專利名稱：一種中藥提取物、制劑及其制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥技術領域，具體地說，是由當歸、川芎或當歸、川芎、紅花配比提取的提取物、含有該提取物的制劑及其制備方法。
背景技術：
根據(jù)我國流行病學調(diào)查，近五十年來不論在農(nóng)村或城市，心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢。50-60年代我國人口死亡原因中心血管病和腦血管病分別居第五六位，1970年以后則分別上升至第二三位，心腦血管疾病死亡者已占全部疾病死因第一位。我國因心腦血管疾病死亡者占總死亡人口的百分比，已由1957年的12.07％上升到2001年的42.6％，每年死于心腦血管疾病者達200萬，另有部分患者雖經(jīng)搶救而幸存，但多數(shù)留下殘疾，生活不能自理，給親屬及社會造成嚴重負擔。心腦血管疾病也是西方國家人群死亡的主要原因。根據(jù)目前已有的流行病學資料推測，疾病的發(fā)展趨勢是到2020年，人類疾病死因排列順序?qū)⒂兄卮笞兓?，但是冠心病和腦卒中仍將是人類死因的第一位和第二位。到那時，估算全球冠心病死亡人數(shù)將自1990年的630萬增至1100萬；腦卒中自440萬增至770萬。30年中循環(huán)系統(tǒng)死因構成將增高59.6％，冠心病和腦卒中分別增高74.6％和75％。這些資料充分說明，心腦血管疾病不僅是危害人類健康的主要疾病，更是目前和未來20年內(nèi)人類致死、致殘的“頭號殺手”。
在心腦血管疾病的治療藥物中，中西藥的應用各有側(cè)重，中藥以其副作用小的優(yōu)勢也占據(jù)較大的市場份額。例如由黃芪、黨參、當歸、丹參、紅花組成的益氣活血方[祝維峰，山東中醫(yī)學院學報，1994，18(5)]；由生脈飲加丹參、黃芪、三七、紅花、元胡、山楂組成的丹芪生脈飲，[陳宇春，光明中醫(yī)，1999，14(5)]；由黃芪、黨參、麥冬、丹參、川芎、降香組成的冠心病基本方[王金榮等，遼寧中醫(yī)雜志，2001，28(8)]；由丹參、延胡索、黃芪、赤芍、川芎、當歸組成的舒心通脈片[王秀娥等，山東中醫(yī)雜志，1997，16(8)]；等等。但以上臨床處方和中成藥均有一定的不足之處，或偏于益氣，或偏于通陽，或偏于活血，或劑型較差，臨床上未得到全面推廣。
并且現(xiàn)有技術中，當歸、川芎和紅花多以水蒸氣蒸餾法和有機溶媒回流法提取其有效成分，因提取溫度高、時間長、步驟多，導致有效成分的遺失，如揮發(fā)油中的主要成分蒿本內(nèi)酯異構化，從而造成有效成分含量的降低。
因此開發(fā)出一種組方精練、獨到，有效成分含量高，療效顯著的治療心腦血管疾病的中藥制劑是人們努力的方向。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一種組方精煉、獨到，有效成分含量高的治療心腦血管疾病的中藥提取物。
本發(fā)明的另一目的是提供包含該提取物的中藥復方制劑。
本發(fā)明的又一目的是提供該中藥提取物及其制劑的制備方法。
本發(fā)明是通過下面的技術方案實現(xiàn)的。
本發(fā)明藥物是在《普濟本事方》的經(jīng)典止血活血方子——佛手散的基礎上進行的改進。當歸，辛、甘、溫，歸肝、心、脾經(jīng)；川芎，辛、溫，歸肝、膽、心包經(jīng)；兩味藥活血化瘀，通絡止痛。為了達到更好的療效，本發(fā)明還選紅花和冰片入藥，紅花，辛、溫，歸心、脾、肺經(jīng)；冰片，辛、苦、微寒，歸心、脾、肺經(jīng)，清郁熱，止疼痛。以上諸藥，在中醫(yī)方劑學的理論基礎上，巧妙配伍，精妙組合，嚴密組方，按照合理的現(xiàn)代提取工藝提取有效成分并制備成藥物制劑，從而達到活血化瘀，理氣止痛之目的。
制備本發(fā)明中藥提取物的原料主要為當歸、川芎，其重量份配比為當歸30～75份 川芎20～65份制備本發(fā)明中藥提取物的原料還可加入紅花，其各組分用量為當歸30～75份 川芎20～65份 紅花5～10份優(yōu)選為當歸40～50份 川芎40～50份 紅花8～10份本發(fā)明所述的“中藥提取物”是指上述配方中原料藥親脂性成分和親水性成分的混合物。在本發(fā)明中，凡使用“中藥提取物”術語時，即表明上述兩種提取物之混合物的總稱。
所述的中藥提取物由超臨界流體萃取法提取，優(yōu)選CO2超臨界流體萃取法提取。優(yōu)選萃取條件為萃取溫度為30℃～50℃，壓力為25MPa～45Mpa，提取時間為1～3h，CO2流量為10～30kg/L，夾帶劑為0.5％～5％丙酮；更優(yōu)選萃取條件為萃取溫度為40℃，壓力為35Mpa，提取時間為2.5h，CO2流量為25kg/L，夾帶劑為2％丙酮。
以上述中藥提取物作為活性成分，加入賦形劑，可以制成各種藥物劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、口服液、注射劑等。
以上述中藥提取物作為活性成分，還可以再加入冰片和賦形劑，制成各種藥物劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、滴丸劑、口服液、注射劑等。
