專利名稱：改性的β胸腺肽的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及P胸腺肽、其同工型(isoform)及其片段的領域。
技術背景胸腺素(34最初被鑒定為一種在體外當內(nèi)皮細胞遷移和分化時被上調(diào)的蛋白 質(zhì)。胸腺素P4最初是由胸腺中分離出來的，是在多種組織中鑒別出的43個氨基 酸、4.9kDa的廣泛存在的多肽。已知該蛋白具有多種作用，包括內(nèi)皮細胞的分 化和遷移中發(fā)揮作用、在T細胞分化中發(fā)揮作用、在肌動蛋白結(jié)合和血管化作 用中發(fā)揮作用。T卩4的氨基酸序列在美國專利No.4,297,276中有所公開，在此將其以引用的 方式并入至本文。T[34在進化過程中高度保守。實際上，小鼠(murine)、大鼠和 人的TP4之間具有完全的同源性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TP4存在于哺乳動物的多種組織類型中，并涉及多種細胞和生理 學過程，其中包括誘導骨髓細胞的末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶活性、刺激下丘腦 促黃體激素釋放激素和黃體激素的分泌、抑制巨嗜細胞的遷移及促進巨嗜細胞 的抗原呈遞、以及體外誘導T細胞系的表型變化等。PCT國際公開No.W099/49883中公開了胸腺素(34亞砜。目前在改良的P胸腺肽方面仍有需求。發(fā)明概述在一個實施方式中，公開了一種組合物，其含有經(jīng)氧化或過氧化改性的本 身(normally)含有甲硫氨酸的p胸腺肽、其同工型、其片段、其經(jīng)分離的R-對映
體或經(jīng)分離的S-對映體，而不含有外消旋的胸腺素P4亞砜；或公開了一種組合 物，其含有改性的具有非甲硫氨酸的氨基酸取代基的卩胸腺肽、其同工型或其 片段，所述非甲硫氨酸的氨基酸取代基取代了本身含有甲硫氨酸的P胸腺肽、 其同工型或其片段的氨基酸序列中的至少一個甲硫氨酸。還公開了形成本發(fā)明 所述組合物的方法。發(fā)明詳述多數(shù)卩胸腺肽的氨基酸序列中具有甲硫氨酸這種氨基酸，該氨基酸在體內(nèi) 和體外易于氧化。這種P胸腺肽在本文中有時被稱為"本身含有甲硫氮酸的卩胸腺肽"。在許多己知的(3胸腺素中，甲硫氨酸位于6位。在本身含有甲硫氨酸的P胸腺素中，當甲硫氨酸(CsHuN02S)這一氨基酸氧 化為甲硫氨酸亞砜(C5HnN03S)時，會導致P胸腺素亞砜(beta thymosin sulfoxides)的生成。該氧化可利用任意適宜的方法來完成。例如，可通過使含 甲硫氨酸的(3胸腺素與過氧化氫相接觸從而將含甲硫氨酸的P胸腺素氧化為亞 砜。W099/4988中公開了可將胸腺素p4用50體積的過氧化氫進行氧化，將該 內(nèi)容以引用的方式并入本文。由此，在W099/49883中描述了可利用稀釋的過 氧化氫將胸腺素(34氧化以形成胸腺素(34亞砜。甲硫氨酸(C5HnN02S)這一氨基酸向甲硫氨酸亞砜(C5HuN03S)的氧化也可 以代表Tp4等含甲硫氨酸的p胸腺素在體內(nèi)以及體外的一條主要降解路徑。己經(jīng)鑒定出許多P胸腺素及同工型與已知的TP4氨基酸序列具有約70。/。、或 約75%、或約80%或更高的同源性。該類(3胸腺素及同工型例如包括Tp4a13、 T(39、 T(310、 T(311、 T|312、 T卩13、 Tpl4和Tpi5。在6位具有甲硫氨酸的示例性l3胸腺素包括Tp4、 Tp4ala、 Tp4xen、 Tp9met、 T{310 和Tpi3。本發(fā)明適用于已知的P胸腺素、其同工型及其片段，例如上述列出的P胸腺 素、其同工型及其片段，還適用于尚未鑒別出的本身含有甲硫氨酸的P胸腺素和 TI34同工型及其片段。此外，本發(fā)明還適用于己知的以及尚未鑒別出的(3胸腺素、其同工型及其片 段，這些P胸腺素、其同工型及其片段通常在肽的6位以外的位置具有一個或多 個甲硫氨酸。
