專利名稱:冬青屬植物及其提取物在制備抗病毒藥物中的應用的制作方法
技術領域:
本發(fā)明涉及冬青科冬青屬植物的用途。具體地說,本發(fā)明涉及冬青科冬青屬植物及其提取物在制備抗病毒藥物中的用途。
背景技術:
冬青屬(Ilex)是冬青科3個屬中我國僅有的1個屬,共118種,多用于清熱解毒、消炎、鎮(zhèn)咳、祛痰及治療心血管疾病,其化學成分主要為三萜及其皂苷、黃酮類、香豆素、木脂素、糖脂類等化合物。
1.心血管藥理作用崗梅根以乙醇、硫酸氫鈉處理制成的注射液對離體滕鼠心臟灌流有擴張冠狀血管、增加冠脈流量和加強心收縮力的作用(湖南醫(yī)學院醫(yī)學研究資料1973;(1)26-29);枸骨對脈鼠離體心臟有增加冠脈流量及心臟收縮力的作用,而對心率影響不大。其冠脈流量及心肌收縮力的增加.可能系通過擴張冠狀動脈及改善心肌供氧的緣故(謝宗萬.全國中草藥匯編(第2版,上冊),北京人民衛(wèi)生出版社,1996602);實驗用Ca2示蹤法研究了毛冬青甲素對免心肌鈣離子內外流的影響。結果發(fā)現(xiàn)毛冬青(10-5mol/L)對心肌鈣離子內流具有明顯促進作用(P<0.05)這種作用可被鈣拮抗劑硝苯吡啶(1.4×10-6mol/L)所阻滯,提示藥物的作用可能和α或β腎上腺素能受體無關。同時,藥物明顯增加心肌細胞內的鈣離子外流。研究結果提示,毛冬青甲素所具有的正性肌力作用可能是由于藥物加快了細胞鈣的轉運速率所致(賈可亮,等.廠州中醫(yī)學院學報,1991;8(1)14);鐵冬青樹皮醇提取物0.05g/0.2ml一次給藥.對離體脈鼠心臟灌流有擴張冠狀動脈增加冠脈流量作用,1.6g/Kg靜脈注射,對麻醉貓有降血壓及對腦垂體后葉所致免實驗性心肌缺血有保護作(黃樹蓮,等.中草藥,1981,12(12)554);從苦丁茶中分離得的三萜化合物為乙酰輔酶A膽固醇?;D移酶(ACAT)抑制劑,可作為治療動脈硬化的新藥(J Nat.Prod.1999;62(9)1061-1064)。
2.降壓作用苦丁茶提取物0.05g/kg靜脈注射正常血壓麻醉犬即可產(chǎn)生明顯作用,對二腎一夾型高血壓大鼠和自發(fā)性高血壓大鼠降壓作用明顯,提示該藥有望開發(fā)成為降壓新藥(陳一,等.中草藥,1995;28(5)250-252)。海南冬青提取物0.25g/kg靜脈注射,可使麻醉狗血壓迅速下降,降壓峰值可達原血壓的50.6%,持續(xù)10-40min,心率減慢(陳一,等.中草藥,1983;14(4)171)。毛冬青粗制劑及黃酮苷對麻醉犬和貓,以及脊髓犬和貓,均能引起緩慢持久的降壓作用,靜注20-30min降壓才明顯,1-3h降至最低水平(北京制藥工業(yè)研究所,等.中草藥,1980;11(8)358))。
3.抗炎抗菌作用細葉冬青果實中分得的鐵冬青酸具廣譜抗菌活性,對細菌、酵母菌和絲狀真菌都有作用,其作用機制為破壞細胞膜以及脂質合成,使細胞內容物流出而死亡(Phytotherres,1999;13(2)151-156)。冬青相當于生藥0.0125g/ml的稀釋水溶液對綠膿稈菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、福氏痢疾備桿菌、產(chǎn)堿桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用(南通醫(yī)學院,中華醫(yī)學雜志,1973,53(4)204)。鐵冬青煎劑試管內能抑制金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、弗氏痢疾桿菌、傷寒桿菌與綠膿桿菌(廣東中醫(yī)學院新中醫(yī),1971;(3)30)。
4.降脂消肥作用苦丁茶提取物1.5g/kg灌胃,可顯著減少正常和肥胖大鼠腹部皮下脂肪組織指數(shù)(陳一,等.中草藥,1995;28(5)250-252)。
5.避孕及抗生育作用枸骨葉丙酮提取物的抗生育作用枸骨丙酮提取物灌胃給藥,對小鼠早孕、中孕無明顯影響;皮下注射給藥,對小鼠有明顯的抗中孕作用;腹腔注射給藥,對小鼠早、中、晚孕有明顯中止作用;對大鼠有顯著抗早孕作用(謝宗萬.全國中草藥匯編(第2版,上冊),北京人民衛(wèi)生出版社,1996602)。
