專利名稱：一種抗腫瘤的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法，特別涉及一種抗腫瘤的藥物組合物及其制備方法。

背景技術(shù)：
癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，世界衛(wèi)生組織公布的統(tǒng)計資料表明每年全世界癌癥發(fā)病約1000萬人，死亡約700萬人。目前臨床應(yīng)用的抗癌藥物的毒副作用多較大。因此研究開發(fā)安全高效的抗癌藥是當(dāng)務(wù)之急，特別是從博大精深的傳統(tǒng)中醫(yī)藥中開發(fā)新的抗癌藥一直是新藥研究的熱門課題。
三七是名貴中藥，傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為“人參補氣第一，三七補血第一”，在我國名貴藥材中是治療廣泛、保健作用持久的“扶正固本”食藥兼用品。三七對機體免疫系統(tǒng)的影響是相當(dāng)廣泛的，它可促進機體粒細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的增殖和活化?？墒筎淋巴細(xì)胞增殖，較高劑量有促進B淋巴細(xì)胞的作用，在病理免疫病情況下起調(diào)節(jié)的作用，在抗腫瘤中也有一定作用。三七總皂甙有顯著的鎮(zhèn)靜作用，并能協(xié)同中樞抑制藥的抑制作用。冬蟲夏草也是傳統(tǒng)名貴藥材，最初見于清《本草備要》入肺經(jīng)止咳，又作為肝腎雙補佳品。經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)分析表明，蟲草含真菌多糖、蟲草素及多種氨基酸、維生素、酶、鈣、磷、鋅等數(shù)十種微量元素，具有提高肌體免疫功能，促進造血和新陳代謝功能。冬蟲夏草煎劑腹腔注射可明顯抑制小鼠自發(fā)性活動，延長小鼠戊巴比妥鈉睡眠時間。故皂苷、蟲草結(jié)合能在提高人體免疫功能、改善睡眠上發(fā)揮更好的保健作用。在本發(fā)明之前沒有關(guān)于本發(fā)明藥物組合物抗腫瘤作用的報道。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種藥物組合物及其制備方法，本發(fā)明另一目的在于提供該藥物組合物制劑的用途。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn) 本發(fā)明是通過如下兩味原料組成 天然蟲草1-4重量份人參皂苷1-4重量份。
上述三味原料藥的最佳配比如下 天然蟲草2重量份人參皂苷3重量份。
上述三味原料藥的配比如下 天然蟲草3重量份人參皂苷2重量份。
上述三味原料藥的配比如下 天然蟲草3重量份人參皂苷4重量份。
上述組合物可以制成片劑、軟膠囊劑、膠囊劑、緩釋劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液體制劑或凍干粉針劑。
本發(fā)明原料藥人參皂苷的具體制備工藝如下 取5-15目人參或三七粗粉，用40-100％乙醇回流提取1-4次，每次1-3小時，收集提取液，過濾，濾液回收乙醇，至無乙醇味后，真空濃縮1.5-2小時，濃縮液加入等體積蒸餾水，攪拌均勻，過濾，濾液過大孔吸附樹脂柱吸附；用2-4倍量樹脂床體積蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，吸附人參皂苷的樹脂柱備用；將上述吸附樹脂柱用20-50％乙醇洗脫，20-50％乙醇用量為1-5倍量樹脂床體積，用薄層色譜法跟蹤檢測，其中的薄層色譜法是展開劑為30-100∶10-50∶2-20的氯仿∶甲醇∶水下層；顯色劑5-20％硫酸乙醇溶液；當(dāng)薄層色譜上出現(xiàn)原人參二醇組皂苷斑點后，停止用20-50％乙醇洗脫，改用30-100％乙醇洗脫，并收集洗脫液；洗脫液用0.5-2％活性炭加熱回流0.5-2小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用30-100％乙醇洗脫樹脂吸附的原人參二醇組皂苷，回收乙醇，真空濃縮，真空干燥，粉碎，得原人參二醇組皂苷；取上述原人參二醇組皂苷粉溶解于30-70％醋酸、20-50％枸櫞酸、20-50％草酸、20-50％丙二酸、0.5-2％鹽酸、0.5-2％硫酸的水或乙醇溶液中，控制反應(yīng)條件水解溫度為20℃-100℃，水解時間為0.5小時-10小時，酸水解反應(yīng)完成后加入與酸水解液等體積蒸餾水，用6％氫氧化鈉溶液中和至中性，過濾，收集水解產(chǎn)物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸餾水