專利名稱：一種由銀杏葉與紅景天制成的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法，以及含有該藥物組合物的制劑，屬于醫(yī)藥
2、背景技術(shù)醫(yī)學上，心腦血管疾病是指心臟和動脈血管發(fā)生硬化而引起的心臟缺血或出血的疾病，包括冠心病、心絞痛、高血壓、心律失常、心肌梗塞、腦梗死等。心腦血管疾病一直號稱威脅人類健康的頭號殺手，高血壓、高血脂、冠心病、糖尿病已成為“時代的瘟疫”。據(jù)有關(guān)調(diào)查報告顯示，我國每年死于心腦血管疾病的人有300多萬，占我國每年總死亡人數(shù)的50％，而幸存下來的人75％不同程度喪失勞動能力，4％重殘。近年來，心腦血管疾病發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，特別是其發(fā)病和死亡的年齡日益呈年輕化趨勢，如何有效防治也就引起人們的高度重視。迄今為止，本領(lǐng)域?qū)＜乙严群笱芯苛硕喾N具有不同作用機制的用于心腦血管疾病的藥物，雖然取得了一些進展，但由于大多數(shù)藥物在藥效及選擇性上仍有許多難以克服的不足，故目前治療心腦血管疾病的理想藥物不多。許多專家把目標定位于對中藥或中藥藥用有效部位的開發(fā)研究上。
銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉。銀杏葉入藥始于明代，銀杏葉制劑的醫(yī)用價值已引起國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，70年代以來，國內(nèi)外學者對銀杏葉的化學、藥理、制劑等進行了全方位的研究，并在此基礎(chǔ)上開發(fā)了一系列制劑用于臨床。銀杏葉成分復雜，主要為黃酮類、萜類內(nèi)酯化合物、多糖類等。對治療心腦血管疾病、老年性癡呆、哮喘、癌癥等有特殊療效，臨床主要用于冠心病、腦缺血、腦功能障礙、腦傷后遺癥等。
銀杏葉提取物的有效成分主要為黃酮類和萜類，具有拮抗血小板活化因子、清除氧自由基、降血脂、增強中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和激素水平、改善血液流變學狀態(tài)、抗炎、抗過敏等作用。進口注射用銀杏葉提取物，商品名為金納多，主要用于各種腦部、周邊等血液循環(huán)障礙，主治急慢性腦機能不全及其后遺癥、耳部血流及神經(jīng)障礙、眼部血流及神經(jīng)障礙、末梢循環(huán)障礙等。國產(chǎn)舒血寧注射液(銀杏葉提取物注射液)，主要用于缺血性心腦血管疾病、冠心病、心絞痛、腦栓塞、腦血管痙攣等。銀杏葉提取物已有國家標準，見中國藥典2005年版一部第281頁。標準規(guī)定，本品按干燥品計，含總黃酮醇苷，不得少于24.0％；含萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯(C15H18O8)、銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)、銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)和銀杏內(nèi)酯C(C20H24O11)的總量計，不得少于6.0％；本品含總銀杏酸不得過百萬分之十。
銀杏葉總黃酮為銀杏葉經(jīng)提取加工制成的總黃酮類提取物。銀杏葉總黃酮是銀杏葉的主要有效成分，包括銀杏雙黃酮(Gilobetin)、異銀杏雙黃酮(Isoginkgetin)、白果素(Bilobetin)、蕓香甙(Rutin)、槲皮素(Ouercetin)、山奈酚(Kaempferol)、異鼠李素(Isorhamnetin)等。大量的實驗研究表明，銀杏葉總黃酮具有擴血管、降血脂、抗凝血、清除自由基、抗白血病、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗輻射等作用，對于心腦血管疾病等有良好的治療作用。
銀杏內(nèi)酯為銀杏葉經(jīng)提取加工制成的萜類內(nèi)酯提取物。銀杏內(nèi)酯也是銀杏葉的主要有效成分，包括銀杏內(nèi)酯A(Ginkgo lide A)、銀杏內(nèi)酯B(Ginkgo lide B)、銀杏內(nèi)酯C(Ginkgo lide C)以及新銀杏內(nèi)酯A(Bilobalide A，白果內(nèi)酯)等。藥理和臨床研究表明，銀杏內(nèi)酯是血小板活化因子(PAF)受體專一、高效的強抑制劑，可以選擇性的拮抗由PAF誘導的血小板聚集，可有效的防止血小板聚集和血栓的形成，其中以銀杏內(nèi)酯B的選擇性和活性最強。銀杏內(nèi)酯對中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用主要表現(xiàn)為能降低腦血管阻力，增加腦血流量，促進腦血循環(huán)；能阻止腦缺血后引起的損傷，明顯改善腦缺血狀態(tài)，顯著抑制缺血引起的腦水腫、電解質(zhì)紊亂、炎性細胞浸潤。銀杏內(nèi)酯對血液循環(huán)系統(tǒng)的作用主要表現(xiàn)為可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善缺血病人的微循環(huán)，減少血栓形成。
紅景天為景天科植物大花紅景天Rhodiola crendata(Hook.F.et Thoms.)H.Ohba的干燥根及根莖；也可以是景天科(Crassulaceae)紅景天屬(Rhodiola L.)其它植物的干燥根及根莖，例如高山紅景天(Rhodiolasachalinensis)、西藏紅景天(Rhodiola kirilow)、玫瑰紅景天(Rhodiola rosea)、菱葉紅景天(Rhodiola henryi)、狹葉紅景天(Rhodiola kirilowii)、裂葉紅景天(Rhodiola quadtifida)、長鞭紅景天(Rhodiola fasskisa)、喜馬紅景天(Rhodiola himalensis)、圣地紅景天(Rhodiola saera)、帕米爾紅景天(Rhodiola pantiro)、云南紅景天(Rhodiola yunnanensis)、大紫紅景天(Rhodiola atropupurea)、互生紅景天(Rhodiola alterna)等?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》中紅景天被列為藥中上品，無毒，有“輕身益氣”之功效。近年來，為綜合利用紅景天屬藥用植物資源，開展了廣泛的研究?，F(xiàn)代研究表明，該類植物含有多種活性成分，紅景天及其提取物具有提高機體高原適應(yīng)能力、抗疲勞、抗缺氧、抗輻射、抗低溫、抗衰老、抗病毒、抗腫瘤，提高學習記憶力，機體免疫雙向調(diào)節(jié)，抑制血糖升高，治療肝、肺損傷及腎間質(zhì)纖維化等作用。近年的研究結(jié)果表明，紅景天在心腦血管疾病的防治方面亦具有獨特的作用能降低心肌耗氧量和耗氧指數(shù)，抗心律失常，劑量增大能降低冠狀動脈阻力，但是對冠脈血流量無顯著影響，具有一定的降低血壓和減慢心跳速率作用，可以抑制血小板聚集和抗體外血栓形成，對心肌缺氧引起的心肌損傷和腦血管阻塞引起的腦缺氧有著良好的治療保護作用。
目前，利用銀杏葉或其提取物、或者銀杏葉總黃酮、或者銀杏內(nèi)酯與紅景天或其提取物的相互作用，配伍組方，制備治療心腦血管疾病等的藥物，尚未見報道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療心腦血管疾病等，提高人民的健康水平，本發(fā)明提供了用于制備治療心腦血管疾病藥物的組合物及其制備方法，以及含有該藥物組合物的制劑。
本發(fā)明藥物組合物由銀杏葉或其提取物、紅景天或其提取物制備而成。按照重量組份計算，由銀杏葉200～2500份或銀杏葉提取物2～100份、紅景天250～2000份或紅景天提取物2.5～400份制備而成；優(yōu)選為由銀杏葉600～1800份或銀杏葉提取物6～72份、紅景天500～1500份或紅景天提取物5～300份制備而成。
上述藥物組合物中的銀杏葉提取物含總黃酮醇苷不低于24.0％，萜類內(nèi)酯不低于6.0％，總銀杏酸不超過百萬分之十、最好不超過百萬分之一；紅景天提取物含紅景天苷不低于3％，總酚和/或多糖不低于50％。
上述藥物組合物中的銀杏葉、紅景天可以用適宜的溶劑和方法單獨提取加工得到提取物銀杏葉提取物和紅景天提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合加工制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。
上述藥物組合物中的銀杏葉提取物可以通過下列工藝制備，但不僅限于下列工藝工藝一取銀杏葉，粉碎，加75％乙醇回流提取兩次，第一次加醇10倍量，提取3小時，第二次加醇8倍量，提取2小時，合并濾液，濾液濃縮至含醇約5％～10％，加入等量的水，攪勻，1～4℃冷藏24～48小時，離心，取上清液上柱，分別用3～4倍量體積水、15％乙醇、75乙醇洗滌，收集75％乙醇液，減壓濃縮至藥材量的1/3體積數(shù)，靜置，濾過，濾液減壓濃縮，真空干燥，粉碎，即得。通過上述工藝制備的銀杏葉提取物得率為1～4％，含總黃酮醇苷不低于24.0％，萜類內(nèi)酯不低于6.0％。
工藝二取銀杏葉，粉碎，加入60％的丙酮水溶液，57～59℃劇烈攪拌30min，濾過，重復上述步驟，再提取一遍，合并濾液，濾液減壓濃縮至含固體物約30％～40％(此時丙酮的含量約5％)。加水稀釋至原體積的2倍，攪拌下冷卻至約12℃，保溫1小時，離心，棄去沉淀，上清液按30％加入硫酸銨，攪勻，使全溶，用丁酮-丙酮混合溶液(6∶4)萃取2次，每次為水溶液的0.5倍量，丁酮-丙酮混合溶液減壓濃縮至含固體物50％～70％，加入水使含固體物約10％，用1/2體積的水飽和正丁醇萃取3次，正丁醇液減壓濃縮至含固體物至少50％以上，然后加入適量水再繼續(xù)濃縮，在所得濃縮液中加入水及乙醇，使固體物含量達10％，醇濃度達30％，加入正己烷萃取3次，每次1/3量的，水相濃縮，并減壓干燥(60～80℃)，即得。通過上述工藝制備的銀杏葉提取物得率為1～3％，含總黃酮醇苷不低于24.0％，萜類內(nèi)酯不低于6.0％。
工藝三取銀杏葉，粉碎，先用12倍量60％乙醇溶液加熱回流二次，每次3小時，濾過，合并乙醇提取液，濃縮成稠膏，用熱水溶解成每1ml相當于0.5g原藥材的溶液，靜置冷卻，濾過，濾液上大孔樹脂(DA201)柱，分別用18％、30％、及50％濃度的乙醇洗脫，18％、30％乙醇脫液濃縮至無醇味，上聚酰胺柱，以95％乙醇洗脫，將大孔樹脂的50％乙醇洗脫液與聚酰胺柱的洗脫液合并，濃縮至無乙醇味，以環(huán)己烷萃取，棄去環(huán)己烷萃取液，濃縮液噴霧干燥，即得。通過上述工藝制備的銀杏葉提取物得率為1～3％，含總黃酮醇苷不低于24.0％，萜類內(nèi)酯不低于6.0％。
