專利名稱：新的莪術(shù)醇糖苷類化合物及其制備與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療癌癥、抗菌和抗病毒的新化合物-------莪術(shù)醇糖苷類化合物物及其制備方法和應(yīng)用。
二.技術(shù)背景莪術(shù)醇(Curcumol)又名姜黃環(huán)奧醇、姜黃醇，屬倍半萜類化合物，是莪術(shù)揮發(fā)油中的重要成分。莪術(shù)揮發(fā)油(莪術(shù)油)已經(jīng)收載于1977年中國(guó)藥典(第463頁(yè))，主治淤血閉經(jīng)、等。莪術(shù)醇作為莪術(shù)油中主要的活性成分之一，也具有抗腫瘤、抗菌、抗早孕、抗病毒、保肝和活血化淤等藥理作用。
莪術(shù)醇(Curcumol)分子式為C15H24O2，[CAS]4871-97-0，分子量236.134，熔點(diǎn)141～142℃，無(wú)色針狀結(jié)晶(無(wú)水乙醇)，熔點(diǎn)142～144℃，[α]D25＝-40.15，易溶于乙醚、氯仿，微溶于石油醚，幾乎不溶于水。莪術(shù)醇無(wú)紫外吸收，亦無(wú)熒光吸收。莪術(shù)醇(Curcumol)的結(jié)構(gòu)式如下 莪術(shù)醇的抗癌機(jī)理可能是它可以抑制腫瘤細(xì)胞的核代謝，同時(shí)使機(jī)體的特異性免疫增強(qiáng)，產(chǎn)生明顯的免疫保護(hù)作用。臨床上，莪術(shù)醇主要用于宮頸癌的治療，采用局部瘤體注射給藥獲得較好療效。莪術(shù)醇能顯著抑制腫瘤細(xì)胞Hela、Mcf-7、MM231的RNA合成，濃度為50μg/mL時(shí)對(duì)胃癌SGC-7901、肝癌HePG2細(xì)胞抑制率可達(dá)到60％以上。莪術(shù)醇對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)影響，長(zhǎng)期應(yīng)用，對(duì)主要臟器無(wú)損害。如莪術(shù)醇提取物給大鼠和狗灌胃7天，動(dòng)物體重、血象、心電、肝腎功能及組織鏡檢均無(wú)明顯影響。
莪術(shù)醇抗菌和抗病毒的作用也正逐漸引起注意，并有希望成為它在臨床上的新應(yīng)用。莪術(shù)醇在試管內(nèi)能顯著抑制金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌的生長(zhǎng)；對(duì)呼吸道合胞體病毒(RSV)有直接抑制作用，對(duì)流感病毒A，A3型有直接滅活作用；此外，尚能對(duì)其它病毒如風(fēng)濕病毒，水痘病毒、副流感病毒，副粘病毒和柯薩奇病毒等也有抑制作用。
可見(jiàn)，經(jīng)過(guò)多年的藥理和臨床研究，莪術(shù)醇在抗腫瘤、抗菌和抗病毒等方面已經(jīng)顯示出確切的療效和廣闊的前景。但是，目前莪術(shù)醇的應(yīng)用還具有一定的局限性，其主要原因在于1.水溶性極低，制劑研究困難；2.以局部注射或瘤體注射給藥時(shí)會(huì)出現(xiàn)疼痛和胸悶等副作用；3.藥效還有待進(jìn)一步提高；4.生物利用度不高，抗腫瘤、抗菌和抗病毒的靶向性不夠。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明專利的目的在于保留莪術(shù)醇原骨架的前提下，在其C-6位羥基上引入糖分子基團(tuán)(糖苷)。與莪術(shù)醇相比，該類莪術(shù)醇糖苷衍生物具有1.更高的溶解性和體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)能力。糖基上豐富的羥基不僅可以解決莪術(shù)醇的水溶性低和制劑難的問(wèn)題，而且很容易將莪術(shù)醇帶入水相中溶解和在血液中運(yùn)輸，當(dāng)該類衍生物到達(dá)病灶細(xì)胞后，糖基可以被細(xì)胞膜上的酶水解，分解后的脂溶性的莪術(shù)醇可以很方便地穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用；2.更好的生物相容性和生物利用度，糖是生物體內(nèi)最重要和最豐富的分子種類之一，糖基的引入使得該類衍生物更容易被生物體所接受，另外，莪術(shù)醇C-6位的糖苷化可以減緩莪術(shù)醇在體內(nèi)的代謝速度，起到藥物緩釋的效果，提高生物利用度；3.更好地藥效。
4.提高藥物靶向性。某些腫瘤組織、細(xì)胞或病原體細(xì)胞的表面富含親和某種糖的酶或其他分子，根據(jù)該類衍生物的糖基不同，藥物在體內(nèi)各種組織中的濃度也不同，因此莪術(shù)除糖苷對(duì)于特異性親和糖的腫瘤或病原體細(xì)胞具有優(yōu)良的靶向殺傷性。
5.更小的毒副作用。水溶性增強(qiáng)，可以方便地改變制劑的類別，消除疼痛，糖基的引入，也將增加生物親和性，減少毒副作用。
四.具體實(shí)施例莪術(shù)醇糖苷類化合物的制備莪術(shù)醇是莪術(shù)油中含量較多的組分，對(duì)市售的莪術(shù)醇進(jìn)行進(jìn)一步分離純化后，可以獲得純度達(dá)95％以上的莪術(shù)醇，作為該發(fā)明專利中莪術(shù)醇結(jié)構(gòu)糖基化修飾的原料。
(1).莪術(shù)醇(C-6位上羥基)糖苷衍生物的制備莪術(shù)醇分子中6-羥基可以看做是6-羰基單縮酮后的產(chǎn)物，由于6位碳上即聯(lián)有羥基有聯(lián)有氧橋，因此，由于空間效應(yīng)和氧橋的供電子效應(yīng)，其穩(wěn)定性和反應(yīng)活性均比一般的羥基化合物稍弱，反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)小心地控制好反應(yīng)條件。