在某些實施方式中，取代甲硫氨酸的氨基酸是中性的、非極性的、疏水性 和域非氧化性的。與含有甲硫氨酸的P胸腺素相比，該類組合物具有穩(wěn)定性更強 的優(yōu)點，同時該組合物與相應的P胸腺素具有實質(zhì)上相同的活性或不同的活性。在某些實施方式中，取代甲硫氨酸的氨基酸抑制P胸腺素的氧化，最優(yōu)選地， 取代的P胸腺素與相應的含有甲硫氨酸的P胸腺素實質(zhì)上具有相同的生物活性。含有甲硫氨酸的P胸腺肽中甲硫氨酸的取代可能導致肽的穩(wěn)定性特征有所 改變。此外，該取代導致肽具有不可預測的新特性和不可預測的未發(fā)生變化的特性。作為非限制性實施例，用于取代含有甲硫氨酸的(3胸腺素中的甲硫氨酸的氨 基酸為纈氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸或亮氨酸。 在另一個實施方式中，T(34中的甲硫氨酸被亮氨酸所取代。 根據(jù)一個實施方式，當甲硫氨酸被亮氨酸所取代時，所述P胸腺肽不是TP4。 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，在含有甲硫氨酸的P胸腺素中用于取代甲硫氨酸的 氨基酸不是亮氨酸。在該方面的某些實施方式中，在含有甲硫氨酸的(3胸腺素中 用于取代甲硫氨酸的氨基酸為纈氨酸、異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或脯氨酸。 根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，用于取代甲硫氨酸的優(yōu)選氨基酸為纈氨酸或 異亮氨酸。根據(jù)本發(fā)明的另一實施方式，用于取代甲硫氨酸的優(yōu)選氨基酸為丙氨酸。 根據(jù)本發(fā)明又一實施方式，用于取代甲硫氨酸的優(yōu)選氨基酸為纈氨酸。 本發(fā)明中，經(jīng)氨基酸取代的改性P胸腺肽、其同工型及其片段可利用任意適 宜的方法獲得，例如可通過固相肽合成來獲得，該方法的一個例子在美國專利 No.5,512,656中有所公開。本發(fā)明還公開了形成經(jīng)氮基酸取代的改性的P胸腺肽的方法，其中將含有甲 硫氨酸的(3胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序列通過下述方法進行改性使 卩胸腺肽、其同工型或其片段中的至少一個甲硫氨酸被非甲硫氨酸進行取代。所 述方法涉及將含有甲硫氨酸的P胸腺肽序列、其同工型或其片段中的至少一個甲 硫氨酸以非甲硫氨酸的氨基酸進行取代以形成改性的p胸腺肽、其同工型或其片 段。如上所述，胸腺素(34可以具有亮氨酸取代基以取代其6位的甲硫氨酸，從而
具有TP41611。取代甲硫氨酸的亮氨酸抑制Tp4的氧化。與TP4相比，Tp4^具有穩(wěn)定性更好 的優(yōu)點，并且意外地具有實質(zhì)上的肌動蛋白結(jié)合活性。以亮氨酸取代T(34中的甲硫氨酸還可意外地使肽具有新的未曾預料的活性。公開了形成Tp4b的方法，其中對TP4進行下述方式的改性將Tp4中6位的 甲硫氨酸取代為亮氨酸。該方法涉及將TP4序列中6位的甲硫氨酸取代為亮氨酸， 從而形成Tp4h。本發(fā)明的肽可以實質(zhì)上具有肌動蛋白結(jié)合活性。所述組合物可與其它物質(zhì)一起用作抗炎劑。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，提供了氧化的含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同 工型或其片段，但除胸腺素卩4亞砜之外。