專利名稱：：基于mans的結(jié)構(gòu)的粘蛋白分泌過(guò)多抑制劑和應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明總體涉及包含肽的組合物及其應(yīng)用方法。技術(shù)背景粘液是一種生物液體，能形成凝膠。其為各種組分的混合物，包括水和來(lái)自各種細(xì)胞的分泌產(chǎn)物。粘蛋白也稱作粘液糖蛋白或上皮糖蛋白，是粘液的主要成分并且是特征在于多個(gè)寡糖側(cè)鏈通過(guò)N-和O-連接與肽核心相連的糖偶聯(lián)物。粘蛋白(粘液的糖蛋白成分)的分泌過(guò)多見(jiàn)于多種呼吸疾病，包括哮喘，慢性支氣管炎，以及囊性纖維化(CF)，并且是導(dǎo)致患有這些疾病的患者死亡的危險(xiǎn)因素。在氣道中，粘液從表面上皮細(xì)胞中的杯狀細(xì)胞以及從粘膜下腺的粘液細(xì)胞釋放到氣道表面上。氣道中表面液體(粘液)的總量是粘液分泌速率與粘液清除速率(通過(guò)上皮重吸收，蒸發(fā)，纖毛轉(zhuǎn)運(yùn)，和咳嗽轉(zhuǎn)運(yùn))的結(jié)果，即粘液分泌速率和粘液清除速率之間差異的結(jié)果。在"正常"條件下，粘液分泌和清除速率得以平衡使得僅僅有較薄的液體表面層覆蓋在氣管支氣管樹上。粘液分泌過(guò)多(如果不同時(shí)伴隨有粘液清除增加)，導(dǎo)致粘液量相對(duì)于正常條件凈增加，并且導(dǎo)致氣道粘液累積，其可導(dǎo)致氣流阻塞以及吸入的顆粒和微生物物質(zhì)的潴留增加。人和非人動(dòng)物中的粘液的分泌過(guò)多歸因于大量氣道炎性疾病的發(fā)病。增加的粘液分泌見(jiàn)于慢性疾病狀態(tài)諸如哮喘，慢性阻性非疾病(COPD)，以及慢性支氣管炎；見(jiàn)于遺傳疾病諸如囊性纖維化；見(jiàn)于過(guò)敏性疾病(遺傳性過(guò)敏癥，過(guò)敏性炎癥)；見(jiàn)于支氣管擴(kuò)張癥；以及多種急性、感染性呼吸疾病諸如肺炎、鼻炎、流感以及普通感冒。在許多所述的呼吸疾病中伴隨粘液分泌過(guò)多的是炎性細(xì)胞在氣道中的存在增加。通過(guò)組織損傷和從這些細(xì)胞釋放的炎性介導(dǎo)物的破壞作用，這些細(xì)胞對(duì)于這些疾病的病理有很大作用。借助于所述慢性炎癥的破壞作用的一個(gè)實(shí)例見(jiàn)于囊性纖維化患者，其中釋放自中性粒細(xì)胞的介導(dǎo)物(即髓過(guò)氧物酶)誘導(dǎo)氣道上皮組織的脫落。哺乳動(dòng)物氣道襯有一薄層粘液，其由氣道上皮(杯狀)細(xì)胞和粘膜下腺產(chǎn)生并分泌的。在疾病諸如哮喘、COPD，慢性支氣管炎、以及囊性纖維化中，粘液分泌過(guò)多是常見(jiàn)的損傷。過(guò)量粘液可導(dǎo)致阻塞、對(duì)感染敏感、甚至氣道壁和結(jié)締組織的破壞。粘液的主要成分是分泌細(xì)胞(即杯狀細(xì)胞和粘液細(xì)胞)合成并儲(chǔ)存在細(xì)胞漿膜結(jié)合的顆粒中的粘蛋白糖蛋白。粘蛋白是上皮細(xì)胞分泌的糖蛋白家族，所述細(xì)胞包括在呼吸道、胃腸道和女生殖道中的那些。粘蛋白負(fù)責(zé)粘液的粘彈性性質(zhì)并且至少8種粘蛋白基因是已知的。見(jiàn)美國(guó)專利申請(qǐng)10/180,753(公開號(hào)US2003/0013652)。粘蛋白分泌過(guò)多和/或粘膜細(xì)胞增生造成的粘膜纖毛損傷導(dǎo)致氣道粘液堵塞，其促進(jìn)慢性感染、氣道阻塞并可能導(dǎo)致死亡。許多氣道疾病諸如慢性支氣管炎，慢性阻塞性肺疾病，支氣管擴(kuò)張，哮喘，囊性纖維化和細(xì)菌感染的特征是粘蛋白產(chǎn)生過(guò)多。見(jiàn)US專利申請(qǐng)10/180，753(公開號(hào)2003/0013652)。適當(dāng)刺激后，粘蛋白顆粒通過(guò)胞吐過(guò)程釋放，其中顆粒轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外周，在該處顆粒膜與胞漿膜融合，允許內(nèi)含物的內(nèi)腔分泌。盡管該過(guò)程的明顯病理生理重要性，最近已經(jīng)清楚了鏈接細(xì)胞表面的刺激與粘液蛋白顆粒釋放的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制。見(jiàn)Lietal，JournalofBiologicalChemistry,276:40982-40990(2001)。肉豆蔻酰化的、丙氨酸富含型C激酶底物(MARCKS)蛋白據(jù)信是人支氣管上皮細(xì)胞的粘液分泌所需的。假設(shè)是MARCKS在不同位置結(jié)合分泌性顆粒膜以及結(jié)合肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架作為收縮性細(xì)胞骨架和粘蛋白顆粒的物理連接，并可能在指導(dǎo)分泌性顆粒進(jìn)入細(xì)胞膜上的錨定位點(diǎn)中起作用。見(jiàn)Singeretal""AMARCKS-relatedpeptideblocksmucushypersecretioninamousemodelofasthma",NatureMedicine,10:193-196(2004)。MANS肽(myr-肽l)是稱為"肉豆蔻?；谋彼岣缓虲-激酶底物"的蛋白質(zhì)(簡(jiǎn)稱為MARCKS蛋白)的肉豆蔻酰化N末端24氨基酸序列。MARCKS的24氨基酸片段，肉豆蔻?；腘末端序列(MANS)肽，顯示在體外抑制粘蛋白釋放，并且也顯示阻斷哮喘小鼠模型中的粘液分泌。見(jiàn)Lietal.andSingeretal.,見(jiàn)上文。已知肉豆蔻?；瘜?duì)于促進(jìn)肽通過(guò)脂質(zhì)雙層的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)有重要性。最近的研究證實(shí)了這一重要性，其顯示非肉豆蔻?；碾呐c肉豆蔻酰化的肽相比不通過(guò)細(xì)胞膜。見(jiàn)A.Harishchandranetal，"InteractionofaPseudosubstratepeptideofProteinKinaseCanditsMyristoylatedFormwithLipidVesicles..OnlytheMyristoylatedFormTranslocatesintoLipidBilayer.，"Biochem.Biopys.Acta,1713:73-82(2005)。
發(fā)明內(nèi)容一方面，提供這樣的肽，其由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有選自下組的氨基酸序列(a)具有來(lái)自肽l中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，其也巳知為MANS肽，和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列。肽的一或多個(gè)氨基酸可選獨(dú)立地被化學(xué)修飾，并且肽以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)。另一方面，提供這樣的肽，其由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有選自下組的氨基酸序列(a)具有來(lái)自肽1中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列。肽的N末端和C末端氨基酸可選獨(dú)立地被化學(xué)修飾。所述肽在以粘蛋白抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)并且在以相同濃度施用時(shí)與MANS肽相比對(duì)哺乳動(dòng)物具有更高的粘蛋白抑制效應(yīng)。另一方面，提供這樣的肽，其由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有選自下組的氨基酸序列(a)具有來(lái)自肽1中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列。肽的N末端和C末端氨基酸可選獨(dú)立地被化學(xué)修飾。所述肽具有比MANS肽更高的水溶性并且在以粘蛋白抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)。另一方面，提供了抑制哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多的方法。所述方法包括施用哺乳動(dòng)物粘蛋白抑制量的粘蛋白分泌抑制性肽。所述肽由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有選自下組的氨基酸序列(a)具有來(lái)自肽1中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列。所述肽中的一或多個(gè)氨基酸可選被獨(dú)立地化學(xué)修飾。另一方面，提供了抑制哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多的方法。所述方法包括給予哺乳動(dòng)物粘蛋白抑制量的粘蛋白分泌抑制肽。所述肽由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有選自下組的氨基酸序列(a)具有來(lái)自肽1中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列，和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列。肽的N末端和C末端可選被獨(dú)立地化學(xué)修飾，并且所述肽在以相同濃度施用時(shí)對(duì)哺乳動(dòng)物具有高于MANS肽的粘蛋白抑制效果。另一方面，提供了抑制哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多的方法。所述方法包括給予哺乳動(dòng)物粘蛋白抑制量的粘蛋白分泌抑制肽。所述肽由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有選自下組的氨基酸序列(a)具有來(lái)自肽1中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序歹ij,和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列。肽的N末端和C末端可選被獨(dú)立地化學(xué)修飾，并且所述肽具有高于MANS肽的水溶性。另一方面，提供這樣的肽，其由少于24個(gè)氨基酸組成并且具有這樣的氨基酸序列，所述氨基酸序列由具有來(lái)自肽1中定義的參照氨基酸序列的4到23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列的變體組成。肽的N末端和C末端氨基酸可選獨(dú)立地被化學(xué)修飾。所述肽在以粘蛋白抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)，具有比MANS肽更高的水溶性，并且在以相等濃度施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有高于MANS的粘蛋白抑制效應(yīng)。本發(fā)明的肽可用于在疾病治療和疾病癥狀的治療中減少粘蛋白分泌和/或抑制(即減少到正常水平或低于正常水平)粘蛋白分泌過(guò)多，在所述疾病中顯示粘蛋白分泌過(guò)多，諸如見(jiàn)于慢性疾病狀態(tài)諸如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和慢性支氣管炎；見(jiàn)于遺傳疾病諸如囊性纖維化；見(jiàn)于過(guò)敏性疾病(遺傳性過(guò)敏癥，過(guò)敏性炎癥)；見(jiàn)于支氣管擴(kuò)張癥；以及多種急性、感染性呼吸疾病諸如肺炎、鼻炎、流感以及普通感冒。另一實(shí)施方案中，提供這樣的肽，其由選自下組的序列組成(a)氨基酸序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.1);和(b)與(a)中的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的N末端氨基酸序列不是肉豆蔻?；牟⑶宜鲭牡腃末端氨基酸可選被獨(dú)立地化學(xué)修飾，所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。該肽用于治療肺疾病中的粘液分泌過(guò)多。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明涉及用于各種用途的方法和組合物，包括抑制哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多(即粘蛋白釋放抑制)以及粘液產(chǎn)生(有時(shí)在本文稱為粘液分泌抑制)。但是在更為詳細(xì)地描述本發(fā)明之前，首先定義以下術(shù)語(yǔ)。定義"粘蛋白抑制效應(yīng)"，"粘蛋白抑制活性"，或"抑制粘蛋白分泌"意指粘蛋白分泌(即粘蛋白釋放)的量減少，并且不一定指粘蛋白分泌的完全停止。施用具有粘蛋白抑制效應(yīng)的組合物與沒(méi)有所述組物的情況下可能出現(xiàn)或預(yù)期出現(xiàn)的情況相比，前者導(dǎo)致粘蛋白分泌減少。一方面，粘蛋白分泌的量減少可為所分泌或分泌過(guò)多的粘蛋白超過(guò)正常水平的量的大約5%到大約100%。另一方面，粘蛋白分泌減少的量可為所分泌或分泌過(guò)多的粘蛋白超過(guò)正常水平的量的大約5%(即所分泌的粘蛋白超過(guò)正常水平的量的大約5%)到低于正常分泌水平的量，諸如以正常分泌水平分泌的量的大約50%。"粘液抑制效應(yīng)"，"粘液抑制活性"，或"抑制粘液產(chǎn)生"意指粘液產(chǎn)生的量減少，并且不一定指粘液產(chǎn)生的完全停止。施用具有粘液抑制效應(yīng)的組合物與沒(méi)有所述組物的情況下可能出現(xiàn)或預(yù)期出現(xiàn)的情況相比，前者導(dǎo)致粘液產(chǎn)生減少。組合物的"粘蛋白抑制量"指與缺乏所述組合物的情況相比，降低或抑制粘蛋白分泌(即粘蛋白釋放)的量，諸如使得粘蛋白分泌降低分泌過(guò)多的粘蛋白超過(guò)正常水平的量的大約5%到大約100%的量。組合物的"粘液抑制量"是這樣的量，其使得與沒(méi)有所述組合物的情況相比降低或抑制粘液產(chǎn)生。在參照肽GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.1)中，在參照肽的N末端位置，G在位置1;相鄰于位置1的G是位置2的A;相鄰于位置2的A是位置3的Q;相鄰于位置3的Q是位置4的F;相鄰于位置4的F是位置5的S;相鄰于位置5的S是位置6的K;相鄰于位置6的K是位置7的T;相鄰于位置7的T是位置8的A;相鄰于位置8的A是位置9的A;相鄰于位置9的A是位置10的K;相鄰于位置10的K是位置11的G;相鄰于位置11的G是位置12的E;相鄰于位置12的E是位置13的A;相鄰于位置13的A是位置14的A;相鄰于位置14的A是位置15的A;相鄰于位置15的A是位置16的E;相鄰于位置16的E是位置17的R;相鄰于位置17的R是位置18的P;相鄰于位置18的P是位置19的G;相鄰于位置19的G是位置20的E;相鄰于位置20的E是位置21的A;相鄰于位置21的A是位置22的A;相鄰于位置22的A是位置23的V;以及相鄰于位置23的V是位置24的A，其中位置24是參照肽的C-末端位置。參照肽的"變體"或參照肽的4-23個(gè)氨基酸片段的變體是具有這樣的氨基酸序列的肽，其與參照肽的氨基酸序列或參照肽的片段的氨基酸序列分別在參照肽或參照肽片段氨基酸序列中的至少一個(gè)氨基酸位置中不同，但是仍保持粘蛋白或粘液抑制活性，所述活性通常是參照肽或片段的活性的0.1-10倍，優(yōu)選是參照肽或片段的活性的0.2-6倍，更優(yōu)選是參照肽或片段的活性的0.3-5倍。參照氨基酸序列的"變體"或參照氨基酸序列的4-23個(gè)氨基酸片段的變體是這樣的氨基酸序列，其與參照氨基酸序列或參照氨基酸序列的片段有至少一個(gè)氨基酸不同，但具有這樣的肽的氨基酸序列，其保持參照氨基酸序列編碼的所述肽或片段的粘蛋白或粘液抑制活性，所述活性通常分別是參照序列的肽或片段的活性的0.1-10倍，優(yōu)選分別是參照序列的肽或片段的活性的0.2-6倍，更優(yōu)選分別是參照序列的肽或片段的活性的0.3-5倍。取代變體肽或取代變體氨基酸序列通過(guò)參照氨基酸序列中的一或多個(gè)氨基酸取代而與參照肽或參照氨基酸序列不同(即有差異)；缺失變體肽或缺失變體氨基酸序列通過(guò)參照氨基酸序列中的一或多個(gè)氨基酸缺失而與參照肽或參照氨基酸序列不同(即有差異)；添加變體肽或添加變體氨基酸序列通過(guò)參照氨基酸序列中的一或多個(gè)氨基酸添加而與參照肽或參照氨基酸序列不同(即有差異)。變體肽或變體氨基酸序列可為參照序列中一或多個(gè)氨基酸的取代(例如至少1，2，3，4，5，6，7或8個(gè)氨基酸取代)的結(jié)果，或者可為參照序列中一或多個(gè)氨基酸的缺失(例如至少1，2，3，4，5，6，7或8個(gè)氨基酸缺失)的結(jié)果，或者可為參照序列中一或多個(gè)氨基酸的添加(例如至少1，2,3，4，5，6，7或8個(gè)氨基酸添加)的結(jié)果，或其以任何順序的組合。取代變體4-23個(gè)氨基酸肽片段或者取代變體4-23個(gè)氨基酸片段序列可通過(guò)參照氨基酸片段序列中的一或多個(gè)氨基酸取代而與參照4-23個(gè)氨基酸肽片段或參照4-23個(gè)氨基酸片段序列不同(艮卩有差異)；缺失變體4-23個(gè)氨基酸肽片段或者4-22個(gè)氨基酸缺失變體氨基酸片段序列可通過(guò)參照氨基酸片段序列中的一或多個(gè)氨基酸缺失而與5-23個(gè)氨基酸的參照肽片段或5-23個(gè)氨基酸參照氨基酸片段序列不同(即有差異)；且4-23個(gè)氨基酸添加變體肽或者4-23個(gè)氨基酸添加變體氨基酸序列可通過(guò)參照氨基酸序列中的一或多個(gè)氨基酸添加而與4-22個(gè)氨基酸的參照肽序列或4-22個(gè)氨基酸的參照氨基酸序列不同(即有差異)。4-23氨基酸變體肽或4-23氨基酸變體氨基酸序列可為參照氨基酸序列的4-23個(gè)氨基酸的片段中一或多個(gè)氨基酸的取代(例如至少l，2，3，4，5，6，7或8個(gè)氨基酸取代)的結(jié)果，或者可為相對(duì)較大的參照氨基酸序列中一或多個(gè)氨基酸的缺失(例如至少l，2，3，4，5，6，7或8個(gè)氨基酸缺失)的結(jié)果，或者可為相對(duì)較小的參照氨基酸序列中一或多個(gè)氨基酸的添加(例如至少l，2，3，4，5，6，7或8個(gè)氨基酸)的結(jié)果，或其以任何順序的組合。優(yōu)選，變體肽或氨基酸序列與參照肽或參照肽的片段或參照氨基酸序列或參照氨基酸序列的片段通過(guò)以下變化而不同少于IO個(gè)氨基酸取代，缺失和/或添加；更優(yōu)選少于8個(gè)氨基酸取代，缺失和/或添加；更優(yōu)選少于6個(gè)氨基酸取代，缺失和/或添加；更優(yōu)選少于5個(gè)氨基酸取代,缺失和/或添加；更優(yōu)選少于4個(gè)氨基酸取代，缺失和/或添加。