專利名稱：一種抗實(shí)體腫瘤組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗實(shí)體腫瘤組合物，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明提供一種含間質(zhì)水解劑的緩釋注射劑和緩釋植入劑。該抗癌緩釋劑可有效地抑制或破壞實(shí)體腫瘤間質(zhì)及腫瘤血管，并能抑制腫瘤的新生血管，有效降低腫瘤內(nèi)的張力、間質(zhì)壓力、間質(zhì)粘性，進(jìn)而提高其間質(zhì)液導(dǎo)率，有利于藥物進(jìn)入實(shí)體腫瘤以及在腫瘤內(nèi)的有效擴(kuò)散。
背景技術(shù)：
癌癥的治療主要包括手術(shù)、放療及化療等方法。其中手術(shù)治療不能清除散在的瘤細(xì)胞，因此常復(fù)發(fā)或?qū)е履[瘤細(xì)胞因手術(shù)刺激而擴(kuò)散轉(zhuǎn)移；放療和傳統(tǒng)的化療不具選擇性，難于腫瘤局部形成有效藥物濃度或治療劑量，效果差，毒性大，單純提高藥物或放射劑量又受到全身毒性反應(yīng)的限制。參見(jiàn)孔等“瘤內(nèi)放置順鉑加系統(tǒng)卡莫司汀治療大鼠腦腫瘤”《外科腫瘤雜志》69期76-82頁(yè)，1998年(Kong Q et al.，J Surg Oncol.1998 Oct；69(2)76-82)。
低劑量的抗癌藥物治療不僅能夠增加癌細(xì)胞的藥物耐受性，而且還可促進(jìn)其浸潤(rùn)性生長(zhǎng)”，參見(jiàn)梁等“抗癌藥物脈沖篩選后增加了人肺癌細(xì)胞的藥物耐受性及體外浸潤(rùn)能力并伴有基因表達(dá)的改變”《國(guó)際癌癥雜志》111期484-93頁(yè)，2004年(Liang Y，et al.，Int JCancer.2004；111(4)484-93)。
抗腫瘤藥物局部放置能夠較好地克服以上缺陷，不僅能夠明顯提高腫瘤局部的藥物濃度，而且可以顯著降低全身毒性反應(yīng)。大量體內(nèi)外試驗(yàn)已顯示出對(duì)實(shí)體腫瘤的治療效果，參見(jiàn)孔慶忠等“瘤內(nèi)放置順鉑加系統(tǒng)卡莫司汀治療大鼠腦腫瘤”《外科腫瘤雜志》69期76-82頁(yè)，1998年(Kong Q et al.，J Surg Oncol.1998 Oct；69(2)76-82)和孔慶忠等“瘤內(nèi)放置順鉑治愈大鼠原發(fā)腦腫瘤”《外科腫瘤雜志》64期268-273頁(yè)(1997年)(Kong Q et al.，JSurg Oncol.1997 Oct；64268-273)。還可參見(jiàn)中國(guó)專利(ZL00111093.4；ZL96115937.5；申請(qǐng)?zhí)?01111264，001111272)及美國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)6,376,525B1；5,651,986；5,626,862)。
然而，實(shí)體腫瘤由腫瘤細(xì)胞和腫瘤間質(zhì)組成，其中腫瘤間質(zhì)中的血管不僅為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)提供了支架及必不可少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還影響了化療藥物在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴(kuò)散，參見(jiàn)尼提等“細(xì)胞外間質(zhì)的狀況對(duì)實(shí)體腫瘤內(nèi)藥物運(yùn)轉(zhuǎn)的影響”《癌癥研究》60期2497-503頁(yè)，2000年(Netti PA，Cancer Res.2000，60(9)2497-503)。
腫瘤間質(zhì)中的血管及結(jié)締組織中的纖維蛋白及膠原蛋白等成分與過(guò)度增生的腫瘤細(xì)胞導(dǎo)致實(shí)體腫瘤的間質(zhì)壓力(interstitial pressure)高、間質(zhì)粘性(interstitialviscosity)大、組織張力系數(shù)(tissue tensile modulus)大、間質(zhì)液導(dǎo)率(hydraulicconductance)低。以上諸因素大大限制了藥物進(jìn)入實(shí)體腫瘤以及在腫瘤內(nèi)的有效擴(kuò)散，因此構(gòu)成腫瘤化療的主要障礙。
不僅如此，腫瘤間質(zhì)中的血管對(duì)常規(guī)化療藥物并不敏感，常導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的耐受性的增強(qiáng)，其結(jié)果是治療失敗。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的藥物組合物，含間質(zhì)水解劑和/或抗癌藥物。更具體而言，是抗實(shí)體腫瘤的緩釋劑，主要為緩釋植入劑和緩釋注射劑。局部應(yīng)用可有效地抑制或破壞腫瘤的血管并能抑制腫瘤的新生血管；除能抑制腫瘤生長(zhǎng)外，還能增加腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性；該抗實(shí)體腫瘤緩釋劑還有效降低腫瘤內(nèi)的張力、間質(zhì)壓力、間質(zhì)粘性，進(jìn)而提高其間質(zhì)液導(dǎo)率，有利于藥物進(jìn)入實(shí)體腫瘤以及在腫瘤內(nèi)的有效擴(kuò)散。
除此之外，將間質(zhì)水解劑和/或抗癌藥物制成緩釋劑(主要為緩釋注射劑和緩釋植入劑)不僅能夠極大地提高腫瘤局部的藥物濃度、降低藥物在循環(huán)系統(tǒng)中的藥物濃度、降低藥物對(duì)正常組織的毒性，還能夠極大方便藥物注射、減少手術(shù)操作的并發(fā)癥、降低病人的費(fèi)用。抗癌藥物除能抑制腫瘤生長(zhǎng)外，還能增加腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。以上意外發(fā)現(xiàn)構(gòu)成本發(fā)明的主要內(nèi)容。
本發(fā)明抗實(shí)體腫瘤緩釋劑包括抗癌有效成分和藥用輔料，抗癌有效成分選自拓?fù)涿敢种苿┖?或四嗪類藥物的抗癌藥物和間質(zhì)水解劑。間質(zhì)水解劑為血管抑制劑和/或蛋白水解酶，血管抑制劑除具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用外，可有效地抑制或破壞腫瘤的血管并能抑制腫瘤的新生血管的形成，進(jìn)而不僅使腫瘤細(xì)胞失去生長(zhǎng)所需的支架及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來(lái)源，與蛋白水解酶合用或單獨(dú)應(yīng)用還可明顯促進(jìn)化療藥物進(jìn)入腫瘤及在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴(kuò)散；蛋白水解酶可有效降解腫瘤間質(zhì)中的血管及結(jié)締組織中的纖維蛋白及膠原蛋白等成分，有效降低腫瘤內(nèi)的張力、間質(zhì)壓力、間質(zhì)粘性，進(jìn)而提高其間質(zhì)液導(dǎo)率，有利于藥物進(jìn)入實(shí)體腫瘤以及在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴(kuò)散。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，抗癌藥物和間質(zhì)水解劑制成的抗癌藥物緩釋劑(主要為緩釋注射劑和緩釋植入劑)不僅能夠極大地提高腫瘤局部的藥物濃度、降低藥物在循環(huán)系統(tǒng)中的藥物濃度、降低藥物對(duì)正常組織的毒性，還能夠極大方便藥物注射、減少手術(shù)操作的并發(fā)癥、降低病人的費(fèi)用。抗癌藥物除能抑制腫瘤生長(zhǎng)外，還能增加腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。蛋白水解酶可有效降解腫瘤間質(zhì)中的血管及結(jié)締組織中的纖維蛋白及膠原蛋白等成分，有效降低腫瘤內(nèi)的張力、間質(zhì)壓力、間質(zhì)粘性，進(jìn)而提高其間質(zhì)液導(dǎo)率，有利于藥物進(jìn)入實(shí)體腫瘤以及在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴(kuò)散。以上意外發(fā)現(xiàn)構(gòu)成本發(fā)明的主要內(nèi)容。
本發(fā)明的復(fù)方藥物組合物可制成任意制劑形式，如，但不限于，膠囊、緩釋劑、顆粒劑、丸劑、片劑、散劑、注射劑、軟膏、貼劑、植入劑、緩釋劑植入劑、緩釋劑注射劑等。其中以緩釋劑為優(yōu)選，以緩釋劑植入劑和緩釋劑注射劑為最優(yōu)選。
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的含間質(zhì)水解劑和抗癌藥物的緩釋注射劑。
本發(fā)明間質(zhì)水解劑緩釋注射劑，由緩釋微球和溶媒組成。具體而言，該抗癌緩釋注射劑由以下成分組成(A)緩釋微球，包括抗癌有效成分0.5-60％緩釋輔料40-99％助懸劑 0.0-30％以上為重量百分比和(B)溶媒，為普通溶媒或含助懸劑的特殊溶媒。
溶媒，分為普通溶媒和特殊溶媒。
抗癌有效成分為間質(zhì)水解劑與拓?fù)涿敢种苿┖?或四嗪類藥物的組合，間質(zhì)水解劑選自血管抑制劑和/或蛋白水解酶。