工藝四取銀杏葉，粉碎，加70％乙醇60℃溫浸提取兩次，每次加醇15倍量，攪拌下溫浸2小時，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至相對密度為1.03～1.09(50℃)，加入4倍量的水，攪勻，1～4℃冷藏過夜，濾過，濾液上柱，分別用3～4倍量體積水、15％乙醇、70乙醇洗滌，收集70％乙醇液，減壓濃縮，真空干燥，浸膏加5倍量乙醇提取二次，每次15分鐘，合并濾液，減壓濃縮，真空干燥，浸膏加8倍量水，加熱至沸騰，微沸5分鐘，放置室溫，1～4℃冷藏過夜，濾過，濾液加25％粗提物的聚酰胺，攪拌5分鐘，濾過，減壓濃縮，真空干燥，即得。通過上述工藝制備的銀杏葉提取物得率為1～3％，含總黃酮醇苷不低于24.0％，萜類內(nèi)酯不低于6.0％。
上述藥物組合物中的紅景天提取物可以通過下列工藝制備，但不僅限于下列工藝工藝一取紅景天藥材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次，每次1小時，第一次加醇10倍量，第二、三次分別為8、8倍量。濾過，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂后，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為10～20％，含紅景天苷不低于3％。
必要時還可進一步精制將上述得到的紅景天粗提物用適量水溶解后，加于已事先處理好的大孔樹脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min，減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為1～4％，含紅景天苷不低于10％。
工藝二取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液用半量石油醚提取三次，棄去石油醚，再用等量正丁醇提取四次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚不低于50％。
工藝三取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，取濃縮液，上大孔樹脂柱或聚酰胺柱，先用濃縮液重量30倍量的水洗脫，棄去洗脫液，再用30倍量80％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚不低于50％。
工藝四取紅景天藥材，加60％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇使乙醇含量為80％，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，濾液減壓回收乙醇，真空干燥或噴霧干燥，即得。或者將濾液減壓回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，用等量正丁醇提取四次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚不低于50％。
工藝五取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，用等量正丁醇提取四次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于4％，總酚不低于50％。
工藝六取紅景天藥材，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時，第二次加10倍量，回流2小時。提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，分成兩份，一份用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物A；另一份加乙醇使含醇量達85％，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得提取物B；將提取物A和提取物B合并即得總提取物。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝七取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物C；藥渣加10倍量水提取三次，每次2小時，合并濾液，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇至含醇量達85％，靜置24小時以上，過濾，沉淀物洗滌，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物D；合并提取物C和提取物D即得總提取物。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為7～9％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝八取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，上聚酰胺柱，先用水洗脫，再用80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，真空干燥或噴霧干燥，得提取物E；水洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇至含醇量達90％，靜置24小時以上，過濾，沉淀物洗滌，真空干燥或噴霧干燥，得提取物F；合并提取物E和提取物F，即得總提取物。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝九取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時，第二次加8倍量，回流1小時，第三次加8倍量，回流1小時，合并提取液，過濾，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液加2倍量水，攪勻，冷藏24小時以上，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物G；水液加乙醇使含醇量達85％，攪勻，靜置24小時以上，過濾，沉淀物洗滌，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物H；合并提取物G和提取物H即得總提取物。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝十取紅景天藥材，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時，第二次加10倍量，回流2小時，提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇使含醇量達85％，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得。通過本工藝制備的紅景天提取物得率為4～6％，含紅景天苷不低于3％，多糖不低于50％。
本發(fā)明藥物組合物也可以由銀杏葉總黃酮、紅景天或其提取物制成。按照重量組份計算，可以由銀杏葉總黃酮1～100份、紅景天250～2000份或紅景天提取物2.5～400份制備而成；優(yōu)選為由銀杏葉總黃酮2～50份、紅景天500～1500份或紅景天提取物5～300份制備而成。
上述藥物組合物中的銀杏葉總黃酮含總黃酮醇苷以槲皮素、山奈酚和異鼠李素的含量之和計不低于50％；紅景天提取物含紅景天苷不低于3％，總酚和/或多糖不低于50％。
上述藥物組合物中的銀杏葉總黃酮可以通過下列工藝制備，但不僅限于下列工藝取銀杏葉，切碎，加70％乙醇80℃溫浸提取兩次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水適量得每1ml相當于原藥材1g的混懸液，冷藏12小時，離心，取上清液，加于已處理好的聚酰胺柱(100g，30～60目，乙醇濕法裝柱，先用2倍柱體積的乙醇沖柱，再改用水洗至近無醇味，備用)上，先用3倍柱體積的水沖洗，再用2倍柱體積的10％的乙醇沖洗，棄去洗脫液，改用4倍柱體積的80％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度1.08～1.10，噴霧干燥，即得。通過本工藝制備的銀杏葉總黃酮得率為1～2％，含總黃酮醇苷以槲皮素、山奈酚和異鼠李素的含量之和計不低于50％。
上述藥物組合物中的紅景天可以用適宜的溶劑和方法提取加工得到紅景天提取物，再與銀杏葉總黃酮和藥學上可接受的輔料混合加工制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。紅景天提取物可以通過前述紅景天提取物的工藝制備，但不僅限于前述工藝。
本發(fā)明藥物組合物還可以由銀杏內(nèi)酯、紅景天或其提取物制成。按照重量組份計算，還可以由銀杏內(nèi)酯0.2～50份，紅景天250～2000份或紅景天提取物2.5～400份制備而成；優(yōu)選為由銀杏內(nèi)酯0.5～10份，紅景天500～1500份或紅景天提取物5～300份制備而成。
上述藥物組合物中的銀杏內(nèi)酯可以通過下列工藝制備，但不僅限于下列工藝取銀杏葉，切碎，加70％乙醇80℃溫浸提取兩次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水適量得每1ml相當于原藥材1g的混懸液；加1/2量的石油醚振搖提取4次，棄去石油醚提取液；再用1/2量的乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，減壓回收溶劑，蒸干，殘渣加30％乙醇加熱使溶解，放置析晶，結(jié)晶再用30％乙醇重結(jié)晶一次，即得。通過本工藝制備的銀杏內(nèi)酯得率為0.2～0.5％，含萜類內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)、銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)和銀杏內(nèi)酯C(C20H24O11)的含量之和計不低于50％。
上述藥物組合物中的銀杏內(nèi)酯含萜類內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量之和計不低于50％；紅景天提取物含紅景天苷不低于3％，總酚和/或多糖不低于50％。
上述藥物組合物中的紅景天可以用適宜的溶劑和方法提取加工得到紅景天提取物，再與銀杏葉總黃酮和藥學上可接受的輔料混合加工制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。紅景天提取物可以通過前述紅景天提取物的工藝制備，但不僅限于前述工藝。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。以上組成，若以克為單位，可以制成10～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。以上組成是按重量份作為配比的，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位。以上重量份數(shù)對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發(fā)明藥物組合物可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
