專利名稱：新的氨基糖苷類(lèi)抗生素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的氨基糖苷類(lèi)抗生素衍生物，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)自1944年發(fā)現(xiàn)鏈霉素(streptomycin)、1949年發(fā)現(xiàn)新霉素(neomycin)以來(lái)，經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的時(shí)間，已發(fā)現(xiàn)或半合成了一系列可以用于臨床的氨基糖苷類(lèi)抗生素。近年來(lái)，氨基糖苷類(lèi)抗生素雖然發(fā)展不如β-內(nèi)酰胺類(lèi)快，但仍為治療革蘭陰性菌感染和結(jié)核病不可缺少的藥物。氨基糖苷類(lèi)抗生素的發(fā)展大致經(jīng)歷了以下階段鏈霉素-新霉素時(shí)期，卡那霉素時(shí)期，慶大霉素(妥布霉素、西索米星、小諾霉素)時(shí)期，半合成的氨基糖營(yíng)類(lèi)抗生素衍生物時(shí)期(其中主要以卡那霉素和慶大霉素為母核的結(jié)構(gòu)改造的衍生物)。
由于早期上市的天然來(lái)源的氨基糖苷類(lèi)抗生素有嚴(yán)重的耳毒性和腎毒性，并且容易產(chǎn)生耐藥性，例如鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素等。為降低此類(lèi)藥物的耳毒性和腎毒性，并降低其耐藥性的發(fā)生率，研究開(kāi)發(fā)了一些半合成品，例如地貝卡星、阿米卡星、異帕米星、奈替米星等。這些半合成衍生物的出現(xiàn)克服和部分克服了臨床上出現(xiàn)的細(xì)菌耐藥性和耳、腎毒副作用。高效、低毒、對(duì)耐藥菌有效的新的衍生物的出現(xiàn)，在臨床上發(fā)揮了重要作用，同時(shí)，也為氨基糖苷類(lèi)抗生素的發(fā)展開(kāi)辟了一條有效的途徑。
隨著氨基糖苷類(lèi)抗生素的廣泛使用，誘導(dǎo)出現(xiàn)了一些耐藥菌株，造成了它在臨床上減效或無(wú)效。細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)，不但影響了氨基糖苷類(lèi)抗生素的療效，也妨礙和限制了其在臨床上的應(yīng)用。細(xì)菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素產(chǎn)生的耐藥機(jī)制主要有3種(1)產(chǎn)生修飾氨基糖苷類(lèi)的鈍化酶(modifying enzyme)，使藥物滅活；(2)改變膜通透性，降低細(xì)菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素的通透性，菌體內(nèi)藥物濃度下降；(3)改變核蛋白體與藥物的結(jié)合部位，致使細(xì)菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素的親和力降低而耐藥。氨基糖苷類(lèi)抗生素鈍化酶是細(xì)菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素耐藥最主要的原因，它們對(duì)分子中特定氨基和羥基的化學(xué)修飾使修飾后的藥物與細(xì)菌核糖體的結(jié)合能力大大降低，從而產(chǎn)生嚴(yán)重的耐藥現(xiàn)象。氨基糖苷鈍化酶包括乙?；?acetylase，N-乙酰氨基轉(zhuǎn)移酶，AAC)、腺苷化酶(adenylase，O-核苷轉(zhuǎn)移酶，ANT)和磷酸化酶(phosphorylase，O-磷酸轉(zhuǎn)移酶，APH)，可分別將乙酰基、腺苷、磷酸連接道氨基糖苷類(lèi)抗生素的氨基或羥基上，使藥物不能與核糖體結(jié)合而失效。這三類(lèi)滅活酶可根據(jù)其作用部位不同分為若干亞型，不同類(lèi)型的酶可以滅活不同的氨基糖苷類(lèi)抗生素，有的可以滅活多種藥物，有的僅滅活少數(shù)藥物。因此，氨基糖苷類(lèi)抗生素間有的出現(xiàn)交叉耐藥性，有的不出現(xiàn)交叉耐藥性。這些鈍化酶由質(zhì)粒編碼并與轉(zhuǎn)座子相連，質(zhì)粒交換和轉(zhuǎn)座子傳遞加速了耐藥基因在不同細(xì)菌間的傳播，導(dǎo)致了嚴(yán)重復(fù)雜的耐藥現(xiàn)象。