我國20多種可供藥用的冬青屬植物,分布廣泛,資源豐富。而目前國內對冬青屬植物的研究大都集中于枸骨、苦丁茶、毛冬青、冬青、鐵冬青幾個種,其化學成分僅限于三萜及其皂苷的研究,對其它化學成分研究尚較粗淺。迄今為止,尚末見任何冬青(Ilex)屬植物用于抗病毒的研究報道。
病毒是最小的病原微生物,其核心是核糖核酸或脫氧核糖核酸(DNA),病毒的傳播最廣,是目前世界上發(fā)病率最高的傳染性疾病之一。由病毒引起的疾病常見的有皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等。此外,病毒與腫瘤、某些心臟病、先天性畸形等也有一定關系。在臨床上較多的疾病與病毒感染有關。據(jù)國外統(tǒng)計資料報道,近3/4的傳染病是由病毒引起的,1984年國際病毒分類學會(ICTV)已公布的55種病毒中有18種屬于致病病毒,不同的病毒感染引起不同的疾患,需要不同的抗病毒藥物治療。
目前臨床上用的抗病毒藥物雖然較多,但大多為核苷類衍生物,其作用是以病毒DNA聚合酶為靶點,它們以酶反應底物類似物的形式與正常底物競爭,直接降低或阻斷DNA聚合酶的活性,其共同的缺點是易產(chǎn)生耐藥毒株,抗病毒譜窄,毒副作用大,價格高昂或藥理特性不明顯。抗病毒藥,有的只抑制DNA型病毒,如阿苷洛韋(無環(huán)鳥苷)、阿糖腺苷、阿糖胞苷、環(huán)胞苷、三氟尿苷等;有的則對RNA型病毒也有作用,如三氮唑核苷。除上述者外,尚有金剛胺、干擾素及其誘導劑也有較好的抗病毒作用。許多中草藥,如穿心蓮、板藍根、大青葉、金銀花、地丁、黃芩、紫草、貫眾、大黃、茵陳、虎杖等也可用于某些病毒感染性疾病的防治。雙嘧達莫也可用于抗病毒感染,對小兒病毒性上呼吸道感染和小兒皰疹性咽喉炎有治療作用。
發(fā)明內容
本發(fā)明人經(jīng)長期篩選研究發(fā)現(xiàn),冬青屬(Ilex)植物具有較強的抗病毒活性,可用于由病毒引起的多種疾病的治療。本發(fā)明的目的是提供冬青屬(Ilex)植物用于制備治療由病毒引起的多種疾病的藥物中的用途,尤其是用于制備治療尤其是由病毒引起的皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等疾病中的用途。
本發(fā)明提供冬青屬(Ilex)植物用于制備治療由病毒引起的多種疾病的藥物中的用途。所述的冬青(Ilex)屬植物選自崗梅(Ilex asprella Champ.);鐵冬青(Ilex rotunda Thunb);苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng);毛冬青(Ilex pubescens Hook.et Arn.);海南冬青(Ilex hainanensis Merr);米碎木(Ilex godajam(Colebr.)Wall.);冬青(Ilex purpureaHassk);大葉冬青(Ilex latifolia Thunb.);枸骨(Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.);滿樹星(llex aculeolata Nakai);珊瑚冬青(llex corallina Franch);榕葉冬青(llexficoidea Hemsl.);山枇耙(llex franchetiana Loes.);長梗冬青(llex pedunculosa Miq.);貓兒刺(llex pernyi Franch.);大果冬青(llex macrocarpa Oliv.);硬毛冬青(llex serrataThunb.);三花冬青(llex triflora Bl.);亮葉冬青(llex viridis Champ.);禿毛冬青(Ilexpubescens Hook.et Arn.var.glabra Chang)任意一種或幾種。優(yōu)選地,所述的冬青屬植物選自枸骨;苦丁茶;崗梅;冬青;大葉冬青中的任意一種或幾種。
本發(fā)明還提供一種用于制備治療由病毒引起的多種疾病的藥物的冬青屬(Ilex)植物提取物,具體的說是以冬青屬(Ilex)植物原生藥或冬青屬(Ilex)植物的水或有機溶劑的提取物為活性成分制備所述的藥物。所述的提取物來自所述植物的根、莖、皮、葉或果實。