反應(yīng)過(guò)程如下步驟1溴代乙酰化糖的合成
(以葡萄糖的結(jié)構(gòu)式為例)冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入適量的乙酸酐，冰浴，緩慢滴加催化劑量的高氯酸，滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入比例量葡萄糖粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入適量的紅磷，于4h內(nèi)滴加比例量液溴。待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至中性，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到淡黃色糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色針狀結(jié)晶，即溴代乙?；?。
步驟2莪術(shù)醇糖苷衍生物的乙?；绑w的合成。
如前所定義的糖類分子反應(yīng)前將莪術(shù)醇溶解于適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑，加入少量無(wú)機(jī)干燥劑干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。然后在燒瓶中，按反應(yīng)比例加入α-溴代乙?；?自制)和莪術(shù)醇，少量的溶劑和催化劑，在50℃以內(nèi)劇烈攪拌反應(yīng)1.5～3小時(shí)，加入少量水稀釋反應(yīng)液，終止反應(yīng)，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇糖苷衍生物的乙酰化前體。
步驟3莪術(shù)醇(C-6位上羥基)糖苷衍生物的合成。
R如前所定義冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入適量的上述乙?；绑w化合物和少量氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有甲醇鈉的甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶，即通式或結(jié)構(gòu)式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)的莪術(shù)醇糖苷衍生物(R如前所定義)。
(2).具體實(shí)施方案以不同的糖類化合物為反應(yīng)原料時(shí)，反應(yīng)的原料比例應(yīng)根據(jù)具體情況來(lái)調(diào)整。
以下的實(shí)施例僅為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。
實(shí)施例一莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(II)的制備；
①在冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入216g(200mL，2.12mol)的乙酸酐，待冷卻到0℃，緩慢滴加1.2mL(70％～72％，0.02mol)的高氯酸。滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入干燥的50g(0.28mol)葡萄糖粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入15.5g(0.5mol)紅磷，于4h內(nèi)滴加90.5g(29mL，1.13mol)液溴，待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用100mL冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至PH為7左右，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到淡黃色糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色針狀結(jié)晶，即1-溴-2，3，4，6-四-O-乙?；?α-D-吡喃葡萄糖(2)，收率97％，熔點(diǎn)86～87℃。
②將莪術(shù)醇溶解于50ml氯仿中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。取干燥后的莪術(shù)醇1.18g(0.005mol)、1-溴-2，3，4，6-四乙?；?α-D-吡喃葡萄糖(2)2.46g(0.006mol)、四丁基溴化銨1.93g(0.006mol)置于二口燒瓶中，加入30mL氯仿作為溶劑，在40～50℃以內(nèi)劇烈攪拌下慢慢滴加1.0mol/L的K2CO3溶液18mL，反應(yīng)1.5小時(shí)后，冷卻，加入30ml水稀釋反應(yīng)液，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取二次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇-6-O-β-(2，3，4，6-四-O-乙?；?D-吡喃葡萄糖)苷(3)2.38g，收率84.3％。C29H42O11，元素分析C61.40％，H7.51％(理論值C61.47％，H7.47％)；質(zhì)譜566.27(100％)。
