專利名稱：一種具有靶器官保護(hù)作用的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有靶器官保護(hù)作用的降壓降脂藥物組合物及其用途，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心血管疾病是人類死亡的主要原因之一，其中主要是冠心病和中風(fēng)。已經(jīng)證實(shí)的心血管疾病的主要危險(xiǎn)因子有三個(gè)血脂異常，包括高低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高甘油三酯和低高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；高血壓；吸煙。研究表明，80～90％的冠心病患者至少有這三種危險(xiǎn)因子中的一種。其他的危險(xiǎn)因素還有年齡(≥55歲)，男性，中風(fēng)史，周圍動(dòng)脈疾病，糖尿病，蛋白尿，左心室肥大及冠心病家族史。心血管疾病的危險(xiǎn)因子很少單獨(dú)發(fā)生，而是常常共同聯(lián)合存在于患者體內(nèi)。高血壓和血脂異常是兩種最普遍共同發(fā)生的心血管疾病危險(xiǎn)因子，大于50％的高血壓患者伴隨有血脂異常[O’Meara JG，et al.Arch Intern Med，2004；1641313-8]。最近研究表明，在英國(guó)20％的成人患有高血壓合并血脂異常[Williams B，et al.Eur Heart J，2004；25528-9]。WHO一項(xiàng)分析發(fā)現(xiàn)，在西歐約有30％的成人患有高血壓合并血脂異常[Tunstall-Pedoe H，et aI.Pharmacoepidemiol Drug Saf，2004；13(Suppl 1)S307]?；€血壓和血清膽固醇升高可以急劇增加心血管疾病的發(fā)生率和冠心病的危險(xiǎn)性，大量臨床研究表明，降壓藥和降脂藥的應(yīng)用可以顯著降低心血管疾病的發(fā)病率和死亡率。
然而多數(shù)患者沒(méi)有達(dá)到令人滿意的療效[Clinical reality of coronary prevention guidelinesacomparison of EUROASPIRE I and II in nine countries.EUROASPIRE I and II Group.EuropeanAction on Secondary Prevention by Intervention to Reduce Events.Lancet，2001；357995-1001]，其原因之一是處方治療的堅(jiān)持度問(wèn)題，50％以上的患者選擇停止這類多藥丸的治療[InsullWJ.Intern Med，1997；241317-25]，這種現(xiàn)象的直接影響就是心血管疾病的發(fā)病率和死亡率升高[Flack JM，et al.Eur Heart J，1996；17(Suppl A)16-20]。因此，簡(jiǎn)化藥方和減少藥丸負(fù)擔(dān)可以增強(qiáng)患者的堅(jiān)持度。一項(xiàng)回顧性調(diào)查顯示，從治療的初始階段就同時(shí)給予降壓和降脂治療，而很少再相繼給予其它藥物，就可以提高患者的堅(jiān)持度[Chapman RH，et al.ArchIntern Med，2005；1651147-52]；尤其對(duì)于高危心血管疾病患者，其效果更明顯，因?yàn)樗麄兘?jīng)常被給予多種復(fù)雜藥物以治療不同的心血管疾病危險(xiǎn)因素。近來(lái)，固定劑量的聯(lián)合用藥被廣泛應(yīng)用。唯一針對(duì)高血壓合并高血脂的已上市復(fù)方藥是氨氯地平與阿托伐他汀組合成的”Caduet”，臨床已經(jīng)證明，兩者的聯(lián)合應(yīng)用可以明顯降低血壓和血膽固醇水平，可使80％以上的心血管疾病患者達(dá)到目標(biāo)血壓和目標(biāo)LDL-C水平[Dorval JF，et al.Am J Cardiol，2005；95249～53]。
氨氯地平是長(zhǎng)效二氫吡啶類鈣通道阻滯劑，由于心肌和平滑肌的收縮依賴于細(xì)胞外鈣離子通過(guò)特異性離子通道進(jìn)入細(xì)胞，氨氯地平可選擇性抑制鈣離子跨膜進(jìn)入平滑肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)揮增加冠脈血管、腎臟、腸系膜血管床血流，降低心臟前負(fù)荷、心肌氧耗和血管張力，降低外周血管阻力，從而降低血壓，抑制血小板聚集等作用。臨床上用于高血壓和心絞痛。
阿托伐他汀屬HMG-CoA還原酶抑制劑，口服吸收后的水解產(chǎn)物在體內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)性地抑制膽固醇合成過(guò)程中的限速酶羥甲戊二酰輔酶A還原酶，使膽固醇的合成減少，也使低密度脂蛋白受體合成增加，臨床上用于治療高膽固醇血癥和混合型高脂血癥，及冠心病和腦中風(fēng)的防治。
2004年2月召開(kāi)的國(guó)際高血壓學(xué)會(huì)(ISH)第20屆學(xué)術(shù)年會(huì)報(bào)道了一項(xiàng)在北美地區(qū)進(jìn)行的多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照短期臨床試驗(yàn)AVALON研究，該研究目的是通過(guò)與氨氯地平或阿托伐他汀單藥治療比較，觀察氨氯地平(5mg/d)和阿托伐他汀(10mg/d)的聯(lián)合治療使高血壓合并血脂異常患者血壓與血脂的達(dá)標(biāo)情況；該研究納入高血壓合并血脂異常的患者847例，經(jīng)過(guò)8周治療，各組達(dá)到NCEP的ATPIII中的LDL-C控制目標(biāo)和JNC-6中的血壓控制目標(biāo)的患者比例分別為聯(lián)合用藥組82.1％與51.1％，氨氯地平組12.4％與54.0％，阿托伐他汀組78.2％與32.3％，安慰劑組6.6％與29.7％；在聯(lián)合用藥組中，LDL-C和血壓的同時(shí)達(dá)標(biāo)率(45.5％)顯著高于氨氯地平組(8.3％)、阿托伐他汀組(28.6％)與安慰劑組(3.5％)。