銀杏葉或其提取物與紅景天或其提取物的藥物組合物，具有抑制血小板凝集及抗血栓形成、改善血流動力學、增加冠脈和腦血流量、改善心肌供血功能、提高心肌耐缺氧能力、清除體內(nèi)過多的自由基、調(diào)節(jié)機體免疫等多種藥理作用。藥理藥效研究表明，銀杏葉或其提取物與紅景天或其提取物的藥物組合物可以顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間，顯著抑制二磷酸腺苷誘導的大鼠血小板凝集，顯著改善麻醉開胸犬的血流動力學，顯著提高小鼠常壓耐缺氧能力，顯著改善大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)損傷癥狀、縮小腦梗塞體積，顯著提高免疫抑制小鼠的細胞免疫和體液免疫功能。
銀杏葉總黃酮與紅景天或其提取物的藥物組合物，具有擴血管、抗心律失常、降血壓、抑制血小板聚集和抗體外血栓形成、降低心肌耗氧量和耗氧指數(shù)、保護腦血管阻塞引起的腦缺氧、降血脂、抗缺氧、調(diào)節(jié)機體免疫等多種藥理作用。藥理藥效研究表明，銀杏葉總黃酮與紅景天或其提取物的藥物組合物可使顯著改善小鼠耳廓微循環(huán)，顯著抑制二磷酸腺苷誘導的大鼠血小板凝集，顯著減小大鼠因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電、生化指標的異常改變和顯著減小心肌缺血范圍，顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平，顯著提高小鼠常壓耐缺氧能力。
銀杏內(nèi)酯與紅景天或其提取物的藥物組合物，具有降低腦血管阻力、增加腦血流量、促進腦血循環(huán)，抑制血小板聚集和抗血栓形成、降低血液粘度、改善微循環(huán)，保護缺血及缺氧引起的腦損傷和心肌損傷、降低冠狀動脈阻力、降低血壓和減慢心跳速率、抗心律失常，消除自由基，調(diào)節(jié)機體免疫等多種藥理作用。藥理藥效研究表明，銀杏內(nèi)酯與紅景天或其提取物的藥物組合物對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡有顯著保護作用，顯著抑制二磷酸腺苷誘導的大鼠血小板凝集，顯著改善大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)損傷癥狀、降低缺血再灌注損傷腦組織含水量、減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度、縮小腦梗塞體積，顯著降低大鼠收縮壓和舒張壓，顯著提高小鼠常壓耐缺氧能力。
本發(fā)明組合物可以與藥學上可接受的輔料制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑或口服制劑；可以腸胃外或口服給藥等方式施用于需要這種治療的患者。
用于腸胃外給藥時，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內(nèi)注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規(guī)格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射劑時，可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
用于口服時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑，依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法制成的球狀或類球狀固體制劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。口服溶液劑系指藥物溶解于適宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑?？诜鞈覄┫抵鸽y溶性固體藥物，分散在液體介質(zhì)中，制成供口服的混懸液體制劑，也包括干混懸劑或濃混懸液。糖漿劑系指含有藥物的濃蔗糖水溶液。
制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預膠化淀粉、甘露醇等；常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；常用崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
綜上所述，本發(fā)明藥物組合物具有下列優(yōu)點
(1)首次提供了銀杏葉或其提取物和紅景天或其提取物、或銀杏葉總黃酮和紅景天或其提取物、或銀杏內(nèi)酯和紅景天或其提取物的藥物組合物，可以用于制備治療心腦血管疾病的藥物，并通過藥理實驗證實兩者有協(xié)同增效的作用，優(yōu)于兩者單獨用藥。
(2)對本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進行了大量摸索研究，通過研究本發(fā)明藥物組合物對大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間的影響、對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用、對免疫抑制小鼠的免疫功能的影響、對小鼠耳廓微循環(huán)的影響、對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響，篩選出具有顯著療效的重量配比范圍。
(3)藥理藥效研究表明，本發(fā)明藥物組合物具有協(xié)同增效作用，可以顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間，顯著抑制二磷酸腺苷誘導的大鼠血小板凝集，顯著改善麻醉開胸犬的血流動力學，對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血具有顯著保護作用，顯著降低大鼠收縮壓和舒張壓，對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡有顯著保護作用，對大鼠腦缺血再灌注損傷的具有顯著保護作用，顯著改善小鼠耳廓微循環(huán)，顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平，顯著提高小鼠常壓耐缺氧能力，顯著提高免疫抑制小鼠的細胞免疫和體液免疫功能。在治療心腦血管疾病方面有顯著效果，是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所意想不到的。
(4)本發(fā)明藥物組合物，可以以原藥材或提取物投料，制備工藝簡便，有效成分明確、含量高，制劑質(zhì)量較高，雜質(zhì)含量較少，穩(wěn)定性好，安全性更高，可以保證臨床用藥安全。
(6)對銀杏葉提取物、紅景天提取物、銀杏葉總黃酮、銀杏內(nèi)酯分別進行了質(zhì)量控制，并提供了多個制備工藝，簡便易行，且提取物質(zhì)量較好，適應(yīng)于工業(yè)化大生產(chǎn)。
以下通過實驗例來進一步闡述本發(fā)明的藥物組合物的有益效果，這些實驗例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學實驗、穩(wěn)定性實驗。本發(fā)明藥物組合物具有下列有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明藥物組合物僅具有下列有益效果。
以下實驗例中用YTH代替銀杏葉或其提取物與紅景天或其提取物的組合物，用YHH代替銀杏葉總黃酮與紅景天或其提取物的組合物，用YNH代替銀杏內(nèi)酯與紅景天或其提取物的組合物。實驗例1～10中所用的紅景天提取物為實施例4制備所得，實驗例11中所用的紅景天提取物為實施例5制備所得，實驗例12中所用的紅景天提取物為實施例6制備所得。
實驗例1 銀杏葉與紅景天合并用藥藥效研究實驗——大鼠實驗性頸動脈血栓形成實驗受試動物 雄性大鼠，280只，體重240～280g，隨機分為14組，每組20只。
供試品 銀杏葉注射液自制，2ml:20mg(相當于原藥材1.2g)；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；(銀杏葉+紅景天)注射液自制，配比見表1-1；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 10mg/kg(以提取物計)，模型組給予氯化鈉注射液。
實驗方法 大鼠用2.5％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動脈，采用電流損傷頸動脈內(nèi)膜法，用BT87-3實驗性體內(nèi)血栓形成儀測定不同組別動物頸動脈血栓形成時間。將刺激電極和溫度探頭掛于頸總動脈上，按表1-1所示腹腔注射給藥，給藥后10min開始刺激，刺激強度為2mA，刺激5min后關(guān)閉刺激開關(guān)，取下電極，3min后調(diào)節(jié)溫控表至零位，觀察動脈溫度突降時間。記錄電刺激開始至主動脈溫度突降的時間，該時間定為頸動脈血栓形成時間(超過3000秒者以3000秒計)。
表1-1 銀杏葉與紅景天合并用藥對大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間的影響(X±SD，n＝20)
*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，與模型組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表1-1。與模型組相比較，銀杏葉200～2500份與紅景天500～1500份均可極顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間(p＜0.01，p＜0.001)，銀杏葉可極顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間(p＜0.01)，紅景天可顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間(p＜0.05)。銀杏葉200～2500份與紅景天500～1500份各個份數(shù)比的作用均優(yōu)于銀杏葉或紅景天單獨給藥的效果，提示銀杏葉與紅景天合并用藥有協(xié)同增效作用，其中銀杏葉600～1800份與紅景天500～1500份的效果更好。
