專利名稱：：治療腎細(xì)胞癌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明總體上涉及用IL-2治療腎細(xì)胞癌的方法。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及治療腎功能受損或?qū)Ω邉┝縄L-2治療不耐受的腎細(xì)胞癌患者的方法。背景白介素-2(IL-2)是天然殺傷細(xì)胞(NK)和T-細(xì)胞增殖及功能的強(qiáng)效刺激物(Morgan等，(1976)Science193:1007-1011)。該天然產(chǎn)生的淋巴因子單用或與淋巴因子激活的殺傷(LAK)細(xì)胞或腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)聯(lián)用均顯示具有抵御各種惡性腫瘤的抗腫瘤活性(參見，例如Rosenberg等，N.Engl.J.Med.(1987)316:889-897;Rosenberg,Ann.Surg.(1988)208:121-135;T叩alian等，JClin.Oncol.(1988)6:839-853;Rosenberg等，N.Engl.J.Med.(1988)319:1676-1680;和Weber等，J.Clin.Oncol.(1992)10:33-40)。已報(bào)道了用Proleukin⑧(加利福尼亞，Emeryville的ChironCorporation的一種可商品化購(gòu)得的IL-2制劑)治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤和腎細(xì)胞癌患者中IL-2的抗腫瘤活性。其它疾病，包括淋巴瘤也顯示對(duì)IL-2治療有反應(yīng)(Gisselbrecht等，Blood(1994)83:2020-2022)。然而，獲得對(duì)腫瘤生長(zhǎng)陽(yáng)性治療結(jié)果所用的高劑量IL-2常導(dǎo)致嚴(yán)重副作用，包括發(fā)熱和寒顫、低血壓和毛細(xì)血管滲漏(血管滲漏綜合征或VLS)及神經(jīng)學(xué)改變(參見，例如Duggan等，JImmunotherapy(1992)12:115-122;Gisselbrecht等，Blood(1994)83:2081-2085;Sznol和Parkinson,Blood(1994)83:2020-2022)。轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌(RCC)通常對(duì)化療(單用一種藥物或聯(lián)用多種藥物)耐受。采用免疫療法，特別是用IL-2觀察到更大成功。用高劑量靜脈內(nèi)IL-2治療可在約15%患者中導(dǎo)致目標(biāo)腫瘤反應(yīng)(objectivetumorresponses),其中一些持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。然而，給予高劑量IL-2可伴有毛細(xì)血管滲漏綜合征，這可導(dǎo)致嚴(yán)重的有時(shí)致命的低血壓和器官灌注降低。這些毒性常將IL-2的應(yīng)用限制于由給藥經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師診治的高度選擇性患者組。已探索單用合較低劑量的IL-2或聯(lián)用其它生物藥物，例如干擾素-a和皮下給藥方案來(lái)致力于開發(fā)對(duì)該疾病更廣泛適用的療法(參見，例如Nieken等，CancerBiother.Radiopharm.(1996)11:289-295;Sleijfer等，J.Clin.Oncol.(1992)10:1119-1123;Lessoni等，AnticancerRes.(2002)22:1061-1-1064;Tourani等，J.Clin.Oncol.(1998)16:2505;Schiller等，CancerRes.(1993)53:1286-1292)。仍需要能降低毒性同時(shí)提高療效的治療腎細(xì)胞癌患者的改進(jìn)療法。發(fā)明概述本發(fā)明提供用IL-2治療腎細(xì)胞癌的有效方法。與以前高劑量IL-2治療所用的劑量相比，該方法利用較低劑量的IL-2來(lái)降低毒性。如本文的實(shí)施例所述，該治療方案能明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)并降低不良副作用，為不能耐受高劑量IL-2治療的患者提供了替代治療方法。在一方面，本發(fā)明提供治療腎細(xì)胞癌人患者的方法。在某些實(shí)施方式中，患者腎功能受損。在某些實(shí)施方式中，腎細(xì)胞癌有轉(zhuǎn)移。在某些實(shí)施方式中，患者不能耐受高劑量IL-2治療。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法包括a)每天分1-3劑給予1-52MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)l-24周;和b)停止IL-2給藥l-4周。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法包括a)每5天-1個(gè)月給予1-52MIU劑量的IL-2，重復(fù)l-24周，其中IL-2與聚乙二醇或聚氧乙烯化多元醇共價(jià)偶聯(lián)；和b)停止IL-2給藥1-4周。在還有一實(shí)施方式中，所述方法包括a)每天分1-3劑給予9-18MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)l-24周；b)停止IL-2給藥l-4周；c)每天分1-3劑給予9MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)l-24周；和d)停止IL-2給藥1-4周。在還有另一實(shí)施方式中，所述方法包括a)第一，在第一周內(nèi)5天，每天給予18MIU劑量的IL-2;b)第二，每天給予9MIU劑量的IL-2，共2天，然后每周內(nèi)3天，每天給予18MIU劑量的IL-2，重復(fù)5周；c)第三，停止IL-2給藥3周；d)第四，每周內(nèi)5天，每天給予9MIU劑量的IL-2，重復(fù)6周；和e)第五，停止IL-2給藥3周。在本文所述任一方法中，所述IL-2可以是重組產(chǎn)生的IL-2。所述IL-2可包括人IL-2或其變體，該變體包含的序列與人IL-2序列(SEQIDNO:l)有至少約70-100%序列相同性，包括這些范圍內(nèi)的任何相同性百分比，例如70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100%序列相同性。在某些實(shí)施方式中，IL-2是IL-2突變蛋白，例如但不限于Ala1()4Ser125IL-2;des-Alaides-Pro2des-Thr3des-Ser4Ala04Ser!25lL-2;禾口deS-Ala!des-Pro2des-Thr3des-Ser4des-Ser5des-Ser6lL-2。在一優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述IL-2突變蛋白是des-丙氨?；?l，絲氨酸-125人白介素-2(阿地白介素)。在某些實(shí)施方式中，所述IL-2偶聯(lián)于聚乙二醇。示范性聚乙二醇包括但不限于平均分子量為1,000-40,000道爾頓的聚乙二醇、平均分子量為2，000-20,000道爾頓的聚乙二醇和平均分子量為3,000-12,000道爾頓的聚乙二醇。在其它實(shí)施方式中，所述IL-2共價(jià)偶聯(lián)于聚氧乙烯化多元醇。示范性聚氧乙烯化多元醇包括但不限于聚氧乙烯化山梨醇、聚氧乙烯化葡萄糖和聚氧乙烯化甘油。在某些實(shí)施方式中，所述聚氧乙烯化多元醇是平均分子量為1，000-40,000的聚氧乙烯化甘油。在本文所述的任一方法中，可給予對(duì)象多輪治療足夠長(zhǎng)時(shí)間從而能至少獲得部分腫瘤反應(yīng)。在某些實(shí)施方式中，所述時(shí)間是至少6個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，所述時(shí)間是至少12個(gè)月。在某些實(shí)施方式中，所述時(shí)間足以獲得完全腫瘤反應(yīng)。在某些實(shí)施方式中，該治療方法還包括多輪治療，每輪包括a)每天分1-3劑給予9MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)1-24周；和b)停止IL-2給藥1-4周；給予所述對(duì)象的時(shí)間足以至少獲得部分腫瘤反應(yīng)。在所述任何方法中，可通過(guò)皮下、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、口服、肺部、鼻部、局部或透皮給藥或通過(guò)輸注或栓劑給予所述IL-2。在一優(yōu)選的實(shí)施方式中，皮下給予所述IL-2。本領(lǐng)域技術(shù)人員鑒于本文內(nèi)容不難想出本發(fā)明的這些和其它實(shí)施方式。附圖簡(jiǎn)述圖1比較了按照實(shí)施例3所述給藥方案的低劑量IL-2在腎功能正常(血清肌酸酐(SCr)Sl.5mg/dL)和受損(SCr〉1.5mg/dL)的腎細(xì)胞癌患者中的相對(duì)效力。圖1顯示無(wú)進(jìn)展存活期(PFS)的對(duì)象百分比與時(shí)間(以年計(jì))關(guān)系圖和存活對(duì)象百分比與時(shí)間(以年計(jì))關(guān)系圖。圖2是描述按照實(shí)施例3所述給藥方案，用低劑量IL-2治療腎功能正常(血清肌酸酐(SCr)^1.5mg/dL)和受損(SCr>1.5mg/dL)的轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者反應(yīng)總比例的柱狀圖。淡陰影顯示完全反應(yīng)(CR)的對(duì)象百分?jǐn)?shù)。濃陰影顯示部分反應(yīng)(PR)的對(duì)象百分?jǐn)?shù)。圖3比較了IV期臨床研究中，用本文所述低劑量IL-2治療群體中患者特征(PS，腎切除術(shù)前)與病例對(duì)照組。腎細(xì)胞癌患者臨床研究的病例對(duì)照組的描述可參見Pyrhonen等，(1999)J.Clin.Oncol.17:2859-2867;Motzer等，(1999)J.Clin.Oncol.17:2530-40;Ritchie等，(1999)Lancet353:14-17;Kriegmair等，(1995)Urology45:758-762;Jones等，(1993)CancerBiother.8:275-288;Gleave等，(1998)NewEngl.J.Med.338:1265-1271;Steineck等，(1990)ActaOncol.29:155-162;和Osband等，(1990)Lancet335:994-998。圖4比較了IV期臨床研究中，用本文所述低劑量IL-2治療群體中患者結(jié)果(ORR，PFS，l年的OS，2年的OS)與病例對(duì)照組。圖5比較了按照實(shí)施例3所述給藥方案，用低劑量IL-2治療的患者與用化療替代IL-2治療(Jones等，(1993)J.Clin.Oncol.12:2714-2722)的病例對(duì)照組患者的存活率。按照如下所示的風(fēng)險(xiǎn)因素分層Jones系統(tǒng)將患者再分成風(fēng)險(xiǎn)組風(fēng)險(xiǎn)良好(0-1種風(fēng)險(xiǎn)因素)、中度風(fēng)險(xiǎn)(2種風(fēng)險(xiǎn)因素)和預(yù)后不佳(所有3種風(fēng)險(xiǎn)因素)。圖5顯示了各風(fēng)險(xiǎn)組中存活對(duì)象百分?jǐn)?shù)與時(shí)間(以年計(jì))關(guān)系圖。用低劑量IL-2治療對(duì)象的數(shù)據(jù)以實(shí)線表示?；熤委煂?duì)象的數(shù)據(jù)以虛線表示。發(fā)明詳述除非另有指出，可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、重組DNA技術(shù)和免疫學(xué)常規(guī)方法實(shí)施本發(fā)明。參考文獻(xiàn)已全面解釋了這些技術(shù)。參見，例如HandbookofExperimentalImmunology(《實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)手冊(cè)》)，第I誦IV巻，(D.M.Weir禾卩CC.Blackwell編，BlackwellScientificPublications);A丄.Lehninger,Biochemistry(《生物化學(xué)》)(WorthPublishers,Inc.,最新版)；Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual(《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》)(第二版，1989);MethodsInEnzymology(《酶學(xué)方法》)(S.Colowick和N.Kaplan編，AcademicPress,Inc.)。