另一項(xiàng)針對(duì)多中心、隨機(jī)、雙盲的臨床試驗(yàn)，入選1220例高血壓患者(51.9％合并LDL-C水平異常)，基線平均血壓146.6/87.9mmHg，平均LDL-C水平為152.9mg/dl，除推薦調(diào)整生活方式外，選擇給予不同配比的氨氯地平/阿托伐他汀(5/10，5/20，5/40，5/80，10/10，10/20，10/40，and 10/80mg)進(jìn)行降壓降脂治療，14周后，57.7％的患者同時(shí)達(dá)到LDL-C和血壓的控制目標(biāo).[Blank，-R；et al.Single-pill therapy in the treatment of concomitant hypertension and dyslipidemia(the amlodipine/atorvastatin gemini study).J Clin Hypertens(Greenwich)，2005；7(5)264-73]?？梢?jiàn)，僅僅氨氯地平與阿托伐他汀聯(lián)合對(duì)于高血壓合并血脂異常的心血管患者仍有一定局限性?；颊叩陌衅鞴贀p傷還需要進(jìn)一步控制和干預(yù)，心血管事件的預(yù)防或治療仍未得到臨床數(shù)據(jù)的驗(yàn)證[Wilson，et al.Amlodipine/Atorvastatin(Caduet)for Preventing Heart Disease.American Family Physician，2006，73(6)1067-1068]。
因此，開(kāi)發(fā)一種可以進(jìn)一步增強(qiáng)氨氯地平+阿托伐他汀對(duì)心腦血管保護(hù)作用，降低靶器官的損害的復(fù)方藥物對(duì)于心血管疾病的治療具有重大的臨床意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服針對(duì)高血壓合并血脂異常目前臨床用藥存在的上述不足，提供一種更為高效的藥物組合物，這種高效體現(xiàn)在心腦血管保護(hù)作用和降低靶器官的損害方面。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的氨氯地平；(2)藥用劑量的阿托伐他?。?3)藥用劑量的葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣；和(4)藥劑學(xué)上可接受的載體。
其中“藥用劑量”是指具有協(xié)同、預(yù)防或治療的藥理作用的量。
進(jìn)一步，優(yōu)選(1)2.5mg～10mg的氨氯地平；(2)10mg～80mg的阿托伐他??；(3)0.1mg～2.0mg的葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣；和(4)藥劑學(xué)上可接受的載體。
更加優(yōu)選(1)5mg～10mg的氨氯地平；(2)10mg～40mg的阿托伐他??；(3)0.2mg～2.0mg的葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣；和(4)藥劑學(xué)上可接受的載體。
其中氨氯地平選自苯磺酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、和苯磺酸左旋氨氯地平中的一種。其中葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣的量進(jìn)一步優(yōu)選葉酸0.4mg～1.6mg，或亞葉酸鈣0.5mg～2.0mg，或左旋亞葉酸鈣0.25mg～1.0mg。
本發(fā)明提供藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓伴血脂異常的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害的藥物中的應(yīng)用，高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害，是指由于高血壓和/或血脂異常引起的心、腦、腎、眼等器官的繼發(fā)性損害，包括腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、左室肥厚、心絞痛、心肌梗死、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心功能減退、良性小動(dòng)脈性腎硬化癥、心力衰竭、心律失常、原發(fā)性心臟驟停、腎功能減退、惡性小動(dòng)脈性腎硬化癥、外周動(dòng)脈疾病、視網(wǎng)膜動(dòng)脈硬化或高血壓眼底病變。
藥物組合物在制備用于降低高血壓伴血脂異常引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的應(yīng)用；其中降低心腦血管事件危險(xiǎn)性是指降低腦卒中、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、心律失常、原發(fā)性心臟驟?；蚬谛牟「呶５陌l(fā)生率。
藥理實(shí)驗(yàn)1氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠的靶器官保護(hù)作用SD大鼠，體重150～180g，水合氯醛(320mg/kg)腹腔注射麻醉，打開(kāi)腹腔，分離左腎動(dòng)脈，0.2mm銀夾狹窄左腎動(dòng)脈，術(shù)后8～10周，取收縮壓≥140mmHg者大鼠為高血壓大鼠。給高血壓大鼠按60萬(wàn)U/kg的總劑量灌胃給予維生素D3，分3d給完，之后每天喂高脂飼料(膽固醇1.0％，丙基硫氧嘧啶0.2％，膽酸鈉0.5％，豬油5.0％，蛋氨酸1.0％，基礎(chǔ)飼料92.3％)[Yen CH，Lau YT.Vascular responses in male and female hypertensive rats with hyperhomocysteinemia.Hypertension.2002；40(3)322-8.Robin S，et al.Opposite effect of methionine-supplemented diet，a model of hyperhomocysteinemia，on plasma and liver antioxidant status in normotensive andspontaneously hypertensive rats.J Nutr Biochem，2004；15(2)80-9.溫進(jìn)坤，等.一種快速建立大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的實(shí)驗(yàn)方法.中華老年學(xué)雜志，2001，21(1)50-52]，正常對(duì)照組大鼠飼喂普通飼料。4周后，測(cè)定大鼠血壓(收縮壓)，采尾血測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。
