專(zhuān)利名稱(chēng)：一種供注射用的中藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種供注射用的中藥制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
米槁性微溫，味甘辛，能溫中散寒，理氣止痛；具有芳香溫通、行氣止痛的功效，主治胸痹，是一種防治冠心病心絞痛的中藥材。目前，米槁一般都是與其他藥物配伍制成，其代表劑型主要有膠囊和滴丸，但這兩種劑型都存在很多不足。如中國(guó)專(zhuān)利公告公開(kāi)的申請(qǐng)?zhí)?3117136.2名稱(chēng)為心胃止痛中藥制劑及其制備方法和申請(qǐng)?zhí)?00410155572.3名稱(chēng)為一種心胃止痛滴心丸制劑及其制備方法的兩件發(fā)明申請(qǐng)，兩者分別將米槁等藥物制成膠囊和滴丸，雖然強(qiáng)調(diào)了中藥復(fù)方的作用，但在現(xiàn)有技術(shù)中，膠囊所用輔料為淀粉，很難吸收揮發(fā)油成分，容易泛油；由于滴丸技術(shù)是近年才逐漸成熟的，該方法用常規(guī)基質(zhì)制成滴丸后所含精油成分極易游離于滴丸表面，在其表面形成一層油膜，然后逐漸揮發(fā)流失，不便貯存。另外，中國(guó)專(zhuān)利公告還公開(kāi)了申請(qǐng)?zhí)?3135734.2名稱(chēng)為治療冠心病、心絞痛的中藥制劑及其制作方法的發(fā)明申請(qǐng)，其制成的復(fù)方注射劑，由于藥物成份較多，難于精制，制劑經(jīng)常發(fā)生分層現(xiàn)象，質(zhì)量很不穩(wěn)定，臨床療效不明顯；同時(shí)，現(xiàn)有技術(shù)中，將提取揮發(fā)油后得到的藥渣也一并入藥，使得含有米槁的制劑劑量不準(zhǔn)確且服用量較大。本發(fā)明意外的發(fā)現(xiàn)，將米槁單獨(dú)制成靜脈注射制劑，不但有利于有效成分的最大限度的應(yīng)用，而且還能準(zhǔn)確鑒定產(chǎn)品質(zhì)量，保證藥效，突出米槁這一特色藥物的功用。因此，我們選擇了注射劑作為米槁制劑，在研制中發(fā)現(xiàn)，制成的米槁注射劑對(duì)穩(wěn)定性要求極高，攜帶、貯藏、運(yùn)輸時(shí)容易破碎，帶來(lái)許多麻煩，因此我們進(jìn)一步將米槁制成凍干粉針劑，發(fā)現(xiàn)能夠有效解決這些問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種供注射用的、質(zhì)量穩(wěn)定、療效好的米槁注射制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述制劑的制備方法。
我們的技術(shù)人員在研究和制備中發(fā)現(xiàn)，米槁的主要有效成分是揮發(fā)油，如果將它制備成注射用藥，技術(shù)上有很大的難度，其一就是揮發(fā)油油水不相溶性。第二是揮發(fā)油注射引起的疼痛和制劑不穩(wěn)定性，其三是原藥材提取的含量難控制。根據(jù)以上難點(diǎn)，我們采用水蒸餾蒸餾法提取米槁?lián)]發(fā)油，控制提取質(zhì)量，再用包合材料對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行包合，解決溶解性問(wèn)題，藥物吸收問(wèn)題以及生物利用度問(wèn)題，同時(shí)我們根據(jù)不同的本發(fā)明注射制劑。采用不同的附加劑，并能保證制備、貯藏、運(yùn)輸過(guò)程中不易被空氣氧化而變質(zhì)，增加了揮發(fā)油的穩(wěn)定性，減輕注射疼痛，確保安全有效。
本發(fā)明所書(shū)包合材料選自淀粉、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精或羥丙基倍他環(huán)糊精(HP-β-CD)，優(yōu)選的是羥丙基倍他環(huán)糊精(HP-β-CD)，包合通過(guò)常規(guī)包合技術(shù)進(jìn)行。
每支注射劑含有有效量的米槁?lián)]發(fā)油，其劑量折合成生藥量為0.5-10g，優(yōu)選是1-5g。
本發(fā)明可以通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料藥為米槁800-1800(重量份)；(2)取米槁藥材，粉碎，加入適量的水浸泡后，經(jīng)水蒸餾充分蒸餾提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，保溫條件下攪拌，室溫下繼續(xù)攪拌，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油的羥丙基倍他環(huán)糊精包合物；(3)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(4)取上述過(guò)濾液，加入不同輔料，再按制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，制成任何一種形式的注射用制劑，如溶液劑，乳劑，干粉劑，凍干粉劑。優(yōu)選的是大輸液和凍干粉針劑。
