專利名稱：腎寶丸劑及其制備方法質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑，特別是涉及腎寶丸劑，同時(shí)涉及該藥的制備方法質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
由腎虛而導(dǎo)致的陽萎，遺精，腰酸痛，畏寒怕冷、夜尿頻多，神疲乏力、脫發(fā)耳鳴、婦女白帶、月經(jīng)過多等癥，是臨床上常見的常見多發(fā)病癥，腎寶組方嚴(yán)謹(jǐn)，配伍周全，具有調(diào)和陰陽，溫陽補(bǔ)腎，安神固精，扶正固本之功，因方中佐以養(yǎng)陰理氣之品，故補(bǔ)而不膩，溫而不燥，為四季進(jìn)補(bǔ)之良藥。臨床可廣泛用于上述病癥，療效顯著。
腎寶丸劑是由淫羊藿、制何首烏等二十二味中藥經(jīng)提取加工制成的中藥制劑，市場上已有腎寶合劑、腎寶糖漿，其配方和質(zhì)量控制方法分別為部標(biāo)中藥成方制劑第十五冊、第十七冊收載。
現(xiàn)有技術(shù)存在的主要問題是(1)液體制劑不穩(wěn)定，久置易產(chǎn)生沉淀；(2)生產(chǎn)成本高，且攜帶運(yùn)輸不便；(3)現(xiàn)有劑型均含有防腐劑；(4)現(xiàn)有劑型都存在含糖量高的不足，不適于糖尿病、肝病患者等服用；(5)現(xiàn)有制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)低，在鑒別一項(xiàng)僅有三個(gè)理化鑒別，專屬性差，且無含量測定，難已真正控制產(chǎn)品質(zhì)量。
本發(fā)明提供了一種腎寶丸劑，克服了上述的制劑方面的不足之處，具有穩(wěn)定性好、不含防腐劑、服用攜帶方便、適于工業(yè)化生產(chǎn)、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。且由于不含糖，不僅適于一般患者服用，而且適于包括糖尿病患者在內(nèi)的一切不適于服用含糖藥物的患者服用。同時(shí)提供了一種腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，即可以用薄層色譜法對腎寶丸劑中的當(dāng)歸與川芎、蛇床子、制何首烏、淫羊藿進(jìn)行鑒別，用高效液相法對腎寶丸劑中的補(bǔ)骨脂進(jìn)行鑒別，用高效液相法測定腎寶丸劑中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷、蛇床子素、五味子醇甲的含量。腎寶丸劑若能完全或部分采用上述鑒別和含量測定項(xiàng)目來進(jìn)行質(zhì)控，必能更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證用藥的安全有效，提高產(chǎn)品的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
1.一種腎寶丸劑，該中藥是由以下配比的中藥原料經(jīng)制備而成，以下的配比可按比例改變，蛇床子28重量份 川芎28.3重量份 菟絲子66重量份補(bǔ)骨脂28.5重量份 茯苓30重量份紅參20重量份小茴香14.4重量份 五味子36重量份 金櫻子94.6重量份白術(shù)14.2重量份當(dāng)歸46.8重量份 覆盆子32.9重量份制何首烏74.4重量份車前子16.5重量份熟地黃94重量份枸杞子66重量份山藥46.3重量份 淫羊藿94.6重量份胡蘆巴94重量份黃芪51.4重量份 肉蓯蓉47.3重量份炙甘草14.2重量份2.腎寶丸劑其制備方法包含以下步驟(1)配方中蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香用50-80％的乙醇滲漉或回流提取；(2)配方中紅參用10-50％的乙醇滲漉或回流提取，藥渣備用；(3)配方中覆盆子等其余十六味與上述紅參藥渣一起，加水煎提，水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制；(4)上述(1)、(2)、(3)所得的提取物按常規(guī)方法制成丸劑。
3.腎寶丸劑還可以采取下述制備方法，即配方中的藥材部分打粉，部分提取，所得的藥材提取物與藥材細(xì)粉一起，采用常規(guī)方法制成丸劑。
4.腎寶丸劑還可以采取下述制備方法，包含以下步驟(1)配方中蛇床子、淫羊藿、小茴香用50-80％的乙醇滲漉或回流提取；(2)配方中紅參、山藥、當(dāng)歸、川芎粉碎成細(xì)粉備用；(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制；(4)上述(1)、(3)所得的提取物與上述(2)所得細(xì)粉按常規(guī)方法制成丸劑。
5.腎寶丸劑還可以采取下述制備方法，包含以下步驟(1)配方中蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香用50-80％的乙醇滲漉或回流提??；(2)配方中紅參、山藥粉碎成細(xì)粉備用；(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制；(4)上述(1)、(3)所得的提取物與上述(2)所得細(xì)粉按常規(guī)方法制成丸劑。
6.所述的腎寶丸劑包含各種丸劑，如丸、濃縮丸、速釋濃縮丸、滴丸、微丸，及在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步加工而制得的各種制劑，如微丸膠囊、微丸片或其它制劑。
7.工藝中蛇床子等的回流條件為用50-80％的乙醇，加5-10倍量溶劑，回流1-3次，每次1-3小時(shí)；最佳為用70％乙醇，加6-8倍量溶劑，回流2次，每次2小時(shí)。
8.工藝中蛇床子等的滲漉條件為用50-80％的乙醇，浸漬12-72小時(shí)，收集4-10倍量漉液；最佳為用70％的乙醇，浸漬48小時(shí)，收集6-8倍量漉液。
9.工藝中覆盆子等的水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制。醇沉的方法為水提液濾過，濃縮至適量，加乙醇使含醇量為40-75％進(jìn)行醇沉；最佳為水提液濾過，濃縮至相對濃度為1.16(80℃熱測)的清膏，加乙醇使含醇量為65％，靜置48小時(shí)，或者是將水提液濾過，濃縮至相對濃度為1.16(80℃熱測)的清膏，加三倍量乙醇，沉淀48小時(shí)。超濾的方法為先將水提液濾過，濾液高速離心，上清液進(jìn)行超濾，壓力100-200kPa，采用CA-3型膜、UF型膜或其它適宜的膜。
10.工藝中紅參提取采用10-50％的乙醇滲漉或回流提取，回流工藝加溶劑量為5-12倍，回流1-3次，每次1-3小時(shí)；滲漉工藝浸漬12-48小時(shí)，收集5-10倍量漉液；最佳為采用回流工藝，浸漬8小時(shí)，加8-10倍量溶劑，回流2次，每次2小時(shí)。
11.工藝中藥材粉碎成細(xì)粉，通常為粉碎成過80-200目的細(xì)粉，最佳為超微粉碎成200-300目的細(xì)粉。
12.工藝中所用的輔料為微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮、羧甲淀粉鈉、聚維酮K30、微粉硅膠、低取代羥丙纖維素、羥丙基甲基纖維素、淀粉、糊精、滑石粉、硬脂酸鎂、聚乙二醇類、山梨醇酐類、聚氧乙烯山梨醇酐類、硬脂酸聚烴氧40酯、倍他環(huán)糊精、泊洛沙姆、羧甲基淀粉鈉、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸、硬脂酸鈉、甘油明膠、蟲膠或其它藥劑學(xué)上可接受的輔料，可采用其中的一種或多種。
13.所制得的丸劑可用適宜的材料進(jìn)行包衣，也可不包衣。
14.腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，含有如下含量測定和定性鑒別中的一種或幾種(1)含量測定a.用高效液相法測定腎寶丸劑中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量；b.用高效液相法測定腎寶丸劑中淫羊藿苷的含量；c.用高效液相法測定腎寶丸劑中蛇床子素的含量；d.用高效液相法測定腎寶丸劑中五味子醇甲的含量。
(2)定性鑒別a.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中當(dāng)歸與川芎；b.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中蛇床子；
c.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中制何首烏；d.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中淫羊藿；e.用高效液相法鑒別腎寶丸劑中補(bǔ)骨脂。
15.腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，含有如下含量測定和定性鑒別中的一種或幾種(1)含量測定a.高效液相法測定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(5-70∶95-30)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷對照品，加乙醇或稀乙醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，用適宜濃度的甲醇/乙醇提取，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量體積，注入液相色譜儀，測定，即得。
b.高效液相法測定腎寶丸劑中淫羊藿苷含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(5-70∶95-30)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，加適量水溶解，用乙酸乙酯或其它適宜的溶劑提取，提取液蒸干，殘?jiān)眠m宜的溶劑溶解，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定即得。