本發(fā)明還提供了形成改性的(3胸腺素亞砜的方法，所述方法包括使本身含 有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同工型或其片段與稀釋的過氧化氫等氧化劑相接觸， 從而形成P胸腺素亞砜肽。另一實施方式為形成卩胸腺素亞砜肽的方法，所述方法包括使除胸腺素卩4 之外的本身含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同工型或其片段與氧化劑，例如過氧化 氫相接觸，從而形成相應的(3胸腺素亞砜肽。對于本文所述的組合物來說，與未被氧化的含有甲硫氨酸的P胸腺素相比， 其具有穩(wěn)定性更強的優(yōu)點，同時該組合物與相應的P胸腺素具有實質(zhì)上相同的活 性或不同的活性。將含有甲硫氨酸的(3胸腺肽氧化為亞砜會導致肽的穩(wěn)定性特征有所變化。此 外，除具有一些未發(fā)生變化的特性外，該取代還可導致肽具有某些新的特性。本身含有甲硫氨酸的P胸腺肽中甲硫氨酸的過氧化會導致肽的穩(wěn)定性特征 發(fā)生變化。此外，除具有一些未發(fā)生變化的特性外，該取代還可導致肽具有某 些新的特性。根據(jù)一個實施方式，用于過氧化的P胸腺肽不是T(34。含有甲硫氨酸的P胸腺肽(包括P胸腺素亞砜)可利用過甲酸或過乙酸來進行 過氧化從而生成相應的P胸腺素砜肽(beta thymosin sulfone peptide),其中受到 過氧化的甲硫氨酸中的硫原子被兩個氧完全氧化(過氧化)。根據(jù)一個實施方式，提供了一種組合物，其含有經(jīng)改性的除T卩4砜之外的含
甲硫氨酸的P胸腺素砜。本發(fā)明包括形成P胸腺素砜的方法，所述方法包括使含有甲硫氨酸的卩胸 腺肽、其亞砜、其同工型或其片段與酸，例如過甲酸和/或過乙酸相接觸，從而 形成相應的P胸腺素砜肽。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方式，本發(fā)明還包括一種形成P胸腺素砜肽的方法，所述方法包括使除胸腺素(34或胸腺素P4亞砜之外的含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其亞砜、其同工型或其片段與酸，例如過甲酸和/或過乙酸相接觸，從而形 成相應的卩胸腺素砜肽。在另一個實施方式中，利用過甲酸或過乙酸將胸腺素(34和/或胸腺素p4亞砜 進行氧化以生成胸腺素p4砜，其中胸腺素(34中6位的甲硫氨酸的硫原子被兩個氧 完全氧化(過氧化)。胸腺素卩4砜可用作抗炎劑。由于TP4的甲硫氨酰殘基中的硫醚為前手性的，因而利用非手性試劑進行氧 化(或過氧化)會形成被稱作S-型和R-型("對映體")的亞砜(砜)。由于作為氧化的胸 腺素(34的潛在伴侶的每一生物分子均為手性的，因而與S-型和R-型的亞砜(或砜) 所形成的復合體是不同的(非對映體)。胸腺素[34亞砜(或砜)的不同形式可以具有 不同的藥效學和藥代動力學特征以及生物活性。因此，S-型和R-型的胸腺素p4 亞砜(或砜)會具有不同的生物學效應?？墒褂冒被岱治鱿到y(tǒng)來區(qū)分氧化的胸腺素P4亞砜(或砜)水解后的L-甲硫 氨酸(S)-型禾n(R)-型的亞砜(或砜)。例如，可使用兩種方法分離氧化或過氧化后的 兩種形式的胸腺素p4亞砜(或砜)。雖然不同形式的甲硫氨酸亞砜(或砜)表現(xiàn)為鏡 和鏡像關系，但是所產(chǎn)生的胸腺素P4亞砜(或砜)并未構成成對的像和鏡像關系， 這是由于肽中的其它氨基酸殘基產(chǎn)生不對稱環(huán)境。因此，可通過HPLC技術對各 種單獨形式進行分離。另一種對所述形式進行分離的方法可使用特定的甲硫氨 酸亞砜(或砜)還原酶，該還原酶對一種形式的胸腺素P4亞砜(或砜)進行還原而對 另一種卻沒有作用?？衫肏PLC將非還原型的胸腺素卩4亞砜(或砜)與酶還原型 的胸腺素P4亞砜(或砜)進行分離。