實驗例2 銀杏葉總黃酮與紅景天合并用藥藥效研究實驗——小鼠耳廓微循環(huán)實驗受試動物 雄性小鼠，240只，體重20～25g，隨機分為12組，每組20只。
供試品 銀杏葉總黃酮注射液自制，1ml:10mg；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；(銀杏葉總黃酮+紅景天)注射液自制，配比見表1-2；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 10mg/kg(以提取物計)，對照組給予氯化鈉注射液。
實驗方法 小鼠按表1-2灌胃給藥后，用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉。麻醉后的小鼠置于鋪有棉花的托板上，保持室溫20±2℃。將小鼠右耳置于耳托架上，在右耳上滴少許液體石蠟，將托板置于顯微鏡載物臺上，調(diào)節(jié)冷光源，使照明光線與耳廓平面成45°～60°夾角，并與毛的生長方向相平行。先在低倍鏡下觀察耳廓全貌，選擇適當部位，換用高倍鏡進行定點連續(xù)觀察。觀察給藥后20min的微循環(huán)狀態(tài)，測量微動脈、微靜脈的直徑和血流速度。
表1-2 銀杏葉總黃酮與紅景天合并用藥對小鼠耳廓微循環(huán)的影響(X±SD，n＝20)
*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表1-2。與對照組相比較，銀杏葉總黃酮2～50份與紅景天500～1500份均可使小鼠耳微動脈、微靜脈管徑極顯著增大(p＜0.01)，血流速度極顯著加快(p＜0.01)；銀杏葉總黃酮可使小鼠耳微動脈、微靜脈管徑顯著增大(p＜0.05)，血流速度顯著加快(p＜0.05)；紅景天可使小鼠耳微動脈、微靜脈管徑增大，血流速度加快，但是無顯著性差異。銀杏葉總黃酮2～50份與紅景天500～1500份各個份數(shù)比的作用均優(yōu)于銀杏葉總黃酮或紅景天單獨給藥的效果，提示銀杏葉總黃酮與紅景天合并用藥有協(xié)同增效作用。
實驗例3 銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥藥效研究實驗——小鼠體內(nèi)血栓形成實驗受試動物 雄性小鼠，360只，體重20～25g，隨機分為36組，每組10只。
供試品 銀杏內(nèi)酯注射液自制，1ml:1mg；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；(銀杏內(nèi)酯+紅景天)注射液自制，配比見表1-3；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1-3。
實驗方法 按照表1-3所列給藥劑量，灌胃給藥1小時后，尾靜脈注射膠原蛋白-腎上腺素混合血栓誘導劑每只0.1mg。注射后20min內(nèi)記錄小鼠偏癱恢復數(shù)，并計算各給藥組對小鼠腦血栓形成的保護率(死亡保護率＝對照組死亡數(shù)-給藥組死亡數(shù)/對照組死亡數(shù))，按公式q＝EAB/(EA+EB-EA×EB)求出各組q值。
表1-3 銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥對小鼠腦血栓死亡的保護作用(X±SD，n＝10)
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-3。結(jié)果表明，銀杏內(nèi)酯0.2～50份與紅景天250～2000份均對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡有保護作用，且均高于相對應(yīng)的銀杏內(nèi)酯或紅景天單獨用藥的效果。金氏概率相加法表明，銀杏內(nèi)酯與紅景天按表1-3所示重量份數(shù)配伍，藥效增強，呈現(xiàn)協(xié)同作用。根據(jù)計算所得的q值，優(yōu)選份數(shù)比范圍為銀杏內(nèi)酯0.5～10份、紅景天500～1500份。
實驗例4 本發(fā)明藥物組合物對大鼠血小板凝集作用的影響受試動物 雄性大鼠，80只，體重200～220g，隨機分為8組，每組10只。
供試品 YTH注射液自制，2ml，含銀杏葉提取物20mg(相當于原藥材1.2g)、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；YHH注射液自制，2ml，含銀杏葉總黃酮10mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；YNH注射液自制，2ml，含銀杏內(nèi)酯1mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；銀杏葉提取物注射液自制，2ml:20mg(相當于原藥材1.2g)；銀杏葉總黃酮注射液自制，1ml:10mg；銀杏內(nèi)酯注射液自制，1ml:1mg；紅景天提取物注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1-4，對照組給予氯化鈉注射液。
實驗方法 各組動物按表1-4陰莖靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥1小時后，以30％戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉，自腹主動脈取血，用3.28％枸櫞酸鈉抗凝(與全血以1∶9混合)。將抗凝全血在20℃條件下1500rpm離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000rpm離心10min，獲得自身對照貧血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恒溫孔中預熱后，加入二磷酸腺苷(ADP，終濃度為3μmol·L-1)誘導血小板聚集，記錄最大聚集率，并計算血小板聚集抑制率＝(對照組聚集率-藥物組聚集率)/對照組聚集率×100％。
表1-4 本發(fā)明藥物組合物對大鼠血小板凝集作用的影響(X±SD，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表1-4。與對照組相比較，YTH、YHH、YNH均極顯著的抑制血小板凝集(p＜0.01)，銀杏葉提取物、銀杏葉總黃酮、銀杏內(nèi)酯、紅景天提取物均顯著抑制血小板凝集(p＜0.05)。YTH的效果優(yōu)于銀杏葉提取物或紅景天提取物單獨給藥的效果，YHH優(yōu)于銀杏葉總黃酮或紅景天提取物單獨給藥的效果，YNH優(yōu)于銀杏內(nèi)酯或紅景天提取物單獨給藥的效果，提示銀杏葉提取物與紅景天提取物、銀杏葉總黃酮與紅景天提取物、銀杏內(nèi)酯與紅景天提取物合并用藥均具有協(xié)同增效作用。在抑制血小板凝集、抗血栓形成以及治療血栓性疾病方面將有顯著療效。
實驗例5 銀杏葉與紅景天合并用藥對麻醉開胸犬血流動力學的影響受試動物 雜種犬，30只，體重11.0～13.0kg，隨機分為6組，每組5只。
供試品 YTH注射液自制，2ml，含銀杏葉提取物20mg(相當于原藥材1.2g)、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；銀杏葉注射液自制，2ml:20mg(相當于原藥材1.2g)；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 YTH注射液低劑量組5mg/kg、中劑量組10mg/kg、高劑量組15mg/kg，銀杏葉注射液10mg/kg，紅景天注射液15mg/kg，模型組給予氯化鈉注射液5ml。
實驗方法 犬用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈注射麻醉后，采取右側(cè)臥位正壓人工呼吸下，于左4～5脅間開胸，于距迷走神經(jīng)2cm處打開心包，壁層做懸床將其縫合于胸壁，使心臟充分暴露。分離主動脈，在主動脈根部套入電磁流量計探頭(10～12mm)，測量心輸出量(CO)；在冠狀動脈左前降支根部，分離心外膜，分離出約1cm冠狀動脈，套入電磁流量計探頭(2～3mm)，測量冠脈流量(CBF)；將此二探頭連于LMTC-621型電磁流量計上，分離一側(cè)頸動脈，插管，連接壓力換能器，記錄動脈血壓(AP)及平均動脈壓(MAP)；將內(nèi)徑為1.5mm的心導管從心尖插入左心室，通過YZ-1型壓力換能器經(jīng)載波放大左室內(nèi)壓(LVP)，LVP電訊號經(jīng)直流放大器放大10倍，記錄左室舒張末期壓(LVEDP)，以LVP電訊號再經(jīng)BMI型微分器微分記錄左室內(nèi)壓變化速率(dp/dtmax)，用針型電極插入受試動物四肢皮下，記錄標II導聯(lián)心電圖(EGG-II)，以測量心率(HR)。上述指標變化均同步記錄于RM-6300生理多導儀。
分離股動脈抽動脈血，經(jīng)頸外動脈插管至冠狀靜脈竇抽取靜脈血，根據(jù)CY-2測氧儀使用說明書，用新鮮配制的無氧溶液(0.01M硼砂溶液加入無水亞硫酸鈉結(jié)晶配制成2％的亞硫酸鈉溶液)調(diào)零，用與空氣平衡溫度恒定的蒸餾水作靈敏度調(diào)節(jié)。待儀器穩(wěn)定后用測氧儀測定血氧含量。實驗結(jié)束后計算心肌耗氧量。
手術(shù)結(jié)束后，觀察上述各項指標，穩(wěn)定后將記錄值作為給藥前的指標，靜脈給藥后于1、5、10、20、30min，采集上述各項指標，并以給藥后各時間點的各項指標變化率(％)，與對照組各對應(yīng)時間點的各項指標變化率(％)做組間顯著性成對資料的t-test處理。
實驗結(jié)果及結(jié)論與模型組相比較，YTH可極顯著降低受試犬心率(HR)、平均動脈壓(MBP)、左室內(nèi)壓(LVP)、心室肌收縮力(dp/dtmax)和心肌耗氧量(p＜0.01)；銀杏葉可顯著降低受試犬的上述指標(p＜0.05)；紅景天可顯著降低受試犬心率(HR)和心肌耗氧量(p＜0.05)，可降低受試犬平均動脈壓(MBP)、左室內(nèi)壓(LVP)和心室肌收縮力(dp/dtmax)，但是無顯著性差異。YTH給藥組的效果優(yōu)于銀杏葉組或紅景天組，提示銀杏葉與紅景天合并用藥有協(xié)同作用，在治療缺血性心腦血管疾病方面將有顯著療效。
實驗例6 銀杏葉總黃酮與紅景天合并用藥對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響受試動物 大鼠，60只，體重200～220g，雌雄兼用，隨機分為6組，每組10只。
供試品 YHH注射液自制，2ml，含銀杏葉總黃酮10mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1mg)；銀杏葉總黃酮注射液自制，2ml:10mg；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1mg)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1-5。