取高血壓伴血脂異常大鼠120只，根據(jù)血壓和血脂水平將大鼠均分為6組，每組20只，分別為模型組、氨氯地平+阿托伐他汀(0.5+1.0mg/kg)組、氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸(0.5+1.0+0.04mg/kg)組、氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸(0.5+1.0+0.08mg/kg)組、氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸(0.5+1.0+0.16mg/kg)組、葉酸(0.08mg/kg)組，另取20只正常大鼠作為正常對(duì)照組。高血壓大鼠繼續(xù)飼喂高脂飼料，正常組大鼠飼喂普通飼料。正常對(duì)照組、模型組給予等容量0.5％CMC溶液，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥20周。
檢測(cè)指標(biāo)(1)分別測(cè)定給藥前和給藥后不同時(shí)間血壓(179型血壓測(cè)定儀，美國(guó)IITCLife Science Inc.)計(jì)算降壓幅度(＝給藥前收縮壓-給藥后收縮壓)。
(2)20周后取血，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平。
(3)收集尿液，用比濁法測(cè)定尿蛋白、放免法測(cè)定24h尿α1微球蛋白；取血，測(cè)定血肌酐、計(jì)算肌酐清除率(Ccr)。
(4)心肌羥脯氨酸測(cè)定取左心室游離壁心肌組織，制備成10％的心肌組織勻漿，按羥脯氨酸測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)，消化法測(cè)定心肌羥脯氨酸含量，按膠原蛋白含量＝羥脯氨酸含量×7.46，換算成膠原蛋白含量。
(5)心肌組織常規(guī)切片，天狼星紅-苦味酸染色，測(cè)量心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)。CVF為膠原面積與心肌總面積的比值，其中膠原面積不包括血管周圍膠原面積，隨機(jī)分析5個(gè)視野，取其均值。PVCA為每一標(biāo)本測(cè)量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動(dòng)脈的周圍面積與管腔面積的比值，取其均值。
(6)腎內(nèi)小動(dòng)脈觀察經(jīng)腹主動(dòng)脈插管，0.1mg/ml；硝普鈉充分?jǐn)U張血管后，用10％的甲醛溶液在10～12kPa下灌注固定，分離左腎，自腎門處剪下腎臟，置于4％甲醛中固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、橫切片、HE染色。光學(xué)顯微鏡下選取外徑為50～100μm的腎內(nèi)小動(dòng)脈，測(cè)量腎內(nèi)小動(dòng)脈內(nèi)徑、壁厚，計(jì)算壁厚內(nèi)徑比。每個(gè)標(biāo)本測(cè)量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動(dòng)脈，取其平均值。
(7)采集主動(dòng)脈樣本，用圖像分析法檢測(cè)主動(dòng)脈脂質(zhì)斑塊面積。
計(jì)量資料用 表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSSl0.0統(tǒng)計(jì)軟件包，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。
結(jié)果(1)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠血壓、血脂水平的影響第20周末，與距常組大鼠比較，模型組大鼠收縮壓顯著升高；與模型組比較，葉酸組大鼠收縮壓有所改善，氨氯地平+阿托伐他汀組及氨氯地平+阿托伐他汀(0.5+1.0mg/kg)+不同劑量葉酸(0.04～0.16mg/kg)組大鼠收縮壓均顯著降低；但與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量葉酸組大鼠收縮壓的降壓幅度沒(méi)有顯著改變。
第20周末，與正常組大鼠比較，模型組大鼠TC、TG顯著升高；與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組及氨氯地平+阿托伐他汀(0.5+1.0mg/kg)+不同劑量葉酸(0.04～0.16mg/kg)組大鼠TC、TG均顯著降低；但與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量葉酸組大鼠TC、TG水平?jīng)]有顯著差異。見(jiàn)表1。
(2)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠血清NO、ET、SOD、MDA水平的影響與距常組大鼠比較，模型組大鼠血漿NO、SOD水平顯著降低，ET、MDA水平顯著升高。與模型組比較，葉酸組、氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠血漿NO、SOD升高、ET、MDA降低。與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，氨氯地平+5可托伐他汀(0.5+1.0mg/kg)+不同劑量葉酸(0.04～0.16mg/kg)組大鼠血清NO、SOD進(jìn)一步升高，ET、MDA進(jìn)一步降低。表明高血壓伴血脂異常大鼠出現(xiàn)顯著的內(nèi)皮細(xì)胞功能損害、脂質(zhì)過(guò)氧化，氨氯地平+阿托伐他汀、葉酸對(duì)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能具有保護(hù)作用和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用，兩者合用對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用顯著增強(qiáng)。見(jiàn)表2。
