專利名稱：一種野黃芩苷原料藥的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制藥工業(yè)中原料藥的制備方法，尤其是高純度野黃芩苷(Scutellarin)的制備方法。
背景技術(shù)：
野黃芩苷(Scutellarin)，又名野黃芩甙、黃芩素甙、燈盞乙素、燈盞花乙素、印黃芩甙(出自植物藥有效成分手冊人民衛(wèi)生出版社1986年3月第一版，p946)，化學(xué)名為4′、5、6-三羥基黃酮-7-0-葡萄糖醛酸甙。其結(jié)構(gòu)式如下 在唇性植物高黃芩Scutellaria altissima L.葉，黃芩S.baicalensisGeorgi莖葉，菊科植物短亭飛蓬(燈盞花，燈盞細辛)Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand-Mazz等植物中野黃芩苷均有一定含量。
燈盞花素系從燈盞花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz全草中分離出的黃酮類有效成分，是一種黃酮類有效部位群，其中主要含有燈盞花乙素；目前從市場上購得的燈盞花素經(jīng)HPLC分析，燈盞花乙素含量在90％左右，多數(shù)低于90％。
在部頒標準中，燈盞花素的含量測定方法采用的是紫外分光光度法(簡稱紫外法)，在335nm波長處測定吸收度，按燈盞花乙素的吸收系數(shù)為570計算含燈盞花乙素為95％-105％。
近年來，在高效液相法測定燈盞花素的研究中發(fā)現(xiàn)，符合國家一直在采用的部頒標準的市售燈盞花素原料藥(紫外法測定95％以上)，其中的主要成分燈盞花乙素(又名野黃芩苷)含量采用HPLC法測定在很大的范圍內(nèi)波動(據(jù)我們研究中購買到的多個生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的合法來源的市售燈盞花素HPLC法測定野黃芩苷實際含量為50％-80％)。
燈盞花素衍生的各種制劑在臨床上已廣泛用于治療心腦血管疾病，療效顯著，但其注射液穩(wěn)定性差，貯存時間短，臨床上個別患者用后時有冷熱反應(yīng)、皮膚瘙癢、皮疹等現(xiàn)象發(fā)生，這些現(xiàn)象的出現(xiàn)主要由于原料藥在生產(chǎn)過程中未除盡其中一些雜質(zhì)所致，這一問題自從燈盞花產(chǎn)品問世30多年來一直未能解決。
盡管業(yè)界比較公認野黃芩苷(或稱燈盞花乙素)為燈盞花素主要有效成分，但由于一直沒有可靠的獲得大批量的工業(yè)化產(chǎn)量的高純度野黃芩苷原料藥，野黃芩苷的相關(guān)安全性與臨床真實有效性評價目前還沒有公開的相關(guān)文獻報道。
有關(guān)文獻資料中也未記載對燈盞花素精制工藝的報道，也未報道對燈盞花素純度的提高及副作用的消除的相關(guān)情況。盡管業(yè)界比較公認野黃芩苷(或稱燈盞花乙素)為燈盞花素主要有效成分，但由于一直沒有可靠的獲得大批量的工業(yè)化產(chǎn)量的高純度野黃芩苷原料藥，野黃芩苷的相關(guān)安全性與臨床真實有效性評價目前還沒有公開的相關(guān)文獻報道。
最近，中國專利CN1715288報道了采用磷酸鹽成鹽法結(jié)合溶劑法精制來提純燈盞花乙素的制備工藝。由于眾所周知的原因，含磷污水的排放牽涉到復(fù)雜的環(huán)保處理過程，含磷工藝大工業(yè)生產(chǎn)中有比較大的環(huán)保壓力。并且在磷酸鹽體系中水溶液極易產(chǎn)生緩沖體系，不利于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
中國授權(quán)專利CN1149989C“黃芩莖葉總黃酮及其野黃芩甙作為制備抗癡呆病藥的應(yīng)用”公開了一種大于50％野黃芩苷粗提物(黃芩莖葉總黃酮)的制備方法，采用的是水提，大孔樹脂制備法；該專利同時提供了一種含量大于90％的野黃芩苷提取物制備方法，即采用甲醇多次重結(jié)晶法。該方法的不足是由于與野黃芩苷相似黃酮類結(jié)構(gòu)分子在甲醇中化學(xué)性質(zhì)相似，收率偏低，純度只能達到90％以上。
從2002年開始，我們經(jīng)過大量研究，發(fā)現(xiàn)采用本專利的碳酸鹽成鹽結(jié)合溶劑相分離技術(shù)的工藝可以更穩(wěn)定可靠地得到大批量的工業(yè)化產(chǎn)量的高純度野黃芩苷原料藥。并且本專利工藝條件比用磷酸鹽溫和很多，所以本專利的優(yōu)點是顯而易見的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點，提供一種野黃芩苷原料藥的制備方法。
