專利名稱：杏樹皮及其提取物在制備增強機體免疫力的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及杏樹皮及其提取物在制備增強機體免疫力的藥物中的用途，屬于中藥領域。
背景技術：
現(xiàn)代醫(yī)學、細胞生物學及分子生物學的發(fā)展，使人們認識到免疫系統(tǒng)的紊亂不僅會產(chǎn)生多種疾病，而且與機體衰老及老年人的多發(fā)病如腫瘤、高血壓、糖尿病甚至精神病的發(fā)生均有密切關系。愛滋病(AIDS)的危害，使人們對免疫缺損的嚴重后果有了更深刻的認識，因此尋找具有良好免疫調(diào)節(jié)作用的藥物已成為當代新藥的發(fā)展方向之一。免疫功能具有增齡性變化，即年齡增大，其免疫功能下降或紊亂，結果胸腺萎縮，T細胞損耗，從而導致機體衰老，壽命縮短。
中藥是我國的醫(yī)藥寶庫，當前又是我國創(chuàng)制新藥的一個重要源泉，要與國際接軌，進行可持續(xù)性發(fā)展，中藥現(xiàn)代化是中藥發(fā)展的必由之路。而中藥免疫調(diào)節(jié)劑的研究無論是在藥學還是藥理學方面都已取得明顯的進步，它的深入研究和開發(fā)將成為中藥現(xiàn)代化的一個典范。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供杏樹皮及其提取物在制備增強機體免疫力的藥物中的用途。
本發(fā)明的第二個目的是提供有效增強機體免疫力的藥物。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案杏樹是我國原產(chǎn)，久經(jīng)栽培，品種很多，具有重要的經(jīng)濟價值。樹性強健，耐干旱，除作果樹和觀賞植物以外，還可作為防護林和水土保持用的優(yōu)良樹種。木材堅硬，適宜制作器物。果實富含營養(yǎng)和維生素，除供生食和浸漬用外，還適宜加工制作杏干、杏脯、杏醬等。種仁(杏仁)含脂肪和蛋白質(zhì)，可供食用及作醫(yī)藥和輕工業(yè)的原料。分布于東亞、中亞、小亞細亞和高加索。我國有7種，分布范圍大致以秦嶺和淮河為界，淮河以北杏的栽培較多，尤以黃河流域各省為其分布中心，淮河以南杏栽植較少。
本發(fā)明意想不到地發(fā)現(xiàn)了杏樹皮的新醫(yī)療用途，經(jīng)過細胞學實驗、動物實驗和臨床試驗，證實本發(fā)明可有效增強細胞活力和機體免疫力，無毒副作用。
本發(fā)明所說的杏樹皮包括杏樹枝部的樹皮、杏樹干部的樹皮和杏樹根部的樹皮。
據(jù)《全展選編·內(nèi)科疾病》記載，杏樹皮為雙子葉植物藥薔薇科植物杏或山杏的樹皮。性味甘，寒，入心、肺經(jīng)?？杉宸?，用于治過食苦杏仁中毒。原植物杏Prunus armeniaca L.山杏Prunus.Armeniaca L.Var.Ansu Maxim.。
據(jù)《本草圖經(jīng)》記載，杏枝為雙子葉植物藥薔薇科植物杏或山杏的樹枝。辛，平，入肝經(jīng)，化瘀通絡，治跌打損傷，瘀血阻絡。原植物杏Prunus armeniaca L.山杏Prunus.ArmeniacaL.Var.Ansu Maxim.。
據(jù)《本草綱目》記載，杏樹根為雙子葉植物藥薔薇科植物杏或山杏的根。苦，溫入肝、腎經(jīng)。行氣墮胎，消食解毒。治胎盤不下，死胎，過食杏仁中毒。原植物杏Prunus armeniacaL.山杏Prunus.Armeniaca L.Var.Ansu Maxim.。
