專利名稱：：迷迭香酸在制備治療或預(yù)防肝纖維化和腎纖維化的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物新用途，具體地涉及迷迭香酸在制備預(yù)防或治療肝纖維化和腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：肝纖維化是慢性肝病重要的病理特征。病毒、乙醇、自身免疫性疾病等病因均可引起肝細(xì)胞壞死、再生和持續(xù)性纖維增生，最終導(dǎo)致肝硬化。現(xiàn)已證實肝纖維化是可逆病變，肝硬化則是不可逆的。因此，在慢性肝病的治療過程中，肝纖維化的防治占有重要地位。腎纖維化(包括腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化)是各種原因引起的腎臟損害最后階段的主要病理基礎(chǔ)，腎纖維化發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，與多種因素有關(guān)，其中主要與細(xì)胞外基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞的增殖和活化，血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子以及細(xì)胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)換失衡有關(guān)，腎間質(zhì)纖維化幾乎是所有原發(fā)或繼發(fā)腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑。迷迭香酸(Rosmarinicacid)的化學(xué)名為R(+)2-((3-(3，4-二羥基苯基-(-氧化-2-丙烯基)氧基)3，4-二羥基苯丙酸)。迷迭香酸是水溶性的多酚類化合物。具有抗炎、抗氧化活性、免疫抑制、抗血栓和抗血小板聚集作用等多種活性[劉鷹翔，計志忠.迷迭香酸藥理作用的研究進(jìn)展，國外醫(yī)藥*植物分冊，1993，8(6):248~251.;陳淑珍，付陽平，等.迷迭香酸對大鼠中性粒細(xì)胞自由基生成和溶酶體釋放的影響，藥學(xué)學(xué)報，1999，34(12):881~885.;PeakeP.W.PussellB.A，MartynP，etal.The，inhibitoneffectofRosmarinicacidoncomplementinvolvestheC5convertase.IntJImmunoPharmacol13:853-857，1997.;鄒正午，徐理納，田金英.迷迭香酸抗血栓和血小板聚集作用，藥學(xué)學(xué)報，1993，28(4):241245.]。但迷迭香酸在制備預(yù)防或治療肝纖維化和腎纖維化的藥理作用未見報道。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)迷迭香酸在預(yù)防或治療肝纖維化和腎纖維化方面有明顯的作用。基于此，本發(fā)明人發(fā)明了迷迭香酸在預(yù)防或治療肝纖維化和腎纖維化的應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了迷迭香酸在制備預(yù)防或治療肝、腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了迷迭香酸在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了迷迭香酸在制備治療或預(yù)防腎纖維化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的藥物在用于肝纖維化和腎纖維化時，其注射時使用劑量范圍是50mg1500mg;優(yōu)選50750mg，口服時使用劑量范圍是100mg3000mg;優(yōu)選1001500mg。本發(fā)明還提供了由迷迭香酸和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、注射液、凍干粉針或注射用乳劑，優(yōu)選以片劑、滴丸或凍干粉針形式存在。具體實施例方式實施例l迷迭香酸凍干粉針制備取迷迭香酸50.0g，加注射用水2000ml使其溶解，以NaOH調(diào)pH=5.5~7.5，加甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含迷迭香酸50.0mg的凍干粉針。實施例2迷迭香酸片劑制備處方迷迭香酸糖粉乳糖羧甲基淀粉鈉3WPVPk3o水溶液硬脂酸鎂100.0g35.0g40.0g23.0g共制成1000片操作稱取處方量的迷迭香酸、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過100目篩，加入3免PVPK3。水溶液適量制軟材，20目篩制粒，6(TC干燥3小時，18目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓片，調(diào)節(jié)片重約200mg，即得。試驗例l:迷迭香酸對肝纖維化的影響1.1藥品與試劑迷迭香酸由山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心提供，含量95%以上，批號041205;文迪雅(馬來酸羅格列酮片，GlaxoSmithKline公司，批號051023)HA(透明質(zhì)酸)、LN(層粘連蛋白)及PcIII(III型膠原)放免試劑盒購買于上海海研醫(yī)學(xué)中心；羥脯氨酸檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g,SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發(fā)公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。