本發(fā)明所述的中藥制劑是指藥劑中的常規(guī)劑型，可以是片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑(硬膠囊劑和軟膠囊劑)、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、滴丸劑等；優(yōu)選的是顆粒劑、膠囊劑(硬膠囊和軟膠囊)、片劑、丸劑；最佳為軟膠囊劑。加入的輔料可以是淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、明膠、甘油、瓊脂、碳酸鈣、表面活性劑、聚乙二醇、糊精等。
以本發(fā)明的中藥提取物為活性成分制備軟膠囊時，各組分重量配比為中藥提取物2.5％～10％ 植物油85％～96％ 助懸劑1.5％～5％優(yōu)選配比為5％～8％ 植物油87％～92％ 助懸劑為2％～4％其中，所述植物油選自大豆油、麻油、玉米油、菜籽油、花生油、芝麻油、葵花籽油、核桃油；優(yōu)選大豆油、麻油；所述助懸劑選自蜂蠟、黃蠟、白蜂蠟、蟲蠟；優(yōu)選蜂蠟、黃蠟。
具體的制備方法包括以下步驟稱取配方量的中藥提取物、助懸劑和適量的植物油；加熱，使助懸劑溶解；用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度；加入余量植物油至配方量，剪切至分散均勻；藥液與囊材液用自動旋轉(zhuǎn)軋囊機制備成軟膠囊。其中，所述的加熱溫度優(yōu)選70℃～85℃。
以本發(fā)明的中藥提取物加入冰片制備軟膠囊時，各組分重量配比為中藥提取物2.5％～10％ 植物油80％～95.8％ 助懸劑1.5％～5％ 冰片0.2％～5％優(yōu)選配比為中藥提取物5％～8％ 植物油86％～91.5％ 助懸劑為2％～4％ 冰片0.5％～2％其中，所述植物油選自大豆油、麻油、玉米油、菜籽油、花生油、芝麻油、葵花籽油、核桃油；優(yōu)選大豆油、麻油；所述助懸劑選自蜂蠟、黃蠟、白蜂蠟、蟲蠟；優(yōu)選蜂蠟、黃蠟。
上述軟膠囊劑的制備方法包括以下步驟稱取配方量的中藥提取物、助懸劑、冰片和適量的植物油；加熱，使助懸劑溶解；用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度；加入余量植物油至配方量，剪切至分散均勻；藥液與囊材液用自動旋轉(zhuǎn)軋囊機制備成軟膠囊。其中，所述的加熱溫度優(yōu)選70℃～85℃。
上述軟膠囊的囊材是膠料，水，增塑劑和防腐劑。其中，膠料選自明膠或阿拉伯膠，優(yōu)選明膠；增塑劑為甘油或山梨醇或甘油與山梨醇的混合物；干膠料同干增塑劑的比為1∶0.3～1；膠料與水的比為1∶0.4～1.4。
本發(fā)明藥物可改善腦微小動脈的血液循環(huán)，有利于改善大腦皮層腦血管床的供血，腦微小動脈括約肌的開放，可用于預防和治療心、腦血管疾病，尤其對小中風、腦性眩暈、腦梗塞后遺癥、冠心病、心絞痛等有顯著療效。
本發(fā)明藥物的提取工藝是經(jīng)過大量試驗的結(jié)果，下面通過具體試驗說明。
實驗材料及檢測方法1.實驗藥材、試劑1.1藥材川芎、當歸及紅花購于陜西商洛藥源基地，按中國2005年版藥典一部檢驗均為合格品。其中，當歸和川芎的阿魏酸含量分別為0.053％和0.025％；紅花中羥基紅花黃色素的含量為1.05％。
1.2試劑甲醇、乙腈為進口試劑，色譜級；磷酸等試劑(天津試劑二廠)，均為分析級；水為自制，為重蒸餾水。
2.檢驗用對照品及對照品溶液配制2.1阿魏酸和羥基紅花黃色素A對照品和川芎對照藥材(購于中國藥品生物制品檢定所)。
2.2阿魏酸對照品溶液稱取阿魏酸對照品適量，用70％甲醇溶解后精密稀釋成13.2μg/ml，棕色瓶置冰箱冷藏保存，備用。
2.3羥基紅花黃色素A對照品溶液稱取羥基紅花黃色素A對照品適量，加25％甲醇溶解并稀釋成0.13mg/ml。
2.4川芎和當歸對照藥材溶液分別取川芎和當歸對照藥材粉末1g和當歸對照藥材，乙醚20ml回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加2ml乙酸乙酯溶解，作為對照品溶液。
3.樣品溶液配制3.1阿魏酸測定的樣品溶液精密稱取0.1g超臨界萃取物，置容量瓶中，用70％甲醇適量超聲使溶解，并精密稀釋，每1ml溶液含20mg的當歸藥材，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液供測定用。
3.2羥基紅花黃色素A測定的樣品溶液精密稱取0.1g超臨界萃取物，置容量瓶中，用70％甲醇適量超聲使溶解，并精密稀釋，每1ml溶液含12mg的紅花藥材，濾過，取續(xù)濾液供測定用。
3.3超臨界萃取物樣品溶液精密稱取0.1g超臨界萃取物，加乙酸乙酯適量，制成每1ml含當歸藥材1g的溶液。
4.儀器、設備4.1超臨界萃取設備HA121-50-05型(江蘇南通華安超臨界萃取有限公司)4.2高效液相色譜儀Waters Alliance HPLC(waters公司)4.3超聲波清洗器KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器5.檢測方法按中國藥典2005年版一部“川芎的鑒別方法”、“當歸的阿魏酸含量測定方法”和“紅花的羥基紅花黃色素含量測定方法”進行檢測。
提取工藝研究
1.加夾劑的超臨界萃取平行實驗研究1.1超臨界萃取方法 按處方比例分別取已經(jīng)混勻的當歸、川芎及紅花混合藥粉末400g，置超臨界萃取釜中，丙酮為夾帶劑，分別按0％、2％和4％加入，CO2流量為25kg/h按表1中參數(shù)進行超臨界萃取，得到的提取物按給定的TLC和HPLC測定條件測定，結(jié)果見表1。