杏樹干莖部位的皮為赤紅色，肉眼觀察發(fā)亮，有光澤，杏樹枝在幼年時也發(fā)紅，當杏樹不再年輕，接近土地的杏樹干底部皮質(zhì)變厚，顏色變?yōu)榛彝辽?，地下部分的杏樹根部，表皮顏色為棕紅色。如果把杏樹枝皮、杏樹干皮及杏樹根皮放在一起，肉眼觀察，杏樹根皮顏色最深，杏樹干皮次之，杏樹枝皮又次之。再把所有樹皮翻過來觀察其纖維層，可以很明顯的觀察到杏樹根皮的纖維層最厚，杏樹干皮次之，杏樹枝皮又次之。所以，雖然三個不同部位的功效是一致的，都可以做為原材料，但從質(zhì)量，數(shù)量方面考慮，優(yōu)先選擇杏樹根皮做為原材料顯然最好，杏樹干皮次之，杏樹枝皮又次之。故本發(fā)明所涉及的所有科學實驗的原材料中杏樹根皮數(shù)量最多，杏樹干皮次之，杏樹枝皮又次之，統(tǒng)稱為杏樹皮。
在取材過程中，由于杏樹膠固著在樹皮上，難以分離，故只能一同入藥，因此不排除杏樹膠含有活性成分的可能。因此本發(fā)明還保護杏樹膠用于制備增加機體(包括人體和動物體)免疫力的藥物的用途。此處的杏樹膠尤指附著于杏樹皮上的杏樹膠，也可通過其他方式制備。
杏樹皮的纖維層分泌有液體，在自然條件下可形成膠狀物質(zhì)，常附著于樹皮表層。本發(fā)明在研究過程中將其作為有效部位之一，與樹皮同時制備藥物。由于杏樹膠來源于樹皮，因此我們有理由相信這種膠狀物質(zhì)也含有未知的活性成分。所以，無論單獨使用樹膠還是將其與樹皮附著在一起混合提取獲得含有樹膠成分的混合物，均屬于本發(fā)明的保護范圍。
杏樹還有野杏樹(也叫山杏樹)與家杏樹(即人工種植杏樹)之分，其根皮外觀的顏色及厚度無明顯區(qū)別，區(qū)別在于提取物的產(chǎn)出量，野杏樹根皮的產(chǎn)量要多于家杏樹根皮，根據(jù)鑒別中藥的一貫經(jīng)驗，所有野生植物品種的質(zhì)量都要優(yōu)于人工種植品種，但做為藥品的原材料，野杏樹不僅藥源有限，采購成本更高，而且容易造成對野杏樹的過度破壞，監(jiān)管會有一定困難。有鑒于此，本專利所涉及的所有科學實驗的原材料中，少部分為野杏樹根皮和野杏樹干皮，大部分為家杏樹根皮，統(tǒng)稱為杏樹皮。
本發(fā)明所用的杏樹皮采摘于山西的呂梁山、太行山和陜西的臨潼山，其他來源的杏樹皮也同樣可以使用。在取下杏樹皮后，趁濕先截成3厘米左右的小段，然后洗凈，曬干或烘干備用。在取下杏樹皮后，趁濕先截成3厘米左右的小段，然后洗凈，曬干或烘干備用。
一種增強機體免疫力的藥物，活性成份為杏樹皮或杏樹皮提取物。
本發(fā)明可以采用中藥制劑常規(guī)方法制備成任何常規(guī)劑型，例如將這些原料藥研磨成粉末混合均勻制成散劑沖服；也可以將這些藥物一起水煎，然后濃縮水煎液，制成口服液；還可以使用有機溶劑提取該藥物原料中的脂溶性成分，制成常規(guī)藥劑；本發(fā)明還可以在簡單處理后加入藥劑學可接受的輔料，制備成各種其他劑型。
加入的輔料可以是淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、明膠、甘油、瓊脂、碳酸鈣、表面活性劑、聚乙二醇、糊精等。
藥劑的劑型可以是片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、噴霧劑、滴丸劑等，優(yōu)選的口服劑型是顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、滴丸劑、丸劑等。
一種增強機體免疫力的湯劑，按下述方法制成取杏樹皮100克，(也可削去外面表皮，僅留中間纖維部分，對于效果基本無影響)，加水500毫升，煮沸20分鐘，文火至粘稠狀即可。
一種增強機體免疫力的粉劑，按下述方法制成取杏樹皮100克，(也可削去外面表皮，僅留中間纖維部分，對于效果基本無影響)，加水500毫升，煮沸20分鐘，文火至粘稠狀，烘干粉碎即可。
一種增強機體免疫力的粉劑，將杏樹皮直接粉碎即得。該杏樹皮可以含有樹膠物質(zhì)。