最優(yōu)選所述變體氨基酸序列與參照序列或片段氨基酸序列通過(guò)1或2或3氨基酸而不同。"序列相同性"意指，就兩條多肽的氨基酸序列而言，具有相同氨基酸的位置的數(shù)目除以兩條序列中較短一條中的氨基酸的數(shù)目。"基本相同"意指，就兩條肽的氨基酸序列的比較或兩條肽片段的氨基酸序列(例如參照肽氨基酸序列的片段)的比較而言，肽或肽片段的氨基酸序列具有至少75%序列相同性，優(yōu)選至少80%序列相同性，更優(yōu)選至少90%序列相同性，最優(yōu)選至少95%序列相同性。術(shù)語(yǔ)"肽"包括肽及其可藥用的鹽。本發(fā)明所用"分離的"肽意指天然存在的肽，其已經(jīng)通過(guò)純化、重組合成或化學(xué)合成而與天然伴隨其的細(xì)胞組分(例如核酸和其他肽)分離或基本分離，并且也包括已經(jīng)從細(xì)胞成分、生物物質(zhì)、化學(xué)前體或其他化學(xué)物質(zhì)純化或基本純化的非天然存在的重組或化學(xué)合成的肽。以下三字母和單字母氨基酸簡(jiǎn)寫在全文使用丙氨酸(Ala)A;精氨酸(Arg)R;天冬酰胺(Asn)N;天冬氨酸(Asp)D;半胱氨酸(Cys)C;谷氨酰胺(Gin)Q;谷氨酸(GIu)E;甘氨酸(GIy)G;組氨酸(His)H;異亮氨酸(He)I;亮氨酸(Leu)L;賴氨酸(Lys)K;蛋氨酸(Met)M;苯基丙氨酸(Phe)F;脯氨酸(Pro)P;絲氨酸(Ser)S;蘇氨酸:(Thr)T;色氨酸(Trp)W;酪氨酸(Tyr)Y;纈氨酸(VaI)V。本發(fā)明所用其他氨基酸三字母符號(hào)包括，見(jiàn)括號(hào)中，(Hyp)指代羥脯氨酸,(NIe)指代正亮氨酸，(Orn)指代鳥氨酸，(Pyr)指代焦谷氨酸和(Sar)指代肌氨酸。通常，肽的氨基(或N末端)出現(xiàn)在所示肽的氨基酸序列的左側(cè)末端，羧基(或C-末端)出現(xiàn)在所示氨基酸序列的右側(cè)末端。肽的氨基酸序列中可以用單字母符號(hào)代表氨基酸，所述氨基酸通過(guò)肽中的肽酰胺鍵共價(jià)相連。表IX包含一系列以單字母簡(jiǎn)寫形式顯示的氨基酸序列，并且具有相應(yīng)的肽編號(hào)和SEQIDNO。參照肽氨基酸序列顯示為肽l。具有參照序列的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列的本發(fā)明的肽的氨基酸序列顯示為肽2-231，含MANS肽的氨基酸序列的隨機(jī)N末端序列(RNS)的氨基酸序列為肽232。本發(fā)明肽的氨基酸序列的代表性變體的氨基酸序列也顯示為肽233-245以及247-251。所列變體肽并非意圖為有限的一組肽，僅僅作為本發(fā)明變體肽的代表性實(shí)例。還顯示了本發(fā)明肽的代表性反向氨基酸序列以及代表性隨機(jī)氨基酸序列。表中的反向和隨機(jī)氨基酸序列并非意圖作為本發(fā)明的代表。表IX中所列的肽的氨基酸序列可經(jīng)化學(xué)方法修飾。例如，如果表IX中所列的肽的氨基酸序列在N末端胺進(jìn)行化學(xué)修飾以便與羧酸形成酰胺化合物，產(chǎn)生的肽在本發(fā)明中有時(shí)表示為羧酸的標(biāo)識(shí)符作為前綴通過(guò)連字符與肽編號(hào)相連的組合。例如，以肽79為例，N末端肉豆蔻?；碾?9有時(shí)在本文稱為"肉豆蔻?；碾?9"或"myr-肽79";N末端乙?；碾?9有時(shí)在本文稱為"乙?；?肽79"或"Ac-肽79"。環(huán)化形式的肽79可稱為"環(huán)形-肽79"或"cyc-肽79"。此外，例如如果表IX中所列肽的氨基酸序列在C末端羧基進(jìn)行化學(xué)修飾，例如通過(guò)胺諸如氨以形成C末端酰胺，產(chǎn)生的肽有時(shí)在本文通過(guò)胺殘基的標(biāo)識(shí)符作為前綴通過(guò)連字符與肽編號(hào)相連的組合來(lái)表示。因此，例如，肽79的C末端酰胺有時(shí)稱為"肽-NH2"。肽(例如肽79)的N末端胺通過(guò)例如肉豆蔻?；M(jìn)行化學(xué)修飾，并且C末端羧基通過(guò)例如氨基團(tuán)進(jìn)行化學(xué)修飾以形成上述的酰胺，利用前綴和后綴說(shuō)明，產(chǎn)生的肽有時(shí)稱為"myr-肽79-NH2"。本發(fā)明涉及這樣的肽，其具有包含少于24個(gè)氨基酸的氨基酸序列，并且其具有與MANS肽的氨基酸序列相關(guān)的氨基酸序列(例如MANS肽是肉豆蔻酰-肽1，MANS肽的參照24-氨基酸序列是肽1)。本發(fā)明的肽由含有少于24氨基酸的氨基酸序列組成，并且可由8-14，10-12，9-14，9-13，10-13，10-14，至少9，至少10個(gè)等氨基酸組成。所述肽通常為直鏈的，但是也可為環(huán)狀的。此外，所述肽可為分離的肽。對(duì)于肽l(參照24氨基酸序列)，參照氨基酸序列的23個(gè)連續(xù)氨基酸的片段有時(shí)在本文稱為23-mer。類似地，參照序列的22個(gè)連續(xù)氨基酸的片段有時(shí)在本文稱為22-mer;21個(gè)氨基酸的序列稱為21-mer;20個(gè)氨基酸的序列稱為20-mer;19個(gè)氨基酸的序列稱為19-mer;18個(gè)氨基酸的序列稱為18-mer;17個(gè)氨基酸的序列稱為17-mer;16個(gè)氨基酸的序列稱為16-mer;15個(gè)氨基酸的序列稱為15-mer;14個(gè)氨基酸的序列稱為14-mer;13個(gè)氨基酸的序列稱為13-mer;12個(gè)氨基酸的序列稱為12-mer;11個(gè)氨基酸的序列稱為11-mer;10個(gè)氨基酸的序列稱為10-mer;9個(gè)氨基酸的序列稱為9-mer;8個(gè)氨基酸的序列稱為8-mer;7個(gè)氨基酸的序列稱為7-mer;6個(gè)氨基酸的序列稱為6-mer;5個(gè)氨基酸的序列稱為5-mer;和4個(gè)氨基酸的序列稱為4-mer。一方面，這些"4到23-mer"氨基酸序列中的任何一種，其本身是肽(有時(shí)在本文記為H2N-肽-COOH)，可獨(dú)立地被化學(xué)修飾，例如通過(guò)化學(xué)方法修飾，其中所述化學(xué)修飾可選自下組:(i)在N末端胺基(H2N-肽-)形成酰胺，諸如與例如d或優(yōu)選與C2(乙酸)-C22羧酸；(ii)在C末端胺基(-肽-(:00印形成酰肢，諸如與例如氨或與(:1-(:22伯胺或仲胺；以及(iii)其組合。所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸;(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體，所述變體選自下組取代變體、缺失變體、添加變體，及其組合。一些實(shí)施方案中，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，具有參照序列肽1的8-14個(gè)連續(xù)氨基酸;(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體，所述變體選自下組取代變體、缺失變體、添加變體，及其組合。另一實(shí)施方案中，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，具有參照序列肽l的10-12個(gè)連續(xù)氨基酸；(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序歹U;和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體，所述變體選自下組取代變體、缺失變體、添加變體，及其組合。另一實(shí)施方案中，所述肽具有的氨基酸序列具有參照序列肽1的至少9,至少10，9-14，9-13，10-13，10-14，等個(gè)連續(xù)氨基酸；與其基本相同的氨基酸序列；或其變體，所述變體選自下組取代變體、缺失變體、添加變體，及其組合。如下文進(jìn)一步解釋的那樣，肽的一或多個(gè)氨基酸(例如N末端和/或C末端氨基酸)可選獨(dú)立地進(jìn)行化學(xué)修飾，一些實(shí)施方案中，肽的一或多個(gè)氨基酸序列可經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾，而其他實(shí)施方案中，肽的所有氨基酸都沒(méi)有被修飾。一方面，優(yōu)選的修飾可出現(xiàn)在肽或肽片段的N末端氨基酸的胺(H2N-)基團(tuán)(其中胺基團(tuán)如果存在肽序列內(nèi)部而不是N末端位置則形成肽酰胺鍵)。另一方面中，優(yōu)選的修飾可出現(xiàn)在所述肽或肽片段的C末端氨基酸的羧基(-COOH)基團(tuán)(其中羧基基團(tuán)如果存在肽序列內(nèi)部而不是C末端位置則形成肽酰胺鍵)。另一方面中，優(yōu)選的修飾可出現(xiàn)在N末端胺(H2N-)基以及C-末端羧酸(-COOH)基團(tuán)。一些實(shí)施方案中，肽的氨基酸序列從參照肽肽1的N末端氨基酸開始。例如，肽可具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽l的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸，其中氨基酸序列起始于參照序列的N末端氨基酸(即，肽2，肽4，肽7,肽11，肽16，肽22，肽29，肽37，肽46,肽56,肽67，肽79,肽92，肽106,肽121,肽137，肽154,肽172，肽191，或肽211);(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體。另一實(shí)施方案中，肽的氨基酸序列從參照肽肽1的C末端氨基酸開始。例如，肽可具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽l的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸，其中氨基酸序列終止于參照序列的C末端氨基酸(即，肽3，肽6，肽10,肽15，肽21，肽28，肽36，肽45，肽55,肽66，肽78，肽91,肽105，肽120，肽136,肽153，肽171，肽l卯，肽210，或肽231);(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體。另一實(shí)施方案中，肽的氨基酸序列不是從參照肽肽1的N末端氨基酸開始而是從參照序列肽1的位置2的氨基酸到位置21的氨基酸開始。例如，肽可具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽l的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸，其中所述氨基酸序列在參照序列的位置2到位置21之間的任何氨基酸開始。這些肽的長(zhǎng)度可為4-23個(gè)連續(xù)氨基酸，并且可代表參照序列肽1中部的肽；(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體。這些肽公開于表IX。本發(fā)明涉及肽氨基酸序列，其用于抑制哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多，并且用于降低哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多，并且其可用于抑制粘蛋白分泌過(guò)多的方法中以及減少粘蛋白分泌過(guò)多的方法中，所述肽氨基酸序列包括分離的肽的氨基酸序列以及肽的氨基酸序列，其可選含有本發(fā)明N末端和/或C末端化學(xué)修飾的基團(tuán)，所述肽氨基酸序列選自下組:23-mers(即，具有23個(gè)氨基酸序列的肽)肽2;和肽3;22-mers(即，具有22個(gè)氨基酸序列的肽)肽4;肽5;和肽6;21-mers(即，具有21個(gè)氨基酸的序列的肽)肽7;肽8;肽9;和肽10;20-mers(即，具有20個(gè)氨基酸的序列的肽)肽11;肽12;肽13;肽14;和肽15;19-mers(即，具有19個(gè)氨基酸的序列的肽)肽16;肽17;肽18;肽19;肽20;和肽21;18舊s(即，具有18個(gè)氨基酸的序列的肽)肽22;肽23;肽25;肽26;肽27;和肽28;17-mers(即，具有17個(gè)氨基酸的序列的肽)肽29;肽30;肽31;肽32;肽33;肽34;肽35;和肽36;16-mers(即，具有16個(gè)氨基酸的序列的肽)肽37;肽38;肽39;肽40;肽41;肽42;肽43;肽44;和肽45;15-mers(g卩，具有15個(gè)氨基酸的序列的肽)肽46;肽47;肽48;肽49;肽50;肽51;肽52;肽53;肽54;和肽55;14-mers(即，具有14個(gè)氨基酸的序列的肽)肽56;肽57;肽58;肽59;肽60;肽61;肽62;肽63;肽64;肽65;和肽66;13-mers(即，具有13個(gè)氨基酸的序列的肽)肽67;肽68;肽69;肽70;肽71;肽72;肽73;肽74;肽75;肽76;肽77;和肽78;12-mers(即，具有12個(gè)氨基酸的序列的肽)肽79;肽80;肽81;肽82;肽83;肽84;肽85;肽86;肽87;肽88;肽89;肽90;和肽91;ll-mers(g卩，具有l(wèi)l個(gè)氨基酸的序列的肽)肽92;肽93;肽94;肽95;肽96;肽97;肽98;肽99;肽100;肽101;肽102;肽103;肽104;和肽105;10-mers(g卩，具有10個(gè)氨基酸的序列的肽)肽106;肽107;肽108;肽109;肽110;肽111;肽112;肽113;肽114;肽115;肽116;肽117;肽118;肽119;和肽120;9-mers(即，具有9個(gè)氨基酸的序列的肽)肽121;肽122;肽123;肽124;肽125;肽126;肽127;肽128;肽129;肽130;肽131;肽132;肽133;肽134;肽135;和肽136;8儒s(即，具有8個(gè)氨基酸的序列的肽)肽137;肽138;肽139;肽140;肽141;肽142;肽143;肽144;肽145;肽146;肽147;肽148;肽149;肽150;肽151;肽152;和肽153;7-mers(即，具有7個(gè)氨基酸的序列的肽)肽154;肽155;肽156;肽157;肽158;肽159;肽160;肽161;肽162;肽163;肽164;肽165;肽166;肽167;肽168;肽169;肽170;和肽171;6-mers(即，具有6個(gè)氨基酸的序列的肽)肽172;肽173;肽174;肽175;肽176;肽177;肽178;肽179;肽180;肽181;肽182;肽183;肽184;肽185;肽186;肽187;肽188;肽189;和肽190;5-mers(即，具有5個(gè)氨基酸的序列的肽)肽191;肽192;肽193;肽194;肽195;肽196;肽197;肽198;肽199;肽200;肽201;肽202;肽203;肽204;肽205;肽206;肽207;肽208;肽209;和肽210;4-mers(即，具有4個(gè)氨基酸的序列的肽)肽211;肽212;肽213;肽214;肽215;肽216;肽217;肽218;肽219;肽220;肽221;肽222;肽223;肽224;肽225;肽226;肽227;肽228;肽229;肽230;和肽231。本發(fā)明分離的肽和N-末端和域C-末端化學(xué)修飾的肽的優(yōu)選的氨基酸序列選自下組23-mers:肽2;和肽3;22-mers:肽4;肽5;和肽6;21-mers:肽7;肽8;肽9;和肽10;20-mers:肽11;肽12;肽13;肽14;和肽15;19-mers:肽16;肽.17;肽18;肽19;肽20;和肽21;18-mers:肽22;肽23;肽24;肽25;肽26;肽27;和肽28;17-mers:肽29;肽30;肽31;肽32;肽33;肽34;肽35;和肽36;16-mers:肽37;肽38;肽39;肽40;肽41;肽42;肽43;肽44;和肽45;15-mers:肽46;肽47;肽48;肽49;肽50;肽51;肽52;肽53;和肽54;14-mers:肽56;肽57;肽58;肽59;肽60;肽61;肽62;肽63;和肽64;13-mers:肽67;肽68;肽69;肽70;肽71;肽72;肽73;肽74;和肽75;12-mers:肽79;肽80;肽81;肽82;肽83;肽84;肽85;肽86;和肽87;ll隱mers:肽92;肽93;肽94;肽95;肽96;肽97;肽98;肽99;和肽100;10-mers:肽106;肽107;肽108;肽109;肽110;肽111;肽112;肽113;和肽114;9-mers:肽122;肽123;肽124;肽125;肽126;肽127;肽128;和肽129;8-mers:肽139;肽140;肽141;肽142;肽143;肽144;和肽145;7-mers:肽157;肽158;肽159;肽160;肽161;和肽162;6-mers:肽176;肽177;肽178;肽179;和肽180;5-mers:肽196;肽197;肽198;和肽199;和4-mers:肽217;和肽219。本發(fā)明分離的肽和N-末端和域C-末端化學(xué)修飾的肽的更為優(yōu)選的氨基酸序列選自下組23-mers:肽2;和肽3;22-mers:肽4;肽5;和肽6;21-mers:肽7;肽8;肽9;和肽10;20-mers:肽11;肽12;肽13;肽14;和肽15;19孺s:肽16;肽17;肽18;肽19;肽20;和肽21;18-mers:肽22;肽23;肽24;肽25;肽26;肽27;和肽28;17-mers:肽29;肽30;肽31;肽32;肽33;肽34;肽35;和肽36;16畫mers:肽37;肽38;肽39;肽40;肽41;肽42;肽43;肽44;和肽45;15-mers:肽46;肽47;肽48;肽49;肽50;肽51;肽52;肽53;和肽54;14-mers:肽56;肽57;肽58;肽59;肽60;肽61;肽62;肽63;和肽64;13備s:肽67;肽68;肽69;肽70;肽71;肽72;肽73;肽74;肽80;肽81;肽82;肽83;肽84;肽85;肽86;和肽87;11-mers:肽92;肽93;肽94;肽95;肽96;肽97;肽98;肽99;和肽100;10-mers:肽106;肽108;肽109;肽110;肽111;肽112;肽113;和肽114;9-mers:肽124;肽125;肽126;肽127;肽128;和肽129;8畫mers:肽141;肽142;肽143;肽144;和肽145;7-mers:肽159;肽160;肽161;和肽162;6-mers:肽178;肽179;和肽180;5-mers:肽198;和肽199;和4-mer:肽219。另一實(shí)施方案中，肽的氨基酸序列包括參照序列肽1的連續(xù)殘基A,K,G，E，如肽219中那樣。例如，肽具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸，其中肽的氨基酸序列如肽219中那樣包括參照肽肽1的連續(xù)殘基A,KA和E(例如，肽219，肽45,肽79，肽67，肽80，等)；(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體。