間質(zhì)水解劑制成的藥物主要經(jīng)口服或靜脈注射等常規(guī)途徑給藥，本發(fā)明的給藥方式為局部緩釋給藥，在顯著增強(qiáng)藥物的治療效果的同時(shí)明顯降低其全身的毒性作用。就具有抗癌活性的間質(zhì)水解劑而言，并非所有緩釋輔料均可達(dá)到有效釋放的緩釋效果。藥用輔料有數(shù)百種以上，具有緩釋作用的藥用輔料，特別是能將本發(fā)明中所選的間質(zhì)水解劑在人體或動(dòng)物體內(nèi)于一定的時(shí)間內(nèi)緩慢釋放的藥用輔料必須經(jīng)過(guò)大量創(chuàng)造性的實(shí)驗(yàn)才能獲得，特定的緩釋輔料與可被緩釋藥物的組合的選擇需要經(jīng)過(guò)大量的創(chuàng)造性勞動(dòng)才能確定。相關(guān)數(shù)據(jù)，特別是動(dòng)物體內(nèi)釋放特性的數(shù)據(jù)需要經(jīng)過(guò)體內(nèi)外大量創(chuàng)造性的實(shí)驗(yàn)才能獲得，并非經(jīng)過(guò)有限的實(shí)驗(yàn)就能確定，具有非顯而易見(jiàn)性。
以上意外發(fā)現(xiàn)構(gòu)成本發(fā)明的主要內(nèi)容。
間質(zhì)水解劑為血管抑制劑和/或蛋白水解酶，血管抑制劑除具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用外，可有效地抑制或破壞腫瘤的血管并能抑制腫瘤的新生血管的形成，進(jìn)而不僅使腫瘤細(xì)胞失去生長(zhǎng)所需的支架及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來(lái)源，與蛋白水解酶合用或單獨(dú)應(yīng)用還可明顯促進(jìn)化療藥物進(jìn)入腫瘤及在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴(kuò)散；蛋白水解酶可有效降解腫瘤間質(zhì)中的血管及結(jié)締組織中的纖維蛋白及膠原蛋白等成分，有效降低腫瘤內(nèi)的張力、間質(zhì)壓力、間質(zhì)粘性，進(jìn)而提高其間質(zhì)液導(dǎo)率，有利于藥物進(jìn)入實(shí)體腫瘤以及在腫瘤周圍及腫瘤組織內(nèi)的滲透和擴(kuò)散。
蛋白水解酶選自彈性蛋白酶、胰彈性蛋白酶、金屬蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、木瓜酶、木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、纖溶酶、舍雷硫代肽酶、胰酶、組織蛋白酶-G、半胱氨酸蛋白酶、硫酯酶、酰胺轉(zhuǎn)移酶、轉(zhuǎn)酯酶活性、纖溶酶原激活劑、膠原酶、多形核白細(xì)胞絲氨酸蛋白酶、核酸酶、脂肪酶、酯酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、神經(jīng)氨酸酶、淀粉酶、松弛肽、干擾素(γ-干擾素)和纖維蛋白酶中的一種或其組合。
其中以彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素(γ-干擾素)和纖維蛋白酶為優(yōu)選。
血管抑制劑選自吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬、馬立馬司他、SU5416、SU6668、煙曲霉素、TNP-470中的一種或其組合。
以上新生新生血管抑制劑還包括它們的鹽，如，但不限于，硫酸鹽、磷酸鹽、鹽酸鹽、乳糖酸鹽、醋酸鹽、天冬酸鹽、硝酸鹽、枸櫞酸鹽、嘌呤或嘧啶鹽、琥珀酸鹽及馬來(lái)酸鹽等上述新生血管抑制劑在緩釋劑中所占的比例因具體情況而定，可為0.1％-50％，以1％-40％為佳，5％-30％為最佳。
拓?fù)涿敢种苿┻x自下列之一或組合喜樹(shù)鹼(camptothecin，CPT)、喜樹(shù)鹼的衍生物、勒托替康(Lurtotecan)、拓?fù)涮婵?10-hydroxy-9-dimethylaminomethyl-(S)-camptothecin，topotecan)、依力替康(irinotecan，IRT)、9-硝基喜樹(shù)鹼(9-nitrocamptothecin，9NC)、7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)鹼(7-ethyl-10-hydroxy-camptothecin，SN-38)、7-乙基-10-[4-(1-哌啶子基)-1-哌啶子基]羰基喜樹(shù)鹼(7-ethyl-10-[4-(1-pyperidino)-1-piperidino]carbonyloxycamptothecin，CPT-11)、10-羥基-喜樹(shù)鹼(10-Hydroxycamptothecin，HCPT)、同型喜樹(shù)鹼(Homocamptothecins)、亞甲二氧基喜樹(shù)鹼(10，11-methylenedioxy，MD-CPT)、(RS)-亞甲二氧基喜樹(shù)鹼(10，11-MD-20(RS)-CPT)、(S)-亞甲二氧基喜樹(shù)鹼甘氨酸酯(10，11-MD-20(S)-cpT-glycinate ester(Gly).HCl)、9-氨基-(S)-亞甲二氧基喜樹(shù)鹼甘氨酸酯(9-amino-10，11-MD-20(S)-CPT-Gly)、N-[2-(二甲基氨基)乙基]呀啶-4-羧酰胺(N-[2-(dimethylamino)ethyl]acridine-4-carboxamide，DACA)及其5或7位取代的衍生物、鬼臼霉素(podophyllotoxin)、依托泊甙(Etoposide，epipodophyllotoxins，鬼臼乙叉甙、足葉乙甙、VP-16)、替尼泊甙(Teniposide、鬼臼噻吩甙、VM-26)、鬼臼酸、鬼臼毒素、三羥基異黃酮(Genistein)、14-羥柔紅霉素、氨柔比星(Amrubicin)、艾柔比星(4’-(acridinylamino)methansulfon-m-anisidide(amsacrine，m-AMSA))、4-去甲氧道諾紅菌素(4-demeth oxydaunorubicin)、地托比星、7-O-甲基諾加-4’-表阿霉素(7-o-methylnogallol-4’-epiadriamycin)、依索比星(Esorubicin)、卡柔比星、伊達(dá)比星(idarubicin，IDA)、羅多比星、流柔比星(Leurubicin)、美多比星、奈莫柔比星(Nemorubicin)、多柔比星、戊柔比星(N-三氟毒素-14-戊酸鹽，N-trifluoroacetyladriamycin-14-valerate，AD 32，valrubicin)、2-[4-(7-氯-2-喹喔啉基氧苯氧基]-丙酸((2-[4-(7-chloro-2-quinoxalinyloxyphenoxy]-propionic acid，XK469)、佐柔比星(Zorubicin)、N-(2-氯乙烷)-N-亞硝基脲基柔紅霉素(N-(2-Chloroethyl)-N-nitrosoureidodaunorubicin，AD 312)、吡唑[1，5-a]吲哚衍生物，如，但不限于，GS-2，-3，-4，GS-5；二氧代哌嗪衍生物，如，但不限于，(+)-1，2-雙(3，5-二氧代哌嗪基)丙烷((+)-1，2-bis(3，5-dioxopiperazinyl-1-yl)propane，ICRF-187)、間-2，3-雙(3，5-二氧代哌嗪-1-基)丁烷(meso-2，3-bis(3，5-dioxopiperazine-1-yl)butane，ICRF-193)、雙二氧代哌嗪(bisdioxopiperazine)；蘇拉明(Suramin)，脫氧鳥(niǎo)苷(Deoxyguanosine)，石膽酸(lithocholic acid，LCA)或疊氮化鈉(sodium azide)。
在上述拓?fù)涿敢种苿┲?，以喜?shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙、替尼泊甙?4-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星或佐柔比星為優(yōu)選。
拓?fù)涿敢种苿┰诮M合物中所占的比例因具體情況而定，一般而言，可從0.01％-50％，以1％-40％為佳，以5％-30％為最佳。均為重量百分比。
四嗪類化合物選自下列之一或組合咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、甲基芐肼(procarbazine，PCB)、米托唑胺(mitozolomide，MTZ)、替莫唑胺(Temozolomide orNSC 362856))、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺[3-N-methyl]temozolomide)。其中以甲基芐肼、米托唑胺、4-羧基替莫唑胺或替莫唑胺為優(yōu)選。以上四嗪類化合物還包括它們的鹽，如，但不限于，硫酸鹽、磷酸鹽、鹽酸鹽、乳糖酸鹽、醋酸鹽、天冬酸鹽、硝酸鹽、構(gòu)櫞酸鹽、嘌呤或嘧啶鹽、琥珀酸鹽及馬來(lái)酸鹽等。
四嗪類化合物在緩釋劑中所占的比例因具體情況而定，一般而言，可從0.1％-50％，以1％-40％為佳，以5％-30％為最佳。均為重量百分比。
