專利名稱：：白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及白介素2(白介素-2)及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：支氣管炎是一種常見病，是支氣管受細(xì)菌或病毒的感染而引起的，也可因物理性、化學(xué)性因素發(fā)毒氣、煙霧、灰塵、寒冷空氣等刺激引起發(fā)病，或是由于某些傳染病所產(chǎn)生的合并癥。急性感染性支氣管炎，多流行于冬季，常為急性上呼吸道感染的一部分，可發(fā)生于普通感冒或鼻炎，喉及氣管支氣管樹的其他病毒感染之后，常伴發(fā)繼發(fā)性細(xì)菌感染，其主要表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)燒、乏力、胸骨后壓痛、胸悶、氣促等癥狀。急性支氣管炎如未及時治療、反復(fù)感染、長期刺激則發(fā)展成為慢性支氣管炎。慢性支氣管炎以老年人發(fā)病率較高，患者可能會連續(xù)咳嗽好幾個月。慢性支氣管炎的第一個癥狀就是晨咳并咳出痰液，有時干咳，有時咳白粘液痰。到末期則咳嗽、呼吸困難，喘鳴幾乎終年不停。慢性支氣管炎病情嚴(yán)重時產(chǎn)生呼吸道衰竭和肺癌。此外，由于肺部氧氣與二氧化碳的交換空間減縮，心臟必須更努力工作，來維持足量的血液，這樣可能導(dǎo)致心臟疾病。目前用于支氣管炎治療的藥物主要有(1)抗生素青霉素、復(fù)方新諾明、琥乙紅霉素等；(2)止咳化痰藥復(fù)方甘草合劑、咳必清、川貝枇杷膏、痰咳凈等；(3)止喘藥氨茶堿、舒喘通等。上述藥物在使用過程中存在以下缺點(diǎn)(1)大量應(yīng)用廣譜抗菌藥，容易導(dǎo)致菌群失調(diào)和細(xì)菌耐藥性；(2)止咳化痰藥為中成藥，起效慢，且不能根治；(3)止喘藥主要是解除支氣管痙攣,但無抗炎作用，且口服易致惡心、嘔吐等副作用。白介素2(InterLeukin-2)是T淋巴細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子(由133個氨基酸組成的多肽，分子量約為15KD)。它是人體免疫應(yīng)答的核心物質(zhì)，具有免疫增強(qiáng)、抗腫瘤和抗感染等作用。臨床上已用于腎癌、黑色素瘤、淋巴瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、腸癌、膀胱癌、頭頸部腫瘤、白血病及癌性胸腹水等病癥的治療，與放、化療比較，白介素-2對正常細(xì)胞毒副作用輕微，能減輕腫瘤患者的疼痛，提高其生活質(zhì)量。此外結(jié)核病、肝炎、艾滋病、性病、成癮性吸毒者及其它免疫功能低下病人均可使用白介素-2。國外更是應(yīng)用大劑量(1000萬單位)治療艾滋病患者。迄今為止，國內(nèi)外尚未有應(yīng)用白介素2治療支氣管炎的報道。我公司產(chǎn)品"基因工程人白細(xì)胞介素-2"是國家重點(diǎn)科技項(xiàng)目(攻關(guān))計劃和"863"高技術(shù)研究開發(fā)項(xiàng)目。該項(xiàng)目1995年獲得中國發(fā)明協(xié)會"中國發(fā)明成果金杯獎"，1996年獲得國家"國家八五攻關(guān)重大科技成果獎"和"北京國際發(fā)明展覽會金牌獎"，1997年獲得"國家科技進(jìn)步二等獎"，至投產(chǎn)以來，我們繼續(xù)對該產(chǎn)品進(jìn)行深度挖掘，并在2002年獲得了水針劑的專利。在此基礎(chǔ)上，我們開發(fā)出了該產(chǎn)品的新用途。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用。其中白介素2及其衍生物尤指人的白介素2及其衍生物。為了提高白介素2的生物活性或者便于以基因工程方式大規(guī)模生產(chǎn)，人們對白介素2的天然結(jié)構(gòu)進(jìn)行了各式各樣的改造，形成了很多白介素2衍生物。包括天然結(jié)構(gòu)在內(nèi)的白介素2及其衍生物，都適用于本發(fā)明的新適應(yīng)癥。并且本發(fā)明可以單獨(dú)使用，也可以與其他治療支氣管炎的藥物聯(lián)合使用，協(xié)同增效。所述支氣管炎為急性支氣管炎或慢性支氣管炎。所述藥物由治療有效量的白介素2或其衍生物和藥劑學(xué)可接受的輔料組成。所述藥物為注射給藥劑型或呼吸道給藥劑型。所述呼吸道給藥劑型為吸入劑、氣霧劑或粉霧劑。本藥效學(xué)動物實(shí)驗(yàn)針對治療支氣管炎，對大鼠建立支氣管炎的動物模型，試驗(yàn)重組人白介素-2(RhlL-2)對治療支氣管炎的效果，并同已上市的，治療效果比較好的止咳祛痰藥鹽酸氨溴索注射液(勃林格殷格翰國際公司生產(chǎn))、抗感染藥注射用頭孢拉定(山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn))和平喘藥氨茶堿注射液(揚(yáng)州中寶制藥有限公司生產(chǎn))進(jìn)行對比。