c.高效液相法測定腎寶丸劑中蛇床子素含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(40-85∶60-15)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品，加甲醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，用適宜濃度的甲醇/乙醇提取，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定即得。
d.高效液相法測定腎寶丸劑中五味子醇甲含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(5-30∶2-15)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，用適宜濃度的甲醇/乙醇提取，作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定即得。
(2)定性鑒別a.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中當(dāng)歸與川芎取供試品適量，加乙醚或其它適宜的溶劑提取，提取液作為供試品溶液，或提取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對照藥材適量，提取后制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶液與對照藥材溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.3-2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
b.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中蛇床子取供試品適量，加乙醚或其它適宜的溶劑提取，提取液作為供試品溶液，或提取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取蛇床子素對照品適量，加溶劑適量制成對照品溶液。吸取上述供試品溶液與對照品溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.5-5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
c.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中制何首烏取供試品適量，加乙酸乙酯或其它適宜的溶劑提取，提取液用適宜濃度的碳酸鈉溶液提取，碳酸鈉提取液用鹽酸調(diào)pH值至1～4，再用乙酸乙酯或其它適宜的溶劑萃取，萃取液作為供試品溶液，或萃取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材適量，提取后制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品適量，加溶劑適量制成對照品溶液。吸取上述供試品溶液、對照藥材和對照品溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(5-25∶2-8∶0.4-2)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。
d.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中淫羊藿取供試品適量，加正丁醇或其它適宜的溶劑提取，提取液用氨試液洗滌，棄去氨試液，提取液作為供試品溶液，或提取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加溶劑適量制成對照品溶液。吸取上述兩種溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(3-30∶0.4-4∶0.4-4∶0.4-4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至顯色，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
e.高效液相法鑒別腎寶丸劑中補(bǔ)骨脂取供試品適量，加甲醇或其它適宜的溶劑提取，提取液作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品適量，加溶劑適量制成對照品溶液。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(20-80∶80-20)為流動相，紫外檢測器或二極管陣列檢測器。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各適量體積，注入液相色譜儀，測定。供試品色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品一致。
所述的提取可采用超聲處理、回流提取、微波提取、振蕩提取等常規(guī)方法；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量測定的流動相還可以是甲醇-乙腈-水(2-10∶0.5-2∶4-20)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；淫羊藿苷的含量測定的流動相還可以是甲醇-水-冰醋酸(40-80∶20-60∶0.2-1)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；蛇床子素的含量測定的流動相還可以是甲醇-水-四氫呋喃(30-75∶20-60∶2-10)、乙腈-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；五味子醇甲含量測定的流動相還可以是乙腈-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；當(dāng)歸與川芎的薄層色譜鑒別的展開劑還可以是石油醚-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)或其它適宜的展開劑；蛇床子的薄層色譜鑒別的展開劑還可以是苯-乙酸乙酯(10-50∶0.3-2)、正己烷-乙酸乙酯(4-20∶0.4-4)或其它適宜的展開劑；
制何首烏的薄層色譜鑒別的展開劑還可以是氯仿-甲醇(5-15∶0.5-5)、石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(50-150∶5-50∶0.5-5)或其它適宜的展開劑；定性鑒別a、b、c、d中既可以采用對照品，也可以采用對照藥材作對照，或兩者均采用；定性鑒別e中既可以采用兩種對照品，也可以僅采用其中的一種對照品作為對照。
16.一種腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，含有如下含量測定和定性鑒別中的一種或幾種(1)含量測定a.高效液相法測定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(25∶75)為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。
b.高效液相法測定腎寶丸劑中淫羊藿苷含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(30∶70)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定即得。
c.高效液相法測定腎寶丸劑中蛇床子素含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(67∶33)為流動相；檢測波長為249nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定，即得。
d.高效液相法測定腎寶丸劑中五味子醇甲含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13∶7)為流動相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。
(2)定性鑒別a.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中當(dāng)歸和川芎取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對照藥材各0.5g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶液與對照藥材溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
b.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中蛇床子取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。取蛇床子素對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
c.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中制何首烏取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。加乙酸乙酯30ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液用5％碳酸鈉溶液振搖提取3次，每次20ml，合并碳酸鈉提取液，用鹽酸調(diào)pH值至2～3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材0.3g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl，對照藥材和對照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。