本發(fā)明優(yōu)選的注射劑的制備方法是(1)取米槁藥材1500g，粉碎，加入6-15倍量的水浸泡8-20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6-10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。(3)取上述過(guò)濾液，加入止痛劑，助溶劑，調(diào)節(jié)滲透壓的附加劑，加注射用水或注射用油或至規(guī)定量，用調(diào)節(jié)PH值至4.0-7.0，灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明優(yōu)選的大輸液劑的制備方法是(1)取米槁藥材1500g，粉碎，加入6-15倍量的水浸泡8-20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6-10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。(3)取上述過(guò)濾液，加入止痛劑，助溶劑，調(diào)節(jié)滲透壓的附加劑，加注射用水或注射用油至規(guī)定量，用調(diào)節(jié)PH值至4.0-7.0，灌裝，加塞，壓蓋，滅菌，即得。
本發(fā)明優(yōu)選的凍干粉針劑的制備方法是(1)取米槁藥材1500g，粉碎，加入6-15倍量的水浸泡8-20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6-10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。(3)取上述過(guò)濾液，加入凍干賦型劑，保護(hù)劑，加注射用水或注射用油至規(guī)定量，調(diào)節(jié)PH值至4.0-7.0，灌裝，冷凍干燥，即得。
本發(fā)明優(yōu)選的米槁?lián)]發(fā)油羥丙基倍他環(huán)糊精(HP-β-CD)包合物的制備通過(guò)對(duì)飽和溶液法和研磨法的優(yōu)化篩選，結(jié)合工業(yè)上的特點(diǎn)，選擇最佳工藝為75％的乙醇混合HP-β-CD((2∶1，V/W)，滴入用無(wú)水乙醇稀釋的揮發(fā)油溶液(1∶1，V/V)，HP-β-CD與揮發(fā)油配比為6∶1(W/V)，邊滴邊研磨，滴完后，再研磨30min，40℃下干燥，即可。
本發(fā)明的注射用米槁制劑，在制成制劑時(shí)根據(jù)需要可以加入藥物可接受的載體，這些載體可以是任何適合制成供注射用制劑的載體(或稱(chēng)輔料，賦型劑)。所述載體選自助溶劑，止痛劑，調(diào)節(jié)滲透壓劑，PH調(diào)節(jié)劑，填充劑，注射用溶劑，防腐劑，抗氧劑，保護(hù)劑等。
所述助溶劑包括1-4％吐溫80、丙二醇或碳酸氫鈉等，所述止痛劑包括1％苯甲醇、5％鹽酸普魯卡因或5％葡萄糖等，所述調(diào)節(jié)滲透壓劑包括0.9％氯化鈉、葡萄糖、磷酸鹽或枸椽酸鹽等，所述PH調(diào)節(jié)劑包括葡甲胺、鹽酸、枸椽酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉等，所述注射用溶劑包括水，乙醇，麻油、茶油或花生油等，所述填充劑包括甘露醇、乳糖、甘露糖醇、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、葡聚糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸等，其他可加入的成分包括甘油、乙醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、土溫60、司盤(pán)-80、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、十六醇、沒(méi)食子酸酯類(lèi)、瓊脂、三乙醇胺、堿性氨基酸、尿素、尿囊素表面活性劑、聚乙二醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素A、維生素C、維生素E、維生素D、氮酮、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鉀、乳酸鈉、淀粉、蔗糖、硅衍生物、纖維素及其衍生物、磷脂類(lèi)材料等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用水蒸餾蒸餾法提取米槁?lián)]發(fā)油后，再用羥丙基倍他環(huán)糊精(HP-β-CD)進(jìn)行包合。由于HP-β-CD為水溶性的包合物，用其包合的揮發(fā)油制成的注射制劑在溶液中溶解性很好，注射時(shí)吸收好，生物利用度高，患者痛感不明顯，容易被患者接受；而且用HP-β-CD對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行包合，使其在制備、貯藏、運(yùn)輸過(guò)程中不易被空氣氧化而變質(zhì)，增加了揮發(fā)油的穩(wěn)定性，提高了療效。本發(fā)明注射劑還加入了止痛劑，減少了注射引起的疼痛。本發(fā)明大輸液劑不含任何抑菌劑，確保安全有效。
