專利名稱：護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，屬于對藥品進行質(zhì)量控制的技術領域。
背景技術：
護肝寧制劑具有清熱利濕，益肝化瘀，舒肝止痛，理氣助消化的作用，主要用于急性肝炎及慢性肝炎、肝硬化等癥，其療效確切可靠，無副作用。其中護肝寧片收錄在部頒中藥成方制劑第十三冊中，已在臨床上應用多年，取得了較滿意的治療效果。但經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有護肝寧制劑存在質(zhì)量控制標準簡單、產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點，在產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，用該質(zhì)量控制方法不能有效控制該制劑的質(zhì)量，從而將影響其臨床療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明針對原有護肝寧片質(zhì)量控制標準簡單、產(chǎn)品質(zhì)量不易控制的缺點，對本制劑的質(zhì)量控制方法進行了研究，擬訂了虎杖中大黃素和虎杖苷的含量測定以及虎杖、靈芝的薄層色譜鑒別，提高了護肝寧制劑的質(zhì)量控制標準，從而保證了該制劑的臨床療效。
本發(fā)明所述的護肝寧制劑是由垂盆草500～1000g、虎杖200～800g、丹參100～500g和靈芝100～500g制成的，其制備方法為取垂盆草，粉碎成細粉，剩余的垂盆草加水煎煮，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏；取靈芝，加入乙醇浸漬，傾取上清液備用，藥渣依次用65～90％乙醇、30～65％乙醇分別浸漬，各傾取上清液，最后壓榨殘渣，收集壓出液，與三次上清液合并，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成稠膏，備用；丹參及虎杖照中國藥典流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用75～95％乙醇作溶劑浸泡4小時后緩緩滲漉(流速每分鐘8ml)，俟可溶性成分完全漉出，漉液回收乙醇并濃縮成稠膏；丹參、虎杖和靈芝的藥渣加水煎煮，合并煎液，濾過，濾液濃縮成稠膏；取上述四種稠膏，加入垂盆草細粉，混勻，減壓干燥，然后加入適當輔料制成不同的制劑。
本發(fā)明所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括對制劑中虎杖和靈芝的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中虎杖所含大黃素和虎杖苷的含量測定。
虎杖的鑒別方法是分別以虎杖對照藥材、大黃素對照品和大黃素甲醚對照品為對照，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑的薄層色譜法。
靈芝的鑒別方法是以靈芝對照藥材為對照，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑的薄層色譜法。
所述的鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取本制劑或其內(nèi)容物，加入甲醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液，加熱水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點。
(2)取本制劑或其內(nèi)容物，加入乙醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
更具體的鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取本制劑或其內(nèi)容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超聲處理5～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加熱水解10～100分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01～0.5g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點。
(2)取本制劑或其內(nèi)容物1～10g，加乙醇10～100ml，加熱回流10～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材0.5～5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各2～15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
虎杖中大黃素的含量測定方法是以大黃素對照品為對照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相的高效液相色譜法。
虎杖中虎杖苷的含量測定方法是以虎杖苷對照品為對照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相的高效液相色譜法。
所述含量測定方法包括以下項目的部分或全部(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇，稱定重量，超聲提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加熱回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，精密加入稀乙醇，稱定重量，加熱回流，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
更具體的含量測定方法包括以下項目的部分或全部(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.1～3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取10～100分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5～50ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加熱回流0.5～5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.05～5g，精密稱定，精密加入稀乙醇10～200ml，稱定重量，加熱回流10～100分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
所述質(zhì)量控制方法包括性狀對于膠囊劑內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微酸、澀；對于片劑藥物顯棕褐色；味苦、微酸、澀；對于顆粒劑藥物為棕褐色的顆粒；味微甜、微酸、澀；鑒別(1)取本制劑或其內(nèi)容物，加入甲醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液，加熱水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點。
(2)取本制劑或其內(nèi)容物，加入乙醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查應符合中國藥典膠囊劑、片劑或顆粒項下有關的各項規(guī)定。
含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇，稱定重量，超聲提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加熱回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，精密加入稀乙醇，稱定重量，加熱回流，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
經(jīng)研究我們發(fā)現(xiàn)，采用以下質(zhì)量控制方法將更容易控制這種制劑的質(zhì)量，更利于保證制劑的臨床療效，故所述質(zhì)量控制方法還可包括性狀對于膠囊劑內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微酸、澀；對于片劑藥物顯棕褐色；味苦、微酸、澀；對于顆粒劑藥物為棕褐色的顆粒；味微甜、微酸、澀；
鑒別(1)取本制劑或其內(nèi)容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超聲處理5～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加熱水解10～100分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01～0.5g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點。
(2)取本制劑或其內(nèi)容物1～10g，加乙醇10～100ml，加熱回流10～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材0.5～5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各2～15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查應符合中國藥典膠囊劑、片劑或顆粒項下有關的各項規(guī)定。
含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.1～3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取10～100分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5～50ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加熱回流0.5～5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.05～5g，精密稱定，精密加入稀乙醇10～200ml，稱定重量，加熱回流10～100分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
為了確保本發(fā)明質(zhì)量控制方法科學、合理、可行，本申請人對方中各藥材的鑒別和含量測定方法進行了研究，具體試驗資料如下一、大黃素含量測定方法研究1.流動相的選擇流動相1以甲醇、0.1％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相2以乙腈、0.1％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相3以甲醇、1％高氯酸不同比例的混合溶液為流動相。
結(jié)果以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相，陰性樣品色譜圖在大黃素峰位置處無假陽性峰；特別是在甲醇-0.1％磷酸(82∶18)流動相條件下，大黃素色譜峰與其它色譜峰分離最好。
2.供試品溶液制備方法研究方法一取藥物0.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲提取(功率250W，頻率33kHz)45分鐘，濾過，取續(xù)濾液20ml，揮干溶劑，加入三氯甲烷25ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，置80℃水浴中加熱回流2小時，冷卻至室溫，分取三氯甲烷液，酸液用三氯甲烷提取3次(20ml，10ml，10ml)，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
方法二、取藥物0.5g，精密稱定，精密加入三氯甲烷50ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，稱定重量，置80℃水浴中加熱回流2小時，冷卻至室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻。分取三氯甲烷液，精密量取20ml，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
分別吸取上述二種供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，按正文色譜條件，依法測定，結(jié)果見下表。
不同提取方法考察結(jié)果