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉，備用；將水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉溶解于5-10倍重量50-140％乙醇中，溶解，過濾，濾液用1％活性炭加熱回流0.5-2小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用30-100％乙醇洗脫樹脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脫液總體積的1/4-3/4，冷卻，放置結(jié)晶，真空抽濾，收集結(jié)晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色譜法測定結(jié)晶中的人參皂苷Rh2和Rg3的含量；此結(jié)晶即為含人參皂苷Rh2和人參皂苷Rg3的抗腫瘤藥物精制物人參皂苷；收率約為原人參二醇組皂苷投料量的4-5％。
本發(fā)明原料藥皂苷的具體制備工藝優(yōu)選制備方法如下 取10目人參或三七粗粉，用70％乙醇回流提取3次，每次2小時，收集提取液，過濾，濾液回收乙醇，至無乙醇味后，真空濃縮2小時，濃縮液加入等體積蒸餾水，攪拌均勻，過濾，濾液過大孔吸附樹脂柱吸附；用3倍量樹脂床體積蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，吸附人參皂苷的樹脂柱備用；將上述吸附樹脂柱用35％乙醇洗脫，35％乙醇用量為2.5倍量樹脂床體積，用薄層色譜法跟蹤檢測，其中的薄層色譜法是展開劑為65∶35∶10的氯仿∶甲醇∶水下層；顯色劑10％硫酸乙醇溶液；當(dāng)薄層色譜上出現(xiàn)原人參二醇組皂苷斑點后，停止用35％乙醇洗脫，改用65％乙醇洗脫，并收集洗脫液；洗脫液用1％活性炭加熱回流0.5小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用65％乙醇洗脫樹脂吸附的原人參二醇組皂苷，回收乙醇，真空濃縮，真空干燥，粉碎，得原人參二醇組皂苷；取上述原人參二醇組皂苷粉溶解于50％醋酸或1％鹽酸中，水解時間鹽酸水解1小時，醋酸水解6小時，水解溫度為75℃，酸水解反應(yīng)完成后加入與酸水解液等體積蒸餾水，用6％氫氧化鈉溶液中和至中性，過濾，收集水解產(chǎn)物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸餾水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉，備用；將水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉溶解于8倍重量95％乙醇中，溶解，過濾，濾液用1％活性炭加熱回流0.5小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用95％乙醇洗脫樹脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脫液總體積的1/2，冷卻，放置結(jié)晶，真空抽濾，收集結(jié)晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色譜法測定結(jié)晶中的人參皂苷Rh2和Rg3的含量；此結(jié)晶即為含人參皂苷Rh2和人參皂苷Rg3的抗腫瘤藥物精制物人參皂苷；收率約為原人參二醇組皂苷投料量的5％。
本發(fā)明皂苷含人參皂苷Rh220％-25％和人參皂苷Rg340％-50％。
下述實驗和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。
實驗例三七蟲草混合粉抑制小鼠黑色素瘤效應(yīng)實驗 選用小鼠黑色素瘤(B16)動物模型，觀察三七蟲草混合粉對B16小鼠一般狀況、腫瘤抑制率影響。
1材料 1.1動物與瘤塊 雄性C57純種小鼠，體重20±2g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司購入(合格證號京動許字004049)，并北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院重點實驗室的清潔級環(huán)境下飼養(yǎng)；小鼠黑色素(B16)瘤塊由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所實驗中心提供。