1.2實驗結(jié)果 表明夾帶劑丙酮的加入，對揮發(fā)油(藁本內(nèi)酯類)、阿魏酸的萃取影響較小，而對羥基紅花黃色素的影響較大。因此，加入夾帶劑是必要的。但夾帶劑濃度增大，影響對羥基紅花黃色素A的萃取增加的幅度變小，考慮其他因素，夾帶劑濃度采用加入2％的丙酮。
2.超臨界萃取中CO2流量對萃取結(jié)果的影響2.1超臨界萃取方法 按處方比例分別取已經(jīng)混勻的當歸、川芎及紅花混合藥粉末400g，置超臨界萃取釜中，CO2流量為25kg/h，按表2中參數(shù)進行超臨界萃取。
2.2提取物按給定的檢測TLC和HPLC測定條件測定，結(jié)果見表2。
表1.夾帶劑對超臨界萃取結(jié)果的影響

表2.超臨界萃取CO2流量對萃取結(jié)果的影響

由結(jié)果可知，在固定夾帶劑、萃取壓力、時間和溫度的條件下，CO2流量對萃取結(jié)果的影響很小，當超臨界流體的流速達到一定時，超臨界萃取CO2流量對萃取結(jié)果的影響是次要的。因此，超臨界萃取時固定CO2流量為25kg/h，正交實驗不再考察此因素。
3.提取工藝的正交實驗研究在夾帶劑、CO2流量對超臨界萃取影響的平行實驗結(jié)果優(yōu)選的基礎上，根據(jù)各味藥的藥理作用及其有效成分的性質(zhì)，并結(jié)合生產(chǎn)工藝和劑型的要求，擬考察溫度、時間和壓力流量三個因素，每因素選了三水平設計試驗，以阿魏酸和羥基紅花黃色素A的提取總量及超臨界CO2萃取得率為指標，進行試驗優(yōu)選。
表3.水提取正交試驗因素—水平設計表

3.1CO2超臨界流體萃取方法按處方中各藥材的比例，準確稱取各藥材粉末合計400克，共9份，在平行操作條件下，按L9(34)正交表試驗9次。萃取完畢，從分離釜1、2收得萃取物，稱重，計算萃取物收率。分別測定萃取物中的阿魏酸和羥基紅花黃色素A的含量，根據(jù)萃取率分別折算成每克藥材中的提取總量。
3.2萃取率計算

3.3超臨界萃取正交實驗結(jié)果與分析結(jié)果見表4。
3.4方差分析方差分析結(jié)果表明被考察因素中，A(溫度)、B(萃取壓力)(時間)、C(萃取壓力)對阿魏酸萃取沒有顯著性影響(P＞0.05)，但對阿魏酸萃取有較大影響(P＜0.10)。因素A(溫度)對羥基紅花黃色素A萃取有顯著性影響(P＜0.05)，B(時間)、C(萃取壓力)對羥基紅花黃色素A萃取均有一定的影響(P＜0.10)；而各因素則對萃取物的得率的影響均無顯著性差異。
表4.超臨界萃取正交實驗設計與實驗表
表5各因素對阿魏酸和羥基紅花黃色素A萃取影響顯著性方差分析結(jié)果

F0.90(2，2)＝9.0，F(xiàn)0.95(2，2)＝19.03.5試驗結(jié)果綜合分析根據(jù)對試驗數(shù)據(jù)直觀和方差分析的結(jié)果，可以得出萃取工藝的基本條件即對于本方來說，在固定夾帶劑濃度(加入2％的丙酮)和CO2流量(25kg/h)的條件下，阿魏酸萃取的最佳工藝參數(shù)組合為A3B3C2，即溫度為50℃，時間為2.5小時，萃取壓力為35Mpa；而對羥基紅花黃色素A來說，最佳提取工藝參數(shù)組合為A2B3C3，即溫度為40℃，時間為2.5小時，萃取壓力為45Mpa；對萃取物收率各因素均無顯著影響。盡管對于阿魏酸和羥基紅花黃色素萃取來說，各自的最佳萃取溫度分別為50℃和40℃，萃取壓力分別為35Mpa和45Mpa，但萃取效率相差均不很大，考慮生產(chǎn)的安全性和降低能耗，而且在40℃和35Mpa的條件下，阿魏酸和羥基紅花黃色素萃取轉(zhuǎn)移率均超過了65％，綜合考慮，確定最佳工藝參數(shù)組合為萃取CO2流量為25kg/h，夾帶劑加入量為2％的丙酮，萃取溫度為40℃，萃取壓力為35Mpa和萃取時間為2.5小時。
3.6工藝驗證3.6.1按優(yōu)選的工藝參數(shù)條件按處方中各藥材的比例，準確稱取混合好的各藥材粉末合計4000克置萃取釜中，按綜合優(yōu)選的工藝參數(shù)條件，在平行操作條件下，進行萃??；萃取完畢后從分離釜1、2收得萃取物并稱重，按給定的TLC和HPLC測定條件和方法進行測定，計算萃取物收率和有效成分含量，分別測定萃取物中的阿魏酸和羥基紅花黃色素A的含量，根據(jù)萃取率分別折算成每克藥材中的提取總量，重復三次。具體結(jié)果見表6。
表6.工藝驗證結(jié)果

工藝驗證結(jié)果表明，優(yōu)選出的超臨界萃取工藝是可行的，不僅萃取物得率穩(wěn)定，各項質(zhì)量指標均穩(wěn)定，阿魏酸和羥基紅花黃色素A的萃取轉(zhuǎn)移率也達到了70％以上，同時，萃取物的得率比較適中，非常適合軟膠囊制劑。說明選擇的工藝是可行的，完全能夠滿足制劑工藝的需要。
3.6.2提取工藝研究說明按處方比例取混合藥粉采用水蒸氣蒸餾得到揮發(fā)油；按相同的藥材比例，采用TLC檢測方法，在365nm處，對比水蒸氣蒸餾得到揮發(fā)油和超臨界萃取物的斑點及熒光強度，發(fā)現(xiàn)超臨界萃取物的斑點的熒光強度明顯超過水蒸氣蒸餾得到的揮發(fā)油的斑點，說明本發(fā)明中，提取揮發(fā)油采用超臨界萃取法明顯優(yōu)于水蒸氣蒸餾法。
本發(fā)明藥物是在尋證古方的基礎上，充分分析論證，巧妙配伍，精妙組合，嚴密組方，標本兼治，療效顯著，具有下述突出優(yōu)點1.本發(fā)明在佛手散的基礎上選擇紅花入藥，顯著提高了藥效。
2.增加冰片入藥，提高了生物利用度。