試驗結(jié)果表明，采用方法一，大黃素提取率較高。
3.精密度試驗精密吸取對照品溶液(49.25μg/ml)10μl，連續(xù)進樣5次，計算得相對標準偏差

試驗結(jié)果表明，該方法精密度良好。
4.穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8小時依法測定。

結(jié)果表明，供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。
5.重復性試驗按本發(fā)明中含量測定項下供試液的制備方法，分別稱取同一批號樣品0.5g，6份，進行測定，計算得相對標準偏差，結(jié)果如下。

結(jié)果表明該方法重復性良好。
6.回收率試驗采取加樣回收法(按1∶1加入)，取已知含量的同一批號樣品約0.25g，精密稱定，各置50ml具塞瓶中，分別精密加入大黃素對照品溶液(3.91mg→10ml)各2ml，精密加入甲醇48ml，其他操作同正文，并依法測定，按以下公式計算回收率，結(jié)果見下表。

試驗結(jié)果表明，大黃素的平均加樣回收率在95％～105％之間，加樣回收良好。
二、虎杖苷含量測定方法研究1.流動相的選擇流動相1以乙腈-水不同比例的混合溶液為流動相；流動相2以甲醇-0.1％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相3以甲醇-0.05％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相4以甲醇-5％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相5以乙腈-0.1％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相6以乙腈醇-0.05％磷酸不同比例的混合溶液為流動相；流動相7以乙腈-0.5％磷酸不同比例的混合溶液為流動相。
結(jié)果以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相，陰性樣品色譜圖在虎杖苷峰位置處無假陽性峰；特別是在乙腈-0.1％磷酸(16∶84)流動相條件下，虎杖苷色譜峰與其它色譜峰均可達到較好分離(分離度為3.69)，且峰形對稱、尖銳，保留時間適宜(約10分鐘)。
2.供試品溶液制備方法研究由于虎杖苷含酚羥基，見光易發(fā)生氧化/聚合反應，故以下操作均為避光。
(1)采用加熱回流，操作如下取藥物約0.15g，精密稱定，精密加入稀乙醇50ml稱定重量，加熱回流提取，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清液，即得。
(2)采用超聲處理法，操作如下取藥物約0.15g，精密稱定，精密加入稀乙醇50ml稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，取上清液，即得。
分別吸取上述二種供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，按正文色譜條件，依法測定。