1.2藥品與試劑 三七中提取分離的Rh2、Rg3以及天然蟲草提取成分由云南天秀植物科技開發(fā)有限公司提供。依據(jù)實驗需要，研究者將以上三種成分按照不同配伍比例混合。配伍混合比例如下皂苷Rh2、Rg3混合粉按照1∶1比例；三七蟲草混合粉1組為蟲草∶皂苷為2∶3比例；三七蟲草混合粉2組為蟲草∶皂苷為3∶2比例；三七蟲草混合粉3組為蟲草∶皂苷為3∶4比例。三健牌環(huán)磷酰胺由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)(批號050405)，購入中國國藥集團總公司。
2方法 2.1建立模型 按照相關(guān)文獻(xiàn)建立小鼠黑色素瘤(B16)動物模型[5]。選擇腫瘤生長旺盛的B16荷瘤小鼠，無菌條件下取出瘤塊，加PBS用玻璃勻漿器按1∶4稀釋制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞數(shù)約為5×106/L，各取0.2ml接種于C57小鼠右前肢腋窩皮下，接種時間在1小時內(nèi)完成。
2.2分組給藥 將接種B16細(xì)胞的C57小鼠隨機分為10組，8只/組。即①正常對照組；②模型對照組；③環(huán)磷酰胺組；④Rh2組；⑤Rg3組；⑥天然蟲草組；⑦Rh2與Rg3混合粉組；⑧三七蟲草混合粉1組；⑨三七蟲草混合粉2組；⑩三七蟲草混合粉3組。該實驗除環(huán)磷酰胺組以50mg/(kg·d)腹腔注射用藥外(隔日1次，共3次)，其余各組均采用灌胃途徑給藥、給水。為有利實驗觀察與評價效果，除環(huán)磷酰胺外，藥物劑量均為10mg/(kg·d)。實驗用藥以無水乙醇溶解后，再以生理鹽水稀釋配制成所需濃度，于接種后次日灌胃給藥，每日1次，共10天，第15天處死小鼠，制備標(biāo)本備檢。
2.3觀察指標(biāo) 實驗過程中動態(tài)觀察小鼠一般生長狀況、體重與動物死亡情況。第15天稱體重并脫頸處死小鼠、剝離腫瘤稱重，依據(jù)公式計算抑瘤率。抑瘤率(％)＝(1-給藥組平均瘤重/模型對照組平均瘤重)×100％；臟器指數(shù)(mg·g-1)＝臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×1000。
2.4統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進行處理，計數(shù)資料采用

表示； 多組資料均數(shù)比較采用單因素方差分析，當(dāng)P＜0.05時，表示有統(tǒng)計學(xué)意義。
3結(jié)果 3.1一般狀況觀察 實驗前各組小鼠一般狀況良好，實驗結(jié)束后小鼠全部存活。實驗過程中動態(tài)觀察各組小鼠一般狀況發(fā)現(xiàn)，模型組、CTX組小鼠一般狀況較差，主要表現(xiàn)為進行性反應(yīng)遲鈍、行動遲緩、進食量減少、形體消瘦、毛色少光澤，并有脫毛現(xiàn)象。尤其以CTX組更為明顯。余各實驗組小鼠毛色光澤、食欲增加、反應(yīng)及運動狀態(tài)良好。其中，以三七蟲草混合粉3∶1配伍比例的小鼠狀態(tài)最佳。3∶4比例次之。從動態(tài)觀察可以看出，三七皂苷、冬蟲夏草及皂苷與冬蟲夏草混合粉能明顯改善模型小鼠整體機能狀態(tài)，提高生活質(zhì)量，具有明顯的扶正作用。
3.2體重變化 給藥前分別稱各組小鼠體重，各組間比較，無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗結(jié)束后顯示，模型組、CTX組小鼠體重明顯下降，其余各組小鼠體重均有不同程度增加，與模型組、CTX組比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義，實驗結(jié)果見表1。
表1各組小鼠平均體重比較(

) 注1采用Anova檢驗，P1為實驗各組小鼠體重與正常小鼠體重比較的P值；P2為實驗各組小鼠體重與模型組小鼠體重比較的P值；P3為實驗各組小鼠體重與CTX組小鼠體重比較的P值；P4為三七蟲草實驗各組小鼠體重分別與Rh2劑量組、Rg3劑量組、天然蟲草組、皂苷混合物組小鼠體重比較的P值。
注2Δ平均體重變化量＝(治療后體重-治療前體重) 通過表1分析有如下結(jié)果①與正常對照組比較，CTX組、模型組小鼠體重明顯下降。說明腫瘤可導(dǎo)致體能消耗、體重下降，而CTX明顯促進了這一病理進程。②給藥各組均有明顯減輕/阻止小鼠體重下降效應(yīng)，其中，以天然蟲草與三七蟲草混合粉最佳。結(jié)合實驗過程中小鼠一般狀態(tài)觀察可以看出，三七主要活性成分Rh2與Rg3、冬蟲夏草能調(diào)節(jié)小鼠機能狀態(tài)，改善生活質(zhì)量，尤以冬蟲夏草效果最為明顯。冬蟲夏草具有滋補功效，調(diào)節(jié)整體機能可能是其抗腫瘤治療的關(guān)鍵機制之一。
3.3腫瘤抑制率 實驗結(jié)束后，分別取出各組小鼠腫瘤稱重，按照公式計算腫瘤抑制率。結(jié)果見表2。
表2各組腫瘤抑制率比較(

