專利名稱：龍膽苦苷在抗病毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在抗病毒藥物中的新用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
病毒性心肌炎(viralmyocarditis，VMC)是由病毒感染引起的心臟病，已成為兒童和青少年猝死的一個重要原因。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)全球病毒病監(jiān)測研究報道顯示VMC在新生兒、兒童中的發(fā)病率為360/10萬，死亡率為8％。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示約45％～60％心肌炎與近期或復(fù)發(fā)的柯薩奇病毒(CVB3)感染有關(guān)。CVB3可引起輕微的上呼吸道感染以及無菌性腦炎；在小兒中也可引起下呼吸道感染，但癥狀較輕微。CVB3可黏附心肌細胞，與受體結(jié)合，穿透細胞膜，于細胞內(nèi)復(fù)制，直接損傷細胞或間接的免疫反應(yīng)引起VMC?？梢奦MC是一種嚴重危害人民健康且不易治療的疾病。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對本病的治療沒有特效的抗CVB3藥物，中藥如黃芪和苦參等制劑經(jīng)臨床應(yīng)用證明，對VMC雖有一定治療作用，但成本較高，成分較復(fù)雜，療效并不令人滿意。因此，尋找有效抗病毒治療VMC的藥物成為當(dāng)代醫(yī)藥學(xué)的迫切需要。
漢坦病毒感染可引起腎綜合征出血熱(HFRS)及漢坦病毒肺綜合征(HPS)等急性病毒性傳染病，流行于世界上很多國家和地區(qū)。HFRS是一類以發(fā)熱、出血和腎臟損害為主要臨床特征的疾病，全世界90％以上的HFRS病例發(fā)生在我國，疫情非常嚴重，年發(fā)病率超過十萬人，且以青壯年居多，死亡率約5-10％，已成為我國目前死亡人數(shù)最多的急性病毒性傳染病之一。漢坦病毒(HTNV)隸屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬，在我國發(fā)生的HFRS主要由該病毒引起；此外，HTNV還可被用作潛在的生物戰(zhàn)劑，已被國際社會列入《禁止生物武器公約》，因此對HTNV的研究具有十分重要的意義。對HFRS的治療，迄今還沒有特異、有效的治療藥物，臨床上主要是采取血液透析等方法進行對癥處理，且費用昂貴。
龍膽苦苷是從中藥秦艽中提取的裂環(huán)環(huán)烯醚萜化合物，研究表明，龍膽總苷(含龍膽苦苷在50％以上)可用于制備促進胃腸消化功能藥物(中國專利97108434.3)，龍膽苦苷還可用于制備抑制乙型肝炎病毒藥物(中國專利200410073488.7)，用于制備保肝利膽抗炎藥物(中國專利03114558.2)。目前已知龍膽苦苷具有抗乙肝病毒的藥理學(xué)作用，但其抗CVB3和HTNV病毒作用未見研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在抗病毒藥物中的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
本發(fā)明涉及龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在抗病毒性心肌炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在抗?jié)h坦病毒感染所引起腎綜合征出血熱(HFRS)及漢坦病毒肺綜合征(HPS)藥物中的應(yīng)用。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是從秦艽中制備出龍膽總苷(含龍膽苦苷50％以上)，再精制成龍膽苦苷，利用其抗病毒活性，可應(yīng)用于制備治療VMC以及漢坦病毒感染所引起的HFRS和HPS的藥物。
龍膽苦苷的制備工藝如下取秦艽，用5-20倍量水煎煮三次，每次15分鐘，合并煎煮液離心取上清液；水煎液上D101大孔樹脂柱，每克樹脂上0.8mL藥液2～6倍量的水洗脫，棄去水洗液，大孔樹脂再用3～10倍30％的乙醇洗脫，回收洗脫液中的乙醇，減壓抽干，得殘留物，即龍膽總苷(含龍膽苦苷50％以上)，將龍膽總苷水解后再按上述方法上大孔樹脂，30％的乙醇洗脫，回收洗脫液后的殘留物溶于2～5倍量的95％乙醇中，過濾，回收乙醇并抽干，再用95％乙醇溶解，再抽干，最后溶于濃乙醇中，放置，析出結(jié)晶，過濾，得龍膽苦苷純品。
有效成分用龍膽苦苷制備抗病毒藥物以常規(guī)藥用制劑的形式來使用；所述的常規(guī)藥物用制劑含作為活性成分在制劑中與藥學(xué)上可接受的載體如適宜于腸胃內(nèi)和腸胃外給藥的有機或無機的固體或液體賦形劑混合，該藥用制劑可以是固體形式如片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑，也可以是液體形式如注射劑、乳劑等。
上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤濕劑和其它常用的添加劑，如乳糖、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、橄欖油、可可脂、乙二醇、抗壞血酸、甘露醇等。
上述的制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。
體外抗病毒實驗證實龍膽苦苷具有抗CVB3和HFRS的活性，因此，龍膽苦苷將可用于制備治療由這兩種病毒引起的病毒性心肌炎和腎綜合征出血熱等病毒性疾病的藥物。
為更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面用龍膽苦苷的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
