專(zhuān)利名稱：注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體的制備方法，具體涉及一種注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
鹽酸伊立替康是喜樹(shù)堿的半合成衍生物。喜樹(shù)堿可特異性地與拓?fù)洚悩?gòu)酶I結(jié)合，后者誘導(dǎo)可逆性單鏈斷裂，從而使DNA雙鏈結(jié)構(gòu)解旋；伊立替康代謝物SN-38可與拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA復(fù)合物結(jié)合，從而阻止斷裂單鏈的再連接。現(xiàn)有研究提示，伊立替康的細(xì)胞毒作用歸因于DNA合成過(guò)程中，復(fù)制酶與拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA一SN-38三聯(lián)復(fù)合物相互作用，從而引起DNA雙鏈斷裂。哺乳動(dòng)物細(xì)胞不能有效地修復(fù)這種DNA雙鏈斷裂。由此達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞的目的。
伊立替康可以溶于水，但是其代謝物鹽酸伊立替康才為其活性成分，而在代謝過(guò)程中可以產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，比如遲發(fā)性腹瀉，惡心，嘔吐，并且可以導(dǎo)致中性粒細(xì)胞減少，呼吸困難、肌肉收縮、痙攣及感覺(jué)異常等，這些不良反應(yīng)嚴(yán)重的影響了臨床使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服背景技術(shù)的不足，而提供一種提高鹽酸伊立替康療效并降低其毒副作用的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該方法通過(guò)將脂質(zhì)混合物溶解于有機(jī)溶劑中，至溶液澄清透明，得脂質(zhì)溶液，脂質(zhì)溶液與緩沖液按照1∶1～8體積比在梯度泵中混合，混合后的空白脂質(zhì)體通過(guò)均質(zhì)機(jī)均質(zhì)或鋪有聚碳酸脂膜的擠壓器擠壓統(tǒng)一粒徑，流出的脂質(zhì)體混合溶液立即通過(guò)超濾器超濾，除去有機(jī)溶劑，中間不斷補(bǔ)充緩沖液，得到空白脂質(zhì)體，加入鹽酸伊立替康溶液，并用脂質(zhì)體pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至堿性，制成載藥脂質(zhì)體；或者將脂質(zhì)混合物及鹽酸伊立替康溶解于有機(jī)溶劑中，通過(guò)噴霧干燥或真空干燥除去有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)成膜，通過(guò)加入含鹽酸伊立替康的水合溶液水合形成載藥脂質(zhì)體。
所述鹽酸伊立替康用量與空白脂質(zhì)體摩爾數(shù)比為0.001～1∶1；所述有機(jī)溶劑為氯仿、甲醇、乙醇、叔丁醇、異丙醇和正丁醇中的單一溶劑，或其中的兩種或兩種以上溶劑制成的混合溶劑；所述緩沖液為pH值在3.3～8之間的檸檬酸緩沖液，或pH值在3.3～13之間的酒石酸緩沖液，或其它pH值在2.5～10之間的有機(jī)酸緩沖液；所述聚碳酸脂膜的孔徑為20～400nm，層數(shù)1～10層；所述脂質(zhì)混合物中含有以下摩爾百分比的原料磷脂酰膽堿20～80％；鞘磷脂0～30％；心肌磷脂0～30％；膽固醇20～80％；聚乙二醇衍生物0～10％；所述磷脂酰膽堿是蛋黃磷脂酰膽堿、大豆磷脂酰膽堿或氫化大豆磷脂酰膽堿；聚乙二醇衍生物為HSPE-S-mPEG2000或DSPE-PEG2000；所述脂質(zhì)體pH調(diào)節(jié)劑是Na2CO3溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、NaHCO3溶液或Ca(OH)2溶液；所述調(diào)節(jié)pH值至堿性指的pH范圍為7.5～3.5。
梯度泵用于按比例混合脂質(zhì)溶液與緩沖液制備空白脂質(zhì)體，擠壓器用于控制空白脂質(zhì)體的粒徑，超濾器用于除去空白脂質(zhì)體中的有機(jī)溶劑并將脂質(zhì)體濃縮到合適的濃度。
本發(fā)明通過(guò)現(xiàn)代脂質(zhì)體技術(shù)制備的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體是由磷脂酰膽堿、鞘磷脂、膽固醇和聚乙二醇衍生物等脂質(zhì)與鹽酸伊立替康形成的脂質(zhì)復(fù)合物，該復(fù)合物可以改變伊立替康在活體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，從而改變其作用效果及毒性特征。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明所采用的方法將鹽酸伊立替康包封在脂質(zhì)體小囊內(nèi)，避免了鹽酸伊立替康在代謝過(guò)程中產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，提高了鹽酸伊立替康的療效并降低了其毒副作用；根據(jù)本工藝生產(chǎn)的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體，粒徑在50～200nm之間，包封率達(dá)95％以上，性質(zhì)穩(wěn)定，療效確切，使用安全可靠，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)室小試(1)薄膜法制備鹽酸伊立替康脂質(zhì)體處方蛋黃磷脂酰膽堿2.12g(2.789473684mmol)心肌磷脂 12.00g(15mmol)膽固醇5.88g(15.23316062mmol)氯仿 13.00mL200mL制備方法將蛋黃磷脂酰膽堿、心肌磷脂、膽固醇和鹽酸伊立替康溶于有機(jī)溶劑氯仿中至溶液澄清透明，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空除去有機(jī)溶劑氯仿并使脂質(zhì)成膜，鹽酸伊立替康1.5g的蔗糖溶液200mL水合，分別過(guò)400nm、200nm、100nm膜統(tǒng)一粒徑，制得載藥脂質(zhì)體，凍干貯存于2～4℃。
