專利名稱：9－(1, 3－苯并二惡茂基－5)－4－(β－D－吡喃葡氧基)－6,7－二甲氧基萘并[2, 3－C ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由天然植物山荷葉提取并經(jīng)化學(xué)工藝半合成制得的新穎的化合物9-(1，3-苯并二惡茂基-5)-4-(β-D-吡喃葡氧基)-6，7-二甲氧基萘并[2，3-C]呋喃-1[3H]酮，其制備方法，含有該化合物作為活性成分的藥物組合物，以及它們在治療各種原因?qū)е碌陌准毎麥p少癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白細胞減少癥是由多種原因?qū)е峦庵苎准毎倲?shù)持續(xù)低于4×109/L的一種綜合癥，也是目前臨床常見病癥，其發(fā)病原因與多種因素有關(guān)，如放、化療后的副反應(yīng)，感染，脾功能亢進，藥物所致及不明原因者，以放、化療后較多出現(xiàn)。白細胞減少癥的典型表現(xiàn)為精神萎靡，乏力，頭暈耳鳴，抵抗力下降。各種原因?qū)е碌陌准毎掷m(xù)減少時，則引發(fā)人體自身免疫力降低，全身各部器官出現(xiàn)嚴重感染，甚至發(fā)生敗血癥，長期抗感染治療又極易并發(fā)真菌感染，均會危及病人的生命。
目前，所謂的治療白細胞減少癥的藥物名目繁多，如鯊肝醇、利血生、肌肝、脫氧核糖核酸等，但療效均不甚滿意。由國外進口的生物制劑粒細胞集落刺激因子(G-CSF)和粒-單細胞集落刺激因子(GM-CSF)雖然療效較好，缺點是價格昂貴，一般患者接受困難；另外須低溫保存，而且無口服劑型，病人使用不便。因此，臨床實際缺乏安全有效、服用方便且價廉的用于治療各種原因?qū)е碌陌准毎麥p少癥的藥物。
據(jù)國外有關(guān)報道，印度曾經(jīng)從大戟科植物閉花木中分離提取出山荷葉堿，加入3，4-二甲基木糖合成了閉花木甙。閉花木甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)與本發(fā)明化合物相似，具有升高白細胞的治療作用。但是閉花木植物本身毒性大，在各國屬珍稀物種，不具備規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)的條件。
本發(fā)明所采用的植物原料山荷葉(diphylleia sinensis Li)，為小檗科山荷葉屬植物，廣泛分布于我國的陜西、甘肅、湖北、四川、云南、寧夏等省，臨床常用于風(fēng)濕腰腿疼痛、跌打損傷、癰腫瘡癤、毒蛇咬傷等癥的治療。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有臨床治療白細胞減少癥時所用藥品給藥方式單一、治療費用昂貴等缺陷給臨床治療帶來的不便，本發(fā)明人通過長期大量試驗摸索，從天然植物山荷葉提取并經(jīng)化學(xué)工藝半合成制得了本發(fā)明化合物。本發(fā)明所用植物原料山荷葉在我國分布廣泛，具有資源豐富、毒性低、易提取等優(yōu)點，并經(jīng)實驗室試驗成功以半合成方法獲得，使得本發(fā)明的工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)成為可能。并且本發(fā)明的化合物理化性質(zhì)穩(wěn)定，適宜制成多種劑型，可多途徑給藥，滿足不同病人的臨床治療需要。
本發(fā)明的目的在于提供一種新穎的、具有藥用價值的化合物9-(1，3-苯并二惡茂基-5)-4-(β-D-吡喃葡氧基)-6，7-二甲氧基萘并[2，3-C]呋喃-1[3H]酮。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述化合物的制備方法。
本發(fā)明進一步的目的是提供一種治療白細胞減少癥的藥物組合物。
本發(fā)明還有一個目的是提供上述化合物和組合物在制備治療白細胞減少癥的藥物方面的用途。