表1氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠降壓作用及血脂水平的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；表2氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠血清NO、ET、SOD、MDA水平的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，★P＜0.05(3)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠腎功能的影響 與正常組大鼠比較，模型組大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低。與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠尿24hα1-微球蛋白、尿蛋白顯著降低，Ccr顯著升高。與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量葉酸(0.04～0.16mg/kg)組大鼠Ccr進(jìn)一步升高，24hα1-微球蛋白、尿蛋白進(jìn)一步降低。表明腎性高血壓伴血脂異常大鼠出現(xiàn)早期腎功能損害，氨氯地平+阿托伐他汀對(duì)腎性高血壓伴血脂異常大鼠的腎功能損害具有保護(hù)作用，葉酸與氨氯地平+阿托伐他汀合用，對(duì)腎性高血壓大鼠的腎功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)。見(jiàn)表3。
表3氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠腎功能的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，★P＜0.05(4)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠心肌膠原蛋白含量的影響 與正常組大鼠比較，模型組大鼠心肌膠原蛋白含量顯著升高。與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠心肌膠原蛋白含量顯著降低。與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量葉酸(0.04～0.16mg/kg)組大鼠心肌膠原蛋白含量進(jìn)一步降低。見(jiàn)表4。
表4氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠心肌膠原蛋白含量、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，★P＜0.05
(4)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響與正常組大鼠比較，模型組大鼠心肌間質(zhì)纖維化指標(biāo)CVF、心肌血管周圍纖維化指標(biāo)PVCA均顯著增加，CVF與PVCA升高幾乎同步，表明心肌間質(zhì)纖維化參與了腎性高血壓伴血脂異常大鼠心臟重構(gòu)的病理過(guò)程。與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠心肌CVF、PVCA均顯著降低，氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組大鼠心肌CVF、PVCA進(jìn)一步降低，與氨氯地平+阿托伐他汀組比較有顯著性差異。見(jiàn)表4。
(5)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠腎內(nèi)小動(dòng)脈的影響高血壓伴血脂異常引起大鼠的血管改變，主要表現(xiàn)為血管壁外膜的纖維化，管壁中層增厚(由平滑肌細(xì)胞增生、肥厚和細(xì)胞間質(zhì)增多所致)；內(nèi)膜玻璃樣變，內(nèi)皮細(xì)胞增生，上述變化使血管壁厚度/管腔比值減小。與正常組大鼠比較，模型組大鼠腎小動(dòng)脈壁厚增加，內(nèi)徑減小，壁厚/內(nèi)徑比增加。與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠腎小動(dòng)脈壁厚降低、壁厚/內(nèi)徑比增加，氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組大鼠腎小動(dòng)脈壁厚進(jìn)一步降低、壁厚/內(nèi)徑比進(jìn)一步增加，與氨氯地平+阿托伐他汀組比較有顯著性差異。見(jiàn)表5。
表5氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠腎內(nèi)小動(dòng)脈的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01(6)氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的影響模型組主動(dòng)脈壁斑塊面積為10.2％；與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠主動(dòng)脈壁斑塊面積顯著降低；葉酸組的主動(dòng)脈斑塊面積較模型組主動(dòng)脈壁斑塊面積有降低趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異；與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量葉酸(0.04～0.16mg/kg)組大鼠主動(dòng)脈壁斑塊面積有進(jìn)一步降低趨勢(shì)。見(jiàn)表6。