本文公開了一種形成含有經(jīng)分離的R-胸腺素卩4亞砜(或砜)的組合物的方法， 其通過將R-胸腺素P4亞砜(或砜)從含有R-胸腺素卩4亞砜(或砜)和S-胸腺素(34亞砜 (或砜)的混合物中進行分離而完成。本文公開了一種形成含有經(jīng)分離的S-胸腺素P4亞砜(或砜)的組合物的方法， 其通過將S-胸腺素卩4亞砜(或砜)從含有S-胸腺素卩4亞砜(或砜)和R-胸腺素(34亞砜 (或砜)的混合物中進行分離而完成。如上所述，已經(jīng)鑒別出許多P胸腺素及其同工型與己知的TP4氨基酸序列具 有約70%、或約75%、或約80%或更高的同源性。該P胸腺素及其同工型例如包 括Tp4ala、 TP9、 T|310、 T卩l(xiāng)l、 T卩12、 Tpi3、 T卩14和Tpi5。如上所述，示例性的在6位具有甲硫氨酸的p胸腺素包括T(34、 T|34ala、 Tp4xen、 T(39met、 Tj310和Tpi3。如上所述，本發(fā)明包括已知的p胸腺素及同工型，例如上述列出的P胸腺素 及同工型，還包括尚未鑒別出的含有甲硫氨酸的p胸腺素、其同工型及其片段。如上所述，本發(fā)明還包括己知的及尚未鑒別出的P胸腺素、其同工型及其片 段，這些J3胸腺素、其同工型及其片段在肽的6位以外的位置具有一個或多個甲 硫氨酸。如同TP4，由于含有甲硫氨酸的P胸腺素的甲硫氨酰殘基中的硫醚為前手性 的，因而利用非手性試劑進行氧化(或過氧化)會形成包括被稱作S-型和R-型("對 映體")的至少兩種類型的亞砜(砜)。由于作為氧化的含有甲硫氨酸的P胸腺素的 潛在伴侶的每一生物分子均為手性的，因而其與S-型和R-型的亞砜(或砜)所形成 的復合體是不同的(非對映體)。p胸腺素亞砜(或砜)的不同形式可以具有不同的藥 效學和藥代動力學行為以及生物活性。因此，S-型和R-型的(3胸腺素亞砜(或砜) 會具有不同的生物學效應。如同Tp4，可使用氨基酸分析系統(tǒng)來區(qū)分氧化的p胸腺素亞砜(或砜)水解后的 L-甲硫氨酸(S)-和(R)-的亞砜(或砜)。例如，可使用至少兩種方法分離氧化(或過 氧化)后的不同形式的P胸腺素亞砜(或砜)。雖然不同形式的甲硫氨酸亞砜(或砜) 表現(xiàn)為鏡和鏡像關系，但是所產(chǎn)生的p胸腺素亞砜(或砜)并未構成成對的像和鏡 像關系，這是由于肽中的其它氨基酸殘基產(chǎn)生了不對稱環(huán)境。因此，可通過已 知的HPLC技術對各種形式進行分離。另一種對不同形式進行分離的方法可使用 特定的甲硫氨酸亞砜(或砜)還原酶，該還原酶對一種形式的P胸腺素亞砜(或砜) 進行還原而對另一種卻沒有作用?？衫肏PLC將非還原型的p胸腺素亞砜(或砜) 與酶還原型的(3胸腺素亞砜(或砜)進行分離。本文公開了一種形成含有經(jīng)分離的R-(3胸腺素亞砜(或砜)的組合物的方法， 其通過將R-卩胸腺素亞砜(或砜)從含有R-卩胸腺素亞砜(或砜)和S-卩胸腺素亞砜(或 砜)的混合物中進行分離而完成。本文進一步公開了一種形成含有經(jīng)分離的S-卩胸腺素亞砜(或砜)的組合物的 方法，其通過將S-卩胸腺素亞砜(或砜)從含有S-卩胸腺素亞砜(或砜)和R-p胸腺素亞 砜(或砜)的混合物中進行分離而完成。在一個實施方式中，本發(fā)明提供一種對受試對象或受試對象的組織的疾病、 損傷、傷害和/或創(chuàng)傷進行治療、預防、抑制或減輕的方法，所述方法是通過施 用有效量的包含本發(fā)明肽的組合物而完成的。所述施用可為直接施用或全身施 用。直接施用的例子例如包括通過直接敷用或吸入使組織與包含溶液、洗液、 藥膏、凝膠、霜劑、糊劑、噴霧劑、懸浮劑、分散體、水凝膠、油膏或油的載 體相接觸，所述溶液、洗液、藥膏、凝膠、霜劑、糊劑、噴霧劑、懸浮劑、分散體、水凝膠、油膏或油中含有本文所描述的肽。全身施用的例子例如包括 將含有本文所描述的肽的組合物進行靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)注射，所述組合 物被置于水等適于進行注射的藥學可接受載體中。