3.以各單味藥的主要有效成分的理化性質(zhì)為理論依據(jù)，采用CO2超臨界流體萃取技術提取親脂性和親水性成分，避免了藁本內(nèi)酯的異構化，從而為療效的提高奠定了物質(zhì)基礎。
下面以本發(fā)明藥物(以下稱為歸芎軟膠囊)的藥效學試驗，毒理學試驗和具體實施例來進一步闡述本發(fā)明的有益效果，但不構成對本發(fā)明的限制。
藥效學試驗1.材料與方法1.1材料健康Wistar大鼠，雌雄不限，體重230-270g，由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，(動物合格證號醫(yī)動字第01-3008號)健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重19-25g，由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供(合格證號醫(yī)動字第01-3001號)。實驗前適應性飼養(yǎng)3天，動物房溫度24±1℃。
歸芎軟膠囊(GXRJNGui Xiong Ruan Jiao Nang)由全歐中藥商會中藥專家組提供，批號028170，成人(按體重為60kg計算)口服量為2000mg/d，相當于生藥量0.625g/(kg·d)，按等效量折算大鼠為3.5g/(kg·d)，小鼠6g/(kg·d)；通心絡，石家莊以嶺藥業(yè)有限公司，批號050613；阿司匹林，石家莊醫(yī)藥集團有限公司第一制藥廠，批號050103LC；心得安，蘇州醫(yī)藥集團有限公司，批號041101；尼莫地平，山東健康藥業(yè)有限公司，批號0501068。
儀器BS-634血小板聚集儀，北京生化儀器廠。WXG-1型微機化動物心功能儀，南京鐵道醫(yī)學院。
1.2方法1.2.1大鼠血栓形成實驗1取wistar大鼠40只，隨機分為歸芎軟膠囊大、中、小劑量組、陽性對照組和陰性對照組5組，每織8只。5組于實驗前24h及1h分別灌胃給予小劑量歸芎軟膠囊3.0g/kg(相當于人等效量)、中劑量歸芎軟膠囊6.0g/kg、大劑量歸芎軟膠囊12.0g/kg，阿司匹林0.3g/kg和水。給藥容積均為5ml/kg。腹腔注射氯胺酮50mg/kg麻醉大鼠，分離左頸外靜脈和左頸動脈，預先精密稱量1根長5cm的4號絲線的質(zhì)量，置于3段聚乙烯管的中段(長8cm，內(nèi)徑1.8mm)，兩端各連接一段長10cm，內(nèi)徑1mm的聚乙烯管，并在管內(nèi)充滿肝素生理鹽水(含肝素量為50U/ml)，當管的一端插入左頸外靜脈后，從聚乙烯管注入上述肝素生理鹽水1ml/kg，夾住管壁并將管的另一端插入左頸動脈，然后放開血流，15min時中斷血流，并迅速取出絲線稱量，以此線重量減去原線重量即為血栓濕重。計算血栓形成抑制率抑制率＝(對照組血栓濕重一給藥組血栓濕重)÷對照組血栓濕重×100％。
1.2.2大鼠血栓形成實驗2取Wistar大鼠50只，隨機分為5組，每組10只。4組于實驗前24h及1h分別灌胃給予中、小劑量芎軟膠囊6.0和3.0g/kg及等劑量通心絡，第5組為對照組給予水，灌胃容積、測定方法及數(shù)據(jù)處理方法均同上。
1.2.3小鼠凝血時間測定取小鼠50只，隨機分為歸芎軟膠囊大、中、小劑量組、陽性對照組和陰性對照組5組，每組10只。5組分別灌胃給予歸芎軟膠囊24.0、12.0和6.0g/kg，阿司匹林0.3g/kg和水，灌胃容積均為10ml/kg，于灌胃后1h用玻片法觀察小鼠凝血時間。
1.2.4小鼠游泳耗竭時間測定取健康小鼠90只，隨機分為6組，每組15只。5組分別灌胃給予大、小劑量歸芎軟膠囊6.0、24.0g/kg和相同劑量通心絡及苯丙胺0.2g/kg，第6組為對照組給予水。灌胃容積均為10ml/kg，1次/d，連續(xù)灌胃5天，于第5天給藥后1h測定小鼠游泳耗竭時間。方法按小鼠體質(zhì)量6％在鼠尾跟部負重后，將小鼠投入水中，觀察小鼠自投入水中至頭部沉入7s以上不能抬起的時間，此時間即為游泳耗竭時間。計算各組小鼠游泳耗竭時間的平均值。
1.2.5對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響雄性大鼠60只，體重2804±20g，隨機分為6組，連續(xù)給納7天(阿司匹林給藥4天)，末次給藥1小時后，大鼠戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(0.05g/kg)，氣管插管，分離右頸總動脈和左頸外靜脈，在聚乙烯管中段放入5cm長的4號手術絲線，管內(nèi)充滿肝素生理鹽水50u/ml，將管兩端分別插入右頸總動脈和左頸外靜脈，形成動-靜脈血流旁路，大鼠股靜脈注入肝素生理鹽水50u/kg，即開放血流，15分鐘后阻斷血流，迅速取出血栓稱重，總重量減去絲線重即為血栓濕重。
1.2.6對大鼠血小板聚集功能的影響雄大鼠60只，體重200±20g，均分6組，給藥同實驗2.2，在末次給藥1小時后，大鼠戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，以硅化注射器自大鼠腹主動脈采血，置硅化離心管中，用3.8％檸檬酸溶液9∶1抗凝，以1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，制成富血小板血漿(PRP)，以2000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，制成貧血小板血漿(PPP)，按比濁法，加入60umol ADP溶液20ul，用RS-634型血小板聚集儀測定各組大鼠血小板最大聚集率。