③在冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入1.70g(0.003mol)的3和15mL氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有0.0097mol甲醇鈉的15ml甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2 h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶0.98g，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(II)，收率82.2％。C21H34O7，元素分析C62.92％，H8.54％(理論值C63.30％，H8.60％)；質(zhì)譜398.23(100％)。
采用BrukerACF-300型核磁共振儀，以CDCl3為溶劑檢測(cè)II的1HNMR和13CNMR，顯示出21個(gè)碳信號(hào)，34個(gè)質(zhì)子信號(hào)(詳細(xì)譜圖數(shù)據(jù)請(qǐng)聯(lián)系專利發(fā)明入)，進(jìn)一步說(shuō)明得到的產(chǎn)物是我們的目標(biāo)物，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(II)。
合成總產(chǎn)率69.3％(以莪術(shù)醇的起始量計(jì)算)。
實(shí)施例二莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃半乳糖苷(III)的制備； ①在冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入216g(200mL，2.12mol)的乙酸酐，待冷卻到0℃，緩慢滴加1.2mL(70％～72％，0.02mol)的高氯酸。滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入干燥的50g(0.28mol)半乳糖粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入15.5g(0.5mol)紅磷，于4h內(nèi)滴加90.5g(29mL，1.13mol)液溴，待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用100mL冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至PH為7左右，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到淡黃色糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色針狀結(jié)晶，即1-溴-2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖(5)，收率93％。C14H19BrO9，元素分析C41.13％，H4.71％，Br19.40％(理論值C40.89％，H4.66％，Br19.43％)；質(zhì)譜410.02(100％)②將莪術(shù)醇溶解于50ml氯仿中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。取干燥后的莪術(shù)醇1.18g(0.005mol)、1-溴-2，3，4，6-四乙?；?α-D-吡喃半乳糖(5)2.46g(0.006mol)、四丁基溴化銨1.93g(0.006mol)置于二口燒瓶中，加入30mL氯仿作為溶劑，在40～50℃以內(nèi)劇烈攪拌下慢慢滴加18mL 1.0mol/L的K2CO3溶液，反應(yīng)1.5小時(shí)后，冷卻，加入30ml水稀釋反應(yīng)液，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取二次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇-6-O-β-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-D-吡喃半乳糖)苷(6)2.34g，收率79.2％。C29H42O11，元素分析C61.52％，H7.51％(理論值C61.47％，H7.47％)；質(zhì)譜566.31(100％)。
③在冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入1.70g(0.003mol)的6和15mL氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有0.0097mol甲醇鈉的15ml甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶1.03g，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃半乳糖苷(III)，收率86.5％。C21H34O7，元素分析C63.35％，H8.63％(理論值C63.30％，H8.60％)；質(zhì)譜398.27(100％)。
采用BrukerACF-300型核磁共振儀，以CDCl3為溶劑檢測(cè)II的1HNMR和13CNMR，顯示出21個(gè)碳信號(hào)，34個(gè)質(zhì)子信號(hào)(詳細(xì)譜圖數(shù)據(jù)請(qǐng)聯(lián)系專利發(fā)明人)，進(jìn)一步說(shuō)明得到的產(chǎn)物是我們的目標(biāo)物，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃半乳糖苷(III)。
