專利名稱：韌革菌素及其制備方法和在藥物上的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及韌革菌素(vibralactone)，其制備方法，以該化合物為活性成分的藥物組合物，以及該化合物在制備治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
脂代謝通常維持著人體內(nèi)脂的合成和降解的平衡。此平衡一旦被打破，即發(fā)生高血脂癥，并引起動(dòng)脈硬化、高血壓、糖尿病等。脂代謝調(diào)節(jié)劑可用來控制這些紊亂。非胰島素依賴型糖尿病(non-insulin-dependentdiabetes mellitus，NIDDM)脂解的抑制可降低血糖。在脂肪作為能量的起始階段是甘油三酯的脂肪酶催化水解，甘油三酯的水解導(dǎo)致血液中甘油和脂肪酸水平的提高。脂肪酶抑制劑可以降低血液中的脂肪酸和糖的水平。肥胖和高膽固醇是由于食物中過高的脂肪攝入。飲食中甘油三酯吸收的關(guān)鍵酶是胰脂肪酶(pancreatic lipase)，抑制胰脂肪酶可導(dǎo)致脂肪吸收的抑制。
迄今，現(xiàn)有技術(shù)中沒有含有式(I)化合物韌革菌素(vibralactone)作為有效成分在治療高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的具有藥用價(jià)值的韌革菌素(vihralactone)。
本發(fā)明的另一目的是提供一種從韌革菌(Boreostereum vibrans)發(fā)酵液中提取本發(fā)明化合物的方法。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供一種以式(I)化合物為活性成分的用于治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物組合物，及該化合物和組合物在制備治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物方面的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案用于治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物，其中含有治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥有效量的式(I)化合物(包括立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體)及可藥用載體和/或賦形劑。
本發(fā)明化合物韌革菌素(vibralactone)可以轉(zhuǎn)化藥學(xué)上可接受的鹽和衍生物，如酯、醚和其它衍生物。酯和醚的形成可采用文獻(xiàn)中的方法(用羧酸或氨基酸，氨基酸中的氨基可以保護(hù)，酯化后去保護(hù)；酯化可在脫水劑DCC存在下進(jìn)行)。雙鍵可以采用文獻(xiàn)方法還原，也可用OsO4進(jìn)行羥基化，或氫鹵化。還可以通過雙鍵的環(huán)氧化以及環(huán)外雙鍵氧化成醛、酸或醇引入新的功能基，進(jìn)一步通過Wittig反應(yīng)引入4～10個(gè)碳的鏈，引入的鏈中可攜帶OR1(R＝H或1～4個(gè)碳的烷基)，NR2R3(R2R3＝H或1～4個(gè)碳的烷基)，或F，Cl，Br，I等。
本發(fā)明化合物用作藥物上時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。該藥物組合物含有0.1～99％，優(yōu)選為0.5～90％的本發(fā)明化合物，其余為藥物學(xué)上可接受的鹽，或?qū)θ撕蛣?dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物制品輔劑。將所述的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明的藥物可經(jīng)口服和注射(靜注、肌注)兩種形式給藥。
口服可用其固體或液體制劑，如粉劑、片劑、糖衣劑、膠囊、溶液、糖漿、滴丸劑等。
注射可用其固體或液體制劑，如粉針劑、溶液形注射劑等。
為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用本發(fā)明的式(I)化合物與藥物載體或賦形劑組成的藥物的生物活性結(jié)果來說明它在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用。
胰脂肪酶活性檢測(cè)胰脂肪酶活性檢測(cè)采用4-methylumbelliferyl oleate(4-MU oleate)作為底物。25μl DMSO樣品液，50μl 0.1mM 4-MU溶液(用緩沖液配制而成13mM Tris-HCl，150mM NaCl，1.3mM CaCl2，pH 8.0)在96孔微板上混合，加入25μl脂肪酶溶液(50U/ml，用緩沖液配制而成13mM Tris-HCl，150mM NaCl，1.3mM CaCl2，pH 8.0)。25℃孵化30分鐘，加入0.1ml 0.1M檸檬酸鈉溶液阻斷反應(yīng)，用熒光酶標(biāo)儀讀脂肪酸酶釋放出的4-methylumbelliferone(激發(fā)波長(zhǎng)355nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm)。韌革菌素(vibralactone)的脂肪酶抑制活性IC50為0.4μg/ml。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容進(jìn)行說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實(shí)施例1B.vibrans新鮮子實(shí)體2005年8月采于中國云南省哀牢山，標(biāo)本藏于中國科學(xué)院昆明植物研究所。培養(yǎng)基組成potato(peel off)200g，glucose20g，KH2PO43g，MgSO41.5g，citric acid 0.1g，thiamin hydrochloride 10mg，溶于1升無菌水中。棕色試劑瓶(大小500ml；培養(yǎng)基體積300ml)。pH調(diào)至6.5，滅菌，22℃，140rpm搖床上培養(yǎng)2周。過濾，除去菌絲，濾液(12生)用醋酸乙酯萃取2次，萃取物1.75克進(jìn)行硅膠柱層析，用CHCl3/MeOH梯度洗脫。在CHCl3-MeOH(98∶2)洗脫段得一組分。該組分進(jìn)一步進(jìn)行硅膠柱層析(石油醚-醋酸乙酯8∶1洗脫)和Sephadex LH-20柱層析(CHCl3/MeOH 1∶1)得韌革菌素(vibralactone)純品65mg。
該方法分離出的化合物韌革菌素(vibralactone)其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
韌革菌素(vibralactone)的結(jié)構(gòu)是基于它的質(zhì)譜和核磁共振等波譜數(shù)據(jù)以及計(jì)算而確定。
紅外光譜數(shù)據(jù)IR vKBrmaxcm-13423(OH)，2971，2915，2860，1816(β-lactone)，1112，1000，836.
質(zhì)譜數(shù)據(jù)MS(ESI+)m/z(％)231(100)[M+Na]+，439(85)[2M+Na]+；HR-ESI-MSm/zcalc.for C12H16O3Na[M+Na]+231.1004；found231.0997.
有關(guān)核磁共振數(shù)據(jù)見表1。
該化合物的立體構(gòu)型通過旋光和13C NMR化學(xué)位移計(jì)算決定(表2和表3)。計(jì)算值和實(shí)測(cè)值非常符合。
Table 1NMR spectral data for vibralactone(3)in CDCl3.