在本文的上下文中引用的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)均全文納入本文作為參考。I.定義描述本發(fā)明時(shí)會(huì)用到以下術(shù)語(yǔ)，這些術(shù)語(yǔ)的定義如下所示。必須注意，除非另有明確指示，本說(shuō)明書和附加的權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式"一"、"一種"和"該"包括復(fù)數(shù)形式。因此，例如提及"一種化療劑"包括兩種或多種藥物的混合物，等等。本文所用的術(shù)語(yǔ)"IL-2"是衍生自淋巴因子的蛋白質(zhì)，其由正常的外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，體內(nèi)存在濃度低。IL-2由Morgan等，(1976)Science193:1007-1008首次發(fā)現(xiàn)，因其能誘導(dǎo)被激活的T淋巴細(xì)胞增殖原先稱為T細(xì)胞生長(zhǎng)因子。其是報(bào)道分子量為13,000-17,000(Gillis和Watson(1980)J.Exp.Med.159:1709)的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)為6-8.5。該定義包括全長(zhǎng)IL-2蛋白及其生物學(xué)活性片段。該術(shù)語(yǔ)也包括IL-2的表達(dá)后修飾，例如糖基化、?；?、磷酸化等。此外，為本發(fā)明的目的，該術(shù)語(yǔ)"IL-2"指包含天然序列的修飾，例如缺失、添加和取代(通常是保守性的)的蛋白質(zhì)，只要該蛋白保留了生物學(xué)活性，即抗腫瘤活性。這些修飾可以是有意的，例如通過(guò)定點(diǎn)誘變，或者可以是意外的，例如通過(guò)產(chǎn)生該蛋白質(zhì)的宿主突變或因PCR擴(kuò)增錯(cuò)誤所致。本文用術(shù)語(yǔ)"衍生自"來(lái)鑒定某分子的最初來(lái)源，但不表示對(duì)制備該分子方法的限制，這些方法可以是，例如化學(xué)合成或重組方法。術(shù)語(yǔ)"變體"、"類似物"和"突變蛋白"指參比分子的生物學(xué)活性衍生物，其保留了所需活性，例如治療本文所述腎細(xì)胞癌的抗腫瘤活性。術(shù)語(yǔ)"變體"和"類似物"通常指與天然分子相比，具有天然多肽序列和結(jié)構(gòu)并含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、取代(通常是保守性的)和/或缺失的化合物，只要這些修飾不破壞生物學(xué)活性并且如下文所述與參比分子"基本上同源"。當(dāng)兩條序列比對(duì)時(shí)，這種類似物的氨基酸序列通常與參比序列具有高度序列同源性，例如50%以上、通常是60%-70%以上、甚至更特別80%-85%或更高，例如至少90%-95%或更高。如本文所解釋的，類似物常包含相同數(shù)目的氨基酸，但可包白"還包括含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸樣分子(包括但不限于只含有氨基和/或亞氨基分子的化合物)的多肽、含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸類似物(包括，例如非天然氨基酸等)的多肽、含有取代的連接鍵以及本領(lǐng)域已知的其它修飾(天然產(chǎn)生和非天然產(chǎn)生(例如，合成)的環(huán)化、支鏈分子等)的多肽。該術(shù)語(yǔ)也包括含有一個(gè)或多個(gè)N-取代的甘氨酸殘基的分子("擬肽")和其它合成氨基酸或肽。(擬肽的描述可參見例如美國(guó)專利號(hào)5,831,005;5,877,278和5,977,301;Nguyen等，ChemBiol.(2000)7:463-473;Simon等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1992)89:9367-9371)。所述類似物或突變蛋白最好至少具有與天然分子相同的抗腫瘤活性。下文描述本領(lǐng)域已知的制備多肽類似物和突變蛋白的方法。如上所述，類似物通常包含保守性取代，即發(fā)生側(cè)鏈相似的氨基酸家族內(nèi)的那些取代。具體地說(shuō)，氨基酸通常分為4個(gè)家族(1)酸性--天冬氨酸和谷氨酸；(2)堿性-賴氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)非極性--丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)無(wú)電荷極性--甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、色氨酸、蘇氨酸、酪氨酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有時(shí)共同分類為芳族氨基酸。例如，可以合理地預(yù)計(jì)分別用異亮氨酸或纈氨酸取代亮氨酸，用谷氨酸取代天冬氨酸，用絲氨酸取代蘇氨酸，或用結(jié)構(gòu)上相關(guān)的氨基酸類似地保守性取代某氨基酸對(duì)生物學(xué)活性不會(huì)產(chǎn)生大的影響。例如，感興趣的多肽可包含最多約5-10個(gè)保守性或非保守性氨基酸取代，或者甚至最多約15-25個(gè)保守性或非保守性氨基酸取代，或者是5-25之間的任何整數(shù)，只要該分子的所需功能維持完整。通過(guò)參考本領(lǐng)域熟知的Hopp/Woods和Kyte-Doolittle圖，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難確定感興趣分子中能耐受改變的區(qū)域。"衍生物"指對(duì)感興趣的天然多肽、該天然多肽的片段或它們各自的類似物的任何合適修飾，例如糖基化、磷酸化、聚合物偶聯(lián)(如與聚乙二醇)、或添加其它外來(lái)部分，只要能保留該天然多肽所需的生物學(xué)活性。本領(lǐng)域通常有制備多肽片段、類似物和衍生物的方法。"片段"指只由完整的全長(zhǎng)序列和結(jié)構(gòu)的一部分構(gòu)成的分子。片段可以包含天然多肽的C-末端缺失、N-末端缺失和/或內(nèi)部缺失。具體蛋白質(zhì)的活性片段通常包含全長(zhǎng)分子的至少約5-10個(gè)毗連氨基酸殘基，優(yōu)選全長(zhǎng)分子的至少約15-25個(gè)毗連氨基酸殘基，最優(yōu)選全長(zhǎng)分子的至少約20-25個(gè)或更多個(gè)毗連氨基酸殘基，或者是5個(gè)氨基酸殘基和全長(zhǎng)序列之間的任何整數(shù)，只要所述片段保留了本文定義的生物學(xué)活性，例如抗腫瘤活性。"基本上純化的"通常指分離某物質(zhì)(化合物、多核苷酸、蛋白質(zhì)、多肽、多肽組合物)，使該物質(zhì)在其所處樣品中占主要百分比。某樣品中，基本上純化的組分通常占該樣品的50%、優(yōu)選80%-85%、更優(yōu)選90-95%。本領(lǐng)域熟知純化感興趣多核苷酸和多肽的技術(shù)，包括，例如離子交換層析、親和層析和根據(jù)密度沉淀。當(dāng)"分離的"指多肽時(shí)，表示所述分子與天然發(fā)現(xiàn)該分子的完整生物已分離或離散，或者所述分子基本上不含相同類型的其它生物大分子。多核苷酸有關(guān)的術(shù)語(yǔ)"分離的"指完全或部分缺乏天然與其正常相連序列的核酸分子；或天然存在，但其中連接有異源序列的序列；或與染色體脫離的分子。"同源性"指兩條多核苷酸或兩條多肽部分間的相同性百分比。當(dāng)兩條核酸序列或兩條多肽序列在確定長(zhǎng)度上顯示至少約50%、優(yōu)選至少約75%、更優(yōu)選至少約80%-85%、優(yōu)選至少約90%、最優(yōu)選至少約95%-98%序列相同性時(shí)，這些分子彼此"基本上同源"。本文所用的"基本上同源"也指顯示與指定序列完全相同的序列。"相同性"通常分別指兩條多核苷酸或多肽序列間核苷酸對(duì)核苷酸或氨基酸對(duì)氨基酸的精確一致性。相同性百分比可通過(guò)以下步驟直接比較兩個(gè)分子(參比序列和與該參比序列的相同性％未知的序列)之間的序列信息來(lái)確定比對(duì)序列，記下兩條比對(duì)序列間的確切匹配數(shù)目，除以參比序列的長(zhǎng)度并將結(jié)果乘以100。可用易得到的計(jì)算機(jī)程序來(lái)幫助分析，例如Dayhoff，M.O.的AtlasofProteinSequenceandStructure(《蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)圖集》)，(M.O.Dayhoff編.，5增干U2:353-358，NationalbiomedicalResearchFoundation,華盛頓，哥倫比亞特區(qū))中的ALIGN,該程序釆用了Smith禾卩Waterman04t/vawcwz>z^;p/.Ma^.2:482-489，1981)的用于肽分析的局部同源性算法。確定核苷酸序列相同性的程序可用WisconsinSequenceAnalysisPackage(威斯康星序列分析包)，第八版(得自GeneticsComputerGroup,Madison,WI)中，例如BESTFIT、FASTA禾卩GAP程序，這些程序也依賴Smith和Waterman算法。采用生產(chǎn)商推薦的和以上威斯康星序列分析包中描述的默認(rèn)參數(shù)不難使用這些程序。例如，具體核苷酸序列與參比序列的相同性百分比可用Smith和Waterman同源性算法確定，該算法采用默認(rèn)評(píng)分表和6個(gè)核苷酸位置的空位罰分。本
發(fā)明內(nèi)容中測(cè)定相同性百分比的另一方法是用JohnF.Collins和ShaneS.Sturrok開發(fā)的，愛丁堡大學(xué)版權(quán)所有，由IntelliGenetics，Inc.(MountainView,CA)分銷的MPSRCH程序包。這套程序包可用Smith-Waterman算法，其中評(píng)分表使用默認(rèn)參數(shù)(例如，空位開放罰12分、空位延伸罰1分、一個(gè)空位罰6分)。產(chǎn)生"匹配"值數(shù)據(jù)反映了"序列相同性"。本領(lǐng)域通常知道采用默認(rèn)參數(shù)計(jì)算序列之間相同性或類似性百分比的其它合適程序，例如另一比對(duì)程序是BLAST。例如，BLASTN和BLASTP可使用以下默認(rèn)參數(shù)遺傳密碼=標(biāo)準(zhǔn)；過(guò)濾器=無(wú)；鏈=兩條；截取值=60;預(yù)期值=10;矩陣BLOSUM62;描述=50條序列；分揀標(biāo)準(zhǔn)=高評(píng)分；數(shù)據(jù)庫(kù)=非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBankCDS翻譯+Swiss蛋白+Spupdate+PIR。這些程序的細(xì)節(jié)不難獲得?；蛘?，可通過(guò)在同源區(qū)域之間形成穩(wěn)定雙螺旋的條件下雜交二多核苷酸，然后用單鏈特異性核酸酶消化并測(cè)定消化片段的大小來(lái)確定同源性?？稍?，例如具體系統(tǒng)規(guī)定的嚴(yán)謹(jǐn)性條件下用Sourthem雜交實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒定基本上同源的DNA序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員能確定合適的雜交條件。參見，例如Sambrook等，同上；DNACloning(《DNA克隆》)，同上；NucleicAcidHybridization(《核酸雜交》)，同上。本文用于描述核酸分子的"重組體"指基因組、cDNA、病毒、半合成或合成來(lái)源的多核苷酸，按照其來(lái)源或操作方法，所述多核苷酸不含與其天然相連的全部或部分多核苷酸。用于蛋白質(zhì)或多肽的術(shù)語(yǔ)"重組體"指重組多核苷酸表達(dá)產(chǎn)生的多肽。如下文進(jìn)一步描述的，通常克隆感興趣的基因，然后在轉(zhuǎn)化的生物中表達(dá)。宿主生物在表達(dá)條件下可表達(dá)外來(lái)基因產(chǎn)生蛋白質(zhì)。本文所用的"腎功能受損"指腎小球?yàn)V過(guò)率不足的患者。在本文這種患者的特征在于血清肌酸酐水平(SCr)大于1.5mg/dL。"抗腫瘤活性"指使細(xì)胞增殖速率降低，因而使現(xiàn)有腫瘤或治療期間產(chǎn)生的腫瘤的生長(zhǎng)速率降低，和/或破壞現(xiàn)有贅生物(腫瘤)細(xì)胞或新形成贅生物細(xì)胞，因而在治療期間減小了腫瘤的總體積?？衫脛?dòng)物模型，例如人腎細(xì)胞癌的異種模型來(lái)評(píng)估這種活性。動(dòng)物模型的描述可參見，例如Pulkkanen等，InVivo(2000)14:393-400和Everitt等，Toxicol.Lett.(1995)82-83:621-625。"治療有效劑量或用量"的IL-2或其變體指如本文所述給藥時(shí)能引起陽(yáng)性治療反應(yīng)，例如抗腫瘤活性的用量。本文所用的術(shù)語(yǔ)"腫瘤反應(yīng)"指所有可檢測(cè)病灶減少或消除。