緩釋輔料粘度范圍IV(dl/g)為0.1～0.8，選自外消旋聚乳酸(D，L-PLA)、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物(D，L-PLGA)、單甲基聚乙二醇/聚乳酸(MPEG-PLA)、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物(MPEG-PLGA)、聚乙二醇/聚乳酸(PLA-PEG-PLA)、聚乙二醇/聚乳酸共聚物(PLGA-PEG-PLGA)、端羧基聚乳酸(PLA-COOH)、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA-COOH)、聚苯丙生、雙脂肪酸與癸二酸共聚物(PFAD-SA)、聚(芥酸二聚體-癸二酸)[P(EAD-SA)]、聚(富馬酸-癸二酸)[P(FA-SA)]、乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物(PLGA)、聚對(duì)二氧環(huán)己酮(PDO)、聚三亞甲基碳酸酯(PTMC)、木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠、蛋白膠之一或其組合；助懸劑選自羧甲基纖維素鈉、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物質(zhì)、土溫20、土溫40和土溫80之一或其組合。
當(dāng)藥物緩釋微球中的抗癌有效成分僅為間質(zhì)水解劑或抗癌藥物時(shí)，抗癌緩釋注射劑主要用于增加其它途徑應(yīng)用的間質(zhì)水解劑或抗癌藥物的作用效果，或用于對(duì)放療或其它療法的增效。當(dāng)藥物緩釋微球中的抗癌藥物僅為間質(zhì)水解劑或抗癌藥物時(shí)，抗癌緩釋注射劑的應(yīng)用及增效方式為(1)含間質(zhì)水解劑的緩釋注射劑局部注射，而抗癌藥物經(jīng)其他途徑應(yīng)用；(2)局部注射含抗癌藥物的緩釋注射劑，其他途徑應(yīng)用間質(zhì)水解劑；(3)局部注射含間質(zhì)水解劑的緩釋注射劑與含抗癌藥物的緩釋注射劑；或(4)局部注射含間質(zhì)水解劑和抗癌藥物的緩釋注射劑。
局部應(yīng)用的抗癌緩釋注射劑還用于對(duì)放療或其它療法的增效。其他途徑指，但，不限于，動(dòng)脈、靜脈、腹腔、皮下、腔內(nèi)給藥。
抗癌有效成分間質(zhì)水解劑和/或抗癌藥物在藥物緩釋微球中的重量百分比為0.1％-60％，以1％-40％為佳，2％-30％為最佳。間質(zhì)水解劑與抗癌藥物的重量比為1-19∶1到1∶1-19，以1-9∶1到1∶1-9為優(yōu)選，以1-5∶1到1∶1-5為最優(yōu)選。
本發(fā)明抗癌藥物組合物中抗癌有效成分為一種或數(shù)種間質(zhì)水解劑和/或一種或數(shù)種抗癌藥的組合，抗癌有效成分優(yōu)選組合如下(1)1-40％的彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他與1-40％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵怠⒁懒μ婵?、依托泊甙、替尼泊甙?4-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星或佐柔比星的組合；或(2)1-40％的彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他與1-40％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺的組合。
本發(fā)明的緩釋輔料是可經(jīng)酶、酸堿或組織液水解或降解的，包括下列之一或其組合(1)生物相容性多聚物，包括生物可降解的或生物不可降解的多聚物及其混合物或共聚物；(2)水溶性低分子化合物；或/和(3)用于實(shí)現(xiàn)針劑和緩釋劑等藥物劑型的合適的添加劑及賦型劑。
緩釋輔料可為各種水溶性或非水溶性高分子多聚物，緩釋輔料選自外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、聚苯丙生、雙脂肪酸與癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚體-癸二酸)、聚(富馬酸-癸二酸)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物、木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠和蛋白膠之一或其組合。
本發(fā)明緩釋微球中緩釋輔料及其重量百分比最優(yōu)選如下(1)55-90％的PLA；
(2)50-90％的PLGA；(3)50-85％的聚苯丙生；(4)55-90％的雙脂肪酸與癸二酸共聚物；(5)55-90％的EVAc；(6)40-95％的木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠或白蛋膠；或(7)40-95％的外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
在各種高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物為首選，混合物和共聚物可選自，但不限于，PLA、PLGA、乙醇酸和羥基羧酸的混合物、葵二酸與芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羥基羧酸的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和羥基羧酸共聚時(shí)的含量分別為重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是聚苯丙生[聚(1，3-二(對(duì)羧基苯氧基)丙烷-癸二酸)(p(CPP-SA))、雙脂肪酸-癸二酸共聚物(PFAD-SA)]、聚(芥酸二聚體-癸二酸)[P(EAD-SA)]和聚(富馬酸-癸二酸)[P(FA-SA)]等。對(duì)羧苯氧基丙烷(p-CPP)與癸二酸共聚時(shí)的含量分別為重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
聚乳酸的分子量峰值可為，但不限于，5000-100,000，但以20,000-60,000為優(yōu)選，以5,000-30,000為最優(yōu)選；聚乙醇酸的分子量可為，但不限于，5000-100,000，但以5，000-50,000為優(yōu)選，以10,000-30,000為最優(yōu)選；以上聚羥基酸可單選或多選。當(dāng)單選時(shí)，以聚乳酸(PLA)或羥基羧酸和乙醇酸的共聚物(PLGA)為優(yōu)選，共聚物的分子量可為，但不限于，5000-100,000，但以20,000-60,000為優(yōu)選，以30,000-50,000為最優(yōu)選；當(dāng)多選時(shí)，以高分子多聚物或不同高分子多聚物組成的復(fù)合多聚物或共聚物為優(yōu)選，以含不同分子量聚乳酸或癸二酸的復(fù)合多聚物或共聚物為最優(yōu)選，如，但不限于，分子量為1000到30000的聚乳酸與分子量為20000到50000的聚乳酸混合、分子量為10000到30000的聚乳酸與分子量為30000到80000的PLGA混合、分子量為20000到30000的聚乳酸與癸二酸混合、分子量為30000到80000的PLGA與癸二酸混合。所用聚乳酸以左旋聚乳酸(L-PLA)為優(yōu)選。左旋聚乳酸(L-PLA)粘度范圍IV(dl/g)為0.2～0.8，玻璃化轉(zhuǎn)變溫度范圍為55～65℃，熔點(diǎn)175～185℃。
除上述緩釋輔料外，還可選用其他物質(zhì)見(jiàn)美國(guó)專利(專利號(hào)4757128；4857311；4888176；4789724)及《藥用輔料大全》(第123頁(yè)，四川科學(xué)技術(shù)出版社1993年出版，羅明生和高天惠主編)中已有詳細(xì)描述。另外，中國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)?6115937.5；91109723.6；9710703.3；01803562.0)及美國(guó)發(fā)明專利(專利號(hào)5,651,986)也列舉了某些藥用輔料，包括充填劑、增溶劑、吸收促進(jìn)劑、成膜劑、膠凝劑、制(或致)孔劑、賦型劑或阻滯劑等為調(diào)節(jié)藥物釋放速度或改變本發(fā)明的其它特性，可以改變聚合物的單體成分或分子量、添加或調(diào)節(jié)藥用輔料的組成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不限于，各種糖或鹽等。其中糖可為，但不限于，木糖醇、低聚糖、(硫酸)軟骨素及甲殼素等，其中鹽可為，但不限于，鉀鹽和鈉鹽等；也可添加其它藥用輔料，如但不限于，充填劑、增溶劑、吸收促進(jìn)劑、成膜劑、膠凝劑、制(或致)孔劑、賦型劑或阻滯劑等緩釋注射劑中，藥物緩釋系統(tǒng)可制成微球、亞微球、微乳、納米球、顆粒或球形小丸，然后與注射溶媒混合后制成注射劑使用。在各種緩釋注射劑中以混懸型緩釋注射劑為優(yōu)選，混懸型緩釋注射劑是將含抗癌成分的藥物緩釋系統(tǒng)懸浮于注射液中所得的制劑，所用的緩釋輔料為上述緩釋輔料中的一種或其組合，所用溶媒為普通溶媒或含助懸劑的特殊溶媒。普通溶媒為，但不限于，蒸餾水、注射用水、生理沖液、無(wú)水乙醇或各種鹽配制的緩沖液。助懸劑的目的在于有效懸浮含藥微球，從而利于注射之用。為方便注射，助懸劑的黏度為100cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))，優(yōu)選1000cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))，最優(yōu)選1500cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))。助懸劑選自羧甲基纖維素鈉、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物質(zhì)、土溫20、土溫40和土溫80之一或其組合。