受試對象優(yōu)選為哺乳動物， 最優(yōu)選為人。本文所描述的組合物可以任意適宜的有效量進行施用。例如，本文所述的組合物可在0.0001-1,000,000微克劑量范圍內(nèi)進行施用，更優(yōu)選在0.1-5，000微克的劑量范圍內(nèi)進行施用，最優(yōu)選在1 -30微克的劑量范圍內(nèi)進行施用。本文所描述的組合物可以每天施用、隔天施用、隔周施用、隔月施用等，在進行施用的每一天可以進行單次或多次施用，例如可在進行施用的每一天進行2、 3、 4或更多次的施用。本發(fā)明還包括藥物組合物或化妝品組合物，所述組合物在藥學或化妝品可接受載體中包括治療有效量的本文所述的組合物。所述載體包括任意適宜的載體，其包括本文所列出載體。本文所描述的給藥方法涉及本文所述的組合物的施用或遞送的多種路徑，其包括對受試對象進行施用的任意常規(guī)施用技術(例如為直接施用、局部注射、吸入或全身施用，但并不限于這些)。使用或包含本文所述組合物的方法和組合物可以通過與藥學可接受或化妝品可接受的非毒性賦形劑、添加劑或載體混合來配制為藥物組合物或化妝品組合物。
具體實施方式
實施例1利用常規(guī)的固相肽合成法(例如，根據(jù)美國專利No.5,512,656中公開的方法)， 以纈氨酸取代6位的甲硫氨酸從而制得Tp4va1，由此得到具有未曾預料和不可預 知的特性的肽。實施例2利用常規(guī)的固相肽合成法，以異亮氨酸取代6位的甲硫氨酸從而制得Tp4^， 由此得到具有未曾預料和不可預知的特性的肽。 實施例3例如根據(jù)美國專利No.5,512,656中公開的方法，利用常規(guī)的固相肽合成法， 以丙氨酸取代6位的甲硫氨酸從而制得TP4 M6A，由此得到具有未曾預料和不可 預知的特性的肽。實施例4例如根據(jù)美國專利No.5，512,656中公開的方法，利用常規(guī)的固相肽合成法， 以苯丙氨酸取代6位的甲硫氨酸從而制得Tp4Phe，由此得到具有未曾預料和不可 預知的特性的肽。實施例5例如根據(jù)美國專利No.5,512，656中公開的方法，利用常規(guī)的固相肽合成法， 以脯氨酸取代6位的甲硫氨酸從而制得Tp4，，由此得到具有未曾預料和不可預 知的特性的肽。實施例6例如根據(jù)美國專利No.5,512，656中公開的方法，利用常規(guī)的固相肽合成法， 以亮氨酸取代6位的甲硫氨酸從而制得TI34'eu，由此得到具有未曾預料和不可預 知的特性的肽。實施例7T(3^u采用本文所述的固相肽合成法進行制備。通過實驗進行如下測定，即與天然TP4相比，T(34^的G-肌動蛋白結(jié)合親和 性。所述實驗重復兩次，每次進行三份平行，所述結(jié)果如下所述(來自三份實驗 的平均值)
第一次測定T{34Kd=1.28mM; Tp4leuKd=1.36mM 第二次測定Tp4Kd=0.54mM; T(34leuKd=0.99mMTP4情況下的較低值是由其亞砜所致的。Tp4和Tf34-亞砜的混合是通過氨基 酸分析而確定的。制備物中約10%為亞砜，其與G-肌動蛋白僅有較弱的結(jié)合。因 而與非氧化的TP4相比，測試中的T(34的真實濃度要更低，游離TP4降低得更多。 對游離T(34的降低進行了測定。利用超濾來分離結(jié)合G-肌動蛋白的TP4與游離 TP4，并利用HPLC來測定超濾液中T(34的濃度。所用方法在Huff et al.,F五/^ Ze"era,414:39-44(1997)中有描述。上述數(shù)據(jù)令人吃驚地顯示出，將(3胸腺肽中的甲硫氨酸進行氨基酸取代時， 實質(zhì)上并不會影響P胸腺肽的G-肌動蛋白結(jié)合能力。實施例8將Tp4以濃H2O2(30。/。)進行處理，對Met殘基進行完全氧化，由此來制備Tp4TP4砜的化學性質(zhì)已經(jīng)得到確定。