專利名稱：一種用于對(duì)乙型肝炎進(jìn)行免疫耐受治療的蛋白疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白疫苗，特別是涉及一種用于對(duì)乙型肝炎進(jìn)行免疫耐受 治療的蛋白疫苗。
背景技術(shù)：
據(jù)有關(guān)資料統(tǒng)計(jì)顯示，乙型肝炎分為平行傳播和垂直傳播兩種傳播途徑， 兩種傳播途徑各占50%。特別是垂直傳播，代代相傳，任其發(fā)展將貽害子孫后 代的身體健康，給家庭和社會(huì)帶來巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響"全面奔小康"的 步伐。病毒性肝炎仍是危害人民身體健康的主要疾病之一，而乙型肝炎占全部 肝炎發(fā)病之首。當(dāng)前，對(duì)乙型肝炎的治療，多以對(duì)癥處理，已形成共識(shí)，即抗 病毒、調(diào)節(jié)免疫、保肝護(hù)肝、防纖維化、防癌等措施。而對(duì)乙型肝炎免疫耐受 的治療仍有不同的看法，而乙肝免疫耐受患者占乙肝門診的40%,對(duì)此，國(guó)內(nèi) 許多醫(yī)療研究單位進(jìn)行了大量的研究和探討，到目前為止，還沒有一種理想的 用于對(duì)乙型肝炎進(jìn)行免疫耐受治療的蛋白疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于對(duì)乙型肝炎進(jìn)行免疫耐受治療 的蛋白疫苗，所要解決的技術(shù)問題是參考美國(guó)Akbaer等研究成果，對(duì)HBsAg 蛋白疫苗進(jìn)行大膽的改進(jìn)組配，組配新的治療性疫苗，使其設(shè)計(jì)方法簡(jiǎn)便、科 學(xué)、實(shí)用、安全、有效，本發(fā)明所釆取的技術(shù)方案是采用HB疫苗60畔、卡介 菌多糖核酸2rai 、花生油水乳化劑0. lml混合組成； 本發(fā)明在進(jìn)行臨床應(yīng)用研究之前，曾做了如下幾方面的基礎(chǔ)性研究工作1. 查閱了國(guó)內(nèi)外相關(guān)文庫2. 借鑒了美國(guó)VIRGINIA CO固DNWEALTH VNVERSITY大學(xué)藥理毒理研究室 博士研究員，美國(guó)MILLNAIR生物公司新藥開發(fā)等研究成果，最后確定HBsAg 蛋白疫苗治療HBV感染免疫耐受的治療應(yīng)用研究。3. 藥理的安全性試驗(yàn)12只大白兔，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)結(jié)東無不良反應(yīng)。 (方法將大白兔注射部位2周、4周、8周作病理組織學(xué)檢查)4. 有5位醫(yī)務(wù)志愿者，曾用乙肝疫苗30ug0. 1. 6免疫后無抗體反應(yīng)，用 HBsAg蛋白疫苗0. 1.6接種全部免疫成功，其抗-HBs p/co值均在14以上(正常值l)見表一。 具體實(shí)施方案本發(fā)明采用HB60ug、卡介菌素lmg、花生油水乳化劑0. lml混合組配新 的治療性疫苗，選擇代表性的應(yīng)試對(duì)象120例，HBsAg+、 HBeAg+、抗-HBC+、 HBVDNA+、 ALT、 AST正常者，垂直傳播平行傳播各半，分為三組治療一組(垂 直傳播)"例；治療二組(平行傳播)40例；對(duì)照組(平行垂直傳播各半)40例。方法HBsAg蛋白疫苗每三周雙側(cè)三角肌注射一次xl2個(gè)月，HBIG200IU 每三周一針x 12個(gè)月，其結(jié)果:治療一組HBeAg治療前p/co值x16. 394 ± 8. 