試驗結(jié)果表明，采用加熱回流的提取方法，虎杖苷提取率較高。
3.精密度試驗精密吸取虎杖苷對照品溶液(23.2μg/ml)20μl，連續(xù)進樣5次，計算得相對標準偏差。

試驗結(jié)果表明，該方法精密度良好。
4.穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8小時依法測定，結(jié)果如下。

結(jié)果表明，供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。
5.重復性試驗按本發(fā)明中含量測定項下供試液的制備方法，分別稱取同一批號樣品0.15g，6份，進行測定，計算得相對標準偏差，結(jié)果如下。

結(jié)果表明該方法重復性良好。
6.回收率試驗采取加樣回收法(按1∶1加入)，取已知含量的同一批號樣品約0.075g，精密稱定，分別精密加入虎杖苷對照品溶液(5.08mg→10ml)各1ml，其他按本發(fā)明含量測定項下供試品溶液制備方法及色譜條件測定，按以下公式計算回收率，結(jié)果如下表。

試驗結(jié)果表明，虎杖苷的平均加樣回收率在95％～105％之間，加樣回收良好。
三、虎杖的薄層鑒別研究對照品溶液的制備取大黃素對照品和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。
對照藥材溶液的制備取虎杖對照藥材，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。
陰性對照液的制備取處方中除虎杖外的其他藥材飲片，按制備工藝制備缺虎杖陰性樣品，以與供試品溶液相同的制備方法制備，即得。
供試品溶液的制備方法一取藥物1.5g，加甲醇50ml，超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加熱水解30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取2次，合并氯仿液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液。
供試品溶液制備方法二取藥物1.5g，加0.25mol/L硫酸溶液5ml，加熱水解30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取，合并氯仿液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液。
展開劑選擇分別以30～60℃石油醚、乙酸丁酯、甲醇、冰醋酸不同比例的混合溶液；以30～60℃石油醚、甲酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液為展開劑。
結(jié)果采用方法一制備供試品溶液，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，分離效果好，斑點清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好。最佳展開劑為石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液。
四、靈芝的薄層鑒別研究對照藥材溶液的制備取靈芝對照藥材，按照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。
陰性對照液的制備取處方中除靈芝外的其他藥材飲片，按制備工藝制備缺靈芝陰性樣品，以與供試品溶液相同的制備方法制備，即得。
供試品溶液制備方法一取本品內(nèi)容物，加乙醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。
供試品溶液制備方法二取本品內(nèi)容物，加甲醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液。
展開劑選擇分別以60～90℃石油醚、甲酸乙酯、甲酸不同比例的混合溶液；以30～60℃石油醚、乙酸丁酯、甲醇、冰醋酸不同比例的混合溶液為展開劑。
結(jié)果采用方法一制備供試品溶液，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，分離效果好，斑點清晰，陰性對照無干擾，方法重現(xiàn)性好。最佳展開劑為石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液。
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明質(zhì)量控制方法研究并制訂了虎杖中大黃素和虎杖苷的含量測定以及虎杖、靈芝的薄層色譜鑒別，所采用的方法精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，回收率高，提高了護肝寧制劑的質(zhì)量控制標準，從而確保了該制劑的臨床療效。
具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發(fā)明，但不作為對本發(fā)明的限制。
本發(fā)明的實施例1所述膠囊劑質(zhì)量控制方法包括性狀內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微酸、澀；鑒別(1)取本品內(nèi)容物1.5g，加甲醇50ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液5ml，加熱水解30分鐘，放冷，用三氯甲烷提取2次，每次5ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各5μl、對照品溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點。
(2)取本品內(nèi)容物3.5g，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)∶甲酸乙酯∶甲酸＝15∶5∶1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查應符合中國藥典膠囊劑項下有關的各項規(guī)定。
含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇∶0.1％磷酸溶液＝82∶18為流動相；檢測波長254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時的大黃素對照品適量，加甲醇制成每1ml中含55μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲提取(功率250W，頻率33kHz)45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液20ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷25ml和2.5mol/L硫酸溶液20ml，置80℃水浴中加熱回流2小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取3次(20ml，10ml，10ml)，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈∶0.1％磷酸＝16∶84為流動相；檢測波長306nm，理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000。
對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24小時的虎杖苷對照品適量，加稀乙醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品內(nèi)容物0.15g，精密稱定，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。
測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g。
本發(fā)明的實施例2所述片劑質(zhì)量控制方法可以包括性狀藥物顯棕褐色；味苦、微酸、澀；鑒別(1)取本制劑5g，加甲醇100ml，超聲處理100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液20ml，加熱水解100分鐘，放冷，用三氯甲烷提取5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷3ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含3mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶0.5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑10g，加乙醇100ml，加熱回流100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查應符合中國藥典片劑項下有關的各項規(guī)定；含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈∶0.05％磷酸溶液＝90∶10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥48小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇200ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取100分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液50ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷50ml和5mol/L硫酸溶液50ml，置80℃水浴中加熱回流5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇∶5％磷酸＝90∶10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑5g，精密稱定，精密加入稀乙醇200ml，稱定重量，加熱回流100分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g。