含有參照肽氨基酸序列肽1的氨基酸序列AKGF的肽片段的實(shí)例包括(a)23-mers:肽2;和肽3;22-mers:肽4;肽5;和肽6;ll-mers:肽7;肽8;肽9;和肽10;20-mers:肽11;肽12;肽13;肽14;和肽15;19-mers:肽16;肽17;肽18;肽19;肽20;禾口肽21;18-mers:肽22;肽23;肽24;肽25;肽26;肽27;和肽28;17-mers:肽29;肽30;肽31;肽32;肽33;肽34;肽35;和肽36;16-mers:肽37;肽38;肽39;肽40;肽41;肽42;肽43;肽44;和肽45;15-mers:肽46;肽47;肽48;肽49;肽50;肽51;肽52;肽53;和肽54;14-mers:肽56;肽57;肽58;肽59;肽60;肽61;肽62;肽63;和肽64;13-mers:肽67;肽68;肽69;肽70;肽71;肽72;肽73;肽74;和肽75;12-mers:肽79;肽80;肽81;肽82;肽83;肽84;肽85;肽86;和肽87;ll畫mers:肽93;肽94;肽95;肽96;肽97;肽98;肽99;和肽100;lO孺s:肽108;肽109;肽110;肽111;肽112;肽113;和肽114;9畫mers:肽124;肽125;肽126;肽127;肽128;和肽129;8-mers:肽141;肽142;肽143;肽144;和肽145;7-mers:肽159;肽160;肽161;和肽162;6-mers:肽178;肽179;和肽180;5-mers:肽198;和肽199;禾Q4-mer:肽219,(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體，所述變體選自下組取代變體，缺失變體，添加變體及其組合，其中所述片段包含4-23個(gè)連續(xù)氨基酸或由其組成。另一實(shí)施方案中，優(yōu)選肽序列具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽1的10-23個(gè)連續(xù)氨基酸；(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體，所述變體選自下組取代變體，缺失變體，添加變體及其組合，其中優(yōu)選氨基酸序列包含23-tner:肽2;22-mer:肽4;21-men肽7;20-mer:肽11;19-mer:肽16;18-mer:肽22;17-mer:肽29;16-mer:肽37;15-mer:肽46;14-mer:肽56;13-mer:肽67;12-mer:肽79;11-mer:肽92;和10-mer:肽106。其他實(shí)施方案中，肽的氨基酸序列從參照序列肽l的N末端氨基酸開始，并包括參照序列肽1的連續(xù)殘基A，K，Q和E，如在肽219中那樣，而在其他實(shí)施方案中，肽的氨基酸序列在參照序列肽1的C末端終止，并包括參照序列肽1的連續(xù)殘基A,K，Q和E，如在肽219中那樣。所述肽相對(duì)于參照氨基酸序列而言可包含一或多個(gè)氨基酸缺失，取代和/或添加。優(yōu)選所述取代可為保守氨基酸取代，或所述取代可為非保守氨基酸取代。一些實(shí)施方案中，所述肽，包括具有的氨基酸序列與參照氨基酸序列基本相同或?yàn)槠渥凅w的肽，與參照氨基酸序列的相應(yīng)連續(xù)氨基酸相比不具有缺失或添加，但可具有保守性或非保守性取代。本發(fā)明肽中對(duì)參照氨基酸序列進(jìn)行的氨基酸取代包括但不限于以下取代丙氨酸(A)可被賴氨酸(K),纈氨酸(V),亮氨酸(L),或異亮氨酸(I)取代；谷氨酸(E)可被天冬氨酸(D)取代；甘氨酸(G)可被脯氨酸(P)取代；賴氨酸(K)可被精氨酸(R)，谷氨酰胺(Q),或天冬酰胺(N)取代；苯丙氨酸(F)可被亮氨酸(L),纈氨酸(V)，異亮氨酸(I)，或丙氨酸(A)取代；脯氨酸(P)可被甘氨酸(G)取代；谷氨酰胺(Q)可被谷氨酸(E)或天冬酰胺(N)取代；精氨酸(R)可被賴氨酸(K),谷氨酰胺(Q)，或天冬酰胺(N)取代；絲氨酸(S)可被蘇氨酸取代；蘇氨酸(T)可被絲氨酸(S)取代;纈氨酸(V)可被亮氨酸(L)，異亮氨酸(I)，蛋氨酸(M)，苯丙氨酸(F)，丙氨酸(A)，或正亮氨酸(NIe)取代。例如，可在本發(fā)明的肽中對(duì)參照氨基酸序列進(jìn)行取代，包括丙氨酸(A)取代苯丙氨酸(F)(例如在參照氨基酸序列的氨基酸位置4)，谷氨酸(E)取代谷氨酰胺(Q)(例如在參照氨基酸序列的氨基酸位置3)，賴氨酸(K)取代丙氨酸(A)(例如在氨基酸位置2禾Q/或8),和/或絲氨酸(S)取代蘇氨酸(T)(例如在參照氨基酸序列的氨基酸位置7)。如果相對(duì)于參照序列而言本發(fā)明的肽(包含未經(jīng)修飾的肽以及通過(guò)化學(xué)方法修飾的肽例如通過(guò)N末端和/或C末端修飾諸如通過(guò)酰胺形成修飾的肽)的氨基酸序列包含取代，優(yōu)選所述肽的氨基酸序列與參照氨基酸序列具有至少80%序列相同性。具有5—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括一處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約80%—約96%(即，~95.7%)序列相同性。具有10一23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括一處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約90%—約96%(g卩，~95.7%)序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括一處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約95%—約96%(即，~95.7%)序列相同性。具有10—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括兩處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約80%一約92%(即,~91.3%)序列相同性。具有16—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括兩處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約87.5%—約92%(即，~91.3%)序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括兩處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約90%—約92%(即，~91.3%)序列相同性。具有15—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括三處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約80%—約87%序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括三處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約85%—約87%序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并且相對(duì)于參照氨基酸序列而言包括四處氨基酸取代的肽與參照氨基酸序列相比具有約80%—約83%(即，~82.6%)序列相同性。本發(fā)明的肽中，對(duì)于參照序列(其為24-mer)的連續(xù)氨基酸序列，選自參照24氨基酸序列的連續(xù)23氨基酸序列(23-mer)中的一個(gè)氨基酸的取代提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽中同23-mer具有相同性的氨基酸片段具有95.65%(或~96%)序列相同性。類似地，所述23-mer中的2，3，4，和5個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有91.30%(或~91%)，86.96%(或~87%)，82.61%(或一83%)，和78.27%(或~78%)序列相同性。類似地，所述22-mer中的1，2，3，4，和5個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有95.45%(或~95%)，90.91%(或91%)，86.36%(或~86%)，81.82%(或82%)，和77.27%(或~77%)序列相同性。類似地，所述21-mer中的l，2，3，4，和5個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有95.24%(~95%)，90.48(~91%)，85.71%(~86%)，80.95(~81%):和76.19%(~76%)序列相同性。類似地，所述20-mer中的l，2，3，4，和5個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有95.00%(95%),90.00%(卯％)，85.00%(85%)，80.00%(80%)，和75.00%(75%)序列相同性。類似地，所述19-mer中的1，2，3，和4個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有94.74%(~95%),89.47%(~89%)，84.21%(84%)，和78.95%(~79%)序列相同性。類似地，所述18-mer中的l，2，3，和4個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有94.44%(~94%)，88.89%(~89%)，83.33%(~83%)，和77.78%(~78%)序列相同性。類似地，所述17-mer中的l，2，3，和4個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有94.12%(~94%)，88.23°/。(~88%)，82.35°/。(~82%)，和76.47%(~76%)序列相同性。類似地，所述16-mer中的1，2，3，和4個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有93.75%(~94%)，87.50%(~88%),81.25%(~81%),和75.00%(75%)序列相同性。類似地，所述15-mer中的1，2，和3個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有93.33%(~93%)，86.67%(~87%)，和80.00%(80%)序列相同性。類似地，所述14-mer中的1，2，和3個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有92.86%(~93%),85.71%(~86。/。)，和78.57%(79%)序列相同性。類似地，所述13-mer中的l，2，和3個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有92.31%(~92%)，84.62%(~85%)，和76.92%(~77%)序列相同性。類似地，所述12-mer中的l，2，和3個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有91.67%(~92%)，83.33%(~83%)，和75.00%(75%)序列相同性。類似地，所述ll-mer中的1和2個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有90.91%(~91%)和81.82%(~82%)序列相同性。類似地，所述10-mer中的1和2個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有90.00°/。(90%)和80.00%(80%)序列相同性。類似地，所述9-mer中的1和2個(gè)氨基酸提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有88.89%(~89%)和77.78%(~78%)序列相同性。類似地，所述8-mer中的1和2個(gè)氨基酸的取代分別提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列與參照肽氨基酸序列具有87.50%(~88%)和75.00%(75%)序列相同性。類似地，所述7-mer，6-mer，5-mer，和4-mer中的1個(gè)氨基酸的取代提供具有這樣的氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列分別與參照肽氨基酸序列具有85.71%(~86%)，83.33%(83.3%),80.00%(80%),和75.00%(75%)序列相同性。本發(fā)明優(yōu)選的氨基酸序列與參照序列中的氨基酸序列具有超過(guò)80%序列相同性，更優(yōu)選與參照序列中的氨基酸序列具有超過(guò)81%—96%序列相同性，更優(yōu)選與參照序列中的氨基酸序列具有超過(guò)80%—96%序列相同性。優(yōu)選的氨基酸序列可選在末端肽氨基基團(tuán)與以下部分形成酰胺鍵而在N末端發(fā)生化學(xué)健合C2—C22線性脂肪族羧酸部分，更優(yōu)選C2一d6線性脂肪族羧酸部分，更優(yōu)選C2或d6線性脂肪族羧酸部分，并且可選通過(guò)末端肽羧酸基團(tuán)與胺形成酰胺鍵在C末端發(fā)生化學(xué)鍵合，所述胺諸如氨或伯胺或仲胺諸如Q—d6線性脂肪族伯胺。肽79(12-mer)的取代變體的實(shí)例，包括例如肽238,其中肽79中位置3的Q被序列238中的E取代；肽233，其中肽79中位置2的A被肽233中的K取代；肽234,其中肽79中位置8的A被肽234中的K取代；肽235，其中肽79中位置2和8的A被肽235中的K取代；肽237,其中肽79中位置4的F被肽237中的A取代；肽239，其中肽79中位置10的K被肽239中的A取代；肽240，其中肽79中位置11的G被肽240中的A取代；和肽241，其中肽79中位置12的E被肽241中的A取代。肽106(10-mer)的取代變體的實(shí)例，包括例如肽236,其中肽106中位置4的F被肽236中的A取代；肽242，其中肽106中位置1的G被肽242中的A取代；肽243,其中肽106中位置3的Q被肽243中的A取代；肽244，其中肽106中位置5的S被肽244中的A取代；肽245，其中肽106中位置6的K被肽235中的A取代；肽247,其中肽106中位置7的T被肽247中的A取代；肽248,其中肽106中位置10的K被肽248中的A取代；和肽249，其中肽106中位置16和10的K均被肽249中的A取代。肽137(8-mer)的取代變體的實(shí)例，包括例如肽250，其中肽137中位置4的F被肽250中的A取代。肽219(4-mer)的取代變體的實(shí)例包括例如，肽251,其中肽219中位置2的K被肽251中的A取代。本文描述的取代變體肽可以為分離的肽的形式或者化學(xué)修飾的肽的形式，例如N末端酰胺諸如肉豆蔻?；０?，乙酰基酰胺，等以及諸如例如C末端酰胺諸如與氨形成的酰胺，以及諸如N末端酰胺和C末端酰胺。當(dāng)與參照氨基酸序列相比在本發(fā)明的肽的氨基酸序列中包含缺失時(shí)，優(yōu)選所述肽的氨基酸序列與參照氨基酸序列具有至少80%序列相同性。具有5—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括一個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有80%—大約96。%(即，~95.7%)序列相同性。具有10—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括一個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有90%—大約96%(即，~95.7%)序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括一個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有95%—大約96%(即，~95.7%)序列相同性。具有10—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括兩個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有80%—大約92%(即，~91.3%)序列相同性。具有16—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括兩個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有87.5%—大約92%(即，~91.3%)序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括兩個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有90%—大約92%(即，~91.3%)序列相同性。具有15—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括三個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有80%—大約87%序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括三個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有85%—大約87%序列相同性。具有20—23個(gè)氨基酸并相對(duì)于參照肽而言包括四個(gè)氨基酸缺失的肽與參照氨基酸序列具有80%—大約83%(即，~82.6%)序列相同性。如上所述，^:的一或多個(gè)氨基酸也可經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾?？衫帽绢I(lǐng)域已知的任何方法對(duì)肽的氨基酸序列進(jìn)行本領(lǐng)域已知的任何氨基酸修飾。一些實(shí)施方案中，N末端和/或C末端氨基酸可被修飾。例如，肽的N末端氨基酸可在N末端氨基(H2N-)垸基化，酰胺化，或?；约袄?，肽的C末端氨基酸可在C末端羧基(-COOH)酰胺化或酯化。例如，N末端氨基可通過(guò)?；M(jìn)行修飾，以包括任何?；蛑觉；孕纬甚０?，包括乙?；?即CHrC(=0)-或肉豆蔻?；Ｒ恍?shí)施方案，N末端氨基可經(jīng)修飾以包含結(jié)構(gòu)式為-C(O)R的?；?，其中R是具有1一15個(gè)碳原子線性或分支烷基，或可經(jīng)過(guò)修飾以包含通式為-C(O)R1的?；?，其中R1是具有1一15個(gè)碳原子的線性烷基。肽的C末端氨基酸也可通過(guò)化學(xué)方法修飾。例如，C末端氨基酸的C末端羧基基團(tuán)可通過(guò)化學(xué)方法修飾以包括氨基以取代羥基(即酰胺化的)。一些實(shí)施方案中，N末端和/或C末端氨基酸不被化學(xué)修飾。所述肽可在N末端氨基酸的氨基基團(tuán)?