專利名稱：補腎增精顆粒劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種補腎增精顆粒劑，特別是用于治療腎陽衰虛所致精子減少，活力低下，死精過多的男性不育癥。
背景技術：
當前環(huán)境污染日益加重，人類生育力呈下降趨勢。據丹麥學者E.Carlsen和A.Giwercman綜合分析1938-1990全球21個國家公開發(fā)表的61篇文獻結果表明，人類精子數過去50年間降低了40％以上，精液量降低20％。我國自70年代至今精子數量下降30％。環(huán)境污染對生殖健康的影響，引起國際社會廣泛重視。早在1991年聯合國在丹麥召開首次“環(huán)境與生殖健康”國際會議；1992年在巴西召開了“環(huán)境與發(fā)展”首腦會議。
目前我國農村化肥、農藥、除草劑、農膜等大量使用，電子垃圾隨處擴散，已經造成了嚴重污染。許多河道發(fā)黑，河岸雜草叢生，垃圾成堆，農田土壤有害元素超標，板結硬化，不僅危及農民身體健康，而且直接影響到農產品的安全，通過食物鏈進入千家萬戶，這對人類生育質量造成嚴重影響，當今，生殖健康質量下降，出生缺陷居高不下。我國約有1200多萬對不孕不育夫婦求助醫(yī)療服務，每年約有30多萬出生缺陷嬰兒降生，對社會和家庭構成壓力，而目前，對男性不育癥尚未有較好的藥物能治療這一問題。
中國專利CN1088809A公開了一種“治療男性不育的復方中成藥”，文中雖有有效實例報道，但效果不佳，總有效率不詳，再則，由于配方中采用人參、龜板膠、鹿角膠等名貴中藥材，使藥價昂貴，影響了推廣應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種能治療因腎陽衰虛所致精子減少，活力低下，死精過多的男性不育癥的藥物，而且藥價便宜，效果更佳，以解決不育男性的痛苦和家庭的矛盾，使有利于患者的學習和工作及建設和諧的小康社會。
本發(fā)明補腎增精顆粒劑由肉蓯蓉、淫羊霍、菟絲子、枸杞子、黃芪、海龍、補骨脂、制何首烏、銀杏、蜈蚣10味中藥組成，它的配方為肉蓯蓉160～170g、淫羊霍230～270g、菟絲子160～170g、枸杞子160～170g、黃芪230～270g、海龍58～70g、補骨脂160～170g、制何首烏230～270g、銀杏160～170g、蜈蚣13～22g。
經藥理、藥效試驗、急性毒性試驗，具有理想的效果。
為了研究該藥物對精子發(fā)生、活力及其降低畸形精子率的作用，本試驗系采用未成熟小鼠以及因缺乏維生素A引起的精子畸形率增加的成年小鼠為動物模型，驗證該制劑的藥理作用。
一、補腎增精顆粒劑對未成熟小鼠精子發(fā)生及其活力的影響(一)試驗材料1、動物小鼠(ICR)，57只，體重(BW)18±1g，由浙江省實驗動物中心提供，屬普通動物級，持有效合格證(浙醫(yī)實驗動物96001號，以下同)。
2、藥物10味中藥，制劑一浸膏，其中海龍和蜈蚣粉碎成細粉，按處方比例混和，備用，其余8味中藥加水10倍，煎煮3次。第1次2h，第2次1.5h，第3次1h，合并濾液，濃縮至適量即得。最終浸膏濃度為2.08g生藥/ml。批號為98116。
3、儀器相差顯微鏡；恒溫水浴；精密分析天平；酸度計等。
(二)試驗設計及其方法1、空白對照組，雄小鼠6只，僅服水，未服其他任何藥物。
2、補腎增精顆粒劑組雄小鼠45只。按不同劑量(1.4g生藥/kgBW～11.2g生藥/kgBW)分成4組(見圖1)；第6組為缺海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組(簡稱缺2味組)，8只；第7組補腎增精顆粒劑單2味組，即海龍和蜈蚣2味組，9只。
3、補腎增精顆粒劑組作為陽性對照組，6只。
上述各組(除空白對照外)，每日給藥1次，連續(xù)1個月。末次給藥24h后，以頸椎脫臼法處死動物，取出附睪尾部組織，置胚胎手術杯中，立即加入1∶40小鼠精子培養(yǎng)液中；用眼科手術剪充分剪碎，并置37℃恒溫水浴箱中孵育10min使精子充分釋入培養(yǎng)液中；再用Macracloth迅速過濾，除去結締組織等；然后用精密取液器，取10μl于潔凈載玻片上，加蓋玻片(22×22mm)，置相差顯微鏡下(×40)，按世界衛(wèi)生組織(WHO)1992標準，觀察精子活率(精子存活率以2％臺盼蘭排斥試驗證實)，至少計數200個精子；并按常規(guī)方法用血球計數板，計算精子密度。