其中在所述的冬青屬植物提取物中,主要成分是皂苷、黃酮。
在所述冬青屬植物的提取過程中,所使用的有機溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇或丙酮。所述的提取方法選自浸泡提取、回流提取、超聲提取、逆流提取、超臨界萃取和樹脂吸附中的一種或幾種。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物,所述組合物包括上述的冬青(Ilex)屬植物提取物和藥學上可接受的載體或輔助性成分。
上述的冬青(Ilex)屬植物及其提取物可用于制備治療由病毒引起的疾病特別是皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等疾病的藥物。
優(yōu)選地,所述冬青屬植物及其提取物可用于治療皰疹、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等疾病。
本發(fā)明冬青屬植物,例如枸骨,在治療急性上呼吸道感染時的用量按重量計為10-5000mg/kg/日,較優(yōu)選用量為300-400mg/kg/日。本發(fā)明冬青屬植物,例如枸骨提取物在治療急性上呼吸道感染時的用量按重量計為1-400mg/kg/日,較優(yōu)選用量為10-40mg/kg/日。由于存在不同個體的自身免于能力不同,本發(fā)明的植物或其提取物的使用量不限于所述范圍。
冬青屬植物用于治療由病毒引起的疾病的藥物時,可以是將冬青屬植物原生藥直接加工成藥物,也可以是對冬青屬植物原生藥進行分離提取,將各種提取物制成藥品,也可以是將冬青屬植物原生藥或各種提取物配合其他藥物制成復方制劑,還可以是冬青屬植物原生藥或各種提取物與其他抗病毒類傳統(tǒng)中藥配伍組成復方中藥及其制劑。
用冬青屬植物原生藥(根、莖、皮、葉或果實)任一種為原料,直接加工成藥品。可以是將上述原生藥凈制后粉碎,過60-200目篩,制成細粉,再將細粉裝膠囊,或制備成片劑、丸劑、顆粒劑、散劑。
用冬青(Ilex)屬植物原生藥(根、莖、皮、葉、果實)任一種為原料,進行初步提取后制備成藥品??梢圆捎矛F(xiàn)代技術中的各種常規(guī)提取方法進行提取,例如,以水為溶劑提取,或者以乙醇、甲醇等有機溶劑提取,優(yōu)選乙醇提取。所得的提取物,加上藥學上可接受的載體,如淀粉、乳糖、蔗糖、怡糖、糊精、纖維素類、瓊脂、硬脂酸鎂、滑石、植物油、阿拉伯膠,明膠等,可以制成膠囊劑、片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、注射液、粉針等多種劑型。
用冬青(Ilex)屬植物原生藥任一種為原料,提取分離出皂苷后制備成藥品。可以采用以下常規(guī)皂苷分離提取方法將原藥材經(jīng)過凈制后粉碎為粗粉,用水,甲醇或乙醇,室溫或加熱(包括回流)提取1-3小時,可重復提取1-3次,然后濾去藥渣,濾液在常壓或減壓下濃縮至一定濃度的濃縮液,靜置備用。將上述提取濃縮液經(jīng)沉淀劑后用大孔樹脂吸附,然后用濃度為30-90%的乙醇洗脫大孔樹脂,洗脫液減壓回收后,得浸膏,經(jīng)真空、冷凍干燥或噴霧干燥成干粉。也可將上述浸膏經(jīng)進一步分離純化為皂苷類單體或混合苷。
冬青(Ilex)屬植物原生藥,或其水提物,或其有機溶劑提取物、或其皂苷提取物或其中藥復方制備的藥物及其制劑具有顯著的抗病毒藥理作用。
由于冬青(Ilex)屬植物原生藥,或其水提物,或其有機溶劑提取物,或其皂苷提取物或其藥物復方制備的藥物及其制劑,具有顯著的抗病毒作用,可將其制成膠囊、片劑、顆粒劑、口服液或注射液、粉針等多種劑型,適用于由病毒引起的疾病特別是皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等疾病的治療,具有療效顯著、價格低廉、使用安全方便等優(yōu)勢特點,也為制備由病毒引起的疾病特別是皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等疾病的藥物提供一種新的藥源植物。