1.2實驗方法大鼠130只，隨機(jī)分為13組，即正常對照組、模型組、羅格列酮組灌胃8mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射2.5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射5rag/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃5mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50mg/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組，每組10只。大鼠肝纖維化模型復(fù)制及各組處置方法參考吳孟超等復(fù)制大鼠肝纖維化模型的方法吳孟超，楊廣順.大鼠肝硬變模型復(fù)制的研究.中華實驗外科雜志，1984，1(4):145—147，除正常對照組外，各組每3d每100g體重皮下注射40先四氯化碳油溶液0.3ml，首劑量加倍，正常對照組大鼠每3d皮下注射油溶液0.3nil/100g體重，6周后,各組開始給藥，連續(xù)給藥6周，給藥結(jié)束后用20%烏拉坦溶液腹腔注射麻醉，解剖，腹主動脈采血，留取肝組織，部分用10%中性福爾馬林溶液固定，24—48h內(nèi)制石蠟塊。肝組織病理學(xué)檢查采用HE染色，纖維增生程度分為0-4級栗坤，趙玉珍，朱秋霜等.川芎嗪對老齡小鼠心、肝超氧化物歧化酶活力的影響.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，1998;21:4—5，對血清中HA(透明質(zhì)酸)、LN(層粘連蛋白)及PcIIl(m型膠原)、及肝中HYP(羥脯氨酸)進(jìn)行測定，HA、LN、PcIII、HYP按檢測試劑盒測定方法測定。1.3實驗結(jié)果病理學(xué)檢査正常對照組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)正常；模型組大鼠肝臟12周均出現(xiàn)明顯的纖維化；迷迭香酸各組中纖維化程度均較模型組輕。光鏡觀察HE常規(guī)染色和VG膠原染色肝組織切片顯示，肝纖維化模型對照組大鼠肝組織中可見肝細(xì)胞脂肪變性，壞死，炎細(xì)胞浸潤；匯管區(qū)內(nèi)膠原纖維沉積，Heimy管增生；纖維結(jié)締組織增生明顯，纖維間隔增粗，并有典型假小葉形成。迷迭香酸治療組大鼠肝組織纖維結(jié)締組織增生程度減輕，纖維間隔變細(xì)，假小葉形成不明顯。對各組纖維增生程度分值進(jìn)行秩和檢驗。結(jié)果見表l，迷迭香酸靜脈注射5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50nig/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組明顯降低纖維增生程度(與模型對照組比較，p〈0.05或0.01)。電鏡觀察正常對照組大鼠肝細(xì)胞間緊密相連，細(xì)胞內(nèi)各種細(xì)胞器分布規(guī)整，結(jié)構(gòu)典型。血竇排列整齊，Disse腔內(nèi)可見肝貯脂細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有脂滴。模型對照組大鼠肝組織中則出現(xiàn)典型的肝細(xì)胞損傷結(jié)構(gòu)，相鄰肝細(xì)胞間隙增寬，肝細(xì)胞變性壞死，核固縮，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大小不等、分布不規(guī)則的脂滴。肝組織中存在輕重不等的纖維化病變。肝竇毛細(xì)血管化，Disse間隙內(nèi)可見較多成纖維細(xì)胞(活化的肝貯脂細(xì)胞)，且周圍有大量膠原纖維沉積。匯管區(qū)內(nèi)可出現(xiàn)大量的膠原纖維。迷迭香酸治療組中，肝細(xì)胞損傷有不同程度的減輕，肝細(xì)胞間隙較緊密，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脂肪小滴減少，細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)趨向正常。肝纖維化病變不明顯，肝血竇和Disse間隙內(nèi)膠原纖維沉積及成纖維樣細(xì)胞數(shù)量減少。對各組HA、LN、Pcffl、HYP進(jìn)行T檢驗。結(jié)果見表2，迷迭香酸靜脈注射5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50mg/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組明顯降低HA、LN、PcIII、HYP水平(與模型對照組比較，p<0.05或0.01)。迷迭香酸灌胃150mg/kg組降低HA、LN、PcIII、HYP水平與迷迭香酸灌胃300mg/kg組比較，無顯著性差異；迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組降低HA、LN、PcIII、HYP水平與迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組比較，無顯著性差異。表1迷迭香酸對大鼠肝纖維化病理形態(tài)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與模型組比較，AP<0.05;"P<0.01。表2迷迭香酸對肝纖維化大鼠肝組織HYP含量及血清HA、LN及PCin含量的影響組別劑量證PCIIIHA(mg/kg)("g/L)(wg/L)"g/L)WU正常對照組——760±9014.2±2.840.7±7.531.3±6.9模型組NS1769±13042.6±8.5130.4±24.187.6±19.4羅格列酮ia81259±153"26.5±9.6"88.9±20.5"63.6±16.8"迷迭香靜脈2.51704±12438.2±7.8115.2±24.179.6±19.0注射組51630±110A34.2±7.6A106.3±23.4A68.3±17.9A251578土113"31.4±7.8"97.5±23.6"62.0±20.0"751'278士121"26.5±9.1"77.9±20.7"57.6±16.8"1501217土143"25.7±7.8"74.6±18.9"55.3±14.6"迷迭香酸灌51724±12138.0±7.5113.8±24.879.1±19.4胃組101614±121*33.7±7.3A104.3±26.4A69.3±16.9*501535±125"31.6±7.2"97.0±24.6"61.0±20.6"1501299±153"27.5±9.6"84.9±20.5"59.6±16.8"3001250±174"26.9±10.5"80.7±18.6"57.3±18.6"與模型組比較，<0.05;"P<0.01。