腫瘤反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)以WHOReportingCriteria(WHO報(bào)道標(biāo)準(zhǔn))為基礎(chǔ)[WHOOffsetPublication,48-WorldHealthOrganization,日內(nèi)瓦，瑞士，(1979)]。每次評(píng)估時(shí)檢測(cè)所有病灶的一維或兩維測(cè)量值是理想的。當(dāng)某器官中存在多個(gè)病灶時(shí)，不可能進(jìn)行這種檢測(cè)，在這種情況下，應(yīng)最多選擇6個(gè)代表性病灶(如果可得到)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"完全反應(yīng)"(CR)指通過(guò)至少間隔4周的兩次評(píng)估檢測(cè)到所有臨床可檢測(cè)的惡性疾病消失。本文所用的術(shù)語(yǔ)"部分反應(yīng)"(PR)指通過(guò)至少間隔4周的至少兩次連續(xù)評(píng)估檢測(cè)到所有可檢測(cè)病灶的最長(zhǎng)垂直直徑的乘積總和比基線降低50%或更多，所述疾病未見可評(píng)估疾病進(jìn)展和任何新病灶的證據(jù)。評(píng)估應(yīng)顯示溶解性病灶(lyticlesion)的大小有部分降低，溶解性病灶再鈣化或增殖病灶的密度降低。IL-2在轉(zhuǎn)移性疾病部位導(dǎo)致短暫炎癥不稀奇。各病灶顯示體積增大不一定能取消PR認(rèn)定，除非在間隔至少28天的連續(xù)兩次檢測(cè)中證明病灶增大。本文所用的術(shù)語(yǔ)"進(jìn)行性疾病"(PD)指間隔至少28天的至少連續(xù)兩次評(píng)估檢測(cè)到病灶大小的至少一個(gè)兩維(最長(zhǎng)垂直直徑的乘積)或一維測(cè)量值增加25%或更多；任何可評(píng)估值顯示病灶明顯惡化；己消失的任何病灶再現(xiàn)；或出現(xiàn)新病灶。本文所用的術(shù)語(yǔ)"穩(wěn)定的疾病"(SD)或"無(wú)變化"指(a)通過(guò)兩維檢測(cè)病灶時(shí)所有可檢測(cè)病灶的最長(zhǎng)垂直直徑的乘積總和降低小于約50%或增加小于約25%,和指(b)通過(guò)一維檢測(cè)病灶時(shí)所有病灶的直徑總和降低小于約50%或增加小于約25%。不應(yīng)出現(xiàn)新的病灶。不存在完全反應(yīng)、部分反應(yīng)或進(jìn)展。由于骨病灶對(duì)治療的反應(yīng)慢，應(yīng)從開始治療至少過(guò)去8周后才適用名稱"無(wú)變化"。本文所用的術(shù)語(yǔ)"無(wú)反應(yīng)者"表示疾病穩(wěn)定或反應(yīng)微小的患者(腫瘤邊界的縮小大于25%但小于50%)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"進(jìn)展"表示與觀察到的最小總和或基線相比，所有可檢測(cè)病灶的乘積總和增加了25%(如果未降低的話)；任何可評(píng)估病灶明顯惡化；已消失的任何病灶再現(xiàn)；或出現(xiàn)任何新的病灶或部位，包括不可評(píng)估疾病的新部位；和/或可能發(fā)生早期腫瘤紅腫(initialtumorflare)(高鈣血癥、骨痛、皮膚病灶紅斑)的情況中，癥狀必須持續(xù)4周或者必須有進(jìn)展的其它證據(jù)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"總反應(yīng)"表示考慮了惡性疾病所有部位的反應(yīng)。在可檢測(cè)疾病患者中，最差的反應(yīng)應(yīng)是總反應(yīng)。不可檢測(cè)病灶無(wú)變化不會(huì)降低可檢測(cè)病灶的部分反應(yīng)；即總反應(yīng)將是部分反應(yīng)。不可檢測(cè)病灶無(wú)變化會(huì)降低可檢測(cè)病灶的完全反應(yīng)，即總反應(yīng)將是部分反應(yīng)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"反應(yīng)持續(xù)時(shí)間"表示從首次證明最佳目標(biāo)腫瘤反應(yīng)到(病灶)進(jìn)展的時(shí)間。本文所用的術(shù)語(yǔ)"存活"表示從首次給予IL-2到死亡的時(shí)間。對(duì)于反應(yīng)者，本文所用的術(shù)語(yǔ)"無(wú)進(jìn)展存活期"(PFS)表示從首次給予IL-2到腫瘤進(jìn)展、死亡或患者最后一次臨床就診(如果仍有反應(yīng)的話)的時(shí)間。II.本發(fā)明實(shí)施方式詳細(xì)描述本發(fā)明之前，應(yīng)知道本發(fā)明不限于具體制劑或過(guò)程參數(shù)，因?yàn)檫@些當(dāng)然可變。也應(yīng)知道本文所用的術(shù)語(yǔ)只是為描述本發(fā)明的具體實(shí)施方式，而不是限制性的。雖然可利用本文所述那些相似或等價(jià)的許多方法和材料來(lái)實(shí)施本發(fā)明，但本文所述的是優(yōu)選的材料和方法。本發(fā)明基于發(fā)現(xiàn)給予低劑量IL-2能安全有效地治療腎細(xì)胞癌的新治療方法。與高劑量IL-2治療相比，本文所述的治療方案能明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)且毒性較低而不良副作用減少。雖然本發(fā)明方法涉及治療已有腫瘤，但應(yīng)知道這些方法可用于預(yù)防治療期間產(chǎn)生的其它腫瘤生長(zhǎng)。本發(fā)明方法特別可用于治療腎功能受損和/或不能耐受高劑量IL-2治療的轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌對(duì)象。本發(fā)明方法所用的IL-2可以是天然或通過(guò)重組技術(shù)獲得的，可以是任何來(lái)源，包括哺乳動(dòng)物來(lái)源，例如小鼠、大鼠、家兔、靈長(zhǎng)類、豬和人。本領(lǐng)域熟知的許多物種的IL-2序列包括但不限于以下序列人IL-2(智人(//omosa內(nèi)e"";前體序列，GenBank登錄號(hào)AAH66254(序歹lJ)殘基21-153代表的成熟序列)；恒河猴IL-2(獼猴(Mflcacoww/a"o);前體序列，GenBank登錄號(hào)P51498;GenBank登錄號(hào)P51498序列殘基21-154代表的成熟序列)；橄欖狒狒(olivebaboon)IL-2(東非狒狒(尸"http://ofl""^);前體序列，GenBank登錄號(hào)Q865Y1;GenBank登錄號(hào)Q865Y1序列殘基21-154代表的成熟序列)；烏黑白眉猴(sootymangabey)IL-2(白頂白瞼猴(Cwcoce6w/or^fl^sa0^);前體序列，GenBank登錄號(hào)P46649;GenBank登錄號(hào)P46649序列殘基21-154代表的成熟序列)；食蟹彌猴IL-2(食蟹猴(Macaca/wc/cw/anX);前體序列，GenBank登錄號(hào)Q29615;GenBank登錄號(hào)Q29615序列殘基21-154代表的成熟序列)；白掌長(zhǎng)臂猿(commongibbon)IL-2(白掌長(zhǎng)臂猿(/fy/o6ato/ar);前體序列，GenBank登錄號(hào)ICGI2;GenBank登錄號(hào)ICGI2序列殘基21-153代表的成熟序列)；普通松鼠猴(commonsquirrelmonkey)IL-2(普通松鼠猴0Sm7mW5c/wrew力；前體序歹U，GenBank登錄號(hào)Q8MKH2;GenBank登錄號(hào)Q8MKH2序列殘基21-154代表的成熟序列)；奶牛IL-2(牛(5cw前體序列，GenBank登錄號(hào)P05016;GenBank登錄號(hào)P05016序列殘基21-155代表的成熟序列；也參見GenBank登錄號(hào)NP-851340報(bào)道的變體前體序列；GenBank登錄號(hào)NP-851340序列殘基24-158代表的成熟序列)；水牛IL-2(中國(guó)水牛CS"6a/w6w6aZ/";前體序列，GenBankQ95KP3;GenBankQ95KP3序列殘基21-155代表的成熟序列)；馬IL-2(馬(五？MWc^a腸);前體序列，GenBank登錄號(hào)P37997;GenBank登錄號(hào)P37997序列殘基21-149代表的成熟序列)；山羊IL-2(山羊(Co/7ra前體序列，GenBank登錄號(hào)P36835;GenBank登錄號(hào)P36835序列殘基21-155代表的成熟序列)；綿羊IL-2(綿羊(OWs前體序列，GenBank登錄號(hào)P19114;GenBank登錄號(hào)P19114序列殘基21-155代表的成熟序列)；豬IL-2(家豬0S^wro/a);前體序列，GenBank登錄號(hào)P26891;GenBank登錄號(hào)P26891(序列)殘基21-154代表的成熟序列)；赤鹿(reddeer)IL-2(馬鹿(Cerviwe/叩/n^);前體序列，GenBank登錄號(hào)P51747;GenBank登錄號(hào)P51747序列殘基21-162代表的成熟序列)；狗IL-2(狗(Cam's/a脂7/an》；前體序列，GenBank登錄號(hào)Q29416;GenBank登錄號(hào)Q29416序列殘基21-155代表的成熟序列)；貓IL-2(家貓(尸efc^to);前體序列，GenBank登錄號(hào)Q07885;GenBank登錄號(hào)Q07885序列殘基21-154代表的成熟序列)；家兔IL-2(家兔(Ory"o/agwscwm'cw/w力；前體序列，GeniBank登錄號(hào)O77620;GenBank登錄號(hào)077620序列的殘基21-153代表成熟序列)；逆戟鯨IL-2(逆戟鯨(Oc/wwo簡(jiǎn));前體序列，GenBank登錄號(hào)097513;GenBank登錄號(hào)097513序列殘基21-152代表的成熟序列)；北方海象IL-2(象海豹(M,謂，a，W簡(jiǎn)^);前體序歹!j，GenBank登錄號(hào)062641;GenBank登錄號(hào)062641序列殘基21-154代表的成熟序列)；家鼠IL-2(小鼠(M^mwc"/w力；前體序列，GenBank登錄號(hào)NP—032392;GenBank登錄號(hào)NP_032392序列殘基21-169代表的成熟序列)；西方野生小鼠IL-2(小鼠(M^^re^s);前體序列，GenBank登錄號(hào)Q08867;GenBank登錄號(hào)Q08867序列殘基21-166代表的成熟序列)；挪威大鼠IL-2(褐家鼠(Aam^"orveg/cw力；前體序列，GenBank登錄號(hào)P17108;GenBank登錄號(hào)P17108(序列)殘基21-155代表的成熟序列)；蒙古沙鼠IL-2(長(zhǎng)爪沙鼠(Men'o"eszmgw/cw/a^s);前體序列，GenBank登錄號(hào)Q08081;GenBank登錄號(hào)Q08081(序列)殘基21-155代表的成熟序列)；上述GenBank登錄號(hào)中公開的任何變體IL-2多肽；各份GenBank報(bào)道全文納入本文作為參考。雖然可用任何來(lái)源的IL-2實(shí)施本發(fā)明，但優(yōu)選IL-2衍生自人來(lái)源，特別是當(dāng)接受治療的對(duì)象是人時(shí)。在一些實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法的IL-2經(jīng)重組產(chǎn)生，例如重組人IL-2蛋白，包括但不限于從微生物宿主獲得的。本發(fā)明方法所用的組合物可包含IL-2的生物學(xué)活性變體，包括任何物種IL-2的變體。這種變體應(yīng)保留天然多肽的所需生物學(xué)活性，從而使得將含有變體多肽的藥物組合物給予對(duì)象時(shí)的療效與含有天然多肽的藥物組合物相同。即，變體多肽以類似于天然多肽所觀察到的方式在該藥物組合物中用作治療活性組分。本領(lǐng)域有測(cè)定變體多肽是否保留所需生物學(xué)活性，由此可在藥物組合物中用作治療活性組分的方法?？刹捎脼闄z測(cè)天然多肽或蛋白質(zhì)活性而專門設(shè)計(jì)的試驗(yàn)來(lái)測(cè)定生物學(xué)活性，所述試驗(yàn)包括本發(fā)明所述的試驗(yàn)。此外，可檢驗(yàn)用生物學(xué)活性天然多肽產(chǎn)生的抗體與變體多肽結(jié)合的能力，能有效結(jié)合表明多肽的構(gòu)象類似于天然多肽。天然或天然產(chǎn)生的IL-2的合適生物學(xué)活性變體可以是以上定義的該多肽的片段、類似物和衍生物。例如，可通過(guò)在克隆的編碼感興趣天然多肽的DNA序列中產(chǎn)生突變來(lái)制備該多肽的氨基酸序列變體。本領(lǐng)域熟知誘變與改變核苷酸序列的方法。參見，例如納入本文作為參考的Walker和Gaastra編，(1983)，TechniquesinMolecularBiology《(分子生物學(xué)技術(shù))》，(MacMillanPublishingCompany,紐約)；Kunkel，(1985)，尸rac.Ato/Jcad,5W.82:488-492;Kunkel等，(1987)MethodsEnzymol.154:367-382;Sambrook等，(1989)，MolecularCloning:ALaboratoryManual(《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》)，(冷泉港，紐約)；美國(guó)專利號(hào)4,873,192;及該處引用的參考文獻(xiàn)。