*Weak but significant allyl long-range correlations.

Table 2The computed energy，optical rotation and13C NMR data for cis-isomer(1R，5S)-1 a to f.


Table 3The computed energy，optical rotation and13C NMR data for cis-isomer(1S，5R)-1 a to f.

實(shí)施例2按實(shí)施例1制得化合物，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶1的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例3按實(shí)施例1制得化合物韌革菌素(vibralactone)，按常規(guī)膠囊制劑方法制成膠囊。
實(shí)施例4
按實(shí)施例1制得化合物韌革菌素(vibralactone)，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶2的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例5按實(shí)施例1制得化合物韌革菌素(vibralactone)，按化合物晶體與賦形劑重量比1∶3的比例加入賦形劑，制粒壓片。
實(shí)施例6片劑韌革菌素(vibralactone) 100mg淀粉100mg玉米漿17％ 適量硬脂酸鎂適量實(shí)施例7膠囊劑韌革菌素(vibralactone) 100mg淀粉100mg硬脂酸鎂適量制備方法將韌革菌素(vibralactone)與助劑混合，過篩，在合適的容器中均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。
實(shí)施例8安瓿劑韌革菌素(vibralactone) 50mg制備方法將韌革菌素(vibralactone)溶解于2毫升丙二醇中，過濾所得溶液在無菌條件下裝入安瓿瓶中。
權(quán)利要求
1.下述結(jié)構(gòu)式(I)化合物
2.權(quán)利要求1化合物的制備方法，該方法包括以下步驟取高等真菌韌革菌(Boreostereum vibrans)菌種，通過液體發(fā)酵，用醋酸乙酯溶劑萃取，所得提取物反復(fù)用硅膠和Sephedex LH-20柱層析分離，得韌革菌素(vibralactone)。
3.用于治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物(包括立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體)和藥學(xué)上可接受的鹽以及載體。
4.權(quán)利要求1的化合物(包括立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體)在制備治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的具有藥用價(jià)值的韌革菌素(vibralactone)(式I化合物)，及從韌革菌(Boreostereum vibrans)發(fā)酵液中提取本發(fā)明化合物的方法，同時(shí)提供一種以式I化合物為活性成分的用于治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥的藥物組合物，及該化合物及其藥物組合物在制備治療和預(yù)防高血脂癥、糖尿病以及肥胖癥藥物方面的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P3/06GK1907978SQ20061004862
公開日2007年2月7日 申請(qǐng)日期2006年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月17日
發(fā)明者劉吉開, 劉東澤, 朱華結(jié), 王飛, 湯建國 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院昆明植物研究所