專利名稱：雌酚酮衍生物ea204在制備血管平滑肌松弛劑中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及雌酚酮衍生物EA204用于制備血管平滑肌松弛劑的用途。
背景技術(shù)：
EA-204的化學(xué)系統(tǒng)名稱是3-(2-哌啶-1-基)-乙氧基-雌甾-1，3，5(10)-三烯-17-酮(3-(2-piperidin-1-y1)-ethoxy-estra-1，3，5(10)-trien-17-one)，該化合物于2004年由Cooperwood，John S.等人成功進(jìn)行合成，并對(duì)其抗癌活性進(jìn)行了考察。結(jié)果表明，該化合物有較強(qiáng)的抗癌活性(專利號(hào)US 2005182038)。至今未見(jiàn)有關(guān)EA-204舒張血管平滑肌作用的報(bào)道，經(jīng)多方面實(shí)驗(yàn)篩選，申請(qǐng)者首次發(fā)現(xiàn)該化合物具有舒張血管平滑肌作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了雌酚酮衍生物EA204在制備血管平滑肌松弛劑中的用途。
血管平滑肌痙攣可引起多種疾病，如高血壓病、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(變異型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗塞、猝死等)、腦血管痙攣性疾病(腦血管痙攣、腦供血不足、偏頭痛、缺血性腦血管疾病等)、外周血管痙攣性疾病(閉塞性周?chē)鷦?dòng)脈粥樣硬化、雷諾綜合征、多發(fā)性大動(dòng)脈炎等)以及肺動(dòng)脈高壓等疾病，所以研究舒張血管平滑肌的藥有很大現(xiàn)實(shí)意義，對(duì)治療高血壓、腦血管痙攣性疾病、緩解心絞痛等疾病均有指導(dǎo)意義和參考價(jià)值。
雌酚酮衍生物EA204對(duì)致痙劑引起的家兔離體降主動(dòng)脈收縮的作用的離體試驗(yàn)研究結(jié)果表明雌酚酮衍生物EA204能夠舒張腎上腺素、去甲腎上腺素、氯化鋇、氯化鉀收縮的家兔離體降主動(dòng)脈。因此，雌酚酮衍生物EA204可以用于制備治療血管平滑肌痙攣的藥物。雌酚酮衍生物EA204可以用于制備治療冠狀動(dòng)脈痙攣導(dǎo)致的變異型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗塞、猝死等疾病的藥物；制備治療小動(dòng)脈痙攣引起的高血壓病、妊娠高血壓綜合征、肺動(dòng)脈高壓的藥物；制備治療各種原因引起的腦血管痙攣、腦供血不足、偏頭痛、缺血性腦血管疾病等的藥物；制備治療外周血管痙攣引起的閉塞性周?chē)鷦?dòng)脈粥樣硬化、雷諾綜合征、多發(fā)性大動(dòng)脈炎等疾病的藥物；制備治療腎動(dòng)脈痙攣引起的少尿的藥物；制備治療視網(wǎng)膜動(dòng)脈痙攣所致的視覺(jué)障礙、偏盲或黑朦等的藥物；制備治療腸系膜動(dòng)脈痙攣時(shí)出現(xiàn)的陣發(fā)性腹部絞痛的藥物。


圖1為EA204對(duì)致痙劑收縮的家兔離體降主動(dòng)脈舒張作用的量效曲線。
圖2為以家兔離體降主動(dòng)脈的鈣累積收縮量效曲線為對(duì)照，加入EA204孵育后，氯化鈣累積收縮量效曲線。
圖1曲線代表平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤圖2中對(duì)照為EA204，加入的EA204的濃度為10-5mol/L，維拉帕米被用作鈣拮抗劑，Ca2+累積加入到介質(zhì)中。
具體實(shí)施例方式
一、實(shí)驗(yàn)材料1、動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22g，沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
新西蘭兔，雌雄兼用，體重2.0～2.5kg，沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