不影響感興趣多肽生物學(xué)活性的適當(dāng)氨基酸取代的指導(dǎo)可見納入本文作為參考的Dayhoff等，(1978)AtlasofProteinS叫uenceandStructure(《蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)圖》)，(Natl.Biomed.Res.Found.，華盛頓，哥倫比亞特區(qū))的模型。優(yōu)選保守性取代，例如用具有相似特性的另一氨基酸取代一個(gè)氨基酸。保守性取代的例子包括但不限于Gly一Ala、ValoIle一Leu、Asp^Glu、Lys"Arg、Asn<^Gln禾口Phe<~>Trp"Tyr。本領(lǐng)域有關(guān)于通過(guò)殘基取代、缺失或插入來(lái)改變IL-2蛋白區(qū)域的指導(dǎo)。參見，例如以下文獻(xiàn)討論的結(jié)構(gòu)/功能關(guān)系和/或結(jié)合研究Bazan(1992)Science257:410-412;McKay(1992)Science257:412;Theze等(1996)Immunol.Today17:481-486;Buchli和Ciardelli(1993)Arch.Biochem.Biophys.307:411-415;Collins等(1988)Proc.Natl.Acad,SciUSA85:7709-7713;Kuziel等(1993)JImmunol.150:5731;Eckenberg等(1997)Cytokine9:488-498，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容全文納入本文作為參考。在感興趣IL-2多肽變體的構(gòu)建中，制作修飾以使變體繼續(xù)具有所需活性。在編碼變體多肽的DNA中進(jìn)行的任何突變顯然不應(yīng)將序列置于讀框外，優(yōu)選不產(chǎn)生可能產(chǎn)生二級(jí)mRNA結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)區(qū)。參見歐洲專利公布號(hào)75，444。IL-2的生物學(xué)活性變體與用作比較基礎(chǔ)的參比IL-2多肽分子，例如天然人IL-2的氨基酸序列有至少約70%、優(yōu)選至少約80%、更優(yōu)選至少約90%-95%或更高、最優(yōu)選至少約98%、99%或更高的氨基酸序列相同性。可用Smkh-Waterman同源性檢索算法以仿射空位檢索測(cè)定序列相同性百分比，檢索用的參數(shù)為空位開放罰分12、空位延伸罰分2和BLOSUM矩陣62。Smith-Waterman同源性檢索算法的說(shuō)明見Sm池和Waterman,^/v.々^/.M"仇(1981)2:482-489。例如，變體可有少至1-15個(gè)氨基酸殘基、少至1-10個(gè)殘基，如6-10，少至5個(gè)、少至4個(gè)、3個(gè)、2個(gè)或甚至l個(gè)氨基酸殘基不同。對(duì)于兩條氨基酸序列的最佳比對(duì)，與參比氨基酸序列相比，變體氨基酸序列的毗連區(qū)段可具有相同數(shù)目的氨基酸、額外的氨基酸殘基或刪除的氨基酸殘基。用于和參比氨基酸序列比較的毗連區(qū)段包含至少20個(gè)毗連氨基酸殘基，可以是30、40、50或更多個(gè)氨基酸殘基。可對(duì)保守殘基取代或空位相關(guān)的序列相同性進(jìn)行校正(參見Smith-Waterman同源性檢索算法)。感興趣的天然IL-2多肽的生物學(xué)活性變體與天然多肽可有少至l-15個(gè)氨基酸、少至1-10個(gè)，如6-10個(gè)，少至5個(gè)、少至4個(gè)、3個(gè)、2個(gè)或甚至1個(gè)氨基酸殘基不同。具有IL-2活性的多肽的精確化學(xué)結(jié)構(gòu)取決于許多因素。由于分子中存在可電離的氨基和羧基，可獲得具體多肽的酸性或堿性鹽，或中性形式。本文所用具有IL-2活性的多肽定義包括在合適環(huán)境條件下保留它們生物學(xué)活性的所有這種制品。此外，可用糖組分衍生(糖基化)或通過(guò)其它添加分子，例如脂質(zhì)、磷酸、乙?；葋?lái)擴(kuò)增該多肽的一級(jí)氨基酸序列。也可通過(guò)與糖偶聯(lián)來(lái)擴(kuò)增。這種擴(kuò)增在某些方面可通過(guò)生產(chǎn)性宿主的翻譯后加工系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)；可在體外引入其它這樣的修飾。在任何情況中，只要多肽的IL-2活性未受破壞，本文所用IL-2多肽的定義便包括這種修飾。在各種試驗(yàn)中，預(yù)計(jì)這種修飾可通過(guò)提高或降低多肽的活性從而定性或定量地影響其活性。此外，可通過(guò)氧化、還原或其它衍生方法來(lái)修飾鏈中的單個(gè)氨基酸殘基，可切割該多肽得到保留活性的片段。這種不破壞活性的改變不應(yīng)將這種多肽序列排除在本文所用感興趣的IL-2多肽的定義之外。本領(lǐng)域?yàn)槎嚯淖凅w的制備和應(yīng)用提供了基本指南。在制備IL-2變體過(guò)程中，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難確定對(duì)天然蛋白的核苷酸或氨基酸序列的哪種修飾所產(chǎn)生的變體將適合用作本發(fā)明方法所用的藥物組合物中的治療活性組分。本發(fā)明方法所用的IL-2或其變體可以是任何來(lái)源，但優(yōu)選重組產(chǎn)生。"重組IL-2"或"重組IL-2變體"指通過(guò)如Taniguchi等(1983)Nature302:305-310和Devos(1983)NucleicAcidsResearch11:4307-4323所述的重組DNA技術(shù)產(chǎn)生，具有與天然序列IL-2相當(dāng)生物學(xué)活性的白介素-2或其變體，或如Wang等(1984)Science224:1431-1433所述突變的IL-2。如本文所述，通常克隆IL-2的編碼基因，然后在轉(zhuǎn)化的生物中表達(dá)，優(yōu)選微生物，最優(yōu)選大腸桿菌。該宿主生物能在表達(dá)條件下表達(dá)外來(lái)基因以產(chǎn)生IL-2。也可在真核生物，例如酵母或人細(xì)胞中制備合成的重組IL-2。培養(yǎng)、收集、破裂細(xì)胞或從中提取IL-2的方法基本上描述于，例如美國(guó)專利號(hào)4,604,377;4,738,927;4,656,132;4,569,790;4,748,234;4,530,787;4，572，798;4,748,234和4,931,543;這些專利全文納入本文作為參考。變體IL-2蛋白的例子可參見歐洲專利(EP)公布號(hào)EP136,489(其公開了天然IL-2的氨基酸序列中一種或多種以下改變Asn26到Gln26;Trpl21到Phel21;Cys58到Ser58或Ala58;Cys105到Serl05或Alal05;Cysl25到Serl25或Alal25;刪除Argl20以后的所有殘基；及其Met-l形式)；1983年10月13日提交的歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?3306221.9(1984年5月30日以公布號(hào)EP109,748公布)描述的重組IL-2突變蛋白，該申請(qǐng)等同于比利時(shí)專利號(hào)893,016和共有的美國(guó)專利號(hào)4,518,584(該專利公開了重組人IL-2突變蛋白，其中按照天然人IL-2編號(hào)的125位半胱氨酸缺失或用中性氨基酸取代；丙氨?；?serl25-IL-2;和des-丙氨?；?serl25-IL-2)。也可參見美國(guó)專利號(hào)4,752,585(其公開了以下變體IL-2蛋白:alal04serl25IL國(guó)2、alal04IL-2、alal04alal25IL-2、va畫serl25IL陽(yáng)2、val104IL-2、va1104alal25IL-2、des-alalalal04serl25IL-2、des-alalalal04IL-2、des-alalalal04alal25IL陽(yáng)2、des-alalval104serl25IL-2、des-alalval104IL陽(yáng)2、des-alalval104alal25IL-2、des-alaldes-pro2alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2alal04IL-2、des-alaldes-pro2alal04alal25IL-2、des-alaldes-pro2val104serl25IL隱2、des-alaldes-pro2val104IL陽(yáng)2、des-alaldes-pro2val104alal25IL-2、des-alaldes曙pro2des-thr3alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2des國(guó)thr3alal04IL-2、des-alaldes隱pro2des-thr3alal04alal25IL-2、des-alaldes陽(yáng)pro2des隱thr3val104serl25IL-2、des-alaldes陽(yáng)pro2des-thr3val104IL誦2、des-alaldes-pro2des-thr3val104alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4val104serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4val104IL-2、des-alaldes國(guó)pro2des-thr3des-ser4val104alal25IL-2、des-alaldes隱pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des隱ser5val104alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04serl25IL-2、des-alaldes國(guó)pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104IL-2禾口des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104alal25IL-2)和美國(guó)專利號(hào)4,931,543(其公開了本文實(shí)施例所用的IL-2突變蛋白des-丙氨?；?l，絲氨酸-125人IL-2以及其它IL-2突變蛋白)。也可參見歐洲專利公布號(hào)EP200,280(1986年12月IO日公布)，其公開了104位甲硫氨酸被保守性氨基酸取代的重組人IL-2突變蛋白。例子包括以下突變蛋白ser4des-ser5alal04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5glul04serl25IL-2;des-alaldes隱pro2des-thr3des-ser4des-ser5glul04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5glul04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04serl25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04serl25IL陽(yáng)2;des陽(yáng)alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des陽(yáng)ser6glul04IL-2;禾口des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des國(guó)ser6glul04alal25IL-2。也參見歐洲專利公布號(hào)EP118,617和美國(guó)專利號(hào)5,700,913，其公開了用丙氨酸替代天然分子中發(fā)現(xiàn)的甲硫氨酸作為N-末端氨基酸的未糖基化人IL-2變體；刪除了起始甲硫氨酸而使N-末端氨基酸是脯氨酸的未糖基化人IL-2;在N-末端甲硫氨酸和脯氨酸之間插入丙氨酸的未糖基化人IL-2變體。