表6氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響(X±SD)

與正常組比較，**＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；藥理實(shí)驗(yàn)2氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸對(duì)卒中易感型自發(fā)性高血壓伴血脂異常大鼠靶器官損害的保護(hù)作用8～10周齡卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠(SHRsp)分別購(gòu)自上海市高血壓病研究所、阜外醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)在室溫(23±2)℃，相對(duì)濕度(50±10)％，光照明暗各12h，飼喂高脂飼料(配方同藥理實(shí)驗(yàn)1)。試驗(yàn)前測(cè)定血壓，根據(jù)血壓數(shù)值，將SHRsp分成模型組、氨氯地平+阿托伐他汀(0.5+1mg/kg)組、氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸(0.04mg/kg)組，另設(shè)WKY對(duì)照組，每組30只。灌胃給藥，每天1次，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)20周。觀察指標(biāo)(1)每日觀察動(dòng)物飲食、存活情況及行為活動(dòng)，記錄各組動(dòng)物腦卒中發(fā)作數(shù)。
(2)病理學(xué)觀察所有大鼠均取腦組織，切片、HE染色，觀察腦出血、腦梗塞或混合性腦卒中，計(jì)算各組大鼠腦卒中發(fā)生率。
(3)大鼠麻醉后行主動(dòng)脈插管，0.1mg/ml硝普鈉充分?jǐn)U張血管后，2.5％戊二醛灌注固定，斷頭取腦，分離顱底動(dòng)脈環(huán)及腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的小動(dòng)脈和細(xì)動(dòng)脈，2.5％戊二醛固定，包埋、切片，甲苯胺藍(lán)染色。計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)定血管的中膜厚度、管腔內(nèi)徑徑，計(jì)算中膜厚度/管腔內(nèi)徑的比值，每張切片測(cè)10條血管。
結(jié)果在試驗(yàn)觀察期內(nèi)，模型組大鼠總計(jì)發(fā)生腦卒中15只，病理組織學(xué)觀察，總計(jì)發(fā)生腦卒中25只，其中腦出血9只，腦梗死11只，混合性中風(fēng)5只。腦卒中灶及周圍均可見(jiàn)小動(dòng)脈透明變性或纖維素樣壞死，管壁增厚，管腔狹窄，有的管腔內(nèi)可見(jiàn)微血栓形成，管周滲血。氨氯地平+阿托伐他汀、氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組大鼠腦卒中發(fā)生率均顯著降低。氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組腦卒中發(fā)生率進(jìn)一步降低，但與氨氯地平+阿托伐他汀組比較無(wú)顯著差異。見(jiàn)表7。
表7氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸連續(xù)給藥20周對(duì)卒中易感型自發(fā)性高血壓伴血脂異常大鼠腦卒中的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲▲P＜0.01；表8氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸連續(xù)給藥20周對(duì)卒中易感型自發(fā)性高血壓伴血脂異常大鼠腦動(dòng)脈的影響(X±SD)

與正常組比較，**P＜0.01；與高血壓組比較，▲▲P＜0.01；與氨氯地平+阿托伐他汀組比較，★P＜0.05與正常組大鼠比較，模型組大鼠腦動(dòng)脈中膜厚度增加，管腔內(nèi)徑減小，中膜厚度/管腔內(nèi)徑比增加。與模型組比較，氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠腦動(dòng)脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比降低，氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組腦動(dòng)脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比進(jìn)一步降低，與氨氯地平+阿托伐他汀組比較有顯著性差異。見(jiàn)表8。
藥理實(shí)驗(yàn)3左旋氨氯地平+阿托伐他汀+亞葉酸鈣對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠的靶器官保護(hù)作用SD大鼠，體重150～180g，造模方法同藥理實(shí)驗(yàn)1。然后根據(jù)血壓和血脂水平將大鼠分為模型組，左旋氨氯地平+阿托伐他汀(0.25+1.0mg/kg)組，左旋氨氯地平+阿托伐他汀+亞葉酸鈣(0.25+1.0+0.05mg/kg)組，左旋氨氯地平+阿托伐他汀+亞葉酸鈣(0.25+1.0+0.10mg/kg)組，左旋氨氯地平+阿托伐他汀+亞葉酸鈣(0.25+1.0+0.20mg/kg)組，亞葉酸鈣(0.08mg/kg)組，另設(shè)正常對(duì)照組。高血壓大鼠繼續(xù)飼喂高脂飼料，正常組大鼠飼喂普通飼料。正常對(duì)照組、模型組給予等容量0.5％CMC溶液，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥20周。