2、儀器1)HSS-1(B)型恒溫浴槽 成都儀器廠2)RM6240B型多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng) 成都儀器廠3)JZJ01型肌肉張力換能器 成都儀器廠4)TG-328A電光分析天平上海天平儀器廠5)T-500型電子天平常熟雙杰測(cè)試儀器廠6)醫(yī)用供氧器(95％O2+5％CO2) 河北省冀州市福利醫(yī)療器械廠7)微量移液器IIIWKY型50-250μl上海榮泰生化工程有限公司試劑3、藥品與試劑雌酚酮衍生物EA204由沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥物化學(xué)教研室提供；鹽酸腎上腺素注射液，上海禾豐制藥有限公司；重酒石酸去甲腎上腺素注射液，上海禾豐制藥有限公司；氯化鈉，天津市大茂化學(xué)試劑廠；氯化鉀，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠；無(wú)水氯化鈣，天津市博迪化工有限公司；碳酸氫鈉，天津市博迪化工有限公司；葡萄糖，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠；氯化鎂，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠；磷酸二氫鉀，沈陽(yáng)試劑五廠。
二、實(shí)驗(yàn)方法1.灌胃給藥實(shí)驗(yàn)小鼠80只，體重18±2g，雌雄各半，隨機(jī)分為4組。給藥前禁食12小時(shí)，以等比劑量(劑量分別為205.0mg/kg、256.0mg/kg、320.0mg/kg、400.0mg/kg)分別給4組小鼠灌胃給藥，給藥后觀察動(dòng)物的中毒癥狀，連續(xù)觀察4小時(shí)，常規(guī)飼養(yǎng)一周，記錄體重及一般狀況，觀察7天累計(jì)死亡率，用Bliss法計(jì)算半數(shù)致死量(LD50)及95％可信限。
2.離體實(shí)驗(yàn)2.1.雌酚酮衍生物EA204對(duì)致痙劑引起的家兔離體降主動(dòng)脈收縮的作用待標(biāo)本張力穩(wěn)定后，向浴管內(nèi)加入致痙劑(氯化鋇2mg/ml，去甲腎上腺素0.02mg/ml，腎上腺素0.01mg/ml及高鉀液60mmol/L)誘導(dǎo)收縮，當(dāng)達(dá)到最大收縮后，充分洗凈標(biāo)本，待標(biāo)本恢復(fù)穩(wěn)定后，再次用同濃度致痙劑誘導(dǎo)二次收縮，當(dāng)與前一次收縮基本一致時(shí)分別累積加入雌酚酮衍生物EA204(10-5mol/L～3*10-3mol/L)。記錄數(shù)據(jù)，以致痙劑的最大收縮幅度為100％，舒張百分?jǐn)?shù)為縱坐標(biāo)，雌酚酮衍生物EA204的對(duì)數(shù)濃度為橫坐標(biāo)繪制舒張量效曲線，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并求EC50。
2.2.與鈣通道的關(guān)系待家兔離體降主動(dòng)脈標(biāo)本張力穩(wěn)定后，將基線調(diào)節(jié)到零，記錄一段波形，將浴管中的營(yíng)養(yǎng)液換成無(wú)鈣液，孵育30分鐘，加入無(wú)鈣高鉀(60mM)去極化液使其去極化20分鐘，然后向浴管中累積加入氯化鈣(10-6mol/L～10-2mol/L)，獲得CaCl2引起家兔離體降主動(dòng)脈收縮的量效曲線。充分沖洗組織，標(biāo)本活性恢復(fù)后，向浴管中加EA204(10-5mol/L)孵育10分鐘后，重復(fù)CaCl2量效曲線，以第一次量效曲線中氯化鈣的最大收縮幅度為100％，獲得EA204孵育后的氯化鈣收縮量效曲線。充分沖洗組織，標(biāo)本活性恢復(fù)后，向浴管中加入維拉帕米(10-7mol/L)孵育10分鐘后，再次獲得氯化鈣累積收縮量效曲線作為陽(yáng)性對(duì)照。比較量效曲線中各個(gè)劑量下鈣引起收縮的幅度，確定EA204的作用與鈣通道的關(guān)系。