本發(fā)明的實施例3所述顆粒劑質(zhì)量控制方法可以包括性狀藥物為棕褐色的顆粒；味微甜、微酸、澀；鑒別(1)取本制劑0.5g，加甲醇10ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1ml，加熱水解10分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑1g，加乙醇10ml，加熱回流10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶0.5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查應符合中國藥典顆粒劑項下有關的各項規(guī)定；含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈∶5％磷酸溶液＝10∶90為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；
對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取10分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷5ml和0.5mol/L硫酸溶液5ml，置80℃水浴中加熱回流0.5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷提取液減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g。
(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇∶0.05％磷酸＝10∶90為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑0.05g，精密稱定，精密加入稀乙醇10ml，稱定重量，加熱回流10分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
本發(fā)明的實施例4所述膠囊劑質(zhì)量控制方法可以包括性狀內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微酸、澀；鑒別(1)取本制劑內(nèi)容物0.5g，加甲醇10ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1ml，加熱水解10分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶0.5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑內(nèi)容物1g，加乙醇10ml，加熱回流10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5∶10∶5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
檢查應符合中國藥典膠囊劑項下有關的各項規(guī)定。
本發(fā)明的實施例5所述片劑質(zhì)量控制方法可以包括性狀藥物顯棕褐色；味苦、微酸、澀；鑒別取本制劑0.5g，加甲醇100ml，超聲處理5分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1ml，加熱水解10分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝30∶1∶5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；含量測定大黃素照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇∶5％磷酸溶液＝30∶70為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取10分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷5ml和0.5mol/L硫酸溶液5ml，置80℃水浴中加熱回流0.5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1次，三氯甲烷提取液減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g。
權利要求
1.一種護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，所述制劑包括膠囊劑、片劑和顆粒劑，其特征在于所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括對制劑中虎杖和靈芝的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中虎杖所含大黃素和虎杖苷的含量測定。
2.按照權利要求1所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于虎杖的鑒別方法是分別以虎杖對照藥材、大黃素對照品和大黃素甲醚對照品為對照，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑的薄層色譜法。
3.按照權利要求1所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于靈芝的鑒別方法是以靈芝對照藥材為對照，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑的薄層色譜法。
4.按照權利要求1、2或3所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取本制劑或其內(nèi)容物，加入甲醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液，加熱水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑或其內(nèi)容物，加入乙醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
5.按照權利要求4所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于更具體的鑒別方法包括以下項目的部分或全部(1)取本制劑或其內(nèi)容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超聲處理5～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加熱水解10～100分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01～0.5g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑或其內(nèi)容物1～10g，加乙醇10～100ml，加熱回流10～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材0.5～5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各2～15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
6.按照權利要求1所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于虎杖中大黃素的含量測定方法是以大黃素對照品為對照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相的高效液相色譜法。
7.按照權利要求1所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于虎杖中虎杖苷的含量測定方法是以虎杖苷對照品為對照，以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相的高效液相色譜法。
8.按照權利要求1、6或7所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述含量測定方法包括以下項目的部分或全部(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇，稱定重量，超聲提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加熱回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g；(2)虎杖苷照 中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，精密加入稀乙醇，稱定重量，加熱回流，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