實驗方法 大鼠用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定，記錄心電，接人工呼吸機進行人工呼吸，打開胸腔，剪開心包，各組動物按表1-5靜脈注射給藥，模型組給予氯化鈉注射液，3min后結(jié)扎左側(cè)冠狀動脈前降枝，全程記錄心電30min，結(jié)扎后1h取血，檢測磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)。取出大鼠心臟，沿結(jié)扎線將心室肌均勻橫切4片，0.5％氯化硝基四氮唑蘭染色，用求積儀測每片心肌兩面的缺血面積，計算心肌缺血面積占心室面積的百分比。
表1-5 銀杏葉總黃酮與紅景天合并用藥對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響(X±SD，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-5。結(jié)扎后，模型組大鼠心電的QRS波均突然異常增高、加寬，心肌大范圍缺血，生化檢測表現(xiàn)為CK和LDH均異常增高。與模型組相比較，YHH各劑量均能極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標的異常改變(p＜0.01)，極顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.01)；銀杏葉總黃酮能極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標的異常改變(p＜0.01)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.05)；紅景天能顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標的異常改變(p＜0.05)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.05)。YHH各劑量的效果均優(yōu)于銀杏葉總黃酮或紅景天單獨給藥的效果，提示銀杏葉總黃酮與紅景天具有協(xié)同增效作用，在治療缺血性心腦血管疾病方面將有顯著療效。
實驗例7 銀杏葉總黃酮與紅景天提取物合并用藥對大鼠實驗性高血脂癥的影響受試動物 健康雄性大鼠，50只，體重200～240g，隨機分為5組，每組10只。
供試品 注射用YHH自制，含銀杏葉總黃酮10mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 注射用YHH低劑量組5mg/kg、中劑量組10mg/kg、高劑量組15mg/kg，對照組及高脂模型組給予氯化鈉注射液1ml。
實驗方法 各組大鼠測藥前膽固醇及甘油三酯水平后，建高脂模型。除空白對照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂飼料(配方為普通飼料86.8％、膽固醇3％、豬油10％、丙硫氧嘧淀0.2％)，連續(xù)喂飼10天后，測血清膽固醇及甘油三酯水平，確定高脂模型建成。模型建成后繼續(xù)飼高脂飼料，給藥組分別灌胃給予低、中、高劑量注射用YHH，對照組及高脂模型組給予氯化鈉注射液，每日1次，連續(xù)給藥20天后，再取血測膽固醇及甘油三酯水平。
表1-6 銀杏葉總黃酮與紅景天提取物合并用藥對飲食性高血脂大鼠血清膽固醇的影響(X±SD，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與高脂模型組相比較。
表1-7 銀杏葉總黃酮與紅景天提取物合并用藥對飲食性高血脂大鼠血清甘油三酯的影響(X±SD，n＝10)
*p＜0.05，與高脂模型組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表1-6、1-7。與對照組相比較，高脂模型組大鼠血清膽固醇和甘油三酯均極顯著升高(p＜0.001)。與高脂模型組相比較，YHH低劑量可顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平(p＜0.05)；YHH中劑量和高劑量可極顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇水平(p＜0.01)，顯著降低甘油三酯水平(p＜0.05)。YHH有良好的降血脂功能，在治療高血脂癥方面將有顯著療效。
實驗例8 銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用受試動物 大鼠，140只，雌雄兼用，體重200～220g，隨機分為假手術(shù)組、缺血再灌注組、YNH注射液低、中、高劑量治療組，銀杏內(nèi)酯注射液治療組、紅景天注射液治療組，每組20只。
供試品 YNH注射液自制，2ml，含銀杏內(nèi)酯1mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；
銀杏內(nèi)酯注射液自制，1ml:1mg；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1-8，假手術(shù)組和缺血再灌注組給予氯化鈉注射液。
實驗方法 大鼠用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動脈近心端、頸外動脈及其分支動脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動脈，沿頸內(nèi)動脈向下分離翼顎動脈，根部結(jié)扎該分支。在頸內(nèi)動脈近端備線、遠端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，插入尼龍線(深度為17～20mm)，拴線進入頸內(nèi)動脈，入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。撤掉動脈夾，扎緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚。缺血1h后灌胃給藥或氯化鈉注射液，繼續(xù)缺血1h后再灌注，勿需再次麻醉和切開皮膚，輕輕提拉所留線頭至有阻力時提示尼龍線頭端已至頸總動脈切口處，血流再通。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。存活鼠再灌注24h后，觀察大鼠行為變化，進行行為評分。參考zea Longa的5分制評分標準0分，正常，無神經(jīng)損傷癥狀；1分，不能完全伸展對側(cè)前爪；2分，向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向?qū)?cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識喪失。然后快速斷頭取鼠大腦。一部分(每組10只)分別稱左右腦半球濕重，置160℃烤箱內(nèi)24h后稱干重，按以下公式計算腦組織含水量腦組織含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％；一部分(每組10只)在前連合平面切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2％TIE溶液中，37℃孵育30min。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。用求積儀(C63圖像分析系統(tǒng))測出各區(qū)面積，并計算梗塞區(qū)占全腦的百分比(％)。
表1-8 銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用(X±SD，n＝20)
◆p＜0.05，◆◆p＜0.01，與假手術(shù)組相比較；*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，與缺血再灌注組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-8。
(1)對行為的影響假手術(shù)組大鼠均無異常癥狀，神經(jīng)行為學評分為0。缺血再灌注組出現(xiàn)不能完全伸展對側(cè)前爪或向外側(cè)轉(zhuǎn)圈或向?qū)?cè)傾倒的神經(jīng)損傷癥狀，神經(jīng)行為學評分為1.8±0.7。與缺血再灌注組相比較，YNH低、中、高三個劑量均可極顯著降低神經(jīng)行為學評分，分別為0.7±0.4、0.6±0.3、0.4±0.3(p＜0.01、p＜0.001)，降低程度有劑量依賴關(guān)系；銀杏內(nèi)酯可顯著降低神經(jīng)行為學評分(p＜0.05)；紅景天可降低神經(jīng)行為學評分，但無顯著性差異。
(2)對腦組織含水量的影響缺血再灌注組的缺血再灌注側(cè)(大腦右半球)腦組織含水量極顯著高于假手術(shù)組(p＜0.01)。YNH低劑量組的腦組織含水量顯著低于缺血再灌注組(p＜0.05)；YNH中、高劑量組的腦組織含水量極顯著低于缺血再灌注組(p＜0.01)。銀杏內(nèi)酯治療組的腦組織含水量高于假手術(shù)組，但無顯著性差異。紅景天治療組的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組(p＜0.05)，低于缺血再灌注組，但無顯著性差異。
(3)對梗死面積的影響假手術(shù)組腦組織無梗塞。缺血再灌注組的缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象，梗塞體積占全腦的37.17％。與缺血再灌注組相比較，YNH低、中、高三個劑量均可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p＜0.05、p＜0.01)，銀杏內(nèi)酯可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p＜0.05)，紅景天可縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積，但無顯著性差異。
上述實驗結(jié)果表明，銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥可顯著改善局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)損傷癥狀，降低缺血再灌注損傷腦組織含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度縮小腦梗塞體積，作用強度有劑量依賴關(guān)系。YNH低、中、高劑量組在各項指標中的效果均優(yōu)于銀杏內(nèi)酯或紅景天單獨用藥的效果，提示銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥具有協(xié)同增效作用，在治療缺血性心腦血管疾病方面將有顯著療效。