合成總產(chǎn)率68.5％(以莪術(shù)醇的起始量計(jì)算)。
實(shí)施例三莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃木糖苷(IV)的制備； ①在冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入216g(200mL，2.12mol)的乙酸酐，待冷卻到0℃，緩慢滴加1.2mL(70％～72％，0.02mol)的高氯酸。滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入干燥的42g(0.28mol)木糖粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入15.5g(0.5mol)紅磷，于4h內(nèi)滴加90.5g(29mL，1.13mol)液溴，待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用100mL冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至PH為7左右，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到淡黃色糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色針狀結(jié)晶，即1-溴-2，3，4-三-O-乙?；?α-D-吡喃木糖(8)，收率85％。C11H15BrO7，元素分析C38.97％，H4.49％，Br23.58％(理論值C38.96％，H4.46％，Br23.56％)；質(zhì)譜338.07(100％)②將莪術(shù)醇溶解于50ml氯仿中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。取干燥后的莪術(shù)醇1.18g(0.005mol)、1-溴-2，3，4，6-四乙?；?α-D-吡喃木糖(8)2.03g(0.006mol)、四丁基溴化銨1.93g(0.006mol)置于二口燒瓶中，加入30mL氯仿作為溶劑，在40～50℃以內(nèi)劇烈攪拌下慢慢滴加18mL 1.0mol/L的K2CO3溶液，反應(yīng)2小時(shí)后，冷卻，加入30ml水稀釋反應(yīng)液，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取二次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇-6-O-β-(2，3，4-三-O-乙酰基-D-吡喃木糖)苷(9)2.02g，收率81.8％。C26H38O9，元素分析C62.96％，H7.70％(理論值C63.14％，H7.74％)；質(zhì)譜494.23(100％)。
③在冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入1.48g(0.003mol)的9和15mL氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有0.0097mol甲醇鈉的15ml甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶1.02g，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃木糖苷(IV)，收率92.4％。C20H32O6，元素分析C65.21％，H8.78％(理論值C65.19％，H8.75％)；質(zhì)譜368.27(100％)。
采用BrukerACF-300型核磁共振儀，以CDCl3為溶劑檢測(cè)II的1HNMR和13CNMR，顯示出20個(gè)碳信號(hào)，32個(gè)質(zhì)子信號(hào)(詳細(xì)譜圖數(shù)據(jù)請(qǐng)聯(lián)系專利發(fā)明入)，進(jìn)一步說(shuō)明得到的產(chǎn)物是我們的目標(biāo)物，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃木糖苷(IV)。
合成總產(chǎn)率75.6％(以莪術(shù)醇的起始量計(jì)算)。
實(shí)施例四莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷(V)的制備；
①在冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入216g(200mL，2.12mol)的乙酸酐，待冷卻到0℃，緩慢滴加1.2mL(70％～72％，0.02mol)的高氯酸。滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入干燥的42g(0.28mol)阿拉伯糖粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入15.5g(0.5mol)紅磷，于4h內(nèi)滴加90.5g(29mL，1.13mol)液溴，待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用100mL冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至PH為7左右，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色粉末結(jié)晶，即1-溴-2，3，4-三-O-乙酰基-α-D-吡喃阿拉伯糖(11)，收率90.7％。