本發(fā)明人是從天然植物山荷葉的根莖中分離提取出山荷葉堿(Diphyllin，迪非林)后，加入D-葡萄糖，進一步合成迪非林葡萄糖苷，即9-(1，3-苯并二惡茂基-5)-4-(β-D-吡比喃葡氧基)-6，7-二甲氧基萘并[2，3-C]呋喃-1[3H]酮，其結(jié)構(gòu)式為 其中山荷葉堿(Diphyllin，迪非林)的結(jié)構(gòu)式為(II) 提取方法包括以下步驟a.將山荷葉根粉碎成粗粉后，用乙醇回流提取；b.濃縮醇提液，向其中加入大量水析，過濾；c.所得黃色顆粒用氯仿熱提；d.濃縮氯仿提取液后，向其中加入乙醇，放置過濾；e.所得沉淀用乙醚洗滌，得到所需產(chǎn)物結(jié)構(gòu)式(II)粗產(chǎn)物。
得到的結(jié)構(gòu)式(II)粗產(chǎn)物用丙酮-乙醇(1∶4)混合溶媒反復(fù)精制可得精品。
從山荷葉堿合成本發(fā)明化合物的方法包括如下步驟(A)使D-葡萄糖和醋酐混合均勻，滴加濃硫酸發(fā)生放熱反應(yīng)，反應(yīng)物冷卻后進行溴化，制得結(jié)構(gòu)式(III)的溴代四乙酰α-吡喃糖 (B)使結(jié)構(gòu)式(II)的山荷葉堿與結(jié)構(gòu)式(III)的溴代四乙酰α-吡喃糖與無水碳酸鉀及適量丙酮混合，攪拌回流約8h，濾除固體，回收溶媒后得結(jié)構(gòu)式(IV)的四乙酰迪非林葡萄糖苷粗品，用乙醇-水精制，制得結(jié)構(gòu)式(IV)的四乙酰迪非林葡萄糖苷 (C)以無水氯化鋅為催化劑，結(jié)構(gòu)式(IV)化合物用甲醇加熱回流，反應(yīng)冷卻后析出粗品，用乙酸-丙酮混合溶媒精制，五氧化二磷真空干燥，即得所需產(chǎn)物——結(jié)構(gòu)式(I)的迪非林葡萄糖苷。
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物對于因放、化療，中毒和使用各種藥物而導(dǎo)致的白細胞減少癥有顯著療效。
本發(fā)明化合物的藥物組合物在動物實驗中顯示出很好的治療白細胞減少癥的作用，且在肌注給藥實驗中表明本發(fā)明化合物的藥物組合物吸收快而完全、效果穩(wěn)定、波動幅度小。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的上述結(jié)構(gòu)式(I)化合物為有效成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。其中，所述的迪非林葡萄糖苷治療有效量為5～100mg。
本發(fā)明的化合物和藥物組合物可用于制備治療各種原因引起的白細胞減少癥的藥物。
上文所述藥學(xué)上可接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括制劑中常規(guī)的稀釋劑、填充劑(如甘露醇、乳糖、聚乙二醇)，粘合劑(如淀粉、微晶纖維素)，崩解劑(如羧甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素)、潤滑劑(如滑石粉、硬脂酸鎂)、濕潤劑(如丙二醇、乙醇)，穩(wěn)定劑(EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉)等等。上述輔料可以是常用劑量，以常用的劑量和迪非林葡萄糖苷混合，當(dāng)?shù)戏橇制咸烟擒沼昧看_定后，各藥用輔料之間的配比可以根據(jù)需要適當(dāng)調(diào)節(jié)。
本發(fā)明化合物可以組合物的形式通過口服、肌注或靜脈給藥。用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體劑型，如片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊等；也可制成液體制劑如糖漿、酏劑等；或者可以制成注射用溶液、水或油性懸浮劑等。優(yōu)選制備成常規(guī)固體劑型和注射用溶液。
