專利名稱：川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
中藥川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMPz)，化學(xué)名為四甲基吡嗪，是從中藥川芎的總生物堿中分離得到的一種有效活性生物堿，化學(xué)結(jié)構(gòu)為1-(5-羥甲基-2-呋喃基)-9H-吡啶并[3，4-b]吲哚。我國在20世紀(jì)70年代初，由北京制藥工業(yè)研究所從川芎提取物中分離出單體川芎嗪，現(xiàn)在已由人工合成。祖國傳統(tǒng)醫(yī)藥認(rèn)為它辛散溫通，既可活血又可行氣，適用于氣滯血淤的病癥。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究則認(rèn)為川芎嗪具有擴(kuò)張小動脈和小靜脈，抗血小板聚集，改變血液流變性，改善微循環(huán)障礙，降低毛細(xì)血管通透性，增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧能力，清除羥自由基，抗脂質(zhì)氧化等作用。
由于川芎嗪具有擴(kuò)張微血管，抗血小板聚集，改善微循環(huán)障礙和抗氧化損傷等作用，現(xiàn)在已被廣泛用于治療心血管疾病和腦缺血性疾病等，也有用川芎嗪來治療非增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變的臨床初步研究，如竇敬芳等(竇敬芳，翁孝剛。川芎嗪治療非增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變臨床研究。眼科新進(jìn)展，1998，18(3)138～140.)報道了36例非增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病患者，川芎嗪治療后取得了較為滿意的療效，總有效率為68.69％。然而，非增殖期糖尿病不產(chǎn)生新生血管，不屬于新生血管性視網(wǎng)膜疾病，其與新生血管性視網(wǎng)膜疾病的治療機(jī)理、治療手段存在很大的差異。另外，在體內(nèi)研究方面，迄今為止尚未見到川芎嗪在新生血管性視網(wǎng)膜疾病方面的實(shí)驗(yàn)研究，較多的研究集中在缺血再灌注損傷模型等方面。
新生血管性視網(wǎng)膜疾病是一類常見的致盲眼病，包括增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變、年齡相關(guān)性黃斑變性、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜血管炎等。這類疾病的共同特點(diǎn)是新生血管生成，使疾病的治療變得非常棘手，嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量，給患者家庭及社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。
目前的研究認(rèn)為，新生血管性視網(wǎng)膜疾病是由于各種原因?qū)е聶C(jī)體內(nèi)新生血管生成的刺激因子與抑制因子之間失去平衡而造成的。血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growthfactor，VEGF)作為最主要的新生血管生成刺激因子，在其中發(fā)揮了重要的作用。缺氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管形成(OIR)的動物模型是國際同行公認(rèn)的成熟的新生血管性視網(wǎng)膜疾病的動物模型，并且已經(jīng)被證實(shí)是由于在缺氧期眼內(nèi)分泌過多的VEGF所引起的。
關(guān)于川芎嗪對視網(wǎng)膜病變的研究既往已有一些報道，如陳瑞華等(陳瑞華，陳少強(qiáng)，陳振彬等，糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)改變及藥物治療效果。福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2001，35119)將川芎嗪用于治療STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠，川芎嗪100mg/Kg灌胃治療12周和20周后，微血管瘤形成明顯減少，視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)改善，大鼠視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)明顯減弱。但是，由于STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜不產(chǎn)生新生血管，該模型僅模擬了部分背景期糖尿病視網(wǎng)膜病變而不能代表增殖期改變。另外，目前雖有報道川芎嗪對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的作用(徐曉玉，楊麗蓉，川芎嗪對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304增殖的影響，中草藥，2004，35(10)1150-1152)，但由于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞有很大的差異，尤其是后者具備內(nèi)屏障的功能而前者無，川芎嗪對視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用直接關(guān)系到該藥治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的機(jī)理及其效應(yīng)，因此有必要進(jìn)行更進(jìn)一步的研究。