助懸劑在普通溶媒中的含量因其的特性而定，可為0.1-30％因具體情況而定。優(yōu)選助懸劑的組成為A)0.5-5％羧甲基纖維素鈉+0.1-0.5％土溫80；或B)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土溫80；或C)0.5-5％羧甲基纖維素鈉+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土溫80。
溶媒的制備則取決于溶媒的種類，普通溶媒有市售，也可以自制，如蒸餾水、注射用水、生理沖液、無(wú)水乙醇或各種鹽配制的緩沖液，但必須嚴(yán)格按照有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。特殊溶媒需考慮到助懸劑的種類及其組成、溶媒所懸浮的藥物、緩釋微球(或微囊)的組成、性質(zhì)及其需要量及注射劑的制備方法，如將羧甲基纖維素鈉(1.5％)+甘露醇和/或山梨醇(15％)和/或吐溫80(0.1％)溶于生理鹽水中得相應(yīng)的溶媒，黏度在10cp-650cp(20℃-30℃時(shí))。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)影響藥物和/或緩釋微球懸浮和/或注射的關(guān)鍵因素是溶媒的黏度，黏度越大，懸浮效果越好，可注射性越強(qiáng)。這種意外發(fā)現(xiàn)構(gòu)成了本發(fā)明的主要指數(shù)特征之一。溶媒的黏度取決于助懸劑的黏度，助懸劑的黏度為100cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))，優(yōu)選1000cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))，最優(yōu)選1500cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))。按照此條件所制得的溶媒的黏度為10cp-650cp(20℃-30℃時(shí))，優(yōu)選20cp-650cp(20℃-30℃時(shí))，最優(yōu)選60cp-650cp(20℃-30℃時(shí))。
注射劑的制備有多種方法，一種是將助懸劑為“0”的緩釋微粒(A)直接混于特殊溶媒中，得到相應(yīng)的緩釋微粒注射劑；另一種是將助懸劑不為“0”的緩釋微粒(A)混于特殊溶媒或普通溶媒中，得到相應(yīng)的緩釋微粒注射劑；再一種是將緩釋微粒(A)混于普通溶媒中，然后加入助懸劑混勻，得到相應(yīng)的緩釋微粒注射劑。除外，還可先將緩釋微粒(A)混于特殊溶媒中制得相應(yīng)的混懸液，然后用真空干燥等辦法去除混懸液中的水分，之后再用特殊溶媒或普通溶媒混懸，得到相應(yīng)的緩釋微粒注射劑。以上方法只是用于說(shuō)明而非限制本發(fā)明。值得注意的是，懸浮藥物或緩釋微球(或微囊)在注射劑中的濃度因具體需要而定，可為，但不限于，10-400mg/ml，但以30-300mg/ml為優(yōu)選，以50-200mg/ml最優(yōu)選。注射劑的黏度為50cp-1000cp(20℃-30℃時(shí))，優(yōu)選100cp-1000cp(20℃-30℃時(shí))，最優(yōu)選200cp-650cp(20℃-30℃時(shí))。此黏度適用于18-22號(hào)注射針頭和特制的內(nèi)徑更大的(至3毫米)注射針頭。
緩釋注射劑的制備方法是任意的，可用若干種方法制備如，但不限于，混合法、熔融法、溶解法、噴霧干燥法制備微球、溶解法結(jié)合冷凍(干燥)粉碎法制成微粉、脂質(zhì)體包藥法及乳化法等。其中以溶解法(即溶劑揮發(fā)法)、干燥法、噴霧干燥法和乳化法為優(yōu)選。微球則可用于制備上述各種緩釋注射劑，其方法是任意的。所用微球的粒徑范圍可在5-400um之間，以10-300um之間為優(yōu)選，以20-200um之間為最優(yōu)選。
微球還可用于制備其他緩釋注射劑，如凝膠注射劑、嵌段共聚物膠束注射劑。其中，嵌段共聚物膠束由疏水-親水嵌段共聚物在水溶液中形成，具有球形內(nèi)核-外殼結(jié)構(gòu)，疏水嵌段形成內(nèi)核，親水嵌段形成外殼。載藥膠束注射進(jìn)入體內(nèi)達(dá)到控制藥物釋放或靶向治療的目的。所用藥物載體為上述任意一種或其組合。其中優(yōu)選分子量為1000-15000的聚乙二醇(PEG)作為膠束共聚物的親水嵌段，優(yōu)選生物降解聚合物(如PLA、聚丙交酯、聚己內(nèi)酯及其共聚物(分子量1500-25000))作為膠束共聚物的疏水嵌段。嵌段共聚物膠束的粒徑范圍可在10-300um之間，以20-200um之間的為優(yōu)選。凝膠注射劑系將生物降解聚合物(如PLA、PLGA或DL-LA和ε-己內(nèi)酯共聚物)溶于某些兩親性溶媒，再加入藥物與之混溶(或混懸)后形成流動(dòng)性較好的凝膠，可經(jīng)瘤周或瘤內(nèi)注射。一旦注入，兩親性溶媒很快擴(kuò)散至體液，而體液中的水分則滲入凝膠，使聚合物固化，緩慢釋放藥物。
緩釋微球還可用于制備緩釋植入劑，所用的藥用輔料可為上述藥用輔料中的任何一種或多種物質(zhì)，但以水溶性高分子聚合物為主選，在各種高分子聚合物中，以聚乳酸、葵二酸、含聚乳酸或葵二酸的高分子多聚物的混合物或共聚物為首選，混合物和共聚物可選自，但不限于，PLA、PLGA、PLA與PLGA的混合物、葵二酸與芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物、雙脂肪酸與癸二酸共聚物(PFAD-SA)、聚(芥酸二聚體-癸二酸)[P(EAD-SA)]、聚(富馬酸-癸二酸)[P(FA-SA)]。聚乳酸(PLA)與聚乙醇酸的的共混比例是10/90-90/10(重量)，最好是25/75-75/25(重量)。共混的方法是任意的。乙醇酸和乳酸共聚時(shí)的含量分別為重量百分比10-90％和90-10％。芳香聚酐的代表物是對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)，對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)與葵二酸共聚時(shí)的含量分別為重量百分比10-60％和20-90％，共混重量比是10-40∶50-90，最好是重量比15-30∶65-85。
本發(fā)明抗癌藥物緩釋劑的又一種形式是抗癌藥物緩釋劑為緩釋植入劑?？拱┲踩雱┑挠行С煞挚删鶆虻匕b于整個(gè)藥用輔料中，也可包裝于載體支持物中心或其表面；可通過(guò)直接擴(kuò)散和/或經(jīng)多聚物降解的方式將有效成分釋放。
緩釋植入劑的特點(diǎn)在于所用的緩釋輔料除高分子聚合物外，還含有上述任意一種或多種其它輔料。添加的藥用輔料統(tǒng)稱為添加劑。添加劑可根據(jù)其功能分為充填劑、致孔劑、賦型劑、分散劑、等滲劑、保存劑、阻滯劑、增溶劑、吸收促進(jìn)劑、成膜劑、膠凝劑等。
緩釋植入劑的主要成份可制成多種劑型。如，但不限于，膠囊、緩釋劑、植入劑、緩釋劑植入劑等；呈多種形狀，如，但不限于，顆粒劑、丸劑、片劑、散劑、球形、塊狀、針狀、棒狀、柱狀及膜狀。在各種劑型中，以體內(nèi)緩慢釋放植入劑為優(yōu)選。可為0.1-5mm(粗)×1-10mm(長(zhǎng))的棒狀，也可為片狀等其它形狀。
緩釋植入劑的最佳劑型為生物相容性、可降解吸收的緩釋劑植入，可因不同臨床需要而制成各種形狀及各種劑型。其主要成份的包裝方法和步驟在美國(guó)專利中(US5651986)已有詳細(xì)描述，包括若干種制備緩釋制劑的方法如，但不限于，(i)把載體支持物粉末與藥物混合然后壓制成植入劑，即所謂的混合法；(ii)把載體支持物熔化，與待包裝的藥物相混合，然后固體冷卻，即所謂的熔融法；(iii)把載體支持物溶解于溶劑中，把待包裝的藥物溶解或分散于聚合物溶液中，然后蒸發(fā)溶劑，干燥，即所謂的溶解法；(iv)噴霧干燥法；及(v)冷凍干燥法等。
緩釋植入劑的抗癌有效成分優(yōu)選如下，均為重量百分比(1)1-40％的彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他與1-40％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵怠⒁懒μ婵?、依托泊甙、替尼泊甙?4-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星或佐柔比星的組合；或(2)1-40％的彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他與1-40％的甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺的組合。
緩釋微球還可用于制備緩釋植入劑，所用的緩釋輔料可為上述藥用輔料中的任何一種或多種物質(zhì)，在各種高分子聚合物中以水溶性高分子聚合物為主選。
本發(fā)明緩釋植入劑中緩釋輔料及其重量百分比最優(yōu)選如下(1)55-90％的PLA；(2)50-90％的PLGA；(3)50-85％的聚苯丙生；(4)55-90％的雙脂肪酸與癸二酸共聚物；(5)55-90％的EVAc；(6)40-95％的木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠或白蛋白膠；或(7)40-95％的外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