1.2.7對小鼠腦循環(huán)障礙的影響小鼠70只，雌雄各半，體重21±2g，均分7組。連續(xù)給藥7天，尼莫地平于實驗當天口服給藥一次。末次給藥30分鐘后，烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，分離兩側(cè)頸總動脈，用0號手術線同時結(jié)扎兩側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)，立即記錄小鼠因腦缺血缺氧后的死亡時間。
1.2.8對小鼠注射空氣致心腦缺氧的影響小鼠90只，雌雄各半，體重20±2g，均分6組，給藥同實驗2.4，心得安于實驗當天給藥一次。在末次給藥30分鐘后，小鼠尾靜脈注射空氣0.1ml/只，0.1秒注射完，立即記錄小鼠吸氣停止時間。
1.2.9對人鼠缺血性腦水腫的影響體重230g±18g，雌性人鼠60只，隨機分為6組，每組10只。各組大鼠ig給藥，連續(xù)5天。偽結(jié)扎組和模型對照組給予同體積生理鹽水。末次給藥后，大鼠以水合氯醛350mg/kg的劑量ip麻醉。各組動物結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，偽結(jié)扎組僅暴露、分離雙側(cè)頸總動脈，不結(jié)扎。術后動物在溫度為28-30℃的觀察室內(nèi)觀察48h。如有動物死亡，立即斷頭，取大腦稱濕重。動物在術后48h全部斷頭處死，取大腦，分析天平稱濕重。之后，將大腦放入110℃的烘箱內(nèi)烘烤48h至恒重，分析天平稱干重。
2結(jié)果2.1歸芎軟膠囊對大鼠血栓形成的影響歸芎軟膠囊3個劑量組和阿司匹林組的大鼠血小板血栓的形成受到顯著抑制，與對照組比較均有顯著性意義(P＜0.01)，結(jié)果見表1。
表1.歸芎軟膠囊對大鼠血栓形成的影響(n＝8，X±S)

注與對照組比較，*P＜0.012.2歸芎軟膠囊與通心絡抗血栓作用比較歸芎軟膠囊對大鼠動脈血栓形成的抑制作用顯著強于相同劑量的通心絡，結(jié)果見表2。
表2.歸芎軟膠囊與通心絡抗血栓作用比較(n＝10，X±S)

注與對照組比較*P＜0.01，與通心絡組比較ΔP＜0.05ΔΔP＜0.012.3歸芎軟膠囊對小鼠凝血時間的影響歸芎軟膠囊大、中劑量組和阿司匹林組的小鼠凝血時間均顯著延長，與對照組比較均有顯著性統(tǒng)計學意義，結(jié)果見表3。
表3.歸芎軟膠囊對小鼠凝血時間的影響(n＝10，X±S)

注與對照組比較*P＜0.01
2.4歸芎軟膠囊對小鼠游泳耗竭時間的影響各給藥組小鼠的游泳耗竭時間均顯著延長，與對照組比較均有顯著性意義，且歸芎軟膠囊大劑量組有高度顯著性差異，說明川芎軟膠囊可劑量依賴性地延長小鼠游泳耗竭時間，具有抗疲勞，增強動物體力及耐力的作用，結(jié)果見表4。
表4.歸芎軟膠囊對小鼠游泳耗竭時間的影響(n＝15，X±S)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.012.5歸芎軟膠囊對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響歸芎軟膠囊三個劑量組均能明顯抑制大鼠動-靜脈旁路血栓形成，高、低劑量組呈現(xiàn)明顯的作用差別，歸芎軟膠囊與通心絡同劑量組比較，其血栓抑制率無顯著差別，結(jié)果見表5。
表5.歸芎軟膠囊對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響(n＝10，X±S)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與歸芎軟膠囊I組比較ΔP＜0.052.6歸芎軟膠囊對大鼠血小板聚集功能的影響歸芎軟膠囊三個劑量組對ADP誘導的大鼠體內(nèi)血小板聚集均有明顯的抑制作用，歸芎軟膠囊與通心絡同劑量組比較，其血小板聚集抑制率無顯著差別，見表6。
表6.歸芎軟膠囊對大鼠血小板聚集功能的影響(n＝10，X±S)

注與對照組比較**P＜0.01，與歸芎軟膠囊I組比較ΔP＜0.052.7歸芎軟膠囊對小鼠腦循環(huán)障礙的影響歸芎軟膠囊三個劑量組均能明顯延長腦循環(huán)障礙小鼠的存活時間，各組間呈現(xiàn)一定的量效關系，歸芎軟膠囊與通心絡同劑量組比較，其存活時間無差別，見表7。
表7歸芎軟膠囊對小鼠腦循環(huán)障礙的影響(n＝10，X±S)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與歸芎軟膠囊I組比較ΔΔP＜0.01，與歸芎軟膠囊II組比較#P＜0.052.8歸芎軟膠囊對小鼠注射空氣致心腦缺氧的影響歸芎軟膠囊三個劑量組均能明顯延長小鼠吸氣時間，中、高劑量組的作用相近，歸芎軟膠囊與通心絡同劑量組比較，前者吸氣停止時間較后者稍有延長，見表8。
表8歸芎軟膠囊對小鼠注射空氣致心腦缺氧的影響(n＝15，X±S)


注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與歸芎軟膠囊I組比較ΔΔP＜0.012.9歸芎軟膠囊對大鼠缺血性腦水腫的影響歸芎軟膠囊中、高劑量組均能明顯減輕腦組織的含水量，與對照組比較有顯著差異，結(jié)果見表9。
表9歸芎軟膠囊對大鼠缺血性腦水腫的影響(n＝10，X±S)