主要從動物體征(動物的咳嗽數(shù)量)和組織病理方面觀察兩個方面比較和確定藥物的治療效果。動物體征方面。四種藥均可以明顯減輕動物的咳嗽次數(shù)。動物組織病理方面。在"炎細(xì)胞浸潤"方面，重組人白介素-2、頭孢拉定、鹽酸氨溴索、氨茶堿均未見明顯減輕"炎細(xì)胞浸潤"病變。在"管周炎癥反應(yīng)"方面，鹽酸氨溴索、頭孢拉定、氨茶堿、RhIL-2(400ku.kg—')可減輕"管周炎癥反應(yīng)"病變。在"肺充血水腫"方面，RhIL-2(lOOku.kg—'、200ku.kg-'、400ku.kg—')和頭孢拉定可減輕"肺充血水腫"病變。在"肺泡間隔增寬"方面，RhlL-2(騒u,kg-'、200ku.kg—'、碰u.kg—')頭孢拉定、鹽酸氨溴索可減輕"肺泡間隔增寬"病變。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明首次使用重組人白介素2治療支氣管炎，結(jié)果表明其可以明顯降低支氣管炎的發(fā)生率，明顯改善其支氣管和肺部的病變，療效確切。下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容所作出的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。圖1為空白組支氣管病理切片(光鏡X200)。圖2為空白組肺部病理切片(光鏡XIOO)。圖3為模型組支氣管病理切片(光鏡X200)。圖4為模型組肺部病理切片(光鏡XIOO)。圖5為頭孢拉定組支氣管病理切片(光鏡X200)。圖6為頭孢拉定組肺部病理切片(光鏡XIOO)。圖7為鹽酸氨溴索組支氣管病理切片(光鏡X200)。圖8為鹽酸氨溴索組肺部病理切片(光鏡X100)。圖9為氨茶堿組支氣管病理切片(光鏡X200)。圖IO為氨茶堿組肺部病理切片(光鏡XIOO)。圖11為RhlL-2lOOku.kg-'組肺部病理切片(光鏡X200)。圖12為RhlL-2100ku.kg—'組肺部病理切片(光鏡XIOO)。圖13為RhIL-2200ku.kg—'組肺部病理切片(光鏡X200)。圖14為RhIL-2200ku.kg-'組肺部病理切片(光鏡X100)。圖15為RhIL-2400ku.kg—'組肺部病理切片(光鏡X200)。圖16為RhIL-2400ku.kg-'組支氣管病理切片(光鏡X100)。具體實(shí)施方式實(shí)施例.抗支氣管炎動物試驗(yàn)一.試驗(yàn)?zāi)康挠^察重組人白介素一2注射液對于慢性支氣管炎癥動物模型韻影響，為其臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。二.實(shí)驗(yàn)材料1.動物清潔級SD大鼠，80只，雌雄各半，南京市軍區(qū)總醫(yī)院提供，體重180200g，動物合格證號SCXK(蘇2003-0004)，在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)35天后使用。2.藥品(1)重組人白介素一2注射液。北京四環(huán)生物制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格125萬u'ml—1,0.5ml/支。批號20050101。(2)陰性對照液。按重組人白介素一2注射液處方配制，內(nèi)含除活性成分重組人白介素一2外的所有成分。(3)鹽酸氨溴索注射液。勃林格殷格翰國際公司生產(chǎn)，規(guī)格2ml:15mg，2ml/支，批號525592。(4)注射用頭孢拉定。山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)。規(guī)格0.5g/支，批號C050509。(5)氨茶堿注射液。揚(yáng)州中寶制藥有限公司生產(chǎn)。規(guī)格2ml:0.25g,批號050324。3.藥物劑量設(shè)計及選擇根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇重組人白介素一2注射液劑量為10萬u，kg—'、20萬ukg—'、40萬ukg—'三個劑量組；此外，由于支氣管炎的常見癥狀為"咳、痰、喘、感染"，因此，結(jié)合臨床常用藥物及使用劑量，設(shè)置止咳祛痰藥鹽酸氨溴索1.5mg/kg組、平喘藥氨茶堿0.025g/kg組、抗感染藥頭孢拉定O.lg/kg組為3個陽性藥組。三.試驗(yàn)方法1.煙熏法制備大鼠慢性支氣管炎模型采用改良煙熏法復(fù)制大鼠慢性支氣管炎模型。