本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明能夠有效增強機體免疫力，同時調(diào)節(jié)機體免疫功能，無毒副反應，使用安全。
下面結合本發(fā)明較佳實施例對本發(fā)明作進一步說明，凡是依照本發(fā)明公開內(nèi)容進行的任何本領域的等同替換均屬于對本發(fā)明專利權的侵犯。
具體實施例方式
實施例1一種增強機體免疫力的湯劑取杏樹皮100克，加水500毫升，煮沸20分鐘，文火煎煮至粘稠狀即可。
提取物的外觀為棕紅色湯劑，聞起來無味，人服用的味覺為苦澀味。
實施例2一種增強機體免疫力的粉劑取杏樹皮100克，粉碎成100目細粉，即得。
外觀為棕紅色粉劑，聞起來無味，人服用的味覺為苦澀味。
實施例3一種增強機體免疫力的粉劑取杏樹皮100克，加水500毫升，煮沸20分鐘，文火煎煮至粘稠狀，烘干粉碎即可。
提取物的外觀為棕紅色粉劑，聞起來無味，人服用的味覺為苦澀味。
實施例4細胞實驗采用體外抑制實驗方法，觀察本發(fā)明在敏感細胞MT4中的抑制作用。
一.材料1.藥物實施例2的藥粉，用無血清的RPMI1640培養(yǎng)基配制成所需濃度(1mg/ml)。
2.細胞及病毒MT4(淋巴細胞株)，中國預防醫(yī)學中心病毒學研究所腫瘤室提供，在含有10％小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液中培養(yǎng)。
3.HIV-1病毒，為國際標準株，中國疾病預防控制中心病毒病控制所提供。
二.方法1.HIV-1，P24抗原檢測試驗采用一種抗原微量ELISA測定方法，以定量測定體外培養(yǎng)的上清液中的P24抗原量，其方法如下(1)吸取裂解液置于包被有P24單抗的條孔中，每孔25μl。
(2)各加100μl樣品，包括藥物組、病毒對照，細胞對照于已設計好的條孔中，條孔置濕盒中于37℃培養(yǎng)60分鐘。
(3)用磷酸緩沖液沖洗條孔，至少沖洗4次。
(4)每孔加100μl酶標抗體(IgG)，37℃培養(yǎng)60分鐘。
(5)用磷酸緩沖液沖洗條孔，至少沖洗4次。
(6)每孔加入100μ新配制的底物，室溫避光放置30分鐘。
(7)每孔加入100μ中止液。
(8)用酶標儀在630nm及450nm范圍內(nèi)雙波測定OD值，最終選取570nm用于檢測。
三.預實驗細胞毒性分析按照抗病毒分析試驗方法，將MT4細胞以20％血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液配成50萬/毫升，種入96孔板，每孔加100μ細胞液，另加入不同濃度的藥液100μl，對照組不加藥，改加無血清RPMI1640培養(yǎng)基100μ。置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6-7天后，觀察藥物對細胞的毒性。
正常細胞毒性原液濃度為1mg/ml試驗結果樣品濃度 1mg/ml 1∶5 1∶10 1∶20570nmOD值 0.545 0.625 0.774 0.820正常細胞對照 0.847活細胞數(shù)率 64.35 73.79 91.38 96.81(％)帶毒細胞毒性原液濃度為1mg/ml試驗結果(570nm OD值)原液濃度1mg/ml樣品濃度1∶2 1∶41∶51∶81∶101∶201∶400.16950.459 0.669 0.909 0.5250.4060.340正常細胞對照 1.3111帶毒細胞對照 1.078與正常細胞對比活細胞數(shù)率 12.93 35.0151.0369.33 40.04 30.97 25.93(％)與帶毒細胞對比活細胞數(shù)率 15.72 42.5862.0684.32 48.70 37.66 31.54(％)四.