；耘c選自下組的酸形成N末端酰胺(i)CrC24脂肪族(aliphatic)(飽和的或可選不飽和的傲酸(例如,與乙酸、丙酸、丁酸、己酸，辛酸，癸酸、十二酸、十四酸(肉豆蔻酸)，十六酸、9-十六酸、十八酸、9-十八碳烯酸、ll沖八碳烯酸、9，12沖八碳雙烯酸，9,12，15-十八碳三烯酸,6，9，12-十八碳三烯酸，二十酸,9-二十碳烯酸，5，8,11，14-二十碳四烯酸，5，8，11，14，17-二十碳五烯酸，二十二垸酸，13-二十二碳烯酸，4，7,10，13,16，19-二十二碳六烯酸，二十四酸等形成N末端酰胺)；(ii)三氟乙酸；(iii)苯甲酸；和(iv)C,-C24脂肪族烷基磺酸，其形成脂肪族烷基磺酰胺，其中磺酸的CrC24脂肪族烷基碳鏈結(jié)構(gòu)與上文所述的脂肪族烷基羧酸中的脂肪族烷基羧酸鏈的相似。例如，肽可利用表示為(d-C23)-烷基-C(O)OH的羧酸基團(tuán)通過(guò)脫水偶聯(lián)?；?，其通過(guò)活化羧酸基團(tuán)形成表示為(CVC23)-烷基-C(0)-NH-肽的酰胺來(lái)進(jìn)行。類似地，磺酰胺可通過(guò)使磺酸種類(表示為(Q-C23)-烷基-S(02)-X，其中X為鹵素或OCH3或其他相容的離去基團(tuán))與N末端氨基基團(tuán)形成(Cr(:23)-烷基-S(OO-NH-肽所示的磺酰胺來(lái)形成。作為另一實(shí)例，N末端氨基酸的N末端氨基基團(tuán)可用Q-C24脂肪族烷基基團(tuán)垸基化，所述脂肪族烷基基團(tuán)的結(jié)構(gòu)如上所述。烷基化可通過(guò)利用脂肪族烷基鹵化物或脂肪族烷基磺酸酯(甲磺酸酯，甲苯磺酸酯，等來(lái)實(shí)現(xiàn))，優(yōu)選利用伯烷基鹵化物或伯垸基磺酸酯。N末端氨基酸可在末端氨基修飾以包括任何?；蛑咀艴；觉；鶊F(tuán)作為酰胺包括乙?；鶊F(tuán)(即，-C(0)CH3)，肉豆蔻?；鶊F(tuán)，丁?；?，己酰基，辛酰基，癸酰基，十二烷?；?，十四垸?；?，十六垸?；?-十六碳烯?；?，十八烷酰基，9-十八碳烯基，11-十八碳烯?；?，12-十八碳二烯?；?，9，12，15-十八碳三烯?；?，6,9,12-十八碳三烯酰基，二十垸?；?-二十碳烯?；?,8,11，14-二十碳四烯?；?，8,11,14，17-二十碳五烯?；?，二+二烷?；?，13-二十二碳烯?；?,7,10，13，16,19-二十二碳己烯?；耐轷；?，所述基團(tuán)通過(guò)酰胺鍵與肽上的末端氨基基團(tuán)共價(jià)相連。本發(fā)明肽的C末端氨基酸的C末端羧酸也可被化學(xué)修飾。例如C末端氨基酸可通過(guò)本發(fā)明肽的C末端羧酸基團(tuán)與胺的反應(yīng)形成酰胺基團(tuán)來(lái)修飾，所述酰胺諸如氨的酰胺；d-C24脂肪族烷基胺的酰胺，優(yōu)選線性脂肪族烷基胺的酰胺；羥基取代的C2-C24脂肪族垸基胺的酰胺；線性2-(CrC24脂肪族垸基)氧乙基胺基的酰胺；omega-甲氧基-聚(乙烯氧)n-乙基胺基團(tuán)(也稱為omega-甲氧基-PEG-alpha-胺基或omega-甲氧基-(聚乙烯乙二醇)胺萄的酰胺，其中n為0-10。肽的C末端氨基酸的C末端羧酸可為選自下組的酯的形式CrC24脂肪族烷基醇的酯，2-(omega-甲氧基-聚(乙烯氧)n)-乙醇基團(tuán)的酯，其中n為0-10。肽的C末端羧酸基團(tuán)，其可表示通式肽-C(O)OH，也可通過(guò)轉(zhuǎn)化成活性形式而得以酰胺化，所述活性形式諸如羧酸鹵化物、羧酸酸酐、N-羥基琥珀酰亞胺酯、五氟苯基(OPfp)酯，3-羥基-2，3-二氫-4-氧代-苯并-三嗪酮(ODhbt)酯，等，以促進(jìn)與氨或伯或仲胺的反應(yīng)，優(yōu)選氨或伯胺，優(yōu)選肽中的任何其他活性基團(tuán)通過(guò)肽合成領(lǐng)域已知的合成化學(xué)相同保護(hù)基團(tuán)來(lái)保護(hù)，尤其是肽固相合成的合成化學(xué)相容保護(hù)基團(tuán)，諸如苯甲基酯，t-丁基酯，和苯基酯等。產(chǎn)生的肽酰胺可表示為通式肽-C(0)-NRSR、胺在肽的C末端)，其中R3和R4獨(dú)立選自以下物質(zhì)組成的組CrC24垸基諸如甲基，乙基，丁基，異丁基，環(huán)丙甲基，己基，十二基，十四基，和如上所述的那些。C末端氨基酸的C-末端羧基也可轉(zhuǎn)化為羥基取代的C2-C24脂肪族垸基胺(羥基附著于胺的碳原子而不是胺的氮原子)的酰胺，諸如諸如2-羥基乙基胺，4-羥基丁基胺，和12-羥基十二基胺，等的酰胺。C-末端羧酸也可轉(zhuǎn)化為羥基-取代的C2-C24脂肪族烷基胺的酰胺,其中羥基基團(tuán)可被酰化與上述C2-C24脂肪族羧酸形成酯。優(yōu)選，在肽中，肽的C末端酰胺表示為通式肽-C(0)RSRS，RS是氫，RS選自下組氫，d-C24烷基和羥基-取代的C2-C24垸基。C末端氨基酸的C末端羧酸可轉(zhuǎn)化為線性2-(CrC24脂肪族烷基)氧乙基胺的酰胺。所述酰胺可通過(guò)例如使線性CVC24脂肪族醇與鉀的氫化物在含有2-氯乙醇的二甘醇二甲醚中反應(yīng)提供線性(VC24脂肪族垸基乙醇，其可通過(guò)氧化成醛轉(zhuǎn)化成胺，然后還原胺化成胺(例如利用氨)，或通過(guò)轉(zhuǎn)化成烷基鹵化物(例如利用亞硫酰氯化物)然后利用胺諸如氨進(jìn)行處理。C-末端氨基酸的C-末端羧酸也可轉(zhuǎn)化成omega-甲氧基-聚(乙烯氧)n-乙胺，其中n為0-10，其可從相應(yīng)的omega-甲氧基-聚(乙烯氧)n-乙醇制備，例如通過(guò)如上所述將醇轉(zhuǎn)化為胺。另一實(shí)施方案中，C末端羧基可轉(zhuǎn)化為通式為肽-C(0)-N^R8的酰胺，其中R是氫，尺8是線性2-(d-C24脂肪族垸基)氧乙基，其中CrC24脂肪族垸基部分如上所述并包括基團(tuán)諸如甲氧乙基(即，CH3OCH2-)，2-十二基氧乙基，等；或117是氫118是omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，其中聚(氧化乙烯)部分的n為0-10，諸如2-甲氧基乙基(即,CH30-CH2CH2-)，omega-甲氧基乙氧基乙基(即，CH30-CH20-CH2CH2-)直到CH30-(CH2CH20)ktCH2-。所述肽的c末端氨基酸的c-末端羧酸基團(tuán)也可為crc24脂肪族垸基醇的酯的形式，醇的脂肪族垸基部分如上所述。肽的c末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)也可為2-(omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基團(tuán)的酯的形式，其中n為0-10，其可從2-甲氧基醇作為2-甲氧基脫氫乙酸鈉(sodium2-methoxyethanolate)的形式與化學(xué)計(jì)量組成所需量(stoichiometricamount)的環(huán)氧乙烯反應(yīng)來(lái)制備，其中所述化學(xué)計(jì)量組成所需量有賴于n的大小。肽中氨基酸的側(cè)鏈也可被化學(xué)修飾。例如，苯丙氨酸或酪氨酸中苯基可被選自下組的取代基替代Q-Cm脂肪族烷基(g卩，線性或分支的，和/或飽和的或不飽和的，和/或含有環(huán)狀基團(tuán))諸如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基異丁基環(huán)丙基，2-甲基環(huán)丙基，環(huán)己基，辛基，癸基，十二基，十八基，二十基，二十二基，二十四基，9-十六碳烯基，9-十八碳烯基，11-十八碳烯基，9，12-十八碳二烯基，9，12，15-十八碳三烯基，9-二十碳烯基，5，8,11，14-二十碳四烯基，5，8,11，14,17-二十碳五烯基13-二十二碳烯基，和4，7，10,13,16，19-二十二碳六烯基；在除外不飽和位置的至少一個(gè)碳原子上被羥基取代的CrC24脂肪族烷基，所述羥基烷基的實(shí)例包括羥基甲基，羥基乙基，羥基十二基等；羥基取代的Q-C24垸基，被C2-C24脂肪族羧基發(fā)生酯化，所述酸諸如乙酸，丁酸，已酸，辛酸，癸酸，十二酸，十四酸，十六酸，9沖六烯酸，十八酸，9沖八烯酸，11沖八烯酸,9,12-十八二烯酸，9，12，15沖八碳三烯酸，6,9,12-十八碳三烯酸，二十酸，9-二十烯酸，5，8，11,14-二十碳四烯酸，5,8，11,14,17-二十碳五烯酸，二十二酸，13-二十二碳烯酸，4,7,10，13，16,19-二十二碳六烯酸，二十四酸，等，二羧酸諸如琥珀酸，或羥基酸諸如乳酸，其中酯取代基的碳原子的總數(shù)為3-25;鹵素諸如氟-，氯-，溴-，和碘-;硝基-;氨基-，諸如NH2，甲基氨基，二甲基氨基；三氟甲基-;羧基(-COOH);CrC24烷氧基(諸如可通過(guò)酪氨酸的烷基化形成)諸如甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙基氧基，丁氧基，異丁基氧基，環(huán)丙基，2-甲氧基環(huán)丙基，環(huán)己基，辛基氧基，癸基氧基，十二基氧基，十六基氧基，十八基氧基，二+基氧基，二+二基氧基，二+四基氧基，9-+六碳烯基氧基，9沖八碳烯基氧基，ll沖八碳烯基氧基9，12沖八碳二烯基氧基，9,12,15-十八碳三烯基氧基，6，9,12-十八碳三烯基氧基，9-二十碳烯基氧基，5,8,11,14-二十碳四烯基氧基5，8，11，14，17-二十碳五烯基氧基，13-二十二碳烯基氧基，禾卩4,7，10，13，16，19-二十二碳己烯基氧基；以及C2-C24羥基烷氧基，諸如2-羥基乙基氧基及其與上述羧酸或三氟乙酸形成的酯。絲氨酸羥基可被來(lái)自下組的取代基酯化C2-C24脂肪族羧酸基團(tuán)，諸如上文所述那些；三氟乙酸基團(tuán)；和苯甲酸基團(tuán)。賴氨酸中的epsilon氨基可通過(guò)化學(xué)方法修飾，例如通過(guò)與以下物質(zhì)形成酰胺C2-C24脂肪族羧酸基團(tuán)(例如，通過(guò)胺與羧酸的化學(xué)活性形式反應(yīng)，所述羧酸諸如酸的氯化物，酸酐，N羥基琥珀酰亞胺酯，五氟苯基(OPfp)酯,3-羥基-2，3-二氫-4-氧代-苯并-三嗪酮(ODhbt)酯，等)如上所述，或苯甲酸基團(tuán)，或氨基酸基團(tuán)。此外，賴氨酸中的epsilon氨基可通過(guò)用一或兩個(gè)CrC4脂肪族烷基垸化來(lái)進(jìn)行化學(xué)修飾。谷氨酸中的羧酸基團(tuán)可通過(guò)與胺形成酰胺來(lái)修飾，所述胺諸如氨；伯脂肪族烷基胺(其垸基部分如上所述)，包括甲基胺，或者氨基酸的氨基基團(tuán)。谷氨酸中的羧酸基團(tuán)可通過(guò)如上所述與CrC24脂肪族羥基垸基基團(tuán)形成酯來(lái)修飾，優(yōu)選與d-C24脂肪族垸基的伯醇形成的酯，所述醇諸如甲醇，乙醇，l-丙醇，n-十二醇等如上所述。本發(fā)明的肽以粘蛋白和/或粘液抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)和/或粘液抑制效應(yīng)。所述肽可具有(l)與等同濃度施用的MANS肽相比，在哺乳動(dòng)物中的更高的粘蛋白抑制效應(yīng)，(2)與等同濃度施用的MANS肽相比，在哺乳動(dòng)物中的更高的粘液抑制效應(yīng)，(3)具有高于MANS肽的更高的水溶性。MARCKS肽和MANS肽分別包含肉豆蔻酰基團(tuán)，其通過(guò)酰胺鍵在N末端氨基酸與胺相連。但是，如本發(fā)明所述，本發(fā)明的肽在肽序列的N末端氨基酸的肉豆蔻?；鶊F(tuán)存在下沒(méi)有粘蛋白分泌過(guò)多抑制活性。實(shí)際上，本發(fā)明不包含N末端化學(xué)修飾的肽被發(fā)現(xiàn)顯示粘液分泌過(guò)多抑制活性。本發(fā)明包含利用除外肉豆蔻?；幕鶊F(tuán)(諸如乙?；?進(jìn)行N末端化學(xué)修飾形成N末端酰胺的肽也被發(fā)現(xiàn)顯示粘蛋白分泌過(guò)多抑制活性。實(shí)際上，MANS肽的N末端乙?；问?非肉豆蔻?；?可在本發(fā)明的方法中顯示粘液分泌過(guò)多抑制活性。此外，本發(fā)明所述包含MANS肽氨基酸序列的肽的氨基酸序列及其變體在本發(fā)的方法中顯示粘蛋白分泌過(guò)多抑制活性。一方面，本發(fā)明提供抑制哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多的方法，所述方法包括施用哺乳動(dòng)物粘蛋白分泌過(guò)多抑制量的粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)具有序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.1)的氨基酸序列;(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本互補(bǔ)的氨基酸序列；其中肽的N末端氨基酸不是肉豆蔻?；牟⑶译牡腃末端氨基酸可選獨(dú)立地經(jīng)化學(xué)修飾，并且在以粘液分泌過(guò)多抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)所述肽具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。一個(gè)實(shí)施方案中，該肽的N末端氨基酸優(yōu)選是?；?。另一實(shí)施方案中，所述肽顯示至少一種下述性質(zhì)(a)以相同濃度施用哺乳動(dòng)物時(shí)對(duì)于哺乳動(dòng)物具有高于SEQIDNO:l的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)，其中N末端氨基酸是肉豆蔻?；?，或(b)在相同液體中、相同濃度下具有高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l的水溶性。一些實(shí)施方案中，N末端氨基基團(tuán)可被修飾以包括具有通式-C(O)R的?；渲蠷是線性或分支的烷基，具有1-15個(gè)碳原子，或可被修飾以包含通式-C(0)W的?；?，其中W是線性烷基，具有1-15個(gè)碳原子。肽的C末端氨基酸也可被化學(xué)修飾。例如C末端氨基酸的C末端羧基可被化學(xué)修飾以包含胺基取代羥基(即酰胺化)。一些實(shí)施方案中，N末端和/或C末端氨基酸不是化學(xué)修飾的。一些實(shí)施方案中，所述肽在人支氣管肺泡灌洗液(BALF)中具有高于在人血漿中的半壽期，并在人粘液(例如囊性纖維化患者的粘液)中的半壽期高于在人血漿中的半壽期。所述肽可用于抑制哺乳動(dòng)物中粘液分泌和/或粘液產(chǎn)生的方法中，治療哺乳動(dòng)物中粘蛋白和/或粘液的分泌過(guò)多的方法中，以及治療導(dǎo)致哺乳動(dòng)物中粘蛋白和/或粘液分泌過(guò)多的肺部疾病的方法中(諸如例如，哮喘，慢性支氣管炎，COPD,和囊性纖維化)。適合通過(guò)所述肽治療的疾病包括但不限于，炎性，病毒性，或細(xì)菌性氣道疾病(例如，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，普通感冒，鼻炎，急性或慢性支氣管炎，肺炎和犬窩咳)，過(guò)敏性疾病(例如，遺傳性過(guò)敏癥，過(guò)敏性炎癥)，支氣管擴(kuò)張癥，肺氣腫，支氣管哮喘，以及一些遺傳疾病(例如囊性纖維化)。肽可是適宜地用于治療以下文獻(xiàn)描述的疾病和病癥，以及用于下文描述的方法中美國(guó)專利申請(qǐng)10/180,753(公開號(hào)U.S.2003/0013652)和09/256,154和國(guó)際公開PCT/USOO/05050(國(guó)際公開號(hào)WO00/50062)，其全文包含在此作為參考。除了疾病相關(guān)性粘蛋白分泌過(guò)多，術(shù)語(yǔ)粘蛋白分泌過(guò)多也包括ATP誘導(dǎo)的粘蛋白分泌過(guò)多以及促分泌素誘導(dǎo)的粘蛋白分泌過(guò)多和刺激的粘蛋白分泌過(guò)多。優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽，其氨基酸序列具有參照氨基酸序列肽l的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸，其中粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽選自(a)以下肽組成的組:肽2,肽3，肽4,肽5，肽6，肽7，肽8，肽9,肽10，肽11,肽12，肽13，肽14，肽15，肽16,肽17，肽18，肽19,肽20，肽21,肽22,肽23,肽24，肽25,肽26，肽27，肽28,肽29，肽30，肽31,肽32，肽33，肽34，肽35，肽36，肽37,肽38,肽39,肽40,肽41，肽42,肽43,肽44,肽45,肽46，肽47，肽48,肽49,肽50，肽51，肽52，肽53,肽54,肽56，肽57，肽58,肽59，肽60,肽61,肽62,肽63，肽64，肽67,肽68,肽69，肽70,肽71，肽72，肽73,肽74，肽75,肽79,肽80,肽81,肽82,肽83,肽84，肽85，肽86，肽87，肽92，肽93,肽94,肽95,肽96,肽97，肽98，肽99，肽100,肽106，肽107,肽108，肽109，肽110，肽111,肽112,肽113,肽114，肽122,肽123，肽124，肽125,肽126，肽127，肽128,肽129，肽139，肽140,肽141，肽142,肽143，肽144,肽145，肽157，肽158，肽159，肽160,肽161,肽162，肽176,肽177,肽178,肽179，肽180，肽196,肽197,肽198，肽199，肽217,和肽219，如本文所述；和，(b)與(a)中定義的序列具有80%-96%的序列相同性的氨基酸序列；其中粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽的氨基酸序列的N末端氨基酸的胺通過(guò)酰胺鍵與選自肉豆蔻酸或乙酸的羧酸共價(jià)結(jié)合，并且其中粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽氨基酸序列的C末端氨基酸的羧基可選通過(guò)酰胺鍵與氨共價(jià)相連。所述肽可局部或系統(tǒng)性施用(例如以包含本發(fā)明的肽和可藥用載體的藥物組合物的方式)，并且可施用哺乳動(dòng)物身體的任何部分，包括但不限于，產(chǎn)生粘液和/或粘蛋白的身體的部分(例如優(yōu)選呼吸道，鼻腔，口腔，氣管，肺，胃腸道，目艮，生殖道等)。所述肽可以多種方式施用，包括但不限于，局部施用，胃腸外施用，直腸施用，肺施用，經(jīng)鼻施用，吸入，吹入，和口服。肺施用可通過(guò)利用，氣溶膠化器，霧化器，干粉吸入器，計(jì)量劑量的吸入器等進(jìn)行。所述肽可作為適于任何藥物有效施用途徑的藥物配制劑制備和施用。本發(fā)明的肽(或其藥物配制劑)可以適合以以下方式施用的形式口服施用(例如片劑，錠瓶硬或軟膠囊，水性或油性懸液，乳液，可分散的粉末或顆粒，糖漿或酏劑)，局部應(yīng)用(例如作為乳膏，油膏，凝膠和水性或油性溶液或懸浮液)，用于通過(guò)吸入施用(例如作為細(xì)粉末或液體氣溶膠)，通過(guò)吹入施用(例如作為細(xì)粉末)，或用于經(jīng)胃腸外施用(例如作為無(wú)菌水性或油性溶液，或經(jīng)靜脈、皮下、肌肉內(nèi)劑型或作為栓劑用于直腸施用)。所述肽可通過(guò)任何適合方法施用哺乳動(dòng)物的氣道，包括產(chǎn)生包含所述肽的氣溶膠。這種氣溶膠可為固體或液體，并且可為以水性為基礎(chǔ)的。