本發(fā)明的注射劑，質(zhì)量控制簡(jiǎn)單有效，以下為其中有效成分的含量測(cè)定方法。
本發(fā)明是通過(guò)1，8-桉葉素的含量測(cè)定對(duì)揮發(fā)油的質(zhì)量進(jìn)行控制的氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定米槁制劑中1，8-桉葉素的含量的方法1儀器、藥材與試劑米槁購(gòu)自貴州省醫(yī)藥公司，符合《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版的要求，GCMS-QP5050A氣質(zhì)聯(lián)用儀、GC-17A氣相色譜儀和DSC-60型差示量熱掃描儀均為日本島津生產(chǎn)；1，8-桉葉素(昆明市化學(xué)試劑公司)，HP-β-CD(天津市化學(xué)試劑二公司)為實(shí)驗(yàn)所需，其它試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果2.1揮發(fā)油的提取稱(chēng)取米槁150g，適當(dāng)粉碎后，混勻，加水淹沒(méi)過(guò)，浸泡1h，倒入10000ml的長(zhǎng)頸圓底燒瓶?jī)?nèi)，再加10倍量的水，裝上冷凝裝置，浸泡14小時(shí)后，電熱套加熱蒸餾8小時(shí)提取揮發(fā)油，最后得到淡黃色的米槁?lián)]發(fā)油。
2.2揮發(fā)油成分的鑒定混合揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜(GC2MS)測(cè)試和圖譜驗(yàn)證，選定峰面積大，清晰度高的29個(gè)峰，鑒定了峰面積歸一化法計(jì)算出的相對(duì)百分含量居前的前7個(gè)成分，依次為1，8-桉葉素(23.75％)，香檜烯(10.63％)，dl-檸檬烯(8.77％)，α-松油醇(6.36％)，β-蒎烯(5.851％)，對(duì)聚傘素(4.933％)和α-蒎烯(4.394％)等，1，8-桉葉素為第6號(hào)離子峰。
2.3揮發(fā)油中1，8-桉葉素的含量測(cè)定2.3.1氣相色譜條件因揮發(fā)油中含有1，8-桉葉素，所以采用氣相色譜測(cè)定桉葉素的含量。具體條件如下柱為10％PEG-20M，Φ2.6mm×2.0m；柱溫145℃，氣化室溫度200℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度200℃，載氣為氮?dú)猓獨(dú)鈮?.0kg/cm2，流速53ml/min。
2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制精密稱(chēng)取1，8-桉葉素標(biāo)準(zhǔn)品0.25g，用無(wú)水乙醇溶于25ml的容量瓶中，再分別吸取0.15、1.5、2.5、3.5、5.0ml，用無(wú)水乙醇溶于5ml的容量瓶中，配制成濃度為1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣1ul，按氣相色譜條件進(jìn)行操作。以1，8-桉葉素的濃度(C)為橫坐標(biāo)，1，8-桉葉素峰高(ΔH)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為ΔH＝111463C+17306r＝0.9997在1.0-10.0mg/ml的范圍內(nèi)，濃度與總峰高呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。
2.3.3 1，8-桉葉素的含量測(cè)定精密稱(chēng)取3批揮發(fā)油樣品0.25g，用無(wú)水乙醇溶于5ml的容量瓶中，配制成濃度為50mg/ml，進(jìn)樣1ul，按氣相色譜條件進(jìn)行操作，將所得的總峰高帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，由求得的濃度得出3批揮發(fā)油中1，8-桉葉素的含量分別為6.3％、11.6％和12.6％。