C11H15BrO7，元素分析C38.99％，H4.48％，Br23.53％(理論值C38.96％，H4.46％，Br23.56％)；質(zhì)譜338.01(100％)②將莪術(shù)醇溶解于50ml氯仿中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。取干燥后的莪術(shù)醇1.18g(0.005mol)、1-溴-2，3，4，6-四乙酰化-α-D-吡喃阿拉伯糖(11)2.03g(0.006mol)、四丁基溴化銨1.93g(0.006mol)置于二口燒瓶中，加入30mL氯仿作為溶劑，在40～50℃以內(nèi)劇烈攪拌下慢慢滴加18mL 1.0mol/L的K2CO3溶液，反應(yīng)1.5小時(shí)后，冷卻，加入30ml水稀釋反應(yīng)液，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取二次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇-6-O-β-(2，3，4-三-O-乙?；?D-吡喃阿拉伯糖)苷(12)2.17g，收率87.8％。C26H38O9，元素分析C63.20％，H7.78％(理論值C63.14％，H7.74％)；質(zhì)譜494.29(100％)。
③在冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入1.48g(0.003mol)的12和15mL氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有0.0097mol甲醇鈉的15ml甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2.5h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶0.99g，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷(V)，收率89.7％。C20H32O6，元素分析C65.23％，H8.79％(理論值C65.19％，H8.75％)；質(zhì)譜368.17(100％)。
采用BrukerACF-300型核磁共振儀，以CDCl3為溶劑檢測(cè)II的1HNMR和13CNMR，顯示出20個(gè)碳信號(hào)，32個(gè)質(zhì)子信號(hào)(詳細(xì)譜圖數(shù)據(jù)請(qǐng)聯(lián)系專利發(fā)明人)，進(jìn)一步說(shuō)明得到的產(chǎn)物是我們的目標(biāo)物，即莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷(V)。
合成總產(chǎn)率78.7％(以莪術(shù)醇的起始量計(jì)算)。
實(shí)施例五莪術(shù)醇-6-O-β-麥芽糖苷(VI)的制備； ①在冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入216g(200mL，2.12mol)的乙酸酐，待冷卻到0℃，緩慢滴加1.2mL(70％～72％，0.02mol)的高氯酸。滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入干燥的95.2g(0.28mol)麥芽糖粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入15.5g(0.5mol)紅磷，于4h內(nèi)滴加90.5g(29mL，1.13mol)液溴，待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用100mL冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至PH為7左右，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到淡黃色糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色針狀結(jié)晶，即1-溴-2，2’，3，3’，4’，6，6’-七-O-乙?；?α-麥芽糖(14)，收率79.2％。C26H35BrO17，元素分析C44.61％，H5.00％，Br11.40％(理論值C44.65％，H5.04％，Br11.42％)；質(zhì)譜698.11(100％)。
②將莪術(shù)醇溶解于50ml氯仿中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。取干燥后的莪術(shù)醇1.18g(0.005mol)、1-溴-2，2’，3，3’，4’，6，6’-七-O-乙酰基-α-麥芽糖(14)4.19g(0.006mol)、四丁基溴化銨1.93g(0.006mol)置于二口燒瓶中，加入30mL氯仿作為溶劑，在40～50℃以內(nèi)劇烈攪拌下慢慢滴加18mL1.0mol/L的K2CO3溶液，反應(yīng)2小時(shí)后，冷卻，加入30ml水稀釋反應(yīng)液，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取二次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇-6-O-β-(2，2’，3，3’，4’，6，6’-七-O-乙?；?α-麥芽糖)苷(15)3.98g，收率93..2％。C41H58O19，元素分析C57.52％，H6.80％(理論值C57.60％，H6.84％)；質(zhì)譜854.27(100％)。
