專利名稱：積雪草苷的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及積雪草苷的一種新用途，具體地涉及積雪草苷在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
積雪草苷(Asiaticoside，Ad)為積雪草提取物三萜皂苷的主要成分之一，已有的資料顯示，在各種皮膚損傷修復(fù)治療中，無(wú)論是在正常創(chuàng)面，還是在延遲愈合的創(chuàng)面中，Ad均具有促進(jìn)皮膚損傷修復(fù)的藥物活性，通過(guò)促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，抗菌和抗氧化活性，有較好的上皮化速率和愈合后外觀。但積雪草苷在制備治療或預(yù)防急慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥理作用未見(jiàn)報(bào)道，本發(fā)明人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)了積雪草苷在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了由積雪草苷在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的積雪草苷純度大于等于90％小于100％。
本發(fā)明提供了以積雪草苷為活性成分的藥物組合物在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的藥物組合物在用于慢性腎功能衰竭及腎纖維化時(shí)，口服時(shí)使用劑量范圍是25mg～1000mg，優(yōu)選25～500mg。
本發(fā)明提供的藥物以制劑形式存在時(shí)，其有效成分的含量25～200mg。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以根據(jù)制劑需要，加入相應(yīng)輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、軟膠囊、糖漿等形式存在，優(yōu)選為軟膠囊及片劑。本發(fā)明提供的各種劑型均可以采用藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
本發(fā)明人進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)積雪草苷在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用(下面的實(shí)施例用來(lái)更詳細(xì)的說(shuō)明本發(fā)明，但并不意味著本發(fā)明僅限于此)。
具體實(shí)施實(shí)例制備例1 積雪草苷片劑的制備處方積雪草苷50.0g糖粉85.0g乳糖40.0g羧甲基淀粉鈉23.0g3％PVPK30水溶液適量硬脂酸鎂2.0g共制成 1000粒操作稱取處方量的積雪草苷、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過(guò)100目篩，加入3％PVPK30水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60℃干燥3小時(shí)，18目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂，混合均勻后壓片，每片約200mg，即得。
制備例2 積雪草苷軟膠囊的制備處方積雪草苷25.0g藥用豆油225mL共制成 1000粒操作稱取處方量的積雪草苷加藥用豆油充分混合均勻后制軟膠囊，每粒約250mg，即得。
試驗(yàn)例1 積雪草苷對(duì)腺嘌呤導(dǎo)致大鼠慢性腎衰及腎纖維化的影響1.1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
藥物 積雪草苷，中國(guó)廣西昌洲天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)有限公司，含量99％，批號(hào)040218；腺嘌呤，常州華通化工公司，批號(hào)040611；甲強(qiáng)龍，比利時(shí)法瑪西亞普強(qiáng)公司，批號(hào)040706；肌酐和尿素氮試劑盒，北京中生科技公司，批號(hào)050606；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號(hào)050906。
1.2試驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠90只，體重150-200g，動(dòng)物喂養(yǎng)1周，將動(dòng)物分為9組，即正常組，模型組、甲強(qiáng)龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4，除正常組外，每只大鼠ip腺嘌呤150mg/kg，連續(xù)給予4天，7天后，大鼠眼框取血，血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸，觀察造模情況，從第8天開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥14天，從眼眶取血，測(cè)定血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸，處死作病理切片，觀察腎功能的病理改變。
從表1結(jié)果可以看出，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組降低大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸(與模型組比較，p＜0.05)；甲強(qiáng)龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4明顯降低大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸(與模型組比較，p＜0.01)。
病理檢查正常對(duì)照組腎組織結(jié)構(gòu)正常，模型組有明顯腎組織結(jié)晶沉淀物，腎小管破壞，萎縮，管腔變小，其中可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及局部纖維組織增生，腎小球腫大，腎小球上皮細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性，內(nèi)皮細(xì)胞下出現(xiàn)大量疏松物質(zhì)，基底膜增厚，定量分析腎小管面積與腎小球體積，模型組與正常對(duì)照組比較有顯著性差異。積雪草苷各劑量組隨劑量增加損傷程度明顯減輕，但仍未恢復(fù)至正常水平。
表1 積雪草苷對(duì)大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸的影響(n＝10)