測(cè)定給藥前后血壓；20周后取血，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血漿一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平。20周后收集尿液，測(cè)尿蛋白、24h尿α1微球蛋白；取血，測(cè)定血肌酐、計(jì)算肌酐清除率(Ccr)。20周后，取左心室游離壁心肌組織，測(cè)定心肌羥脯氨酸含量，并計(jì)算膠原蛋白含量；心肌組織常規(guī)切片，測(cè)量心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)。分離左腎，石蠟切片，測(cè)量腎內(nèi)小動(dòng)脈內(nèi)徑、壁厚，計(jì)算壁厚內(nèi)徑比。采集主動(dòng)脈樣本，用圖像分析法檢測(cè)主動(dòng)脈脂質(zhì)斑塊面積。
結(jié)果表明，高血壓伴血脂異常大鼠出現(xiàn)血壓血脂升高，左旋氨氯地平+阿托伐他汀組及氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量亞葉酸鈣組大鼠血壓血脂均顯著降低，與左旋氨氯地平+阿托伐他汀組相比，氨氯地平+阿托伐他汀+不同劑量亞葉酸鈣組大鼠血壓和血脂水平?jīng)]有顯著差異；高血壓伴血脂異常大鼠出現(xiàn)顯著的內(nèi)皮細(xì)胞功能降低，左旋氨氯地平+阿托伐他汀、亞葉酸鈣對(duì)大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能具有保護(hù)作用，左旋氨氯地平+阿托伐他汀與亞葉酸鈣合用對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用顯著增強(qiáng)；左旋氨氯地平+阿托伐他汀具有抗氧化作用，左旋氨氯地平+阿托伐他汀與亞葉酸鈣合用抗氧化作用顯著增強(qiáng)；左旋氨氯地平+阿托伐他汀對(duì)其心腎功能損害具有保護(hù)作用，左旋氨氯地平+阿托伐他汀與亞葉酸鈣合用，對(duì)高血壓伴血脂異常大鼠的心腎功能保護(hù)作用顯著增強(qiáng)；模型組大鼠出現(xiàn)主動(dòng)脈壁斑塊，與左旋氨氯地平+阿托伐他汀組比較，左旋氨氯地平+阿托伐他汀(0.25+1.0mg/kg)+不同劑量亞葉酸鈣(0.05～0.20mg/kg)組大鼠主動(dòng)脈壁斑塊面積有進(jìn)一步降低趨勢(shì)。
藥理實(shí)驗(yàn)4左旋氨氯地平+阿托伐他汀+左旋亞葉酸鈣對(duì)卒中易感型自發(fā)性高血壓伴血脂異常大鼠靶器官損害的保護(hù)作用卒中易感型自發(fā)性高血壓大鼠(SHRsp)，8～10周齡，飼喂高脂飼料。試驗(yàn)前測(cè)定血壓，根據(jù)血壓數(shù)值，將SHRsp分成模型組、左旋氨氯地平+阿托伐他汀(0.25+1.0mg/kg)組、左旋氨氯地平+阿托伐他汀+左旋亞葉酸鈣(0.25+1.0+0.025mg/kg)組、另設(shè)WKY對(duì)照組，每組30只。灌胃給藥，每天1次，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)20周。觀察各組動(dòng)物腦卒中發(fā)作數(shù)及首次發(fā)作時(shí)間；腦組織切片，計(jì)算各組大鼠腦卒中發(fā)生率；分離顱底動(dòng)脈環(huán)及腦實(shí)質(zhì)內(nèi)的小動(dòng)脈和細(xì)動(dòng)脈，切片，測(cè)定血管的中膜厚度、管腔內(nèi)徑徑，計(jì)算中膜厚度/管腔內(nèi)徑的比值。
結(jié)果表明，氨氯地平+阿托伐他汀、氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組大鼠腦卒中發(fā)生率均顯著降低。氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組腦卒中發(fā)生率進(jìn)一步降低，但與氨氯地平+阿托伐他汀組比較無(wú)顯著差異。氨氯地平+阿托伐他汀組大鼠腦動(dòng)脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比較模型組降低，氨氯地平+阿托伐他汀+葉酸組腦動(dòng)脈中膜厚度、中膜厚度/管腔內(nèi)徑比進(jìn)一步降低，與氨氯地平+阿托伐他汀組比較有顯著性差異。
該藥物組合物的劑型包括但不限于普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、顆粒劑、丸劑、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑或貼劑等劑型。
該藥物組合物中還含有藥劑學(xué)可接受的載體，可制成普通口服制劑，包括普通片劑、普通膠囊、顆粒劑等，制成片劑時(shí)所述藥學(xué)上可接受的載體包括有助于將活性化合物配制成藥用制劑的賦形劑和輔藥，如淀粉、微晶纖維素、無(wú)機(jī)鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，屬于本領(lǐng)域常識(shí)。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸三聯(lián)藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，研究表明氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸三聯(lián)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能具有保護(hù)作用和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用，且效果優(yōu)于氨氯地平/阿托伐他汀二聯(lián)應(yīng)用；在靶器官腎臟的功能保護(hù)方面，氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸三聯(lián)的效果顯著強(qiáng)于氨氯地平/阿托伐他汀二聯(lián)用藥；在靶器官心臟方面，心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)分別代表心肌纖維化病變的兩種主要形式——間質(zhì)纖維化和血管周圍纖維化的病變程度，是衡量心臟重構(gòu)的主要指標(biāo)，而心臟重構(gòu)的程度又是體現(xiàn)心臟功能的基礎(chǔ)，如膠原含量增加可增強(qiáng)室壁的僵硬度，降低心室順應(yīng)性致心室舒張功能不全，研究表明本發(fā)明的三聯(lián)應(yīng)用在保護(hù)心功能方面具有明顯協(xié)同作用，且優(yōu)于上述二聯(lián)用藥；在靶器官腎臟方面，氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸三聯(lián)的療效同樣好于上述二聯(lián)用藥；在血管方面，本發(fā)明的三聯(lián)應(yīng)用也具有協(xié)同作用，主動(dòng)脈壁斑塊面積的降低效果強(qiáng)于上述二聯(lián)用藥。
