專利名稱：：通過乳酸菌培養(yǎng)所得到的降血壓劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種降血壓劑，其以在特定的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌所得的培養(yǎng)物為有效成分。
背景技術(shù)：
：以往，含有螺旋藻或小球藻的食品，由于其豐富含有綠黃色蔬菜中特有的營養(yǎng)成分或固有的營養(yǎng)成分，因此，其作為可輕易攝取在日常飲食中容易缺乏的營養(yǎng)成分的食品被利用。近來，提出了在螺旋藻或小球藻中培養(yǎng)乳酸菌，改善螺旋藻和小球藻的特有的氣味和風(fēng)味的食品(參考專利文獻(xiàn)1和2)。另外，據(jù)稱特定的健康食品對(duì)高血壓癥有效，已知通過在乳類中接種乳酸菌的方法(專利文獻(xiàn)3)、在乳制品中接種酶、接著接種乳酸菌的方法(專利文獻(xiàn)4)、或者將含有糠、胚芽的米糠等在一定條件下浸漬在水中的方法(專利文獻(xiàn)5)得到的健康食品。但是，雖然在水的存在下維持含有螺旋藻或小球藻和乳酸菌的混合物并進(jìn)行乳酸菌培養(yǎng)，將由此得到的培養(yǎng)物作為健康食品使用是已知的，但對(duì)高血壓癥有效這一事實(shí)還完全不知。專利文獻(xiàn)l:日本特開2004-081206號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2:日本特開昭63-157963號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3:日本特許3172150號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4:日本特開2001-120179號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5:日本特許2590423號(hào)公報(bào)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的課題在于提供一種降血壓劑，其將在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌而得至'J的乳酸菌培養(yǎng)物作為有效成分。用于解決問題的方法本發(fā)明人們?yōu)榱私鉀Q上述課題，對(duì)于在水的存在下維持微藻類和乳酸菌并利用各種條件培養(yǎng)該混合體中的乳酸菌而得到的乳酸菌培養(yǎng)物，進(jìn)行有關(guān)降血壓作用的試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該培養(yǎng)物具有非常優(yōu)異的作用，以至完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明提供一種降血壓劑，其將在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌而得到的乳酸菌培養(yǎng)物作為有效成分。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明能夠得到一種降血壓劑，其將在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌而得到的乳酸菌培養(yǎng)物作為有效成分。圖l是表示培養(yǎng)時(shí)間到24小時(shí)為止的實(shí)施例l和實(shí)施例2的GABA量(mg/100g)的比專交圖。圖2是表示以第0周的血壓為基準(zhǔn)的第X周的血壓上升率的圖。(試驗(yàn)例)具體實(shí)施方式以下對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。作為本申請(qǐng)發(fā)明所使用的微藻類，可列舉出螺旋藻、小球藻等。