(三)結果
1、精子活率精子活率隨服藥劑量而增加，但各組與對照組和強精顆粒劑組比較，無統計學意義(圖1)。
2、精子活力隨服藥劑量(1.4～5.6g生藥/kgBW)而明顯增加，其中2.8g生藥和5.6g生藥/kg組與對照組比較，P＜0.05。而補腎增精顆粒劑精子活力雖然比對照組有所增加，但無統計學意義(P＞0.05，圖2-3)。
3、精子密度補腎增精顆粒劑組(1.4g～5.6g生藥/kg)隨服藥劑量而明顯增加，與對照組比較，P＜0.05～P＜0.01。在相同劑量下(10倍擬用臨床劑量組)，強精顆粒劑組的精子密度大于補腎增精顆粒劑組。見圖4。
二、補腎增精顆粒劑對因缺乏維生素A所致成年小鼠精子活力及其畸形率的影響取成年小鼠20只，8月齡，體重45±3g。自8月齡起，改喂缺乏維生素A飼料，直至實驗結束，并實施如下試驗。
(一)對小鼠體外精子活力的影響精子處理方法同上試驗，將精子數調節(jié)成106cells/ml；分成4組(見圖5)，每組體積為0.25ml進行補腎增精顆粒劑對小鼠體外精子活力的影響實驗1、對照組不加任何藥物；2、補腎增精顆粒劑2.2g/ml組(相當于擬用臨床劑量5倍)；3、補腎增精顆粒劑4.4g組(擬用臨床劑量10倍)；4、8.8g(擬用臨床劑量20倍)組；然后置37℃恒溫水溶箱，連續(xù)培養(yǎng)4h。分別在0，1，2，3和4h時觀察精子“a+b”級活力。
結果(見圖5)對照組精子活力(a+b)隨培養(yǎng)時間的延長而逐漸降低，從45％下降至20％；而給藥組精子活力(a+b)隨培養(yǎng)時間的延長雖有下降，但下降緩慢。在3h時，4.4g組仍維持在43％，而對照組僅為24％。8.8g組精子活力可達到50％，表明補腎增精顆粒劑對精子活力具有明顯的增強作用。
(二)對缺乏維生素A所致小鼠精子畸形率的影響實驗動物同前述，分成2組實驗1、對照組6只，不給任何藥物僅喂等體積水；2、補腎增精顆粒劑組(2.8g生藥/kgBW，為10倍擬用臨床劑量)，每日經口給藥1次，連續(xù)給藥4周。末次給藥24h，處死動物，取出附睪和輸精管精子，精子處理方法同上，然后觀察精子形態(tài)。根據正常精子頭、頸和尾三部分的形態(tài)頭部頂體為鐮刀形，表面光滑，有明顯的吻端，呈鉤狀；頸部短而直；尾部自上而下為中段、主段和尾段，各段光滑，無其他附屬結構等，鑒定其精子畸形率。
結果對照組精子形態(tài)異常率甚高，可達到67.6±6.5％。異常精子主要表現為頭部頂體呈純形，吻端鉤形消失，尾部主段仍保留胞漿小滴，或呈發(fā)夾型畸形，表明精子附睪成熟受阻。給藥組精子異常率明顯降低(41.2±5.2％)。
三、結論1、補腎增精顆粒劑可明顯地增加幼年小鼠精子數量和提高精子活力，但對精子存活率無明顯作用；2、體外試驗結果表明，該制劑也可直接提高精子活力，并延長精子存活時間；3、補腎增精顆粒劑可顯著地降低成年小鼠畸形精子率。


圖1為補腎增精顆粒劑對未成熟小鼠精子存活率的影響。其中1為對照組，2為補腎增精顆粒劑組1.4g生藥/kg BW，3為補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，4為補腎增精顆粒劑組5.6g生藥/kg BW，5為補腎增精顆粒劑組11.2g生藥/kg BW，6為缺海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，7為單有海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，8為補腎增精顆粒劑組6.7g生藥/kg BW。