顯然,根據(jù)本發(fā)明的上述內容,按照本領域的普通技術知識和慣用手段,在不脫離本發(fā)明上述基本技術思想前提下,還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
,對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1制備方法1 崗梅(Ilex asprella)、毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.)原生藥藥品的制備 以冬青(Ilex)屬植物中一種為原料,即崗梅根,或毛冬青根,凈制后按常規(guī)方法粉碎,過篩,制成粒度小于120目的細粉,細粉裝入膠囊,0.5g/粒,滅菌,分裝即成。
制備方法2 鐵冬青(Ilex rotunda Thunb.)、米碎木(Ilex godajam(Colebr.)Wall.)的水提取物的制備 以冬青(Ilex)屬植物中一種為原料,即鐵冬青樹皮、或米碎木的樹皮,除去雜質,取原生藥500g,粉碎后加入10倍量水,加熱回流提取2小時,濾渣再加10倍量水,加熱回流提取2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮干燥后得到鐵冬青水提取物88克(編號KV-1),或米碎木水提取物93克(編號KV-2)。
制備方法3 苦丁茶(Ilex dingcha C.J.Tseng)、海南冬青(Ilex hainanensis Merr)、大葉冬青(llex latifolia Thunb.)、冬青(Ilex purpurea Hassk.)、枸骨(Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.)乙醇提取物的制備以冬青(Ilex)屬植物中一種為原料,即苦丁茶的葉、或海南冬青的葉、或大葉冬青的葉、或冬青的葉、或枸骨的葉,除去雜質,取原生藥500g,粉碎后加70%乙醇溶液4升,加熱回流提取2小時,濾渣再加70%乙醇溶液3升,加熱回流提取2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮干燥后得到苦丁茶乙醇提取物114g(編號KV-3)、或海南冬青乙醇提取物106g(編號KV-4)、或大葉冬青乙醇提取物113g(編號KV-5)、或冬青乙醇提取物109g(編號KV-6)、或枸骨乙醇提取物99g(編號KV-7)。
制備方法4 枸骨(Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.)皂苷提取物的制備 以枸骨葉為原料,除去雜質,取原生藥1000g,粉碎后加入10倍量水,加熱回流提取2小時,濾渣再加10倍量水,加熱回流提取2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮至一定濃度,提取液加95%乙醇使含醇量到60%,取上清液,濃縮至無醇味,再用AB-8型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥成干粉,得到約20g提取物干粉(編號KV-8),經(jīng)測定含有皂苷57%。
制備方法5 崗梅(Ilex asprella)皂苷提取物的制備 以崗梅根為原料,取原生藥1000g,碎成粗粉,用75%乙醇回流提取,過濾,回收乙醇適量至無醇味,加蒸餾水適量,過濾,用D-101型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥成干粉,得到約18g提取物干粉(編號KV-9),經(jīng)測定含有皂苷61%。
制備方法6 毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arn.)總皂苷提取物的制備 以毛冬青根為原料,取原生藥1000g,碎成粗粉,加入10倍量水,加熱回流提取兩次,每次2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮至一定濃度,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,正丁醇萃取液濃縮至無醇味,再用XDA-6型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥成干粉(編號KV-10),得到約15g提取物干粉,經(jīng)測定含有皂苷59%。