作為本發(fā)明所使用的螺旋藻，例如可列舉出以下的物質(zhì)。螺旋藻(Spirulina)被包含在藍(lán)藻類(Cyanobacteria)中，是屬于以往統(tǒng)稱為螺旋藻屬的節(jié)旋藻屬(Arthrospira)和螺旋藻屬(Spirulina)的微小的單細(xì)胞微生物，例如可列舉出，鈍丁貞節(jié)旋藻(Arthrospiraplatensis)、極大節(jié)旋藻(Arthrospiramaxima)、Arthrospirageitleri、Arthrospirasiamese、大蟲累旋藻(Spirulinamajor)、鹽澤蟲累旋藻(Spirulinasubsalsa)等，其中,從可人工培養(yǎng)且容易得到的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選鈍頂節(jié)旋藻、極大節(jié)旋藻、Arthrospirageitleri、Arthrospirasiamese。作為本發(fā)明所使用的小球藻，可列舉出例如以下的物質(zhì)。小球藻(Chlorella)是指綠藻類(Chlorophyceae)、小球藻屬(Chlorella)的藻類，從容易得到且安全性優(yōu)異的觀點(diǎn)考慮，可列舉出例如普通小球藻(C.vulgaris)、Chlorellaregularis、淀粉核小球藻(C.pyrenoidosa)、橢圓小5求藻(C.ellipsidea)等。這些微藻類，一直以來作為食品被廣泛使用，在安全性上已經(jīng)被確認(rèn)沒有問題。作為這些微藻類，可列舉出生的藻體、干燥藻體和經(jīng)機(jī)械處理等方法處理過的藻體處理物等。作為生的藻體，例如，可通過離心分離、濾過等方法收獲被培養(yǎng)在水中的螺旋藻、小球藻而得到。生的藻體從培養(yǎng)槽收獲后可按原有狀態(tài)使用，但優(yōu)選用水或生理鹽水洗凈后使用。作為千燥藻體，可列舉出例如，對(duì)通過前述方法得到的生的藻體進(jìn)行冷凍干燥處理、噴霧干燥處理的物質(zhì)等。作為通過積d成處理方法處理的藻體處理物，例如，可通過對(duì)生的藻體進(jìn)行超生波照射處理、均質(zhì)化等機(jī)械處理而得到。藻體的機(jī)械處理物可以在其后實(shí)施干燥處理。作為本發(fā)明所使用的藻體，從進(jìn)一步保持微藻類的有效成分，而且從味道、氣P未的觀點(diǎn)來看，優(yōu)選為生的藻體。作為生的藻體，通常根據(jù)收獲時(shí)的水分除去的程度，分為在水中懸浮的懸浮狀藻體、水分含量比懸浮狀藻體少的糊狀藻體、水分含量比糊狀藻體少的餅狀狀態(tài)的藻體，可使用任意狀態(tài)藻體。螺旋藻、小球藻優(yōu)選使用懸浮狀的藻體(以下，有時(shí)稱為懸浮液。)。另外，使用干燥藻體、藻體處理物時(shí)，可以是干燥的狀態(tài)，也可以是加水制成的如生的藻體的那樣懸浮狀、糊狀、餅狀的。作為微藻類，為了使其含有的有效成分不損失，優(yōu)選不進(jìn)行加熱殺菌，但也可以根據(jù)需要使用經(jīng)加熱殺菌的微藻類。在此，微藻類可以是單獨(dú)使用螺旋藻或小球藻，也可以使用螺旋藻和小球藻的混合物。接著，對(duì)乳酸菌進(jìn)行說明。乳酸菌歷來以食品的保藏和調(diào)味為目的被利用于發(fā)酵乳制品、釀造制品、蔬菜和果實(shí)的腌制物等很多食品的加工中。作為本發(fā)明所使用的乳酸菌，只要是可作為食用使用的乳酸菌就可以沒有限制地使用。作為乳酸菌，根據(jù)來源的生長環(huán)境可分類為乳系乳酸菌、植物系乳酸菌、腸道系乳酸菌、來自藻類生長的自然湖中的乳酸菌等。另外乳酸菌根據(jù)其生長的適宜條件可分類為中溫性菌、高溫性菌、耐堿性菌等，可使用具有任意性質(zhì)的菌。