注與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001急性毒性試驗歸芎軟膠囊按225g/kg原生藥體重小鼠灌胃給藥后，每日一次，給藥后按常規(guī)飼養(yǎng)，每天觀察小鼠飲水、進食、排便、活動及毛色方面的情況，連續(xù)7天，要求的各項觀察指標均正常，小鼠未出現(xiàn)任何毒性反應。不能求出其LD50，小鼠最大耐受倍數(shù)為臨床成人用量的363.63倍。
具體實施例方式
實施例1活性成分制備實施例稱取當歸600g，川芎400g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為35℃，壓力為30Mpa，CO2流量為30kg/h，夾帶劑為3％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取3h后從分離釜1、2收得萃取物共計56g。
實施例2活性成分制備實施例稱取當歸460g，川芎540g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為30℃，壓力為40Mpa，CO2流量為20kg/h，夾帶劑為4％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取1.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計52g。
實施例3活性成分制備實施例稱取當歸480g，川芎520g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為40℃，壓力為35Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計52g。
實施例4活性成分制備實施例稱取當歸500g，川芎500g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為45℃，壓力為40Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為1％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計50g。
實施例5活性成分制備實施例稱取當歸400g，川芎600g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為45℃，壓力為35Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2；溫度40℃，壓力5Mpa，提取3h后從分離釜1、2收得萃取物共計52g。
實施例6活性成分制備實施例稱取當歸500g，川芎420g，紅花80g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為50℃，壓力為40Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為0.5％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計55g。
實施例7活性成分制備實施例稱取當歸750g，川芎200g，紅花50g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為40℃，壓力為45Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取3h后從分離釜1、2收得萃取物共計53g。
實施例8活性成分制備實施例稱取當歸300g，川芎600g，紅花100g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為38℃，壓力為43Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2h后從分離釜1、2收得萃取物共計50g。
實施例9活性成分制備實施例稱取當歸400g，川芎500g，紅花100g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為45℃，壓力為35Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取1.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計54g。
實施例10活性成分制備實施例稱取當歸350g，川芎650g，紅花50g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為38℃，壓力為45Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為3％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計56g。
實施例11活性成分制備實施例稱取當歸485g，川芎427g，紅花88g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為40℃，壓力為35Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2.5h后從分離釜1、2收得萃取物共計53g。
實施例12活性成分制備實施例稱取當歸515g，川芎400g，紅花85g于萃取釜中，調(diào)節(jié)萃取溫度為45℃，壓力為35Mpa，CO2流量為25kg/h，夾帶劑為2％丙酮，分離釜1溫度45°，壓力10Mpa，分離釜2溫度40℃，壓力5Mpa，提取2h后從分離釜1、2收得萃取物共計51g。