2.4揮發(fā)油包合物的選擇與制備2.4.1羥丙基倍他環(huán)糊精(HP-β-CD)包合物的制備通過(guò)對(duì)飽和溶液法和研磨法的優(yōu)化篩選，結(jié)合工業(yè)上的特點(diǎn)，選擇最佳工藝為75％的乙醇混合HP-β-CD((2∶1，V/W)，滴入用無(wú)水乙醇稀釋的揮發(fā)油溶液(1∶1，V/V)，HP-β-CD與揮發(fā)油配比為6∶1(W/V)，邊滴邊研磨，滴完后，再研磨30min，40℃下干燥，即可。
2.4.2揮發(fā)油HP-D-CD包合物的鑒定將揮發(fā)油HP-β-CD包合物通過(guò)做DSC圖譜與淀粉、HP-β-CD及其混合物的DSC圖譜比較，見(jiàn)表1。
表1 揮發(fā)油B-CD包合物的DSC圖譜與淀粉、HP-β-CD及其混合物的DSC圖譜比較
從DSC圖譜可知，HP-β-CD和淀粉的DSC圖譜不同，但它們二者與揮發(fā)油混合物的DSC圖譜在大于120℃處都有一個(gè)尖峰出現(xiàn)，說(shuō)明此尖峰是揮發(fā)油自身的DSC圖譜峰，當(dāng)形成包合物后，尖峰消失，確證HP-β-CD與揮發(fā)油的包合物已經(jīng)產(chǎn)生。而淀粉的揮發(fā)油包合物的尖峰未完全消失；用淀粉包合揮發(fā)油的尖峰仍然存在。說(shuō)明米槁?lián)]發(fā)油經(jīng)HP-β-CD包合效果最好。
2.4.3揮發(fā)油HP-β-CD包合物中1，8-桉葉素的測(cè)定稱(chēng)取3份揮發(fā)油各0.18g，制得3批揮發(fā)油HP-β-CD包合物后，采取水蒸氣蒸餾方法獲得的揮發(fā)油分別收集于3個(gè)10ml容量瓶?jī)?nèi)，無(wú)水乙醇定容，按上述氣相條件操作，由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得揮發(fā)油HP-β-CD包合物所含1，8-桉葉素分別為5.8、5.7、5.0mg。
2.4.4HP-β-CD包含物中揮發(fā)油包合率的計(jì)算稱(chēng)取2.4.3項(xiàng)下的3份揮發(fā)油，按上述氣相色譜條件測(cè)出其中所含的1，8-桉葉素的含量，則揮發(fā)油HP-β-CD包合物所含1，8-桉葉素的含量與揮發(fā)油中所含1，8-桉葉素含量的比，即為HP-β-CD包含物中揮發(fā)油的包合率，結(jié)果平均包合率為93.4％。
結(jié)論揮發(fā)油的包合使得揮發(fā)油從液態(tài)轉(zhuǎn)為固態(tài)粒子，提高了揮發(fā)油穩(wěn)定性，由揮發(fā)油包合物與現(xiàn)有技術(shù)中米槁與其他藥物混合提取制成的膠囊和滴丸相比，避免在貯存過(guò)程揮發(fā)油的含量減少。
通過(guò)米槁?lián)]發(fā)油的含量測(cè)定，使得提取過(guò)程中米槁?lián)]發(fā)油的含量得到控制，從而使制劑原料中所含的揮發(fā)油含量也控制在一定范圍，為制劑的穩(wěn)定、可控提供了可行的方法。
以下通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，說(shuō)明本發(fā)明的有益效果。
藥效學(xué)研究本發(fā)明米槁注射制劑是治療冠心病、心絞痛的中藥制劑，具有芳香溫通、行氣止痛的功效，主治胸痹，臨床用于冠心病、心絞痛、哮喘引起的胸痛、憋氣、心悸等癥。我們以米槁注射液為例，采用大鼠冠脈結(jié)扎后出現(xiàn)的心肌缺血的動(dòng)物模型，研究其抗心肌缺血的藥理作用。
1材料1.1藥物和試劑米槁注射液由本公司藥廠(chǎng)提供，每毫升含生藥5.8g(批號(hào)20031102)；復(fù)方丹參片廣東白云山中藥廠(chǎng)生產(chǎn)(批號(hào)2003317)；安定片北京四環(huán)制藥廠(chǎng)生產(chǎn)(批號(hào)2003208)；烏來(lái)糖蘇州第二化工廠(chǎng)生產(chǎn)(批號(hào)2003418)。
1.2動(dòng)物Wistar大鼠雄性，體重200～300g。昆明種小鼠雌雄各半，體重18～21g。均購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物研究所繁殖場(chǎng)(合格證號(hào)SCXK1-00-0003；SCXK11-00-0005)。
1.3儀器RBP-1B型大鼠血壓計(jì)北京協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)研究所制造。950型三道光小鼠自主活動(dòng)記錄儀日本制造。XD-3型心電圖機(jī)德國(guó)制造。R80b型血液黏度測(cè)定儀、LG-B-190紅細(xì)胞聚集變形儀深圳創(chuàng)佳科學(xué)儀器公司生產(chǎn)。AVL995型血?dú)夥治鰞x；瑞士制造。