自制80X70X70cm煙室，箱蓋四個角處各留一個1.5X2cm的開口，用來通氣；側(cè)面各安裝一塊透明的玻璃，以便觀察里面的煙霧濃度，防止煙霧濃度過高導(dǎo)致大鼠死亡；側(cè)面底端開一個30X15cm的小閘門，用來中途換煙之用。將大鼠分批置于煙室進(jìn)行煙熏25分鐘，每日兩次，持續(xù)30天。2.動物分組及給藥將80只SD大鼠按體重隨機(jī)分為8組，每組雌雄各半，即重組人白介素一2注射液100ku'kg-'、200ku'kg—'、400kukg"三個劑量組；模型組(給予等體積陰性對照液)；空白對照組(給予等體積陰性對照液)，給藥方式為s.c.，給藥容積為2ml，kg—';頭孢拉定組(給予頭孢拉定注射液O.lg/kg，給藥方式為i.p.，給藥容積為10mlkg—');鹽酸氨溴索組(給予鹽酸氨溴索注射液1.5mg/kg，給藥方式為i.p.，給藥容積為10ml*kg");氨茶堿組(給予氨茶堿注射液0.025g/kg,給藥方式為i.P.，給藥容積為10mlkg—')。各組動物按以上方法給藥，每日兩次，除空白組外每次給藥后30min按1所述方法制備慢性支氣管炎模型。3.動物體征觀察在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，于實(shí)驗(yàn)開始后第13天、第19天、第25天、第27天記錄30min內(nèi)各組動物的咳嗽數(shù)，并作統(tǒng)計學(xué)分析。4.病理切片檢査給藥結(jié)束后第2天，將動物脫頸椎處死，迅速剖取肺臟和支氣管。10%福爾馬林溶液固定，常規(guī)取材，脫水，石蠟包埋，制片，HE染色，由專業(yè)人員在光學(xué)顯微鏡下觀察支氣管與肺組織的形態(tài)變化。四.實(shí)驗(yàn)結(jié)果l.動物體征各給藥組(包括重組人白介素一2注射液100kirkg"、200kirkg'1、400ku'kg"三個劑量組，頭孢拉定組，鹽酸氨溴索組，氨茶堿組)與陰性對照組(即模型組)相比，每分鐘內(nèi)咳嗽次數(shù)均明顯減少。表1.rhlL-2注射液對大鼠體征(咳嗽數(shù)目，次/分鐘)的影響(n=10，x+s)組別天數(shù)13192527空白對照組0000模型組13±0.8217土0.4714±0.4718±0.47RhlL-2訓(xùn)ku.kg-16±0.67**11±0.47**10±1.05**15±1.05**RhlL-2200ku.kg-16±0.94**7±0.47**7±0.67**8±0.47**RhlL-2400ku.kg"4土o.47"12±0.67**9土o.47"11±0.47**頭孢拉定組5土0.47"6土0.47"3±0.47**5±0.47**鹽酸氨溴索組3±0.47**5±0.47**2±0.47**3±0.47**氨茶堿組3±0.47**4土o.47"1±0.67**"p<0.01vs模型組(陰性對照組)2.感染動物病理切片檢査結(jié)果:參見圖1至圖16所示。(1)空白對照組肺組織形態(tài)正常。支氣管腔內(nèi)無滲出物，支氣管上皮無變性壞死脫落，管壁及其周圍組織無炎細(xì)胞浸潤；肺泡間隔未見明顯增厚，肺泡腔內(nèi)無滲出物。(2)模型組肺組織呈中__重度支氣管炎。表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞變性，壞死，腔內(nèi)見脫落壞死的上皮及炎性滲出物。病變支氣管壁有大量炎細(xì)胞浸潤。管周可見炎性滲出物。肺泡壁普遍增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張。(3)RhIL-2100ku.kg—'組肺組織呈輕_—中度支氣管炎。表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞部分變性，壞死，腔內(nèi)可見少量脫落壞死的上皮及炎性滲出物，氣管壁有少量炎細(xì)胞浸潤，管周亦可見少量炎性滲出物。肺泡壁普遍增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張，充血。(4)RhlL-2200ku.kg一'組本組肺組織病理變化基本同RhIL-2100ku.kg—'組。(5)RhIL-2400ku.kg-'組本組肺組織病理變化基本同RhIL-2100ku.kg—'組。(6)頭孢拉定組本組肺組織呈輕度支氣管炎。表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞部分變性，壞死，腔內(nèi)可見少量脫落壞死的上皮及炎性滲出物，氣管壁有少量炎細(xì)胞浸潤，管周亦可見少量炎性滲出物。肺泡壁普遍增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張，充血。(7)鹽酸氨溴索組本組肺組織呈中度支氣管炎。