給藥途徑取決于多種因素，為于原發(fā)或轉(zhuǎn)移腫瘤所在部位獲得有效濃度，藥物可經(jīng)多種途徑給予，如皮下、腔內(nèi)(如腹腔、胸腔及椎管內(nèi))、瘤內(nèi)、瘤周注射或放置、選擇性動(dòng)脈注射、淋巴結(jié)內(nèi)及骨髓內(nèi)注射。以選擇性動(dòng)脈注射、腔內(nèi)、瘤內(nèi)、瘤周注射或放置為優(yōu)選。
緩釋植入劑的應(yīng)用及增效方式同抗癌緩釋注射劑，即局部放置的間質(zhì)水解劑與其它途徑給藥的抗癌藥物的聯(lián)合、局部放置的抗癌藥物與其它途徑給藥的間質(zhì)水解劑的聯(lián)合、局部放置的抗癌藥物與局部放置的間質(zhì)水解劑的聯(lián)合。其中局部應(yīng)用的抗癌藥物與間質(zhì)水解劑可單獨(dú)或聯(lián)合生產(chǎn)、包裝、銷售、使用。包裝指藥物對(duì)輔料而言的載藥過(guò)程以及含藥緩釋劑對(duì)運(yùn)輸和/或儲(chǔ)存而言的內(nèi)外包裝。
本發(fā)明可以用于制備治療人及動(dòng)物的各種腫瘤的藥物制劑，主要為緩釋注射劑或緩釋植入劑，所指腫瘤包括起源于大腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟、肝、膽囊、頭頸部、口腔、甲狀腺、皮膚、黏膜、腺體、血管、骨組織、淋巴結(jié)、肺臟、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宮、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮頸、前列腺、膀胱、結(jié)腸、直腸的原發(fā)或轉(zhuǎn)移的癌或肉瘤或癌肉瘤。
本發(fā)明所制的緩釋注射劑或緩釋植入劑中還可加入其它藥用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼藥、抗凝藥、止血藥等。
通過(guò)如下試驗(yàn)和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明抗實(shí)體腫瘤組合物的技術(shù)作進(jìn)一步的描述試驗(yàn)一、間質(zhì)水解劑(膠原酶)及抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)結(jié)腸癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表1)。第一組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑，第3到6組分別為喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、勒托替康、拓?fù)涮婵?。?到10組分別為膠原酶與喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、勒托替康、拓?fù)涮婵档穆?lián)合。除膠原酶經(jīng)瘤內(nèi)放置外，喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、勒托替康、拓?fù)涮婵稻鶠楦骨唤o藥。除膠原酶為2.5mg/kg外均為15mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表1)。
表1
注喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、勒托替康、拓?fù)涮婵稻鶠橥負(fù)涿敢种苿＝Y(jié)果表明，與對(duì)照組相比，間質(zhì)水解劑(第2組)及拓?fù)涿敢种苿?第3到6組)單獨(dú)應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)，特別是局部給藥。而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗(yàn)二、間質(zhì)水解劑(胰蛋白酶)及抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
按照試驗(yàn)一所述之方法測(cè)定間質(zhì)水解劑及抗癌藥物的對(duì)胰腺癌體內(nèi)抑瘤作用，結(jié)果表明，胰蛋白酶和松弛肽等間質(zhì)水解劑能夠明顯增強(qiáng)依力替康、依托泊甙、替尼泊甙、14-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星的抑瘤作用(P＜0.05)。二者單獨(dú)應(yīng)用特別是局部給藥對(duì)胰腺癌均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)，而聯(lián)合應(yīng)用具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗(yàn)三、局部應(yīng)用抗癌藥物和間質(zhì)水解劑(溶菌酶)的抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)乳腺癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表2)。第一組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑，第3到6組分別為。第7到10組分別為間質(zhì)水解劑與依力替康、依托泊甙、替尼泊甙、氨柔比星的聯(lián)合。所有藥物經(jīng)均為瘤內(nèi)放置，除溶菌酶為5mg/kg外均為15mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表2)。
表2
注依力替康、依托泊甙、替尼泊甙、氨柔比星均為拓?fù)涿敢种苿?。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，間質(zhì)水解劑(第2組)及拓?fù)涿敢种苿?第3到6組)單獨(dú)應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗(yàn)四、間質(zhì)水解劑(透明質(zhì)酸酶)及拓?fù)涿敢种苿┑捏w內(nèi)抑瘤作用。
按照試驗(yàn)三的方法檢測(cè)了透明質(zhì)酸酶及拓?fù)涿敢种苿┑捏w內(nèi)抑瘤作用。結(jié)果表明透明質(zhì)酸酶及選自艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星的抗癌藥物單獨(dú)應(yīng)用對(duì)結(jié)腸癌均有明顯抑瘤作用(P＜0.05)。而聯(lián)合應(yīng)用具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗(yàn)五、間質(zhì)水解劑(纖溶酶)及抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)卵巢癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表3)。第1組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑；第3到6組分別為依托泊甙、羅多比星、流柔比星、佐柔比星。第7到10組分別為間質(zhì)水解劑與不同抗癌藥物的聯(lián)合。除間質(zhì)水解劑經(jīng)瘤內(nèi)放置外，均為腹腔給藥。除間質(zhì)水解劑為10mg/kg外均為5mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表3)。
表3
注依托泊甙、羅多比星、流柔比星、佐柔比星均為拓?fù)涿敢种苿?br> 試驗(yàn)六、間質(zhì)水解劑(血管內(nèi)皮抑素)及抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)肺癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表4)。第1組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑；第3到6組分別為拓?fù)涿敢种苿?。?到10組分別為間質(zhì)水解劑與不同抗癌藥物的聯(lián)合。除間質(zhì)水解劑經(jīng)瘤內(nèi)放置外，拓?fù)涮婵?、依力替康、米托唑胺、替莫唑胺均為腹腔給藥。除間質(zhì)水解劑為4mg/kg外均為16mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表4)。
表4
注拓?fù)涮婵?、依力替康、米托唑胺、替莫唑胺均為抗癌藥物?br> 試驗(yàn)七、間質(zhì)水解劑(吉非替尼)及抗癌藥物的體內(nèi)抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)胃癌腫瘤細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表5)。第一組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑，第3到6組分別為甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺。第7到10組分別為間質(zhì)水解劑與甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺的聯(lián)合。除間質(zhì)水解劑經(jīng)瘤內(nèi)放置外，甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺均為腹腔給藥。除間質(zhì)水解劑為15mg/kg外均為2.5mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表5)。