實施例13軟膠囊制備實施例取明膠100份加入120份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例1制備的活性成分56g，大豆油400g，蜂蠟25g，80℃加熱至蜂蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的大豆油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例14軟膠囊制備實施例取明膠100份加入140份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例3制備的活性成分52g，大豆油400g，蜂蠟25g，80℃加熱至蜂蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的大豆油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例15軟膠囊制備實施例取明膠100份加入130份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例11制備的活性成分53g，玉米油400g，蜂蠟30g，85℃加熱至蜂蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的玉米油200g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例16軟膠囊制備實施例取明膠100份加入140份水中使其吸水膨脹，另將35份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；
取實施例11制備的活性成分53g，麻油500g，蜂蠟35g，冰片5.5g，75℃加熱至蜂蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的麻油350g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例17軟膠囊制備實施例取明膠100份加入120份水中使其吸水膨脹，另將40份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例10制備的活性成分56g，玉米油500g，蟲蠟20g，80℃加熱至蟲蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的玉米油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例18軟膠囊制備實施例取明膠100份加入120份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例3制備的活性成分52g，麻油500g，黃蠟20g，冰片5g，85℃加熱至黃蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的麻油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例19軟膠囊制備實施例取明膠100份加入120份水中使其吸水膨脹，另將30份山梨醇加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例6制備的活性成分55g，菜籽油400g，蜂蠟30g，70℃加熱至蜂蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的菜籽油400g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例20軟膠囊制備實施例取明膠100份加入140份水中使其吸水膨脹，另將30份山梨醇加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例3制備的活性成分52g，花生油400g，黃蠟30g，冰片2g，85℃加熱至黃蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的花生油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例21軟膠囊制備實施例取明膠100份加入140份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例11制備的活性成分53g，麻油450g，蟲蠟20g，冰片5g，85℃加熱至蟲蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的麻油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例22軟膠囊制備實施例取明膠100份加入120份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例8制備的活性成分50g，麻油350g，黃蠟20g，冰片4.5g，80℃加熱至黃蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的麻油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例23軟膠囊制備實施例取阿拉伯膠100份加入130份水中使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至60℃～80℃，將膨脹的明膠加入，攪拌，熔融，保溫待用；取實施例11制備的活性成分55g，麻油450g，黃蠟25g，冰片4.5g，80℃加熱至黃蠟溶解，用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度，加入余量的麻油300g，剪切至分散均勻；將明膠液與藥液裝入自動旋轉(zhuǎn)軋囊機，壓制成規(guī)格為0.4g/粒的軟膠囊。