實驗例9 銀杏內(nèi)酯與紅景天提取物合并用藥對大鼠血壓的影響受試動物 健康雄性大鼠，60只，體重200～230g，隨機分為6組，每組10只。
供試品 注射用YNH自制，含銀杏內(nèi)酯1mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；銀杏內(nèi)酯注射液自制，1ml:1mg；紅景天提取物注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1-9。
實驗方法 各組大鼠均以2％戊巴比妥鈉45mg/kg腹腔注射麻醉。分離氣管，插入氣管套管；分離右頸總動脈，插管后經(jīng)壓力換能器連接GY-40四道生理記錄儀記錄收縮壓(SAP)和舒張壓(DAP)同時記錄肢體II導聯(lián)心電圖。按表1-9通過WZ-50G微量注射泵以每小時10ml/kg注入股靜脈，對照組給予氯化鈉注射液。觀察給藥1h和停藥1h的外周血壓變化。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-9。與對照組相比較，YNH低劑量組，給藥1h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.05)，給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均極顯著降低(p＜0.01)；中、高劑量組，給藥1h時和給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均極顯著降低(p＜0.01)；降壓作用呈劑量依賴性。與對照組相比較，銀杏內(nèi)酯給藥1h時和給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.05)；紅景天提取物給藥1h時的收縮壓和舒張壓均降低，但無顯著性差異，給藥后1h時的收縮壓和舒張壓均顯著降低(p＜0.05)。YNH低、中、高劑量的作用均優(yōu)于銀杏內(nèi)酯或紅景天提取物單獨給藥的效果，提示銀杏內(nèi)酯與紅景天提取物合并用藥有協(xié)同增效作用，在抗高血壓方面將有顯著療效。
表1-9 銀杏內(nèi)酯與紅景天提取物合并用藥對大鼠血壓的影響(X±SD，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗例10 銀杏葉總黃酮與紅景天、銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥對小鼠常壓耐缺氧能力的影響受試動物 小鼠，60只，體重20～25g，隨機分為6組，每組10只。
供試品 注射用YTH自制，含銀杏葉提取物20mg(相當于原藥材1.2g)、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；銀杏葉注射液自制，2ml:20mg(相當于原藥材1.2g)；注射用YHH自制，含銀杏葉總黃酮10mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；銀杏葉總黃酮注射液自制，2ml:10mg；注射用YNH自制，含銀杏內(nèi)酯1mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；銀杏內(nèi)酯注射液自制，1ml:1mg；紅景天注射液自制，2ml:30mg(相當于原藥材1g)；氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 見表1-10，對照組給予氯化鈉注射液。
實驗方法 小鼠按表1-10灌胃給藥，每天1次，連續(xù)5天。末次給藥1h后，分別置于經(jīng)容量標定125ml的廣口瓶中，瓶內(nèi)置10g鈉石灰以吸收CO2和水份，瓶蓋涂以凡士林密封，記錄小鼠的死亡時間。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-10。與對照組相比較，YTH、YHH、YNH均可極顯著延長小鼠的存活時間(p＜0.01)；銀杏葉、銀杏葉總黃酮、銀杏內(nèi)酯均可延長小鼠存活時間，但無顯著性差異；紅景天可極顯著延長小鼠存活時間(p＜0.01)。YTH組小鼠的存活時間長于銀杏葉組或紅景天組，YHH組小鼠的存活時間長于銀杏葉總黃酮組或紅景天組，YNH組小鼠的存活時間長于銀杏內(nèi)酯組和紅景天組，提示銀杏葉與紅景天、銀杏葉總黃酮與紅景天、銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥有協(xié)同增效作用，在治療缺氧性心腦血管疾病及其它缺氧性疾病方面將有顯著療效。
表1-10 銀杏葉總黃酮或銀杏內(nèi)酯與紅景天合并用藥對小鼠常壓耐缺氧能力的影響(X±SD，n＝10)
**p＜0.05，與對照組相比較。
實驗例11 銀杏葉提取物與紅景天提取物合并用藥對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用受試動物 大鼠，400只，雌雄兼用，體重220～250g，隨機分為20組假手術(shù)組、缺血再灌注組、銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比治療組，銀杏葉提取物治療組、紅景天提取物治療組，每組20只。
供試品 銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比顆粒自制，配比見表1-11；銀杏葉提取物顆粒自制，40mg，相當于原藥材2.5g；紅景天提取物顆粒自制，75mg，相當于原藥材1g；生理鹽水自制。
給藥劑量 見表1-11，假手術(shù)組和缺血再灌注組給予生理鹽水。
實驗方法 除不測定腦組織含水量外，同實驗例8。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-11。
(1)對行為的影響假手術(shù)組大鼠均無異常癥狀，神經(jīng)行為學評分為0。生理鹽水對照組出現(xiàn)不能完全伸展對側(cè)前爪或向外側(cè)轉(zhuǎn)圈或向?qū)?cè)傾倒的神經(jīng)損傷癥狀，神經(jīng)行為評分為1.8±0.8。與生理鹽水對照組相比較，銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比均可極顯著降低神經(jīng)行為學評分(p＜0.01)；銀杏葉提取物可顯著降低神經(jīng)行為學評分(p＜0.05)；紅景天提取物可降低神經(jīng)行為學評分，但無顯著性差異。
(2)對梗死面積的影響假手術(shù)組腦組織無梗塞。生理鹽水對照組缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象，梗塞體積占全腦的37.43％。與生理鹽水對照組相比較，銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比均可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p＜0.05、p＜0.01)，銀杏葉提取物可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p＜0.05)，紅景天提取物可縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積，但無顯著性差異。
上述實驗結(jié)果表明，銀杏葉提取物10～60份與紅景天提取物10～200份合并用藥可顯著改善局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)損傷癥狀，降低缺血再灌注損傷腦組織含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度縮小腦梗塞體積。銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比在各項指標中的效果均優(yōu)于銀杏葉提取物或紅景天提取物單獨用藥的效果，提示銀杏葉提取物與紅景天提取物合并用藥具有協(xié)同增效作用，在治療缺血性腦血管疾病方面將有顯著療效。
表1-11 銀杏葉提取物與紅景天提取物合并用藥對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用(X±SD，n＝20)
*p＜0.05，**p＜0.01，與缺血再灌注組相比較。
實驗例12 銀杏葉提取物與紅景天提取物合并用藥對免疫抑制小鼠免疫功能的影響受試動物 小鼠，400只，雌雄兼用，體重22～25g，隨機分為20組正常對照組、照射對照組、照射后銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比組、銀杏葉提取物組、紅景天提取物組，每組20只。
供試品 銀杏葉提取物與紅景天提取物各配比膠囊自制，配比見表1-12；銀杏葉提取物膠囊自制，40mg，相當于原藥材2.5g；紅景天提取物膠囊自制，55mg，相當于原藥材1g；生理鹽水自制。
給藥劑量20mg/kg，正常對照組和照射對照組給予滅菌生理鹽5ml/kg。
實驗方法 小鼠隨機分為20組。照射當天開始灌胃給藥，正常對照組和照射對照組給予滅菌生理鹽，連續(xù)給藥10天，其中第6天用2％綿羊紅細胞(SRBC)按0.5ml/只對所有小鼠行腹腔注射免疫，第10天眼球后取血，脫臼處死，取脾獲得脾細胞，配成1×106個/ml備用。測定血清凝集素、溶血空斑形成細胞(PFC)和E玫瑰花結(jié)形成率。
表1-12 銀杏葉提取物與紅景天提取物合并用藥對免疫抑制小鼠免疫功能的影響(X±SD，n＝20)
◆◆p＜0.01，與正常對照組相比較；*p＜0.05，**p＜0.01，與照射對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表1-12。
(1)對抗綿羊紅細胞抗體水平的影響與正常對照組相比較，照射對照組抗體血清凝集素水平極顯著降低(p＜0.01)。與照射對照組相比較，照射后銀杏葉提取物10～75份、紅景天提取物10～200份各配比給藥組的抗體血清凝集素水平均顯著升高(p＜0.05，p＜0.01)；銀杏葉提取物給藥組的抗體血清凝集素水平升高，但無顯著性差異；紅景天提取物給藥組的抗體血清凝集素水平顯著升高(p＜0.05)。
(2)對溶血空斑形成細胞(PFC)數(shù)的影響與正常對照組相比較，照射對照組的溶血空斑形成細胞數(shù)極顯著降低(p＜0.01)。與照射對照組相比較，照射后銀杏葉提取物10～75份、紅景天提取物10～200份各配比給藥組的溶血空斑形成細胞數(shù)均顯著升高(p＜0.01)；銀杏葉提取物給藥組的溶血空斑形成細胞數(shù)升高，但無顯著性差異；紅景天提取物給藥組的溶血空斑形成細胞數(shù)顯著升高(p＜0.05)。