d.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中淫羊藿取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。加正丁醇30ml，超聲提取30分鐘，濾過，濾液加氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘數(shù)分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
e.高效液相法鑒別腎寶丸劑中補(bǔ)骨脂取供試品適量，加甲醇40ml，超聲提取30分鐘，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品適量，加甲醇制成每1ml各含4μg的混合溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ID)測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(40∶60)為流動相，檢測波長為246nm。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定。供試品色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品一致。
所述的提取樣品或溶解提取物所用溶劑的量、超聲或回流提取的時(shí)間、定容或溶解后體積、點(diǎn)樣量或進(jìn)樣量、對照品的濃度可以以所述具體值為基準(zhǔn)改變，或按比例改變。
所述的定性鑒別a、b、c、d中既可以采用對照品，也可以采用對照藥材作對照，或兩者均采用，定性鑒別e中既可以采用兩種對照品，也可以僅采用其中的一種對照品作為對照。
所述的超聲處理也可以采用回流提取、微波提取、振蕩提取等常規(guī)提取方法，所述的回流提取也可以采用超聲處理、微波提取、振蕩提取等常規(guī)提取方法。
17.上述鑒別及含測方法，不僅可用于控制腎寶丸劑的質(zhì)量，也適用于控制腎寶其它制劑。
18.腎寶丸劑中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量限度為一次最小服用量中含制何首烏以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計(jì)，不得少于1.3mg；淫羊藿苷的含量限度為一次最小服用量中含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)，不得少于1.5mg；蛇床子素的含量限度為一次最小服用量中含蛇床子以蛇床子素(C15H16O3)計(jì)，不得少于0.8mg；五味子醇甲的含量限度為一次最小服用量中含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計(jì)，不得少于0.4mg；上述含量限度為最低含量限度，可以根據(jù)生產(chǎn)的具體情況提高含量限度。
19.腎寶丸劑制備工藝研究(1)紅參回流提取工藝以干膏得率及人參皂苷Re+Rg1提取量為評價(jià)指標(biāo)，對紅參回流工藝進(jìn)行考察，取紅參粗粉100g三份，加20％乙醇浸漬8小時(shí)后，分別加入6倍、9倍、12倍溶劑，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮，真空干燥。結(jié)果加入6倍量溶劑，人參皂苷Re+Rg1提取量、干膏得率分別為766.37mg、54.76％，加入9倍量溶劑分別為957.22mg、60.18％，加入12倍量溶劑分別為960.38mg、65.34％。故可以認(rèn)為加入溶劑9倍量時(shí)已能提盡有效成分，再增加提取次數(shù)和溶媒量，只能增加淀粉等無效成分的提出。從節(jié)約能源、降低生產(chǎn)成本及減少服用量考慮，優(yōu)選紅參回流提取工藝為紅參粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)。
(2)淫羊藿、當(dāng)歸、蛇床子、川芎、小茴香五味藥滲漉工藝考察以干膏得率、淫羊藿苷提取量為評價(jià)指標(biāo)，對淫羊藿等五味藥的滲漉工藝進(jìn)行考察，按原腎寶糖漿處方的量稱取淫羊藿等五味212.1g三份，，分別粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，按試驗(yàn)方案，分別收集滲漉液1000ml(4.7倍量)、1500ml(7倍量)、2000ml(9.4倍量)，回收乙醇，減壓濃縮，真空干燥。結(jié)果收集滲漉液1000ml淫羊藿苷提取量、干膏得率分別為598mg、7.34％，滲漉液1500ml分別為650mg、9.29％，收集滲漉液2000ml分別為667mg、10.27％。故可以認(rèn)為滲漉液1500ml已能提盡有效成分，再增加提取次數(shù)和溶媒量，只能增加淀粉等無效成分的提出。從節(jié)約能源、降低生產(chǎn)成本及減少服用量考慮，優(yōu)選淫羊藿等5味滲漉提取工藝為淫羊藿等五味粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液7倍量。
(3)制何首烏等十六味藥水提工藝以干膏得率、二苯乙烯苷提取量為評價(jià)指標(biāo)，對制何首烏等十六味藥水提工藝進(jìn)行考察，按原腎寶糖漿處方的1/2量稱取制何首烏等16味加紅參經(jīng)醇提取的藥渣共413.15g三份，按試驗(yàn)方案，分別加入不同量的水，浸泡1小時(shí)，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濾液減壓濃縮至相對密度為1.16(80℃熱測)的清膏，加乙醇使含醇量為65％，靜置48小時(shí)，取上清液減壓回收乙醇，減壓濃縮，真空干燥。結(jié)果加入8倍量水二苯乙烯苷提取量、干膏得率分別為652mg、12.46％，加入10倍量水二苯乙烯苷提取量、干膏得率分別為725mg、14.13％，加入12倍量水二苯乙烯苷提取量、干膏得率分別為729mg、15.62％，故可以認(rèn)為加水量為10倍時(shí)，已能基本提盡有效成分，再增加溶媒量，只能增加淀粉、粘液質(zhì)等無效成分的提出。從節(jié)約能源、降低成本及減少服用量考慮，優(yōu)選制何首烏等16味提取工藝為制何首烏等16味加紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加入10倍量水浸泡1小時(shí)，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濾液減壓濃縮至相對密度為1.16(80℃熱測)的清膏，加乙醇使含醇量為65％，靜置48小時(shí)。
同時(shí)，對醇沉條件為加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)的工藝進(jìn)行考察，在二苯乙烯苷提取量上，與醇沉濃度為65％的工藝無明顯差別。
(4)成型工藝腎寶丸劑的提取工藝可分為二類，一類為處方中的藥材全部提取，另一類為處方中藥材部分提取，部分打細(xì)粉。對于處方中藥材均提取的，可以采用將提取物濃縮成稠膏，或濃縮，干燥制成干膏粉，所提的稠膏或干膏粉采用常規(guī)方法制成丸劑。對于處方中藥材部分提取，部分打細(xì)粉的，將提取物濃縮成稠膏，或濃縮，干燥制成干膏粉，所得的稠膏或干膏粉與藥材細(xì)粉一起，采用常規(guī)方法制成丸劑。所制得的丸劑，包括丸、濃縮丸、速釋濃縮丸、滴丸、微丸，及在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步加工而制得的各種制劑，如微丸膠囊、微丸片或其它制劑。所制得的丸劑可以為包衣丸劑也可為不包衣丸劑。
a.濃縮丸可采用泛制法、塑制法、壓制法或其它適宜的方法。
泛制法起模是泛丸成型的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，模子的好壞直接影響成品的圓整度，模子的粒度差和數(shù)目，也影響加大過程中篩選的次數(shù)和丸粒的規(guī)格等。可采用粉未直接起模法或制粒起模法，可取3-10％的藥粉起模。干燥溫度50-80℃。
塑制法對于處方中藥材全提取的工藝，提取所得的稠膏或干膏粉，加入適量輔料，制軟材，制丸。由于干膏粉的粘性較強(qiáng)，需加入適量的輔料，如淀粉、硬脂酸鎂等，方能順利制丸。所用的溶劑可采用水、一定濃度的醇及其它適宜的溶劑。對于處方中藥材部分提取，部分打粉的工藝，提取所得的稠膏或干膏粉，加入藥材細(xì)粉及適量輔料混勻，制軟材，制丸。
壓制法處方中藥材提取所得的稠膏或干膏粉，加入藥材細(xì)粉或/及適量輔料混勻，制粒，壓丸。亦可采用全粉壓制的方法。制粒的方法可采用各種常規(guī)方法，如濕法制粒、干法制粒、一步制粒等。濕法制粒時(shí)，因浸膏本身具有一定的粘性，故采用60-95％的乙醇為潤濕劑。壓片時(shí)可加入0.5-3％的微粉硅膠以增加顆粒的流動性。
所用的輔料為淀粉、糊精、羧甲基淀粉鈉、聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、滑石粉或其它藥劑學(xué)上可接受的輔料，可采用其中的一種或多種。根據(jù)所加入輔料的不同，可分為普通的濃縮丸和速釋濃縮丸。
b.滴丸由以上述二十二種藥材的提取物為原料，與作為基質(zhì)的可藥用載體一起制備而成。
基質(zhì)可采用聚乙二醇類、山梨醇酐類、聚氧乙烯山梨醇酐類、硬脂酸聚烴氧40酯、倍他環(huán)糊精、泊洛沙姆、羧甲基淀粉鈉、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸、硬脂酸鈉、甘油明膠、蟲膠或其它藥劑學(xué)上可接受的輔料，可采用其中的一種或多種。
配比以g或kg為單位，按重量份計(jì)，藥物提取物∶基質(zhì)＝1∶1～1∶10。
按照配方所給出的比例，稱取藥物提取物和基質(zhì)，將其置于加熱容器內(nèi)，邊攪拌邊加熱，得到含有藥物提取物和基質(zhì)的熔融液/混懸液備用；調(diào)整滴丸機(jī)的溫度控制系統(tǒng)，使滴丸機(jī)的滴頭溫度加熱并保持在50℃～90℃，冷凝劑的溫度冷卻并保持在40℃～-5℃；待滴丸機(jī)滴頭和冷凝柱內(nèi)冷凝劑的溫度分別達(dá)到所要求的溫度狀態(tài)時(shí)，將含有藥物提取物和基質(zhì)的熔融液/混懸液，置于滴丸機(jī)的滴頭罐內(nèi)，滴入冷凝劑中收縮成型即得。