3、發(fā)明內(nèi)容由于氨基糖苷類(lèi)抗生素問(wèn)世以來(lái)，一直是臨床上重要的抗感染藥物，為臨床上治療革蘭陰性菌感染不可缺少的藥物，療效確切，價(jià)格低廉?，F(xiàn)在以至將來(lái)此類(lèi)藥物仍然為臨床必須藥品，仍將會(huì)在我國(guó)廣泛應(yīng)用。但是，此類(lèi)藥物使用后極易產(chǎn)生耐藥菌，同時(shí)本身又具有耳毒性、腎毒性等不良反應(yīng)，給臨床用藥帶來(lái)極大的不便，為了解決這些問(wèn)題，我們的藥物研究人員進(jìn)行了許多有益的探索，尋找高效低毒、抗耐藥菌的氨基糖苷類(lèi)抗生素新的衍生物。我們研究合成了一些新的氨基糖苷類(lèi)衍生物，驚奇的發(fā)現(xiàn)這些新的氨基糖苷類(lèi)衍生物與現(xiàn)有的氨基糖苷類(lèi)抗生素相比，具有抗菌譜廣、抗菌活性高，并且耐藥性的發(fā)生率很低等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)具有良好的理化性質(zhì)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明提供了新的氨基糖苷類(lèi)抗生素衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，結(jié)構(gòu)式如下式所示 其中R1表示氫原子、羥基或1～4個(gè)碳原子的烷基，R2和R3表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R4表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R5表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R6表示氫原子、羥基或1～4個(gè)碳原子的烷基，R7表示氫原子、羥基或1～4個(gè)碳原子的烷基。
優(yōu)選的化合物為R1表示氫原子或甲基；R2和R3表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R2或R3之一為羥基時(shí)，另一個(gè)不為羥基；R4表示羥基；R5表示羥基；R6表示氫原子或甲基；R7表示羥基。
進(jìn)一步優(yōu)選的化合物為
R1表示氫原子；R2表示氯原子或溴原子；R3表示羥基；R4表示羥基；R5表示羥基；R6表示甲基；R7表示羥基。
進(jìn)一步優(yōu)選的化合物也可以為R1表示氫原子；R2表示羥基；R3表示氯原子或溴原子；R4表示羥基；R5表示羥基；R6表示甲基；R7表示羥基。
表1 本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)抗生素衍生物的分子式及分子量(部分)
上面所述優(yōu)選的化合物的化學(xué)名稱和結(jié)構(gòu)式如下(1)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-4-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺，
(2)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-4-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺 (3)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺， (4)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺。
上面所述的任一化合物藥學(xué)上可接受的鹽可以用藥學(xué)上常規(guī)的方式制成有機(jī)酸鹽或無(wú)機(jī)酸鹽，如硫酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、乳酸鹽、醋酸鹽、枸櫞酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、苯磺酸鹽、門(mén)冬氨酸鹽、精氨酸鹽，特別優(yōu)選硫酸鹽。
上面所述優(yōu)選的化合物硫酸鹽的化學(xué)名稱和結(jié)構(gòu)式如下(1)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-4-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽， (2)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-4-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽 (3)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽，
(4)(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽。
本發(fā)明還提供了制備上述化合物的制備方法，基本步驟為以異帕米星為起始原料，進(jìn)行鹵素取代，即可得到所述化合物，必要時(shí)可進(jìn)一步純化或精制。