其它IL-2突變蛋白包括WO99/60128公開的(用組氨酸或異亮氨酸取代20位的天冬氨酸，用精氨酸、甘氨酸或異亮氨酸取代80位的天冬酰胺，或用亮氨酸或谷氨酸取代126位的谷氨酰胺)，據(jù)報(bào)道這些突變蛋白對(duì)表達(dá)T細(xì)胞受體的細(xì)胞(優(yōu)選NK細(xì)胞)所表達(dá)的高親和力IL-2受體有選擇活性并且IL-2毒性降低；美國(guó)專利號(hào)5,229,109公開的突變蛋白(用丙氨酸取代38位的精氨酸，用賴氨酸取代42位的苯丙氨酸)，與天然IL-2相比，這些突變蛋白顯示與高親和力IL-2受體的結(jié)合降低但仍保留了刺激LAK細(xì)胞的能力；國(guó)際公布號(hào)WO00/58456公開的突變蛋白(天然IL-2中天然產(chǎn)生的(x)D(y)序列改變或缺失，其中D是天冬氨酸，(x)是亮氨酸、異亮氨酸、甘氨酸或纈氨酸，(y)是纈氨酸、亮氨酸或絲氨酸)，據(jù)稱這些突變蛋白能減輕血管滲漏綜合征；國(guó)際公布號(hào)WO00/04048公開的IL-2pl-30肽(對(duì)應(yīng)于IL-2的前30個(gè)氨基酸，含有IL-2的完整a-螺旋A，能與IL-2受體的b鏈相互作用)，據(jù)報(bào)道這些突變蛋白能刺激NK細(xì)胞和誘導(dǎo)LAK細(xì)胞；和WO00/04048公開的IL-2pl-30肽的突變形式(用賴氨酸取代20位的天冬氨酸)，據(jù)報(bào)道這些突變形式不誘導(dǎo)血管出血但保留了產(chǎn)生LAK細(xì)胞的能力。此外，可用聚乙二醇修飾IL-2以提高其溶解性并改變藥物動(dòng)力學(xué)分布(參見美國(guó)專利號(hào)4,766,106)。2004年3月5日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/550,868公開了預(yù)計(jì)毒性降低的IL-2突變蛋白的其它例子，該份申請(qǐng)全文納入本文作為參考。這些突變蛋白包含成熟的人IL-2的氨基酸序列，其中該成熟的人IL-2序列中用絲氨酸取代125位半胱氨酸，而且至少還有一個(gè)其它氨基酸取代，與相似用量的des-丙氨?；?l，C125S人IL-2或C125S人IL-2相比，該突變蛋白在相同試驗(yàn)條件下具有以下功能特征1)維持或提高天然殺傷(NK)細(xì)胞的增殖，和2)誘導(dǎo)NK細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子水平降低。在一些實(shí)施方式中，其它取代選自T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T麗、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、124L、K32A、K32W、N33E、P34E，.P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R、E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65LP65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、腦D、腦H、麗T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95P、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V;其中的氨基酸殘基位置按照成熟的人IL-2氨基酸序列編號(hào)。在其它實(shí)施方式中，這些突變蛋白包含成熟的人IL-2的氨基酸序列，其中該成熟的人IL-2序列中用丙氨酸取代125位半胱氨酸，而且至少還有一個(gè)其它氨基酸取代，從而使該突變蛋白具有這些相同的功能特征。在一些實(shí)施方式中，其它取代選自T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T讓、Qll、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、124L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L36S、L36.W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R,.E62T、E62Y;，K64D、K64E、K64G、K64L,.K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L80K、L80N、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、畫D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V;其中的氨基酸殘基位置按照成熟的人IL-2氨基酸序列編號(hào)。在其它實(shí)施方式中，這些突變蛋白包含成熟的人IL-2，其中在所述成熟的人IL-2序列中至少有一個(gè)其它氨基酸取代，從而使該突變蛋白具有這些相同的功能特征。在一些實(shí)施方式中，其它取代選自T7A、T7D、T7R、K8L、K9A、K9D、K9R、K9S、K9V、K9W、T10K、T畫、Q11A、Q11R、Q11T、E15A、H16D、H16E、L19D、L19E、D20E、124L、K32A、K32W、N33E、P34E、P34R、P34S、P34T、P34V、K35D、K35I、K35L、K35M、K35N、K35P、K35Q、K35T、L36A、L36D、L36E、L36F、L36G、L36H、L36I、L36K、L36M、L36N、L36P、L36R、L3.6S、L36W、L36Y、R38D、R38G、R38N、R38P、R38S、L40D、L40G、L40N、L40S、T41E、T41G、F42A、F42E、F42R、F42T、F42V、K43H、F44K、M46I、E61K、E61M、E61R,.E62T、E62Y、K64D、K64E、K64G、K64L、K64Q、K64R、P65D、P65E、P65F、P65G、P65H、P65I、P65K、P65L、P65N、P65Q、P65R、P65S、P65T、P65V、P65W、P65Y、L66A、L66F、E67A、L72G、L72N、L72T、F78S、F78W、H79F、H79M、H79N、H79P、H79Q、H79S、H79V、L80E、L80F、L80G、L8QK、L畫、L80R、L80T、L80V、L80W、L80Y、R81E、R81K、R81L、R81M、R81N、R81P、R81T、D84R、S87T、N88D、N88H、N88T、V91A、V91D、V91E、V91F、V91G、V91N、V91Q、V91W、L94A、L94I、L94T、L94V、L94Y、E95D、E95G、E95M、T102S、T102V、M104G、E106K、Y107H、Y107K、Y107L、Y107Q、Y107R、Y107T、E116G、N119Q、T123S、T123C、Q126I和Q126V;其中的氨基酸殘基位置按照成熟的人IL-2氨基酸序列編號(hào)。美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/550,868公開的其它突變蛋白包括以上鑒定的突變蛋白，除了含有起始丙氨酸；成熟的人IL-2序列的l位殘基缺失。本文所用的術(shù)語(yǔ)IL-2也應(yīng)包括IL-2融合體或偶聯(lián)物，包括將IL-2與第二蛋白融合或與聚脯氨酸或水溶性聚合物共價(jià)偶聯(lián)以降低給藥頻率或提高IL-2耐受性。例如，可采用本領(lǐng)域已知的方法將IL-2(或其本文定義的變體)與人白蛋白或白蛋白片段融合(參見WO01/79258)?；蛘?，可采用本領(lǐng)域已知的方法將IL-2與聚脯氨酸或聚乙二醇均聚物和聚氧乙烯化多元醇共價(jià)偶聯(lián)，其中所述均聚物是未取代的或在一端用烷基取代，所述多元醇是未取代的(例如參見美國(guó)專利號(hào)4，766，106;5,206,344;4,894,226和5，830，452)。本發(fā)明方法可利用含有IL-2作為治療活性組分的任何藥物組合物。本領(lǐng)域已知這種藥物組合物；包括但不限于納入本文作為參考的美國(guó)專利號(hào)4,745,180;4,766,106;4,816,440;4,894,226;4,931,544禾卩5,078,997公開的。因此，可將本領(lǐng)域已知的含有IL-2或其變體的液體、凍干或噴霧干燥的組合物制備為水性或非水性溶液或混懸液，隨后按照本發(fā)明方法給予對(duì)象。各種組合物含有IL-2或其變體作為治療或預(yù)防活性組分。"治療或預(yù)防活性組分"指專門摻入組合物的IL-2或其變體，當(dāng)將該藥物組合物給予對(duì)象時(shí)能在該對(duì)象體內(nèi)產(chǎn)生對(duì)于疾病或病癥的治療或預(yù)防所需的治療或預(yù)防反應(yīng)。藥物組合物優(yōu)選包含適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑、填充劑，或二者以盡可能減少與制備和保存期間蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和生物學(xué)活性喪失相關(guān)的問(wèn)題。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明方法所用的含IL-2的藥物組合物是含有穩(wěn)定的單體IL-2或其變體的組合物，含有多聚IL-2或其變體的組合物，和含有穩(wěn)定凍干的或噴霧干燥的IL-2或其變體的組合物。2000年10月3日提交的PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT/USOO/27156公開了含有穩(wěn)定的單體IL-2或其變體的藥物組合物，其內(nèi)容納入本文作為參考。"單體"IL-2指在本文所述藥物組合物中蛋白質(zhì)分子基本上以其單體形式而不是凝聚形式存在。因此不存在IL-2的共價(jià)或疏水性寡聚物或凝聚物。簡(jiǎn)言之，以用量足以降低保存期間IL-2或其變體形成凝聚物的氨基酸堿配制這些液體組合物中的IL-2或其變體。氨基酸堿是一種氨基酸或氨基酸混合物，其中任何給定的氨基酸以其游離堿形式或其鹽形式存在。優(yōu)選的氨基酸選自精氨酸、賴氨酸、天冬氨酸和谷氨酸。這些組合物還包含緩沖劑以將液體組合物的pH維持在能穩(wěn)定IL-2或其變體的可接受范圍內(nèi)，其中所述緩沖劑是基本上不含其鹽形式的酸、鹽形式的酸或酸及其鹽形式的混合物。所述酸宜選自琥珀酸、檸檬酸、磷酸和谷氨酸。本文將這類組合物稱為穩(wěn)定的單體IL-2藥物組合物。這些組合物中的氨基酸堿用于在液體藥物組合物保存期間穩(wěn)定IL-2或其變體以免形成凝聚物，而利用基本上不含其鹽形式的酸、鹽形式的酸或酸及其鹽形式的混合物作為緩沖劑可導(dǎo)致液體組合物具有接近等滲的重量克分子滲透壓濃度。該液體藥物組合物還可摻有其它穩(wěn)定劑(具體說(shuō)是甲硫氨酸)，非離子表面活性劑，例如聚山梨醇酯80和EDTA來(lái)進(jìn)一步穩(wěn)定該多肽。據(jù)說(shuō)這種液體藥物組合物穩(wěn)定，因?yàn)槁?lián)合加入了氨基酸堿和基本上不含其鹽形式的酸、鹽形式的酸或酸及其鹽形式的混合物導(dǎo)致該組合物與不聯(lián)用這兩種組分配制的液體藥物組合物相比保存穩(wěn)定性升高。含有穩(wěn)定的單體IL-2或其變體的這些液體藥物組合物可以水性液體形式，或待以后使用的冷凍狀態(tài)保存，或以后可重建為液體形式的干燥形式，或適合按照本發(fā)明方法給予對(duì)象的其它形式來(lái)使用。"干燥形式"指通過(guò)以下方式干燥的液體藥物組合物或制劑冷凍干燥(即，凍干；參見，例如Williams和Polli(1984)J.ParenteralSci.Technol.55:48-59)、噴霧干燥(參見Masters(1991)刊于Spray-DryingHandbook(《噴霧干燥手冊(cè)》)(第五版；LongmanScientificandTechnical,Essez，英國(guó))，第491-676頁(yè)；Broadhead等(1992)DrugDevel.Ind.Pharm.75:1169-1206;和Mumenthaler等(1994)Pharm.Res.11:12-20)，或空氣干燥(Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology25:459-470;和Roser(1991)Biopharm.4:47-53)。含有非凝聚單體狀態(tài)il-2的il-2制劑的其它例子包括Whittington和Faulds(1993)Drugs46(3):446-514所述的那些制劑。這些制劑包含重組IL-2產(chǎn)品，其中重組IL-2突變蛋白Tecdeukin(氨基末端加有甲硫氨酸殘基的非糖基化人IL-2)用0.25%人血清白蛋白(凍干粉末，用等滲鹽水配制)配制，重組IL-2突變蛋白Bioleukin(氨基末端加有甲硫氨酸殘基和用丙氨酸取代人IL-2序列中125位的半胱氨酸殘基的人IL-2)與酸混合配制為0.1-1.0mg/ml的IL-2突變蛋白，其中該制劑的pH為3.0-4.0，最好不含緩沖液，電導(dǎo)率低于1000mmhos/cm(最好低于500mmhos/cm)。參見EP373,679;Xhang等(1996)Pharmaceut.Res.13(4):643-644;和Prestrelski等(1995)Pha醒ceut.Res.12(9):1250-1258。共有的美國(guó)專利號(hào)4,604,377公開了含有多聚IL-2或其變體的藥物組合物的例子，該份專利的內(nèi)容納入本文作為參考。"多聚"指藥物組合物中存在的蛋白質(zhì)分子以平均10-50個(gè)分子締合成微凝聚形式。這些多聚物以松散結(jié)合、物理締合的IL-2分子存在。凍干形式的這些組合物可以商品名Proleukin(ChironCoipomtion，Emeryville,加利福尼亞)而商品化購(gòu)得。