所用的冷凝劑可以是甲基硅油、液體石蠟、植物油或其它藥劑學(xué)上可接受的輔料，可采用其中的一種或多種。。
c.微丸由以上述二十二種藥材的提取物為原料，與藥用輔料一起制備而成的直徑小于2.5mm的各類丸劑。
輔料可采用糊精、淀粉、微晶纖維素、蔗糖、乳糖、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或其它藥劑學(xué)上可接受的輔料，可采用其中的一種或多種。
配比以g或kg為單位，按重量份計(jì)，藥物提取物∶輔料＝1∶1～4∶1。
可采用各種常規(guī)的方法制備微丸，如泛丸法，造粒包衣機(jī)法、擠壓一滾圓成丸法，離心一流化造丸法等。
20.腎寶丸劑定性鑒別研究(1)當(dāng)歸和川芎的薄層色譜鑒別，參考《中國藥典》2000年版一部項(xiàng)下川芎的鑒別。因當(dāng)歸和川芎對照藥材的斑點(diǎn)基本一致，故本實(shí)驗(yàn)以當(dāng)歸和川芎兩種對照藥材為對照，陰性樣品亦采用同時(shí)缺當(dāng)歸、川芎兩味。以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，結(jié)果Rf值合適，斑點(diǎn)清晰，缺當(dāng)歸、川芎樣品無干擾。展開劑采用石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(9∶2)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(17∶3)亦可。
(2)蛇床子的薄層色譜鑒別，本實(shí)驗(yàn)以以蛇床子素為對照品，環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶2)為展開劑，結(jié)果Rf值合適，斑點(diǎn)清晰，缺蛇床子樣品無干擾。展開劑采用正己烷-乙酸乙酯(85∶15)、苯-乙酸乙酯(30∶1)亦可。
(3)制何首烏的薄層色譜鑒別，供試品制備先用乙酸乙酯提取，再以5％碳酸鈉溶液提取，使大黃素等成分溶解于堿液中，再酸化用乙酸乙酯提取，以何首烏作對照藥材，大黃素作對照品，石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)為展開劑，結(jié)果色譜斑點(diǎn)清晰，Rf值合適，缺制何首烏樣品無干擾。展開劑采用氯仿-甲醇(8∶2)、石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(9∶1∶0.1)亦可。
(4)為淫羊藿的薄層色譜鑒別，參考中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)烏陽補(bǔ)心糖漿[WS-10585(ZD-0585)2002]鑒別項(xiàng)下的方法。因處方中淫羊藿量較多，經(jīng)試驗(yàn)采用正丁醇提取后，再用堿液洗滌的供試品溶液制備方法，以淫羊藿苷為對照品，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，以10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，結(jié)果色譜斑點(diǎn)清晰，Rf值合適，缺淫羊藿樣品無干擾。
(5)為補(bǔ)骨脂的液相色譜鑒別。參考中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)補(bǔ)腎益腦丸[WS-10555(ZD-0555)2002]鑒別項(xiàng)下的方法。先取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的混合對照品溶液于200-400nm處掃描紫外吸收光譜，結(jié)果顯示在246nm波長處有最大吸收，故選擇246nm為測定波長。三批樣品經(jīng)甲醇超聲后進(jìn)樣，供試品色譜中，在與混合對照品相應(yīng)的位置均有色譜峰，同法制備缺補(bǔ)骨脂陰性樣品，陰性樣品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置無色譜峰，說明陰性樣品對其無干擾。流動相采用甲醇-水(60∶40)亦可。
21.腎寶丸劑含量測定研究(1)腎寶丸劑中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖甙含量測定a.色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(25∶75)為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
b.對照品、供試品、陰性對照品溶液的制備 對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，精密稱定，分別置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
缺制何首烏陰性對照溶液的制備 取缺制何首烏陰性對照0.15g，照“供試品溶液的制備”同法操作，即得缺制何首烏陰性對照溶液。
c.測定 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、缺制何首烏陰性對照溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定，即得。
可見供試品中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的分離度＞1.5，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷與其它組分達(dá)到較好分離，而陰性未有干擾，不干擾成分測定。理論塔板數(shù)以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算不低于2000。流動相采用甲醇-乙腈-水(5∶1∶9)應(yīng)可。
d.對該方法進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷在15μg/ml～120μg/ml范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系，回收率為98.99％，精密度、重復(fù)性均良好。
(2)腎寶丸劑中淫羊藿苷含量的測定a.色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(30∶70)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
b.對照品、供試品、陰性對照品溶液的制備對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，精密稱定，分別加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
缺淫羊藿陰性對照溶液的制備 取缺淫羊藿陰性對照0.18g，照“供試品溶液的制備”同法操作，即得缺淫羊藿陰性陰性對照溶液。
c.測定取對照品溶液、供試品溶液、缺淫羊藿陰性對照溶液及空白溶液(流動相)各20μl，注入液相色譜儀，測定。
可見供試品中淫羊藿苷的分離度＞1.5，淫羊藿苷與其它組分達(dá)到較好分離，而陰性未有干擾，不干擾成分測定。理論塔板數(shù)以淫羊藿苷峰計(jì)算大于2000。流動相采用甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶0.5)亦可。
d.對該方法進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果淫羊藿苷在20μg/ml～80μg/ml范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系，回收率為99.98％，精密度、重復(fù)性均良好。表明本法可以用于測定腎寶丸劑中的淫羊藿苷的含量。
(3)腎寶丸劑中蛇床子素含量的測定a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(67∶33)為流動相；檢測波長為249nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
b.對照品、供試品、陰性對照品溶液的制備對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
缺蛇床子陰性對照溶液的制備 取缺蛇床子陰性對照0.25g，照“供試品溶液的制備”同法操作，即得缺蛇床子陰性陰性對照溶液。
c.測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定，即得。
可見供試品中蛇床子素的分離度＞1.5，蛇床子素與其它組分達(dá)到較好分離，而陰性未有干擾，不干擾成分測定。理論塔板數(shù)以蛇床子素峰計(jì)算大于2000。流動相采用甲醇-水(67∶33)、甲醇-水-四氫呋喃(53∶42∶5)亦可。
d.對該方法進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果蛇床子素在10μg/ml～100μg/ml范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系，回收率為99.35％，精密度、重復(fù)性均良好。表明本法可以用于測定腎寶丸劑中的蛇床子素的含量。
(4)腎寶丸劑中五味子醇甲含量的測定a.色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13∶7)為流動相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
b.對照品、供試品、陰性對照品溶液的制備對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液。
供試品溶液的制備 取供試品適量，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
缺五味子陰性對照溶液的制備 取缺五味子陰性對照0.25g，照“供試品溶液的制備”同法操作，即得缺五味子陰性陰性對照溶液。