龍膽苦苷的的體外抗病毒實驗實驗一、考察龍膽苦苷對CVB3的直接滅活作用在24孔板上，加0.5×104/mL濃度的心肌細胞1mL/孔，培養(yǎng)24h，除正常組每孔加100TCID的CVB31mL，孵育1h后，棄去上清液，PBS沖洗3次，加入龍膽苦苷，藥物終濃度為1、0.1、0.01mmoL/mL，陽性對照組加入病毒唑1mmoL/mL，每組四孔，加細胞維持液，5％CO2孵箱培養(yǎng)72h，逐日觀察細胞病變效應(yīng)(CPE)。最后用MTT法檢測細胞存活率。
實驗結(jié)果感染病毒后，病毒組所致的CPE特征為細胞皺縮、變圓、脫落、碎裂(

圖1所示)。病毒唑組細胞皺縮、脫落，無節(jié)律性搏動(圖5所示)；龍膽苦苷治療組細胞仍能夠呈節(jié)律性搏動，部分細胞皺縮，對CVB3的抑制率與其濃度呈正相關(guān)(圖2-4所示)。結(jié)果顯示龍膽苦苷對CVB3具有直接滅活作用。量效關(guān)系見表1。
表1龍膽苦苷對CVB3的抑制作用

實驗二、考察龍膽苦苷對HTNV的直接滅活作用在24孔板上，加0.5×104/mL濃度的Vero細胞1mL/孔，培養(yǎng)24h，除正常組每孔加100TCID的HTNV1mL，孵育1h后，棄去上清液，PBS沖洗3次，加入龍膽苦苷，藥物終濃度為1、0.1、0.01mmoL/mL，陽性對照組加入病毒唑1mmoL/mL，每組四孔，加細胞維持液，5％CO2孵箱培養(yǎng)72h，逐日觀察細胞病變效應(yīng)(CPE)。最后用ElASA法檢測病毒滴度。
實驗結(jié)果感染病毒后，病毒組所致的CPE特征為部分細胞開始老化并有卷縮變形，然后部分脫落。病毒唑組細胞皺縮、脫落；龍膽苦苷治療組細胞部分細胞皺縮，但無脫落。對HTNV的抑制率與其濃度呈正相關(guān)。結(jié)果顯示龍膽苦苷對HTNV具有直接滅活作用。
發(fā)明的有益效果龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷具有抗CVB3和HTNV病毒的藥理活性，以龍膽苦苷為藥用原料制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑、糖漿劑，可用于治療病毒性心肌炎及腎綜合征出血熱等疾病。
具體實施例方式
實施例1藥用制劑龍膽苦苷制備成片劑，以生產(chǎn)片劑產(chǎn)品1000片為例所用原料和輔料及其重量配比如下龍膽苦苷200g淀粉100g
或龍膽總苷(含龍膽苦苷約70％)285g淀粉 100g其制備工藝按制劑學(xué)片劑的常規(guī)工藝進行，每片重0.3g，每片含龍膽苦苷200mg。用法用量口服，每次1片，一日1次，小兒酌減，30天為一個療程。
實施例2藥用制劑龍膽苦苷制備成膠囊劑，以生產(chǎn)膠囊劑產(chǎn)品1000粒為例所用原料和輔料及其重量配比如下龍膽苦苷 200g淀粉 100g或龍膽總苷(含龍膽苦苷約70％)285g淀粉 100g其制備工藝按制劑學(xué)膠囊劑的常規(guī)工藝進行，每粒重0.3g，每粒含龍膽苦苷200mg。用法用量口服，每次1片，一日1次，小兒酌減，30天為一個療程。
實施例3藥用制劑龍膽苦苷制備成顆粒劑，以生產(chǎn)顆粒劑產(chǎn)品1000g為例所用原料和輔料及其重量配比如下龍膽苦苷 200g蔗糖 400g糊精 400g或龍膽總苷(含龍膽苦苷約70％)285g蔗糖 400g糊精 400g其制備工藝按制劑學(xué)顆粒劑的常規(guī)工藝進行，每袋重1g，每袋含龍膽苦苷200mg。用法用量口服，每次1袋，一日1次，小兒酌減，30天為一個療程。
實施例4藥用制劑龍膽苦苷制備成糖漿劑，以生產(chǎn)糖漿劑產(chǎn)品1000mL為例所用原料和輔料及其重量配比如下龍膽苦苷 200g蔗糖 600g蒸餾水加至1000mL或龍膽總苷(含龍膽苦苷約70％)285g蔗糖 600g蒸餾水加至1000mL其制備工藝按制劑學(xué)顆粒劑的常規(guī)工藝進行，每瓶10mL，1mL含龍膽苦苷20mg。用法用量口服，每次1瓶，一日1次，小兒酌減，30天為一個療程。
實施例5藥用制劑龍膽苦苷制備成注射劑，以生產(chǎn)注射劑產(chǎn)品1000支為例所用原料和輔料及其重量配比如下龍膽苦苷 200g注射用甘露醇 20g或龍膽總苷(含龍膽苦苷約70％)285g注射用甘露醇 20g其制備工藝按制劑學(xué)注射劑的常規(guī)工藝進行，每支重0.22g，每支含龍膽苦苷200mg。用法用量溶解在250mL葡萄糖注射液中，一日1次，小兒酌減，30天為一個療程。
權(quán)利要求
1.龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在制備治療抗柯薩奇病毒藥物中的用途。
2.龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在制備治療抗?jié)h坦病毒藥物中的用途。
3.龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在制備治療病毒性心肌炎藥物中的用途。
4.龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在制備治療腎綜合征出血熱藥物中的用途。
5.龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在制備治療漢坦病毒肺綜合征藥物中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意之一所述用途，其特征在于制備的藥物采用片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑、注射劑或乳劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了龍膽苦苷或含龍膽苦苷50％以上的龍膽總苷在抗病毒藥物中的新用途。體外抗病毒實驗證實龍膽苦苷具有抗CVB
文檔編號A61K36/515GK1965853SQ20061010485
公開日2007年5月23日 申請日期2006年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月6日
發(fā)明者孫曉莉, 孫文基, 王四旺, 丁媛媛, 王海波 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)