該確定所用的技術手段為HPLC、 MALDI-TOFMS和氨基酸分析。MALDI-TOF分析顯示出32Da的肽的分子量增 加，這是由于02摻入至所述肽中所致。已經(jīng)確定TI34-砜具有與G-肌動蛋白結(jié)合的性質(zhì)。T(34-砜與G-肌動蛋白形成 復合體，該復合體的Kd值約為10uM。因而與Tp4和G-肌動蛋白所形成的復合體 (luM灘比，T(34-砜與G-肌動蛋白形成的復合體的穩(wěn)定性要低，但令人吃驚的是， 該復合體的穩(wěn)定性遠強于Tp4-亞砜與G-肌動蛋白形成的復合體(20uM)的穩(wěn)定 性。實施例9如本文所述，通過使包括TP4^、 Tp4xen、 T|39met、 Tpi0和Tpi3的P胸腺素與稀釋的過氧化氫相接觸，將其轉(zhuǎn)化為亞砜，從而形成相應的卩胸腺素亞砜。 實施例10如本文所述，通過使包括TP4^、 T|34xen、 Tp9met、 TplO和T(313的P胸腺素與 與過甲酸和/或過乙酸相接觸，將其轉(zhuǎn)化為(3胸腺素砜肽，從而形成相應的(3胸腺 素砜肽。實施例11TJ34亞砜為S-型和R-型的一對一 的混合物，將其以特異的甲硫氨酸亞砜還原 酶(MSR-A和MSR-B)進行還原。通過該方法將S-型或R-型中的一種還原，而使另 一種仍為亞砜。該方法提供兩種試樣 一種試樣含有TP4和R-T(34亞砜的混合物， 而另一種試樣含有Tp4和S-Tp4亞砜的混合物。將兩種試樣以HPLC進行分離，并 分離出S-TP4亞砜純品和R-Tp4亞砜純品。測定它們與G-肌動蛋白的復合體的解 離常數(shù)。令人吃驚的是，它們的復合體的解離常數(shù)是相同的。G-肌動蛋白與 (R/S)-TP4亞砜或與R-TP4亞砜或與S-TP4亞砜的復合體的穩(wěn)定性是相同的 (Kd 20uM)。肌動蛋白-Tp4亞砜的Kd約為luM。通過與G-肌動蛋白的結(jié)合，R-T(34 亞砜可能轉(zhuǎn)化為S-Tp4亞砜(S-TI34亞砜可能轉(zhuǎn)化為R-TP4亞砜)。這種外消旋作用 可能使Kd值的差別消失。 實施例12分離實施例8制備的T(34-砜、實施例9制備的p胸腺素亞砜、實施例10制備的 卩胸腺素砜，得到它們各自的經(jīng)分離的S-對映體和R-對映體。
權利要求
1.一種組合物，該組合物含有經(jīng)氧化或過氧化改性的本身含有甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型、其片段、其經(jīng)分離的R-對映體或經(jīng)分離的S-對映體，而不含有外消旋的胸腺素β4亞砜；或者該組合物含有改性的具有非甲硫氨酸的氨基酸取代基的β胸腺肽、其同工型或其片段，所述非甲硫氨酸的氨基酸取代基取代了本身含有甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序列中的至少一個甲硫氨酸。
2. 如權利要求1所述的組合物，其中所述含有甲硫氨酸的卩胸腺肽為Tp4、 Tp4ala、 Tp4xen、 Tp9met、 T卩10或TP13。
3. 如權利要求1所述的組合物，其中所述氨基酸取代基為亮氨酸、纈氨酸、 異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或脯氨酸。
4. 如權利要求1所述的組合物，其中所述含有甲硫氨酸的P胸腺肽為Tp4。
5. 如權利要求1所述的組合物，其中所述氨基酸取代基為亮氨酸、纈氨酸、 異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或脯氨酸。
6. 如權利要求1所述的組合物，其中所述氨基酸取代基至少是以下之一 中性的、非極性的、疏水的或非氧化性的。
7. 如權利要求1所述的組合物，其中所述氨基酸取代基抑制所述肽的氧化。