c.測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定，即得。
可見供試品中五味子醇甲的分離度＞1.5，五味子醇甲與其它組分達(dá)到較好分離，而陰性未有干擾，不干擾成分測定。理論塔板數(shù)以五味子醇甲峰計(jì)算大于2000。流動相采用甲醇-水(13∶7)亦可。
d.對該方法進(jìn)行方法學(xué)考察，結(jié)果五味子醇甲在10μg/ml～80μg/ml范圍內(nèi)成良好線性關(guān)系，回收率為99.52％，精密度、重復(fù)性均良好。表明本法可以用于測定腎寶丸劑中的蛇床子素的含量。
22.腎寶丸劑含量測定中含量限度的確定(1)2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量限度確定腎寶丸劑一次最小服用量中含有制何首烏藥材約0.744g，中國藥典2005年版一部規(guī)定制何首烏藥材中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量不得低于0.7％。以制何首烏藥材中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量為0.7％計(jì)，當(dāng)轉(zhuǎn)移率為35％時(shí)，一次最小服用量中含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷為1.82mg。結(jié)合腎寶合劑中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量和所研制的腎寶片、腎寶咀嚼片、腎寶顆粒、腎寶膠囊中的2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷轉(zhuǎn)移率，考慮到大生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的損耗等因素，將本品2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷含量限度定為一次最小服用量中含制何首烏以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計(jì)，不得少于1.3mg。
(2)淫羊藿含量限度確定腎寶丸劑一次最小服用量中含有淫羊藿藥材約0.946g，中國藥典2005年版一部規(guī)定淫羊藿藥材中淫羊藿苷的含量不得低于0.5％。以淫羊藿藥材中淫羊藿含量為0.5％計(jì)，當(dāng)轉(zhuǎn)移率為35％時(shí)，一次最小服用量中含淫羊藿苷為1.6mg。結(jié)合腎寶合劑中淫羊藿苷含量和所研制的腎寶片、腎寶咀嚼片、腎寶顆粒、腎寶膠囊中的淫羊藿苷轉(zhuǎn)移率，考慮到大生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的損耗等因素，將本品淫羊藿苷含量限度定為一次最小服用量中含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)，不得少于1.4mg。
(3)蛇床子素含量限度確定腎寶丸劑一次最小服用量中含有蛇床子藥材約0.28g，中國藥典2005年版一部規(guī)定蛇床子藥材中蛇床子素的含量不得低于1.0％。以蛇床子藥材中蛇床子素含量為1.0％計(jì)，當(dāng)轉(zhuǎn)移率為35％時(shí)，一次最小服用量中含蛇床子素為0.98mg。結(jié)合腎寶合劑中蛇床子素含量和所研制的腎寶片、腎寶咀嚼片、腎寶顆粒、腎寶膠囊中的蛇床子素轉(zhuǎn)移率，考慮到大生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的損耗等因素，將本品蛇床子素含量限度定為一次最小服用量中含蛇床子以蛇床子素(C15H16O3)計(jì)，不得少于0.8mg。
(4)五味子醇甲含量限度確定腎寶丸劑一次最小服用量中含有五味子藥材約0.36g，中國藥典2005版一部規(guī)定五味子藥材中五味子醇甲的含量不得低于0.40％。以五味子藥材中五味子醇甲含量為0.40％計(jì)，當(dāng)轉(zhuǎn)移率為35％時(shí)，一次最小服用量中含五味子醇甲為0.504mg。結(jié)合腎寶合劑中五味子醇甲含量和所研制的腎寶片、腎寶咀嚼片、腎寶顆粒、腎寶膠囊中的五味子醇甲轉(zhuǎn)移率，考慮到大生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的損耗等因素，將本品五味子醇甲含量限度定為一次最小服用量中含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計(jì)，不得少于0.4mg。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不由此而限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1濃縮丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集約七倍量滲漉液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，濾過，濾液備用；紅參粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加10倍量水浸泡1小時(shí)，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對濃度為1.16(80℃熱測)的清膏，加乙醇使含醇量為65％，靜置48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，加入上述蛇床子等提取液和紅參提取液，混勻，濃縮至相對密度為1.40(80℃熱測)的稠膏，加入適量淀粉，制成軟材，制丸，干燥，包衣，即得。
實(shí)施例2濃縮丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，滲漉，收集約七倍量滲漉液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，濾過，濾液備用；紅參粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加10倍量水浸泡1小時(shí)，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對濃度為1.16(80℃熱測)的清膏，加乙醇使含醇量為65％，靜置48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，加入上述蛇床子等提取液和紅參提取液，混勻，真空干燥，粉碎得干膏粉，加入0.5-3倍量淀粉，混勻，以50％乙醇為溶劑，采用泛制法或塑制法，制成丸劑。
實(shí)施例3濃縮丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；紅參、山藥粉碎成細(xì)粉備用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至稠膏，與上述蛇床子等的稠膏混勻，真空干燥，粉碎，所得干膏粉與上述紅參、山藥細(xì)粉混勻，以40％乙醇為溶劑，制軟材，制丸，干燥，包衣，即得。
實(shí)施例4濃縮丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；紅參、山藥粉碎成細(xì)粉備用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至稠膏，與上述蛇床子等的稠膏混勻，真空干燥，粉碎，所得干膏粉與上述紅參、山藥細(xì)粉混勻，用90％的乙醇制粒，干燥，壓制成丸，包衣，即得。
實(shí)施例5濃縮丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，滲漉，收集約七倍量滲漉液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，濾過，濾液備用；紅參粉碎成粗粉，加9倍量20％乙醇浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加10倍量水浸泡1小時(shí)，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對濃度為1.16(80℃熱測)的清膏，加乙醇使含醇量為65％，靜置48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.10(80℃熱測)的清膏，加入上述蛇床子等提取液和紅參提取液，混勻，真空干燥，粉碎，所得干膏粉加入適量淀粉混勻，用80％的乙醇，制粒，干燥，壓制成丸，包衣，即得。
實(shí)施例6濃縮丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；紅參、山藥、當(dāng)歸、川芎粉碎成細(xì)粉備用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至稠膏，與上述蛇床子等的稠膏混勻，真空干燥，粉碎，所得干膏粉與上述紅參等細(xì)粉混勻，以水為溶劑，制軟材，制丸，干燥，包衣，即得。
實(shí)施例7速釋濃縮丸劑的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；紅參粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶劑，浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至稠膏，與上述蛇床子等的稠膏和紅參稠膏，混勻，真空干燥，粉碎，所得干膏粉加入5-20％羧甲基淀粉鈉，用90％的乙醇制粒，干燥，壓制成丸，包衣，即得。
實(shí)施例8滴丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；紅參粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶劑，浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至稠膏，與上述蛇床子等的稠膏和紅參稠膏，混勻，真空干燥，粉碎成干膏粉備用；取聚乙二醇-6000加熱熔化，與上述干膏粉按1∶1的比例混勻，以液體石蠟為冷卻劑，藥液溫度50-90℃，冷卻溫度10～20℃，滴速50-60滴/分，滴制成丸。