抗病毒實驗(每孔5萬個MT4細胞)用100TCID50HIV-1病毒感染易感淋巴細胞株(MT4細胞)，置于37℃培養(yǎng)箱中60-90分鐘后，用無血清RPMI1640液清洗，離心(1800轉/分)去掉上清液，加入96孔細胞板中，將配制好的不同藥物濃度分別加入其中，用RPMI1640完全培養(yǎng)液，培養(yǎng)6-7天后，用《HIV-1，P24試劑盒》(市售)檢測上清液中的P24抗原，同時做同等條件的病毒對照及正常細胞對照組。
試驗結果原液濃度1mg/ml樣品濃度1∶5 1∶100.324 0.539
正常細胞對照1.3111帶毒細胞對照1.078對病毒的抑制率 69.94 50.00(％)五.結論本發(fā)明藥物在0.2mg/ml時，對HIV-1病毒的抑制率為69.94％。
本發(fā)明藥物在0.125mg/ml時，與正常細胞對比活細胞數(shù)率為69.33％。
與帶毒細胞對比活細胞數(shù)率為84.32％。
實施例5動物實驗對本發(fā)明藥物進行了對鼠白血病病毒(鼠AIDS)的抑制作用的動物實驗，利用Friend型鼠白血病病毒(FLV)感染BALB/C小鼠為動物模型，以脾指數(shù)及相應的脾指數(shù)抑制率，以及血白細胞的變化為評價指標觀察本發(fā)明抗鼠白血病病毒作用。結果表明該藥物各劑量組均能抑制病毒引起的小鼠病變。
一.實驗材料1.藥物按實施例2制備的棕紅色粉末。陽性對照藥物為AZT，廈門制藥廠生產(chǎn)，批號9802011。
2.動物BALB/C小鼠由南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供，雌性，體重13-15克。
3.試劑動物血液分析試劑稀釋液，Diluent(批號0795712)，清洗液，Detergent(0795712)，鞘液，Sheath(680112)，溶血素，Lyse，批號17912，均購自美國雅培公司。
4.儀器CELL-DYN3500R血球計數(shù)器5.毒種Friend鼠白血病病毒購自美國經(jīng)典培養(yǎng)物收藏中心(ATCC)，經(jīng)腹腔注射小鼠增強毒力后，傳代1次。并測定其半數(shù)致死量為2.0。
二.實驗方法1.稀釋病毒試驗前取毒種，用流水沖浸融化，以DMEM稀釋成每0.2ml含5個LD50，放冰水中保存。
2.感染小鼠小白鼠隨即分組，每組5-8只，分陽性藥物組(AZT)、病毒對照組及本發(fā)明藥物大、中、小劑量組。在碘酒和酒精消毒后，用已經(jīng)滴定鼠白血病病毒液注射腹腔，每只鼠約0.2ml，同時設正常小鼠對照組。
3.給藥本發(fā)明藥物按0.3g/kg、0.2g/kg和0.1g/kg分為大、中、小劑量給藥；陽性藥物(AZT)對照組按100mg/kg給藥。以上藥物均在病毒攻擊的同一天開始給藥，共給藥20天，給藥1次/天，灌胃給藥。
4.測定脾指數(shù)感染后21天，殺剖小鼠，殺剖前禁食禁水4小時以上，稱小鼠體重，處死后取出鼠脾、胸腺，稱重。按照以下公式計算得出脾指數(shù)、胸腺指數(shù)和抑制率。



5.鼠血常規(guī)測定摘取眼球抗凝取血，測定血常規(guī)，包括紅細胞計數(shù)和白細胞計數(shù)等指標。
三.統(tǒng)計學處理對所得實驗數(shù)據(jù)進行t檢驗，求統(tǒng)計學的的顯著性，凡p值小于0.05的，定為此藥物有效。
四.實驗結果見表1。
表1本發(fā)明藥物對小鼠實驗感染鼠白血病病毒抑制作用

注與病毒對照組相比，*p＜0.05，**p＜0.01五.結論以上結果顯示，杏樹皮含有可有效抑制鼠白血病病毒的感染的物質(zhì)，其樹皮直接粉碎得到的藥物能夠治療鼠AIDS。提示，如果對杏樹皮進行進一步提取，得到的物質(zhì)將可能具有更好的療效。