) 注采用Anova檢驗，P1為實驗各組腫瘤抑制率與模型組比較的P值；P2為Rh2組腫瘤抑制率與三七蟲草混合粉各組比較的P值；P3為Rg3組與三七蟲草混合粉各組比較的P值；P4為天然蟲草組與三七蟲草混合粉各組比較的P值；P5為皂苷混合粉與三七蟲草混合粉各組比較的P值 從表2分析可以看出①除Rg3組外，實驗用藥各組腫瘤抑制率均在30％以上，單味成分以天然蟲草抑瘤率最佳，Rh2次之。②Rh2、Rg3組合后的抑瘤率高于單味成分，具有一定的協(xié)同加和作用。③按不同配伍比例的三七蟲草混合粉抑瘤率高于單味成分，具有明顯的協(xié)同加和效應(yīng)，其中，以蟲草、皂苷比例為3∶2療效最佳，2∶3比例次之，3∶4比例最低，與天然蟲草、皂苷混合物抑瘤率相似。以上說明冬蟲夏草不同的配伍比例對腫瘤抑制率有一些影響。
4、結(jié)論 該實驗選用B16動物模型，觀察三七與天然蟲草混合粉對模型小鼠一般狀況、體重以及腫瘤抑制率影響。研究結(jié)果顯示①與正常對照組比較，CTX組、模型組小鼠體重明顯下降，尤其以CTX組下降幅度最大。說明腫瘤可導(dǎo)致體能消耗、體重下降，而CTX明顯促進了這一病理進程。②給藥各組均有明顯減輕/阻止小鼠體重下降效應(yīng)，其中，以天然蟲草與三七蟲草混合粉最佳。結(jié)合實驗過程中小鼠一般狀態(tài)觀察可以看出，三七主要活性成分、冬蟲夏草能調(diào)節(jié)小鼠機能狀態(tài)，改善生活質(zhì)量，尤以冬蟲夏草效果最為明顯。冬蟲夏草具有滋補功效，調(diào)節(jié)整體機能可能是其抗腫瘤治療的關(guān)鍵機制之一。③除Rg3組外，實驗用藥各組腫瘤抑制率均在30％以上，單味成分以天然蟲草抑瘤率最佳，Rh2次之。④Rh2、Rg3組合后的抑瘤率高于單味成分，具有一定的協(xié)同加和作用。⑤按不同配伍比例的三七蟲草混合粉抑瘤率高于單味成分，具有明顯的協(xié)同加和效應(yīng)，其中，以蟲草、皂苷比例為3∶2療效最佳，2∶3比例次之，3∶4比例最低，與天然蟲草、皂苷混合物抑瘤率相似。以上說明冬蟲夏草不同的配伍比例對腫瘤抑制率有一些影響。
下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果
具體實施例方式 實施例1口服凝膠的制備 天然蟲草2kg人參皂苷3kg，加常規(guī)輔料制成口服凝膠。
上述的人參皂苷的制備方法如下 取10目人參或三七粗粉，用70％乙醇回流提取3次，每次2小時，收集提取液，過濾，濾液回收乙醇，至無乙醇味后，真空濃縮2小時，濃縮液加入等體積蒸餾水，攪拌均勻，過濾，濾液過大孔吸附樹脂柱吸附；用3倍量樹脂床體積蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，吸附人參皂苷的樹脂柱備用；將上述吸附樹脂柱用35％乙醇洗脫，35％乙醇用量為2.5倍量樹脂床體積，用薄層色譜法跟蹤檢測，其中的薄層色譜法是展開劑為65∶35∶10的氯仿∶甲醇∶水下層；顯色劑10％硫酸乙醇溶液；當(dāng)薄層色譜上出現(xiàn)原人參二醇組皂苷斑點后，停止用35％乙醇洗脫，改用65％乙醇洗脫，并收集洗脫液；洗脫液用1％活性炭加熱回流0.5小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用65％乙醇洗脫樹脂吸附的原人參二醇組皂苷，回收乙醇，真空濃縮，真空干燥，粉碎，得原人參二醇組皂苷；取上述原人參二醇組皂苷粉溶解于50％醋酸或1％鹽酸中，水解時間鹽酸水解1小時，醋酸水解6小時，水解溫度為75℃，酸水解反應(yīng)完成后加入與酸水解液等體積蒸餾水，用6％氫氧化鈉溶液中和至中性，過濾，收集水解產(chǎn)物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸餾水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉，備用；將水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉溶解于8倍重量95％乙醇中，溶解，過濾，濾液用1％活性炭加熱回流0.5小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用95％乙醇洗脫樹脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脫液總體積的1/2，冷卻，放置結(jié)晶，真空抽濾，收集結(jié)晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色譜法測定結(jié)晶中的人參皂苷Rh2和Rg3的含量；此結(jié)晶即為含人參皂苷Rh2和人參皂苷Rg3的抗腫瘤藥物精制物人參皂苷；收率約為原人參二醇組皂苷投料量的5％。
實施例2膠囊劑的制備 天然蟲草3kg人參皂苷2kg，加常規(guī)輔料制成膠囊劑。