作為本發(fā)明所使用的乳酸菌，從分類學(xué)上可列舉出乳桿菌(Lactobacillus)屬、片球菌(Pediococcus)屬、四聯(lián)球菌(Tetragenococcus)屬、肉食桿菌(Carnobacteri腿)屬、漫游球菌(Vagococcus)屬、明串珠菌(Leuconostoc)屬、魏斯氏菌(Weissella)屬、酒球菌(Oenococcus)屬、奇異菌(Atopobi薩)屬、《連球菌(Streptococcus)屬(正式名為腸3求菌屬，在本i兌明書中包含于腸球菌屬)、腸球菌(Enterococcus)屬、乳球菌(Lactococcus)屬、氣球菌(Aerococcus)屬、差異球菌(Alloiococcus)屬、蜜蜂球菌(Melissococcus)屬、雙岐桿菌(Bifidobacterium)屬等，另夕卜，可列舉出例如，德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii)、植物享L桿菌(Lactobacillusplantarum)、p耆酉臾享L^干菌(Lactobacillusacidophilus)、鄉(xiāng)豆吝'L4干菌(Lactobacillusbrevis)、孝L酉臾享L5求菌(Lactococcuslactis)、明串5朱菌屬某些種(Leuconostocsp.)、酪黃腸J求菌(Enterococcuscasseliflavus)等的種類。作為本發(fā)明所4吏用的乳酸菌，優(yōu)選屬于乳桿菌屬、乳球菌屬、腸球菌屬的乳酸菌。乳酸菌可以單獨(dú)-使用一種，也可以混合兩種以上的菌j吏用。另外，在后述的培養(yǎng)工程中，可以將相同種類的菌分成兩階段以上接菌培養(yǎng)，也可以將不同的菌種分成兩階段以上接菌培養(yǎng)。乳酸菌可以使用在瓊脂培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，通過冷藏保存、冷凍保存、干燥保存等保存方法保存的菌，由于使用將這些保存后的乳酸菌接菌培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基得到的物質(zhì)(以下簡稱為種培養(yǎng)液。)時(shí)，乳酸菌的增殖速度快，乙醛、丁二酮等的香料類的產(chǎn)生能力、有機(jī)酸產(chǎn)生能力等活性高，故優(yōu)選。為了培養(yǎng)種培養(yǎng)液而使用的培養(yǎng)基，只要是能使所使用的乳酸菌生長的培養(yǎng)基就沒有限制，通常作為培養(yǎng)乳酸菌的液體培養(yǎng)基可列舉出例如，Man、Rogosa、Sharpe設(shè)計(jì)的MRS培養(yǎng)基(Merck生產(chǎn))、以及利用了牛乳成分的乳清培養(yǎng)基、脫脂培養(yǎng)基等培養(yǎng)基。為了調(diào)制種培養(yǎng)液，通常將保存的乳酸菌添加到前述液體培養(yǎng)基中，維持在對(duì)培養(yǎng)的乳酸菌來說適宜的需氧狀態(tài)或厭氧狀態(tài)下，靜置或攪拌而進(jìn)行培養(yǎng)。接著，就本發(fā)明使用的乳酸菌培養(yǎng)物的調(diào)制方法進(jìn)行說明。乳酸菌培養(yǎng)物是通過在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌而被調(diào)制的。在此，含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液，只要是含有微藻類，并能使乳酸菌增殖的培養(yǎng)液就沒有特別的限制，可通過如下方法得到，例如，將乳酸菌加入到在水中懸浮了微藻類的懸浮液中的方法；將乳酸菌加入到在水中加入了微藻類的潤濕液、糊狀物、餅狀物等中的方法；將上述種培養(yǎng)液加入到上述懸浮液中的方法等。更具體地，可通過以下例示的方法得到。(i)將乳酸菌的培養(yǎng)液或干燥狀態(tài)的乳酸菌添加到生的藻體或干燥的藻體的懸浮液、糊狀物中。(ii)將乳酸菌的培養(yǎng)液添加到生的藻體或干燥的藻體的餅狀物中。(iii)將成為潤濕狀態(tài)的量的乳酸菌的培養(yǎng)液添加到干燥的藻體中。