表5
注甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺為抗癌藥物。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，間質(zhì)水解劑(第2組)及抗癌藥物(第3到6組)單獨(dú)應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)，特別是局部給藥。而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗(yàn)八、局部應(yīng)用抗癌藥物和間質(zhì)水解劑(厄洛替尼)的抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)肝癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表6)。第一組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑，第3到6組分別為米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺。第7到10組分別為間質(zhì)水解劑與米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺的聯(lián)合。所有藥物經(jīng)均為瘤內(nèi)放置，除間質(zhì)水解劑為2.5mg/kg外均，抗癌藥物均為17.5mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表6)。
表6
注米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺均為抗癌藥物。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，間質(zhì)水解劑(第2組)及抗癌藥物(第3到6組)單獨(dú)應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
類似增效作用還見(jiàn)于其它間質(zhì)水解劑與其它抗癌藥物的聯(lián)合，如米托唑胺或替莫唑胺與吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素或血管內(nèi)皮抑素的組合，以及喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙或替尼泊甙與甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他的組合。所試腫瘤細(xì)胞包括腦腫瘤(CNS-1、C6、9L)、胃腺上皮癌(SA)、骨腫瘤(BC)、乳腺癌(BA)、甲狀腺乳頭狀腺癌(PAT)、肝癌、胰腺癌、腎癌及食管癌等。
試驗(yàn)九、不同分子量聚乳酸制成的間質(zhì)水解劑緩釋植入劑的體內(nèi)釋放比較以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，分組(3只/組)并于皮下給予含不同分子量(MW)的聚乳酸(PLA)承載的等量間質(zhì)水解劑緩釋植入劑。然后分別于1、3、7、14、21、28和35天測(cè)藥物于植入劑內(nèi)的剩余量，進(jìn)而得出其體內(nèi)釋放速度(％)。結(jié)果表明，分子量為20000的釋放為1天(8％)、3(28％)、7(56％)、14(82％)、21(90)、28(94)和35(98％)。比較不同分子量聚乳酸制成的間質(zhì)水解劑(膠原酶)緩釋植入劑的體內(nèi)釋放發(fā)現(xiàn)，隨分子量增加而變慢，以第7天為例，與全身給藥組相比，腫瘤抑制率隨聚乳酸分子量增加而提高，依次為68％(MW5000)、66％(MW15000)、54％(MW25000)、50％(MW40000)和48(MW60000)。
試驗(yàn)十、局部應(yīng)用抗癌藥物和間質(zhì)水解劑(血管內(nèi)皮抑素)的抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)食道癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表7)。第一組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為間質(zhì)水解劑，第3到6組分別為喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、拓?fù)涮婵?、依力替康。?到10組分別為間質(zhì)水解劑與喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、拓?fù)涮婵怠⒁懒μ婵档穆?lián)合。所有藥物經(jīng)均為瘤內(nèi)放置，除間質(zhì)水解劑為2.5mg/kg外均，抗癌藥物均為17.5mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表7)。
表7
注喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、拓?fù)涮婵怠⒁懒μ婵稻鶠榭拱┧幬?。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，間質(zhì)水解劑(第2組)及抗癌藥物(第3到6組)單獨(dú)應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
試驗(yàn)十一、局部應(yīng)用抗癌藥物和伏他拉尼的抑瘤作用。
以大白鼠為試驗(yàn)對(duì)象，將2×105個(gè)食道癌細(xì)胞皮下注射于其季肋部，待腫瘤生長(zhǎng)14天后將其分為以下10組(見(jiàn)表8)。第一組為對(duì)照，第2到10組為治療組，其中，第2組為伏他拉尼，第3到6組分別為。第7到10組分別為間質(zhì)水解劑(伏他拉尼)與米托唑胺、替莫唑胺、喜樹(shù)鹼、拓?fù)涮婵档穆?lián)合。所有藥物經(jīng)均為瘤內(nèi)放置，除間質(zhì)水解劑為5mg/kg外均，抗癌藥物均為15mg/kg。治療后第30天測(cè)量腫瘤體積大小，比較治療效果(見(jiàn)表8)。
表8
注米托唑胺、替莫唑胺、喜樹(shù)鹼、拓?fù)涮婵稻鶠榭拱┧幬铩＝Y(jié)果表明，與對(duì)照組相比，間質(zhì)水解劑(第2組)及抗癌藥物(第3到6組)單獨(dú)應(yīng)用均有一定的抑瘤作用(P＜0.05)。然而聯(lián)合應(yīng)用(第7到10組)具有明顯的增效作用(P＜0.001)。
特別注意的是，本發(fā)明的緩釋劑，特別是緩釋注射劑操作簡(jiǎn)單方便、重復(fù)性好。不僅療效好，毒副作用小。
不同的藥物包裝與不同的生物降解高分子的釋藥特性不同。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，最適宜于本發(fā)明藥物緩釋的緩釋輔料為外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、聚苯丙生、雙脂肪酸與癸二酸共聚物、聚(芥酸二聚體-癸二酸)、聚(富馬酸-癸二酸)、乙烯乙酸乙烯酯共聚物、聚乳酸、聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物、木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠、白蛋白膠之一或其組合；最適宜的助懸劑為甲基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物質(zhì)、土溫20、土溫40、土溫80之一或其組合。
總之，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明中的間質(zhì)水解劑對(duì)所列拓?fù)涿敢种苿┗蛩泥侯惪拱┧幬锏脑鲂ё饔?。因此，本發(fā)明所述的抗癌復(fù)合物的有效成分為間質(zhì)水解劑和任意一種(或多種)拓?fù)涿敢种苿┗蛩泥侯惪拱┧幬锏穆?lián)合或單獨(dú)包裝。以上有效成分可制成任意劑型或形狀，但以緩慢釋放劑型為優(yōu)選，主要為緩釋注射劑或緩釋植入劑。
(1)1-40％的彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他與1-40％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙、替尼泊甙?4-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星或佐柔比星的組合；或(2)1-40％的彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬或馬立馬司他與1-40％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺的組合。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1.