2方法和結(jié)果2.1心肌缺血試驗(yàn)取200～300g雄性大鼠用10％烏來(lái)糖腹腔注射麻醉(1mL/100g)，背位固定，胸部去毛，消毒。于左側(cè)第4肋間開(kāi)胸暴露心臟，輕壓左側(cè)胸部，擠出心臟，距左冠狀動(dòng)脈起點(diǎn)2～3mm處穿一細(xì)絲線(xiàn)結(jié)扎，心臟放回胸腔，閉胸。術(shù)后第二天動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組10只，米槁注射液大劑量組(12g/kg)相當(dāng)于臨床等效劑量的2倍；米槁注射液中劑量組(6g/kg)相當(dāng)于臨床等效劑量；米槁注射液小劑量組(3g/kg)相當(dāng)于臨床劑量的1/2倍，復(fù)方丹參片(0.5片g/kg)陽(yáng)性對(duì)照藥，相當(dāng)于臨床等效劑量的2倍，每日一次，連續(xù)給藥20d，空白對(duì)照組和模型組給等容量的蒸餾水。用組間t檢驗(yàn)比較模型組與各給藥組間的差異，見(jiàn)表1。
表1 對(duì)心肌缺血大鼠心電圖的影響(x±s，n＝10)
注與模型組比較1)P＜0.05，2)P＜0.01，下同。
2.1.1對(duì)血壓、心率及心電圖的影響于結(jié)扎前和結(jié)扎后3、6、9、12、15、18、21d分別測(cè)定大鼠的II導(dǎo)聯(lián)心電圖，觀(guān)察T波倒置出現(xiàn)百分率及ST段抬高的總mv數(shù)即∑ST。試驗(yàn)最后一天給藥30min后測(cè)心率和血壓，見(jiàn)表2。
表2 對(duì)心肌缺血大鼠心率和血壓的影響(x±s，n＝10)
表1、2顯示，冠脈結(jié)扎后大鼠大多出現(xiàn)ST段抬高，T波倒置的心肌缺血和損傷反應(yīng)，血壓升高。給藥后，各給藥組大鼠抬高的ST段明顯下降，T波倒置減少或反轉(zhuǎn)，血壓下降，藥后20d基本恢復(fù)正常，其中以大、中劑量組作用最為明顯，藥后9dT波倒置消失，抬高的ST段明顯下降，藥后18d全部恢復(fù)正常，與對(duì)照組比較差異顯著。模型組大鼠冠脈結(jié)扎前后抬高的ST段和T波倒置情況無(wú)明顯變化，并伴有P波消失或倒置等心率失常出現(xiàn)。表明米槁注射液可對(duì)抗大鼠冠脈結(jié)扎后出現(xiàn)的心肌缺血和損傷反應(yīng)。
2.1.2 對(duì)心肌梗塞范圍的定量組織學(xué)測(cè)量 試驗(yàn)最后一天給藥30min后，用10％烏來(lái)糖腹腔注射麻醉，開(kāi)胸取出心臟，用生理鹽水洗凈，稱(chēng)全心重量。在心臟結(jié)扎線(xiàn)以下，平行冠脈溝將心室橫切成相等厚度的5片，放入用pH714磷酸緩沖液新配制的015gPdl氯化硝基四氮唑藍(lán)(N2BT)溶液中，在37℃恒溫水浴染色15min。梗塞部分不被染色，未梗塞部分呈藍(lán)色。切取梗塞區(qū)稱(chēng)重(計(jì)算梗塞心肌占全心重量的百分比)，固定于10％甲醛液中，固定后，流水沖洗，經(jīng)各級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋，切片，HE染色，封片，光鏡觀(guān)察其顯微結(jié)構(gòu)。
表3-1 對(duì)大鼠心肌梗塞范圍的影響(x±s，n＝10)
表3-2 心肌組織病變程度比較(n＝10)
病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)-正常結(jié)構(gòu)(心肌組織未見(jiàn)病變)。+輕度。心肌組織輕度腫脹，有少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。++中度。部分心肌細(xì)胞梗死，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。+++重度。心肌組織大面積梗死，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
結(jié)果米槁注射液各劑量組可減少冠脈結(jié)扎大鼠的心肌梗塞范圍，與對(duì)照組比較差異顯著。鏡下觀(guān)察，空白對(duì)照組心肌組織排列整齊，染色均勻，未見(jiàn)明顯病理改變。模型對(duì)照組心肌組織排列紊亂，染色變淺，心肌細(xì)胞有不同程度水腫，壞死區(qū)部分心肌細(xì)胞肥大，有間質(zhì)性心肌炎，心肌細(xì)胞壞死、溶解，有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。陽(yáng)性藥復(fù)方丹參及米槁注射液大、中、小劑量組，心肌組織病變與模型組比較，有不同程度減輕。詳見(jiàn)表3-1、3-2。
2.2對(duì)血?dú)飧髦笜?biāo)的影響取200～300g雄性大鼠用10％烏來(lái)糖腹腔注射麻醉，開(kāi)胸，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈后閉胸，連續(xù)給藥20d，方法及分組情況同上。術(shù)后第22d，給藥30min后烏來(lái)糖腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血測(cè)血?dú)飧髦笜?biāo)。