為了便于制成適于臨床使用的制劑，本發(fā)明化合物還可以藥學(xué)上常用的方法進(jìn)一步與藥學(xué)上可接受的酸成鹽，此處的酸可以為無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸，如硫酸、鹽酸、磷酸、碳酸、乳酸、醋酸、枸櫞酸、檸檬酸、酒石酸、苯磺酸、門(mén)冬氨酸、精氨酸等，特別優(yōu)選硫酸。
本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)包括上面所述的任一化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與其它藥用活性成分的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步要求保護(hù)包括上面所述的任一化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物。
上述藥物組合物可以口服或腸胃外給藥等方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可制成常規(guī)的固體制劑，如片、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口腔崩解片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊等；也可制成液體制劑，如口服液、糖漿等。用于腸胃外給藥時(shí)，可制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無(wú)菌粉針、輸液等。本發(fā)明中優(yōu)選常用口服制劑和注射劑，如片、膠囊、顆粒、粉針、水針、輸液等。
上述藥物組合物的制劑可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
上述藥物組合物在制成口服制劑時(shí)，可選擇的填充劑有淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；可選擇的粘合劑有羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；可選擇的崩解劑有干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；可選擇的潤(rùn)滑劑有硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
上述藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯80、丙二醇、聚乙二醇等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明還提供了新的氨基糖苷類(lèi)衍生物在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的用途，本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物對(duì)志賀菌屬、假單孢菌屬、克雷伯菌屬、沙雷氏菌屬、沙門(mén)氏菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、葡萄球菌屬等細(xì)菌均有良好的抗菌活性。
本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)首次提供了一些新的氨基糖苷類(lèi)抗生素衍生物，尤其是(S)-O-6-氨基-6-脫氧-4-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽、(S)-O-6-氨基-6-脫氧-4-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽、(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽、(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺硫酸鹽，豐富了氨基糖苷類(lèi)抗生素的臨床用藥品種，使革蘭陰性菌等感染的患者擁有更多的選擇性。
(2)新的氨基糖苷類(lèi)衍生物具有與硫酸異帕米星相似的抗菌譜，以及更高的抗菌活性，具有良好的臨床使用價(jià)值。
(3)新的氨基糖苷類(lèi)衍生物的耐藥性發(fā)生率非常低，可廣泛用于臨床。
(4)新的氨基糖苷類(lèi)衍生物的毒性比較低，保證了臨床用藥安全。
(4)新的氨基糖苷類(lèi)衍生物具有良好的理化性質(zhì)，易溶于水，易于制成各種制劑，方便臨床用藥。
(5)新的氨基糖苷類(lèi)衍生物的制備工藝簡(jiǎn)單，藥品純度高、收率高、質(zhì)量穩(wěn)定，易于進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。
