專利名稱：：黃芩湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性部位的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及到黃芩湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性部位的提取制備方法及所獲得產(chǎn)品的應(yīng)用，屬于中藥復(fù)方活性部位提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：黃芩湯來源于漢張仲景的《傷寒論》是我國醫(yī)門經(jīng)方之一，具有"高效優(yōu)質(zhì)中藥復(fù)方藥物"的特征，是療效確切、藥味相對(duì)簡單的一個(gè)經(jīng)典復(fù)方藥物。黃芩湯由黃芩、芍藥、甘草、大棗組成，能清熱止痢，和中止痛。用于治療濕熱下痢，腹痛泄瀉，瀉下急迅或?yàn)a而不爽，肛門灼熱等癥。黃芩湯的有效性及安全性經(jīng)過千百年臨床檢驗(yàn)，確實(shí)、可靠。臨床用于痢疾、急性胃炎、腸炎、小兒腹瀉、消化道型病毒性感冒，也有用于阿米巴痢疾。方中黃芩苦寒，以清理熱為主，能清熱燥濕，解毒治痢；芍藥酸寒，能邪熱斂陰和，營緩急止痛；甘草大棗條中和脾，益氣滋液，顧護(hù)正氣。四藥組合，具有淸熱止痢，和中止痛的功效。說明本方配物的合理性和科學(xué)性?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明黃芩湯的藥理活性較為廣泛，主要表現(xiàn)為抑菌抗炎，解痙，鎮(zhèn)痛，解熱，增強(qiáng)免疫，鎮(zhèn)靜等方面。(中國中藥雜志，1990年，15巻，第2期)但尚未有對(duì)黃芩湯活性部位制備方法及其應(yīng)用的研究報(bào)道。潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis,UC)是胃腸道最嚴(yán)重的疾病之一，病變主要限于大腸粘膜與粘膜下層，臨床表現(xiàn)為腹瀉、粘液膿血便、腹痛、病情輕重不等，多呈反復(fù)發(fā)作的慢性病程，并可能引起中毒性巨結(jié)腸，直腸結(jié)腸癌變，腸大出血等多種并發(fā)癥。世界各地都可發(fā)生UC，但北半球更常見。發(fā)病率英格蘭、挪威、瑞典、丹麥和美國占10萬人口的3.37.3%，白種人和猶太人較高，有色人種和地中海地區(qū)較低。性別無明顯差別，但家族發(fā)病增加，可發(fā)生在各種年齡，但2040歲多見。近年來發(fā)病率逐漸升高，但其病因及確切發(fā)病機(jī)制至今未明。一般認(rèn)為涉及到遺傳、免疫、感染、精神等多方面的因素。過去一直認(rèn)為該病在我國相當(dāng)少見,隨著發(fā)病率的升高，近年來我國對(duì)本病的認(rèn)識(shí)己引起重視。本發(fā)明提供的黃芩湯活性部位治療潰瘍性結(jié)腸炎，是從整體觀念出發(fā)，療效確切持久，且安全性好。特別對(duì)輕中度患者，運(yùn)用中藥治療安全、有效、經(jīng)濟(jì)，符合潰瘍性結(jié)腸炎患者的治療需求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明一個(gè)目的是提供一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的黃芩湯活性部位。本發(fā)明的另一目的是提供一種低成本、高轉(zhuǎn)移率、適合于工業(yè)生產(chǎn)的黃芩湯活性部位的制備方法。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供上述黃吝湯活性部位為原料，在制備、治療或預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明藥物的活性成分是由如下重量份比例的原料藥制成的黃芩3份白芍2份甘草(炎)2份大棗2份本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的這種黃芩湯活性部位的制備方法包括A、浸潤將黃芩湯組成藥物飲片用509b濃度以上的醇溶液，以l-3倍(V/W)的量浸泡8-12小時(shí)使之溶脹。B、提取用50%-9596濃度的醇溶液對(duì)A步驟中生藥加熱回流3-5次以上；醇溶液用量為生藥的3-10倍(V/W),每次提取時(shí)間為1-2小時(shí)，合并提取液。在0.05MP條件下，50-75X:減壓濃縮，得藥液比重為1.01-1.20。C、大孔吸附樹脂對(duì)提取物富集活性部位將歩驟B中藥液加到裝有D-lOl、D-201、D-140、D141A、D-301、D-401、AB-8等弱極性大孔吸附樹脂其中的一種大孔吸附樹脂的層析柱中，用水洗脫至無a-萘酚反應(yīng)，繼之用60-80%的醇溶液洗脫至鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性，收集醇洗脫液。D、干燥將C歩驟獲得的醇洗脫液在0.05MP條件下，50-75C減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.10~1.25(60t:)的浸膏，置701C-85r干燥成干膏。