實(shí)施例9滴丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至適量，備用；紅參粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶劑，浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至適量，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至適量，與上述蛇床子等的提取液和紅參提取液，混勻，噴霧干燥，收集干膏粉備用；取硬脂酸聚烴氧40酯-聚乙二醇按1∶5的比例加熱熔化，與上述干膏粉按1∶5的比例混勻，以液體石蠟為冷卻劑，藥液溫度70-90℃，冷卻溫度15～-5℃，滴速50-60滴/分，滴制成丸。
實(shí)施例10滴丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至適量，備用；紅參粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶劑，浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至適量，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至適量，與上述蛇床子等的提取液和紅參提取液，混勻，噴霧干燥，收集干膏粉備用；取泊洛沙姆-聚乙二醇按1∶5的比例加熱熔化，與上述干膏粉按1∶10的比例混勻，以甲基硅油為冷卻劑，藥液溫度70-90℃，冷卻溫度15～-5℃，滴速50-60滴/分，滴制成丸。
實(shí)施例11微丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；紅參粉碎成粗粉，用20％乙醇作溶劑，浸漬8小時(shí)后，回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮至稠膏，備用；其余覆盆子等十六味，與紅參經(jīng)醇提取的藥渣，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至稠膏，與上述蛇床子等的稠膏和紅參稠膏，混勻，真空干燥，粉碎成干膏粉備用；取干膏粉與微晶纖維素按70～40∶30～60的比例投入流化床造粒包衣機(jī)內(nèi)，以3～10％PVP水溶液為粘合劑，采用頂噴或傾噴制粒，滾圓，包衣，制成微丸。
實(shí)施例12微丸的制備以上二十二味，蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香粉碎成粗粉，用70％乙醇作溶劑，浸漬48小時(shí)后，以每分鐘1～3ml的速度緩緩滲漉，收集滲漉液約5000ml，回收乙醇，濃縮至適量，備用；紅參、山藥粉碎成細(xì)粉備用；其余覆盆子等十五味，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至稠膏，加三倍量乙醇沉淀48小時(shí)，取上清液回收乙醇，濃縮至適量，與上述蛇床子等的提取液混勻，噴霧干燥，收集干膏粉，與上述細(xì)粉混勻，以稀乙醇為潤濕劑，泛制成微丸，置45℃干燥，即得。
實(shí)施例13微丸膠囊的制備取制得的微丸裝入膠囊中，即得微丸膠囊。
實(shí)施例14腎寶丸劑的鑒別與含量測定(可包含下述的全部或部分)1.鑒別
(1)取供試品適量，研細(xì)，加乙醚20ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對照藥材各0.5g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶液與對照藥材溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(2)取蛇床子素對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液與[鑒別](1)項(xiàng)下供試品溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(7∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
(3)取供試品適量，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液用5％碳酸鈉溶液振搖提取3次，每次20ml，合并碳酸鈉提取液，用鹽酸調(diào)pH值至2～3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材0.3g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl，對照藥材和對照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。
(4)取供試品適量，研細(xì)，加正丁醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液加氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘數(shù)分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
(5)取供試品適量，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲30分鐘，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品適量，加甲醇制成每1ml各含4μg的混合溶液，作為對照品溶液。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(40∶60)為流動相，檢測波長為246nm。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定。供試品色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品一致。
2.含量測定
(1)2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷避光操作。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(25∶75)為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，研細(xì)，混勻，取約0.25g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。
本品每片含制何首烏以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計(jì)，不得少于0.6mg。
(2)淫羊藿苷色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(30∶70)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，研細(xì)，混勻，取約0.25g，精密稱定，加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。
本品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)，不得少于0.5mg。
(3)蛇床子素色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(67∶33)為流動相；檢測波長為249nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，研細(xì)，混勻，取約0.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每片含蛇床子以蛇床子素(C15H16O3)計(jì)，不得少于0.25mg；
(4)五味子醇甲色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13∶7)為流動相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取供試品適量，研細(xì)，混勻，取約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。
本品每片含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計(jì)，不得少于0.15mg。
權(quán)利要求
1.一種腎寶丸劑，其特征在于，它由以下配比的中藥原料經(jīng)制備而成，以下的配比可按比例改變，蛇床子28重量份 川芎28.3重量份菟絲子66重量份補(bǔ)骨脂28.5重量份茯苓30重量份 紅參20重量份小茴香14.4重量份五味子36重量份金櫻子94.6重量份白術(shù)14.2重量份 當(dāng)歸46.8重量份覆盆子32.9重量份制何首烏74.4重量份 車前子16.5重量份 熟地黃94重量份枸杞子66重量份 山藥46.3重量份淫羊藿94.6重量份胡蘆巴94重量份 黃芪51.4重量份肉蓯蓉47.3重量份炙甘草14.2重量份
2.權(quán)利要求1的腎寶丸劑，其特征在于，包含各種丸劑，如丸、濃縮丸、速釋濃縮丸、滴丸、微丸，及在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步加工而制得的各種制劑，如微丸膠囊、微丸片或其它制劑。
3.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的制備方法，其特征在于，包含以下步驟(1)配方中蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香用50-80％的乙醇滲漉或回流提??；(2)配方中紅參用10-50％的乙醇滲漉或回流提取，藥渣備用；(3)配方中覆盆子等其余十六味與上述紅參藥渣一起，加水煎提，水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制；(4)上述(1)、(2)、(3)所得的提取物按常規(guī)方法制成丸劑。