三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.急性毒性實(shí)驗(yàn)灌胃給藥實(shí)驗(yàn)給藥后2小時(shí)高劑量組有小鼠死亡，主要集中在12小時(shí)到24小時(shí)。LD50值為259.3mg/kg，95％置信限為227.0～296.2mg/kg。Bliss法計(jì)算用表見(jiàn)表1。
表1 口服給予EA204后LD50數(shù)據(jù)

2.離體實(shí)驗(yàn)2.1.EA204對(duì)致痙劑引起的家兔離體降主動(dòng)脈收縮的作用由圖和表(圖1，表2)可知EA204能夠舒張腎上腺素、去甲腎上腺素、氯化鋇、氯化鉀收縮的家兔離體降主動(dòng)脈。
表2 EA204對(duì)致痙劑引起家兔離體降主動(dòng)脈收縮的舒張作用的EC50值(n＝4，

)

2.2與鈣通道的關(guān)系以家兔離體降主動(dòng)脈的鈣累積收縮量效曲線為對(duì)照，結(jié)果如圖2所示，加入EA204孵育后，氯化鈣累積收縮量效曲線呈劑量依賴性右移并且最大效應(yīng)基本不變，EA204孵育后量效曲線的最大反應(yīng)為對(duì)照的100％，這說(shuō)明EA204能夠拮抗氯化鈣引起的離體家兔離體降主動(dòng)脈的收縮作用，而用非競(jìng)爭(zhēng)性鈣拮抗劑維拉帕米(10-7mol/L)孵育后，標(biāo)本的最大反應(yīng)為對(duì)照的53％。由此可見(jiàn)，EA204孵育后的鈣累積量效曲線和維拉帕米孵育后的鈣累計(jì)量效曲線不同，對(duì)于氯化鈣引起的家兔離體降主動(dòng)脈的收縮的拮抗作用具有競(jìng)爭(zhēng)性拮抗的特點(diǎn)。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明雌酚酮衍生物EA204能夠舒張腎上腺素、去甲腎上腺素、氯化鋇、氯化鉀收縮的家兔離體降主動(dòng)脈。
權(quán)利要求
1.雌酚酮衍生物EA204在制備血管平滑肌松弛劑中的用途，其特征在于雌酚酮衍生物EA204用于制備治療血管平滑肌痙攣性疾病的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雌酚酮衍生物EA204在制備血管平滑肌松弛劑中的用途，其特征在于血管平滑肌痙攣性疾病包括冠狀動(dòng)脈痙攣導(dǎo)致的變異型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗塞、猝死類(lèi)疾?。恍?dòng)脈痙攣引起的高血壓病、妊娠高血壓綜合征、肺動(dòng)脈高壓；各種原因引起的腦血管痙攣、腦供血不足、偏頭痛、缺血性腦血管疾??；外周血管痙攣引起的閉塞性周?chē)鷦?dòng)脈粥樣硬化、雷諾綜合征、多發(fā)性大動(dòng)脈炎；腎動(dòng)脈痙攣引起的少尿；視網(wǎng)膜動(dòng)脈痙攣所致的視覺(jué)障礙、偏盲或黑朦；腸系膜動(dòng)脈痙攣時(shí)出現(xiàn)的陣發(fā)性腹部絞痛。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及雌酚酮衍生物EA204在用于制備治療血管平滑肌痙攣性疾病藥物中的應(yīng)用。在動(dòng)物離體試驗(yàn)中，雌酚酮衍生物EA204能夠舒張腎上腺素、去甲腎上腺素、氯化鋇、氯化鉀收縮的家兔離體降主動(dòng)脈。可以用于制備治療高血壓病、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(變異型心絞痛、不穩(wěn)定型心絞痛、急性心肌梗塞、猝死等)、腦血管痙攣性疾病(腦血管痙攣、腦供血不足、偏頭痛、缺血性腦血管疾病)、外周血管痙攣性疾病(閉塞性周?chē)鷦?dòng)脈粥樣硬化、雷諾綜合征、多發(fā)性大動(dòng)脈炎等)以及肺動(dòng)脈高壓等疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1985833SQ20061017218
公開(kāi)日2007年6月27日 申請(qǐng)日期2006年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月31日
發(fā)明者付守廷, 李娟 , 陳國(guó)良 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)