上述的人參皂苷的制備方法如下 取15目人參或三七粗粉，用60％乙醇回流提取4次，每次2小時，收集提取液，過濾，濾液回收乙醇，至無乙醇味后，真空濃縮2小時，濃縮液加入等體積蒸餾水，攪拌均勻，過濾，濾液過大孔吸附樹脂柱吸附；用4倍量樹脂床體積蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，吸附人參皂苷的樹脂柱備用；將上述吸附樹脂柱用30％乙醇洗脫，60％乙醇用量為4倍量樹脂床體積，用薄層色譜法跟蹤檢測，其中的薄層色譜法是展開劑為65∶45∶10的氯仿∶甲醇∶水下層；顯色劑10％硫酸乙醇溶液；當(dāng)薄層色譜上出現(xiàn)原人參二醇組皂苷斑點后，停止用30％乙醇洗脫，改用60％乙醇洗脫，并收集洗脫液；洗脫液用2％活性炭加熱回流2小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用80％乙醇洗脫樹脂吸附的原人參二醇組皂苷，回收乙醇，真空濃縮，真空干燥，粉碎，得原人參二醇組皂苷；取上述原人參二醇組皂苷粉溶解于50％醋酸溶液中，控制反應(yīng)條件水解溫度為65℃，水解時間為8小時，酸水解反應(yīng)完成后加入與酸水解液等體積蒸餾水，用6％氫氧化鈉溶液中和至中性，過濾，收集水解產(chǎn)物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸餾水，分2次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉，備用；將水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉溶解于10倍重量85％乙醇中，溶解，過濾，濾液用1％活性炭加熱回流2小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用85％乙醇洗脫樹脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脫液總體積的2/3，冷卻，放置結(jié)晶，真空抽濾，收集結(jié)晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色譜法測定結(jié)晶中的人參皂苷Rh2和Rg3的含量；此結(jié)晶即為含人參皂苷Rh2和人參皂苷Rg3的抗腫瘤藥物精制物人參皂苷；收率約為原人參二醇組皂苷投料量的4％。
實施例3滴丸的制備 天然蟲草3kg人參皂苷4kg，加常規(guī)輔料制成滴丸。
權(quán)利要求
1、一種抗腫瘤的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的天然蟲草1-4重量份 皂苷1-4重量份。
2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的天然蟲草2重量份 皂苷3重量份。
3、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的天然蟲草3重量份 皂苷2重量份。
4、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的天然蟲草3重量份 皂苷4重量份。
5、如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特征在于該組合物制成片劑、軟膠囊劑、膠囊劑、緩釋劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液體制劑或凍干粉針劑。
6、權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取5-15目人參或三七粗粉，用40-100％乙醇回流提取1-4次，每次1-3小時，收集提取液，過濾，濾液回收乙醇，至無乙醇味后，真空濃縮1.5-2小時，濃縮液加入等體積蒸餾水，攪拌均勻，過濾，濾液過大孔吸附樹脂柱吸附；用2-4倍量樹脂床體積蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，吸附人參皂苷的樹脂柱備用；將上述吸附樹脂柱用20-50％乙醇洗脫，20-50％乙醇用量為1-5倍量樹脂床體積，用薄層色譜法跟蹤檢測，其中的薄層色譜法是展開劑為30-100∶10-50∶2-20的氯仿∶甲醇∶水下層；顯色劑5-20％硫酸乙醇溶液；當(dāng)薄層色譜上出現(xiàn)原人參二醇組皂苷斑點后，停止用20-50％乙醇洗脫，改用30-100％乙醇洗脫，并收集洗脫液；洗脫液用0.5-2％活性炭加熱回流0.5-2小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用30-100％乙醇洗脫樹脂吸附的原人參二醇組皂苷，回收乙醇，真空