將80mg分子量峰值為25000-40000的聚乳酸(PLGA，50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入10mg膠原酶和10mg喜樹(shù)鹼，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機(jī)溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得含10％膠原酶和10％喜樹(shù)鹼的抗癌緩釋。均為重量百分比。該抗實(shí)體腫瘤藥物組合物在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為15-25天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為25-50天。
實(shí)施例2.
如實(shí)施例1所述，所不同的是聚乳酸的分子量峰值為35000-60000的(PLGA，75∶25)，抗癌有效成分及重量百分比為下列之一(1)5％的透明質(zhì)酸酶與10％的羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙或替尼泊甙的組合；或(2)10％的松弛肽與10％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙或替尼泊甙的組合。
實(shí)施例3.
將80mg聚苯丙生(對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)∶癸二酸(SA)為20∶80)共聚物放入容器中，加100ml二氯甲烷，溶解混勻后，加入10mg胰蛋白酶和10mg米托唑胺，重新?lián)u勻后用噴霧干燥法制備含10％胰蛋白酶和10％米托唑胺的注射用微球。然后將微球懸浮于含15％甘露醇的生理鹽水中，制得相應(yīng)的混懸型緩釋注射劑，黏度為20cp-300cp(20℃-30℃時(shí))。該緩釋注射劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為15-25天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為30-40天左右。
實(shí)施例4.
加工成緩釋注射劑的方法步驟與實(shí)施例3相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比為2.5-20％的透明質(zhì)酸酶或膠原酶與5-25％的米托唑胺的組合；所用的緩釋輔料為外消旋聚乳酸(分子量峰值為20000-60000)、PLGA(75∶25或50∶50)、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
緩釋注射劑的黏度為200cp-600cp(20℃-30℃時(shí))。
實(shí)施例5.
將70mg分子量峰值為20000-60000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入15mg替莫唑胺和15mg松弛肽，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機(jī)溶劑。將干燥后的含藥固體組合物冷凍粉碎制成含15％替莫唑胺和15％松弛肽的微粉，然后懸浮于含1.5％羧甲基纖維素鈉的生理鹽水中，制得相應(yīng)的混懸型緩釋注射劑，黏度為220cp-340cp(20℃-30℃時(shí))。該緩釋注射劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為10-15天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為20-30天左右。
實(shí)施例6加工成緩釋注射劑的方法步驟與實(shí)施例5相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比為
(1)2.5％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺和10％松弛肽的組合；(2)10％的甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺和10％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；(3)15％的米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺和10％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；(4)25％的甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺和10％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合。
注射劑的黏度為10cp-650cp(20℃-30℃時(shí))。
實(shí)施例7.
將70mg聚苯丙生(對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)∶癸二酸(SA)為20∶80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入20mg甲基芐肼和10mg纖溶酶，重新?lián)u勻后用噴霧干燥法制備含20％甲基芐肼與10％纖溶酶的注射用微球。然后將微球懸浮于含1.5％羧甲基纖維素鈉和0.5％吐溫80的生理鹽水中，制得相應(yīng)的混懸型緩釋注射劑，黏度為180cp-260cp(25℃-30℃時(shí))。該緩釋注射劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為14-25天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為30-50天左右。
實(shí)施例8.
加工成緩釋注射劑的方法步驟與實(shí)施例7相同，但所不同的是所含抗癌有效成分為5-25％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼與5-25％的甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺的組合；緩釋注射劑黏度為440cp-650cp(25℃-30℃時(shí))。
實(shí)施例9將70mg聚苯丙生(對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)∶癸二酸(SA)為20∶80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入20mg4-羧基替莫唑胺和10mg溶菌酶，重新?lián)u勻后用噴霧干燥法制備含20％4-羧基替莫唑胺和10％溶菌酶的注射用微球。然后將微球懸浮于含1.5％羧甲基纖維素鈉和15％山梨醇和0.2％吐溫80的生理鹽水中，制得相應(yīng)的混懸型緩釋注射劑，黏度為100cp-160cp(25℃-30℃時(shí))。該緩釋注射劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為10-15天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為20-30天左右。
實(shí)施例10加工成緩釋注射劑的方法步驟與實(shí)施例9相同，但所不同的是所含抗癌有效成分為15％的甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺與15％的溶菌酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；黏度為560cp-640cp(25℃-30℃時(shí))。
實(shí)施例11將70mg聚苯丙生(對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)∶癸二酸(SA)為20∶80)共聚物放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入10mg3-N-甲基替莫唑胺和20mg吉非替尼，重新?lián)u勻后用噴霧干燥法制備含10％3-N-甲基替莫唑胺和20％吉非替尼的注射用微球。然后將微球經(jīng)壓片法制得相應(yīng)的緩釋植入劑。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為15-25天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為30-40天左右。
實(shí)施例12加工成緩釋植入劑的方法步驟與實(shí)施例11相同，但所不同的是所用緩釋輔料為60-95％的外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物、雙脂肪酸與癸二酸共聚物(PFAD-SA)、聚(芥酸二聚體-癸二酸)[P(EAD-SA)]或聚(富馬酸-癸二酸)[P(FA-SA)]，所含抗癌有效成分為10％甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺和5-20％吉非替尼或厄洛替尼的組合。
實(shí)施例13將70mg分子量峰值為35000的聚乳酸(PLGA，50∶50)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入10mg米托唑胺和20mg拉帕替尼，重新?lián)u勻后用噴霧干燥法制備含10％米托唑胺和20％拉帕替尼的注射用微球。然后將微球經(jīng)壓片法制得相應(yīng)的緩釋植入劑。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為15-20天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為35-50天左右。
實(shí)施例14加工成緩釋植入劑的方法步驟與實(shí)施例11-13相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及重量百分比為(1)1-40％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、拉帕替尼或厄洛替尼與1-40％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙、替尼泊甙?4-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星或佐柔比星的組合；或(2)1-40％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、拉帕替尼或厄洛替尼與1-40％的咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺或3-N-甲基替莫唑胺的組合。
實(shí)施例15加工成緩釋劑的方法步驟與實(shí)施例1-14相同，但所不同的是所用的緩釋輔料為下列之一或其組合a)聚乳酸(PLA)，分子量峰值為10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；b)聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物(PLGA)，其中，聚乙醇酸和羥基乙酸的比例為50-95∶50-50，分子量峰值為10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；c)乙烯乙酸乙烯酯共聚物(EVAc)；d)聚苯丙生，對(duì)羧苯基丙烷(p-CPP)∶癸二酸(SA)為10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40；e)雙脂肪酸與癸二酸共聚物(PFAD-SA)；f)聚(芥酸二聚體-癸二酸)[P(EAD-SA)]；g)聚(富馬酸-癸二酸)[P(FA-SA)]；h)木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠或白蛋膠；i)外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。
實(shí)施例16加工成緩釋注射劑的方法步驟與實(shí)施例1-10相同，但所不同的是所用的助懸劑分別為下列之一或其組合a)0.5-3.0％羧甲基纖維素(鈉)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物質(zhì)；e)0.1-0.5％吐溫20。
實(shí)施例17.
