專利名稱：6-氧-咖啡酰-熊果甙、含其的巖茶提取物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種6-氧-咖啡酰-熊果式、含有6-氧-咖啡酰-熊果甙 的巖茶提取物及制備方法。
背景技術(shù)：
巖茶，又名樟葉越桔(變種)(Vaccinium dunalianum Wight var. dmmliamim),別名飯米果(云南昆明)、長尾越桔(中國高等植物 圖鑒)。常綠灌木，稀攀援灌木，高l-4米，偶成喬木，高3-17米， 通常地生，稀附生；幼枝紫褐色，有細(xì)棱，無毛。葉片革質(zhì)或厚革質(zhì)， 橢圓形、長圓形、長圓狀披針形或卵形，長4.5-13厘米，寬2-5厘米， 頂端尾狀漸尖，尾尖部分可達(dá)3厘米，基部楔形或鈍圓，全緣，表面 無毛，背面散生貼伏的具腺短毛，側(cè)脈3-4對，自葉片下部向上斜升， 連同中脈在兩面突起；葉柄長5-7亳米，通常無毛，有時(shí)密被短柔毛。 花序腋生，總狀，多花，長3-6厘米，無毛；苞片卵形，長7-10毫米, 早落；花梗長5-8毫米，稍粗壯；萼簡無毛，萼齒三角形，長l毫米 許；花冠淡綠帶紫紅色或淡紅色，寬鐘狀，長約6毫米，裂片三角形， 開展或上部反折，外面無毛，內(nèi)面被疏柔毛；雄蕊鮮黃色，與花冠近 等長，花絲扁平，長約l毫米，疏生短柔毛，藥室背部有開展的距， 藥管長為藥室的2倍。漿果球形，直徑4-12亳米，成熟時(shí)紫黑色，被 白粉?；ㄆ?-5月，果期9-12月。
從巖茶中提取的6-氧-咖啡酰-熊果甙，是一種有效的抗氧化劑， 對于肌膚美白、祛斑等有特別功效，可廣泛用于化妝品、食品。
經(jīng)過專利檢索，目前還沒有發(fā)現(xiàn)以巖茶為原料的提取物；也沒有 發(fā)現(xiàn)6-氧-咖啡酰-熊果甙的相關(guān)研究報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種6-氧-咖啡酰-熊果甙
(6-O-caffeoyl-Arbutin )、含有6-氧-咖啡酰-熊果式的巖茶提取物及制
備方法。
本發(fā)明一種6-氧-咖啡酰-熊果甙，它具有下列分子結(jié)構(gòu)<formula>formula see original document page 5</formula>
本發(fā)明提供了一種含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物，它以
巖茶為原料，經(jīng)提取溶媒提取、濃縮、分離純化、結(jié)晶和千燥制得的， 提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的重量含量為80%以上。
本發(fā)明所述的含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物為淡黃色， 粉末狀，味苦，易溶于水，熔點(diǎn)為20(TC。
本發(fā)明同時(shí)提供了 一種制備所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶 提取物的方法，它以巖茶為原料，包括提取溶媒提取、濃縮、分離純 化、結(jié)晶和干燥步驟。提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙重量含量為80% 以上。
本發(fā)明方法釆用巖茶的葉、芽、花、果實(shí)為原料，可以在提取前 先將原料進(jìn)行粉碎，巖茶經(jīng)粉碎后有利于活性成分的充分溶出。 本發(fā)明所述提取方法為加熱提取。
本發(fā)明加熱提取時(shí)提取溶媒為水或低碳醇，溶媒用量為原料重量 的3~15倍量，最佳為8倍量；溫度為50 10CTC, 7(TC最佳；提取 時(shí)間為溶媒沸騰后1~2小時(shí)，提取次數(shù)為2 3次。其中所述低碳醇 為甲醇、乙醇，所述低碳醇的重量濃度為1%~95%, 50%為最佳濃
度。
本發(fā)明所述巖茶提取后需要進(jìn)行回收低碳醇處理，溫度控制在60 "C以下，真空度控制在0.06Mpa以上，回收低碳醇的藥液與原料重量 比應(yīng)控制在1: 2~5之間。
本發(fā)明所述巖茶提取、回收低碳醇、離心(臥式離心機(jī):4800r/min) 后，濃縮液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀和濾液；用 水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶l。
本發(fā)明所述分離純化為柱層析分離純化。
本發(fā)明所述柱層析分離純化為
1) 液經(jīng)濃縮，濃縮至原來提取液體積的1/4-1/2、回收低碳醇、 離心(臥式離心機(jī)4800r/min)后，直接進(jìn)入大孔樹脂柱， 流速控制在0.5 ~ 1.5BV/hr左右；吸附比例為2:1，即兩份樹 月旨:一份原料；
2) 用去離子水洗柱至流出液清澈，約2h;
3) 用低碳醇洗柱至洗脫液澄清、透明，流速略慢于吸附的速
度；
4) 收集從大孔樹脂柱中的流出的澄清、透明，略帶醇味的洗 脫液，至流出液完全無醇味，收集洗脫液約是樹脂量的1~ 3倍左右；
5) 醇水洗脫液經(jīng)真空濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；
6) 濃縮液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀和濾 液；用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶 2