以下通過(guò)試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物的有益效果，這些試驗(yàn)例包括本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物藥效學(xué)試驗(yàn)、毒理學(xué)試驗(yàn)。本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物具有下列有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物僅具有下列有益效果。
以下試驗(yàn)例中化合物003表示(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺，用化合物004表示(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺。
試驗(yàn)例1～2中所用的化合物003硫酸鹽為按照實(shí)施例1的方法制備所得，所用的化合物004硫酸鹽為按照實(shí)施例2的方法制備所得。
試驗(yàn)例1化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽的抗菌譜及抗菌活性供試菌種福氏痢疾桿菌CMCC00512、銅綠假單孢菌CMCCB26003、綠膿桿菌ATCC27853、肺炎克雷伯菌ATCC49790、粘質(zhì)沙雷氏菌CMCC08101、甲型副傷寒沙門(mén)氏菌CMCC00332、甲型溶血性鏈球菌CMCC02404、乙型溶血性鏈球菌CMCC02411、糞腸球菌CMCC02422、白色葡萄球菌CMCC02502試驗(yàn)方法(1)試管法試驗(yàn)菌液的制備從新鮮菌種斜面沾取少量菌苔，接種在適合試驗(yàn)均生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上，于規(guī)定溫度培養(yǎng)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，培養(yǎng)后作為原菌液，用滅菌生理鹽水進(jìn)行10倍系列的稀釋，取適宜濃度的0.1ml菌液測(cè)定活菌數(shù)。
取滅菌試管15支，各加入肉湯1ml，第一管加入藥物原液1ml，混勻后取1ml加入第二管，依次稀釋至第15管，從第15管取出1.0ml于一滅菌試管內(nèi)不加試驗(yàn)菌作為空白對(duì)照，其余試管各加入0.1ml菌液，同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照。置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時(shí)，觀察結(jié)果，以肉眼觀察無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的藥物濃度作為最低抑菌濃度，取無(wú)菌生長(zhǎng)的試管中0.01ml液體接種于平板上，測(cè)出MIC(最低抑菌濃度，μg/ml)和MBC(最低殺菌濃度μg/ml)。
(2)藥敏紙片法菌懸液的制備挑取3～5個(gè)菌落，置肉湯中孵育2～6小時(shí)，其濁度相當(dāng)于0.5號(hào)麥?zhǔn)蠞岫然蛴蒙睇}水調(diào)至0.5號(hào)麥?zhǔn)蠞岫?，此時(shí)肉湯中細(xì)菌數(shù)約為1億個(gè)細(xì)菌/ml。
接種M-H平板在瓊脂平板上均勻的涂布一層稀釋的試驗(yàn)菌，用無(wú)菌鑷子將待測(cè)藥紙片均勻的貼在平板上，在適宜溫度下培養(yǎng)18小時(shí)，取出平板，測(cè)量紙片周?chē)志χ睆?mm，每張紙片含藥量均為10μg)
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論結(jié)果見(jiàn)表2。
從表2可以看出，化合物003硫酸鹽、化合物004硫酸鹽對(duì)所有供試菌種的MIC均與硫酸異帕米星相似或略低；對(duì)所有供試菌種均有很好的殺菌作用，對(duì)綠膿桿菌、肺炎克雷伯菌、甲型溶血性鏈球菌的MBC略低于硫酸異帕米星，對(duì)福氏痢疾桿菌、銅綠假單孢菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、乙型溶血性鏈球菌、糞腸球菌的MBC為硫酸異帕米星的1/2或低于1/2，對(duì)白色葡萄球菌的MBC幾乎為硫酸異帕米星的1/4。
上述試驗(yàn)結(jié)果中，化合物003硫酸鹽、化合物004硫酸鹽對(duì)供試菌種的抑菌效果相當(dāng)于或略優(yōu)于硫酸異帕米星的，對(duì)供試菌種的殺菌效果大部分極顯著優(yōu)于硫酸異帕米星的，表明本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物具有抗菌譜廣、抗菌活性高的優(yōu)點(diǎn)，為具有很好的臨床應(yīng)用潛力的新化合物。