*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較試驗(yàn)例2 積雪草苷對(duì)腎切除導(dǎo)致大鼠慢性腎衰的影響2.1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
藥物 積雪草苷，中國(guó)廣西昌洲天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)有限公司，含量99％，批號(hào)040218；甲強(qiáng)龍，比利時(shí)法瑪西亞普強(qiáng)公司，批號(hào)040706；肌酐和尿素氮試劑盒，北京中生科技公司，批號(hào)050606；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號(hào)050906。
2.2試驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠135只，體重150-200g，動(dòng)物喂養(yǎng)1周，將動(dòng)物分為9組，即正常組，模型組、甲強(qiáng)龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4，除正常組外，大鼠用5/6腎切除方法制成慢性腎衰模型，第一次手術(shù)切除左腎2/3，一周后行第二次手術(shù)切除右腎，第二次手術(shù)后一周開(kāi)始給藥，給藥后4周、8周分別大鼠眼框取血，測(cè)定血清肌酐和尿素氮，給藥后4周處死5只，實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死10只，作病理切片，觀察腎功能的病理改變。
從表2、表3結(jié)果可以看出，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮(與模型組比較，p＜0.05)；甲強(qiáng)龍(12mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4明顯降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮(與模型組比較，p＜0.01)；積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮與積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4比較，無(wú)顯著性差異。
病理改變給藥第4周模型組光鏡下見(jiàn)腎小球有不同程度代償性肥大，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，腎小球毛細(xì)血管襻呈分葉狀，部分腎小球囊腔消失，毛細(xì)血管管壁增厚，腎小管腫脹、擴(kuò)張，管腔內(nèi)有蛋白沉積，部分小管萎縮，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，各給藥組亦見(jiàn)上述改變，但病變程度較輕，隨劑量增大，病變程度減輕；給藥第8周模型組光鏡下見(jiàn)系膜細(xì)胞增生，基質(zhì)明顯增多，毛細(xì)血管管壁塌陷，毛細(xì)血管節(jié)段性硬化，硬化區(qū)多在血管壁附近硬化的腎小球內(nèi)可見(jiàn)均質(zhì)圓形PAS染色深紅色的沉積物，個(gè)別腎小球有局灶球囊粘連，局灶新月體形成，間質(zhì)可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，纖維組織增生，各組腎小球硬化程度不等，隨劑量增大，病變程度減輕。
表2 積雪草苷對(duì)大鼠腎切除慢性腎衰給藥4周血清肌酐和尿素氮的影響(n＝5)

*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較表3 積雪草苷對(duì)大鼠腎切除慢性腎衰給藥8周血清肌酐和尿素氮的影響

*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較試驗(yàn)例3 積雪草苷對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響3.1材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。
藥物 積雪草苷，中國(guó)廣西昌洲天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)有限公司，含量99％，批號(hào)040218；苯那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)040306；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號(hào)050906。
3.2試驗(yàn)方法與結(jié)果大鼠90只，體重150-200g，動(dòng)物喂養(yǎng)1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手術(shù)區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開(kāi)皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側(cè)輸尿管，假手術(shù)組僅切開(kāi)腹腔并游離左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點(diǎn)位于左腎下極水平，然后在兩道結(jié)扎點(diǎn)間剪斷輸尿管，逐層縫合，將動(dòng)物分為9組，即假手術(shù)組，模型組、苯那普利(10mg/kg)組，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4，術(shù)后各組開(kāi)始給藥，21天后10％水合氯醛麻醉后處死各組動(dòng)物，生理鹽水反復(fù)灌洗后留取左側(cè)腎臟，腎組織經(jīng)4％的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測(cè)定說(shuō)明測(cè)定羥脯氨酸。
從表4結(jié)果可以看出，積雪草苷灌胃小劑量(1mg/kg)組，積雪草苷灌胃中劑量(2.5mg/kg)組降低單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎羥脯氨酸含量(與模型組比較，p＜0.05)；苯那普利(10mg/kg)組，積雪草苷灌胃大劑量(10mg/kg)組1，積雪草苷灌胃大劑量(25mg/kg)組2，積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3，積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4明顯降低單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎羥脯氨酸含量(與模型組比較，p＜0.01)；積雪草苷灌胃大劑量(50mg/kg)組3降低單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎羥脯氨酸含量與積雪草苷灌胃大劑量(100mg/kg)組4比較，無(wú)顯著性差異。
常規(guī)病理學(xué)檢查①肉眼檢查假手術(shù)組腎臟顏色鮮紅，表面光滑，包膜光澤，無(wú)粘連。其他各組腎臟體積增大，顏色蒼白，表面呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數(shù)區(qū)域腎包膜粘連。②光鏡檢查假手術(shù)組腎單位結(jié)構(gòu)清晰，腎小球囊無(wú)擴(kuò)張或縮小，腎小管上皮細(xì)胞無(wú)明顯變性及壞死，管腔內(nèi)無(wú)脫落上皮細(xì)胞或管型，間質(zhì)中無(wú)血管擴(kuò)張或炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組大片腎小管壞死，腎間質(zhì)纖維細(xì)胞增生，腎小管擴(kuò)張，內(nèi)有大量棕黃色折光物質(zhì)或壞死脫落的上皮細(xì)胞，腎小球數(shù)目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。給藥各組病變與模型對(duì)照組類似，但均有不同程度的形態(tài)學(xué)改善，尤以積雪草苷灌胃大劑量各組顯著，與模型對(duì)照組比較有明顯差異。
表4 積雪草苷對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎羥脯氨酸含量的影響

*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較。
權(quán)利要求
1.積雪草苷在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，藥物組合物可以以片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、軟膠囊或糖漿的形式存在。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，藥物組合物優(yōu)選為片劑、軟膠囊。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，口服時(shí)使用劑量范圍為25～1000mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，使用劑量范圍優(yōu)選為25～500mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其有效成分的含量為25～200mg。
全文摘要
本發(fā)明提供了積雪草苷的新用途，具體提供了積雪草苷在制備治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K9/48GK101073577SQ200610044269
公開(kāi)日2007年11月21日 申請(qǐng)日期2006年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月19日
發(fā)明者蔣王林, 田京偉, 宋吉倫 申請(qǐng)人:山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司