本發(fā)明所述方法立足于野黃芩苷的理化性質(zhì)以及化學(xué)結(jié)構(gòu)上的特征進行工藝設(shè)計。野黃芩苷不溶于水，微溶于甲醇、乙醇、丙酮；野黃芩苷結(jié)構(gòu)上存在羧基和多個酚羥基。研究發(fā)現(xiàn)，采用堿金屬弱酸鹽可以與野黃芩苷分子上的羧基生成可溶性的鹽，同時又可以避免由于使用強堿而與苯環(huán)上的酚羥基發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生其他雜質(zhì)，這種鹽幾乎不溶于有機溶劑。我們還發(fā)現(xiàn)，在一定濃度的復(fù)合有機溶劑水溶液中也是幾乎不溶的，利用復(fù)合溶劑沉淀法沉淀，達到野黃芩苷與其它雜質(zhì)分離的目的。沉淀物水溶后，在一定濃度的復(fù)合溶劑中酸化解離，沉淀生成野黃芩苷，同時雜質(zhì)溶于復(fù)合溶劑。經(jīng)一次或多次反復(fù)處理，用HPLC測定，野黃芩苷的純度可穩(wěn)定地達到98％以上，重復(fù)上述工藝多次，甚至可以達到99.9％以上。
本發(fā)明所述的高純度野黃芩苷原料藥的制備工藝由以下步驟組成(一)、向容器中加入一定量的野黃芩苷粗提物，再加入一定量的水，用堿金屬弱酸鹽或其溶液調(diào)節(jié)pH至目標值，攪拌使完全溶解。
(二)、在上述溶液中加入一定量的沉淀溶劑，沉淀，靜置，濾過，沉淀物用沉淀溶劑洗滌；(三)、轉(zhuǎn)移沉淀至合適的容器，用一定量的水溶解，加溶劑使成含有溶劑重量百分比為一定范圍的溶液，充分攪拌后，過濾，加酸調(diào)節(jié)pH至目標值，沉淀過濾，水洗至中性，干燥；(四)、重復(fù)步驟(一)至(三)一次或多次，既可得到有藥用價值的，含量高達98％以上的野黃芩苷原料藥。
在上述工藝步驟(一)中所述野黃芩苷粗提物的特征是野黃芩苷含量大于50％的野黃芩苷提取物，既可以是市售燈盞花素，也可以是從燈盞花藥材直接提取的提取物，也可以是野黃芩苷含量大于50％的黃芩莖葉中提取的黃芩莖葉總黃酮等；所加入水的量為5倍以上，其上限可以不受限制，只是加入得水越大，在以后的步驟中應(yīng)加入的溶劑量也隨之增大，從工業(yè)成本及可行性角度考慮，一般以5-50倍為宜；所加入的碳酸氫鉀、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫銨、碳酸銨等，可以為其中的一種或是幾種的組合，其加入的方式可以直接加入，也可以配制成合適水溶液加入，加入的量以最終調(diào)節(jié)的PH值為度，pH值6-9為宜；步驟(二)所述的沉淀溶劑為能于水以任意比例相溶的有機溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮中的一種或幾種；步驟(三)所述的溶劑為能于水以任意比例相溶的有機溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮中的一種或幾種；步驟(二)中溶劑加入的量與步驟(一)中的水量有關(guān)，系成正比關(guān)系，一般以步驟(一)所述水量的1-3倍為宜，即為所加野黃芩苷粗提物的5-150倍；所加入的酸，主要作用是酸化離解沉淀物，還原生成野黃芩苷，以強酸為宜，如鹽酸、硫酸等；pH值1-4為宜，pH值高了，得率偏低，pH值低了，析出雜質(zhì)增多；所述的含有重量百分比為5-50％溶劑的溶液是指溶劑的水溶液。由于超過50％的溶劑水溶液可能會產(chǎn)生沉淀，不利于產(chǎn)品得率。低于5％則不利于除去相關(guān)雜質(zhì)。
上述過程可在常溫下進行，也可以在所用溶劑的沸點溫度以下進行，但以10-50℃為最佳。
本發(fā)明所述工藝步驟簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)，所制備野黃芩苷經(jīng)高壓液相色譜儀分析，野黃芩苷純度的98％以上，得到了極好的效果和商業(yè)上的成功。
野黃芩苷原料藥在工業(yè)上尤其是制藥領(lǐng)域有著極其重要的價值，本專利的一個有益結(jié)果是我們獲得了大批量的工業(yè)化產(chǎn)量的高純度野黃芩苷原料藥，并對其進行了臨床前安全毒理藥效的相關(guān)性評價，結(jié)果表明跟原燈盞花素的相關(guān)性質(zhì)確實有很大的不同。它極有希望解決燈盞花素在近30年的臨床應(yīng)用中沒有解決的技術(shù)難題，即解決了注射劑的不穩(wěn)定性；消除了該產(chǎn)品存在的發(fā)冷、發(fā)熱、皮疹、皮膚瘙癢等不良反應(yīng)；降低毒性，提高了療效和使用的安全性。
本發(fā)明所制得產(chǎn)物不僅可作為原料藥，還可以做對照品。
具體實施例方式(野黃芩苷粗提物以燈盞花素為例)實施例1稱市售燈盞花素原料藥1000g，加30倍重量的水，用10％碳酸鉀試液調(diào)PH值至7.8，使完全溶解，濾過，濾液加1倍水量的乙醇沉淀，邊加邊攪拌，使沉淀完全，靜置10小時，濾過，加乙醇洗滌三次，再將沉淀物移至另一容器中，加入水25倍量溶解，加20倍量乙醇，攪拌，過濾，再加1∶1鹽酸調(diào)pH2-3靜置10小時，抽濾，用水洗滌至中性，再加乙醇洗一次，烘干，重復(fù)上述步驟一次。即為精制野黃芩苷，經(jīng)HPLC分析乙素含量為99.83％，如附圖1所示。