(3)對E玫瑰花結(jié)形成率形成率的影響與正常對照組相比較，照射對照組的E玫瑰花結(jié)形成率極顯著降低(p＜0.01)。與照射對照組相比較，照射后銀杏葉提取物10～75份、紅景天提取物10～200份各配比給藥組的E玫瑰花結(jié)形成率均極顯著升高(p＜0.01)；銀杏葉提取物給藥組的E玫瑰花結(jié)形成率升高，但無顯著性差異；紅景天提取物給藥組的E玫瑰花結(jié)形成率顯著升高(p＜0.05)。
上述結(jié)果表明，銀杏葉提取物10～75份與紅景天提取物10～200份各配比合并用藥能顯著提高免疫抑制小鼠的細胞免疫和體液免疫功能，并且各配比的效果均優(yōu)于銀杏葉提取物或紅景天提取物單獨給藥的效果，提示銀杏葉提取物與紅景天提取物合并用藥具有協(xié)同增效作用，在提高機體免疫方面將有顯著療效。
實驗例13 YTH注射液、YHH注射液和YNH注射液的穩(wěn)定性實驗供試品 YTH注射液自制，2ml，含銀杏葉提取物20mg(相當于原藥材1.2g)、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；YHH注射液自制，2ml，含銀杏葉總黃酮10mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)；YNH注射液自制，2ml，含銀杏內(nèi)酯1mg、紅景天提取物30mg(相當于原藥材1g)。
考察項目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標示含量，并在長期實驗期末增加無菌和熱原檢查實驗方法 置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月，比較外觀后，測試各項指標，將結(jié)果與0個月比較；在12個月末增加無菌和熱原檢查。
實驗結(jié)果 溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置12個月，各項指標均無明顯變化；12個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論 由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，YTH注射液、YHH注射液、YNH注射液均比較穩(wěn)定，可以長期放置，適應(yīng)于放大生產(chǎn)。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，進一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型制備工藝中的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
以下實施例中用YTH代替銀杏葉或其提取物與紅景天或其提取物的組合物，用YHH代替銀杏葉總黃酮與紅景天或其提取物的組合物，用YNH代替銀杏內(nèi)酯與紅景天或其提取物的藥物組合物。
實施例1 銀杏葉提取物的制備及含量測定銀杏葉提取物的制備取銀杏葉5kg，粉碎，加75％乙醇回流提取兩次，第一次加醇10倍量，提取3小時，第二次加醇8倍量，提取2小時，合并濾液，濾液濃縮至含醇約5％，加入等量的水，攪勻，4℃冷藏24小時，離心，取上清液上柱，分別用3倍量體積水、15％乙醇、75乙醇洗滌，收集75％乙醇液，減壓濃縮至藥材量的1/3體積數(shù)，靜置，濾過，濾液減壓濃縮，真空干燥，粉碎，即得。
分別制備三批銀杏葉提取物，得率見表2-1。
銀杏葉提取物的含量測定總黃酮醇苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備 分別精密稱取槲皮素對照品、山奈素對照品、異鼠李素對照品，加甲醇制成每1ml分別含30μg、30μg、20μg的混合溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物約35mg，精密稱定，加甲醇-25％鹽酸溶液(4∶1)的混合溶液25ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮醇苷的含量。
總黃酮醇苷＝(槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量)×2.51萜類內(nèi)酯的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以正丙醇-四氫呋喃-水(1∶15∶84)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備 分別精密稱取白果內(nèi)酯對照品、銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品和銀杏內(nèi)酯C對照品適量，加甲醇制成每1ml各含2mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物約0.15g，精密稱定，加水10ml，置水浴中加熱使溶散，加2％鹽酸溶液2滴，用乙酸乙酯振搖提取4次(15ml，10ml，10ml，10ml)，合并提取液，用5％醋酸鈉溶液20ml洗滌。合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20ml，分取水液，用乙酸乙酯10ml洗滌，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液5μl、10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程分別計算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，即得。
對上述制備的三批銀杏葉提取物分別進行含量測定，測定結(jié)果見表2-1。
表2-1 銀杏葉提取物的含量測定結(jié)果和得率
實施例2 銀杏葉總黃酮的制備以及含量測定銀杏葉總黃酮的制備取銀杏葉1kg，切碎，加70％乙醇80℃溫浸提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水適量得每1ml相當于原藥材1g的混懸液，冷藏12小時，離心，取上清液，加于已處理好的聚酰胺柱(100g，30～60目，乙醇濕法裝柱，先用2倍柱體積的乙醇沖柱，再改用水洗至近無醇味，備用)上，先用3倍柱體積的水沖洗，再用2倍柱體積的10％的乙醇沖洗，棄去洗脫液，改用4倍柱體積的80％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度1.08～1.10，噴霧干燥，即得。
分別制備三批銀杏葉總黃酮，得率見表2-2。
銀杏葉總黃酮的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2500。山奈素峰與異鼠李素峰的分離度應(yīng)大于1.5。
對照品溶液的制備 分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素、山奈素、異鼠李素對照品，各加甲醇制成每1ml分別含0.03mg、0.03mg、0.02mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取銀杏葉總黃酮0.1g，加甲醇-25％鹽酸(4∶1)的混合液25ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.5μm)濾過，取濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮醇苷的含量。
總黃酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量)×2.51對上述三批銀杏葉總黃酮進行含量測定，結(jié)果見表2-2。
表2-2 銀杏葉總黃酮的含量測定結(jié)果和得率
實施例3 銀杏內(nèi)酯的制備以及含量測定銀杏內(nèi)酯的制備取銀杏葉1kg，切碎，加70％乙醇80℃溫浸提取二次，每次2小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水適量得每1ml相當于原藥材1g的混懸液。加1/2量的石油醚振搖提取4次，棄去石油醚提取液；再用1/2量的乙酸乙酯振搖提取4次，合并乙酸乙酯液，減壓回收溶劑，蒸干，殘渣加30％乙醇加熱使溶解，放置析晶，結(jié)晶再用30％乙醇重結(jié)晶一次，即得。
分別制備三批銀杏內(nèi)酯，得率見表2-3。
銀杏內(nèi)酯的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以正丙醇-四氫呋喃-水(1∶15∶84)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于2500。白果內(nèi)酯峰與銀杏內(nèi)酯C峰的分離度應(yīng)大于1.5。
對照品溶液的制備 分別精密稱取白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C對照品適量，加甲醇制成每1ml各含2mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取銀杏內(nèi)酯0.1g，加水10ml，置水浴中溫熱使溶散，加2％鹽酸溶液2滴，用醋酸乙酯振搖提取4次(15ml、10ml、10ml、10ml)，合并提取液，用5％醋酸鈉溶液20ml洗滌，分取醋酸鈉溶液，再用醋酸乙酯10ml洗滌。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20ml，分取水洗液，用醋酸乙酯10ml洗滌，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，殘渣用丙酮溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加丙酮至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl、15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程分別計算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，即得。
對上述三批銀杏內(nèi)酯進行含量測定，結(jié)果見表2-3。
表2-3 銀杏內(nèi)酯的含量測定結(jié)果和得率
實施例4 紅景天提取物1的制備以及含量測定紅景天提取物1的制備取紅景天10kg，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次，每次1小時，第一次加醇100L，第二、三次分別為800L、800L。濾過，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂后，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得紅景天粗提物(供口服用)。將上述得到的紅景天粗提物用適量水溶解后，加于已事先處理好的大孔樹脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min。減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧干燥，得紅景天精提物(供注射用)。