所述的黃芩湯活性部位的制備方法中所述醇溶液包括甲醇、乙醇、丙醇的50%-80%溶液之一或混合物。所述的黃芩湯活性部位的制備方法歩驟B中，可用慢速滲漉替代回流提取，醇溶液用暈為生藥量的30倍以上，直至無明顯的鹽酸-鎂粉反應(yīng)為止，合并提取液。所述的黃芩湯活性部位的制備方法步驟D中優(yōu)選D-lOl大孔吸附樹脂富集活性部位。所述的黃芩湯活性部位的制備方法獲得的活性部位，黃酮、皂苷類成分總含量達(dá)到50。/。以上。所述的黃芩湯活性部位在制備、治療或預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的藥物中的應(yīng)用，可以用于制備滴丸、片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑。本發(fā)明的--個(gè)重要特點(diǎn)是活性部位黃酮、皂苷類成分含量達(dá)到50%以上，活性部位的提取、富集方法較簡便，為黃薈湯活性部位大批量的工業(yè)生產(chǎn)創(chuàng)造了工藝條件。本發(fā)明制備的黃芩湯活性部位在抗乙酸所至大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型試驗(yàn)表明，效果顯著。急性毒性試驗(yàn)表明，黃芩湯活性部位對(duì)小鼠無急性毒性。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合黃芩湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性部位的制備方法和制劑實(shí)例，說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。實(shí)施例1:1、按處方量取黃芩湯藥材3.0kg，加入2倍(V/W)生藥量的70%的乙醇溶液，攪拌均勻，放置8小時(shí)。再加入5倍70%的乙醇溶液加熱回流1.5小時(shí)，過濾，從復(fù)兩次，合并提取液。2、上述提取液在0.05MP條件下，50-75"減壓濃縮，得藥液比重為1.10(60匸)的浸膏。3、將上述獲得的浸膏加到裝有3.0kgD-101大孔吸附樹脂的層析柱中，用7倍柱體積水洗脫，繼之用6倍柱體積的80%乙醇溶液洗脫。收集80%乙醇洗脫液。4、將上述80y。乙醇洗脫液在0.05MP條件下，701C減壓濃縮，至相對(duì)密度為1.20(60匸)的浸膏，置751C減壓干燥得323g干膏。得率為10.76%。5、80%乙醇洗脫干燥物即為本發(fā)明黃零湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性部位，黃酮與皂苷總含量為67.1%，其中總黃酮含量為53.2%，總皂苷含量為13.9%，。實(shí)施例2:取活性部位100g，粉碎，過80目篩，加入微晶纖維35g、硬脂酸鎂5g,混勻，制成顆粒，壓制成片，包薄膜衣即得。實(shí)施例3:取活性部位50g，粉碎，過80目篩，加入淀粉40g、蔗糖粉5g、乙醇適量，混勻，制成顆粒，干燥即得。實(shí)施例4:取活性部位100g，粉碎，過80目篩，加入乳糖50g、硬脂酸鎂10g，混勻，裝入腸溶膠囊或膠囊即得。藥理作用本發(fā)明的藥物及其膠囊劑進(jìn)行了下列動(dòng)物試驗(yàn)以證明其療效摘要本發(fā)明黃芩湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性部位為采用現(xiàn)代中藥技術(shù)，對(duì)傳統(tǒng)中藥復(fù)方中活性成分進(jìn)行富集，主要用于治療潰瘍性結(jié)腸炎。根據(jù)"中藥新藥研究指南"的耍求，進(jìn)行了與功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)試驗(yàn)，為該藥臨床試驗(yàn)提供藥效學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將葯效學(xué)研究結(jié)果分述如下，第一部分主耍藥效學(xué)研究—、黃芩湯活性部位對(duì)乙酸所至澳瘍性結(jié)腸炎模型大賦的影響(1)黃萃湯活性部位對(duì)乙酸所至大豕浪瘍性結(jié)腸炎模型結(jié)腸重量和腸重系數(shù)的影響取禁食24小時(shí)大鼠50只，固定于半俯臥位，頭低腳高位，自肛門插入硅膠導(dǎo)管，推入戰(zhàn)乙酸lml,保持體位15秒后用生理鹽水2Qml沖洗，飼養(yǎng)三天，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、陽性藥(桷氧鑽吡啶)組、黃萃湯活性部位1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg三個(gè)劑Jt組，正常組為10只健康大鼠，各組給藥i均為lml/100g體重，正常組、空白組均給等量的生理鹽水，每天籌胃一次，連續(xù)3周，末次給藥后1小時(shí)后，各組大鼠斷頭處死，立即開旗分離結(jié)腸，沿腸系旗剪開，生理鹽水洗凈，用濾紙吸凈水分，稱量結(jié)腸重量，計(jì)算結(jié)腸系數(shù).