③在冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入2.56g(0.003mol)的15和15mL氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有0.015mol甲醇鈉的15ml甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶1.33g，即莪術(shù)醇-6-O-β-麥芽糖苷(VI)，收率79.2％。C27H44O12，元素分析C57.80％，H7.86％(理論值C57.84％，H7.91％)；質(zhì)譜560.15(100％)。
采用BrukerACF-300型核磁共振儀，以CDCl3為溶劑檢測(cè)II的1HNMR和13CNMR，顯示出27個(gè)碳信號(hào)，44個(gè)質(zhì)子信號(hào)(詳細(xì)譜圖數(shù)據(jù)請(qǐng)聯(lián)系專利發(fā)明人)，進(jìn)一步說(shuō)明得到的產(chǎn)物是我們的目標(biāo)物，即莪術(shù)醇-6-O-β-麥芽糖苷(VI)。
合成總產(chǎn)率73.8％(以莪術(shù)醇的起始量計(jì)算)。
實(shí)施例六莪術(shù)醇-6-O-β-(N-乙酰-D-葡糖胺)苷(VII)的制備；
①在冰浴冷卻下向配有機(jī)械攪拌器、溫度計(jì)、滴液漏斗的500mL四頸圓底燒瓶中加入216g(200mL，2.12mol)的乙酸酐，待冷卻到0℃，緩慢滴加1.2mL(70％～72％，0.02mol)的高氯酸。滴畢控制溫度在30～40℃之間，分批加入干燥的61.8g(0.28mol)N-乙酰-D-葡糖胺粉末。反應(yīng)完后再冷卻到0℃，加入15.5g(0.5mol)紅磷，于4h內(nèi)滴加90.5g(29mL，1.13mol)液溴，待反應(yīng)完全后加入150mL氯仿，過(guò)濾除去未反應(yīng)的紅磷，濾液用100mL冰水洗3次，再用飽和碳酸氫鈉洗滌至PH為7左右，有機(jī)層用分子篩干燥。濾除分子篩減壓蒸去氯仿，得到淡黃色糖漿狀產(chǎn)物，糖漿結(jié)晶后用無(wú)水乙醚重結(jié)晶得白色針狀結(jié)晶，即1-溴-3，4，6-三-O-乙?；?α-N-乙酰-D-葡糖胺(17)，收率76％。C14H20BrNO8，元素分析C41.03％，H4.95％，Br19.47％(理論值C40.99％，H4.91％，Br19.48％)；質(zhì)譜411.01(100％)②將莪術(shù)醇溶解于50ml氯仿中，加入少量無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸干溶劑。取干燥后的莪術(shù)醇1.18g(0.005mol)、1-溴-3，4，6-三-O-乙?；?α-N-乙酰-D-葡糖胺(17)2.45g(0.006mol)、四丁基溴化銨1.93g(0.006mol)置于二口燒瓶中，加入30mL氯仿作為溶劑，在40～50℃以內(nèi)劇烈攪拌下慢慢滴加18mL1.0mol/L的K2CO3溶液，反應(yīng)2小時(shí)后，冷卻，加入30ml水稀釋反應(yīng)液，靜止分層，水層用二氯甲烷萃取二次，合并有機(jī)層，用水洗滌至中性，加入無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘留物粗品經(jīng)桂膠柱層析純化得到莪術(shù)醇-6-O-β-(3，4，6-三-O-乙?；?N-乙酰-D-葡糖胺)苷(18)2.34g，收率82.9％。C29H43NO10，元素分析C61.62％，H7.70％(理論值C61.58％，H7.66％)；質(zhì)譜565.29(100％)。
③在冰浴冷卻下向配有回流冷凝管、溫度計(jì)和恒壓滴液漏斗的三頸圓底燒瓶中加入1.70g(0.003mol)的18和15mL氯仿，攪拌片刻溶解，再向體系內(nèi)緩慢滴加含有0.0097mol甲醇鈉的15ml甲醇溶液，于0℃反應(yīng)2h后，旋干溶劑，得粗品。粗產(chǎn)物用95％的乙醇重結(jié)晶，得白色針狀結(jié)晶1.06g，即莪術(shù)醇-6-O-β-(N-乙酰-D-葡糖胺)苷(VII)，收率80.7％。C23H37O7，元素分析C62.80％，H8.50％(理論值C62.85％，H8.48％)；質(zhì)譜439.26(100％)。
采用BrukerACF-300型核磁共振儀，以CDCl3為溶劑檢測(cè)II的1HNMR和13CNMR，顯示出23個(gè)碳信號(hào)，37個(gè)質(zhì)子信號(hào)(詳細(xì)譜圖數(shù)據(jù)請(qǐng)聯(lián)系專利發(fā)明人)，進(jìn)一步說(shuō)明得到的產(chǎn)物是我們的目標(biāo)物，即莪術(shù)醇-6-O-β-(N-乙酰-D-葡糖胺)苷(VII)。
合成總產(chǎn)率66.9％(以莪術(shù)醇的起始量計(jì)算)。
(3).抗腫瘤活性測(cè)試實(shí)例以下的實(shí)施例僅為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，尤其是說(shuō)明本發(fā)明中的新化合物的藥理活性，而不是限制本發(fā)明。
僅以權(quán)利要求2～7中的II、III、IV、V、VI、VII等六種新化合物為例，通過(guò)MTT法(四甲基偶氮唑鹽比色法)，測(cè)試這六種莪術(shù)醇糖苷對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抑制活性，以IC50(半數(shù)抑制濃度)值來(lái)表示抗腫瘤活性的強(qiáng)弱。結(jié)果如表1表1莪術(shù)醇糖苷對(duì)各種腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度(IC50，μg/mL)