表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞部分變性，壞死，腔內(nèi)可見脫落壞死的上皮及炎性滲出物，氣管壁有少量炎細(xì)胞浸潤，管周亦可見少量炎性滲出物。肺泡壁普遍增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張，充血。(8)氨茶堿組本組肺組織呈輕度支氣管炎。表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞部分變性，壞死，腔內(nèi)可見少量脫落壞死的上皮及炎性滲出物，氣管壁有少量炎細(xì)胞浸潤，管周亦可見少量炎性滲出物。肺泡壁普遍增厚。3.數(shù)理統(tǒng)計(1)t檢驗(yàn)在病理學(xué)表征方面，分別以"炎細(xì)胞浸潤"、"粘膜上皮變性、壞死"、"管周炎癥反應(yīng)"、"肺充血水腫"、"肺泡間隔增寬"等5個指標(biāo)，對各組進(jìn)行積分，即以"-"計為0分，以"+"計為l分，以"++"計為2分，以"+++"計為3分。并進(jìn)行t檢驗(yàn)。表2.各組動物病理學(xué)指標(biāo)的比較(x土s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*p<0.05vs模型組(陰性對照組)；**p<0.01vs模型組(陰性對照組)(1)在"炎細(xì)胞浸潤"方面，各給藥組與模型組之間均無顯著性差異(p>0.05)。說明重組人白介素-2、頭孢拉定、鹽酸氨溴索、氨茶堿均未見明顯減輕"炎細(xì)胞浸潤"病變。(2)在"粘膜上皮變性、壞死"方面，模型組與頭孢拉定組之間有顯著性差異(p<0.05),說明頭孢拉定可減輕"粘膜上皮變性、壞死，，病變。(3)在"管周炎癥反應(yīng)"方面，模型組與鹽酸氨溴索組、頭孢拉定組之間有極顯著性差異(p<0.01),模型組與氨茶堿組、RhIL-2400ku.kg—1組之間有顯著性差異(p<0.05)，說明鹽酸氨溴索、頭孢拉定、氨茶堿、RhIL-2400ku.kg—'可減輕"管周炎癥反應(yīng)"病變。(4)在"肺充血水腫"方面，模型組與RhIL-2lOOku.kg—、RhIL-2200ku.kg-'、RhIL-2400ku.kg—'組之間有極顯著性差異(p<0.01)，模型組與頭孢拉定組之間有顯著性差異(p<0.05)，說明RhIL-2lOOku.kg一1、RhIL-2200ku.kg—1、RhIL-2400ku.kg—'、頭孢拉定可減輕"肺充血水腫"病變。(5)在"肺泡間隔增寬"方面，模型組與RhIL-2lOOku.kg—'組、RhIL-2200ku.kg—1組、頭孢拉定組之間有極顯著性差異(pO.01)，模型組與RhIL-2400ku.kg—'、鹽酸氨溴索組之間有顯著性差異(p<0.05)，說明RhIL-2lOOku.kg—'、RhlL-2200ku.kg:RhIL-240()ku.kg—'、頭孢拉定、鹽酸氨溴索可減輕"肺泡間隔增寬"病變。五.結(jié)論RhlL-2注射液可以明顯降低大鼠支氣管炎的發(fā)生率，明顯改善其支氣管和肺部的病變。權(quán)利要求1.白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，其特征在于所述白介素2及其衍生物為人白介素-2及其衍生物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，其特征在于所述支氣管炎為急性支氣管炎或慢性支氣管炎。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，其特征在于所述藥物由治療有效量的白介素2或其衍生物和藥劑學(xué)可接受的輔料組成。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為注射給藥劑型或呼吸道給藥劑型。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的白介素2及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，其特征在于所述呼吸道給藥劑型為吸入劑、氣霧劑或粉霧劑。全文摘要本發(fā)明公開了白介素2(白介素-2)及其衍生物作為制備治療支氣管炎藥物的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明首次使用重組人白介素2治療支氣管炎，結(jié)果表明其可以明顯降低支氣管炎的發(fā)生率，明顯改善其支氣管和肺部的病變，療效確切。文檔編號A61K9/12GK101125200SQ20061008929公開日2008年2月20日申請日期2006年8月15日優(yōu)先權(quán)日2006年8月15日發(fā)明者朱家壁,玥湯,程度勝申請人:北京四環(huán)生物制藥有限公司;中國藥科大學(xué)