試驗2迷迭香酸對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響2.1材料迷迭香酸由山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心提供，含量95%以上，批號041205;苯那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號040306;羥脯氨酸(HYP)試劑盒，南京建成生物公司，批號050906;纖維連結(jié)蛋白(FN)試劑盒購自上海生物制品所。實驗動物普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發(fā)公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。2.2試驗方法與結(jié)果大鼠130只，隨機(jī)分為13組，即假手術(shù)組、模型組、苯那普利組灌胃10mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射2.5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射5mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃5mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50呢/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組，動物喂養(yǎng)1周，各大鼠以10%水合氯醛3.OmL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)臥位固定于手術(shù)臺上，剪毛后用碘酒、75%酒精消毒手術(shù)區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側(cè)輸尿管，假手術(shù)組僅切開腹腔并游離左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點位于左腎下極水平，然后在兩道結(jié)扎點間剪斷輸尿管，逐層縫合，術(shù)后10天10%水合氯醛麻醉后處死各組動物，取血，按纖維連結(jié)蛋白測定說明測定纖維聯(lián)接蛋白(FN)。生理鹽水反復(fù)灌洗后留取左側(cè)腎臟，腎組織經(jīng)4%的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測定說明測定羥脯氨酸。常規(guī)病理學(xué)檢査①肉眼檢查假手術(shù)組腎臟顏色鮮紅，表面光滑，包膜光澤，無粘連。其他各組腎臟體積增大，顏色蒼白，表面呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數(shù)區(qū)域腎包膜粘連。②光鏡檢査假手術(shù)組腎單位結(jié)構(gòu)清晰，腎小球囊無擴(kuò)張或縮小，腎小管上皮細(xì)胞無明顯變性及壞死，管腔內(nèi)無脫落上皮細(xì)胞或管型，間質(zhì)中無血管擴(kuò)張或炎細(xì)胞浸潤。模型對照組大片腎小管壞死，腎間質(zhì)纖維細(xì)胞增生，腎小管擴(kuò)張，內(nèi)有大量棕黃色折光物質(zhì)或壞死脫落的上皮細(xì)胞，腎小球數(shù)目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。給藥各組病變與模型對照組類似，但均有不同程度的形態(tài)學(xué)改善，尤以迷迭香酸灌胃大劑量各組顯著，與模型對照組比較有明顯差異。對各組FN、HYP進(jìn)行T檢驗。結(jié)果見表3，迷迭香酸靜脈注射5呢/kg組、迷迭香酸靜脈注射25mg/kg組、迷迭香酸靜脈注射75rag/kg組、迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組、迷迭香酸灌胃10mg/kg組、迷迭香酸灌胃50mg/kg組、迷迭香酸灌胃150mg/kg組、迷迭香酸灌胃300mg/kg組明顯降低FN、HYPP水平(與模型對照組比較，p<0.05或0.01)。迷迭香酸灌胃150mg/kg組降低FN、HYP水平與迷迭香酸灌胃300mg/kg組比較，無顯著性差異；迷迭香酸靜脈注射75mg/kg組降低FN、HYP水平與迷迭香酸靜脈注射150mg/kg組比較，無顯著性差異。表3迷迭香酸對單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>權(quán)利要求1.迷迭香酸在制備治療或預(yù)防肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。2.迷迭香酸在制備治療或預(yù)防腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其可以注射給藥，也可以口服給藥。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其注射給藥劑量為50-1500mg,口服給藥劑量為100-3000mg。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，注射給藥優(yōu)選劑量為50-750mg，口服給藥優(yōu)選劑量為100-1500mg。全文摘要本發(fā)明提供了迷迭香酸在制備治療或預(yù)防肝、腎纖維化的藥物中的應(yīng)用。其可以口服給藥，也可以注射給藥，其注射給藥時給藥劑量為50-1500mg，口服給藥時給藥劑量為100-3000mg。文檔編號A61P1/16GK101095668SQ20061004537公開日2008年1月2日申請日期2006年6月29日優(yōu)先權(quán)日2006年6月29日發(fā)明者曲桂武,田京偉,蔣王林申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司