綜上所述，至今為止采用川芎嗪制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物未見任何報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是提供川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用。
所述新生血管性視網(wǎng)膜疾病為增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變或年齡相關(guān)性黃斑變性或視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞或早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變或視網(wǎng)膜血管炎。
本發(fā)明研究川芎嗪對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響，實(shí)驗(yàn)表明川芎嗪對正常和缺氧條件下培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有抑制作用，并闡明該抑制作用與川芎嗪促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川芎嗪對OIR模型中新生血管的形成有明顯的抑制作用，明顯降低了病變視網(wǎng)膜中VEGF的表達(dá)，能有效減輕視網(wǎng)膜的病變程度。從而為川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用提供了有力的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病提供了一種新的可行的治療方案。


圖1是ELISA P14小鼠視網(wǎng)膜檢測VEGF蛋白表達(dá)的示意圖，其中，1為對照組；2為實(shí)驗(yàn)組1(川芎嗪100mg/Kg)；3為實(shí)驗(yàn)組2(川芎嗪200mg/Kg)；圖2是RT-PCR檢測P14小鼠視網(wǎng)膜VEGF mRNA表達(dá)的示意圖，其中，1為對照組；2為實(shí)驗(yàn)組1(川芎嗪100mg/Kg)；3為實(shí)驗(yàn)組2(川芎嗪200mg/Kg)；圖3是P17小鼠行熒光素心臟灌注視網(wǎng)膜鋪片觀察視網(wǎng)膜新生血管，其中，圖3A中左上為正常P17小鼠；右上為對照組；左下為實(shí)驗(yàn)組1(川芎嗪100mg/Kg)；右下為實(shí)驗(yàn)組2(川芎嗪200mg/Kg)；圖4是P17小鼠眼球行冰凍切片和GSA染色檢測視網(wǎng)膜新生血管，其中圖4A中，左上為正常小鼠視網(wǎng)膜；右上為對照組；左下為實(shí)驗(yàn)組1(川芎嗪100mg/Kg)；右下為實(shí)驗(yàn)組2(川芎嗪200mg/Kg)；圖5是體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞并用VIII因子進(jìn)行細(xì)胞鑒定的結(jié)果示意圖；圖6是MTT檢測川芎嗪干預(yù)后第2、4、6天細(xì)胞增殖情況，其中，圖6A是正常細(xì)胞組凋亡結(jié)果；圖6B是缺氧細(xì)胞組凋亡結(jié)果示意圖；圖7是川芎嗪干預(yù)后48小時檢測細(xì)胞凋亡情況，其中，圖7A是正常細(xì)胞組凋亡結(jié)果；圖7B是缺氧細(xì)胞組凋亡結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式
藥品與主要試劑鹽酸川芎嗪注射液，無錫市第七制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格40mg/2ml，批號050112；MTT，DMSO。所有數(shù)據(jù)以x±s表示，輸入SAS統(tǒng)計軟件，采用方差分析方法進(jìn)行比較，并作多樣本均數(shù)間兩兩比較的q檢驗(yàn)，兩因素相關(guān)關(guān)系采用相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有顯著性。
實(shí)施例1體內(nèi)實(shí)驗(yàn)1.氧誘導(dǎo)的血管增殖性視網(wǎng)膜病變小鼠模型的制備及給藥將出生后第7天(P7)的C57/BL小鼠與母鼠放入含氧體積分?jǐn)?shù)為75％±3％的飼養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)5天，飼養(yǎng)溫度維持在(23±2)℃，每天照明12h，用自動氧氣分析儀監(jiān)測并調(diào)控箱內(nèi)氧氣含量。P12放回正?？諝庵酗曫B(yǎng)，這時小鼠視網(wǎng)膜處于相對缺氧狀態(tài)，P17時視網(wǎng)膜內(nèi)有大量新生血管形成。P12-P16每天一次給小鼠腹腔注射藥物，分為三組，實(shí)驗(yàn)組1為腹腔注射川芎嗪100mg/Kg，實(shí)驗(yàn)組2為腹腔注射川芎嗪200mg/Kg，對照組為腹腔注射等量生理鹽水。