制備方法7 大葉冬青(llex latifolia Thunb.)總皂苷提取物的制備 以大葉冬青葉為原料,取原生藥1000g,碎成粗粉,加入10倍量水,加熱回流提取兩次,每次2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮至一定濃度,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,正丁醇萃取液濃縮至無醇味,再用D-101型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥成干粉,得到約17g提取物干粉(編號KV-11),經(jīng)測定含有皂苷52%。
制備方法8 鐵冬青(Ilex rotunda Thunb.)總皂苷提取物的制備 以鐵冬青樹皮為原料,取原生藥1000g,碎成粗粉,用8倍量75%乙醇回流2次,每次2小時,合并提取液,濃縮至無醇味,離心,上清液用AB-8型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥或噴霧干燥成干粉,得到約19g提取物干粉(編號KV-12),經(jīng)測定含有皂苷62%。
制備方法9 苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)總皂苷提取物的制備 以苦丁茶葉為原料,取原生藥1000g,碎成粗粉,加入10倍量水,加熱回流提取2小時,濾渣再加10倍量水,加熱回流提取2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮至一定濃度,離心,上清液再用D-101型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥成干粉,得到約21g提取物干粉(編號KV-13),經(jīng)測定含有皂苷52%。
制備方法10 冬青(Ilex purpurea Hassk.)總皂苷提取物的制備 以冬青葉為原料,取原生藥1000g,碎成粗粉,加入10倍量水,加熱回流提取2小時,濾渣再加10倍量水,加熱回流提取2小時,過濾。合并兩次濾液,濃縮至一定濃度,離心,上清液再用D-101型大孔樹脂吸附,先用水和30%稀乙醇液洗脫柱子,然后用含70%稀乙醇液洗脫柱子,收集70%稀乙醇洗脫液,洗脫液減壓回收后,得浸膏,真空干燥成干粉,得到約18g提取物干粉(編號KV-14),經(jīng)測定含有皂苷54%。
實施例2 KV-1~KV-14體外抗病毒試驗研究KV-1~KV-14等提取物,配成每毫升含生藥1克溶液。陽性對照藥雙黃連注射液(山西太行藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)),為棕紅色的澄明液體。試驗用的病毒有柯薩奇病毒B3、B4、A16(CVB3、CVB4、CVA16),新型腸道病毒71型(EV71),以上四種病毒來源于中國藥品生物制品檢定所,脊髓灰質炎病毒III型(PVIII),??刹《?型(ECHO6V),腺病毒III型(AdVIII),單純皰疹病毒I型(HSV-I)、呼吸道合胞病毒(RSV),單純皰疹病毒II型(HSV-2)、流感病毒(A3V),以上七種病毒來源于中國預防科學院病毒學研究所,麻疹病毒(MV),風疹病毒(RV)、人巨細胞病毒(HCMV),以上三種病毒來源于中國科學院武漢病毒研究所。所用14種病毒分別接種于來源于中國預防科學院病毒學研究所的人羊膜細胞(FL),人胚腎細胞(293),人宮頸癌細胞(Hela)和人喉癌細胞(Hep-2)細胞,以測定其敏感性,細胞按照常規(guī)方法傳代。同時制成3×105/L的細胞懸液,每孔0.1毫升,24小時后形成單層細胞備用。本試驗采用組織細胞半數(shù)感染量(TCID50)微量法測定病毒毒力,采用不同病毒的100~200TCID50/0.1ml。