腸重系數(shù)=結(jié)腸重量/大鼠體重量表1對(duì)乙鵬至大駄浪痛性結(jié)腸炎模雖結(jié)腸重量和麻重系數(shù)的彩響(Jb:SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與乙酸所造模蹇組比較*1*<0.05,**P<0.01，***P<0.001由表1可見，大鼠口展黃萃湯活性部位商、中兩個(gè)劑量均可顯著坩加結(jié)腸重量，顯著培加腸重系數(shù)陽性對(duì)照藥柳氣確吡啶也可顯著坩加結(jié)麻重量，顯著増加腸重系數(shù)(2)黃芩湯活性部位對(duì)乙酸所至大K浪瘍性結(jié)腸炎模型結(jié)腸組織中SQD、MDA的影響取禁食24小時(shí)大鼠50只，固定于半俯臥位，頭低腳商位，自肛門插入硅膠導(dǎo)管，推入8K乙酸lm1,保持體位15秒后用生理鹽水20ml沖洗，飼養(yǎng)三天.隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、陽性藥(楝氣磺吡啶)組、黃芩湯活性部位1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg三個(gè)劑量組。正常組為10只健康大鼠，各組給藥量均為lml/100g體重，正常組、空白組均給等量的生理鹽水，每天[胃一次，連續(xù)3周，末次給藥后1小時(shí)后，各組大鼠斷頭處死，立即開腹分離結(jié)腸，沿腸系胰剪開，生理鹽水洗凈，找出病變明顯結(jié)腸l-2cm，采用SOD試劑盒與MDA試劑盒潿定結(jié)麻組織中SOD與MDA含i,表2對(duì)乙酸所至人鼠欲痛性鈉腸炎模報(bào)糖tt組織中sqd、UM的形響(》±sd)組別動(dòng)物只數(shù)劑ttsod含量加/m蛋白)mda含tt(aaol/m蚩n)正常對(duì)照組101,1/咖g141.11±19.*"空白對(duì)照組101b1/l加g45.4狄31陽性對(duì)照組100.9g/kg26.S扭7J0"樣品粗10L6g/kg12361±17,02*"21.25*541"樣品組1030.77i8J9"樣品組1091.肚15.91**34.您7.85*與空白對(duì)照組比較*1<0.05,*<0.01，***P<0.001由表2可見，大K口展黃芩湯活性部位三個(gè)劑量，均可顯著坩加結(jié)腸組織中S0D含量，顯著降低結(jié)腸組織中l(wèi)fl)A含量陽性對(duì)照藥柳氧購耽啶也可顯著増加SOD含量，顯著降低血清中MDA含量。二、黃芩湯活性部位對(duì)番瀉葉所至小鼠腹瀉模型的影響取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、陽性藥(瀉痢停)組、黃芩湯活性部位1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg三個(gè)劑量組，給藥量均為0.2ml/10g體重，空白組給等Jt的生理鹽水，每天灌胃一次，連續(xù)3天，末次給藥后l小時(shí)后以番瀉葉混懸液按生藥量2.28/1痛胃，隨即將小鼠置于有濾紙的小桶中，觀察5小時(shí)腹瀉次數(shù)，表3對(duì)番掲葉所至小R膽再的影響(》±幼〉組別動(dòng)物只數(shù)劑量5小時(shí)膽瀉累計(jì)次數(shù)空白對(duì)照組100.2nl/10g7擬J陽性對(duì)照組100.2g/kg4肚1.9**樣品組101.6g/kg糊組100.8g/kg樣品組100.4g/kg與空白對(duì)照組比較*1<0.肪，《<0.01，*"P<0.001由表3可見，小鼠口服黃芩湯活性部位三個(gè)劑量，均可顯著減少番瀉葉所至小鼠腹瀉次數(shù)，表明黃芩湯活性部位具有較好的止瀉作用。三、黃芩湯活性部位對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹炎癥模型的影響取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，即空白對(duì)照組、陽性藥(阿斯匹林)組、黃芩湯活性部位1.6g/kg、0.8g/kg、0.4g/kg三個(gè)劑量組，給藥量均為0.2ral/10g體重，空白組給等量的生理鹽水。每天灌胃一次，連續(xù)3天，水次給藥后1小時(shí)，各鼠于左側(cè)耳殼正反兩面均勻涂抹制炎劑(二甲苯)O.lml。l小時(shí)后處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，于同一部位用打孔器沖下耳片(9mm)，稱重，以兩耳片重量差為腫脹度，求出抑制率。數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。結(jié)果見表4。抑制率=(空白組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度X100%表4對(duì)二甲苯所致小鼠耳廊腫脹的影響(A土SD)組別動(dòng)物只數(shù)劑量腫脹度(mg)抑制率w空白對(duì)照組100.2ml/10g15.12±3.01-陽性對(duì)照組100.7g/kg7.02i2,32"53.57樣品組101.6g/kg8.9肚3.35**40.61樣品組100.8g/kg10.41士3.1"31.15樣品組100.4g/kg12.20±3.92豐19.31與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01由表4可見，小鼠口服黃芩湯活性部位三個(gè)劑量，均可顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，表明黃芩湯活性部位具有較好的抗炎作用。