表2 化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽的抗菌譜及抗菌活性
試驗(yàn)例2對(duì)慶大霉素耐藥的大腸埃希菌的抗菌活性比較試驗(yàn)菌株由北京大學(xué)第三附屬醫(yī)院提供的用紙片法測(cè)定慶大霉素耐藥(抑菌圈直徑≤12cm)的大腸埃希菌62株，采用常規(guī)方法或API、VITEK對(duì)菌種進(jìn)行鑒定。質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)菌株為大腸埃希菌ATCC25922，由中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心提供。
供試品慶大霉素、鏈霉素、阿米卡星、奈替米星、依替米星、異帕米星、西索米星、阿司米星、地貝卡星9種氨基糖苷類(lèi)抗生素均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。本發(fā)明化合物003、004。
體外最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定采用二倍微量肉湯稀釋法。
MIC值測(cè)定結(jié)果結(jié)果見(jiàn)表3。通過(guò)臨床分離的紙片法測(cè)定慶大霉素耐藥的大腸埃希菌對(duì)11種氨基糖苷類(lèi)抗生素的MIC值結(jié)果可以看出，本發(fā)明的化合物003、004對(duì)慶大霉素耐藥的大腸埃希菌的抗菌活性最強(qiáng)，其次是阿米卡星、奈替米星。眾所周知，大腸埃希菌是引起臨床感染最常見(jiàn)的革蘭陰性菌，結(jié)果提示本發(fā)明的化合物可在低濃度時(shí)對(duì)耐慶大霉素的大腸埃希菌有顯著的抗菌活性，表明本發(fā)明化合物具有意想不到的優(yōu)點(diǎn)。
表3 MIC值測(cè)定結(jié)果
試驗(yàn)例3化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽的急性毒性試驗(yàn)動(dòng)物健康昆明種小白鼠，體重20～25g，雌性各半，隨機(jī)分組。
供試品硫酸異帕米星(市購(gòu))，化合物003硫酸鹽(自制)，化合物004硫酸鹽(自制)，以上藥物均由生理鹽水配制備用。
給藥途徑與給藥容積靜脈注射，25ml/kg試驗(yàn)方法在預(yù)試驗(yàn)獲得0％和100％致死劑量的范圍內(nèi)將受試動(dòng)物隨機(jī)分為5個(gè)劑量組(共15組)，各供試品每組10只。分別尾靜脈注射給藥，給藥后觀察各劑量組動(dòng)物的毒性反應(yīng)癥狀，對(duì)死亡動(dòng)物即時(shí)進(jìn)行解剖，肉眼觀察各臟器內(nèi)的病變。根據(jù)給藥后七天動(dòng)物死亡數(shù)計(jì)算其半數(shù)致死劑量LD50值。
試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論化合物003硫酸鹽、化合物004硫酸鹽及硫酸異帕米星對(duì)小鼠靜脈注射給藥的急性毒性反應(yīng)小鼠靜脈注射化合物003硫酸鹽、化合物004硫酸鹽及硫酸異帕米星約15小時(shí)后，高劑量組小鼠開(kāi)始出現(xiàn)掙扎、行動(dòng)失調(diào)等癥狀，24小時(shí)內(nèi)相繼出現(xiàn)死亡，其余各組未死動(dòng)物一般在24小時(shí)后回復(fù)正常。死亡動(dòng)物解剖后肉眼觀察各臟器，未見(jiàn)有明顯病變?；衔?03硫酸鹽、化合物004硫酸鹽及硫酸異帕米星對(duì)小鼠靜脈注射給藥的LD50值分別為274.28mg/kg、293.51mg/kg、249.54mg/kg。
上述試驗(yàn)結(jié)果中，化合物003硫酸鹽、化合物004硫酸鹽對(duì)小鼠尾靜脈注射的急性毒性略低于硫酸異帕米星，表明本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物的毒性較低，可以保證臨床用藥的安全。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實(shí)施例中用化合物003代替(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-氯-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺，用化合物004代替(S)-O-6-氨基-6-脫氧-3-溴-α-D-吡喃葡萄糖基(1-4)-O-[3-脫氧-4-C-甲基-3-(甲氨基)-β-L-阿拉伯吡喃糖苷-(1，6)]-N′-(3-氨基-2-羥基-1-氧基丙基)-2-脫氧-D-鏈霉胺。