這些方法中，優(yōu)選(i)，由于乳酸菌的培養(yǎng)能力和香料的產(chǎn)生能力高，故在(i)中進(jìn)一步優(yōu)選使用生的藻體的懸浮液作為微藻類，使用培養(yǎng)液、特別是種培養(yǎng)液作為乳酸菌。前述藻體的懸浮液、糊狀物、餅狀物、乳酸菌的培養(yǎng)液都含有水，含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液在水不足時(shí)可加水使之成為潤濕狀態(tài)下或維持在水中的狀態(tài)。水優(yōu)選使用滅菌水。含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中的微藻類的含量，從使后述的乳酸菌培養(yǎng)后的收獲工序、干燥工序中有良好的效率的觀點(diǎn)來看，作為干燥菌體優(yōu)選為O.l~30質(zhì)量％,更優(yōu)選120質(zhì)量％。含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中的乳酸菌的培養(yǎng)，可以是靜置培養(yǎng)，該培養(yǎng)液是液體時(shí)，也可以是通過螺旋槳攪拌的攪拌培養(yǎng)。另外，為了適應(yīng)所使用的乳酸菌的生長，可以使培養(yǎng)體系為厭氧狀態(tài)，也可以為需氧狀態(tài)。乳酸菌的使用量只要是使乳酸菌增殖的菌數(shù)就可以，從能良好地抑制夾雜菌的繁殖的觀點(diǎn)考慮，開始培養(yǎng)乳酸菌時(shí)的乳酸菌數(shù)，按固體成分換算，優(yōu)選每lg藻類為105~IO"個(gè)，更優(yōu)選為106~101()個(gè)。含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液的pH因?yàn)榕囵B(yǎng)乳酸菌而生成的乳酸等酸，在培養(yǎng)過程會(huì)變化，優(yōu)選培養(yǎng)開始時(shí)的pH為4.0~9.0,更優(yōu)選為5.0~7.0。培養(yǎng)溫度，只要是乳酸菌可增殖的溫度都可以，從適合乳酸菌增殖、不損壞微藻類的有效成分的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選為4~45°C,更優(yōu)選為2040。C。為了使乳酸菌充分增殖并發(fā)揮優(yōu)異的降血壓作用，培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為例如9IOO小時(shí)，更優(yōu)選為1572小時(shí)，特別優(yōu)選為18~50小時(shí)。為了發(fā)揮優(yōu)異的降血壓作用，充分抑制其它夾雜菌的增加，較好地減少微藻類特有的味道和氣味并發(fā)揮降血壓作用，培養(yǎng)后的乳酸菌數(shù)優(yōu)選為增加到培養(yǎng)開始時(shí)的乳酸菌數(shù)的10~1000倍。另外，為了維持適合乳酸菌增殖的pH,可以在培養(yǎng)中添加氫氧化鉀、氫氧化鈣等堿性化合物來調(diào)整pH,為了降低夾雜菌并發(fā)揮降血壓作用，優(yōu)選通過乳酸菌生成的乳酸等使含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液的pH降低到5.0附近。本發(fā)明中，向含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中加糖可抑制夾雜菌的生長，并且可進(jìn)一步減少微藻類特有的氣味和味道，故優(yōu)選。抑制該夾雜菌生長的效果在使用夾雜菌容易繁殖的干燥藻體作為微藻類時(shí)尤為顯著。作為前述糖類，可列舉出例如單糖類、低聚糖類、多糖類等。作為單糖類可列舉出例如，葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖、核糖、木糖等。作為低聚糖類可列舉出例如，蔗糖、麥芽糖等二糖類、低聚半乳糖、低聚果糖、大豆低聚糖、低聚木糖、棉子糖等。