第二部分安全性研究一、急性毒性試驗(yàn)(最大給藥量試驗(yàn))經(jīng)預(yù)試無法測出LDa,，故進(jìn)行最大給藥量試驗(yàn)。取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組，每組20只，分別為對(duì)照組和給藥組.各組小鼠均禁食12小時(shí)，然后給藥組小鼠用0.34g干粉/ml的黃芩湯活性部位(最大濃度)灌胃，容量為0.4ml/10g體重(最大容量)，一日共給藥一次，劑量為13.0g干粉/kg，相當(dāng)于成人臨床用量的350倍(臨床成人70kg，用量2，7g/日)，對(duì)照組小鼠給予等容量蒸餾水，觀察給藥后7日內(nèi)動(dòng)物狀態(tài)良好。以上研究結(jié)果表明，黃芩湯活性部位通過抗炎、止瀉、改變結(jié)腸組織內(nèi)SOD、MDA等指標(biāo)發(fā)揮治療潰瘍性結(jié)腸炎作用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、黃芩湯活性部位的制備工藝簡便宜行，適用大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。2、按照本發(fā)明制備的黃芩湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性組分，有效成分含量高，所得的產(chǎn)物生物活性強(qiáng)。權(quán)利要求1、一種用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的黃芩湯活性部位的制備方法，其特征在于包括如下步驟A、醇溶液浸潤將黃芩湯藥物飲片用50％濃度以上的醇溶液，以1-3倍(V/W)的量浸泡8-12小時(shí)使之溶脹；B、提取活性部位用50％-95％濃度的醇溶液對(duì)A步驟中生藥加熱回流3-5次以上；醇溶液用量為生藥的3-10倍(V/W)，每次提取時(shí)間為1-2小時(shí)，合并提取液；在0.05MP條件下，50-75℃減壓濃縮，得藥液比重為1.01-1.20。C、大孔樹脂對(duì)提取物富集活性部位將步驟B中藥液加到裝有D-101、D-201、D-140、D141A、D-301、D-401、AB-8等弱極性大孔吸附樹脂其中的一種大孔吸附樹脂的層析柱中，用水洗脫至無α-萘酚反應(yīng)，繼之用60-80％的醇溶液洗脫至鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性，收集醇洗脫液。D、干燥將C步驟獲得的乙醇洗脫液在0.05MP條件下，50-75℃減壓濃縮，得到相對(duì)密度為1.10-1.25(60℃)的浸膏，置70℃-85℃干燥成干膏。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述醇溶液包括甲醇、乙醇、丙醇的50%-80%水溶液之一或混合物。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在歩驟B中，可用慢速滲漉替代回流提取，醇溶液用量為生藥量的30倍以上，直至無明顯的鹽酸-鎂粉反應(yīng)為止，合并提取液。4、根據(jù)權(quán)利要求卜3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在步驟C中優(yōu)選D-lOl大孔樹脂富集活性部位。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，獲得的活性部位總黃酮、總皂苷類成分總含量達(dá)到50%以上。6、根據(jù)權(quán)利要求l-3所述的方法制得的黃苳湯活性部位，用于制備滴丸、片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑。7、權(quán)利要求l-6所述黃芩湯活性部位在制備、治療或預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種黃芩湯治療潰瘍性結(jié)腸炎活性部位的制備方法及所獲得產(chǎn)品的應(yīng)用。本發(fā)明是根據(jù)現(xiàn)代中藥提取技術(shù)，對(duì)黃芩湯中活性部位進(jìn)行提取、富集，分別采用醇溶液浸潤、提取、大孔吸附樹脂富集、干燥等步驟，獲得的黃芩湯活性部位中黃酮、皂苷類成分總含量達(dá)到50％以上。實(shí)驗(yàn)研究表明，本發(fā)明黃芩湯活性部位具有抗?jié)冃越Y(jié)腸炎作用。文檔編號(hào)A61K36/539GK101167798SQ200610161839公開日2008年4月30日申請(qǐng)日期2006年12月6日優(yōu)先權(quán)日2006年12月6日發(fā)明者劉偉娜,崔力劍,李云鵬,王永立,竇玉紅,詹文紅,丁趙,蕓黃申請(qǐng)人:河北醫(yī)科大學(xué)