權(quán)利要求
1莪術(shù)醇-6-O-糖苷，即具有通式I的化合物及其藥理上可以接受的鹽 其中R為糖類分子基團(tuán)，包括單糖、寡糖、多糖基團(tuán)以及被修飾和改造后的糖類基團(tuán)。CN1704417A規(guī)定了R為H、烷基、RCO、HO3S，但未包含糖類取代基或糖苷。為了提高莪術(shù)醇的水溶性、生物相容性以及對(duì)癌癥細(xì)胞和病原體的靶向性，本發(fā)明中，R僅為各糖類取代基，如D(L)-葡萄糖、D(L)-阿洛糖、D(L)-阿卓糖、D(L)-甘露糖、D(L)-古洛糖、D(L)-艾杜糖、D(L)-半乳糖、D(L)-塔羅糖、D(L)-木糖、D(L)-核糖、D(L)-阿拉伯糖、D(L)-來(lái)蘇糖、果糖以及乳糖、蔗糖和麥芽糖等寡糖。很明顯的，上述各基團(tuán)分子只為舉例說(shuō)明R的種類，R并不局限于上述糖類分子。R的糖類分子可以為鏈狀結(jié)構(gòu)，也可以為環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其中環(huán)狀結(jié)構(gòu)包括呋喃型和吡喃型兩種。R的糖類分子可以是D構(gòu)型，也可以是L構(gòu)型的。R也包括被氨基化、磷酸化、酰化或羧酸化的糖類取代基，如四乙?；咸烟?、N-乙酰葡糖胺、神經(jīng)氨酸、N-乙酰神經(jīng)氨酸(唾液酸)、乙酰胞壁酸、D-葡萄糖-6-磷酸，等等。R與莪術(shù)醇羥基的縮水結(jié)合方式可以包括α和β兩種類型。R最為有利地選自D-吡喃型葡萄糖、D-呋喃型木糖、D-吡喃型半乳糖、D-呋喃型阿拉伯糖、D-吡喃型甘露糖、D-呋喃型核糖，或上述六種中的一種或幾種組成的寡糖。
2根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I，其特征在于R為葡萄糖時(shí)即得到具有結(jié)構(gòu)式II的化合物，莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
3根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I，其特征在于R為半乳糖時(shí)即得到具有結(jié)構(gòu)式III的化合物，莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃半乳糖苷。
4根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I，其特征在于R為木糖時(shí)即得到具有結(jié)構(gòu)式IV的化合物，莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃木糖苷。
5根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I，其特征在于R為阿拉伯糖時(shí)即得到具有結(jié)構(gòu)式V的化合物，莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃阿拉伯糖苷。
6根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I，其特征在于R為麥芽糖時(shí)即得到具有結(jié)構(gòu)式VI的化合物，莪術(shù)醇-6-O-β-D-吡喃麥芽糖苷。
7根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I，其特征在于R為N-乙酰-D-葡糖胺時(shí)即得到具有結(jié)構(gòu)式VII的化合物，莪術(shù)醇-6-O-β-(N-乙酰-D-葡糖胺)苷。
8根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I所限定的化合物(或藥理上可接受的鹽)，特別是權(quán)利要求2至7中的化合物II、III、IV、V、VI、VII，選用其中至少一種，采用通常的方法制成內(nèi)服的片劑、膠囊、口服液等或注射用的液劑、粉劑等或外用的膏劑、藥液，用于治療癌癥、抗菌和抗病毒的藥物。
9根據(jù)權(quán)利要求1中的通式I所限定的化合物(或藥理上可接受的鹽)，特別是權(quán)利要求2至7中的化合物II、III、IV、V、VI、VII，選用其中至少一種，應(yīng)用于其他制藥，如腸、胃、肝、腎等類藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療癌癥、抗菌和抗病毒的新化合物莪術(shù)醇糖苷類化合物物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明主要對(duì)莪術(shù)醇進(jìn)行糖苷化修飾，提供一系列新的莪術(shù)醇糖苷類化合物，及其制備方法和應(yīng)用。莪術(shù)醇具有良好的抗腫瘤、抗菌和抗病毒活性，本發(fā)明在保留莪術(shù)醇原骨架的前提下，在其C－6位羥基上引入糖分子基團(tuán)(糖苷)，因?yàn)樘欠肿拥囊?，該類新化合物具有更高的水溶性和體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)能力、更好的生物相容性、更好的藥效和更低的毒副作用，更重要的是，該類新化合物可能對(duì)于某些腫瘤或病原體細(xì)胞具有靶向性。
文檔編號(hào)A61P31/12GK1995056SQ20061015441
公開(kāi)日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月31日
發(fā)明者梁廣, 李校堃, 姚崇舜, 楊樹(shù)林 申請(qǐng)人:溫州醫(yī)學(xué)院