4.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的制備方法，其特征在于，其制備方法還可采用配方中的藥材部分打粉，部分提取，所得的藥材提取物與藥材細(xì)粉一起，采用常規(guī)方法制成丸劑。
5.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的制備方法，其特征在于，包含以下步驟(1)配方中蛇床子、淫羊藿、小茴香用50-80％的乙醇滲漉或回流提??；(2)配方中紅參、山藥、當(dāng)歸、川芎粉碎成細(xì)粉備用；(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制；(4)上述(1)、(3)所得的提取物與上述(2)所得細(xì)粉按常規(guī)方法制成丸劑。
6.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的制備方法，其特征在于，包含以下步驟(1)配方中蛇床子、淫羊藿、當(dāng)歸、川芎、小茴香用50-80％的乙醇滲漉或回流提??；(2)配方中紅參、山藥粉碎成細(xì)粉備用；(3)配方中覆盆子等其余十五味，加水煎提，水提液可進(jìn)一步采用醇沉、超濾或其它適宜的方法進(jìn)行精制；(4)上述(1)、(3)所得的提取物與上述(2)所得細(xì)粉按常規(guī)方法制成丸劑。
7.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，含有如下含量測定和定性鑒別中的一種或幾種，不僅可用于控制腎寶丸劑的質(zhì)量，也適用于控制腎寶其它制劑。(1)含量測定a.用高效液相法測定腎寶丸劑中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量；b.用高效液相法測定腎寶丸劑中淫羊藿苷的含量；c.用高效液相法測定腎寶丸劑中蛇床子素的含量；d.用高效液相法測定腎寶丸劑中五味子醇甲的含量。(2)定性鑒別a.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中當(dāng)歸與川芎；b.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中蛇床子；c.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中制何首烏；d.用薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中淫羊藿；e.用高效液相法鑒別腎寶丸劑中補(bǔ)骨脂。
8.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，含有如下含量測定和定性鑒別中的一種或幾種，不僅可用于控制腎寶丸劑的質(zhì)量，也適用于控制腎寶其它制劑。(1)含量測定a.高效液相法測定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(5-70∶95-30)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷對照品，加乙醇或稀乙醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，用適宜濃度的甲醇/乙醇提取，作為供試品溶液。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量體積，注入液相色譜儀，測定，即得。b.高效液相法測定腎寶丸劑中淫羊藿苷含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(5-70∶95-30)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，加適量水溶解，用乙酸乙酯或其它適宜的溶劑提取，提取液蒸干，殘?jiān)眠m宜的溶劑溶解，作為供試品溶液。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定即得。c.高效液相法測定腎寶丸劑中蛇床子素含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(40-85∶60-15)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品，加甲醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，用適宜濃度的甲醇/乙醇提取，作為供試品溶液。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定即得。d.高效液相法測定腎寶丸劑中五味子醇甲含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(5-30∶2-15)為流動相；紫外檢測器或二極管陣列檢測器。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇或其它適宜的溶劑制成確定濃度的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，用適宜濃度的甲醇/乙醇提取，作為供試品溶液。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定即得。(2)定性鑒別a.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中當(dāng)歸與川芎取供試品適量，加乙醚或其它適宜的溶劑提取，提取液作為供試品溶液，或提取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對照藥材適量，提取后制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶液與對照藥材溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.3-2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。b.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中蛇床子取供試品適量，加乙醚或其它適宜的溶劑提取，提取液作為供試品溶液，或提取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取蛇床子素對照品適量，加溶劑適量制成對照品溶液。吸取上述供試品溶液與對照品溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(3-20∶0.5-5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。c.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中制何首烏取供試品適量，加乙酸乙酯或其它適宜的溶劑提取，提取液用適宜濃度的碳酸鈉溶液提取，碳酸鈉提取液用鹽酸調(diào)pH值至1～4，再用乙酸乙酯或其它適宜的溶劑萃取，萃取液作為供試品溶液，或萃取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材適量，提取后制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品適量，加溶劑適量制成對照品溶液。吸取上述供試品溶液、對照藥材和對照品溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(5-25∶2-8∶0.4-2)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。d.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中淫羊藿取供試品適量，加正丁醇或其它適宜的溶劑提取，提取液用氨試液洗滌，棄去氨試液，提取液作為供試品溶液，或提取液蒸/揮干，殘?jiān)舆m宜的溶劑使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加溶劑適量制成對照品溶液。吸取上述兩種溶液各適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G或硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(3-30∶0.4-4∶0.4-4∶0.4-4)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至顯色，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。e.高效液相法鑒別腎寶丸劑中補(bǔ)骨脂取供試品適量，加甲醇或其它適宜的溶劑提取，提取液作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品適量，加溶劑適量制成對照品溶液。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(20-80∶80-20)為流動相，紫外檢測器或二極管陣列檢測器。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各適量體積，注入液相色譜儀，測定。供試品色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品一致。所述的提取可采用超聲處理、回流提取、微波提取、振蕩提取等常規(guī)方法；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量測定的流動相還可以是甲醇-乙腈-水(2-10∶0.5-2∶4-20)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；淫羊藿苷的含量測定的流動相還可以是甲醇-水-冰醋酸(40-80∶20-60∶0.2-1)、甲醇-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；蛇床子素的含量測定的流動相還可以是甲醇-水-四氫呋喃(30-75∶20-60∶2-10)、乙腈-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；五味子醇甲含量測定的流動相還可以是乙腈-水(5-70∶95-30)或其它適宜的流動相；當(dāng)歸與川芎的薄層色譜鑒別的展開劑還可以是石油醚-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)、環(huán)己烷-乙酸乙酯(5-25∶0.5-5)或其它適宜的展開劑；蛇床子的薄層色譜鑒別的展開劑還可以是苯-乙酸乙酯(10-50∶0.3-2)、正己烷-乙酸乙酯(4-20∶0.4-4)或其它適宜的展開劑；制何首烏的薄層色譜鑒別的展開劑還可以是氯仿-甲醇(5-15∶0.5-5)、石油醚(30-60℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(50-150∶5-50∶0.5-5)或其它適宜的展開劑；定性鑒別a、b、c、d中既可以采用對照品，也可以采用對照藥材作對照，或兩者均采用；定性鑒別e中既可以采用兩種對照品，也可以僅采用其中的一種對照品作為對照。