實(shí)施例3～8所用的化合物003硫酸鹽為按照實(shí)施例1的方法制備所得，所用的化合物004硫酸鹽為按照實(shí)施例2的方法制備所得。
實(shí)施例1 化合物003及其硫酸鹽的制備(1)堿化取硫酸異帕米星7.9g(10.31mmol)，溶于50ml水中，用10％的碳酸鈉溶液在冰浴下緩慢調(diào)節(jié)pH＝10，將溶液減壓濃縮至干得固體，該固體用50ml甲醇溶液提取，反復(fù)三次，合并萃取液，減壓濃縮至干，得異帕米星5.70g，收率96.8％。
(2)氯代將上步所得異帕米星5.70g(10mmol)加入500ml四口瓶中，然后加入200ml的氯化亞砜，攪拌加熱至回流，固體全溶，反應(yīng)4小時(shí)后停止反應(yīng)，減壓濃縮至干，然后加入少量甲醇，混勻后蒸干溶劑，得深紅色油狀物。
(3)純化將上述油狀物用50ml去離子水溶解后，通入預(yù)處理好的樹(shù)脂(CG-50#)柱中，以1ml/min的流速吸附，吸附完畢后，用去離子水洗滌。然后樹(shù)脂用1N的氨水解吸，收集所需的組分，濃縮至干，得化合物003。
(4)成鹽將上述產(chǎn)物用20ml甲醇溶解，然后用6N的硫酸甲醇溶液調(diào)節(jié)pH5～6，析出大量白色固體，過(guò)濾，干燥，得硫酸鹽3.7g，收率47.2％。
熔點(diǎn)243～247℃(變色分解)元素分析(C22H42N5O11Cl·2H2SO4)C33.58；H5.93；N8.90；S8.17；Cl4.41(理論C33.69；H5.91；N8.93；S8.18；Cl4.52)1H-NMR(600MHz，D2O)δ5.10(1H，d)，5.01(1H，d)，4.40(2H，d，d)，3.96(1H，m)，3.91(1H，m)，3.75(2H，m)，3.71(2H，m)，3.55(2H，m)，3.50(1H，d，d)，3.35(1H，d，d)，3.17(1H，d，d)，3.12(1H，m)，3.08(1H，m)，2.99(1H，m)，2.91(1H，m)，2.70(1H，m)，2.52(s，3H)，1.90(m，1H)，1.73(1H，m)，1.31(s，3H)實(shí)施例2 化合物004及其硫酸鹽的制備及結(jié)構(gòu)確證(1)堿化取硫酸異帕米星7.9g(10.31mmol)，溶于50ml水中，用10％的碳酸鈉溶液在冰浴下緩慢調(diào)節(jié)pH＝10，將溶液減壓濃縮至干得固體，該固體用50ml甲醇溶液提取，反復(fù)三次，合并萃取液，減壓濃縮至干，得異帕米星5.70g，收率96.8％。
(2)溴代將上步所得異帕米星5.70g(10mmol)加入500ml四口瓶中，加入200ml的四氫呋喃，然后加入9.4gNBS和9.4g三苯基膦，攪拌反應(yīng)4小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液減壓濃縮至干，得淺棕色油狀物。
(3)純化將上述油狀物用50ml去離子水溶解后，通入預(yù)處理好的樹(shù)脂(CG-50#)柱中，以1ml/min的流速吸附，吸附完畢后，用去離子水洗滌，然后樹(shù)脂用1N的氨水解吸，收集所需的組分，濃縮至干，得化合物004。
(4)成鹽將上述產(chǎn)物用20ml甲醇溶解，然后用6N的硫酸甲醇溶液調(diào)節(jié)pH5～6，析出大量白色固體，過(guò)濾，干燥，得硫酸鹽3.5g，收率42.2％。
熔點(diǎn)210～215℃(變色分解)元素分析(C22H42N5O11Br·2H2SO4)C31.72；H5.65；N8.42；S7.68；Br9.51(理論C31.89；H5.60；N8.45；S7.74；Br9.64)1H-NMR(600MHz，D2O)δ5.12(1H，d)，5.03(1H，d)，4.41(2H，d，d)，4.06(1H，m)，3.99(1H，m)，3.78(2H，m)，3.75(2H，m)，3.56(2H，m)，3.52(1H，d，d)，3.37(1H，d，d)，3.19(1H，d，d)，3.11(1H，m)，3.08(1H，m)，3.00(1H，m)，2.92(1H，m)，2.70(1H，m)，2.53(s，3H)，1.91(m，1H)，1.74(1H，m)，1.30(s，3H)實(shí)施例3 化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽水針的制備1、處方處方1化合物003硫酸鹽205g(以化合物003計(jì))山梨醇 20g注射用水 2000ml共制備 1000支處方2化合物004硫酸鹽220g(以化合物004計(jì))山梨醇 20g注射用水 2000ml共制備 1000支2、制備工藝