血壓與心血管事件危險(xiǎn)的關(guān)系是連續(xù)的，一致的，且獨(dú)立于其它危險(xiǎn)因素，血壓越高，發(fā)生腦卒中、心力衰竭、心肌梗死和腎病的危險(xiǎn)就越大；血脂異常也具有這類相似的特征。因此降低心腦血管事件危險(xiǎn)性，對(duì)于高血壓伴血脂異常的治療具有重要臨床意義?！靶哪X血管事件危險(xiǎn)性”與上述靶器官損害等疾病的治療是有區(qū)別的。所謂“心腦血管事件危險(xiǎn)性”是指一個(gè)患者個(gè)體相對(duì)于整個(gè)人群的發(fā)生心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。近十多年，在心腦血管疾病研究領(lǐng)域，“降低心腦血管事件危險(xiǎn)性”愈來(lái)愈成為衡量藥物療效或治療方案的主要指標(biāo)，國(guó)際上一些大型臨床試驗(yàn)都是選擇這類指標(biāo)作為臨床終點(diǎn)的。本發(fā)明提供的氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸三聯(lián)藥物組合物在降低腦卒中發(fā)生率方面具有明顯協(xié)同作用，且其效果顯著強(qiáng)于氨氯地平/阿托伐他汀二聯(lián)應(yīng)用的效果。
可見(jiàn)，本發(fā)明提供的藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，其協(xié)同作用在于協(xié)同保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能作用、協(xié)同抗氧化作用、協(xié)同保護(hù)心腎功能、協(xié)同預(yù)防或延緩動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成作用、協(xié)同降低腦卒中發(fā)生率，而且在上述這些藥理作用中，本發(fā)明提供的這種氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸三聯(lián)的藥物組合物效果均優(yōu)于僅含氨氯地平和阿托伐他汀的二聯(lián)藥物組合物。因此，對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)有顯著的改善意義。
鑒于上述協(xié)同功效在臨床中的有益作用，本發(fā)明還提供了上述藥用劑量的含氨氯地平、阿托伐他汀及葉酸的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓伴血脂異常、高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害或高血壓伴血脂異常相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用；或在制備用于降低心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的應(yīng)用。通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，提供給患者這種特定用途的藥物組合物可以提高患者依從性，使患者服藥方便，降低醫(yī)療費(fèi)用，具有較好市場(chǎng)前景。
下面結(jié)合


和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，藥理作用的實(shí)驗(yàn)支持詳見(jiàn)以下具體實(shí)施方式
。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 復(fù)方氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸片劑制備處方如下(1000片)氨氯地平5g阿托伐他汀 10g葉酸0.2g羧甲基淀粉鈉20g磷酸氫鈣180g10％聚維酮水溶液適量硬脂酸鎂1％制備方法將原輔料粉碎過(guò)80目篩，干燥備用。取相當(dāng)于5g氨氯地平量的苯磺酸氨氯地平、阿托伐他汀10g和葉酸0.2g按照等量遞增法混合均勻，加入羧甲基淀粉鈉20g、磷酸氫鈣180g，按照等量遞增法均勻混合，將葉酸溶解于粘合劑10％聚維酮水溶液中，加入粘合劑適量制軟材，30目制粒，40～45℃干燥3h；30目整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，含量測(cè)定后用8號(hào)沖頭，壓片，即得。制備過(guò)程中注意避光，成品檢驗(yàn)合格后，鋁塑泡罩包裝，避光保存。制成的復(fù)方片劑中每片含氨氯地平5mg、阿托伐他汀10mg、葉酸0.2mg。
實(shí)施例2制備復(fù)方片劑制備方法同實(shí)施例1。15種藥物復(fù)方的成分及含量見(jiàn)表9。
表9 15種復(fù)方活性藥物配方組成

注氨氯地平鹽的投藥量＝表中所示劑量×(氨氯地平鹽分子量/氨氯地平分子量)；按1000片/粒/袋計(jì)制備藥物時(shí)，投藥量＝表中所示劑量×1000。
實(shí)施例3 復(fù)方氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸膠囊制備處方如下(1000粒)氨氯地平5g阿托伐他汀 10g葉酸0.2g乳糖100～200g羧甲基淀粉鈉15～25g10％聚維酮水溶液適量硬脂酸鎂1％制備方法將原輔料粉碎過(guò)80目篩，干燥備用。取相當(dāng)于5g氨氯地平量的馬來(lái)酸氨氯地平、阿托伐他汀10g和葉酸0.2g按照等量遞增法混合均勻，加入100～200g乳糖、15～25g羧甲基淀粉鈉(輔料確切用量按照活性藥物用量調(diào)整)，按照等量遞增法均勻混合，用10％聚維酮乙醇溶液制成軟材，20目篩制粒，60℃干燥約2h，20目篩整粒，控制顆粒的含水量為2-3％，將干燥后的顆粒與處方量硬脂酸鎂混合均勻，半成品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定含量，裝入空心膠囊，即得1000粒膠囊。制備過(guò)程中注意避光。成品檢驗(yàn)合格后鋁塑泡罩包裝，避光保存。制成的復(fù)方膠囊中每粒含氨氯地平5mg、阿托伐他汀10mg、葉酸0.2mg。