實施例24片劑制備實施例將實施例1中的活性成分56g與淀粉1∶1比例混合，將25g羧甲基纖維素鈉與上述混合物混合均勻，加入75％的乙醇溶液作為黏合劑，過22目篩，40度烘箱干燥，加入適量硬脂酸鎂，壓片，制成300mg/片的片劑。
實施例25包衣片劑制備實施例將實施例11中的活性成分53g與17g輕質(zhì)氧化鎂混合，加入17g淀粉，乳糖17g，0.5％的HPMC水溶液做黏合劑，制成300mg/片的素片，以30％的尤特奇RL30D包衣，制成300mg/片的包衣制劑。
實施例26膠囊制備實施例將實施例3中的活性成分52g與淀粉1∶1比例混合，將25g羧甲基纖維素鈉與上述混合物混合均勻，加入75％的乙醇溶液作為黏合劑，過22目篩，40度烘箱干燥，整粒，裝硬膠囊，制成270mg/粒的膠囊。
實施例27濃縮丸制備實施例將實施例11中的活性成分53g與微晶纖維素進行混合，其中微晶纖維素的用量為浸膏粉的40％，加入水作為粘合劑制成素丸。
將上述素丸選用上?？房?COLORCON)包衣技術有限公司的歐巴代(胃溶型)為本品的包衣材料進行包衣，得濃縮丸制劑。
包衣條件如下選用水為溶解劑；包衣液濃度為20％；包衣增重5％；進風溫度80℃；片床溫度45℃；霧化壓力2.0bar；包衣鍋轉(zhuǎn)速17rmp；進料流速3g/min。
實施例28顆粒劑制備實施例取實施例11中的活性成分53g，甲基纖維素9g，糖粉820g，混合均勻后，加入適量70％乙醇，制成軟材，制粒，揮去乙醇，80℃噴霧干燥，制成顆粒劑。
實施例29滴丸劑制備實施例取300g聚乙二醇-6000加熱至80℃，熔融后加入實施例11中的活性成分53g，攪拌均勻，移至滴丸機中，保持熔融液溫度70℃，由上往下，滴速適中滴入10℃甲基硅油中，制成滴丸劑1000粒。
權利要求
1.一種中藥提取物，其特征在于，它主要由下列重量份配比的原料藥制成當歸30～75川芎20～65。
2.根據(jù)權利要求1所述的中藥提取物，其特征在于，原料藥還有紅花5～10。
3.根據(jù)權利要求2所述的中藥提取物，其特征在于，原料藥重量份配比為當歸40～50川芎40～50紅花8～10。
4.權利要求1～3任一權利要求所述的中藥提取物的提取方法，其特征在于，采用超臨界流體萃取法，條件為萃取溫度為30℃～50℃，壓力為25MPa～45Mpa，提取時間為1～3h，CO2流量為10～30kg/L，夾帶劑為0.5％～5％丙酮。
5.根據(jù)權利要求4所述的中藥提取物的提取方法，其特征在于，采用CO2超臨界流體萃取法，條件為萃取溫度為40℃，壓力為35Mpa，提取時間為2.5h，CO2流量為25kg/L，夾帶劑為2％丙酮。
6.含有權利要求1～3任一權利要求所述中藥提取物的制劑，其特征在于，它包括該中藥提取物和藥劑中可接受的載體。
7.根據(jù)權利要求6所述的中藥制劑，其特征在于，是軟膠囊，包括以下重量百分比的組分中藥提取物2.5％～10％植物油85％～96％助懸劑1.5％～5％。
8.根據(jù)權利要求6所述的中藥制劑，其特征在于，是軟膠囊，它包括以下重量百分比的組分中藥提取物2.5％～10％植物油80％～95.8％助懸劑1.5％～5％冰片0.2％～5％。
9.根據(jù)權利要求7或8所述的中藥制劑，其特征在于，所述植物油選自大豆油、麻油、玉米油、菜籽油、花生油、芝麻油、葵花籽油、核桃油。
10.根據(jù)權利要求7或8所述的中藥制劑，其特征在于，助懸劑選自蜂蠟、黃蠟、白蜂蠟、蟲蠟。
11.權利要求7或8所述中藥制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟稱取適量的植物油和配方量的其余各組分；加熱，使助懸劑溶解；用剪切式乳勻機剪切至適宜的分散度；加入余量植物油至配方量，剪切至分散均勻；藥液與囊材液用自動旋轉(zhuǎn)軋囊機制備成軟膠囊。
12.根據(jù)權利要求11所述的中藥制劑的制備方法，其特征在于，加熱溫度為70℃～85℃。
13.權利要求1～3任一權利要求所述中藥提取物在制備改善腦微小動脈血液循環(huán)，改善大腦皮層腦血管床的供血，促進腦微小動脈括約肌開放以及預防和治療小中風、腦性眩暈、腦梗塞后遺癥、腦血管供血不足、冠心病、心絞痛等心腦血管疾病藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥提取物以及含有該提取物的中藥制劑，該中藥提取物主要以當歸、川芎為原料藥制成，或者進一步含有紅花。本發(fā)明中藥提取物的提取工藝采用CO
文檔編號A61K47/44GK1903238SQ20061006605
公開日2007年1月31日 申請日期2006年3月28日 優(yōu)先權日2005年7月28日
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