將70mg分子量峰值為20000-60000的聚乳酸(PLA)放入容器中，加100毫升二氯甲烷，溶解混勻后，加入25mg米托唑胺和5mg松弛肽，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機(jī)溶劑。將干燥后的含藥固體組合物冷凍粉碎制成含25％米托唑胺和5％松弛肽的微粉，然后懸浮于含1.5％羧甲基纖維素鈉的生理鹽水中，制得相應(yīng)的混懸型緩釋注射劑，黏度為220cp-340cp(20℃-30℃時(shí))。該緩釋注射劑在體外生理鹽水中的釋藥時(shí)間為10-15天，在小鼠皮下的釋藥時(shí)間為20-30天左右。
實(shí)施例18加工成緩釋注射劑的方法步驟與實(shí)施例5相同，但所不同的是所含抗癌有效成分及其重量百分比為(1)50％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙、替尼泊甙、甲基芐肼、米托唑胺或替莫唑胺和5％的膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；(2)40％的米托唑胺或替莫唑胺和10％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；(3)30％的米托唑胺或替莫唑胺和20％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；
(4)20％的米托唑胺或替莫唑胺和15％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合；(5)10％的米托唑胺或替莫唑胺和10％的胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼的組合。
注射劑的黏度為10cp-650cp(20℃-30℃時(shí))。
以上實(shí)施例僅用于說(shuō)明，而并非局限本發(fā)明的應(yīng)用。
本發(fā)明所公開(kāi)和保護(hù)的內(nèi)容見(jiàn)權(quán)利要求。
以上結(jié)果表明本發(fā)明所用的間質(zhì)水解劑與其抗癌藥物的組合以及由此產(chǎn)生的抗癌增效作用具有普遍意義。因此，間質(zhì)水解劑與其抗癌藥物聯(lián)合時(shí)的劑量選擇可以根據(jù)本發(fā)明的有關(guān)數(shù)據(jù)推出。
上述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方法作了進(jìn)一步的描述。是為了舉例說(shuō)明而不是要限定本發(fā)明的范圍。實(shí)際上，除本文所示和所述之外的本發(fā)明的各種改變，對(duì)于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來(lái)說(shuō)都可從說(shuō)明書(shū)和圖表中顯而易見(jiàn)。當(dāng)然這些改變應(yīng)在所附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。因此，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到前面的說(shuō)明書(shū)著重公開(kāi)了本發(fā)明的某些特定實(shí)施方式及對(duì)其所做的等同改變或替換都是在所附權(quán)利要求書(shū)所述的構(gòu)思和范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種抗實(shí)體腫瘤組合物，其特征在于抗實(shí)體組合物為緩釋注射劑由以下成分組成(A)緩釋微球，包括抗癌有效成分 0.5-60％緩釋輔料 41-99.9％助懸劑 0.0-30％以上為重量百分比和(B)溶媒，為普通溶媒或含助懸劑的特殊溶媒。其中，抗癌有效成分為間質(zhì)水解劑和抗癌藥物，所述抗癌藥物選自拓?fù)涿敢种苿┖?或四嗪類藥物；緩釋輔料選自下列之一或其組合a)聚乳酸；b)聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；c)聚苯丙生；d)乙烯乙酸乙烯酯共聚物；e)雙脂肪酸與癸二酸共聚物；f)聚(芥酸二聚體-癸二酸)共聚物；g)聚(富馬酸-癸二酸)共聚物；h)木糖醇、低聚糖、軟骨素、甲殼素、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠或白蛋膠；i)外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、單甲基聚乙二醇/聚乳酸、單甲基聚乙二醇/聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、聚乙二醇/聚乳酸共聚物、端羧基聚乳酸或端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物。助懸劑選自羧甲基纖維素鈉、碘甘油、二甲硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物質(zhì)、土溫20、土溫40和土溫80之一或其組合，助懸劑的黏度為100cp-3000cp(20℃-30℃時(shí))。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于間質(zhì)水解劑選自彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、鏈霉蛋白酶、分散酶、菠蘿蛋白酶、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、纖溶酶、組織蛋白酶-G、纖溶酶原激活劑、膠原酶、鏈激酶、糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、干擾素、纖維蛋白酶、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、伏他拉尼、培立替尼、羧基氨基三唑、反應(yīng)停、雷諾胺、血管抑素、內(nèi)皮抑素、血管內(nèi)皮抑素、甲磺酸伊馬替尼、司馬斯尼、達(dá)薩替尼、阿瓦斯丁、卡那替尼、索拉非尼、蘇尼替尼、特奧斯塔、帕尼托馬、馬立馬司他之一或其組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于所述四嗪類藥物選自咪唑并四嗪、咪唑并哌嗪、咪唑并吡啶、甲基芐肼、米托唑胺、替莫唑胺、4-羧基替莫唑胺、3-N-甲基替莫唑胺之一或其組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于所述拓?fù)涿敢种苿┻x自喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、鬼臼霉素、三羥基異黃酮、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙、替尼泊甙?4-羥柔紅霉素、氨柔比星、艾柔比星、地托比星、依索比星、羅多比星、流柔比星、佐柔比星之一或其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于抗癌有效成分為下列之一(1)1-40％的纖溶酶、纖溶酶原激活劑、膠原酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼與1-40％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙或替尼泊甙的組合；或(2)1-40％的纖溶酶、纖溶酶原激活劑、膠原酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼與1-40％的米托唑胺或替莫唑胺的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于a)聚乳酸的分子量峰值為10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；b)聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物中，聚乙醇酸和羥基乙酸的比例為50-95∶50-50，分子量峰值為10000-30000、300000-60000、60000-100000或100000-150000；c)聚苯丙生中，對(duì)羧苯基丙烷∶癸二酸為10∶90、20∶80、30∶70、40∶60、50∶50或60∶40。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于所用的助懸劑分別為下列之一a)0.5-3.0％羧甲基纖維素(鈉)；b)5-15％甘露醇；c)5-15％山梨醇；d)0.1-1.5％表面活性物質(zhì)；e)0.1-0.5％吐溫20；f)(碘)甘油、二甲硅油、丙二醇或卡波姆；g)0.5-5％羧甲基纖維素鈉+0.1-0.5％土溫80；h)5-20％甘露醇+0.1-0.5％土溫80；i)0.5-5％羧甲基纖維素鈉+5-20％山梨醇+0.1-0.5％土溫80。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述之抗癌緩釋注射劑，其特征在于所述之藥物制劑為緩釋微球制成的緩釋植入劑，經(jīng)瘤內(nèi)或瘤周注射或放置給藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述之抗癌緩釋植入劑，其特征在于所述之抗癌有效成分及其重量百分比為(1)1-40％的纖溶酶、纖溶酶原激活劑、膠原酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼與1-40％的喜樹(shù)鹼、羥基喜樹(shù)鹼、9-硝基喜樹(shù)鹼、勒托替康、拓?fù)涮婵?、依力替康、依托泊甙或替尼泊甙的組合；或(2)1-40％的纖溶酶、纖溶酶原激活劑、膠原酶、透明質(zhì)酸酶、溶菌酶、松弛肽、纖維蛋白酶、吉非替尼或厄洛替尼與1-40％的米托唑胺或替莫唑胺的組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求1和7所述之抗癌緩釋劑，其特征在于所述之緩釋劑用于制備治療起源于人及動(dòng)物大腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟、肝、膽囊、頭頸部、口腔、甲狀腺、皮膚、粘膜、腺體、血管、骨組織、淋巴結(jié)、肺臟、食管、胃、乳腺、胰腺、眼睛、鼻咽部、子宮、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮頸、前列腺、膀胱、結(jié)腸或直腸的原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤的緩釋劑，經(jīng)瘤內(nèi)或瘤周注射或放置給藥。
全文摘要
一種抗實(shí)體腫瘤組合物為緩釋注射劑，由緩釋微球和溶媒組成。其中緩釋微球包括抗癌有效成分和緩釋輔料，抗癌有效成分為間質(zhì)水解劑和選自拓?fù)涿敢种苿┖?或四嗪類藥物的抗癌藥物的組合，溶媒為含助懸劑的特殊溶媒；間質(zhì)水解劑選自膠原酶、溶菌酶、松弛肽、吉非替尼或厄洛替尼；緩釋輔料選自聚乳酸共聚物、聚乙二醇/聚乳酸、乙醇酸共聚物、EVAc、脂肪酸與癸二酸共聚物等；助懸劑的黏度為80cp－3000cp(20℃－30℃時(shí))，選自羧甲基纖維素等；緩釋微球還可制成緩釋植入劑，腫瘤內(nèi)或瘤周注射或放置該緩釋劑，能于局部釋藥達(dá)約30－50天左右。緩釋劑單獨(dú)應(yīng)用能有效抑制腫瘤生長(zhǎng)，促進(jìn)藥物瘤內(nèi)擴(kuò)散，與化療和/或放療等非手術(shù)療法聯(lián)合應(yīng)用還可顯著增強(qiáng)其療效。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1961860SQ200610201180
公開(kāi)日2007年5月16日 申請(qǐng)日期2006年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月1日
發(fā)明者孫娟, 俞建江, 張紅軍, 劉恩祥 申請(qǐng)人:濟(jì)南康泉醫(yī)藥科技有限公司