實施例2稱市售燈盞花素原料藥1000g，加15倍重量的水，用10％碳酸銨試液調(diào)PH值至6.8，使完全溶解，濾過，濾液加2倍水量的甲醇沉淀，邊加邊攪拌，使沉淀完全，靜置10小時，濾過，加甲醇洗滌三次，再將沉淀物移至另一容器中，加入水20倍量溶解，加10倍量甲醇，攪拌，過濾，再加1∶1鹽酸調(diào)pH1-2靜置10小時，抽濾，用水洗滌至中性，再加乙醇洗一次，烘干，即為精制野黃芩苷，經(jīng)HPLC分析乙素含量為98.97％，如附圖2所示。
實施例3稱市售燈盞花素原料藥1000g，加10倍重量的水，用10％碳酸氫鉀試液調(diào)PH值至7.2，使完全溶解，濾過，濾液加水量1.5倍丙酮沉淀，邊加邊攪拌，使沉淀完全，靜置10小時，濾過，加丙酮洗滌三次，再將沉淀物移至另一容器中，加入水12倍量溶解，加6倍量丙酮，攪拌，過濾，再加1∶1鹽酸調(diào)pH1-2靜置10小時，抽濾，用水洗滌至中性，再加乙醇洗一次，烘干，即為精制野黃芩苷，經(jīng)HPLC分析乙素含量為99.13％，如附圖3所示。


使用儀器類型高效液相色譜梯度方式恒流檢測器二極管陣列檢測器 儀器型號Agilent 1100檢測波長335nm柱溫30℃柱型號Agilent ZORBAX 80A Extend-C18柱(4.6×250mm)積分方法面積歸一法圖1 實施例1的高效液相圖譜Signal 1DAD1 A，Sig＝335，4 Ref＝offPeak RetTime Type Width Area Height Area# [min][min] [mAU*s] [mAU] ％----|--------|----|-------|-------------|-------------|-------|1 5.832 BP0.2311 5.820963.44637e-1 0.11082 9.126 PB0.3428 5244.96729 234.62505 99.83373 12.224 BP0.2981 2.915891.18062e-1 0.0555Totals 5253.70414 235.08774Results obtained with enhanced integrator?。剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑?** End of Report ***圖2 實施例2的高效液相圖譜Signal 1DAD1 A，Sig＝335，4 Ref＝offPeak RetTime Type Width AreaHeight Area#[min] [min][mAU*s] [mAU]％----|--------|----|-------|-----------|------------|--------|13.030 BV0.579135.159777.25892e-1 0.662623.656 VB0.409210.655513.19410e-1 0.200835.834 PP0.2470 5.995293.44498e-1 0.113049.143 PB0.3441 5251.58252 233.77045 98.97195 12.233 BB0.2886 2.743941.15753e-1 0.0517Totals5306.13703 235.27600Results obtained with enhanced integrator！＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝*** End of Report ***圖3 實施例3的高效液相圖譜Signal 1DAD1 A，Sig＝335，4 Ref＝offPeak RetTime Type Width AreaHeight Area#[min] [min][mAU*s] [mAU] ％----|--------|----|--------|----------|-------------|---------|1 3.019BB0.677630.616775.46535e-1 0.75412 5.853PP0.2254 4.856563.26829e-1 0.11963 9.173BB0.3046 4024.61865 201.86977 99.1263Totals 4060.09198 202.74313Results obtained with enhanced integrator?。剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑剑?** End of Report ***