所述氣溶膠的適宜大小顆粒可通過(guò)本領(lǐng)域已知的多種方法制備。所述氣溶膠的顆粒通常大小小于50微米，優(yōu)選約0.1-約10微米，更優(yōu)選約1-約10微米，更優(yōu)選約2-約7微米，優(yōu)選約2-約7微米。肽(或肽的藥物配制劑)的經(jīng)鼻施用可通過(guò)例如噴灑應(yīng)用肽的水性溶液或懸液或通過(guò)應(yīng)用諸如來(lái)自滴管或移液管肽的水性溶液或懸液的液滴或小液滴，例如以藥物可接受的形式，優(yōu)選無(wú)菌鹽水(NaCl)溶液進(jìn)行，所述溶液可選被緩沖。水性溶液的滅菌可通過(guò)例如對(duì)包含所述肽的含水溶液的無(wú)菌過(guò)濾，可選在藥學(xué)可接受的添加物諸如防腐劑、抗氧化劑、緩沖鹽、張力修飾劑等的存在下進(jìn)行。包含所述肽的水性懸液的滅菌可通過(guò)以下方法實(shí)現(xiàn)，例如照射或者無(wú)菌過(guò)濾，其可用于在懸浮的物質(zhì)的粒徑小于0.2微米的情況下，例如包含膠束的懸液，脂質(zhì)體諸如磷脂穩(wěn)定化的脂質(zhì)體，或類似的可通過(guò)0.2微米的濾紙的顆粒。本發(fā)明的肽的治療有效量的水性溶液(例如等張鹽水溶液或高張鹽水溶液，以及可選不與肽發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的糖)可通過(guò)例如無(wú)菌過(guò)濾滅菌，作為含有治療有效量的肽的等分試樣置于無(wú)菌小瓶中，凍干以形成干粉末，封口，這優(yōu)選在惰性環(huán)境或氣體的存在下利用無(wú)菌塞子或帽子進(jìn)行。使用之前，可加入足量的水重新水化干粉末形成等張溶液作為單劑量，其可作為氣溶膠施用哺乳動(dòng)物的氣道。施用哺乳動(dòng)物的肽或其藥物配制劑的量有賴于多種因素，包括但不限于，具體的肽，哺乳動(dòng)物的類型，哺乳動(dòng)物的疾病程度，哺乳動(dòng)物的重量，哺乳動(dòng)物的年齡。此外，希望在用肽治療的哺乳動(dòng)物中保持一定水平的粘蛋白分泌/粘液產(chǎn)生(例如正?；蚧A(chǔ)水平)。一個(gè)實(shí)施方案中，人是優(yōu)選需要治療的哺乳動(dòng)物，施用的肽的量足以在以單或多劑量施用時(shí)抑制粘蛋白分泌過(guò)多。本發(fā)明的肽的單劑量可為0.1mg-約30mg/kg體重，優(yōu)選約0.1mg-約15mg/kg體重，更優(yōu)選約0.1mg-約7.5mg/kg體重。劑量的數(shù)目和治療的持續(xù)時(shí)間有賴于受試者對(duì)治療的反應(yīng)。對(duì)單劑量的量，劑量的數(shù)目以及治療持續(xù)時(shí)間的調(diào)節(jié)可通過(guò)護(hù)理人員根據(jù)癥狀及其嚴(yán)重性來(lái)確定。一個(gè)實(shí)施方案中，分離的肽由少于24個(gè)氨基酸組成并具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸(或其他實(shí)施方案中，8-14個(gè)連續(xù)氨基酸或10-12個(gè)連續(xù)氨基酸)，其中氨基酸序列從參照序列的N末端氨基酸開始；(b)與(a)中定義的氯基酸序列基本上相似的序列；(c)氨基酸序列，，其具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸(或其他實(shí)施方案中，8-14個(gè)連續(xù)氨基酸或10-12個(gè)連續(xù)氨基酸)，其中氨基酸序列在參照序列的C末端氨基酸結(jié)束；以及(d)基本上類似于(c)中定義的氨基酸序列的序列。N末端氨基酸的N末端氨基和/或C末端氨基酸的C末端羧基可選如下進(jìn)行化學(xué)修飾-(1)所述肽的N-末端氨基酸的N-末端胺基可選為選自下組的酰胺的形式-C2-C24脂肪族羧酸的酰胺，三氟乙酸的酰胺；苯甲酸的酰胺；CrC24脂肪族垸基磺酸的酰胺；或肽的N末端氨基酸的N-末端胺基可選被選自下組的基團(tuán)烷基化:CrC24脂肪族烷基，線性2-(d-C24脂肪族垸基)氧乙基，omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，n為0-10;禾口(2)所述肽的C-末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)可選為選自下組的酰胺的形式氨的酰胺，Q-C24脂肪族烷基胺的酰胺，羥基-取代的C2-C24脂肪族垸基胺的酰胺，線性2-(Q-C24脂肪族烷基)氧乙基胺基的酰胺，以及omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基胺基的酰胺，n為0-10;或所述肽的C-末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)可選為選自下組的酯的形式CrC24脂肪族垸基醇的酯，2-(omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基的酯,n為0-10。所述肽以粘蛋白抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白釋放抑制效應(yīng)。所述肽在以相同濃度施用時(shí)對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白抑制效應(yīng)高于MANS肽和/或具有高于MANS肽的水溶性。另一個(gè)實(shí)施方案中，分離的肽由少于24個(gè)氨基酸組成并具有這樣的氨基酸序列，其為具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸(或其他實(shí)施方案中，8-14個(gè)連續(xù)氨基酸或10-12個(gè)連續(xù)氨基酸)的變體，其中氨基酸序列從參照序列的N末端氨基酸開始。N末端氨基酸的N末端氨基和/或C末端氨基酸的C末端羧基可選如下進(jìn)行化學(xué)修飾(1)所述肽的N-末端氨基酸的N-末端胺基可選為選自下組的酰胺的形式C2-C24脂肪族羧酸的酰胺，三氟乙酸的酰胺；苯甲酸的酰胺；CrC24脂肪族垸基磺酸的酰胺；或肽的N末端氨基酸的N-末端胺基可選被選自下組的基團(tuán)垸基化:d-C24脂肪族烷基，線性2-(CrC24脂肪族垸基)氧乙基，omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，n為0-10;和(2)所述肽的C-末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)可選為選自下組的酰胺的形式氨的酰胺，d-C24脂肪族烷基胺的酰胺，羥基-取代的C2-C24脂肪族烷基胺的酰胺，線性2-(d-C24脂肪族垸基)氧乙基胺基的酰胺，以及omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基胺基的酰胺，n為0-10;或所述肽的C-末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)可選為選自下組的酯的形式CVC24脂肪族垸基醇的酯，2-(omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基的酯,n為0-10。所述肽以粘蛋白抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)。所述肽在以相同濃度施用時(shí)對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白抑制效應(yīng)高于MANS肽和/或具有高于MANS肽的水溶性。其他實(shí)施方案中，抑制哺乳動(dòng)物中粘蛋白分泌過(guò)多的方法包括施用哺乳動(dòng)物粘蛋白抑制量的分離的粘蛋白分泌抑制肽。所述分離的肽由少于24個(gè)氨基酸組成并具有選自下組的氨基酸序列(a)氨基酸序列，其具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸(或其他實(shí)施方案中，8-14個(gè)連續(xù)氨基酸或10-12個(gè)連續(xù)氨基酸)，其中氨基酸序列從參照序列的N末端氨基酸開始；(b)與(a)中定義的氨基酸序列基本上相似的序列；(c)氨基酸序列，其具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸(或其他實(shí)施方案中，8-14個(gè)連續(xù)氨基酸或10-12個(gè)連續(xù)氨基酸)，其中氨基酸序列從參照序列的C末端氨基酸結(jié)束；以及(d)基本上類似于(c)中定義的氨基酸序列的序列。N末端氨基酸的N末端氨基和/或C末端氨基酸的C末端羧基可選如下進(jìn)行化學(xué)修飾(1)所述肽的N-末端氨基酸的N-末端胺基可選為選自下組的酰胺的形式C2-C24脂肪族羧酸的酰胺，三氟乙酸的酰胺；苯甲酸的酰胺；CrCw脂肪族垸基磺酸的酰胺；或肽的N末端氨基酸的N-末端胺基可選被選自下組的基團(tuán)烷基化:d-C24脂肪族烷基，線性2-(CrC24脂肪族烷基)氧乙基，omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基n為0-10;禾口(2)所述肽的C-末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)可選為選自下組的酰胺的形式氨的酰胺，C,-C24脂肪族烷基胺的酰胺，羥基-取代的C2-C24脂肪族垸基胺的酰胺，線性2-(Cl-C24脂肪族烷基)氧乙基胺基的酰胺，以及omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基胺基的酰胺，n為0-10;或所述肽的C-末端氨基酸的C-末端羧酸基團(tuán)可選為選自下組的酯的形式CrC24脂肪族垸基醇的酯，2-(omega-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基的酯，n為0-10。所述肽以粘蛋白抑制量施用哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白抑制效應(yīng)。所述肽在以相同濃度施用時(shí)對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白抑制效應(yīng)高于MANS肽和/或具有高于MANS肽的水溶性。本發(fā)明的肽可通過(guò)任何適宜方法制備，包括固相肽合成技術(shù)，諸如例如使用芴基甲氧基羰基(FMoc)化學(xué)法和適宜的肽合成儀諸如CS-Bio肽合成儀，或利用叔-丁氧基羰基(Boc)化學(xué)方法和適宜的肽合成儀諸如ABI430A肽合成儀。適合用于FMoc或Boc合成的被保護(hù)的氨基酸可購(gòu)得，例如購(gòu)自Calbiochem，aunitofEMDBiosciences,SanDiego，CA。在固相肽合成中，所需肽的C末端羧基作為N-alpha-保護(hù)的氨基酸共價(jià)連接于聚合物支持物。N-alpha-氨基保護(hù)基隨后被去除并且第二N-alpha-保護(hù)的氨基酸通過(guò)形成酰胺偶聯(lián)于附著的氨基酸，所述酰胺與連接在樹脂上的去保護(hù)的氨基酸N-alpha-胺相結(jié)合。這些步驟利用所需肽序列的各自的被保護(hù)的氨基酸重復(fù)，直到獲得所需的序列。合成末，C末端氨基酸和聚合物支持物之間的連接被切割以釋放所述肽。所述肽可被分離并通過(guò)HPLC純化。有用HPLC純化方法包括離子交換層析和反向?qū)游?。肽溶液可通過(guò)蒸發(fā)或凍干以提供固體形式的分離的肽。含有可氧化基團(tuán)諸如蛋氨酸、半胱氨酸、色氨酸等殘基的肽優(yōu)選保持無(wú)氧環(huán)境中，并且配制并保存在溶液或懸液中時(shí)，用于無(wú)氧溶劑中?；罨孽ヅc樹脂連接的肽的胺末端在合成過(guò)程中的偶聯(lián)可利用如下物質(zhì)實(shí)現(xiàn)利用過(guò)量諸如4倍過(guò)量的氨基酸和苯并三唑-l-基-氧基-tris-二甲基氨基-膦六氟磷酸酯，以及諸如6倍過(guò)量的N，N-二異丙基乙基胺。得自Fmoc合成的肽可從樹脂上利用三氟乙酸/thioamsole/三異丙基硅烷(triisopropylsilane)/甲醇(例如以比例90:5:2.5:2.5，vol/vol/vol/vol)在20'C、4h來(lái)切割，得自Boc合成的那些通過(guò)用例如HF/anisole(9:1，vol/vo喊4°C、1h來(lái)切割。在Fmoc肽策略中，第一Fmoc氨基酸通過(guò)酸惰性接頭附著于不溶支持樹脂。Fmoc的去保護(hù)可通過(guò)用堿諸如哌啶處理氨基酸來(lái)實(shí)現(xiàn)。第二Fmoc氨基酸利用預(yù)活化的種類或原位活化來(lái)偶聯(lián)(偶聯(lián)反應(yīng)可利用活化劑原位進(jìn)行，所述活化劑是肽化學(xué)領(lǐng)域已知的，諸如DCC,HBTU，TBTU，BOP,BOP-Cl，等)。所需的肽合成之后，樹脂連接的肽被去保護(hù)并例如通過(guò)利用弱酸諸如三氟乙酸(TFA)或TMSBr在存在凈化劑諸如巰基化合物，苯酚和水的條件下進(jìn)行酸性水解裂解從固相支持物解離。一方面，對(duì)側(cè)鏈功能團(tuán)進(jìn)行去保護(hù)并從樹脂切割之前，肽的末端胺基可利用羧酸(例如，脂肪族羧酸，三氟乙酸，苯甲酸等)處理，例如，用脂肪族羧酸種類諸如脂肪族羧酸的活化形式諸如五氟酯以類似于肽鍵形成的方式與羧酸形成酰胺或與脂肪族磺酸種類(諸如磺酰氯)在肽的N末端形成磺酰胺?？蛇x,N-末端胺可被以下物質(zhì)垸基化，例如,脂肪族烷化劑(例如，脂肪族甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)，其通過(guò)相應(yīng)的磺酰氯和堿諸如嘧錠與脂肪醇反應(yīng)獲得，所述醇可通過(guò)脂肪族羧酸的還原(例如通過(guò)鋰鋁氫化物(lithiumaluminumhydride》獲得。另一方面，相應(yīng)的D氨基酸(例如達(dá)4個(gè)D氨基酸)與剩余物如L氨基酸可用于肽合成方法中以提供本發(fā)明的肽，其可選如上文所述進(jìn)行化學(xué)修飾。另一方面，所需的肽氨基酸序列，例如通過(guò)固相合成，并且側(cè)鏈保護(hù)基被選擇為耐受酯切割步驟以從樹脂釋放肽的情況下，形成在肽c末端具有游離羧基的側(cè)鏈保護(hù)的肽。c-末端羧酸可轉(zhuǎn)化成活性酯(例如五氟苯基酯)并用胺諸如氨處理形成酰胺(表示為肽-C(0)-NH2),或與上述脂肪族胺形成肽的脂肪族酰胺，任何剩余的保護(hù)基可被去除以提供所需的本發(fā)明的肽。此外，C末端羧酸酯可通過(guò)以下方法形成C末端羧酸與脂肪醇通過(guò)脫氫偶聯(lián)諸如通過(guò)使用碳化二亞胺試劑而形成。含有酸性功能基團(tuán)的氨基酸諸如天冬氨酸和谷氨酸可以類似于上述方法的方式轉(zhuǎn)化成酰胺和酯，并且賴氨酸中的epsikm胺基可如上文對(duì)于末端胺基所述的化學(xué)方法那樣轉(zhuǎn)化成酰胺和脂肪族胺。可用于本發(fā)明的肽的FMoc固相合成的受保護(hù)的氨基酸的實(shí)例包括以下非限制性實(shí)例N-alpha-Fmoc-L-丙氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-(2-Fmoc-氧基-4-甲氧基苯甲基)-丙氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-甘氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-(2-Fmo0氧基-4-甲氧基苯甲基)-甘氨酸五氟苯基酯;N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸g-2-苯基異丙基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸alpha-4-{N-[l-(4，4-二甲基-2,6-二氧代環(huán)亞己基(dioxocyclohexylidene))-3-甲基丁基]-氨基}苯甲基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸gamma-4-(N-[l-(4，4-二甲基-2，6-二氧代環(huán)亞己基)-3-甲基丁基]-氨基}苯甲基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸alpha-烯丙基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸g-苯甲基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸alpha-t-丁基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸gamma-t-丁基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酸gamma-t-丁基酉旨五氟苯基酯；N陽(yáng)alpha,epsilon-二-Fmoc-L-賴氨酸五氟苯基酯；N-alpha,epsilon-二-Fmoc-L-賴氨酸；N-alpha-1-(4,4-二甲基-2，6-二氧代環(huán)己-1-亞基)乙基-N-epsilon-Fmoc-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-L-賴氨酸；>!