圖2為補腎增精顆粒劑對未成熟小鼠精子活力的影響。其中1為對照組，2為補腎增精顆粒劑組1.4g生藥/kg BW，3為補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，4為補腎增精顆粒劑組5.6g生藥/kg BW，5為補腎增精顆粒劑組11.2g生藥/kg BW，6為缺海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，7為單有海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，8為補腎增精顆粒劑組6.7g生藥/kg BW。
圖3為補腎增精顆粒劑對未成熟小鼠附睪尾部精子活力的影響。
圖4為補腎增精顆粒劑對未成熟小鼠附睪精子密度的影響。其中1為對照組，2為補腎增精顆粒劑組1.4g生藥/kg BW，3為補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，4為補腎增精顆粒劑組5.6g生藥/kg BW，5為補腎增精顆粒劑組11.2g生藥/kg BW，6為缺海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，7為單有海龍和蜈蚣的補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW，8為補腎增精顆粒劑組6.7g生藥/kg BW。
圖5為補腎增精顆粒劑對小鼠體外精子活力的作用。其中1為對照組，2為補腎增精顆粒劑組2.2mg生藥/kg BW，3為補腎增精顆粒劑組4.4mg生藥/kg BW，4為補腎增精顆粒劑組8.8mg生藥/kg BW。
圖6為補腎增精顆粒劑對因缺乏維生素A所致成年小鼠精子畸形的影響。其中1為對照組，2為P＜0.001補腎增精顆粒劑組2.8g生藥/kg BW。
本發(fā)明補腎增精顆粒劑具有補腎助陽、益氣生精之功效，治療腎陽衰虛所致精子減少，活力低下，死精過多的男性不育癥有較好的療效。本發(fā)明以小鼠為動物模型，經規(guī)范地進行藥理學研究表明補腎增精顆粒劑對精子發(fā)生、活力及其降低畸形精子率具有明顯的增強和改善作用。臨床試驗初步表明，對治療因少精子癥、弱精子癥和少精子伴弱精子癥所致的男性不育治療效果總有效率達85.7％，其中治愈率為20％，顯效率22.9％。該藥價較低，適合平民百姓用藥，具有較大的推廣價值。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發(fā)明作進一步描述實施例1，配方為肉蓯蓉160～170g、淫羊霍230～270g、菟絲子160～170g、枸杞子160～170g、黃芪230～270g、海龍58～70g、補骨脂160～170g、制何首烏230～270g、銀杏160～170g、蜈蚣13～22g?；颊呙咳找淮?，每次二粒，連服3個月。
表1 某些男性患者服用補腎增精顆粒劑的治療效果

從表1看出，總有效率為85.7％；其中少精子癥和原因不明性不育癥有效率均為100％，但例數較少；少精子癥伴弱精子癥次之(92.3％)；弱精子癥療效較差(69.2％)?？偗煶虨?3.5±30.3日。
權利要求
1.一種補腎增精顆粒劑，配方為肉蓯蓉160～170g、淫羊霍230～270g、菟絲子160～170g、枸杞子160～170g、海龍58～70g、補骨脂160～170g、制何首烏230～270g、黃芪230～270g、銀杏160～170g、蜈蚣13～22g10味中藥組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種補腎增精顆粒劑，特別適用于治療因腎陽衰虛所致精子減少，活力低下，死精過多的男性不育癥。由肉蓯蓉、淫羊霍、菟絲子、枸杞子、海龍、補骨脂、制何首烏、黃芪、銀杏、蜈蚣10味中藥組成。具有補腎助陽、益氣生精之功效，本發(fā)明經藥理學研究表明補腎增精顆粒劑對精子發(fā)生、活力及其降低畸形精子率具有明顯的增強作用，以小鼠為動物模型，驗證了該制劑的藥理作用，并經臨床預試驗證實具有明顯療效，因而具有較大的推廣價值。
文檔編號A61K35/64GK1883612SQ20061005087
公開日2006年12月27日 申請日期2006年5月19日 優(yōu)先權日2006年5月19日
發(fā)明者倪崖, 陳文穎, 袁玉英, 李春波, 石其賢, 毛偉 申請人:浙江省醫(yī)學科學院