結(jié)果表5可見(jiàn)給藥組大、中劑量可使冠脈結(jié)扎大鼠血液中的O2含量、O2飽和度和O2分壓降低，CO2分壓升高，降低耗氧量，與對(duì)照組比較差異明顯。
2.3活血化瘀試驗(yàn)取200～300g雄性大鼠用10％烏來(lái)糖腹腔注射麻醉，開(kāi)胸，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈后閉胸，連續(xù)給藥20d，方法及分組情況同上。術(shù)后第22d，給藥30min后烏來(lái)糖腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血測(cè)血液流變學(xué)各指標(biāo)。
結(jié)果表6可見(jiàn)給藥組可降低冠脈結(jié)扎大鼠低切變率下的全血黏度，與對(duì)照組比較差異顯著，對(duì)壓積、聚積指數(shù)、變形指數(shù)無(wú)明顯影響。
表5 米槁注射液對(duì)心肌缺血大鼠血?dú)獾挠绊?x±s，n＝10)
表6 米槁注射液對(duì)心肌缺血大鼠血液流變學(xué)的影響(x±s，n＝10)
3討論冠心病是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的簡(jiǎn)稱(chēng)。它是由于供應(yīng)心臟營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的血管一冠狀動(dòng)脈發(fā)生了粥樣硬化所致。這種粥樣硬化的斑塊，堆積在冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜上，久而久之，越積越多，使冠狀動(dòng)脈管腔嚴(yán)重狹窄甚至閉塞，從而導(dǎo)致了心肌的血流量減少，供氧不足，使心臟的正常工作受到不同程度的影響，由此產(chǎn)生一系列缺血性表現(xiàn)，如胸悶，憋氣，心絞痛，心肌梗死甚至猝死等。屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)“胸痹”、“真心痛”范疇。其基本病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)、氣虛血瘀，以瘀阻心脈為其主要病理改變，因此，通脈是改善心肌供血最為重要的手段。動(dòng)脈粥樣硬化的產(chǎn)生與中醫(yī)血瘀證密切相關(guān)，米槁注射液根據(jù)中醫(yī)藥理論，以芳香溫通、行氣止痛為治療大法，所用之藥既符合中醫(yī)的辨證論治和理法方藥，又有一定的現(xiàn)代藥理研究依據(jù)，以上藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，米槁注射液能對(duì)抗大鼠冠脈結(jié)扎后出現(xiàn)的心肌缺血和損傷反應(yīng)，減少心肌梗塞范圍，降低耗氧量，降低低切變率下的全血黏度。
4、結(jié)果米槁注射液具有對(duì)抗大鼠冠脈結(jié)扎后出現(xiàn)的心肌缺血和損傷，減少心肌梗塞范圍；降低耗氧量；降低低切變率下的血液黏度。對(duì)抗大鼠冠脈結(jié)扎后引起的心肌缺血的作用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合事實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，下列各事實(shí)例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，對(duì)本發(fā)明并無(wú)限制。
本發(fā)明實(shí)施例1米槁注射液制備方法(1)取米槁藥材1500g，粉碎，加入10倍量的水浸泡14小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾8小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入山梨酸0.2g，甘油25ml，氯化鈉8g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至5.5，灌封，滅菌，即得。
本發(fā)明實(shí)施例2(1)取米槁藥材1000g，粉碎，加入6倍量的水浸泡8小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入山梨酸0.15g，20ml土溫-60，氯化鈉8g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至4.0，灌封，滅菌，即得。即得本發(fā)明米槁注射液200支，5ml/支，肌內(nèi)注射，一日1-2次，一次1-2支。