-&11^^111001^-&111&-(2孑1110(>氧基-4-甲氧基苯甲基)-N-epsilon-t-丁氧基羰基(butoxycarbonyl)隱L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon-l-(4,4匿二甲基-2,6-二氧代環(huán)己-l-亞基)-3-甲基丁基-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon-1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代環(huán)己-1-亞基)乙基丄-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon-2-氯-CBZ-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon-4-甲基三苯甲游基-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon國(guó)乙酰-L-賴氨酸;N-alpha-Fmoc-N-epsilon-苯甲基氧基羰基-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon-t-Boc-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-N-epsilon-t-Boc-L-賴氨酸五氟苯基酯；N垂alpha-Fmoc-N-epsilon-三氟乙酰-L-賴氨酸；N-alpha-Fmoc-4-氯-L-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-4-氰基-L-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-4-氟-L-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-4-硝基-L-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-L-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-L-苯丙氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-(2-Fmoc-氧基-4-甲氧基苯甲基)-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-N-alpha-甲基-L-苯丙氨酸；N-alpha-Fmoc-L-脯氨酸五氟苯基酯；^^^1^^1110(^31111113-(4,4'-二甲氧基二苯甲基)-L-谷氨酰胺；N-alpha-Fmoc-gamma-三苯甲游基-L-谷氨酰胺五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酰胺；N-alpha-Fmoc-L-谷氨酰胺五氟苯基酯;N-alpha-Fmoc-N-gamma-三苯甲游基-L-谷氨酰胺；^^1^^11100:^-(4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯磺酰)-L-精氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺；N-alpha-Fmoc-NG-2,2，4，6,7-五甲基二氫苯并呋喃(dihydrobenzofUran)-5-磺酰-L-精氨酸；N-alpha-Fmoc-NG-2，2，5,7,8-五甲基chroman-6-磺酰-L-精氨酸；^&^1^^1110(:-1^5-4-甲氧基-2，3,6-三甲基苯磺酰-L-精氨酸;N-alpha-Fmoc-N-4-甲氧基-2,3，6-三甲基苯磺酰-L-精氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fm0C-NG-硝基-L-精氨酸；N-alpha-Fmoc-N-甲苯磺?；?L-精氨酸；N-alpha-Fmoc-0-(2-乙酰氨-2-脫氧基-3,4,6-三-O-乙酰-alpha-D-吡喃半乳糖基)-L-絲氨酸；N-alpha-Fmoc-L-絲氨酸；N-alpha-Fmoc-O-苯甲基-L-磷酸絲氨酸；N-alpha-Fmoc-O-苯甲基-L-絲氨酸；N-alpha-Fmoc-O-t-丁基-L-絲氨酸;N-alpha-Fmoc-O-t-丁基-L-絲氨酸N-羥基琥珀酰亞胺(succinimide);N-alpha-Fmoc-O-三苯甲游基-L-絲氨酸；N-alpha-Fmoc-L-蘇氨酸；N-alpha-Fmoc-O-苯甲基-L-磷酸蘇氨酸；N-alpha-Fmoc-O-苯甲基-L-蘇氨酸;N-alpha-Fmoc-O-t-丁基-L-蘇氨酸；N-alpha-Fmoc-O-三苯甲游基-L-蘇氨酸；N-alpha-Fmoc-0-(2-乙酰胺-2-脫氧-3,4,6-三-0-乙酰-alpha-D-吡喃半乳糖基-L-蘇氨酸；N-alpha-Fmoc-L-纈氨酸；N-alpha-Fmoc-L-纈氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-(2-Fmoc-氧基_4-甲氧基苯甲基)-纈氨酸；N-alpha-Fmoc-N-alpha-(2-Fmoc-氧基-4-甲氧基苯甲基)-纈氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-甲基-L-纈氨酸；N-alplia-Fmoc-O-(雙-二甲基氨基-膦(phosphono))-L-酪氨酸；N-alpha-Fmoc-L-酪氨酸；N-alpha-Fmoc-0-2,6-二氯苯甲基-L-酪氨酸;N-alpha-Fmoc-0-2-溴代-CBZ-L-酪氨酸；N-alpha-Fmoc-O-2-氯代三苯甲游基-L-酪氨酸；N-alpha-Fmoc-O-苯甲基-L-磷酸酪氨酸；N-alpha-Fmoc-O-甲基-L-酪氨酸；N-alpha-Fmoc-O-磷酸-L-酪氨酸；N-alpha-Fmoc-O-t-丁基-L-酪氨酸-alpha-Fmoc-O-t-丁基-L-酪氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-l-金剛垸(adamantly)酯;N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-2-金剛烷酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-2-苯基異丙基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-4-(N-[I-(4，4-二甲基-2，6-二氧代環(huán)亞己基)-3-甲基丁基]-氨基}苯甲基酯;N畫alpha-Fmoc-L-天冬氨酸alpha-4-{N-[1-(4,4-二甲基-2，6-二氧代環(huán)亞己基)-3-甲基丁基]-氨基}苯甲基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸alpha-烯丙基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-苯甲基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸alpha-t-丁基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-t-丁基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸beta-t-丁基酯五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸-beta-1-金剛烷酯五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬氨酸-beta-2-金剛垸酯五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-L-亮氨酸；N-alpha-Fmoc-L-亮氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-(2-Fmoc-氧基-4-甲氧基苯甲基)-亮氨酸；^^^11&-11100>1-&^1^-(2^11100氧基-4-甲氧基苯甲基)-亮氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-甲基-L-亮氨酸；N-alpha-Fmoc-L-異亮氨酸；N-alpha-Fmoc-L-異亮氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-N-alpha-丁基-L-異亮氨酸；N-alpha-Fmoc-beta-2，4，6-三甲氧基苯甲基-L-天冬酰胺；N-alpha-Fmoc-beta-三苯甲游基-L-天冬酰胺五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-L-天冬酰胺；N-alpha-Fmoc-L-天冬酰胺五氟苯基酯；N畫alpha-Fmoc-N-beta-(3,4,6-三-0-乙酰-2-(乙酰氨基)-脫氧-2-beta-吡喃葡萄糖基)-L-天冬酰胺；N-alpha-Fmoc-N-beta-三苯甲游基-L-天冬酰胺；N-alpha-Fmoc-N-im-甲基三苯甲游基-L-組氨酸；N-alpha-Fmoc-N-im-t-Boc-L-組氨酸環(huán)己基銨鹽；N-alpha-Fmoc-N-im-甲苯磺酰基-L-組氨酸；N-alpha-Fmoc-N-im-三苯甲游基-L-組氨酸;N-alpha-Fmoc-S-乙酰胺基甲基-L-半胱氨酸；N-alpha-Fmoc-S-乙酰胺基甲基-L-半胱氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-S-苯甲基-L-半胱氨酸；N-alpha-Fmoc-S-p-甲氧基苯甲基-L-半胱氨酸；N-alpha-Fmoc-S-p-甲氧基三苯甲游基-L-半胱氨酸；N-alpha-Fmoc-S-t-丁基-L-半胱氨酸;N-alpha-Fmoc-S-t-丁基-L-半胱氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-S-t-丁基硫代-L-半胱氨酸；N-alpha-Fmoc-S-t-丁基硫代-L-半胱氨酸五氟苯基酯；N-alpha-Fmoc-S-三苯甲游基-L-半胱氨酸；N-alpha-Fmoc-S-三苯甲游基-L-半胱氨酸五氟苯基酯。這些和用于固相肽合成的其他氨基酸試劑可商購(gòu)得，例如購(gòu)自CalbiochemCorporation脂肪族羧酸也可得自Sigma-AldrichChemicalCompany。所述肽也可通過(guò)固相合成利用Boc策略制備，其中第一Boc氨基酸通過(guò)HF可切割接頭連接于不溶支持樹脂。通過(guò)去除Boc基團(tuán)去保護(hù)可伴隨用TFA處理BOC-氨基酸來(lái)實(shí)現(xiàn)。第二Boc氨基酸隨后利用預(yù)活化的種類或原位活化偶聯(lián)。合成所需的肽之后，對(duì)樹脂結(jié)合的肽進(jìn)行去保護(hù)，并通過(guò)利用強(qiáng)酸諸如HF,TFMSOTf，或TMSOTf.通過(guò)切割從固相支持物解離?？杉尤胩砑觿┲T如巰基化合物添加入保護(hù)肽使其在切割過(guò)程中不發(fā)生任何碳化。以下保護(hù)基適合用于HF切割:Arg(Mts);Cys(4-MeOBzl);His(Z);Arg(Tos);GIu(OBzI);Lys(Cl-Z);Asp(OBzl);Glu(OcHex);Ser(Bzl);Asp(OcHex);His(Bom);Thr(Bzl);Cys(Acm);His(Dnp);Trp(CHO);Cys(4-MeBzl);His(Tos);Tyr(Br-Z);Asp(OtBu);His(Trt)。以下保護(hù)基適合TFMSOTf切害!j:Arg(Mts);His(Bom);Met(O);As[rho](OBzl);His(Dnp));Ser(Bzl);Cys(Acm);His(Tos);Thr(Bzl);Cys(4-MeBzl);His(Z);Trp(CHO);GIu(OBzI);Lys(Cl-Z);Tyr(Br-Z)。以下保護(hù)基適合TMSOTf切割A(yù)rg(Mts);Glu(OcHex);Trp(CHO);Arg(Mbs);His(Bom);Trp(Mts);Asp(OBzl);Lys(Cl-Z);Tyr(Br-Z);Asp(OcHex);Met(O);Tyr(Bzl);Cys(Acm);Ser(Bzl);Tyr(Cl-Bzl);His(Bom);Thr(Bzl)。氨基酸羧酸和胺的偶聯(lián)形成肽酰胺鍵可通過(guò)在Boc策略利用以下物質(zhì)進(jìn)行:碳化二亞胺諸如二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC),二異丙基碳化二亞胺(DIC)，t-丁基丁基-和t-丁基乙基-碳化二亞胺；BOP;PyBroP;PyBOP;HBTU;TBTU;和HATU，所有這些試劑都需要堿來(lái)活化并通過(guò)形成對(duì)稱酸酐來(lái)起作用?？蛇x，可以使用羧酸-碳酸或羧酸-次磷酸混合酸酐試劑，其通過(guò)將異丁基-或異丙基-氯甲酸酯和取代的氯化次磷酸與N-alpha-保護(hù)的氨基酸，或N-羧基酸酐(NCA's)或Leuchs'酸酐來(lái)制備。對(duì)于Fmoc化學(xué)方法，可根據(jù)上文所述的合成策略對(duì)N-末端胺和C-末端羧酸基進(jìn)行化學(xué)修飾。實(shí)施例本發(fā)明將進(jìn)一步通過(guò)以下實(shí)例說(shuō)明，所述實(shí)例并非意圖限制。這些實(shí)例提供得自對(duì)特定肽進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，所述肽代表本發(fā)明公開的肽。分別位于所述肽的氨基酸序列左側(cè)和右側(cè)的N末端氨基酸的N末端氨基和/或C末端氨基酸的C末端羧基可被任意修飾，其通過(guò)用#標(biāo)記受試肽來(lái)表示。表IX包含肽的關(guān)鍵氨基酸。Myr-和Ac-分別是肉豆蔻酰和乙酰的簡(jiǎn)寫，其通過(guò)氨基鍵與各個(gè)肽氨基酸序列的N末端氨基酸共價(jià)相連;-NH2表示氨的酰胺，其共價(jià)連接于肽氨基酸序列的C末端。實(shí)施例1A-哮喘小鼠模型中受試肽的相對(duì)效力I.方案和方法設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)檢査MANS肽和其他相關(guān)受試肽是否在體內(nèi)抑制鼠氣道中的粘蛋白分泌過(guò)多。用于這些研究中的卵清蛋白致敏的小鼠過(guò)敏性炎癥和哮喘模型見(jiàn)于Singeretal.(2004)，見(jiàn)上文。作為陰性對(duì)照，含有N-末端肉豆蔻酰基以及與MANS的氨基酸相同但順序不同(即隨機(jī)N末端序列，RNS，肉豆蔻酰-肽232)的對(duì)照肽與推薦的活性肽一起進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。BP2小鼠，年齡6-8周，每周兩次經(jīng)皮下(twiceatweeklyintervals訴lug卵清蛋白免疫。致敏14天后，將動(dòng)物暴露于氣溶膠化的卵清蛋白，72小時(shí)后其導(dǎo)致杯狀細(xì)胞明顯增生。72小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)之后，將促分泌素醋甲膽堿(60mM)利用Buxcosystem霧化器遞送，提供細(xì)的氣溶膠90秒鐘。用促分泌素攻擊之前15分鐘，將50受試多肽，以三種不同濃度(10pM，100pM，或140pM),通過(guò)氣管內(nèi)途經(jīng)施用。RNS肽僅僅以高劑量水平(50^L140溶液)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。MANS以及RNS肽在120mM乙酸鈉，pH7中完全可溶(freelysoluable)。這些實(shí)驗(yàn)中所用的各種對(duì)照見(jiàn)下表I。每次實(shí)驗(yàn)以6只小鼠每點(diǎn)的方式進(jìn)行，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。為了檢測(cè)品系間差異，在Balb/C小鼠中在相似方案中重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。刺激的和未剌激的粘蛋白分泌，在用120mM乙酸鈉處理的小鼠中(數(shù)據(jù)未顯示)與鹽水對(duì)照相同。醋甲膽堿攻擊之后，處死動(dòng)物并對(duì)每組6只動(dòng)物進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(BAL)以分析分泌的粘蛋白。表l表明實(shí)驗(yàn)的總體方案。表I-受試肽存在下醋甲膽堿誘導(dǎo)的粘蛋白分泌過(guò)多的總體方<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>II.分析BAL液體通過(guò)斷頸處死小鼠，并快速暴露氣管，通過(guò)小的切口插入套管。收集0.5ml支氣管肺泡灌洗(BAL)液然后用含有PMSF(5mM)，EDTA(5mM)和DTT(5mM)的3x1mlPBS處理。通過(guò)簡(jiǎn)單離心將BAL液分離成無(wú)細(xì)胞和含細(xì)胞級(jí)分，然后進(jìn)行分析。通過(guò)ELISA法通過(guò)利用顯示與小鼠粘蛋白反應(yīng)的抗粘蛋白抗體分析無(wú)細(xì)胞上清中粘蛋白的存在。具體地，識(shí)別分泌型粘蛋白的碳水化合物部分的小鼠抗-MUC5AC抗體用于這些測(cè)定法中。從每份BAL樣品產(chǎn)生的數(shù)據(jù)相對(duì)于Bradford測(cè)定法中測(cè)定的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)化。粘蛋白含量表示為利用抗粘蛋白抗體獲得的值減去用非免疫對(duì)照抗體獲得的值。所有ELISA數(shù)據(jù)利用單向ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。P〈0，05時(shí)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)被認(rèn)為明顯不同于對(duì)照。下表II，III,IV，V和VI總結(jié)了各種肽對(duì)Balb/C和BP2小鼠中粘蛋白分泌的影響。如表II所示，在100的各種受試肽存在下，粘蛋白分泌是對(duì)照(即沒(méi)有肽)的8%到56%。表II-哮喘小鼠模型中的粘蛋白分泌(Balb/C小鼠中的實(shí)驗(yàn))<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>所有受試肽的濃度均為100pM。所有值相對(duì)于對(duì)照顯著(p〈0.001)除外myr-肽137(p〈0.01)和RNS。表III-哮喘小鼠模型中的粘蛋白分泌(Balb/C小鼠中的實(shí)驗(yàn))<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>所有受試肽的濃度均為100pM。*=值相對(duì)于對(duì)照顯著(pO.05);**-值相對(duì)于對(duì)照顯著(pO.Ol)。表IV-哮喘小鼠模型中的粘蛋白分泌(Balb/C小鼠中的實(shí)驗(yàn))<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>*—直相對(duì)于對(duì)照顯著(pO.05);**Hl相對(duì)于對(duì)照顯著(p〈0.01).+=值相對(duì)于lOO(iM處理顯著(p0.05)。表V-哮喘小鼠模型中的粘蛋白分泌(BP2小鼠中的實(shí)驗(yàn))<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)確定小鼠哮喘模型中受試肽的作用的持續(xù)時(shí)間。如方法1A中所述，用卵清蛋白免疫Balb/C小鼠。14天以后，用氣溶膠化的卵清蛋白攻擊動(dòng)物。用促分泌素處理72小時(shí)后，通過(guò)氣溶膠方法遞送醋甲膽堿。受試肽(50L的100M溶液)通過(guò)氣管內(nèi)途徑施用30min，60min,或120min，然后用醋甲膽堿攻擊。處死動(dòng)物并進(jìn)行BAL分析分泌的粘蛋白。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示于表VI。表VI-小鼠中受試肽的作用持續(xù)時(shí)間(Balb/C小鼠中的實(shí)驗(yàn))<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>可選小鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃投繙y(cè)定小鼠肺中粘蛋白的方法可用于評(píng)估本發(fā)明肽的活性。