在該參考文獻(xiàn)中公開的凍干制劑包含選擇性氧化的、微生物產(chǎn)生的重組IL-2，其中重組IL-2與水溶性載體，例如占主要成分的甘露醇和足夠量的十二垸基硫酸鈉混合以確保重組IL-2在水中可溶。這些組合物適合于構(gòu)建成胃腸外給予的水性注射液，在人患者中穩(wěn)定且耐受良好。重建時(shí)，IL-2或其變體保留其多聚狀態(tài)。本發(fā)明方法包括含有多聚IL-2或其變體的這種凍干或液體組合物。本文將這種組合物稱為多聚IL-2藥物組合物。本發(fā)明方法也可利用含IL-2或其變體的穩(wěn)定凍千或噴霧干燥的藥物組合物，按照本發(fā)明方法給予可將這些組合物重建成液體或其它的合適形式。這些藥物組合物公開于全文納入本文作為參考的2000年11月28日提交的待批申請(qǐng)美國(guó)系列號(hào)09/724,810和2000年11月27日提交的國(guó)際申請(qǐng)PCT/US00/35452。這些組合物還可包含至少一種填充劑(bulkingagent)、至少一種含量足以在干燥過(guò)程中穩(wěn)定蛋白質(zhì)的試劑，或二者。"穩(wěn)定的"指IL-2蛋白或其變體在凍干或噴霧干燥得到固體或干粉形式的組合物后能保留其單體或多聚形式以及質(zhì)量、純度和效力等其它關(guān)鍵特性。在這些組合物中，用作填充劑的優(yōu)選載體物質(zhì)包括甘氨酸、甘露醇、丙氨酸、纈氨酸或它們的任何組合，最優(yōu)選甘氨酸。根據(jù)所用的試劑，該制劑中填充劑的含量范圍是0%-約10%(w/v)。用作穩(wěn)定劑的優(yōu)選載體物質(zhì)包括任何糖或糖醇或任何氨基酸。優(yōu)選的糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、山梨醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖或它們的任何組合，優(yōu)選蔗糖。當(dāng)穩(wěn)定劑是糖時(shí)，其含量范圍是約0%-約9.0%/力、優(yōu)選約0.5%-約5.0%、更優(yōu)選約1.0%-約3.0%、最優(yōu)選約1.0%。當(dāng)穩(wěn)定劑是氨基酸時(shí)，其含量范圍是約0%-約1.0%(w/v)、優(yōu)選約0.3%-約0.7%、最優(yōu)選約0.5%。這些穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥組合物可任選包含甲硫氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)或其鹽的一種，例如EDTA二鈉或能保護(hù)IL-2或其變體以免甲硫氨酸被氧化的其它螯合劑。以此方式使用這些試劑描述于納入本文作為參考的待批美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)系列號(hào)60/157696?？捎镁彌_劑配制穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥組合物，這些組合物處于液相時(shí)(例如配制期間或干粉形式的組合物重建后)，所述緩沖劑可將該藥物組合物的pH維持在可接受范圍內(nèi)，優(yōu)選在約pH4.0-pH8.5之間。選擇的緩沖液應(yīng)使得它們與干燥方法相容，并且不影響蛋白質(zhì)在加工期間及保存時(shí)的質(zhì)量、純度、效力和穩(wěn)定性。上述穩(wěn)定的單體、多聚體和穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥的IL-2藥物組合物代表了本發(fā)明方法所用的合適組合物。然而，本發(fā)明方法包括含IL-2或其變體作為治療活性組分的任何藥物組合物。給藥利用低劑量IL-2或其變體給予治療上有效的至少一輪治療。"治療有效輪次的治療"指對(duì)于治療腎細(xì)胞癌(特別是轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌)個(gè)體，給予時(shí)能導(dǎo)致陽(yáng)性治療反應(yīng)的一輪治療。如本文所述，特別感興趣的是用能提供抗腫瘤療效的低劑量IL-2進(jìn)行一輪治療。"陽(yáng)性治療反應(yīng)"指按本發(fā)明方法進(jìn)行治療的個(gè)體顯示腎細(xì)胞癌的一種或多種癥狀有改善。因此，例如，"陽(yáng)性治療反應(yīng)"可以是與治療有關(guān)的疾病改善，和/或與治療有關(guān)的疾病的一種或多種癥狀改善。因此，例如，陽(yáng)性治療反應(yīng)指以下一種或多種疾病改善(1)腫瘤體積降低；(2)癌細(xì)胞數(shù)目減少；(3)抑制(即，至一定程度減緩，優(yōu)選停滯)腫瘤生長(zhǎng)；(4)抑制(即，一定程度減緩，優(yōu)選停滯)癌細(xì)胞滲入周圍器官；(5)抑制(即，一定程度減緩，優(yōu)選停滯)腫瘤轉(zhuǎn)移；和(6)—定程度上緩解癌癥相關(guān)的一種或多種癥狀。這種治療反應(yīng)可以進(jìn)一步表征為一定程度的改善。因此，例如改善可以表征為完全反應(yīng)。"完全反應(yīng)"指對(duì)于開始研究時(shí)的所有初始異?；蜿?yáng)性部位，通過(guò)體檢、實(shí)驗(yàn)室、核與放射顯影研究(即，CT(計(jì)算機(jī)化斷層顯像)和/或MRI(磁共振成象))和其它非侵入性方法證實(shí)所有可檢測(cè)或可評(píng)估疾病的所有癥狀或體征消失?；蛘撸膊〉母纳瓶蓺w類為部分反應(yīng)。"部分反應(yīng)"指在至少28天中，與治療前的測(cè)量值相比，所有可檢測(cè)病灶的垂直直徑乘積總和降幅大于50%，可評(píng)估的疾病無(wú)進(jìn)展，也未形成任何新的病灶。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，含IL-2或其變體的藥物組合物是緩釋制劑或利用緩釋裝置給予的制劑。本領(lǐng)域熟知這種裝置，包括例如透皮貼片和能以連續(xù)、穩(wěn)定狀態(tài)的方式長(zhǎng)時(shí)間遞送各種劑量藥物的微型可植入泵從而實(shí)現(xiàn)非緩釋藥物組合物的緩釋作用?？砂凑毡绢I(lǐng)域已知的任何醫(yī)學(xué)上可接受方法給予含IL-2或其變體的藥物組合物。合適的給藥途徑包括胃腸外給藥，例如皮下(SC)、腹膜內(nèi)(IP)、肌肉內(nèi)(IM)、靜脈內(nèi)(IV)或輸注、口服和肺部、鼻部、透皮和栓劑。當(dāng)組合物經(jīng)肺部遞送給予時(shí)，可調(diào)整治療有效劑量從而使血流中藥物(例如IL-2或其變體)的可溶性水平等于用胃腸外(例如，SC、IP、IM或IV)給予治療有效劑量獲得的水平。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，通過(guò)IM或SC注射給予含IL-2或其變體的藥物組合物，特別是通過(guò)IM或SC注射至癌癥治療方案所用一種或多種治療藥物所給予的局部區(qū)域。影響IL-2給予量的因素包括但不限于給藥方式、給藥頻率、所治療的具體疾病、疾病的嚴(yán)重性、病史、患者是否同時(shí)用另一藥物治療、所治療個(gè)體的年齡、身高、體重、健康狀況和身體條件。隨著所治療對(duì)象體重增加，通常優(yōu)選較高劑量的該藥物。為獲得效力，在特定時(shí)間內(nèi)IL-2的血液水平必須在某特定水平以上。效力依賴于劑量，較高水平的IL-2可得到較強(qiáng)的抗腫瘤效力。為盡可能降低毒性，特定時(shí)間內(nèi)IL-2的血液水平必須低于確定水平，并且持續(xù)特定時(shí)間(必須有"休息期(restperiod)"以清除IL-2)。艮卩，在給予下一劑前，藥物在某確定時(shí)間內(nèi)必須低于某確定水平。兩劑之間的休息期越短，毒性越大。在某些實(shí)施方式中，治療腎細(xì)胞癌患者的方法包括用低劑量IL-2(l-52MIU)進(jìn)行一輪治療，然后是休息期以使患者從IL-2的不良作用中"恢復(fù)"?？砂凑彰咳战o藥方案給予多劑量的IL-2或其變體，例如每天分1-3劑給予1-52MIU，或更優(yōu)選9-18MIU的IL-2，每周3-6天，共l-24周，然后是休息期。休息期最好在給藥方案之間為1-4周。此后可進(jìn)行IL-2給藥的新方案以再次加強(qiáng)免疫系統(tǒng)。在某些實(shí)施方式中，第二輪治療包括每天分1-3次給予9MIU，每周3-6天，共l-24周，然后是休息期。在某些實(shí)施方式中，治療腎細(xì)胞癌患者的方法包括一輪治療，用低劑量IL-2(9-18MIU)治療6周，每周5天每天1次(qdX5天)，然后是不給予IL-2的1-4周"休息期"；和后一輪治療，包括用9MIU劑量的IL-2治療6周，每周5天每天1次，然后是不給予IL-2的l-4周休息期。在某些實(shí)施方式中，后一輪治療重復(fù)多次，該輪次包括用9MIU劑量的IL-2治療6周，每周5天每天l次，然后是不給予IL-2的l-4周休息期。在一優(yōu)選的實(shí)施方式中，通過(guò)以下方式治療腎細(xì)胞癌患者第一，在一周的5天每天給予18MIU劑量的IL-2;第二，在每周中，先每天給予9MIU劑量的IL-2，共2天，再每天給予18MIU劑量的IL-2，共3天，重復(fù)5周；第三，3周不給予IL-2;第四，每周的5天每天給予9MIU劑量的IL-2，重復(fù)6周；和第五，3周不給予IL-2。在某些實(shí)施方式中，用于治療腎細(xì)胞癌患者的IL-2與聚乙二醇或聚氧乙烯化多元醇共價(jià)偶聯(lián)。在某些實(shí)施方式中，用與聚乙二醇或聚氧乙烯化多元醇共價(jià)偶聯(lián)的IL-2的一輪治療包括每5天-1個(gè)月給予1-52MIU的IL-2，重復(fù)1-24周，然后是休息期。在某些實(shí)施方式中，采用本文所述任一方法給予患者多輪治療的時(shí)間應(yīng)足以獲得部分腫瘤反應(yīng)，例如該時(shí)間有至少6個(gè)月或至少12個(gè)月。該時(shí)間優(yōu)選足以獲得完全腫瘤反應(yīng)。在某些實(shí)施方式中，腎細(xì)胞癌患者的腎功能受損(SCr>1.5mg/dL)，對(duì)高劑量IL-2治療不耐受或不適合?？赏ㄟ^(guò)本文所述任一方法用低劑量IL-2治療這種患者。當(dāng)按照上述給藥方案治療的患者顯示部分反應(yīng)，或在長(zhǎng)期消退后復(fù)發(fā)時(shí)，可能需要后續(xù)治療過(guò)程以實(shí)現(xiàn)疾病的完全消退。因此，在第一期治療的停止期后，患者可以再接受一次或多次IL-2治療。本文將治療期之間的這種停止期稱為中斷時(shí)期。應(yīng)知道中斷時(shí)期的長(zhǎng)度取決于任何先前IL-2治療期所達(dá)到的腫瘤反應(yīng)程度(即，完全還是部分)。III.實(shí)驗(yàn)下文是實(shí)施本發(fā)明的具體實(shí)施方式的實(shí)施例。提供這些實(shí)施例只是為了說(shuō)明目的，而不是要以任何方式限制本發(fā)明的范圍。已努力確保所用數(shù)值(例如，用量、溫度等)的精確性，但當(dāng)然應(yīng)考慮到一些實(shí)驗(yàn)失誤和偏差。實(shí)施例1IV期人臨床試驗(yàn)的IL-2藥物組合物所用的IL-2制劑由加利福尼亞，Emeryville的ChironCorporation生產(chǎn)，商品名為Proleukin⑧。該制劑中的IL-2是重組產(chǎn)生、非糖基化的人IL-2突變蛋白，稱為阿地白介素，其與天然人IL-2氨基酸序列的區(qū)別在于刪除了起始丙氨酸殘基和用絲氨酸殘基取代125位的半胱氨酸殘基(稱為des-丙氨?；?l，絲氨酸-125人白介素-2)。如全文納入本文作為參考的美國(guó)專利號(hào)4,931,543所述，用大腸桿菌表達(dá)該IL-2突變蛋白，然后用透析和陽(yáng)離子交換層析純化。按商品名Proleukin⑧投入市場(chǎng)的該IL-2制劑提供為無(wú)菌、白色到灰白色無(wú)防腐劑的凍干粉末，每小瓶含1.3mg蛋白質(zhì)(22MIU)。實(shí)施例2IV期人臨床試驗(yàn)中用IL-2治療轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者的選擇標(biāo)準(zhǔn)以下選擇標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者選擇標(biāo)準(zhǔn)患者證實(shí)患有腎細(xì)胞癌(透明細(xì)胞的、乳頭狀、混合型或肉瘤樣腫瘤)并有轉(zhuǎn)移性疾病的證據(jù)；進(jìn)入研究4周內(nèi)確定患者患有可檢測(cè)或可評(píng)估的腫瘤疾病；患者的Karnofsky體力狀態(tài)260，對(duì)應(yīng)于東部協(xié)作腫瘤組織(EasternCooperativeOncologyGroup)(ECOG)體力狀態(tài)(PS)是0-2;患者必須大于18歲；血清肌酸酐水平低于1.8mg/dL證實(shí)患者具有足夠的腎功能；血紅蛋白210gm/dl;白細(xì)胞24,000/ml;血小板^100,000/ml;促甲狀腺激素(TSH)水平正常；和患者愿意并能書面告知同意參與該項(xiàng)研究，包括全部所需的研究過(guò)程和隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)患者以前用Proleukin⑧治療過(guò)；用計(jì)算機(jī)化斷層顯像(CT)和/或磁共振成象(MRI)掃描檢測(cè)到患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有活動(dòng)性疾?。