權(quán)利要求
1.一種野黃芩苷原料藥的制備方法，其特征在于以下步驟組成(一)、向容器中加入一定量的野黃芩苷粗提物，再加入一定量的水，用堿金屬弱酸鹽或其溶液調(diào)節(jié)pH至目標值，攪拌使完全溶解。(二)、在上述溶液中加入一定量的沉淀溶劑，沉淀，靜置，濾過，沉淀物用沉淀溶劑洗滌；(三)、轉(zhuǎn)移沉淀至合適的容器，用一定量的水溶解，加溶劑使成含有溶劑重量百分比為一定范圍的溶液，充分攪拌后，過濾，加酸調(diào)節(jié)pH至目標值，沉淀過濾，水洗至中性，干燥；(四)、重復(fù)步驟(一)至(三)一次或多次，既可得到有藥用價值的，含量高達98％以上的野黃芩苷原料藥。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(一)中所述的野黃芩苷粗提物，該野黃芩苷粗提物的野黃芩苷含量不少于50％；
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(一)中所述的水的用量為5-50重量份，以野黃芩苷粗提物的重量為1份計；
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(一)中的所述的堿金屬弱酸鹽為碳酸氫鉀、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫銨、碳酸銨等中的一種或幾種；
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(一)中的所述的堿金屬弱酸鹽溶液為碳酸氫鉀、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、碳酸氫銨、碳酸銨等中的一種或幾種的水溶液；
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(一)中所述的pH至目標值，該目標值為pH6-9；
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(二)中所述的沉淀溶劑的加入量為步驟(一)所述水量的1-3倍為宜，即沉淀溶劑的加入量為5-150重量份，以起始野黃芩苷粗提物的重量為1份計；
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(二)中所述的沉淀溶劑為能與水以任意比例相溶的有機溶劑；一般為乙醇、甲醇、丙酮等的一種或幾種；
9.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(三)中所述的一定量的水為5-40重量份，以起始野黃芩苷粗提物的重量為1份計；
10.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(三)中所述的溶劑為能與水以任意比例相溶的有機溶劑，一般為乙醇、甲醇、丙酮等的一種或幾種；
11.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(三)中所述的溶劑重量百分比為一定范圍的溶液，優(yōu)選溶劑重量百分比為5-50％的溶液；
12.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(三)中所述的所加入的酸，主要是強酸，如鹽酸、硫酸等；
13.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(三)中所述的pH至目標值，該目標值為pH6-9。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制藥工藝中原料藥的制備方法，尤其是高純度野黃芩苷原料藥的制備方法。本發(fā)明所述的野黃芩苷原料藥的制備工藝有以下步驟組成1.向容器中加入一定量的野黃芩苷粗提物，再加入一定量的水，用堿金屬弱酸鹽或其溶液調(diào)節(jié)pH至目標值，攪拌使完全溶解。2.在上述溶液中加入一定量的沉淀溶劑，沉淀，靜置，濾過，沉淀物用沉淀溶劑洗滌；3.轉(zhuǎn)移沉淀至合適的容器，用一定量的水溶解，加溶劑使成含有溶劑重量百分比為一定范圍的溶液，充分攪拌后，過濾，濾液加酸調(diào)節(jié)pH至目標值，沉淀過濾，水洗至中性，干燥；4.重復(fù)步驟(一)至(三)一次或多次，既可得到有藥用價值的，含量高達98％以上的野黃芩苷原料藥。
文檔編號A61P9/00GK1850838SQ20061007598
公開日2006年10月25日 申請日期2006年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月26日
發(fā)明者黎豫杭, 張善飛, 潘迎鋒, 劉曉云, 柴建國, 張建兵, 尤國鴻, 葛晶晶, 張麗, 張平 申請人:正大青春寶藥業(yè)有限公司