8. 如權利要求1所述的組合物，該組合物含有改性的具有非甲硫氨酸的氨 基酸取代基的P胸腺肽、其同工型或其片段，所述非甲硫氨酸的氨基酸取代基 取代了除T(34以外的含有甲硫氨酸的P胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序 列中的至少一個甲硫氨酸，所述氨基酸取代基不是亮氨酸。
9. 一種含有T(34^肽的組合物，其含有經(jīng)改性的TP4氨基酸序列，該序列 中6位的甲硫氨酸被亮氨酸取代。
10. 如權利要求1所述的組合物，其中所述經(jīng)改性的含有甲硫氨酸的p胸 腺肽、其同工型或其片段為亞砜。
11. 如權利要求1所述的組合物，其中所述經(jīng)改性的含有甲硫氨酸的卩胸 腺肽、其同工型或其片段為砜。
12. 如權利要求1所述的組合物，其含有胸腺素p4砜。
13. 如權利要求1所述的組合物，其含有TP4^砜、T(34xen砜、T(34""t砜、 TP10砜或Tpl3砜。
14. 如權利要求1所述的組合物，其含有經(jīng)分離的R-對映體。
15. 如權利要求1所述的組合物，其含有經(jīng)分離的S-對映體。
16. 如權利要求1所述的組合物，其含有經(jīng)分離的胸腺素p4亞砜的R-對映體。
17. 如權利要求1所述的組合物，其含有經(jīng)分離的胸腺素p4亞砜的S-對映體。
18. —種形成權利要求1的p胸腺素砜肽的方法，該方法包括使本身含 有甲硫氨酸的I3胸腺肽與酸接觸，從而形成(3胸腺素砜肽。
19. 如權利要求18所述的方法，其中所述酸包括過甲酸或過乙酸中的至少一種。
20. 形成權利要求1所述的含有經(jīng)分離的R-p胸腺素亞砜或砜的組合物的 方法，該方法包括從相應的R-卩胸腺素亞砜或砜和S-卩胸腺素亞砜或砜的混合 物中分離R-p胸腺素亞砜或砜。
21. 形成權利要求1所述的含有經(jīng)分離的S-卩胸腺素亞砜或砜的組合物的方 法，該方法包括從含有相應的S-(3胸腺素亞砜或砜和R-p胸腺素亞砜或砜的混 合物中分離S-(3胸腺素亞砜或砜。
22. 形成權利要求1所定義的改性的p胸腺肽、其同工型或其片段的方法， 該方法包括使本身含有甲硫氨酸的卩胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序 列中的至少一個甲硫氨酸被非甲硫氨酸的氨基酸取代基所取代，從而形成改性 的(3胸腺肽、其同工型或其片段。
23. 如權利要求22所述的方法，其中所述氨基酸取代基為亮氨酸、纈氨酸、 異亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸。
24. 形成權利要求9所定義的T(34^肽的方法，該方法包括使Tf34的6 位的甲硫氨酸被亮氨酸所取代，從而形成T(34^肽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種組合物，其含有經(jīng)氧化或過氧化改性的含甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型、其片段、其經(jīng)分離的R-對映體或經(jīng)分離的S-對映體，而不含有外消旋的胸腺素β4亞砜；或公開了一種組合物，其含有改良的β胸腺肽、其同工型或其片段，該組合物具有氨基酸取代基，用以本身取代含有甲硫氨酸的β胸腺肽、其同工型或其片段的氨基酸序列中的至少一個甲硫氨酸；本發(fā)明還公開了形成所述組合物的方法。
文檔編號A61K38/00GK101119741SQ200680002164
公開日2008年2月6日 申請日期2006年1月17日 優(yōu)先權日2005年1月14日
發(fā)明者埃瓦爾德·漢納佩爾, 大衛(wèi)·克羅克福德, 托馬斯·赫夫, 阿蘭·L.·戈爾茨坦 申請人:雷金納克斯生物制藥公司;埃朗根-紐倫堡大學