灰阎颊邔?duì)Proleukin的任一組分過(guò)敏；患者正同時(shí)進(jìn)行涉及藥物研究的臨床試驗(yàn)，或者患者在之前的4周內(nèi)接受了試驗(yàn)用藥；患者以前接受過(guò)腎細(xì)胞癌的全身性治療(已接受腎細(xì)胞癌手術(shù)的患者符合選擇標(biāo)準(zhǔn)；已接受放療至病灶指數(shù)消失(non-indexlesion)的患者在完成放療兩周后對(duì)于研究合格)；患者患有紐約心臟協(xié)會(huì)(NewYorkHeartAssociation)(NYHA)定義的III或IV類心臟?。灰阎颊呋加凶陨砻庖呒膊?，例如克羅恩病；婦女患者處于妊娠期或哺乳期；和患者患有轉(zhuǎn)移性疾病，并且外科手術(shù)摘除轉(zhuǎn)移灶后沒(méi)有疾病證據(jù)。實(shí)施例3給予人的低劑量IL-2的IV期臨床研究臨床研究設(shè)計(jì)與目標(biāo)設(shè)計(jì)的交替給藥的白介素-2(ILIAD)的IV期臨床研究是前瞻性、多中心、單臂、標(biāo)簽公開的研究以評(píng)估皮下給予轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者低劑量Proleukin的效力和安全性。第一終點(diǎn)是客觀反應(yīng)率(objectiveresponserate)(ORR)^16%。第二終點(diǎn)包括完全反應(yīng)(CR)和部分反應(yīng)(PR)率，反應(yīng)持續(xù)時(shí)間、無(wú)進(jìn)展存活(PF)、總存活(OS)和不良反應(yīng)發(fā)生率(AE)。參與者包括社區(qū)和科學(xué)機(jī)構(gòu)的臨床研究人員，大多數(shù)是社區(qū)臨床醫(yī)師。ILIAD篩選了270位患者，其中登記了267位。臨床前評(píng)估包括完整的病史、體檢、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC)、血清化學(xué)成分、促甲狀腺激素(TSH)水平和適當(dāng)?shù)姆派滹@影研究來(lái)證實(shí)轉(zhuǎn)移性疾病的部位。治療期間的評(píng)估包括先進(jìn)行CBC、血清化學(xué)成分、TSH和體檢，再開始新一輪治療，各輪治療的第4周前進(jìn)行CBC，在各患者接觸時(shí)評(píng)估AE。兩輪后，在新的各輪治療開始前需要作放射顯影評(píng)估以前確定的轉(zhuǎn)移性疾病部位。病例報(bào)告表格記錄了轉(zhuǎn)移性疾病的可評(píng)估面積和作出這種測(cè)定的方法。ILIAD治療方案所有患者按照以下治療時(shí)間表接受Proleukin:<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>后續(xù)輪次7-9周休息Proleukin⑧以18百萬(wàn)國(guó)際單位(MIU)/天給予5天(1周，1輪)、以9MIU/天給予2天，然后以18MIU/天給予3天(2-6周，1輪)和以9MIU/天給予5天(l-6周，輪次22)。全部治療輪次是9周，其中6周治療，3周不治療。治療時(shí)間應(yīng)持續(xù)至少兩輪。研究人員可自行決定從研究中排除具有進(jìn)行性疾病的患者，而有反應(yīng)者繼續(xù)治療。每9周評(píng)估腫瘤反應(yīng)直至疾病有進(jìn)展，最多兩年。評(píng)估第一年和第二年患者的存活。ILIAD意向治療(intent-to-treat)(ITT)人群(n=263位患者)接受至少一劑量的研究藥物。根據(jù)該方案規(guī)定的指導(dǎo)對(duì)毒性修改劑量。經(jīng)歷3級(jí)或更高級(jí)毒性的患者應(yīng)停止治療直至癥狀消失，隨后將劑量減半。如果耐受，逐漸將劑量回升至所述方案劑量。研究人員自行決定劑量的回升速度和最終劑量。按照該方案，任何耙劑量應(yīng)足夠低從而患者能看門診接受Proleukin,但也應(yīng)足夠高以確保全身性吸收(皮下給藥的劑量范圍一般是5-10MIU/天)。毒性持續(xù)兩周以上的患者從該項(xiàng)研究中排除。收集到總共270位患者的數(shù)據(jù)。270位患者中有3位未能篩選，4位登記了但從未給藥。其余263位患者至少服用一劑量的研究藥物，他們符合分析條件(意向治療人群)。根據(jù)263位患者的給藥記錄，142位患者接受兩輪研究藥物(符合方案人群(per-protocolpopulation))。65%的意向治療患者和70.4%符合方案患者因疾病進(jìn)展或復(fù)發(fā)而退出。效力兩輪治療后，研究人員評(píng)估患者的進(jìn)展或反應(yīng)(見下表)。反應(yīng)類別是"完全反應(yīng)"(CR)、"部分反應(yīng)"(PR)、"進(jìn)行性疾病"(PD)、"穩(wěn)定疾病"(SD)和"未測(cè)定"(UD)。研究人員將263位意向治療患者中的6位(2.3%)評(píng)價(jià)為完全反應(yīng)者，12位(4.6%)評(píng)價(jià)為部分反應(yīng)者。48位意向治療患者(18.3%)具有穩(wěn)定疾病，156位(59.3%)具有進(jìn)行性疾病狀態(tài)。38位(14.4%)意向治療患者視作未確定，3位(1.1%)未評(píng)價(jià)?？偡磻?yīng)率(完全反應(yīng)加上部分反應(yīng))是6.8%，95。/?？尚畔迏^(qū)間(CI)是4.1-10.6%。研究人員將142位符合方案(g卩，接受兩輪研究藥物)患者中的6位(4.2%)評(píng)價(jià)為完全反應(yīng)者，11位(7.7%)評(píng)價(jià)為部分反應(yīng)者?？偡磻?yīng)率(完全反應(yīng)加上部研究人員對(duì)最佳反應(yīng)的評(píng)估<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>在263位意向治療患者中，169位(64.3%)在2年隨訪期間死亡。在142位符合方案患者中，73位(51.4%)死亡。下表總結(jié)了存活的分析結(jié)果。存活<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>腎功能亞組通過(guò)比較腎功能正常(血清肌酸酐(SCr)S1.5mg/dL)患者與腎功能受損(SCPl.5mg/dL)患者的ILIAD研究數(shù)據(jù)進(jìn)行亞組分析。腎功能正常和受損亞鉅的比較分別顯示腎切除術(shù)(73與70%)，PS=0(28與23%)，PS=1(59與60%)和PS=2-3(13與17%)的頻率相似。參見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>比較腎功能正常與受損患者的效力發(fā)現(xiàn)腎功能正常和受損的患者具有相似的結(jié)果。圖l-3描述了實(shí)施上述方案后對(duì)腎功能正常(血清肌酸酑(SCr)^1.5mg/dL)與腎功能受損(SCr>1.5mg/dL)轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者用較低劑量IL-2治療后相對(duì)效力的比較。與腎功能正常的患者相比，腎功能受損患者的PR(5.7與4.3。/。)、ORR(7.6與6.7%)、中值PFS(0.34與0.33年)、PFS-1年(28與18%)、PFS-2年(16與10%)和OS-2年(39與31%)、CR(1.9與2.4%)發(fā)生率相似或較高。腎功能受損亞組的中值存活(1.0與1.1年)和OS-l年(52與55%)略低。比較腎(功能)亞組的療效參見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>當(dāng)以先前腎切除術(shù)和體力狀態(tài)的腎功能亞組為對(duì)照時(shí)，PFS和OS維持相當(dāng)。采用標(biāo)準(zhǔn)SAS程序產(chǎn)生的單變量無(wú)條件邏輯消退模型來(lái)評(píng)估ORR的優(yōu)勢(shì)比(oddsratio)和Wald95%可信限區(qū)間。當(dāng)以腎切除術(shù)(優(yōu)勢(shì)比=0.52)、PS=0(優(yōu)勢(shì)比二0.57)和PS二1(優(yōu)勢(shì)比=0.63)為對(duì)照亞組時(shí)，腎功能受損患者的ORR在數(shù)值上低于腎功能正?；颊?。然而，這些差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著，由于腎功能正常(11=14)和腎功能受損(11=4)亞組中反應(yīng)者的數(shù)目少，故應(yīng)小心解釋。釆用Cox正比危險(xiǎn)回歸模型獲得PFS及OS的危險(xiǎn)比和95%可信限區(qū)間。當(dāng)以腎切除術(shù)(危險(xiǎn)比=0.86)、非腎切除術(shù)(危險(xiǎn)比=1.09)、PS二0(危險(xiǎn)比=1.15)和PS二1(危險(xiǎn)比=0.71)為對(duì)照亞組時(shí)，腎功能受損患者的PFS與腎功能正?；颊呦嗨啤．?dāng)以腎切除術(shù)(危險(xiǎn)比=0.92)、非腎切除術(shù)(危險(xiǎn)比二1.03)、PS-0(危險(xiǎn)比-l.ll)和PS-l(危險(xiǎn)比=0.82)為對(duì)照亞組時(shí)，腎功能受損患者的存活率與腎功能正?；颊呦嗨啤Ｒ娤卤?。ILIAD亞組的單變量評(píng)估(SCr〉1.5與51.5mg/dL)<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>NE=未評(píng)估與病史對(duì)照比較文獻(xiàn)檢索鑒定到以前未用免疫療法治療的腎細(xì)胞癌患者研究中使用安慰劑或假安慰劑對(duì)照組的8份出版物(Pyrhonen等，(1999)J.Clin.Oncol.17:2859-2867;Motzer等，(1999)J.Clin.Oncol.17:2530-40;Ritchie等，(1999)Lancet353:14-17;Kriegmair等，(1995)Urology45:758-762;Jones等，(1993)CancerBiother.8:275-288;Gleave等，(1998)NewEngl.J.Med.338:1265-1271;Steineck等，(1990)ActaOncol.29:155-162;Osband等，(19卯)Lancet335:994-998)。在這些公布的研究中對(duì)照組的結(jié)果極為不同，最有可能是因?yàn)閷?duì)照治療(不治療、激素治療或化療)、研究設(shè)計(jì)、患者選擇標(biāo)準(zhǔn)和患者以前的治療有差異。見下表。病例對(duì)照數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>圓括號(hào)中是95Q/。CI，方括號(hào)中是范圍UK=未知，NE=未評(píng)估MPA=甲羥孕酮，VLB=長(zhǎng)春堿，CIM=西米替丁腎功能正常亞組、腎功能受損亞組和ILIADITT群的結(jié)果比病例對(duì)照組的大多數(shù)檢測(cè)結(jié)果更可取。對(duì)于ILIAD腎功能亞組和ITT群，PS=0、PS二l禾口先前腎切除術(shù)的患者百分比接近該病例對(duì)照組范圍的中值，提示ILIAD患者群與病例對(duì)照的相當(dāng)(見圖3)。相反，ILIADITT群和腎功能亞組在大多數(shù)效力結(jié)果(43/50，86%)數(shù)值上比病例對(duì)照的更可取(見圖4)。與病例對(duì)照7/50(14%)的效力結(jié)果相比，腎功能亞組和ITT群的結(jié)果相同或數(shù)值較低Stdneck(1990)研究中的CR;Osband(1990)研究中的PR;Ritchie(1999)研究中的PR和ORR;Gleave(1998)研究中的CR、中值存活率和OS-1年。當(dāng)終點(diǎn)比較時(shí)，對(duì)于大多數(shù)反應(yīng)(16/21，76%)、PFS(8/8，100%)和存活率(19/21，90%)結(jié)果，ILIAD研究比病例對(duì)照更可取。此外，通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)組分層的ILIAD患者的存活率高于病例對(duì)照。將用低劑量IL-2治療的患者的存活率與用化療代替IL-2治療患者的病例對(duì)照組(Jones等，同上所述)的存活率作比較。按照風(fēng)險(xiǎn)因素分層的Jones系統(tǒng)將患者再分為各風(fēng)險(xiǎn)組，該系統(tǒng)基于聯(lián)合以下鑒定的風(fēng)險(xiǎn)因素EC0GPS>1、從診斷到治療少于2年的時(shí)間、多個(gè)部位的轉(zhuǎn)移灶。將患者再分為以下Jones風(fēng)險(xiǎn)組風(fēng)險(xiǎn)良好(0-1種風(fēng)險(xiǎn)因素)、風(fēng)險(xiǎn)適度(2種風(fēng)險(xiǎn)因素)和預(yù)后不佳(所有3種風(fēng)險(xiǎn)因素)。