實(shí)施例4制備復(fù)方膠囊制備方法同實(shí)施例3。15種藥物復(fù)方的成分及含量見(jiàn)表9。
實(shí)施例5復(fù)方氨氯地平/阿托伐他汀/葉酸顆粒劑制備處方如下(1000袋)氨氯地平5g阿托伐他汀 10g葉酸0.2g乳糖850～950g羧甲基淀粉鈉10～20g阿拉伯膠2g10％聚維酮水溶液適量甜橙香精2g阿斯巴甜5g聚乙二醇1％制備方法將原輔料粉碎過(guò)80目篩，干燥備用。取相當(dāng)于5g氨氯地平量的甲磺酸氨氯地平、阿托伐他汀10g和葉酸0.2g按照等量遞增法混合均勻，加入850～950g乳糖、10～20g羧甲基淀粉鈉(輔料確切用量按照活性藥物用量調(diào)整)，按照等量遞增法均勻混合，用10％聚維酮乙醇溶液制成軟材，18目篩制粒，60℃干燥約2h，16目篩整粒，控制顆粒的含水量為2％以下，將干燥后的顆粒與處方量甜橙香精、阿斯巴甜、硬脂酸鎂混合均勻，半成品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定含量，裝入鋁袋即得1000袋。制備過(guò)程中注意避光。制成的復(fù)方顆粒劑中每袋含氨氯地平5mg、阿托伐他汀10mg、葉酸0.2mg。
實(shí)施例6制備復(fù)方顆粒劑制備方法同實(shí)施例5。
15種藥物復(fù)方的成分及含量見(jiàn)表9。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的氨氯地平；(2)藥用劑量的阿托伐他??；(3)藥用劑量的葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣；和(4)藥劑學(xué)上可接受的載體。
2.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的氨氯地平的藥用劑量是2.5mg～10mg，阿托伐他汀的藥用劑量是10mg～80mg，葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣的藥用劑量是0.1mg～2.0mg。
3.權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于葉酸的藥用劑量是0.4mg～1.6mg；或亞葉酸鈣的藥用劑量是0.5mg～2.0mg；或左旋亞葉酸鈣的藥用劑量是0.25mg～1.0mg。
4.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于氨氯地平選自苯磺酸氨氯地平、甲磺酸氨氯地平、馬來(lái)酸氨氯地平、和苯磺酸左旋氨氯地平中的一種。
5.權(quán)利要求1～4中任一所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的制藥劑型為片劑、膠囊或顆粒劑。
6.權(quán)利要求1～5中任一所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓伴血脂異常的藥物中的用途。
7.權(quán)利要求1～5中任一所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害的藥物中的用途。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害，包括動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、左室肥厚、心絞痛、心肌梗死、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、心功能減退、良性小動(dòng)脈性腎硬化癥、心力衰竭、心律失常、原發(fā)性心臟驟停、腎功能減退、惡性小動(dòng)脈性腎硬化癥、外周動(dòng)脈疾病、視網(wǎng)膜動(dòng)脈硬化或高血壓眼底病變。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害是腦卒中。
10.權(quán)利要求1～5中任一所述的藥物組合物在制備用于降低高血壓伴血脂異常引起的心腦血管事件危險(xiǎn)性的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有協(xié)同作用的降壓降脂藥物組合物及其用途，由藥用劑量的氨氯地平、阿托伐他汀、葉酸或亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣和藥劑學(xué)上可接受的載體組成。該藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，其協(xié)同作用在于保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能、抗氧化、保護(hù)心腎功能、預(yù)防或延緩動(dòng)脈粥樣硬化、或降低腦卒中發(fā)生率。本發(fā)明還提供上述藥物組合物在制備用于預(yù)防、治療或延緩高血壓伴血脂異常、高血壓伴血脂異常引起的靶器官損害或高血壓伴血脂異常相關(guān)疾病、或降低心腦血管事件危險(xiǎn)性藥物中的應(yīng)用。通過(guò)本發(fā)明的實(shí)施，提供給患者這種特定用途的藥物組合物可以提高患者依從性，便患者服藥方便，降低醫(yī)療費(fèi)用，具有較好市場(chǎng)前景。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1969855SQ20061014435
公開(kāi)日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2006年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月4日
發(fā)明者徐希平, 陳光亮, 王琳琳, 王燕, 于多, 李華, 王文艷, 陳明俠 申請(qǐng)人:北京華安佛醫(yī)藥研究中心有限公司, 安徽省生物醫(yī)學(xué)研究所