9.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，含有如下含量測定和定性鑒別中的一種或幾種，不僅可用于控制腎寶丸劑的質(zhì)量，也適用于控制腎寶其它制劑。(1)含量測定a.高效液相法測定2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷的含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(25∶75)為流動相；檢測波長為320nm。理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。供試品溶液的制備 取供試品適量，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。b.高效液相法測定腎寶丸劑中淫羊藿苷含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙睛-水(30∶70)為流動相；檢測波長為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含40ug的溶液，即得。供試品溶液的制備 取供試品適量，加水10ml，置具塞分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次，每次10ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定即得。c.高效液相法測定腎寶丸劑中蛇床子素含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(67∶33)為流動相；檢測波長為249nm。理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品，加甲醇制成每1ml含50ug的溶液，即得。供試品溶液的制備 取供試品適量，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液20ml，注入液相色譜儀，測定，即得。d.高效液相法測定腎寶丸劑中五味子醇甲含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13∶7)為流動相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備 精密稱取五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取供試品適量，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ml，注入液相色譜儀，測定即得。(2)定性鑒別a.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中當(dāng)歸和川芎取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸和川芎對照藥材各0.5g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述供試品溶液與對照藥材溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。b.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中蛇床子取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。取蛇床子素對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(7∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。c.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中制何首烏取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。加乙酸乙酯30ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液用5％碳酸鈉溶液振搖提取3次，每次20ml，合并碳酸鈉提取液，用鹽酸調(diào)pH值至2～3，再用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材0.3g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液10μl，對照藥材和對照品溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。d.薄層色譜法鑒別腎寶丸劑中淫羊藿取供試品適量，加乙醚30ml，加熱回流1小時(shí)，濾過.濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。加正丁醇30ml，超聲提取30分鐘，濾過，濾液加氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘數(shù)分鐘，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。e.高效液相法鑒別腎寶丸劑中補(bǔ)骨脂取供試品適量，加甲醇40ml，超聲提取30分鐘，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對照品適量，加甲醇制成每1ml各含4μg的混合溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ID)測定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(40∶60)為流動相，檢測波長為246nm。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定。供試品色譜圖中主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對照品一致。所述的提取樣品或溶解提取物所用溶劑的量、超聲或回流提取的時(shí)間、定容或溶解后體積、點(diǎn)樣量或進(jìn)樣量、對照品的濃度可以以所述具體值為基準(zhǔn)改變，或按比例改變。所述的定性鑒別a、b、c、d中既可以采用對照品，也可以采用對照藥材作對照，或兩者均采用，定性鑒別e中既可以采用兩種對照品，也可以僅采用其中的一種對照品作為對照。所述的超聲處理也可以采用回流提取、微波提取、振蕩提取等常規(guī)提取方法，所述的回流提取也可以采用超聲處理、微波提取、振蕩提取等常規(guī)提取方法。
10.權(quán)利要求1的腎寶丸劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，其含量測定的定量限為一次最小服用量中，含制何首烏以2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-b-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計(jì)，不得少于1.3mg；含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)計(jì)，不少于1.5mg；含蛇床子以蛇床子素(C15H16O3)計(jì)，不得少于0.8mg；含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計(jì)，不得少于0.4mg；上述含量限度為最低含量限度，可以根據(jù)生產(chǎn)的具體情況提高含量限度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種腎寶丸劑，同時(shí)涉及該丸劑的制備方法質(zhì)量控制方法。該丸劑克服現(xiàn)有制劑的不足，具有穩(wěn)定性好、不含糖、不含防腐劑、服用攜帶方便、適于工業(yè)化生產(chǎn)、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，具有廣大的市場潛力。同時(shí)提供了腎寶丸劑的制備方法質(zhì)量控制方法，所提供的質(zhì)量控制方法可以對腎寶丸劑中的當(dāng)歸與川芎、蛇床子、制何首烏、淫羊藿、補(bǔ)骨脂進(jìn)行鑒別，對腎寶丸劑中制何首烏的活性物質(zhì)2，3，5，4’－四羥基二苯乙烯－2－O－b－D－葡萄糖苷、淫羊藿的活性物質(zhì)淫羊藿苷、蛇床子的活性物質(zhì)蛇床子素、五味子的活性物質(zhì)五味子醇甲進(jìn)行含量測定。
文檔編號A61P13/12GK1840059SQ20061020001
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月10日
發(fā)明者毛曉敏 申請人:毛曉敏