上述步驟中所述低碳醇為甲醇、乙醇，低濃度醇水溶液的濃度最 低為體積濃度30 % ,高濃度醇水溶液的濃度最高為體積濃度95 %;
本發(fā)明所述柱層析分離純化中使用的大孔樹脂為以聚苯乙烯為 骨架的材料；所述大孔樹脂型號為DIOI、 D130、 AB-8或HP-20。 本發(fā)明方法中得到的粗晶1、粗晶2經(jīng)合并后，加入8 10倍重
量的低碳醇，加熱待其溶解后，放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽 濾，得成品；其中所述低碳醇為甲醇、乙醇，低濃度醇水溶液的濃度 最低為體積濃度20% ，髙濃度醇水溶液的濃度最高為體積濃度40% ， 以30%為最佳濃度。
本發(fā)明同時(shí)提供了一種從巖茶提取的6-氧-咖啡酰-熊果甙，它為 淡黃色，粉末狀，味苦，易溶于水，經(jīng)HPLC (High Performance Liquid Chromatography)法高效液相色譜測定，提取物中6-氧-咖啡酰-熊果 甙重量含量為80%以上。
本發(fā)明通過核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(Mass Spectrum)確定了 6-氧-咖啡酰-熊果甙的分子結(jié)構(gòu)，如下所示
本發(fā)明從巖茶中提取的6-氧-咖啡酰-熊果甙，是一種有效的抗氧 化劑，對于肌膚美白、祛斑等有特別功效，可廣泛用于化妝品、食品。


圖1為本發(fā)明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的特征指紋圖譜。 圖2為本發(fā)明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的核磁共振(NMR) 結(jié)果。
圖3為本發(fā)明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的質(zhì)譜(Mass Spectrum)圖譜。
圖4、圖5為本發(fā)明提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的核磁共振 (NMR)圖譜。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l
如圖1-5所示，通過核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MassSpectrum) 確定了 6-氧-咖啡酰-熊果甙的分子結(jié)構(gòu)，如下所示
OH
實(shí)施例2
1) 前處理將揀選、剔除雜質(zhì)后的巖茶粉碎；
2) 提取將原料與去離子水按l: IO比例混合裝入提取罐，加熱 至沸騰后保持溫度2小時(shí)，收取第一次提取料液，第二次提取再加入 3倍量的去離子水，加熱沸騰保溫2小時(shí)，收取第二次提取料液。
3) 減壓濃縮將提取液導(dǎo)入濃縮器中進(jìn)行減壓濃縮，溫度控制 在60。C以下，真空度控制在0.06MPa以上，回收的藥液與原料重量比 控制在1: 3之間；
4) 離心將濃縮后的藥液通過離心機(jī)離心；
5) 離心后的藥液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀 和濾液；用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶1;
6) 濃縮、離心后的濾液直接進(jìn)D101樹脂柱；
7) 用水洗柱至流出液清澈；用30%乙醇洗柱至流出液無味；收 集從大孔樹脂柱中的流出液；
8) 洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；9) 濃縮液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀和濾液，; 用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶2;
10) 粗晶l和粗晶2經(jīng)合并后，加入8倍重量的50%體積濃度的 乙醇，加熱待其溶解后，放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得 成品。
實(shí)施例3
1) 前處理將揀選、剔除雜質(zhì)后的巖茶粉碎；
2) 提取將原料與50%體積濃度的乙醇按1: 8比例混合裝入提 取罐，加熱至沸騰后保持溫度l小時(shí)，收取第一次提取料液，第二次 提取再加入8倍量的50%體積濃度的乙醇，加熱沸騰保溫l小時(shí)，收 取第二次提取料液。
3) 減壓濃縮將提取液導(dǎo)入濃縮器中進(jìn)行減壓濃縮，溫度控制 在60。C以下，真空度控制在0.06MPa以上，回收乙醇的藥液與原料重 量比控制在1: 2之間；
4) 離心將濃縮后的藥液通過離心機(jī)離心；
5) 離心后的藥液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀 和濾液；用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶l;
6) 濃縮、離心后的提取液直接進(jìn)D101樹脂柱；
7) 用水洗柱至流出液清澈；用30%乙醇洗柱至流出液無味；收 集從大孔樹脂柱中的流出液；
8) 洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮至原料的一倍量左右；