709, 治療后x5.536 士 7.927， t值5.831, p<0.001，轉(zhuǎn)陰率為50%, HBVDNA陰轉(zhuǎn)23 例，轉(zhuǎn)陰率為57.5%。治療二組HBeAg治療前p/co值xl3.895 士 9.472，治療后x2. 444 ± 2. 518， t值7.388， p< 0.001,陰轉(zhuǎn)2Q例,陰轉(zhuǎn)率50%, HBVDNA陰轉(zhuǎn)23例，陰轉(zhuǎn)率 57. 5%。 對(duì)照組佐旋咪唑片2. 5mg， 2. 5mg/kg/日，每周兩次口服x 12個(gè)月，HBeAg 治療前P/'co值x5. 896 ± 10. 430,治療后xl5. 749 ± 8. 64， t值0.111， p〉0.5， 無顯著性差異，陰轉(zhuǎn)2例，陰轉(zhuǎn)率5%， HBVDNA陰轉(zhuǎn)8例，陰轉(zhuǎn)率20%。臨床應(yīng)用本發(fā)明對(duì)慢性乙型肝炎免疫耐受治療較為理想，可作為進(jìn)一步深 層次方面的研究與應(yīng)用。綜合上述研究結(jié)果采用HBsAg蛋白疫苗對(duì)乙型肝炎免疫耐受臨床應(yīng)用，可 以得出以下幾點(diǎn)結(jié)論一、 垂直傳播與平行傳播的患者療效大致相同，其原因可能是病史收集的不 清，也可能是免疫耐受機(jī)理相同，發(fā)病機(jī)理相似，故療效相當(dāng)。二、 HBeAg存在可作為病毒復(fù)制指標(biāo)，e抗原存在與HBVDNA存在也是平行的，故其療效也較一致。三、 治療組治療中期部分患者ALT升高，兩組約有16例，但都不超過200u， 也可能是免疫耐受部分解除，機(jī)體免疫狀況好轉(zhuǎn)所起的清除病毒作用，繼續(xù)使 用治療，個(gè)別患者用干擾素(安福隆300—500萬u)療效更好。四、 治療期間HBVM好轉(zhuǎn)部分病人要繼續(xù)治療，6例病人使用28個(gè)月后，有 4例病人HBVM全部轉(zhuǎn)陰，2例只有抗HBC+，依此可以考慮延長(zhǎng)療程治療。五、 治療期間部分病人可能出現(xiàn)ALT升髙，可以是免疫耐受部分解除或全部 解除，細(xì)胞免疫可發(fā)揮作用。大部分ALT不升高，可能還是通過細(xì)胞因子免疫 的作用，兩種作用可能同時(shí)存在，是因?yàn)閭€(gè)人的免疫狀況不同，免疫反應(yīng)也不 盡相同。六、 本課題實(shí)驗(yàn)病例，除個(gè)別患者注射部位有腫痛外l一2日即止，余無不良反應(yīng)。七、HBsAg (—)陰轉(zhuǎn)率50%, HBvDNA (核酸)陰轉(zhuǎn)率57. 5%
本項(xiàng)目研究表明HBsAg蛋白疫苗---度性乙型肝炎，治療性疫苗能夠在部分臨床試驗(yàn)中激發(fā)特異性細(xì)胞免疫和非細(xì)胞免疫的途徑，降低HBVDNA的水平， 改善患者的免疫狀況，可使HBeAg的血清全含量明顯降低，部分轉(zhuǎn)陰。單純乙肝疫苗可作為治療性疫苗使用，作為主動(dòng)免疫應(yīng)答基因來調(diào)節(jié)，對(duì) HBsAg的高位應(yīng)答和低位應(yīng)答有不同的MHC表現(xiàn)型，前Sl蛋白有很重要的免疫 原性，在T細(xì)胞水平顯著高于S2抗原，前S2可激活特異性TH來誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn) 生抗前S2的抗體，前S1、 S2的調(diào)節(jié)可提供B細(xì)胞克隆的輔助?？ń槊缢乜商?