(1)將生產(chǎn)用安瓿配液用容器具、儀器設(shè)備等進(jìn)行清理、除菌、除熱原；(2)按處方稱取原料和輔料；(3)取山梨醇加配液量80％的注射用水，攪拌溶解；加入配液量0.05％的針用活性炭，攪拌15min，過(guò)濾，脫炭；(4)向溶液中加入化合物003硫酸鹽或化合物004硫酸鹽，攪拌溶解；(5)測(cè)溶液的pH值，用無(wú)水Na2HPO4調(diào)pH值5.5～6.0；(6)補(bǔ)加注射用水至全量，定容；(7)藥液經(jīng)過(guò)0.22μm的微孔濾膜精濾，檢查澄明度；(8)半成品檢驗(yàn)；(9)將藥液裝于安瓿中，2ml/支；(10)100℃流通蒸汽滅菌30min；(11)檢漏，燈檢；(12)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4 化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽粉針的制備1、處方處方1化合物003硫酸鹽205g(以化合物003計(jì))甘露醇 200g注射用水 3000ml共制備 1000支處方2化合物004硫酸鹽220g(以化合物004計(jì))甘露醇 200g注射用水 3000ml共制備 1000支2、制備工藝(1)將生產(chǎn)所用西林瓶、膠塞及配液用容器具、儀器設(shè)備等進(jìn)行清理、除菌、除熱原；(2)按處方稱取原料和輔料；(3)將甘露醇加配液量80％注射用水，攪拌溶解；然后加入配液量0.05％的針用活性炭，攪拌15min，過(guò)濾，脫炭；
(4)向溶液中加入化合物003硫酸鹽或化合物004硫酸鹽，攪拌溶解；(5)測(cè)溶液的pH值，用無(wú)水Na2HPO4調(diào)pH值5.5～6.0；(6)補(bǔ)加注射用水至全量，定容；(7)藥液經(jīng)過(guò)0.22μm的微孔濾膜精濾，檢查澄明度；(8)半成品檢驗(yàn)；(9)藥液分裝2ml于西林瓶中，半壓塞；(10)將樣品置凍干機(jī)中，采用下述凍干工藝凍干-40℃預(yù)凍4小時(shí)，-30～0℃低溫真空干燥18小時(shí)，0～30℃升溫干燥2小時(shí)，30℃恒溫干燥2小時(shí)。
(11)凍干結(jié)束，壓塞、扎蓋；(12)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5 化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽氯化鈉注射液的制備1、處方處方1；化合物003硫酸鹽205g(以化合物003計(jì))氯化鈉 2250g注射用水 250000ml共制備 1000瓶處方2化合物004硫酸鹽220g(以化合物004計(jì))氯化鈉 2250g注射用水 250000ml共制備 1000瓶2、制備工藝(1)將配液用容器具、儀器設(shè)備等進(jìn)行清理、除菌、除熱原；(2)按處方稱取原料和輔料；(3)取氯化鈉加配液量80％的注射用水，攪拌溶解；加入配液量0.05％的針用活性炭，攪拌15min，過(guò)濾，脫炭；(4)向溶液中加入化合物003硫酸鹽或化合物004硫酸鹽，攪拌溶解；(5)測(cè)溶液的pH值，必要時(shí)用調(diào)pH值約5.0～6.0；(6)補(bǔ)加注射用水至全量，定容；
(7)藥液經(jīng)過(guò)0.22μm的微孔濾膜精濾，檢查澄明度；(8)半成品檢驗(yàn)；(9)將藥液裝于輸液瓶中，250ml/瓶；(10)115℃熱壓滅菌30min；(11)檢漏，燈檢；(12)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽葡萄糖注射液的制備1、處方處方1化合物003硫酸鹽205g(以化合物003計(jì))葡萄糖 25000g注射用水 250000ml共制備 1000瓶處方2化合物004硫酸鹽220g(以化合物004計(jì))葡萄糖 25000g注射用水 250000ml共制備 1000瓶2、制備工藝(1)將配液用容器具、儀器設(shè)備等進(jìn)行清理、除菌、除熱原；(2)按處方稱取原料和輔料；(3)取葡萄糖加配液量80％的注射用水，攪拌溶解；加入配液量0.05％的針用活性炭，攪拌15min，過(guò)濾，脫炭；(4)向溶液中加入化合物003硫酸鹽或化合物004硫酸鹽，攪拌溶解；(5)測(cè)溶液的pH值，必要時(shí)用調(diào)pH值約5.0～6.0；(6)補(bǔ)加注射用水至全量，定容；(7)藥液經(jīng)過(guò)0.22μm的微孔濾膜精濾，檢查澄明度；(8)半成品檢驗(yàn)；(9)將藥液裝于輸液瓶中，250ml/瓶；(10)115℃熱壓滅菌30min；
(11)檢漏，燈檢；(12)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽片的制備1、處方處方1化合物003硫酸鹽205g(以化合物003計(jì))微晶纖維素 80g預(yù)膠化淀粉 20g10％PVP K30乙醇液 適量硬脂酸鎂 3g共制備 1000片處方2化合物004硫酸鹽220g(以化合物004計(jì))微晶纖維素 80g預(yù)膠化淀粉 20g10％PVP K30乙醇液 適量硬脂酸鎂 3g共制備 1000片2、制備工藝(1)原料和輔料分別粉碎過(guò)80目篩備用；(2)制粒溶液制備取PVPK30加濃度為30～95％藥用乙醇制成5～10％的溶液，即得；(3)取原料和輔料混勻，加入制粒溶液適量制軟材，20目制粒，50～70℃干燥；(4)顆粒干燥后，18目整粒，加入硬脂酸鎂混勻；(5)顆粒含量測(cè)定；(6)壓片，隨機(jī)檢測(cè)片重；(7)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例8 化合物003硫酸鹽和化合物004硫酸鹽膠囊的制備1、處方