實(shí)施例2pH梯度法制備(1)空白脂質(zhì)體的制備處方磷脂酰膽堿 10.605g(13.95394737mmol)膽固醇 4.395g(11.38601036mmol)乙醇24.75mL叔丁醇 24.75mL檸檬酸緩沖液適量150mL制備方法將磷脂酰膽堿和膽固醇溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質(zhì)溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質(zhì)體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質(zhì)體通過(guò)擠壓器擠壓統(tǒng)一粒徑，流出的脂質(zhì)體混合溶液立即通過(guò)超濾器超濾，中間不斷補(bǔ)充檸檬酸緩沖液(pH＝4.0)750mL，然后濃縮脂質(zhì)體至目標(biāo)濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質(zhì)體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉10.5g，加注射用水225mL溶解，過(guò)濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將6g鹽酸伊立替康溶于300mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質(zhì)體中，加入(2)步制備的堿溶液并將pH值調(diào)至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，分裝，即得。
實(shí)施例3放大生產(chǎn)工藝(1)空白脂質(zhì)體的制備處方心肌磷脂211.8g(278.6842105mmol)膽固醇 88.2g(228.4974093mmol)乙醇495mL叔丁醇 495mL檸檬酸緩沖液3000mL3000mL制備方法將心肌磷脂和膽固醇溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質(zhì)溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質(zhì)體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜?；旌虾蟮那绑w脂質(zhì)體通過(guò)擠壓器擠壓統(tǒng)一粒徑，流出的脂質(zhì)體混合溶液立即通過(guò)超濾器超濾，中間不斷補(bǔ)充檸檬酸緩沖液(pH＝4.0)15L，然后濃縮脂質(zhì)體至目標(biāo)濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質(zhì)體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉84g，加注射用水1800mL溶解，過(guò)濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將24g鹽酸伊立替康溶于1200mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質(zhì)體中，加入(2)步制備的堿溶液將pH值調(diào)至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，加支撐劑蔗糖，分裝，凍干，即得。
實(shí)施例4pH梯度法制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體
(1)空白脂質(zhì)體的制備處方磷脂酰膽堿8.773g(11.543421.5mmol)膽固醇3.232g(8.373056995mmol)HSPE-S-mPEG20002.995g(1.047202797mmol)乙醇 24.75mL叔丁醇24.75mL0.1mol/L的NaOH溶液適量150mL制備方法將磷脂酰膽堿、膽固醇和HSPE-S-mPEG2000溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質(zhì)溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質(zhì)體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質(zhì)體通過(guò)擠壓器擠壓統(tǒng)一粒徑，流出的脂質(zhì)體混合溶液立即通過(guò)超濾器超濾，中間不斷補(bǔ)充檸檬酸緩沖液750mL，然后濃縮脂質(zhì)體至目標(biāo)濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質(zhì)體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉10.5g，加注射用水225mL溶解，過(guò)濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將6g鹽酸伊立替康溶于600mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質(zhì)體中，加入(2)步制備的堿溶液將pH值調(diào)至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，分裝，即得。
實(shí)施例5pH梯度法制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(1)空白脂質(zhì)體的制備處方磷脂酰膽堿 10.605g(13.95394737mmol)膽固醇 3.232g(8.373056995mmol)DSPE-PEG20002.995g(1.047202797mmol)乙醇 24.75mL
叔丁醇 24.75mL0.1mol/L的MaOH溶液 適量150mL制備方法將磷脂酰膽堿、膽固醇和DSPE-PEG2000溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質(zhì)溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質(zhì)體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質(zhì)體通過(guò)擠壓器擠壓統(tǒng)一粒徑，流出的脂質(zhì)體混合溶液立即通過(guò)超濾器超濾，中間不斷補(bǔ)充檸檬酸緩沖液750mL，然后濃縮脂質(zhì)體至目標(biāo)濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質(zhì)體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉10.5g，加注射用水225mL溶解，過(guò)濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將6g鹽酸伊立替康溶于600mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質(zhì)體中，加入(2)步制備的堿溶液將pH值調(diào)至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，分裝，即得。