該方法描述于Evansetal(Am.J.Respir.CellMol.Biol.Vol.31,pp382-394,2004)。簡(jiǎn)而言之，每周通過(guò)對(duì)Balb/c雌性小鼠(5-8周齡，每只20-25g)通過(guò)腹腔內(nèi)注射(i.p.)100含有2.2mg明礬鹽以及20嗎卵清蛋白的生理鹽水溶液來(lái)致敏、持續(xù)四周。最后一次腹腔內(nèi)注射7天后，在30分鐘中通過(guò)氣溶膠施用溶于生理鹽水中的卵清蛋白的2.5%溶液來(lái)攻擊小鼠。利用AeroMistCA-209加壓空氣霧化器(compressedairnebulizer)(CIS-US,Inc.,Bedford,MA)產(chǎn)生所述氣溶膠。卵清蛋白攻擊后3天，在2-3分鐘中，將50受試肽以10的等分試樣遞送給小鼠的每個(gè)鼻孔。15分鐘后，用氣溶膠化的100mMATP溶液在處理小鼠5分鐘。20分鐘后，小鼠通過(guò)ip注入克他命(ketamine)，甲苯噻嗪，和乙酰丙嗪的混合物來(lái)麻醉，用鹽水通過(guò)右心室灌洗肺直到從肺組織中流出的血液變清。深度麻醉下，用20號(hào)鈍頭套管對(duì)動(dòng)物進(jìn)行氣管切開，通過(guò)腹主動(dòng)脈放血處死。固定劑(O.lM磷酸鹽緩沖液中的4。/。多聚甲醛，pH7.0)以壓力10-15cm通過(guò)氣管輸入，原位固定肺30分鐘，從胸腔取出并在4"C過(guò)夜固定。將肺包埋在石蠟中，切成6pm的切片。為了對(duì)粘蛋白進(jìn)行熒光標(biāo)記，利用過(guò)碘酸熒光chiff(PAFS)染色法對(duì)組織進(jìn)行染色。組織首先在in/。過(guò)碘酸(10min)中染色，潤(rùn)洗，用吖啶黃素(acriflavine)熒光Schiff，s劑(0.5%吖啶黃素HC1wt/vo1,1%焦亞硫酸鈉(sodiummetabisulfite)wt/vo1,0.01NHC1)處理20min,在雙去離子H20中潤(rùn)洗，并在酸性乙醇(O.lNHC1包含在70%乙醇中)中潤(rùn)洗2x5min。在分級(jí)乙醇溶液中對(duì)切片進(jìn)行脫水，允許其在黑暗中在空氣中干燥。一旦干燥，PAFS-染色的切片用加拿大膠覆蓋培養(yǎng)基(Canadabalsammountingmedium)(50。/。加拿大膠樹脂，50%丁基水楊酸鹽；FisherChemicals)覆蓋。為定量粘蛋白，PAFS-染色的切片在40x倍物鏡下進(jìn)行檢驗(yàn)。獲取來(lái)自中軸(axial)支氣管的10個(gè)視野的圖像，利用MagnaFire2.1(Optronics)控制照相機(jī)設(shè)置。PAFS顯像通過(guò)利用雙激發(fā)濾鏡(500run和573nm峰)激發(fā)樣品并利用雙發(fā)射濾鏡來(lái)觀察樣品，峰值531nm(綠)和628nm(紅)。對(duì)于每個(gè)視野，首先僅僅利用相機(jī)上的紅色獲得通道在(590ms暴露)來(lái)產(chǎn)生圖像。相同的圖像隨后利用相機(jī)上的紅色和綠色通道獲得(590ms紅，450ms綠)。對(duì)于測(cè)量細(xì)胞學(xué)(morphometric)分析，粘蛋白染色的體積密度和熒光強(qiáng)度隨后利用ImageProPlus測(cè)定。氣道上皮中的粘蛋白染色的體積密度通過(guò)立體測(cè)量學(xué)方法計(jì)算。簡(jiǎn)而言之，染色的表面積與上皮總表面積的比例除以邊界長(zhǎng)度指標(biāo)(boundarylengthmeasurement),其是總上皮表面積，基底膜長(zhǎng)度，以及幾何學(xué)常數(shù)4/3i的積。結(jié)果，數(shù)據(jù)表示為細(xì)胞內(nèi)粘蛋白含量每基底膜表面積。粘蛋白分泌表示為總上皮含量的分?jǐn)?shù)。實(shí)施例1B氣溶膠化的Ac-肽106肽施用對(duì)具有杯狀細(xì)胞發(fā)育不良以及氣道阻塞的小鼠模型中的粘蛋白分泌過(guò)多的影響氣溶膠化的Ac-肽106肽對(duì)哮喘小鼠模型中的粘蛋白分泌過(guò)多的效力在兩個(gè)濃度測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，5-8周齡的BALB/c小鼠如實(shí)施例1A所述用卵清蛋白每周免疫、持續(xù)3周。第28天，用氣溶膠化的2.5%卵清蛋白生理鹽水溶液攻擊小鼠30分鐘。卵清蛋白攻擊之后3天，利用AeroMistCA-209霧化器，施用每組小鼠(r^2)10mM和30mM的氣溶膠化的Ac-肽106的等張溶液1小時(shí)。氣溶膠顆粒的物質(zhì)平均空氣動(dòng)力學(xué)直徑為1.49um(范圍0,4-4.7um)。根據(jù)Ac-肽106的這些濃度和該粒徑，計(jì)算的Ac-肽106的肺沉積分別為0.38mg/kg體重和1.1mg/kg體重。Ac-肽106施用之后立即通過(guò)氣溶膠施用促分泌素腺苷酸三磷酸酯(ATP)(鹽水中的濃度為100mM)5分鐘。處死小鼠，20分鐘之內(nèi)收獲肺。在鹽水中潤(rùn)洗肺，用多聚甲醛固定，包埋于石蠟中，并切片。定量分析切片中粘蛋白的存在，其通過(guò)定量免疫組織化學(xué)方法根據(jù)Evansetal.(Am.J.Respir.CellMol.Biol.Vol.31,pp382-394,2004)所述進(jìn)行。結(jié)果顯示Ac-肽106在濃度0.38和1.1mg/kg體重分別有效抑制ATP誘導(dǎo)的粘蛋白分泌過(guò)多30-67%。實(shí)施例2在0.5生理鹽水中評(píng)估受試肽的定量溶解性各種受試肽G-5mg每種)在單個(gè)2mL螺紋帶帽玻璃瓶中精確稱重，將25uL0.5N鹽水，pH6.5的等分試樣在25。C、環(huán)境壓力下加入。溶解性通過(guò)目測(cè)評(píng)估。如果受試肽完全溶解在第一鹽水等分式樣中，計(jì)算其溶解性并認(rèn)為超過(guò)計(jì)算的量。因此，如果3.5mg受試肽立即溶于0.5N鹽水的第一個(gè)25等分試樣時(shí)，其溶解度被認(rèn)為>140mg/mL。類似地，如果1.7mg受試肽不能溶于1.7mL的0.5N鹽水中時(shí)，其溶解度被認(rèn)為〈1.0mg/mL。各種受試多肽的溶解性的評(píng)估結(jié)果顯示于表VII。半生理鹽水(half-normalsaline)中的各種肽的溶解度也可通過(guò)以下兩種半-定量方法方法1和方法2之一測(cè)定。方法1可用于其在半生理鹽水中的溶解性將低于約10mg/mL的多肽，而方法2可用于將以超過(guò)約30mg/mL溶解于半生理鹽水中的肽。方法1每種肽以濃度1mg/mL溶于二甲基亞砜(DMSO)。該溶液的等分試樣用半生理鹽水稀釋5倍提供0.2mg/mL溶液。利用C18/5微米柱對(duì)后一種肽溶液進(jìn)行HPLC分析。洗脫緩沖液包含0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液(緩沖液A)和0.1%TFA的100%乙腈溶液(緩沖液B)。所述肽在約20分鐘之中用5%B-45%B的梯度洗脫。每個(gè)肽峰的曲線下面積(AUC)可由此測(cè)定。該AUC值可用作標(biāo)準(zhǔn)值(AUC-Std)以測(cè)定飽和溶液上清中每種相應(yīng)肽的濃度。每種肽的飽和溶液可通過(guò)加入足量的肽到lmL半生理鹽水中直到獲得云霧狀懸液來(lái)制備。后者隨后在10,000xg離心10分鐘。隨后對(duì)上清進(jìn)行HPLC分析。如需要，HPLC分析之前進(jìn)一步用半生理鹽水稀釋上清。從該分析獲得的AUC(AUC-Sat)用于通過(guò)以下公式確定飽和溶液中肽的濃度溶液中肽的濃度=AUC-Stdx0.2/AUC-Sat.方法2該方法可提供半正常鹽水中的肽溶解性的估計(jì)。所述方法包括加入加權(quán)量(記為"xx"毫克)的肽溶解于lmL半生理鹽水中的量。結(jié)果表示為〉xxmg/mL，其中xx是加入半生理鹽水中肽的量。表VII-20度在0.5N鹽水、pH6.5中的肽溶解度<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>實(shí)施例3-牛物液體中受試肽的穩(wěn)定性對(duì)人血漿，人BALF，以及CF患者粘液中的各種受試肽進(jìn)行分析確定受試肽對(duì)生物液體中蛋白裂解的易感性。此外，對(duì)顯示濃度衰減的樣品進(jìn)行一級(jí)動(dòng)力學(xué)分析以測(cè)定受試肽的半壽期。在接受的同一天分析該樣品或保存在-2(TC并在隨后的2天之內(nèi)分析。l.生物液體的收集和處理A.人血漿新鮮人血樣品收集在檸檬酸鹽緩沖的vacuutrainers中(不含EDTA或肝素)。紅細(xì)胞(RBC)通過(guò)在4。C對(duì)血液在4000xg離心10min去除。血漿等分試樣(0.9mL)隨后與O.lmL的0.5mg/mL受試肽溶液在75mM乙酸鈉緩沖液、pH7.0中混合(spike)，并保溫在水浴中保持在37°C。一式兩份的10uL等分試樣在5，15，30，60和180分鐘間隔取出，并且立刻用990uL下述溶液"冷淬(quench)"，所述溶液包含含有0.2%蟻酸的50%乙腈+50%水。隨后對(duì)樣品進(jìn)行液相層析質(zhì)譜(LCMS)分析。B.人BAL液體獲得收集自COPD患者的BALF樣品并冷凍。解凍BALF樣品，混合在一起并在4-8。C、10,000xg離心10min。上清(0.9mL)與0.1mL的0.5mg/mL肽溶液在75mM乙酸鈉緩沖液、pH7.0中混合，并如上所述進(jìn)行加工和分析。C.人CF粘液來(lái)自CF患者的冷凍粘液(痰)被解凍，與2體積的75mM乙酸鈉緩沖液，pH7借助于玻璃組織研磨器混合，在4-8'C、10,000xg離心10min。將沉淀重懸于1體積乙酸鹽緩沖液中并離心。組合兩種上清并如下使用。上清(450^L)與500.5mg/mL肽溶液在75mM乙酸鈉緩沖液、pH7.0中混合，并如上所述進(jìn)行加工和分析。II.濃度分析所有樣品利用LC/MS/MS(MDS/SCIEX，API4000Model)分析。利用PhenomenexLunaC18柱進(jìn)行，而利用陽(yáng)離子電噴離子化進(jìn)行質(zhì)譜分析。A.分析人血漿和BALF中的肽Ac-肽79-NH2,肽106-NH2,Ac-肽106以及分析人血漿和人CF粘液中的肽mvr-肽106，肽106，肽106-NH2,AcJ太106和cvc-肽106(環(huán)狀肽)在人的粘液中對(duì)于每種肽，在濃度0.100pg/mL,1.00ng/mL,10.0(ig/mL，和100pg/mL，通過(guò)LCMS分析校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物，但除外myr-肽106，肽106,肽106-NH2,肽106，和環(huán)肽，cyc-肽106,它們?cè)跐舛?.100昭/mL,1.00pg/mL,10.0略/mL，和75pg/mL進(jìn)行分析。標(biāo)準(zhǔn)物在1。/。人BALF，血漿或粘液中在含有0.2%蟻酸的50/50水/乙腈混合物中制備。對(duì)于每組標(biāo)準(zhǔn)物，儀器反應(yīng)值利用1/(濃度)2線性最小二乘直線(least-squaresline)擬合。樣品濃度利用該直線的斜率和截距計(jì)算。校準(zhǔn)范圍之外的濃度通過(guò)外推校準(zhǔn)曲線測(cè)定。B.分析人血漿和BALF中的肽myr-肽，234-NH2-mw-肽234，肽106和myr-肽106對(duì)于每種肽，在濃度50昭/mL分析一式兩份的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物。對(duì)于每組標(biāo)準(zhǔn)物，儀器反應(yīng)曲線使用沒(méi)有加權(quán)的線性最小二乘直線通過(guò)截距O來(lái)擬合。樣品濃度利用該線的斜率和截距計(jì)算。C.分析人血漿和BALF中的肽肽237，mvr-肽106-NH,，mvr-肽236和mvr-肽236-NH，為了分析血漿中的肽濃度，對(duì)于每種肽，在濃度25嗎/mL和50pg/mL分析一式兩份的校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物。對(duì)于每組標(biāo)準(zhǔn)物，儀器反應(yīng)曲線使用沒(méi)有加權(quán)的線性最小二乘直線通過(guò)截距0來(lái)擬合。樣品濃度利用該直線的斜率和截距計(jì)算。校準(zhǔn)范圍之外的濃度通過(guò)外推校準(zhǔn)曲線來(lái)測(cè)定。為了分析BALF樣品中的肽濃度，在BALF，水，乙腈，和蟻酸的混合物中制備的一份50昭/mL校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物針對(duì)每個(gè)樣品組進(jìn)行分析。in.動(dòng)力學(xué)圖譜對(duì)于所有顯示濃度中明顯的衰減的樣品，一級(jí)動(dòng)力學(xué)圖譜通過(guò)利用軟件程序Watson測(cè)定。Watson擬合log轉(zhuǎn)化的數(shù)據(jù)與最小二乘直線，從而測(cè)定參數(shù)諸如Cmax(最大濃度)，截距，速率常數(shù)，斜率和Tm(半壽期)。所得動(dòng)力學(xué)參數(shù)基于線性擬合，而不是實(shí)際的濃度值。溶液中的0時(shí)間校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)物不包括作為動(dòng)力學(xué)圖譜的一部分。然而，真正的一級(jí)動(dòng)力學(xué)不需要包括零時(shí)間數(shù)據(jù)點(diǎn)來(lái)準(zhǔn)確描述濃度作為時(shí)間的函數(shù)的改變。人血漿，人BALF(BALF"/2)，和人CF粘液(粘液"/2)中受試肽的半壽期(t力)示于表VIII。表vm<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>#:myr和Ac分別是肉豆蔻?；鸵阴；矁r(jià)結(jié)合于N末端胺位點(diǎn)；-NH2是共價(jià)結(jié)合于肽C末端羧基的酰胺；s叫no.和eye分別是序列編號(hào)和環(huán)的簡(jiǎn)寫。-:實(shí)驗(yàn)未進(jìn)行*:沒(méi)有從實(shí)驗(yàn)獲得足夠數(shù)據(jù)以計(jì)算半壽期提供固體形式的分離的肽。含有可氧化基團(tuán)諸如蛋氨酸、半胱氨酸、色氨酸等殘基的肽優(yōu)選保持無(wú)氧環(huán)境中，并且配制并保存在溶液或懸液中時(shí)，用于無(wú)氧溶劑中?；罨孽ヅc樹脂連接的肽的胺末端在合成過(guò)程中的偶聯(lián)可利用如下物質(zhì)實(shí)現(xiàn)利用過(guò)量諸如4倍過(guò)量的氨基酸和苯并三唑-l-基-氧基-tris-二甲基氨基-膦六氟磷酸酯，以及諸如6倍過(guò)量的N，N-二異丙基乙基胺。得自Fmoc合成的肽可從樹脂上利用三氟乙酸/thioamsole/三異丙基硅烷(triisopropylsilane)/甲醇(例如以比例90:5:2.5:2.5，vol/vol/vol/vol)在20'C、4h來(lái)切割，得自Boc合成的那些通過(guò)用例如HF/anisole(9:1，vol/vo喊4°C、1h來(lái)切割。在Fmoc肽策略中，第一Fmoc氨基酸通過(guò)酸惰性接頭附著于不溶支持樹脂。Fmoc的去保護(hù)可通過(guò)用堿諸如哌啶處理氨基酸來(lái)實(shí)現(xiàn)。第二Fmoc氨基酸利用預(yù)活化的種類或原位活化來(lái)偶聯(lián)(偶聯(lián)反應(yīng)可利用活化劑原位進(jìn)行，所述活化劑是肽化學(xué)領(lǐng)域已知的，諸如DCC,HBTU，TBTU，BOP,BOP-Cl，等)。所需的肽合成之后，樹脂連接的肽被去保護(hù)并例如通過(guò)利用弱酸諸如三氟乙酸(TFA)或TMSBr在存在凈化劑諸如巰基化合物，苯酚和水的條件下進(jìn)行酸性水解裂解從固相支持物解離。一方面，對(duì)側(cè)鏈功能團(tuán)進(jìn)行去保護(hù)并從樹脂切割之前，肽的末端胺基可利用羧酸(例如，脂肪族羧酸，三氟乙酸，苯甲酸等)處理，例如，用脂肪族羧酸種類諸如脂肪族羧酸的活化形式諸如五氟酯以類似于肽鍵形成的方式與羧酸形成酰胺或與脂肪族磺酸種類(諸如磺酰氯)在肽的N末端形成磺酰胺?？蛇x,N-末端胺可被以下物質(zhì)垸基化，例如,脂肪族烷化劑(例如，脂肪族甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)，其通過(guò)相應(yīng)的磺酰氯和堿諸如嘧錠與脂肪醇反應(yīng)獲得，所述醇可通過(guò)脂肪族羧酸的還原(例如通過(guò)鋰鋁氫化物(lithiumaluminumhydride》獲得。另一方面，相應(yīng)的D氨基酸(例如達(dá)4個(gè)D氨基酸)與剩余物如L體重4-7Kg，平均5.03Kg.;環(huán)境適應(yīng)期7天；鑒定方法獨(dú)特的紋身加5數(shù)字ID編號(hào)。病史受試前12—24個(gè)月，所有動(dòng)物用于疫苗研究，針對(duì)腦膜炎免疫。所有動(dòng)物在其嬰兒期也接受常規(guī)抗麻疹以及破傷風(fēng)免疫。C.動(dòng)物管理-飼養(yǎng)條件與標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程中的一致，其基于"GuidefortheCareandUseofLaboratoryAnimals"。食物標(biāo)準(zhǔn)恒河猴飲食，每天提供。水隨意獲取，從自動(dòng)飲水系統(tǒng)獲得市政用水。居住動(dòng)物獨(dú)立圈養(yǎng)在認(rèn)可的不銹鋼籠子中，通過(guò)表示動(dòng)物編號(hào)，受試碼，性別，動(dòng)物碼的卡片區(qū)分。環(huán)境室溫每天監(jiān)測(cè)。房間溫度范圍20-26°C。房間濕度范圍，每天調(diào)節(jié)，為40-70%。光循環(huán)利用自動(dòng)定時(shí)器(12小時(shí)光，12小時(shí)黑暗)控制。人員助手接受關(guān)于靈長(zhǎng)類知識(shí)的適當(dāng)培訓(xùn)。結(jié)果結(jié)果提供數(shù)據(jù)，RNS肽，乙酸鈉緩沖液或生理鹽水對(duì)于粘液分泌沒(méi)有影響，而粘液分泌的幾乎75%受到MANS肽抑制。實(shí)施例5-測(cè)定人支氣管上皮細(xì)胞中分泌的粘蛋白的組織培養(yǎng)方法HBE1是乳頭瘤病毒轉(zhuǎn)化的人支氣管上皮細(xì)胞系，在空氣/液體界面中培養(yǎng)時(shí)能分泌粘蛋白。HBE1細(xì)胞培養(yǎng)在空氣/液體界面中，如前所述(Lietal，J.Biol.Chem.,volume276，pp40982-40990，2001)。