分別制備三批紅景天提取物，得率見表2-4。
紅景天提取物1的含量測定總酚的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含沒食子酸0.05mg的溶液，即得。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，各加磷鉬鎢酸試液1ml，再分別加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29％碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，紫外-可見分光光度法，在760nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
供試品溶液的制備 精密稱取紅景天提取物25mg，置25ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，搖勻，使樣品完全溶解，精密吸取2ml置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標準曲線的制備項下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1ml”起，加水10ml，依法測定吸光度，從標準曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg)，計算，即得。
紅景天苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(15∶85)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按紅景天苷峰計算應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取紅景天提取物0.1g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
對上述三批紅景天提取物進行含量測定，結(jié)果見表2-4。
表2-4 紅景天提取物1的含量測定結(jié)果和得率
實施例5 紅景天提取物2的制備以及含量測定紅景天提取物2的制備取紅景天藥材5kg，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時，第二次加10倍量，回流2小時。提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，分成兩份，一份用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物A；另一份加乙醇使含醇量達85％，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得提取物B；將提取物A和提取物B合并即得總提取物。
分別制備三批紅景天提取物，得率見表2-5。
紅景天提取物2的含量測定多糖的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品約適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
標準曲線的制備 精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為各對照品溶液。分別精密量取各對照品溶液2ml，置25ml納氏比色管中，加入2％苯酚水溶液1ml，搖勻，迅速加入硫酸5.0ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中加熱10分鐘，取出迅速冷卻至室溫，紫外-可見分光光度法測定，在488±2nm波長處分別測定吸光度，以測定的吸光度為縱坐標(y)，對照品的濃度(μg/ml)為橫坐標(x)，繪制標準曲線。
供試品溶液的制備 精密稱取紅景天提取物25mg，置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取5ml置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取供試品溶液2ml，置25ml納氏比色管中，照標準曲線制備項下自“加入2％苯酚水溶液1ml”起依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中糖類(以葡萄糖計)的量，計算，即得。
總酚的含量測定方法同實施例4“總酚的含量測定”項下。
紅景天苷的含量測定方法同實施例4“紅景天苷的含量測定”項下。
對上述三批紅景天提取物進行含量測定，結(jié)果見表2-5。
表2-5 紅景天提取物2的含量測定結(jié)果和得率
實施例6 紅景天提取物3的制備以及含量測定紅景天提取物3的制備取紅景天藥材5kg，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時，第二次加10倍量，回流2小時，提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇使含醇量達85％，攪勻，冷藏24小時以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得。
分別制備三批紅景天提取物，得率見表2-6。
紅景天提取物3的含量測定多糖的含量測定方法同實施例5“多糖的含量測定”項下。
紅景天苷的含量測定方法同實施例4“紅景天苷的含量測定”項下。
對上述三批紅景天提取物進行含量測定，結(jié)果見表2-6。
表2-6 紅景天提取物3的含量測定結(jié)果和得率
實施例7 YTH藥物組合物的制劑1、處方(1000單位的制劑，單位g)
2、制備方法可按照藥劑學上的常規(guī)方法制成各種劑型，包括口服制劑和注射劑，口服制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片等，注射劑包括水針、輸液、粉針等。
實施例8 YHH藥物組合物的制劑1、處方(1000單位的制劑，單位g)
2、制備方法可按照藥劑學上的常規(guī)方法制成各種劑型，包括口服制劑和注射劑，口服制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片等，注射劑包括水針、輸液、粉針等。
實施例9 YNH藥物組合物的制劑1、處方(1000單位的制劑，單位g)
2、制備方法可按照藥劑學上的常規(guī)方法制成各種劑型，包括口服制劑和注射劑，口服制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片等，注射劑包括水針、輸液、粉針等。
權(quán)利要求
1.一種用于心腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，該藥物組合物由銀杏葉200～2500份或銀杏葉提取物2～100份、紅景天250～2000份或紅景天提取物2.5～400份制備而成。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，該藥物組合物由銀杏葉600～1800份或銀杏葉提取物6～72份、紅景天500～1500份或紅景天提取物5～300份制備而成。
3.如權(quán)利要求1、2所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉提取物含總黃酮醇苷不低于24.0％、萜類內(nèi)酯不低于6.0％，總銀杏酸不超過百萬分之十；紅景天提取物含紅景天苷不低于3％，總酚和/或多糖不低于50％。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，該藥物組合物還可以由銀杏葉總黃酮1～100份、紅景天250～2000份或紅景天提取物2.5～400份制備而成。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，該藥物組合物由銀杏葉總黃酮2～50份、紅景天500～1500份或紅景天提取物5～300份制備而成。
6.如權(quán)利要求4、5所述的藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉總黃酮含總黃酮醇苷以槲皮素、山奈酚和異鼠李素的含量之和計不低于50％；紅景天提取物含紅景天苷不低于3％，總酚和/或多糖不低于50％。
7.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，該藥物組合物還可以由銀杏內(nèi)酯0.2～50份，紅景天250～2000份或紅景天提取物2.5～400份制備而成。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，按照重量組份計算，該藥物組合物由銀杏內(nèi)酯0.5～10份，紅景天500～1500份或紅景天提取物5～300份制備而成。
9.如權(quán)利要求7、8所述的藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏內(nèi)酯含萜類內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量之和計不低于50％；紅景天提取物含紅景天苷不低于3％，總酚和/或多糖不低于50％。
10.如權(quán)利要求1、2、4、5、7、8所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可制成任一臨床上或藥學上可接受的劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法，以及含有該藥物組合物的制劑。本發(fā)明藥物組合物由銀杏葉或其提取物與紅景天或其提取物、或者銀杏葉總黃酮與紅景天或其提取物、或者銀杏內(nèi)酯與紅景天或其提取物制備而成?？芍瞥膳R床上或藥學上可接受的任一劑型，制備方法簡便，制劑穩(wěn)定性高，適應(yīng)于大生產(chǎn)。兩藥協(xié)同作用，共同發(fā)揮抑制血小板聚集和抗血栓形成、改善血流動力學、增加冠脈和腦血流量、降低腦血管阻力、降低血液粘度、保護缺血及缺氧引起的腦損傷和心肌損傷、抗心律失常、抗高血壓、抗高血脂、提高機體免疫等多種藥理作用，主要用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
文檔編號A61P9/00GK1931217SQ200610153340
公開日2007年3月21日 申請日期2006年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月14日
發(fā)明者蔡軍 申請人:蔡軍