初篩的過程為形成單層的細胞孔棄去培養(yǎng)液,加入對細胞無毒性濃度的藥物作用24小時,吸出藥液加入病毒液,均采用37℃吸附1小時后吸出,加入含藥的維持液,置37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48~96小時,待病毒對照孔病變達+++~++++,細胞對照正常時測定結果。將初篩有意義的病毒分4組試驗,探討藥物的具體作用環(huán)節(jié)。I組為感染前24小時給藥,吸出藥液,用Hank’S液洗4次,加入病毒液;II組為感染后給藥,先加病毒液置37℃吸附1小時,洗去病毒,加含藥維持液;III組為藥液與病毒液同時加入細胞層;IV組為藥液與病毒液混合,置37℃作用2小時后加入細胞層。以上均設正常對照組及相應的病毒對照組、陽性對照組。光鏡下觀察細胞病變(CPE)。根據(jù)CPE程度,采用四甲基偶氮唑藍(MTT)能被活細胞內脫氫酶還原而染色的特性,使用酶標測定儀在570nm測定A值。藥物對組織細胞保護率用下式計算保護率(%)=(加藥孔A值-病毒對照孔A值)/細胞對照孔A值×100%。
1∶32以上稀釋的KV-1~KV-14提取物、1∶16以上稀釋的雙黃連注射液,對FL、Hela、293和Hep-2細胞未見明顯的細胞毒性作用。
選用藥液與病毒液同時加入上述4種細胞層的方法,測定了1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256等5個濃度KV-1等14個系列提取物的抗病毒作用。結果1∶16、1∶32、1∶64、1∶1284個稀釋度的14個提取物均有明顯的抗病毒效應(p<0.01)。根據(jù)毒性測定結果,本實驗采用1∶32稀釋雙黃連注射液和14個提取物。
初篩結果利用光鏡檢查CPE,結果表明14個提取物均可不同程度地抑制14種病毒對組織細胞的CPE(見表1,以KV-13提取物為代表)。而且提取物(以KV-13提取物為代表)的抗病毒作用譜比與雙黃連注射液的抗病毒作用譜廣,效果顯著,見表2。
表1KV-13對病毒所誘導CPE的影響
-無細胞病變效應;±細胞出現(xiàn)病變效應的時間推遲;++++3/4的細胞發(fā)生細胞病變效應表2KV-13與雙黃連注射液對病毒的病變效應比較結果
-無細胞病變效應;±細胞出現(xiàn)病變效應的時間推遲;++++3/4的細胞發(fā)生細胞病變效應分組結果在鏡下觀察CPE的基礎上,用MTT染色測定A值,以便客觀地反映加藥與不加藥之差別。I組實驗的目的是觀察藥物能否進入細胞或吸附于細胞表面,以組織病毒的吸附與進入,結果表明,14個提取物對A3V、AdVIII、MV、RSV、HSV-1、HSV-2、CVB3、CVB4、CVA16等9種病毒均有抗病毒作用(p<0.05);II組實驗目的是觀察藥物能否對已進入細胞內的病毒起作用,抑制其生物合成及成熟釋放,結果表明,14個提取物對A3V、AdVIII、MV、RSV、HSV-1、HSV-2、CVB3、CVB4、CVA16、EV71等10種病毒有意義(p<0.05);III、IV組為藥物與病毒再不同條件下作用,觀察藥物對病毒的直接滅活作用,結果表明,在KV-1~KV-14提取物中,其中KV-13提取物對細胞的保護率可高達96%,詳見表3~6。
表314個提取物對組織培養(yǎng)細胞病毒感染的保護率比較(%)(組I)
表414個提取物對組織培養(yǎng)細胞病毒感染的保護率比較(%)(組II)
表514個提取物對組織培養(yǎng)細胞病毒感染的保護率比較(%)(組III)
表614個提取物對組織培養(yǎng)細胞病毒感染的保護率比較(%)(組IV)
對KV-1~KV-14提取物在不同種細胞上的抗14種RNA及DNA病毒作用結果表明,KV系列提取物具有明顯及較廣的抗病毒效應,特別對呼吸合胞病毒、流感病毒和皰疹病毒有顯著效果。關于KV-1~KV-14提取物的抗病毒作用機理,從分組實驗結果看出,其作用是多途徑的,不僅有直接滅活病毒的作用,而且對吸附于細胞表面和進入細胞內的病毒均有抑制作用。本研究證明KV-1~KV-14提取物的抗病毒作用強于雙黃連。而且在KV-1~KV-14提取物中,其中KV-13、KV-8、KV-7等提取物的抗病毒作用最強。