9.按照權利要求8所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于更具體的含量測定方法包括以下項目的部分或全部(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.1～3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取10～100分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5～50ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加熱回流0.5～5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g；(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.05～5g，精密稱定，精密加入稀乙醇10～200ml，稱定重量，加熱回流10～100分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
10.按照權利要求1所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述質(zhì)量控制方法包括性狀對于膠囊劑內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微酸、澀；對于片劑藥物顯棕褐色；味苦、微酸、澀；對于顆粒劑藥物為棕褐色的顆粒；味微甜、微酸、澀；鑒別(1)取本制劑或其內(nèi)容物，加入甲醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液，加熱水解，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇溶解，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑或其內(nèi)容物，加入乙醇，加熱回流，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；檢查應符合中國藥典膠囊劑、片劑或顆粒項下有關的各項規(guī)定；含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇，稱定重量，超聲提取，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷和0.5～5mol/L硫酸溶液，置80℃水浴中加熱回流，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解并定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g；(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇溶解，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物，精密稱定，精密加入稀乙醇，稱定重量，加熱回流，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
11.按照權利要求10所述護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述質(zhì)量控制方法包括性狀對于膠囊劑內(nèi)容物為棕褐色的顆粒；味苦、微酸、澀；對于片劑藥物顯棕褐色；味苦、微酸、澀；對于顆粒劑藥物為棕褐色的顆粒；味微甜、微酸、澀；鑒別(1)取本制劑或其內(nèi)容物0.5～5g，加甲醇10～100ml，超聲處理5～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加2.5mol/L硫酸溶液1～20ml，加熱水解10～100分鐘，放冷，用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5～3ml使溶解，作為供試品溶液；另取虎杖對照藥材0.01～0.5g，同法制成對照藥材溶液；再取大黃素和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1ml含0.2～3mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液，分別點于同一硅膠G薄層板上，以30～60℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；置氨蒸氣中熏后，日光下檢視，顯相同的紅色斑點；(2)取本制劑或其內(nèi)容物1～10g，加乙醇10～100ml，加熱回流10～100分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5～5ml使溶解，作為供試品溶液；另取靈芝對照藥材0.5～5g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各2～15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以60～90℃石油醚∶甲酸乙酯∶甲酸＝5～30∶1～10∶0.5～5的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；檢查應符合中國藥典膠囊劑、片劑或顆粒項下有關的各項規(guī)定；含量測定(1)大黃素 照中國藥典高效液相色譜法測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸溶液＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的大黃素對照品，加甲醇制成每1ml含30～100μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.1～3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10～200ml，稱定重量，在功率250W、頻率33kHz下超聲提取10～100分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5～50ml，置燒瓶中，揮干溶劑，加入三氯甲烷5～50ml和0.5～5mol/L硫酸溶液5～50ml，置80℃水浴中加熱回流0.5～5小時，放冷，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取1～5次，合并三氯甲烷提取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于1.5mg/g；本片劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.5mg/g；本顆粒劑含虎杖以大黃素C15H10O5計，不得少于0.1mg/g；(2)虎杖苷 照中國藥典高效液相色譜法測定，避光操作色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈∶0.05～5％磷酸＝10～90∶90～10為流動相；檢測波長306nm；理論板數(shù)按虎杖苷峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥12～48小時的虎杖苷對照品，加稀乙醇制成每1ml含10～50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本制劑或其內(nèi)容物0.05～5g，精密稱定，精密加入稀乙醇10～200ml，稱定重量，加熱回流10～100分鐘，冷卻至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得；測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10～25μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本膠囊劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.5mg/g；本片劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.2mg/g；本顆粒劑含虎杖以虎杖苷C20H22O8計，不得少于0.054mg/g。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種護肝寧制劑的質(zhì)量控制方法，所述質(zhì)量控制方法主要包括性狀、鑒別、檢查以及含量測定項目中的部分或全部；其中鑒別包括對制劑中虎杖和靈芝的薄層色譜鑒別；含量測定是對制劑中虎杖所含大黃素和虎杖苷的含量測定；與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明質(zhì)量控制方法研究并制訂了虎杖中大黃素和虎杖苷的含量測定以及虎杖、靈芝的薄層色譜鑒別，所采用的方法精密度高，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性好，回收率高，提高了護肝寧制劑的質(zhì)量控制標準，從而確保了該制劑的臨床療效。
文檔編號A61K9/48GK1857435SQ20061020029
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月30日 優(yōu)先權日2006年3月30日
發(fā)明者葉湘武, 安崇惠, 閆文超, 楊坤, 武燕, 徐裕彬 申請人:貴州益佰制藥股份有限公司