2.ELISA檢測P14小鼠視網(wǎng)膜VEGF蛋白的表達(dá)取P14實(shí)驗(yàn)小鼠每組各3只，水合氯醛過量麻醉處死小鼠，取出每組小鼠眼球各6只放入250ul細(xì)胞裂解液中，超聲粉碎，12000G 4℃離心30min，收集上清液，置于-70℃冰箱中保存。用BCA法檢測蛋白濃度，ELISA試劑盒檢測視網(wǎng)膜蛋白提取液中VEGF表達(dá)每孔加入50ul Assay Diluent RDlN，向孔內(nèi)加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品、樣品，輕輕拍打孔板1分鐘，蓋上膠帶，室溫下孵育2小時，吸去每孔的液體，加入400ulWash Buffer清洗，重復(fù)此步驟4次，每孔加入100ul Conjugate，蓋上新的膠帶，室溫下孵育2小時，用Wash Buffer清洗每孔，清洗步驟同前，然后每孔加入100ul Subtrate Solution，室溫下孵育30分鐘，注意避光，最后每孔加入100ul Stop Solution，輕輕拍打孔板以充分混合，用酶標(biāo)儀讀取每孔450nm的光密度和570nm的光密度，用450nm的讀數(shù)減去570nm的讀數(shù)以校正。計算1mg/ml視網(wǎng)膜蛋白中VEGF的含量。
結(jié)果如圖1所示，P14小鼠視網(wǎng)膜VEGF蛋白表達(dá)如下實(shí)驗(yàn)組1為232.4±13.75，實(shí)驗(yàn)組2為201.3±10.94，對照組為249.5±12.13。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2小鼠視網(wǎng)膜VEGF蛋白表達(dá)均比對照組減少(F＝19.94，P＝0.0002)。說明腹腔注射川芎嗪可以降低小鼠視網(wǎng)膜VEGF蛋白的表達(dá)。
3.RT-PCR檢測P14小鼠視網(wǎng)膜VEGF mRNA的表達(dá)取P14實(shí)驗(yàn)小鼠每組各1只，水合氯醛過量麻醉處死小鼠，取出小鼠眼球2只，分離視網(wǎng)膜，迅速置于研缽中，倒入適量事先準(zhǔn)備好的液氮，研磨組織至成粉末狀，加入1mlTrizol，研磨至完全溶解。分別提取每組總RNA，紫外分光光度儀測定RNA純度和含量。2％瓊脂糖凝膠電泳檢測所提mRNA完整性。以RNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以cDNA為模板，加入引物、2×Taq Platinμm PCR MasterMix等，主要循環(huán)反應(yīng)條件如下小鼠β-actin預(yù)變性94℃5min，然后94℃10s，55℃30s，72℃1min，共30個循環(huán)，72℃延伸10min。VEGF預(yù)變性94℃5min，然后94℃10s，72℃2min，共30個循環(huán)，72℃延伸10min。PCR產(chǎn)物以2％瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像系統(tǒng)顯帶，拍照。顯影結(jié)果經(jīng)全自動圖像分析系統(tǒng)Gel analyzer軟件處理，計算每個目的條帶的積光光密度值(OPTDI)，計算各個處理組VEGF與β-actinOPTDI的比值，得出VEGF mRNA相對于β-actin mRNA的表達(dá)量。
結(jié)果如圖2所示，P14小鼠視網(wǎng)膜VEGF mRNA表達(dá)(VEGF/β-actin)如下實(shí)驗(yàn)組1為0.795±0.069，實(shí)驗(yàn)組2為0.638±0.082，對照組為1.056±0.085。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2小鼠視網(wǎng)膜VEGF mRNA表達(dá)均比對照組減少(P＜0.0001)。說明腹腔注射川芎嗪可以降低小鼠視網(wǎng)膜VEGF mRNA的表達(dá)。
4.P17小鼠行熒光素心臟灌注視網(wǎng)膜鋪片觀察視網(wǎng)膜新生血管在P17，用2.5％的水合氯醛(1.2ml/100g)腹腔麻醉小鼠，固定四肢。剪開腹壁，在肝上緣用止血鉗夾住腹主動脈。剪開膈肌并暴露心臟，剪開右心耳，經(jīng)左心室將50mg/ml熒光素標(biāo)記的葡聚糖1ml快速注入。若小鼠心臟變大和舌尖、四肢變黃，則說明心臟灌注成功。取出眼球，在10％的甲醛中室溫固定半小時。顯微鏡下去除角膜、虹膜和晶體，小心完整地剝離視網(wǎng)膜，從視網(wǎng)膜鋸齒緣到4個象限的赤道部做放射狀切開，視網(wǎng)膜平鋪在玻片上，水溶性封片劑封口，加蓋玻片。用熒光顯微鏡檢測平鋪的視網(wǎng)膜，Image-Pro Plus(Media Cybernetics，美國)軟件測量視網(wǎng)膜新生血管的面積。
結(jié)果如圖3所示，實(shí)驗(yàn)組1視網(wǎng)膜新生血管面積為0.748±0.061mm2，實(shí)驗(yàn)組2視網(wǎng)膜新生血管面積為0.535±0.057mm2，對照組的新生血管面積為0.954±0.051mm2。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2視網(wǎng)膜新生血管面積比對照組明顯減少(F＝105.29，P＜0.0001)。說明腹腔注射川芎嗪可以抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成。
5.P17行冰凍切片和GSA染色檢測視網(wǎng)膜新生血管在P17，處死小鼠并迅速取下眼球，OCT包埋。整個眼球從一側(cè)的虹膜根部開始到另一側(cè)的虹膜根部切成10um的系列冰凍切片。相隔100um收集1張切片，連續(xù)收集14張。用生物素標(biāo)記的凝集素(griffonia simplicifolia lectin B4，GSA，Vector Laboratories，美國)進(jìn)行組織化學(xué)染色，GSA可以選擇性結(jié)合到血管細(xì)胞上切片在體積分?jǐn)?shù)10％正常牛血清中孵育30min，室溫下用生物素標(biāo)記的GSA孵育2h，沖洗，過氧化物酶/卵白素(Vector laboratories，美國)孵育45min，沖洗，最后用二氨基聯(lián)苯胺孵育顯色，用伊紅作對比染色。同軸顯微鏡檢查，Image-Pro Plus(Media Cybernetics，美國)軟件測量視網(wǎng)膜表面的GSA染色陽性的細(xì)胞及其面積。14張切片GSA陽性細(xì)胞的總面積作為每只眼球新生血管的總量，用作一個單一的實(shí)驗(yàn)值。每鼠雙眼新生血管的總量的均數(shù)用作統(tǒng)計分析的單一實(shí)驗(yàn)值。