實施例3 枸骨(Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.)總皂苷抗柯薩奇B3(CVB)病毒引起心肌炎的實驗研究制備方法4的方法制的提取物干粉(編號KV-8),配成藥液A液2.5mg/ml,B液2mg/ml,C液1.5mg/ml;將254只小鼠隨機分為8組,其中預防組(A、B、C液)、治療組(A、B、C液)和模型組采用腹腔接種0.2mlCVB3以誘導小鼠病毒性心肌炎模型。正常對照組同法接種0.2ml不含病毒的Eagle液,預防組在接種前2天給藥。治療組在接種病毒后1小時以200ml/kg灌胃給藥,每日1次。病毒對照組及正常組小鼠給等量生理鹽水灌胃。連續(xù)觀察小鼠表現(xiàn),分別在3、5、7、10、15天乙醚麻醉活殺各KV-8組6只小鼠。各對照組3只小鼠,對在實驗治療期死亡小鼠亦收取心臟檢測。心臟巨檢及心臟做組織學檢查,HE染色,光學顯微鏡下觀察各組小鼠心肌組織病變程度及心肌炎發(fā)生率。
結果見表7,顯示出藥物對心肌有較強的保護作用,這種保護作用在預防組中更明顯。
表7KV-8體內抗病毒保護心肌作用
心室段橫切面+孤立病灶;++<5個小灶性壞死散病灶;+++>5個片狀壞死;*P<0.05;**P<0.01實施例4 苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)總皂苷對流感病毒性肺炎的實驗研究制備方法9的方法制的提取物干粉(編號KV-13),配成不同濃度的藥液;小白鼠隨機分8組,每組10只,p o給藥,每天2次,連續(xù)5天,正常對照組及病毒對照組灌服相同體積的生理鹽水,陽性藥物對照灌服病毒唑,于第6天在乙醚麻醉下,用流感病毒FM1株15個LD 50量滴鼻感染,同時設生理鹽水滴鼻對照,感染后96小時解剖小白鼠,取肺稱重,算出肺指數(shù),肺指數(shù)值大,表示肺病變程度嚴重。結果在0.05g/kg及以上劑量的苦丁茶總皂苷均能抑制流感病毒引起的小白鼠肺炎,見表8。
肺指數(shù)=肺重(g)/體重(g)×100肺指數(shù)抑制率%=(病毒對照組肺指數(shù)均值-試驗組肺指數(shù)均值)÷病毒對照組肺指數(shù)均值×100%表8KV-13對流感病毒性肺炎的影響(x±s)
**與病毒對照相比p<0.01結果可見,感染后小鼠肺指數(shù)值明顯增大,苦丁茶總皂苷在所試劑量范圍內對流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用,肺指數(shù)值明顯降低。表明苦丁茶總皂苷對流感病毒感染小鼠所致肺病變有抑制作用。
實施例5 枸骨葉乙醇提取物(KV-7)治療帶狀皰疹臨床觀察制備方法3的方法制得枸骨葉提取物干粉(編號KV-7),配成一定濃度的口服液諸位治療組,每支10ml,含提取物3g,每天3次,每次1支;對照組口服無環(huán)鳥苷片,每次200mg,每天5次。
療效觀察按臨床縮短病程及疼痛減輕最早天數(shù)進行對比。兩組均在治療過程中記錄停止出現(xiàn)新皰時間(簡稱止皰)、水皰干涸時間(簡稱結痂)、疼痛減輕時間(按病人自我感覺疼痛開始減輕時間)、痊愈時間及全程。治愈皮疹全部消退,疼痛消失;有效皮疹消退40%以上,疼痛減輕;無效皮疹消退40%以下,或疼痛未減輕。以治療日開始計算,結果見表9結果表明枸骨葉乙醇提取物(KV-7)治療帶狀皰疹療效優(yōu)于無環(huán)鳥苷。
表9KV-7治療帶狀皰疹臨床觀察
*與對照組比較(x2檢驗)P<0.05 **與對照組比較(x2檢驗)P<0.01實施例6 枸骨(Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.)總皂苷膠囊治療急性上呼吸道感染的臨床研究制備方法4的方法制的提取物干粉(編號KV-8),制備膠囊,用每日3次,每次1g的劑量口服,并以雙黃連口服液(河南竹林眾生制藥股份有限公司生產(chǎn))做對照,每支10mL,每次2支,每日2次,療程與治觀察急性上呼吸道感染發(fā)熱患者202例,療程3d。
總體療效判定參照《中藥新藥治療感冒的臨床研究指導原則》的要求,按痊愈、顯效、有效、無效四級評定療效。痊愈服藥72h內,體溫恢復正常(腋溫降至37℃以下,不再回升),癥狀消失,異常理化指標恢復正常。顯效服藥72h內,體溫恢復正常,主要癥狀大部分消失,異常理化指標接近正常。有效服藥72h內,體溫較以前降低,主要癥狀部分消失,異常理化指標有所改善。無效不符合以上標準者。枸骨總皂苷膠囊愈顯率92.23%,雙黃連口服液愈顯率66.67%,前者療效優(yōu)于后者(P<005)。結果見表10。