濃縮，真空干燥，粉碎，得原人參二醇組皂苷；取上述原人參二醇組皂苷粉溶解于30-70％醋酸、20-50％枸櫞酸、20-50％草酸、20-50％丙二酸、0.5-2％鹽酸、0.5-2％硫酸的水或乙醇溶液中，控制反應(yīng)條件水解溫度為20℃-100℃，水解時間為0.5小時-10小時，酸水解反應(yīng)完成后加入與酸水解液等體積蒸餾水，用6％氫氧化鈉溶液中和至中性，過濾，收集水解產(chǎn)物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸餾水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉，備用；將水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉溶解于5-10倍重量50-140％乙醇中，溶解，過濾，濾液用1％活性炭加熱回流0.5-2小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用30-100％乙醇洗脫樹脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脫液總體積的1/4-3/4，冷卻，放置結(jié)晶，真空抽濾，收集結(jié)晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色譜法測定結(jié)晶中的人參皂苷Rh2和Rg3的含量；此結(jié)晶即為含人參皂苷Rh2和人參皂苷Rg3的抗腫瘤藥物精制物人參皂苷；收率約為原人參二醇組皂苷投料量的4-5％。
7、如權(quán)利要求5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法為取10目人參或三七粗粉，用70％乙醇回流提取3次，每次2小時，收集提取液，過濾，濾液回收乙醇，至無乙醇味后，真空濃縮2小時，濃縮液加入等體積蒸餾水，攪拌均勻，過濾，濾液過大孔吸附樹脂柱吸附；用3倍量樹脂床體積蒸餾水洗去水溶性雜質(zhì)，吸附人參皂苷的樹脂柱備用；將上述吸附樹脂柱用35％乙醇洗脫，35％乙醇用量為2.5倍量樹脂床體積，用薄層色譜法跟蹤檢測，其中的薄層色譜法是展開劑為65∶35∶10的氯仿∶甲醇∶水下層；顯色劑10％硫酸乙醇溶液；當(dāng)薄層色譜上出現(xiàn)原人參二醇組皂苷斑點后，停止用35％乙醇洗脫，改用65％乙醇洗脫，并收集洗脫液；洗脫液用1％活性炭加熱回流0.5小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用65％乙醇洗脫樹脂吸附的原人參二醇組皂苷，回收乙醇，真空濃縮，真空干燥，粉碎，得原人參二醇組皂苷；取上述原人參二醇組皂苷粉溶解于50％醋酸或1％鹽酸中，水解時間鹽酸水解1小時，醋酸水解6小時，水解溫度為75℃，酸水解反應(yīng)完成后加入與酸水解液等體積蒸餾水，用6％氫氧化鈉溶液中和至中性，過濾，收集水解產(chǎn)物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸餾水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉，備用；將水解產(chǎn)物粗次生皂苷粉溶解于8倍重量95％乙醇中，溶解，過濾，濾液用1％活性炭加熱回流0.5小時脫色，過濾去除活性炭，濾液過大孔陽、陰離子交換柱，進一步脫色脫鹽除雜，并用95％乙醇洗脫樹脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脫液總體積的1/2，冷卻，放置結(jié)晶，真空抽濾，收集結(jié)晶，真空干燥，粉碎；用高效液相色譜法測定結(jié)晶中的人參皂苷Rh2和Rg3的含量；此結(jié)晶即為含人參皂苷Rh2和人參皂苷Rg3的抗腫瘤藥物精制物人參皂苷；收率約為原人參二醇組皂苷投料量的5％。
8、如權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
9、如權(quán)利要求5所述的藥物組合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗腫瘤的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由天然蟲草和皂苷組成。本發(fā)明另一目的在于提供該藥物組合物制劑的抗腫瘤的用途。
文檔編號A61K9/08GK101019897SQ20061016570
公開日2007年8月22日 申請日期2006年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月14日
發(fā)明者李曉明, 仲行 申請人:云南天秀植物科技開發(fā)有限公司