高抗原遞呈細(xì)胞，提高T、 B淋巴細(xì)胞的功能，高水平的表達(dá)MACI、 OMHCII、 活化非特異性巨噬細(xì)胞的介導(dǎo)作用和細(xì)胞因子的效應(yīng)。佐劑具有增效緩釋作用，花生油水乳化佐劑具有提高細(xì)胞免疫和體液免疫作 用。而鋁佐劑只能在提高體液免疫同時(shí)還有降低細(xì)胞免疫作用。因此，本發(fā)明設(shè)計(jì)方法簡(jiǎn)便、科學(xué)、實(shí)用、安全、有效，取得成果后，可 以廣泛的應(yīng)用于臨床，造福于人類的健康事業(yè)。1、患者王建民，男，43歲，于5年前查出患有乙肝"大三陽"、HBV— DHA陽性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，經(jīng)多方治療無效，于2005年2月在我 院用乙肝疫苗60mg、卡介苗多糖核酸lmg、佐劑0. lml雙側(cè)三角肌肌注治療， 經(jīng)過"個(gè)月的治療，患者于今年5月份查HBeAg轉(zhuǎn)陰、HBV—DNA也轉(zhuǎn)陰，肝 功能正常。2、 患者閆紅偉，女，"歲，于2005年4月份于我院檢查出患有乙肝，HBeAg 陽性，HBV—DNA陽性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，建議其治療，用乙肝疫苗 90Mg、卡介苗多糖核酸lmg、佐劑0. lml雙側(cè)三角肌肌注治療，經(jīng)過10個(gè)月治 療后復(fù)查乙肝五項(xiàng)HBeAg轉(zhuǎn)陰、HBV-—DNA陰性.3、 郭明全，男，55歲，2005年3月份因乏力、厭油膩飲食、右上腹疼痛到我
院檢查為乙肝HBeAg陽性、HBV—DNA陽性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，用乙 肝疫苗120Mg、卡介苗多糖核酸lmg、佐劑O.lml雙側(cè)三角肌肌注治療，經(jīng)過9 個(gè)月治療后復(fù)查HBeAg陰性、HBV—DNA陰性.4、李宗連、女、40歲，于2005年3月份于我院查出患有乙肝HBeAg陽性、HBV 一DNA陽性，肝功正常的乙肝免疫耐受者，用乙肝疫苗180Mg、卡介苗多糖核酸 lmg、佐劑0. lml，雙側(cè)三角肌肌注治療，經(jīng)過6個(gè)月治療后復(fù)查乙肝五項(xiàng)陽g 轉(zhuǎn)陰、HBV—DNA陰性.
權(quán)利要求
1、一種用于對(duì)乙型肝炎進(jìn)行免疫耐受治療的蛋白疫苗，其特征在于是由HB疫苗60μg、卡介菌多糖核酸2ml、花生油水乳化劑0.1ml混合組成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于對(duì)乙型肝炎進(jìn)行免疫耐受治療的蛋白疫苗，是由HB疫苗60μg、卡介菌多糖核酸2ml、花生油水乳化劑0.1ml混合組成，對(duì)HBsAg蛋白疫苗進(jìn)行大膽的改進(jìn)組配，組配新的治療性疫苗，使其設(shè)計(jì)方法簡(jiǎn)便、科學(xué)、實(shí)用、安全、有效，本發(fā)明HBsAg蛋白疫苗，能夠在部分臨床試驗(yàn)中激發(fā)特異性細(xì)胞免疫和非細(xì)胞免疫的途徑，降低HBVDNA的水平，改善患者的免疫狀況，可使HBeAg的血清全含量明顯降低，部分轉(zhuǎn)陰。
文檔編號(hào)A61P31/00GK101125202SQ20061004816
公開日2008年2月20日 申請(qǐng)日期2006年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月15日
發(fā)明者馬勝錄 申請(qǐng)人:馬勝錄