表10KV-8膠囊、雙黃連口服液兩組治療急性上呼吸道感染的療效比較
注與雙黃連口服液組相比*P<005實施例7 苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)總皂苷治療流行性出血性結膜炎臨床試驗對照組用0.1%羥芐唑眼藥水和0.1%利福平眼藥水交替滴眼,口服病毒靈,每次0.1g,每日3次,用藥7天。
治療組局部眼藥治療與對照組相同,同時口服苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng)總皂苷,制備方法9的方法制的提取物干粉(編號KV-13),制成的膠囊,每粒含提取物0.3g,每次3粒,每日2次,用藥7天。
療效標準治愈眼刺痛發(fā)癢、畏光流淚、異物感、灼熱感等癥狀完全消失,無沙澀不適感,無分泌物,眼瞼不紅腫,結膜充血水腫消退,結膜下出血吸收;顯效眼刺痛發(fā)癢、畏光流淚、異物感、灼熱感、沙澀不適感明顯減輕或消失,無分泌物,眼瞼不紅腫,結膜充血水腫基本消退,結膜下出血大部分吸收;好轉眼刺痛發(fā)癢、畏光流淚、沙澀異物感減輕或仍部分存在,分泌物減少,眼瞼紅腫、結膜充血水腫減輕,結膜下出血部分吸收;無效用藥7天后,上述諸癥無明顯改善。結果見表11。
表11KV-13治療結果及療效比較
注*與對照組比較,P<0.01。
對照組平均治愈天數(shù)為5.3天,治療組為3.2天,經(jīng)統(tǒng)計學處理,治療組治愈時間明顯短于對照組(P<0.01)。
權利要求
1.冬青屬植物及其提取物在制備治療由病毒引起的疾病的藥物中的用途。
2.根據(jù)權利要求1的用途,其特征在于,所述的冬青屬植物選自崗梅;鐵冬青;苦丁茶;毛冬青;海南冬青;米碎木;冬青;大葉冬青;枸骨;滿樹星;珊瑚冬青;榕葉冬青;山枇耙;長梗冬青;貓兒刺;大果冬青;硬毛冬青;三花冬青;亮葉冬青;禿毛冬青中的任意一種或幾種。
3.根據(jù)權利要求1或2的用途,其特征在于,所述的冬青屬植物選自枸骨;苦丁茶;崗梅;冬青;大葉冬青中的任意一種或幾種。
4.根據(jù)權利要求1或2的用途,其特征在于,以冬青屬植物原生藥或冬青屬植物的水或有機溶劑的提取物為活性成分制備所述的藥物。
5.根據(jù)權利要求1的用途,其特征在于,所述的由病毒引起的各種疾病是皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感或皰疹性角膜炎。
6.根據(jù)權利要求5的用途,其特征在于,所述的由病毒引起的各種疾病是皰疹、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感或皰疹性角膜炎。
7.一種冬青屬植物提取物,其特征在于,所述的提取物來自所述植物的根、莖、皮、葉或果實。
8.根據(jù)權利要求7的冬青屬植物提取物,其特征在于所述組合物主要含皂苷、黃酮。
9.根據(jù)權利要求7或8的冬青屬植物提取物,其特征在于,提取過程中使用的有機溶劑為甲醇、乙醇、正丁醇或丙酮;提取方法選自浸泡提取、回流提取、超聲提取、逆流提取、超臨界萃取和樹脂吸附中的一種或幾種。
10.一種藥物組合物,其特征在于,所述組合物包括冬青屬植物原生藥或提取物和藥學上可接受的載體或輔助性成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及冬青屬植物及其提取物在制備治療由病毒引起的疾病的藥物中的用途。所述的冬青屬植物原生藥,具有顯著抗病毒作用,可將其制成多種劑型,適用于由病毒引起的多種疾病治療,尤其是由病毒引起的皰疹、腦炎、麻疹、腮腺炎、小兒麻痹癥、傳染性肝炎、病毒性心肌炎病、病毒性肺炎、病毒性呼吸道感染、流感、皰疹性角膜炎等疾病。所述藥物具有療效顯著、價格低廉、使用安全方便等優(yōu)勢特點。
文檔編號A61P11/00GK1872105SQ200610074298
公開日2006年12月6日 申請日期2006年4月8日 優(yōu)先權日2006年4月8日
發(fā)明者馮秀明 申請人:馮秀明