9) 濃縮液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀和濾液，; 用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶2;
10) 粗晶1和粗晶2經(jīng)合并后，加入IO倍重量的30%體積濃度 的乙醇，加熱待其溶解后，放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾， 得成品。
權(quán)利要求
1、一種6-氧-咖啡酰-熊果甙，其特征在于它具有下列分子結(jié)構(gòu)
2、 一種含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物，其特征在于它 以巖茶為原料，經(jīng)提取溶媒提取、濃縮、分離純化、結(jié)晶和干燥制得 的，提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙的重量含量為80%以上。
3、 如權(quán)利要求2所述的含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物， 其特征在于所述提取物為淡黃色，粉末狀，味苦，易溶于水，熔點(diǎn) 為200。C。
4、 一種制備如權(quán)利要求2所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提 取物的方法，其特征在于它以巖茶為原料，包括提取溶媒提取、濃 縮、分離純化、結(jié)晶和干燥步驟。
5、 如權(quán)利要求4所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物的制 備方法，其特征在于所述提取方法為加熱提取，所述提取溶媒為水 或低碳醇，溶媒用量為原料重量的3~15倍量；提取溫度為50-100 °C;提取時(shí)間為溶媒沸騰后1~2小時(shí)，提取次數(shù)為2-3次。
6、 如權(quán)利要求5所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物的制 備方法，其特征在于所述低碳醇為甲醇或乙醇；所述低碳醇的重量 濃度為1% ~95%。
7 、如權(quán)利要求6所述含有6-氧-咖啡酰-熊果式的巖茶提取物的制 備方法，其特征在于所述濃縮步驟為將提取液導(dǎo)入濃縮器中進(jìn)行減 壓濃縮，溫度控制在6(TC以下，真空度控制在0.06MPa以上，回收的 藥液與原料重量比控制在1: 3之間；將濃縮后的藥液通過離心機(jī)離 心；離心后的藥液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀和 濾液；用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶l;
8、 如權(quán)利要求7所述含有6-氧-咖啡酰-熊果式的巖茶提取物的制 備方法，其特征在于所述分離純化為柱層析分離純化。
9、 如權(quán)利要求8所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物的制 備方法，其特征在于所述柱層析分離純化步驟為1) 濾液經(jīng)濃縮，濃縮至原來提取液體積的1/4-1/2、回收低碳 醇、離心后，直接進(jìn)入大孔樹脂柱，流速控制在0.5 ~ 1.5BV/hr左右；吸附比例為2:1，即兩份樹脂:一份原料；2) 用去離子水洗柱至流出液清澈，約2h;3) 用低碳醇洗柱至洗脫液澄清、透明，流速略慢于吸附的速 度；4) 收集從大孔樹脂柱中的流出的澄清、透明，略帶醇味的洗 脫液，至流出液完全無醇味，收集洗脫液約是樹脂量的1~ 3倍左右；5) 醇水洗脫液經(jīng)真空濃縮，濃縮至原料的一倍量左右； 濃縮液放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶，抽濾，得沉淀和濾液；用水洗至沉淀顏色為淡黃色，將沉淀真空干燥，得粗晶2;所用的大孔樹脂為以聚苯乙烯為骨架的材料，大孔樹脂型號為: DlOl、 D130、 AB-8或HP-20。
10、 如權(quán)利要求9所述含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物的 制備方法，其特征在于將粗晶1、粗晶2經(jīng)合并后，加入8 10倍 重量的低碳醇，加熱待其溶解后，放置24小時(shí)，析出大量的結(jié)晶， 抽濾，得成品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種6-氧-咖啡酰-熊果甙(6-O-caffeoyl-Arbutin)、含有6-氧-咖啡酰-熊果甙的巖茶提取物及制備方法。以巖茶為原料，經(jīng)提取溶媒提取、濃縮、分離純化、結(jié)晶、干燥提取6-氧-咖啡酰-熊果甙，它以水或低碳醇作為溶媒，加熱提取，采用柱層析分離純化、重結(jié)晶，得到的6-氧-咖啡酰-熊果甙為淡黃色，粉末狀，味苦，易溶于水，熔點(diǎn)為200℃，提取物中6-氧-咖啡酰-熊果甙重量含量經(jīng)高效液相測定，為80％以上。
文檔編號A61P39/00GK101104628SQ20061009109
公開日2008年1月16日 申請日期2006年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月13日
發(fā)明者孫步詳, 宋云飛, 梁遠(yuǎn)盛, 湯凌志, 興 韋 申請人:桂林萊茵生物科技股份有限公司;宋云飛