結(jié)果如圖4所示，實(shí)驗(yàn)組1視網(wǎng)膜新生血管面積為0.151±0.010mm2，實(shí)驗(yàn)組2視網(wǎng)膜新生血管面積為0.104±0.014mm2，對照組的新生血管面積為0.210±0.021mm2。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2視網(wǎng)膜新生血管面積比對照組明顯減少(F＝94.96，P＜0.0001)。說明腹腔注射川芎嗪可以抑制小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成。
實(shí)施例2體外實(shí)驗(yàn)1.體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞鑒定眼球源自人角膜移植供體，離體后6-12h獲得。在無菌條件下沿赤道部剪開眼球，去除眼前段組織，小心分離視網(wǎng)膜組織和玻璃體組織，取出視網(wǎng)膜神經(jīng)層，用D-Hanks液漂洗2-3次后剪碎，去除肉眼可見的大血管組織。加入2％胰蛋白酶于室溫中消化30分鐘，終止消化后1500rpm離心5min，去上清。用0.067％II型膠原酶室溫下消化15分鐘，終止消化后1500rpm離心5min，去上清，加入含20％胎牛血清和0.5ng/ml的β-內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(β-Endothelial cellgrowth factor，β-ECGF)的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液混勻，接種于預(yù)先涂上纖維連接蛋白的培養(yǎng)瓶。將培養(yǎng)瓶置于5％CO2，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。每兩天換1/2液，不斷洗去崩解的細(xì)胞碎片及死亡的其他細(xì)胞，待細(xì)胞匯合成單細(xì)胞層后，按1∶2或1∶3傳代。用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和VIII因子相關(guān)抗原免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行鑒定。
結(jié)果如圖5所示。圖A為DAB染色，染色陽性細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。圖B為熒光素染色鑒定，染色陽性細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞。
2.在正常和缺氧條件下培養(yǎng)細(xì)胞并加干預(yù)正常條件下培養(yǎng)的細(xì)胞分為三組，實(shí)驗(yàn)組1為培養(yǎng)液中加入100ug/ml川芎嗪，實(shí)驗(yàn)組2為培養(yǎng)液中加入200ug/ml川芎嗪，對照組中加入的是D-Hank’s液。缺氧條件培養(yǎng)細(xì)胞用的是氯化鈷致細(xì)胞化學(xué)缺氧，細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入125umol/L氯化鈷，也分三組加干預(yù)，分組情況同前。
3.MTT檢測干預(yù)后第2、4、6天細(xì)胞增殖情況取2-4代近融合的內(nèi)皮細(xì)胞，以每孔1*103的密度接種細(xì)胞于96孔板上。用含10％胎牛血清的人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液在37℃、5％CO2環(huán)境中培養(yǎng)，24h后給予干預(yù)，分組如上。干預(yù)后第2、4、6天分別取每個處理組的6個平行孔內(nèi)加入MTT溶液(5g/L)20ul，置于37℃培養(yǎng)箱中4小時，然后棄去上清液，每孔加入150ul二甲基亞砜，振蕩10分鐘，在酶聯(lián)免疫儀上以490nm波長測定各孔的吸光度(OD)值。以時間為橫軸，平均光吸收值為縱軸繪制細(xì)胞生長曲線。
結(jié)果如圖6所示。在正常條件下培養(yǎng)的細(xì)胞，第4天對照組細(xì)胞OD值為0.059±0.002，實(shí)驗(yàn)組1 OD值為0.053±0.002，實(shí)驗(yàn)組3 OD值為0.040±0.005，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2細(xì)胞增殖分別比對照組減少了24.90％和66.73％(F＝44.05，P＜0.0001)。第6天對照組細(xì)胞OD值為0.085±0.005，實(shí)驗(yàn)組1 OD值為0.060±0.009，實(shí)驗(yàn)組2 OD值為0.048±0.009，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2細(xì)胞增殖分別比對照組減少了46.03％和66.46％(F＝30.28，P＜0.0001)。