本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如將活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需劑型。具體例如按配置總量計稱取含10～70％迪非林葡萄糖苷，加入30～90％的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑等，充分攪拌混合制成顆粒，在60～70℃干燥2～4小時壓制成片，使每片含迪非林葡萄糖苷30～100mg。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1％～99.5％的活性成分，更優(yōu)選含有重量比為0.5％～95％的活性成分。
本發(fā)明的施藥量可根據(jù)用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴重程度等因素加以調(diào)整，日劑量為5～100mg/kg體重，可以每日一次或多次給藥?？筛鶕?jù)臨床的病例表現(xiàn)適當(dāng)加以改變。
具體實施例方式
以下通過實施例來進一步闡述本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1本發(fā)明化合物9-(1，3-苯并二惡茂基-5)-4-(β-D-吡喃葡氧基)-6，7-二甲氧基萘并[2，3-C]呋喃-1[3H]酮的制備(A)按以下步驟分離提取山荷葉堿(diphyllin，迪非林)取山荷葉根粗粉8公斤，用95％乙醇回流提取三次，將乙醇提取液濃縮，所得濃縮液中加入大量水進行水析，過濾后得黃色顆粒。該顆粒用氯仿熱提三次，濃縮，向所得濃縮液中加入5立升乙醇后，放置過濾，濾液他用(向其中加入苯，放置，過濾后可得鬼臼毒粗品)。所得沉淀用乙醚洗滌，既得迪非林粗品，約24克。
上述所得迪非林粗品用丙酮-乙醇(1∶4)混合溶媒反復(fù)精制，得精品，呈微黃色針狀結(jié)晶狀。
熔點289-291℃。
元素分析結(jié)果C21H16O7，實測值C.65.27；H.4.32；OMe 16.61％；理論值C，65.89；H 4.17；OMe16.30％。
紫外光譜λMaxC2H5OHnm230.268迪非林結(jié)構(gòu)為
(B)按下述步驟合成標題化合物 (B.1)溴代四乙酰α-吡喃糖(III)的制備于2L燒瓶中投入132克D-葡萄糖、560毫升醋酐，混合均勻，滴加1-2滴濃硫酸，立即發(fā)生放熱反應(yīng)，反應(yīng)物保持110℃二小時，冷卻后直接進行溴化反應(yīng)，由紅磷和溴發(fā)生溴化氫，于20℃以下通入反應(yīng)液中，增重300克，停止反應(yīng)。低溫快速蒸除醋酐，殘留液中加400毫升乙醚及適量石油醚，逐漸析出結(jié)晶，過濾，用少量無水乙醇洗滌，得粗品約150克。
(B.2)四乙酰迪非林葡萄糖苷(IV)的制備于5L燒瓶中投入150克迪非林，380克(III)粗品、300克無水碳酸鉀，攪拌回流，濾除固外，回收溶媒后得(IV)粗品，用乙醇一水精制，得(IV)265克，收率93％。
(B.3)迪非林葡萄糖苷，即標題化合物的制備將(IV)220克、甲醇2.5L、無水氯化鋅330克投入反應(yīng)瓶，加熱回流，反應(yīng)冷卻后析出粗品，用乙酸-丙酮混合溶媒精制、五氧化二磷真空干燥得迪非林葡萄糖苷75克，收率44％。
所得化合物結(jié)構(gòu)為
分子式C27H26O12·H2O迪非林葡萄糖苷呈白色粉末狀，分子量為560.524，不溶于水，易溶于聚乙二醇、二甲基甲酰胺，微溶于丙酮、苯等有機溶媒。
元素分析計算值C57.72；H5.03測定值C57.49；H5.29無水樣品計算值C59.77；H4,83測定值C59,51，59.69；H4.86，4.99熔點179-182℃紅外圖譜IRKBr3500cm-1(-OH)1750cm-1(C＝0)920cm-1(次甲氧基)紫外圖譜UMaxEtoH262，320核磁圖譜NMR(重氫丙酮)R-22型、90兆周內(nèi)標六甲基二硅醚6，3.70(3H，S，-OCH3)，3.90(3H，S，-OCH3)，4.80.(1H.d.j＝6H2糖上CH)，5.40，5.70(2H.d.d.j＝15H2，O＝C-O-CH-)， 6.7-8.2(5H，m.芳環(huán)氫)。