上述實(shí)施例的原輔料配比、有機(jī)溶劑種類(lèi)及比例、工藝過(guò)程等沒(méi)有一一列舉，經(jīng)申請(qǐng)人的實(shí)踐證明所提供的制作工藝、原輔料及其配比、有機(jī)溶劑選擇及配比、緩沖液選擇及配比等均包含在權(quán)利要求中。
根據(jù)本工藝生產(chǎn)的鹽酸伊立替康脂質(zhì)體，包封率達(dá)95％以上，性質(zhì)穩(wěn)定，療效確切，使用安全可靠，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
名詞解釋HSPE-PEG2000表示其平均分子量為2000的聚乙二醇-氫化大豆磷脂酰乙醇胺；DSPE-PEG2000表示其平均分子量為2000的聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及贰?br> 權(quán)利要求
1.一種注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該方法通過(guò)將脂質(zhì)混合物溶解于有機(jī)溶劑中，至溶液澄清透明，得脂質(zhì)溶液，脂質(zhì)溶液與緩沖液按照1∶1～8體積比在梯度泵中混合，混合后的空白脂質(zhì)體通過(guò)均質(zhì)機(jī)均質(zhì)或鋪有聚碳酸脂膜的擠壓器擠壓統(tǒng)一粒徑，流出的脂質(zhì)體混合溶液立即通過(guò)超濾器超濾，除去有機(jī)溶劑，中間不斷補(bǔ)充緩沖液，得到空白脂質(zhì)體，加入鹽酸伊立替康溶液，并用脂質(zhì)體pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至堿性，制成載藥脂質(zhì)體；或者將脂質(zhì)混合物及鹽酸伊立替康溶解于有機(jī)溶劑中，通過(guò)噴霧干燥或真空干燥除去有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)成膜，通過(guò)加入含鹽酸伊立替康的水合溶液水合形成載藥脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述鹽酸伊立替康用量與空白脂質(zhì)體摩爾數(shù)比為0.001～1∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑為氯仿、甲醇、乙醇、叔丁醇、異丙醇和正丁醇中的單一溶劑，或其中的兩種或兩種以上溶劑制成的混合溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述緩沖液為pH值在3.3～8之間的檸檬酸緩沖液，或pH值在3.3～13之間的酒石酸緩沖液，或其它pH值在2.5～10之間的有機(jī)酸緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述聚碳酸脂膜的孔徑為20～400nm，層數(shù)1～10層。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述脂質(zhì)混合物中含有以下摩爾百分比的原料磷脂酰膽堿20～80％；鞘磷脂0～30％；心肌磷脂0～60％；膽固醇20～80％；聚乙二醇衍生物0～10％。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述聚乙二醇衍生物為HSPE-S-mPEG2000或DSPE-PEG2000。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述磷脂酰膽堿是蛋黃磷脂酰膽堿、大豆磷脂酰膽堿或氫化大豆磷脂酰膽堿。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述脂質(zhì)體pH調(diào)節(jié)劑是Na2CO3溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、NaHCO3溶液或Ca(OH)2溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述調(diào)節(jié)pH值至堿性指的pH范圍為7.5～3.5。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的制備方法，該方法通過(guò)將一定摩爾比的脂質(zhì)混合物溶解于有機(jī)溶劑中，脂質(zhì)溶液與緩沖液按照一定體積比混合，通過(guò)聚碳酸脂膜擠壓統(tǒng)一粒徑，并通過(guò)超濾除去有機(jī)溶劑，得到空白脂質(zhì)體，加入鹽酸伊立替康溶液，并用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH值至堿性，制成載藥脂質(zhì)體；或者將一定摩爾比的磷脂、膽固醇等脂質(zhì)及鹽酸伊立替康溶解于有機(jī)溶劑中，通過(guò)噴霧干燥、真空干燥或其他方法除去有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)成膜，通過(guò)加入含藥物的水合溶液水合形成載藥脂質(zhì)體。根據(jù)本發(fā)明生產(chǎn)的注射用鹽酸伊立替康脂質(zhì)體，粒徑在50～200nm之間，包封率達(dá)95％以上，性質(zhì)穩(wěn)定，療效確切，使用安全可靠，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/4738GK1994279SQ20061010537
公開(kāi)日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月31日
發(fā)明者佐建鋒, 王九成, 黃馨惠, 傅經(jīng)國(guó), 魏春龍, 胡忍樂(lè) 申請(qǐng)人:西安力邦醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司