簡(jiǎn)而言之，HBE1細(xì)胞培養(yǎng)在空氣/液體界面中，通過(guò)將適當(dāng)量的細(xì)胞接種到12孔跨孔透明培養(yǎng)插入物(Costar，Cambridge,MA)中進(jìn)行，所述插入物表面包被一薄層大鼠尾膠原蛋白I型(CollaborativeBiomedical,Bedford,MA)。在濕化的95%空氣，5%C02環(huán)境下，細(xì)胞首先浸沒(méi)培養(yǎng)在培養(yǎng)基中5-7天直到幾乎滿底。那時(shí)，空氣/液體界面通過(guò)去除表層培養(yǎng)基并從基底外側(cè)喂養(yǎng)細(xì)胞來(lái)產(chǎn)生。培養(yǎng)基以后每天更換。細(xì)胞再培養(yǎng)14天允許完全分化。在細(xì)胞上表面累積的粘蛋白通過(guò)用磷酸鹽緩沖的鹽水pH7.2洗滌來(lái)去除。為了收集基線粘蛋白分泌，將細(xì)胞與單獨(dú)的培養(yǎng)基保溫30分鐘，收集上方培養(yǎng)基中分泌的粘蛋白，通過(guò)ELISA定量。為測(cè)定粘蛋白促分泌素誘導(dǎo)的粘蛋白分泌過(guò)多，將細(xì)胞暴露于含有0.5^M佛波醇豆蔻酸乙酸酯(PMA)的培養(yǎng)基中30分鐘，收集粘蛋白并通過(guò)ELISA定量。為了測(cè)定受試肽對(duì)PMA誘導(dǎo)的粘蛋白分泌過(guò)多的抑制，將細(xì)胞與含有25或50)iM受試肽的培養(yǎng)基預(yù)保溫15分鐘，然后與0.5^MPMA保溫30分鐘。每種受試肽和每種對(duì)照使用6個(gè)孔。收集在上方培養(yǎng)基中分泌的粘蛋白，通過(guò)夾心ELISA方法利用堿性磷酸酶-偶聯(lián)的粘蛋白(MUC5A)特異性抗體(ZymedLaboratories,SanFrancisco,CA)定量。用0.5^MPMA處理HBE1細(xì)胞導(dǎo)致粘蛋白分泌增加20%。PMA誘導(dǎo)的這種粘蛋白分泌增加通過(guò)用25MANS肽或用25Ac-肽no:106預(yù)處理而100%阻斷。Ac-肽no:219在濃度25不100%抑制PMA誘導(dǎo)的粘蛋白分泌，但是也抑制粘蛋白分泌到低于未經(jīng)刺激的培養(yǎng)基對(duì)照的20%的水平。Ac-肽no:251對(duì)PMA誘導(dǎo)的粘蛋白分泌增加的抑制效應(yīng)最小，為6%。表ix含有本發(fā)明的肽列表以及其各自的氨基酸序列和相應(yīng)的SEQIDNOS。表IX肽和氨基酸序列<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>雖然本發(fā)明已經(jīng)詳細(xì)描述并給出其具體實(shí)施方案，對(duì)于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員顯而易見(jiàn)可進(jìn)行各種改變和修飾而不偏離本發(fā)明的精神和范圍權(quán)利要求1.抑制哺乳動(dòng)物中粘蛋白分泌過(guò)多的方法，所述方法包括給哺乳動(dòng)物施用粘蛋白分泌過(guò)多抑制量的粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽，所述肽由少于24個(gè)氨基酸組成，并且具有選自以下序列組成的組的氨基酸序列(a)具有參照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列；和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的一或多個(gè)氨基酸^E選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列起始于參照序列的N末端氨基酸。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列起始于參照序列的位置2的氨基酸到位置21的氨基酸。4.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列包括參照序列的連續(xù)殘基A,K，G和E(SEQIDNO:219)。5.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列終止于參照序列的C末端氨基酸。6.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列由參照序列的8-14個(gè)連續(xù)氨基酸組成或者由與所述參照序列基本相同的氨基酸序列的8-14個(gè)連續(xù)氨基酸組成。7.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的氨基酸序列由參照序列的10-12個(gè)連續(xù)氨基酸組成或者由與所述參照序列基本相同的氨基酸序列的10-12個(gè)連續(xù)氨基酸組成。8.權(quán)利要求l的方法，其中所述肽的N末端氨基酸在N末端氨基發(fā)生烷基化，酰胺化，或?；?。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述肽的N末端氨基酸在N末端氨基發(fā)生肉豆蔻?；?。10.權(quán)利要求8的方法，其中所述肽的N末端氨基酸在N末端氨基發(fā)生酰化。11.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽的N末端氨基酸在N末端氨基是非肉豆蔻酰化的。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述肽選自以下一組乙酰-肽106，肽106，和肽106-NH2。13.權(quán)利要求5的方法，其中所述肽選自以下一組肽15，肽45，肽91和肽153。14.權(quán)利要求2的方法，其中所述肽選自以下一組肽79，肽233，肽234，myr-肽234-NH2，和肽235。15.權(quán)利要求4的方法，其中所述肽是乙酰-肽219。16.權(quán)利要求1的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人。17.權(quán)利要求1的方法，其中哺乳動(dòng)物中的粘蛋白分泌過(guò)多是哺乳動(dòng)物中的肺疾病引起的。18.權(quán)利要求15的方法,其中所述肺疾病選自以下疾病組成的組哮喘、慢性支氣管炎、COPD和囊性纖維化。19.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽顯示至少一種以下性質(zhì)(a)以相同濃度施用于所述哺乳動(dòng)物時(shí)，對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)高于所述參照序列；或(b)在相同液體中、相同濃度下，具有高于所述參照序列的水溶性。20.抑制哺乳動(dòng)物中粘蛋白分泌過(guò)多的方法，所述方法包括給哺乳動(dòng)物施用粘蛋白分泌過(guò)多抑制量的粘蛋白分泌過(guò)多抑制肽，所述肽具有選自以下序列組成的組的氨基酸序列(a)具有序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的氨基酸序列；和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的N末端氨基酸是非肉豆蔻?；牟⑶胰芜x地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，所述肽的C末端氨基酸任選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用于哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。21.權(quán)利要求20的方法，其中所述肽的N末端氨基酸是乙?；摹?2.權(quán)利要求20的方法，其中所述肽顯示以下性質(zhì)中的至少一種:(a)以相同濃度施用于所述哺乳動(dòng)物時(shí)，對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l;或(b)在相同液體中、相同濃度下，其水溶性高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:1。23.—種肽，其由少于23個(gè)氨基酸組成，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)具有參照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列；和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的N末端氨基酸是乙?；牟⑶宜鲭牡腃末端氨基酸任選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用于哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。24.權(quán)利要求23的肽，其中所述肽的C末端氨基酸在C末端羧基發(fā)生酰胺化或酯化。25.權(quán)利要求23的肽，其中C末端氨基酸在C末端羧基與以下物質(zhì)發(fā)生酰胺化氨，CrC24脂肪族烷基胺，羥基取代的Q-C24脂肪族垸基胺，線性2-(d-C24脂肪族垸基)氧乙基胺基，或co-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，其中n為0-10。26.權(quán)利要求23的肽，其中C末端氨基酸在C末端羧基與以下物質(zhì)發(fā)生酯化Q-C24脂肪族垸基醇或^(Q)-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基團(tuán)，其中n為0-10。27.權(quán)利要求23的肽，其中所述肽選自乙?；?肽106和乙?；?肽219組成的組。28.權(quán)利要求23的肽，其中所述肽顯示以下性質(zhì)中的至少一種(a)以相同濃度施用于所述哺乳動(dòng)物時(shí)，對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l;或(b)在相同液體中、相同濃度下，其水溶性高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l。29.—種肽，其由少于24個(gè)氨基酸組成，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)具有參照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列；其中所述肽包含至少一個(gè)氨基酸取代，其中K取代A;A取代F，K,GQ，S，T,和/或E;或E取代Q;其中所述肽的N末端和C末端氨基酸任選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，且所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用于哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。30.權(quán)利要求29的肽，其中N末端氨基酸在N末端胺與以下物質(zhì)發(fā)生烷基化Q-C24脂肪族烷基，線性2-(d-C24脂肪族烷基)氧乙基，或co-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，其中n為0-10。31.利要求29的肽，其中N末端氨基酸在N末端胺與以下物質(zhì)發(fā)生酰胺化C2-C24脂肪族羧酸，三氟乙酸，苯甲酸，或d-C24脂肪族垸基磺酸。32.權(quán)利要求29的肽，其中所述肽的C末端氨基酸在C末端羧基發(fā)生酰胺化或酯化。33.權(quán)利要求29的肽，其中C末端氨基酸在C末端羧基與以下物質(zhì)發(fā)生酰胺化氨，CrC24脂肪族烷基胺，羥基取代的CrC24脂肪族垸基胺，線性2-(CrC24脂肪族垸基)氧乙基胺基，或co-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，其中n為0-10。34.權(quán)利要求29的肽，其中C末端氨基酸在C末端羧基與以下物質(zhì)發(fā)生酯化CrC24脂肪族垸基醇或2-(①-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基團(tuán)，其中n為0-10。35.權(quán)利要求29的肽，其中所述肽顯示以下性質(zhì)中的至少一種(a)以相同濃度施用于所述哺乳動(dòng)物時(shí)，對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:1;或(b)在相同液體中、相同濃度下，其水溶性高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l。36.權(quán)利要求29的肽，其中所述肽選自由肽233-245以及肽247-251組成的組。37.—種肽，其由少于24個(gè)氨基酸組成，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)具有參照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列；和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的N末端序列起始于參照序列的位置2到位置21;且其中所述肽的N末端和C末端氨基酸任選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用于哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。38.權(quán)利要求37的肽，其中在N末端氨基與以下物質(zhì)發(fā)生烷基化C廣C24脂肪族烷基，線性2-(C廣C24脂肪族垸基)氧乙基，或Q)-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，其中n為0-10。39.利要求37的肽，其中在N末端氨基與以下物質(zhì)發(fā)生酰胺化C2-C24脂肪族羧酸，三氟乙酸，苯甲酸，或Q-C24脂肪族烷基磺酸。40.權(quán)利要求37的肽，其中所述肽的C末端氨基酸在C末端羧基發(fā)生酰胺化或酯化。41.權(quán)利要求37的肽，其中在C末端羧基與以下物質(zhì)發(fā)生酰胺化氨，(VC24脂肪族烷基胺，羥基取代的C2-C24脂肪族烷基胺，線性2-(C,-C24脂肪族垸基)氧乙基胺基或(D-甲氧基-聚(氧化乙烯)n-乙基，其中n為0-10。42.權(quán)利要求37的肽，其中在C末端羧基與以下物質(zhì)發(fā)生酯化d-C24脂肪族垸基醇或2-(Q)-甲氧基-聚(氧化乙烯)n)-乙醇基團(tuán)，其中n為0-10。43.權(quán)利要求37的肽，其中所述肽顯示以下性質(zhì)中的至少一種(a)以相同濃度施用于所述哺乳動(dòng)物時(shí)，對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)高于N末端氨基酸被肉豆蔻酰化的SEQIDN0:1;或(b)在相同液體中、相同濃度下，其水溶性高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l。44.一種肽，其由少于17個(gè)氨基酸組成，所述肽具有選自下組的氨基酸序列(a)具有參照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的4-16個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列；和(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的N末端和C末端氨基酸任選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，且所述肽的N末端氨基酸是非肉豆蔻?；?，所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用于哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。45.權(quán)利要求44的肽，其中所述肽的氨基酸序列起始于參照序列的N末端氨基酸。46.權(quán)利要求44的肽，其中所述肽的氨基酸序列包括參照序列的殘基AKGE(SEQIDNO:219)。47.權(quán)利要求44的肽，其中所述肽的氨基酸序列終止于參照序列的C末端氨基酸。48.權(quán)利要求44的肽，其中所述肽的氨基酸序列由參照序列的8-14個(gè)連續(xù)氨基酸組成或者由與所述參照序列基本相同的氨基酸序列的8-14個(gè)連續(xù)氨基酸組成。49.權(quán)利要求44的肽，其中所述肽的氨基酸序列由參照序列的10-12個(gè)連續(xù)氨基酸組成或者由與所述參照序列基本相同的氨基酸序列的10-12個(gè)連續(xù)氨基酸組成。50.權(quán)利要求44的肽，其中所述肽的N末端氨基酸在N末端氨基發(fā)生乙酰化。51.—種肽，其由選自下組的序列組成(a)具有序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQIDNO.l)的氨基酸序列；禾口(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；其中所述肽的N末端氨基酸是非肉豆蔻酰化的，且所述肽的C末端氨基酸任選地獨(dú)立地通過(guò)化學(xué)方法修飾，所述肽在以粘蛋白分泌過(guò)多抑制量施用于哺乳動(dòng)物時(shí)具有粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)。52.權(quán)利要求51的肽，其中所述肽的N末端氨基酸是乙酰化的。53.權(quán)利要求51的肽，其中所述肽顯示以下性質(zhì)中的至少一種(a)以相同濃度施用于所述哺乳動(dòng)物時(shí)，對(duì)哺乳動(dòng)物的粘蛋白分泌過(guò)多抑制效應(yīng)高于N末端氨基酸被肉豆蔻?；腟EQIDNO:l;或(b)在相同液體中、相同濃度下，其水溶性高于N末端氨基酸被肉豆蔻酰化的SEQIDNO:l。54.藥物組合物，其包含權(quán)利要求23-53之一的肽，并任選地包含可藥用載體和/或稀釋劑。55.權(quán)利要求23-53之一的肽在制備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用于治療哺乳動(dòng)物中由于肺疾病造成的粘蛋白分泌過(guò)多。全文摘要本發(fā)明提供了包含少于24個(gè)氨基酸的肽。所述的肽具有選自以下序列組成的組的氨基酸序列(a)具有參照序列肽1的4-23個(gè)連續(xù)氨基酸的氨基酸序列；(b)與(a)中定義的序列基本相同的氨基酸序列；和(c)(a)中定義的氨基酸序列的變體。還提供了非肉豆蔻?；腗ANS肽。利用所述肽的各種方法在本發(fā)明提供。文檔編號(hào)A61K38/16GK101146545SQ200680009056公開日2008年3月19日申請(qǐng)日期2006年1月20日優(yōu)先權(quán)日2005年1月20日發(fā)明者I·帕里克申請(qǐng)人:拜歐馬克醫(yī)藥有限公司