本發(fā)明實(shí)施例3(1)取米槁藥材1800g，粉碎，加入15倍量的水浸泡20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入山梨酸0.25g，丙二醇30ml，氯化鉀8g，加注射用水至規(guī)定量，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至7.0，灌封，滅菌，即得。即得本發(fā)明米槁注射液200支，5ml/支，肌內(nèi)注射，一日1-2次，一次1-2支。
實(shí)施例4米槁大輸液劑制備方法(1)取米槁藥材1500g，粉碎，加入10倍量的水浸泡14小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾8小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入右旋果糖和乳糖219g，助溶劑，調(diào)節(jié)滲透壓的附加劑，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至6.0，灌裝，加塞，壓蓋，滅菌，即得本發(fā)明米槁大輸液劑1000ml，使用時(shí)配以氯化鈉溶液稀釋?zhuān)o脈滴注，一日1-2次，一次250-500ml。
實(shí)施例5(1)取米槁藥材1800g，粉碎，加入15倍量的水浸泡20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入甘露醇和葡聚糖180g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至4.0，灌裝，加塞，壓蓋，滅菌，即得本發(fā)明米槁大輸液劑1000ml，使用時(shí)配以氯化鈉溶液稀釋?zhuān)o脈滴注，一日1-2次，一次250-500ml。
實(shí)施例6(1)取米槁藥材800g，粉碎，加入6倍量的水浸泡8小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入甘露醇和葡聚糖180g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至7.0，灌裝，加塞，壓蓋，滅菌，即得本發(fā)明米槁大輸液劑1000ml，使用時(shí)配以氯化鈉溶液稀釋?zhuān)o脈滴注，一日1-2次，一次250-500ml。
本發(fā)明實(shí)施例7米槁凍干粉針劑制備方法(1)取米槁藥材1500g，粉碎，加入6-15倍量的水浸泡8-20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6-10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入聚乙烯毗咯烷酮200g，甘露醇500g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至5.8，灌裝，冷凍干燥，即得。即得本發(fā)明米槁凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例8(1)取米槁藥材800g，粉碎，加入6倍量的水浸泡8小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾6小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入甘露醇和葡聚糖180g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至4.0，灌裝，冷凍干燥，即得。即得本發(fā)明米槁凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例9(1)取米槁藥材1800g，粉碎，加入15倍量的水浸泡20小時(shí)后，經(jīng)水蒸餾蒸餾10小時(shí)提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油緩慢加入到HP-β-CD飽和水溶液(v/g)中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時(shí)，室溫下繼續(xù)攪拌5小時(shí)，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，60℃以下干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用。
(3)取上述過(guò)濾液，加入葡萄糖和果糖225g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調(diào)節(jié)PH值至7.0，灌裝，冷凍干燥，即得。即得本發(fā)明米槁凍干粉針劑1000支。肌內(nèi)注射，一日1-2次，一次1-2支。