處方1化合物003硫酸鹽205g(以化合物003計(jì))微晶纖維素 80mg預(yù)膠化淀粉 20mg10％PVP K30乙醇液 適量硬脂酸鎂 3g共制備 1000粒處方2化合物004硫酸鹽220g(以化合物004計(jì))微晶纖維素 80mg預(yù)膠化淀粉 20mg10％PVP K30乙醇液 適量硬脂酸鎂 3g共制備 1000粒2、制備工藝(1)原料和輔料分別粉碎過(guò)80目篩備用；(2)制粒溶液制備取PVP K30加濃度為30～95％藥用乙醇制成5～10％的溶液，即得；(3)取原料和輔料混勻，加入制粒溶液適量制軟材，20目制粒，50～70℃干燥；(4)顆粒干燥后，18目整粒，加入硬脂酸鎂混勻；(5)顆粒含量測(cè)定；(6)膠囊填充，隨機(jī)檢測(cè)裝量；(7)成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.如下式所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1表示氫原子、羥基或1～4個(gè)碳原子的烷基，R2和R3表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R4表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R5表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R6表示氫原子、羥基或1～4個(gè)碳原子的烷基，R7表示氫原子、羥基或1～4個(gè)碳原子的烷基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R1表示氫原子或甲基；R2和R3表示氫原子、羥基、氟原子、氯原子、溴原子或碘原子，R2或R3之一為羥基時(shí)，另一個(gè)不為羥基；R4表示羥基；R5表示羥基；R6表示氫原子或甲基；R7表示羥基。
3.如權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2表示氯原子或溴原子，R3表示羥基。
4.如權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R2表示羥基，R3表示氯原子或溴原子。
5.如權(quán)利要求1～4所述的任一化合物藥學(xué)上可接受的鹽為有機(jī)酸鹽或無(wú)機(jī)酸鹽。
6.如權(quán)利要求5所述的化合物藥學(xué)上可接受的鹽為硫酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、乳酸鹽、醋酸鹽、枸櫞酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、苯磺酸鹽、門(mén)冬氨酸鹽、精氨酸鹽。
7.包括權(quán)利要求1～4所述的任一化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物為藥學(xué)上可接受的任一劑型。
9.如權(quán)利要求8所述的劑型為口服制劑、注射劑、外用制劑。
10.如權(quán)利要求1～4所述的任一化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的氨基糖苷類(lèi)抗生素衍生物，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物組合物，以及這些化合物在制備用于治療和/或預(yù)防感染性疾病的藥物中的用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的新的氨基糖苷類(lèi)衍生物，與現(xiàn)有的氨基糖苷類(lèi)抗生素相比，抗菌譜廣、抗菌活性高，耐藥性的發(fā)生率很低，具有良好的臨床使用價(jià)值，可廣泛用于臨床；毒性比較低，可保證臨床用藥的安全；具有良好的理化性質(zhì)，易溶于水，易于制成各種制劑，方便臨床用藥。
文檔編號(hào)A61K9/48GK101074249SQ20061004399
公開(kāi)日2007年11月21日 申請(qǐng)日期2006年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月19日
發(fā)明者黃振華 申請(qǐng)人:黃振華