實施例2本發(fā)明片劑的制備稱取迪非林葡萄糖苷30g，加入乳糖40g，羧甲基淀粉鈉21g，交聯(lián)羧甲基淀粉16g，聚乙二醇4000 30g混合均勻。加入50％乙醇45mL制成適宜的軟材，通過14目篩整粒，加入羧甲基淀粉鈉5g，硬脂酸鎂5g混合均勻，檢驗合格后壓片，共1000片。
實施例3本發(fā)明注射劑的制備稱取迪非林葡萄糖苷5g，加入聚乙二醇-400 2000mL，邊加熱邊攪拌使溶解，然后加入配制量0.02％的針劑活性炭，充分攪拌，粗濾后，再用0.22μm的微孔濾膜精濾，分裝，100℃熱壓滅菌30分鐘，檢漏，質(zhì)檢，包裝，即得5mg/2mL/支安瓿，共1000支。
在詳細說明的較佳實施例之后，熟悉該項技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述申請專利范圍與精神下可進行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受限于說明書中所舉實例的實施方式。
實施例4本發(fā)明化合物的主要藥效學(xué)實驗(一)對苯所致小鼠白細胞減少的治療作用1.口服迪非林葡萄糖苷對苯所致小鼠白細胞減少的影響48只小白鼠，純苯與滅菌麻油按1∶1配制，隔日皮下注射(0.05mL/Kg)共4次，制成苯中毒白細胞減少模型(白細胞數(shù)下降至實驗前均數(shù)的50％左右)。之后，隨機分為4組本發(fā)明口服小劑量組(DFL-A，0.12g/kg)，本發(fā)明口服大劑量組(DFL-B，0.24g/kg)，鯊肝醇組(BA，0.32g/kg)，鹽水組(NS，等溶劑鹽水)。各組每日灌胃給藥1次，連續(xù)7d。于給藥第2，4，7d自尾靜脈采血計數(shù)白細胞。
表1口服迪非林葡萄糖苷對苯所致小鼠白細胞減少的影響(x±s，×109/L)

與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001與大劑量組比較△P＜0.05 △△P＜0.01結(jié)果，治療后實驗組與鹽水對照組比較，第2，4，7d的白細胞值有非常顯著差異。本發(fā)明口服大劑量組白細胞顯著高于口服小劑量組及鯊肝醇組。
2.肌注迪非林葡萄糖苷對苯所致小鼠白細胞減少的影響36只小白鼠，純苯與滅菌麻油按1∶1配制，隔日皮下注射(0.05mL/Kg)共4次，制成苯中毒白細胞減少模型(白細胞數(shù)下降至實驗前均數(shù)的50％左右)。之后，隨機分為3組本發(fā)明肌注小劑量組(DFL-C，0.02g/kg)，本發(fā)明肌注大劑量組(DFL-D，0.04g/kg)，鹽水組(NS，等溶劑鹽水)。各組每日肌注給藥1次，連續(xù)7d。于給藥第2，4，7d自尾靜脈采血計數(shù)白細胞。
表2肌注迪非林葡萄糖苷對苯所致小鼠白細胞減少的影響(x±s，×109/L)

與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001與大劑量組比較△P＜0.05 △△P＜0.01結(jié)果治療后實驗組與鹽水對照組比較，第2，4，7d的白細胞值有非常顯著差異。本發(fā)明肌注大劑量組白細胞顯著高于肌注小劑量組，與口服劑量組比較，肌注給藥升高白細胞效果優(yōu)于口服給藥。
(二)對環(huán)磷酰胺所致小鼠白細胞減少的治療作用26只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺，80mg/kg，隔日1次共5次，制成化療白細胞減少模型[白細胞數(shù)下降(2.00～3.00)×109/L]。之后，隨機分為2組本發(fā)明大劑量組(DFL-B，同上)；生理鹽水組。各組每日灌胃給藥1次，連續(xù)9d。于給藥第3，6，9d分別自尾靜脈采血計數(shù)白細胞。
表3迪非林葡萄糖苷對環(huán)磷酰胺所致小鼠白細胞減少的影響(x±s，×109/L)

與鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01結(jié)果給藥后第3，6天，本發(fā)明大劑量組的白細胞數(shù)顯著高于對照組，第9天兩組白細胞均恢復(fù)到實驗前正常水平。
(三)對輻射損傷所致小鼠白細胞減少的治療作用52只小鼠以60Co-γ射線全身一次性均勻照射，總計量450rad，制成放療白細胞減少模型。分組及給藥劑量同前，對照組選用復(fù)方阿膠漿(7.8mL/kg)。于照射當(dāng)天分別灌胃給藥，每日1次連續(xù)10d。于給藥第2，4，7，10d分別自尾靜脈采血計數(shù)白細胞。
表4迪非林葡萄糖苷對輻射損傷所致小鼠白細胞減少的影響(x±s，，×109/L)


與鹽水組比較**P＜0.01***P＜0.001與大劑量組比較△P＜0.05 △△P＜0.01 △△△P＜0.001結(jié)果治療后實驗組與生理鹽水對照組比較，第2，4，7d的白細胞值有非常顯著差異。本發(fā)明大劑量組白細胞顯著高于小劑量組及復(fù)方阿膠漿組。
結(jié)論對苯所致的小鼠白細胞減少，口服本發(fā)明SBX 0.12～0.24g/kg的升提白細胞作用迅速，7～9d白細胞恢復(fù)正常，大劑量作用強于小劑量及鯊肝醇，肌注本發(fā)明SBX 0.02～0.04g/kg的升提白細胞作用迅速，7～9d白細胞恢復(fù)正常，大劑量作用強于小劑量，肌注給藥升高白細胞效果優(yōu)于口服給藥。對環(huán)磷酰胺所致的小鼠白細胞減少，口服本發(fā)明SBX 0.12～0.24g/kg的升提白細胞作用迅速，7～9d白細胞恢復(fù)正常；對輻射損傷小鼠，口服SBX 0.24g/kg有顯著白細胞升提作用，作用強于復(fù)方阿膠漿組。證明本發(fā)明可對抗多種原因引起的骨髓造血功能的抑制，進骨髓里細胞增殖，對白細胞減少有顯著的治療作用。
權(quán)利要求
1.結(jié)構(gòu)式(I)化合物9-(1，3-苯并二惡茂基-5)-4-(β-D-吡喃葡氧基)-6，7-二甲氧基萘并[2，3-C]呋喃-1[3H]酮。
2.權(quán)利要求1化合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)從小檗科山荷葉屬植物山荷葉根莖中分離提取出山荷葉堿(diphyllin，迪非林)；(2)制備溴代四乙酰α-吡喃糖使D-葡萄糖和醋酐反應(yīng)，反應(yīng)物冷卻后進行溴化反應(yīng)，得到溴代四乙酰α-吡喃糖；(3)制備四乙酰迪非林葡萄糖苷使迪非林與溴代四乙酰α-吡喃糖、無水碳酸鉀及適量丙酮攪拌回流，濾除固體，回收溶媒后即得四乙酰迪非林葡萄糖苷；(4)制備迪非林葡萄糖苷將四乙酰迪非林葡萄糖苷、甲醇、無水氯化鋅投入反應(yīng)瓶，加熱回流，反應(yīng)冷卻后析出迪非林葡萄糖苷粗品，用乙酸-丙酮混合溶煤精制，五氧化二磷真空干燥，即得所需權(quán)利要求1化合物迪非林葡萄糖苷。
3.一種用于治療白細胞減少癥的藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
4.權(quán)利要求1化合物在制備治療白細胞減少癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的結(jié)構(gòu)式(I)化合物9－(1，3－苯并二惡茂基－5)－4－(β－D－吡喃葡氧基)－6，7－二甲氧基萘并[2，3－C]呋喃－1[3H]酮。本發(fā)明還涉及該化合物的制備方法，含有該化合物作為活性成分的藥物組合物，以及本發(fā)明化合物和藥物組合物在治療各種原因?qū)е碌陌准毎麥p少癥中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/7048GK1850837SQ20061007649
公開日2006年10月25日 申請日期2006年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月26日
發(fā)明者田兵, 耿志輝, 田崗, 候立鵬, 劉鵬 申請人:田兵, 耿志輝, 田崗, 候立鵬, 劉鵬