從脾指數(shù)和白細胞計數(shù)指標來看，脾指數(shù)比病毒對照組低，白細胞計數(shù)接近正常組值，說明本發(fā)明對胸腺T淋巴系統(tǒng)的不良影響比陽性藥物AZT要小，更有利于免疫功能重建，在殺滅病毒的同時全面提升機體免疫功能，標本兼治。
實施例6臨床觀察一.藥物及受試1.藥物按照實施例3的方法制備，得棕紅色粉末。
2.受試20例患者，其中男性10例、女性10例，年齡在18～60歲。病程在2年之內(nèi)的為8例，3年之內(nèi)的為5例，4年為7例。
3.診斷標準(1)心脾兩虛頭暈目眩、全身乏力。倦怠瞌睡、食少呆納、大便溏泄、健忘失眠、心悸氣短、精神疲倦、舌體胖大、邊有齒痕，脈沉細。
(2)氣血不足心悸怔仲、失眠多夢、健忘自汗、少氣懶言。面色無華、舌質(zhì)淡、胎薄白，脈沉細。
二.實驗方法1.服用本發(fā)明藥物，每日2次，每次5-15g，30天為一個療程。
2.采用治療前后自身對照，實驗期間禁用其他藥物。
3.療效判定標準(1)痊愈主要癥狀消失(2)顯效主要癥狀消失2/3以上(3)有效主要癥狀減輕(4)無效主要癥狀治療前后無變化三.結果綜合療效觀察結果20位患者中，痊愈10例，占50％，顯效5例，占25％，有效5例，占25％，總有效率100％。
權利要求
1.杏樹皮在制備增強機體免疫力的藥物中的用途。
2.杏樹皮提取物在制備增強機體免疫力的藥物中的用途。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的杏樹皮在制備增強機體免疫力的藥物中的用途，其特征在于所述杏樹皮為杏樹枝部的樹皮、杏樹干部的樹皮和杏樹根部的樹皮。
4.杏樹膠在制備增強機體免疫力的藥物中的用途。
5.一種增強機體免疫力的藥物，其特征在于活性成份為杏樹皮或杏樹皮提取物。
6.一種增強機體免疫力的藥物，其特征在于由權利要求5所述的藥物和藥劑學可接受的輔料組成。
7.根據(jù)權利要求6所述的一種增強機體免疫力的藥物，其特征在于所述藥劑學可接受的輔料為淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、明膠、甘油、瓊脂、碳酸鈣、表面活性劑、聚乙二醇、糊精等。
8.根據(jù)權利要求6所述的一種增強機體免疫力的藥物，其特征在于所述制劑的劑型為片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、噴霧劑、滴丸劑等，優(yōu)選的口服劑型是顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、滴丸劑、丸劑等。
9.一種增強機體免疫力的湯劑，按下述方法制成取杏樹皮100克，加水500毫升，煮沸20分鐘，文火至粘稠狀即可。
10.一種增強機體免疫力的粉劑，按下述方法制成(1)將杏樹皮直接粉碎；或(2)取杏樹皮100克，加水500毫升，煮沸20分鐘，文火至粘稠狀，烘干粉碎即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了杏樹皮及其提取物在制備增強機體免疫力的藥物中的用途。本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明能夠有效增強機體免疫力，同時調(diào)節(jié)機體免疫功能，無毒副反應，使用安全。
文檔編號A61K9/20GK1990017SQ20061016197
公開日2007年7月4日 申請日期2006年12月8日 優(yōu)先權日2005年12月9日
發(fā)明者范建榮 申請人:范建榮