圖5顯示了不同的各風(fēng)險(xiǎn)組存活對(duì)象百分比與時(shí)間(以年計(jì))的關(guān)系圖。與病例對(duì)照相比，在所有3個(gè)Jones風(fēng)險(xiǎn)組中，按照實(shí)施例3所述方案用低劑量IL-2治療的患者的存活率數(shù)值較高。然而，ILIAD患者和病例對(duì)照之間存活率的差異看來(lái)隨風(fēng)險(xiǎn)組變得不佳而降低。見下表。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>圓括號(hào)中是95%<:1毒性研究人員將不良反應(yīng)測(cè)定為與研究治療方法"不相關(guān)"、"可能相關(guān)()"或"多半相關(guān)(probablyrelated)"。最常發(fā)生的不良反應(yīng)是疲倦(41.1%的患者)、然后是寒顫(36.9%)、惡心(36.5%)、發(fā)熱(32.7%)、嘔吐NOS(22.1%)和厭食(20.9%)。在至少10%患者中觀察到以下治療相關(guān)的不良反應(yīng)(見下表)<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>低劑量Proleukin⑧的腎毒性低于高劑量Proleukin⑧。對(duì)于SCr升高超過(guò)基線的患者，高劑量Proleukin⑧治療顯示可導(dǎo)致明顯的腎毒性，第一輪治療中檢測(cè)到平均峰值SCr>4mg/dL，第二輪治療中是>6mg/dL(Belldegrun等，1987)。對(duì)于SCr在正?；€的患者，觀察到平均峰值SCr有較低但仍驚人的上升(升至3mg/dL)。60。/。的腎功能受損患者的SCr水平在30天內(nèi)回復(fù)至基線，與之相比，腎功能正常的患者是98%。這些結(jié)果提示高劑量Proleukin⑧在腎功能受損患者中產(chǎn)生的腎毒性高于腎功能正常患者。相反，低劑量Proleukin⑧在治療期間只導(dǎo)致SCr略微上升(通?！?mg/dL)，在腎功能正常和受損亞組之間相當(dāng)。各亞組罕見SCr升高〉3mg/dL。SCr偏差在此范圍(<3mg/dL)內(nèi)的患者估計(jì)不會(huì)有嚴(yán)重癥狀或需要特殊治療。腎功能正常和受損患者亞組之間的不良反應(yīng)(AE)的頻率和等級(jí)通常相當(dāng)。與正常亞組相比，腎功能受損亞組的嚴(yán)重不良反應(yīng)(SAE)(26與30%)、AE(77與89y。)和藥物相關(guān)AE(76與81%)的總數(shù)略低。腎功能受損亞組中導(dǎo)致中斷的AE數(shù)略高(30與25。/。)。在正常和腎功能受損亞組中，AE的最高百分比是3級(jí)(42與34%)，然后分別是2級(jí)(33與23%)、4級(jí)(9與13)、l級(jí)(4與8%)和5級(jí)(1與0%)。腎功能正常和腎功能受損亞組之間最常見的不良反應(yīng)(各亞組報(bào)道有>10%的患者)通常相當(dāng)，分別包括疲倦(43與45%)、寒顫(38與36%)、發(fā)熱(39與23%)、注射部位反應(yīng)(18與21%)、惡心(39與36%)、嘔吐(25與19%)、腹瀉(20與19%)、皮炎NOS(18與11%)、厭食(23與19%)、咳嗽(20與9%)、呼吸困難NOS(13與26%)、失眠(9與17%)、關(guān)節(jié)痛(12與13%)、肌痛(11與9%)、下肢水腫(8與17%)、體重降低(11與4%)和低血壓NOS(6與11%)。腎功能亞組之間LDProleukin⑧的腎毒性相似。通過(guò)比較各輪治療期間SCr水平與基線檢測(cè)值來(lái)評(píng)估LDProleukin⑧的腎毒性。雖然在治療期間大量患者的峰值SCr水平略微上升，但在腎功能受損亞組中只有5位患者，腎功能正常亞組中有8位患者觀察到峰值SCr>2.0mg/dL。峰值SCr>3.0mg/dL不常見，只在腎功能受損亞組的l位患者，腎功能正常亞組的2位患者中觀察到。結(jié)論對(duì)于治療腎功能受損的轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者(其對(duì)高劑量IL-2治療不適合)，低劑量白介素-2看來(lái)安全而有效。IV期臨床研究的結(jié)果表明低劑量Proleukin⑧在腎功能正常和腎功能受損的患者中均能產(chǎn)生相似的應(yīng)答率、無(wú)進(jìn)展存活期(PFS)和總存活率(OS)。用低劑量Proleukin⑧治療腎功能正常和腎功能受損患者的效力結(jié)果通常高于病例對(duì)照組報(bào)道的。腎功能亞組之間低劑量Proleukin⑧(造成)的腎毒性相似，遠(yuǎn)低于用高劑量Proleukin⑧的腎功能受損患者中觀察到的。實(shí)施例4給予低劑量IL-2治療轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌將IL-2制劑給予組織學(xué)診斷患轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌的患者。該制劑中IL-2的濃度約為22MIU。皮下注射給予該IL-2制劑。治療包括9-周兩輪次。第一輪包括用9-18MIU的低劑量IL-2治療6周，每天1次，每周5天(qdX5d)，然后是3周休息期。第二輪包括用9MIU的低劑量IL-2治療6周，每天1次，每周5天(qdX5d)，然后是3周休息期。在有反應(yīng)患者中重復(fù)幾輪治療。雖然說(shuō)明并描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但應(yīng)該知道可對(duì)其作出各種變化，而不脫離本發(fā)明的構(gòu)思和范圍。權(quán)利要求1.一種治療腎細(xì)胞癌人患者的方法，其中所述患者的腎功能受損，所述方法包括a)每天分1-3劑給予1-52MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)1-24周；和b)停止IL-2給藥1-4周。2.—種治療腎細(xì)胞癌人患者的方法，其中所述患者的腎功能受損，所述方法包括a)每5天-l個(gè)月給予l-52MIU劑量的IL-2，重復(fù)l-24周，其中所述IL-2與聚乙二醇或聚氧乙烯化多元醇共價(jià)偶聯(lián)；和b)停止IL-2給藥1-4周。3.—種治療腎細(xì)胞癌人患者的方法，所述方法包括a)每天分1-3劑給予9-18MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)l-24周；b)停止IL-2給藥1-4周;c)每天分l-3劑給予9MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)l-24周；和d)停止IL-2給藥1-4周。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括a)第一，在第一周內(nèi)5天每天給予18MIU劑量的IL-2;b)第二，每天給予9MIU劑量的IL-2，共2天，然后每周內(nèi)3天每天給予18MIU劑量的IL-2，重復(fù)5周；c)第三，停止IL-2給藥3周；d)第四，每周內(nèi)5天每天給予9MIU劑量的IL-2，重復(fù)6周；和e)第五，停止IL-2給藥3周。5.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述IL-2是重組產(chǎn)生的IL-2，其包含的氨基酸序列與人IL-2的氨基酸序列至少有70%的序列相同性。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述IL-2包含的氨基酸序列與人IL-2的氨基酸序列至少有80%的序列相同性。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述IL-2包含的氨基酸序列與人IL-2的氨基酸序列至少有90%的序列相同性。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述IL-2包含的氨基酸序列與人IL-2的氨基酸序列至少有95。/。的序列相同性。9.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述IL-2是IL-2突變蛋白。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述IL-2是des-丙氨?；?l，絲氨酸-125人白介素-2(阿地白介素)。11.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述IL-2選自Ala104Ser125IL-2;des-Ala！des-Pro2des-Thr3des-Ser4Ala104Ser125IL-2;禾口des-Alatdes-Pro2des-Thr3des-Ser4des-Ser5des-Ser6IL-2。12.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述IL-2與聚乙二醇偶聯(lián)。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的平均分子量為1,000-40,000道爾頓。14.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的平均分子量為2，000-20,000道爾頓。15.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇的平均分子量為3,000-12，000道爾頓。16.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述IL-2與聚氧乙烯化多元醇共價(jià)偶聯(lián)。17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述聚氧乙烯化多元醇選自聚氧乙烯化山梨醇、聚氧乙烯化葡萄糖和聚氧乙烯化甘油。18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述聚氧乙烯化多元醇是聚氧乙烯化甘油。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述聚氧乙烯化多元醇的平均分子量為1，000-40，000道爾頓。20.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述腎細(xì)胞癌有轉(zhuǎn)移性。21.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，給予所述對(duì)象多輪治療方法的時(shí)間足以至少獲得部分腫瘤反應(yīng)。22.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，還包括多輪治療，其包括a)每天分l-3劑給予9MIU劑量的IL-2，每周3-6天，重復(fù)l-24周；和b)停止IL-2給藥l-4周；給予所述對(duì)象的時(shí)間足以獲得至少部分腫瘤反應(yīng)。23.如權(quán)利要求21或22所述的方法，其特征在于，所述時(shí)間是至少6個(gè)月。24.如權(quán)利要求21或22所述的方法，其特征在于，所述時(shí)間是至少12個(gè)月。25.如權(quán)利要求21或22所述的方法，其特征在于，獲得完全腫瘤反應(yīng)。26.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述IL-2通過(guò)皮下、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、口服、肺部、鼻部、局部或透皮給藥或通過(guò)輸注或栓劑給予。27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述IL-2通過(guò)皮下給予。28.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述患者的腎功能受損。29.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述患者對(duì)高劑量IL-2治療不耐受。30.IL-2在制備按以上任一項(xiàng)權(quán)利要求所述治療腎細(xì)胞癌人患者的藥物中的應(yīng)用。全文摘要公開了用低劑量IL-2治療腎細(xì)胞癌的方法。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及治療腎功能受損和/或?qū)Ω邉┝縄L-2治療不耐受患者的轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌的方法。與高劑量IL-2治療相比，本文所述治療方案能顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，同時(shí)毒性和不良副作用減少。文檔編號(hào)A61P35/04GK101132809SQ200680006721公開日2008年2月27日申請(qǐng)日期2006年1月27日優(yōu)先權(quán)日2005年1月27日發(fā)明者G·維瑟雷爾,L·伊萊亞斯申請(qǐng)人:諾華疫苗和診斷公司