而在缺氧條件下培養(yǎng)的細(xì)胞，第4天對照組細(xì)胞OD值為0.075±0.014，實(shí)驗(yàn)組1 OD值為0.069±0.018，實(shí)驗(yàn)組2 OD值為0.048±0.008，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2細(xì)胞增殖分別比對照組減少了27.54％和77.30％(F＝6.79，P＝0.008)。第6天對照組細(xì)胞OD值為0.111±0.004，實(shí)驗(yàn)組1 OD值為0.073±0.005，實(shí)驗(yàn)組3 OD值為0.053±0.007，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示，實(shí)驗(yàn)組1和組2細(xì)胞增殖分別比對照組減少了50.13％和79.64％(F＝136.43，P＜0.0001)。說明川芎嗪對正常和缺氧條件下培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有抑制作用。
4.干預(yù)后48小時檢測細(xì)胞凋亡情況取2-4代細(xì)胞，將細(xì)胞以相同密度接種于培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)24h后加入干預(yù)分組如上。作用48h后，收集細(xì)胞并用70％冷乙醇固定，4℃冰箱過夜。用PBS洗滌2遍后將細(xì)胞重懸于200ul結(jié)合緩沖液中，加入10ul AnnexinV-FITC和5ul PI，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng)15分鐘，加入300ul結(jié)合緩沖液，用流式細(xì)胞儀以激發(fā)波長488nm進(jìn)行檢測，每個樣本檢測30000個細(xì)胞。流式細(xì)胞儀測定結(jié)果輸入計算機(jī)，應(yīng)用分析程序軟件進(jìn)行處理，直接給出細(xì)胞直方圖及凋亡百分比，其中左下象限代表正常細(xì)胞胞(An-/PI-)，右下象限代表早期凋亡細(xì)胞(An+/PI-)，右上象限代表晚期凋亡及壞死細(xì)胞(An+/PI+)。
如圖7所示，在正常條件下培養(yǎng)的細(xì)胞中，對照組細(xì)胞凋亡比例為2.3％，實(shí)驗(yàn)組1凋亡比例為27.0％，實(shí)驗(yàn)組2凋亡比例為52.8％。在缺氧條件下培養(yǎng)的細(xì)胞，對照組凋亡比例為4.5％，實(shí)驗(yàn)組1凋亡比例為18.7％，實(shí)驗(yàn)組2凋亡比例為49.1％。說明在正常和缺氧條件下川芎嗪都可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。


表1 表2本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了川芎嗪對正常和缺氧條件下培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用，并闡明該抑制作用與川芎嗪促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川芎嗪對OIR模型中新生血管的形成有明顯的抑制作用，降低病變視網(wǎng)膜中VEGF的表達(dá)，能有效減輕視網(wǎng)膜的病變程度。為川芎嗪在以新生血管生成為特點(diǎn)的各種新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物制備中提供了新的應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述新生血管性視網(wǎng)膜疾病為增殖期糖尿病視網(wǎng)膜病變。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述新生血管性視網(wǎng)膜疾病為年齡相關(guān)性黃斑變性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述新生血管性視網(wǎng)膜疾病為視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述新生血管性視網(wǎng)膜疾病為早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的川芎嗪在制備治療新生血管性視網(wǎng)膜疾病的藥物中的應(yīng)用，其特征是所述新生血管性視網(wǎng)膜疾病為視網(wǎng)膜血管炎。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種川芎嗪在制備治療血管增殖性視網(wǎng)膜病變的藥物中的應(yīng)用，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川芎嗪對正常和缺氧條件下培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖有抑制作用，并闡明該抑制作用與川芎嗪促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川芎嗪對OIR模型中新生血管的形成有明顯的抑制作用，降低病變視網(wǎng)膜中VEGF的表達(dá)，能有效減輕視網(wǎng)膜的病變程度。從而提供川芎嗪在臨床中新的應(yīng)用，為治療新生血管性視網(wǎng)膜病變提供了一種新的治療途徑。
文檔編號A61P27/02GK101045057SQ200610132470
公開日2007年10月3日 申請日期2006年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月30日
發(fā)明者梁小玲, 謝素貞, 丁小燕 申請人:中山大學(xué)中山眼科中心