權(quán)利要求
1.一種供注射用的中藥制劑，其特征在于，活性成分為中藥米槁的揮發(fā)油。
2.權(quán)利要求1的中藥制劑，其特征在于，其中還含有藥物可接受的載體。
3.權(quán)利要求1的中藥制劑，其特征在于，所述藥物可接受的載體選自助溶劑，止痛劑，滲透壓調(diào)節(jié)劑，PH調(diào)節(jié)劑，填充劑，注射用溶劑，防腐劑，抗氧劑，保護(hù)劑，包合材料。
4.權(quán)利要求1的中藥制劑，其特征在于，所述中藥米槁的揮發(fā)油被包合材料包合。
5.權(quán)利要求4的中藥制劑，其特征在于，所述包合材料選自淀粉、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精或羥丙基倍他環(huán)糊精。
6.權(quán)利要求4的中藥制劑，其特征在于，所述中藥米槁的揮發(fā)油和包合材料的比例為1∶6。
7.權(quán)利要求2的中藥制劑，其特征在于，每支注射劑含有有效量的米槁?lián)]發(fā)油，其劑量折合成米槁生藥量為0.5-10g，其余為藥物可接受的載體。
8.權(quán)利要求1的中藥制劑的制備方法，其特征在于，經(jīng)過(guò)以下步驟(1)取米槁藥材，粉碎，加水浸泡后，經(jīng)水蒸汽蒸餾提取揮發(fā)油，將收集的揮發(fā)油加入到羥丙基倍他環(huán)糊精飽和水溶液中，攪拌，冷藏過(guò)夜，過(guò)濾，干燥，得到米槁?lián)]發(fā)油的羥丙基倍他環(huán)糊精包合物；(2)取上述包合物用注射用水溶解，過(guò)濾，備用；(3)取上述過(guò)濾液，加入藥物可接受的載體，再按制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)，制成注射用制劑。
9.權(quán)利要求8的制備方法，其特征在于，所述制成注射用制劑選自注射用溶液劑，注射用乳劑，注射用干粉劑，注射用凍干粉劑。
10.權(quán)利要求1的中藥制劑的含量測(cè)定方法，是測(cè)定米槁?lián)]發(fā)油中1，8-桉葉素的含量，其特征在于，經(jīng)過(guò)以下步驟氣相色譜條件柱為10％PEG-20M，Φ2.6mm×2.0m；柱溫145℃，氣化室溫度200℃，F(xiàn)ID檢測(cè)器溫度200℃，載氣為氮?dú)?，氮?dú)鈮?.0kg/cm2，流速53ml/min；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制精密稱(chēng)取1，8-桉葉素標(biāo)準(zhǔn)品0.25g，用無(wú)水乙醇溶于25ml的容量瓶中，再分別吸取0.15、1.5、2.5、3.5、5.0ml，用無(wú)水乙醇溶于5ml的容量瓶中，配制成濃度為1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣1ul，按氣相色譜條件進(jìn)行操作；以1，8-桉葉素的濃度(C)為橫坐標(biāo)，1，8-桉葉素峰高(ΔH)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為ΔH＝111463C+17306r＝0.9997；1，8-桉葉素的含量測(cè)定精密稱(chēng)取揮發(fā)油樣品0.25g，用無(wú)水乙醇溶于5ml的容量瓶中，配制成濃度為50mg/ml，進(jìn)樣1ul，按氣相色譜條件進(jìn)行操作，將所得的總峰高帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，由求得的濃度得出揮發(fā)油中1，8-桉葉素的含量。
全文摘要
本發(fā)明是一種供注射用的中藥制劑及其制備方法，它是由單味藥中藥米槁按照常規(guī)工序提取有效成分后制作成中藥注射劑、大輸液劑和凍干粉針劑制劑；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的制劑更為簡(jiǎn)單，成分精簡(jiǎn)，安全有效。有效成分在溶液中溶解性很好，注射時(shí)吸收好，生物利用度高，患者痛感不明顯，容易被患者接受；并能保證在制備、貯藏、運(yùn)輸過(guò)程中不易被空氣氧化而變質(zhì)，而且生產(chǎn)成本低廉、能夠較好控制質(zhì)量，另外它的治療效果明顯，主治由陰寒凝結(jié)、氣失溫煦所致胸痹心痛(冠心病心絞痛)；癥見(jiàn)胸痛徹背，感寒痛甚，胸悶氣短、心悸、重則哮喘，不能平臥，面色蒼白，四肢厥冷，舌苔白，脈緊。
文檔編號(hào)A61K9/08GK1833677SQ20061005090
公開(kāi)日2006年9月20日 申請(qǐng)日期2006年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月5日
發(fā)明者葉湘武, 王澤坤 申請(qǐng)人:貴州益佰制藥股份有限公司