作為多糖類可列舉出例如，直鏈淀粉、支鏈淀粉、纖維素、糖原、(3-葡聚糖、粘多糖等。作為糖類優(yōu)選低聚糖，其中，優(yōu)選低聚半乳糖、低聚木糖。糖類的添加方法沒有特別限制，例如可以將微藻類、乳酸菌和糖類混合，也可將預(yù)先添加了糖類的微藻類和乳酸菌混合，也可將預(yù)先添加了糖類的乳酸菌和微藻類混合。另外，糖類可以使用固體形狀的，但優(yōu)選使用預(yù)先溶解于水等中制成水溶液的糖類。相對(duì)于含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液和糖類的合計(jì)，糖類的使用量優(yōu)選為0.05~20質(zhì)量％,更優(yōu)選為O.l~10質(zhì)量％。通過在該乳酸菌培養(yǎng)物的調(diào)制過程生成的乳酸、醋酸等有機(jī)酸類、大腸桿菌素類等的抗菌作用，其它夾雜菌減少，乳酸菌成為優(yōu)越種。進(jìn)而，由于乳酸菌生成的乙醛、丁二酮等香料類，降低了微藻類特有的氣味和味道，成為在食品中易于利用的香味。上述得到的乳酸菌培養(yǎng)物，可直接作為乳酸菌飲料、添加了乳酸菌的食品來使用。上述得到的乳酸菌培養(yǎng)物，具有如下特征其具有與培養(yǎng)前的微藻類的散料不同的成分組成。例如，具有如下特征關(guān)于培養(yǎng)24小時(shí)后的培養(yǎng)物的游離氨基酸量，脯氨酸、半胱氨酸、纈氨酸、白氨酸、異白氨酸、Y-氨基丁酸(以下簡稱為"GABA，，)、賴氨酸、組氨酸等與培養(yǎng)前相比，每100g藻體的含量成為IO倍以上，游離氨基酸總量也增加為24咅以上。另外，利用蛋白質(zhì)質(zhì)量的通常的測定法BCA(BicinchoninicAcid)法，測定了以分子量為10000的分離膜進(jìn)行處理的培養(yǎng)前的散料以及乳酸菌培養(yǎng)物所含有的蛋白質(zhì)質(zhì)量。結(jié)果，例如使用螺旋藻散料作為藻體時(shí)，分子量為10000以下的成分在培養(yǎng)24小時(shí)后比培養(yǎng)開始前增加到約2倍，表明高分子量的蛋白質(zhì)被低分子化，變成吸收性優(yōu)異的成分。另外，通過本發(fā)明所得到的乳酸菌培養(yǎng)物與現(xiàn)有的與本發(fā)明類似的乳酸菌培養(yǎng)物相比，其特征在于含有高濃度的GABA。例如，前述的(專利文獻(xiàn)3)中記載，在乳類中單獨(dú)4吏用L.lactisYIT2027時(shí)，經(jīng)過3天的培養(yǎng)，為15mg/100mL，通過與L.caseiYIT9029進(jìn)4亍〉'昆合i咅養(yǎng)，i曽力口至)j38mg/100mL。然而，已知^^艮據(jù)本發(fā)明的方法，經(jīng)過24小時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間，可以生產(chǎn)1OOmg/1OOmL以上濃度的GABA，作為GABA生產(chǎn)方法非常優(yōu)異。本發(fā)明的降血壓劑是以上述得到的乳酸菌培養(yǎng)物為有效成分的。本發(fā)明的降血壓劑可以調(diào)制成棵片、薄膜衣片、糖衣片、腸溶片、多層片等的片劑、顆粒劑、粉末劑、液體制劑等形態(tài)。這些形態(tài)的調(diào)制可根據(jù)各形態(tài)依照通常的方法，對(duì)乳酸菌培養(yǎng)物進(jìn)行懸浮、干燥、粉碎、成型等即可。調(diào)制到各形態(tài)時(shí)，可以使用為了調(diào)制其形態(tài)而通常使用的粘結(jié)劑、表面活性劑、增稠劑、填充劑、崩解劑、賦形劑等。另外，可以直接使用該乳酸菌培養(yǎng)物作為乳酸菌飲料、乳酸菌添加物，也可以將乳酸菌培養(yǎng)物添加到其它的食品中。例如，進(jìn)行千燥處理時(shí)，通常是使藻體的水分含有率變?yōu)?~7質(zhì)量％,優(yōu)選能夠保持乳酸菌的菌數(shù)的處理。作為優(yōu)選的干燥方法，可列舉出例如冷凍干燥法，噴霧干燥法等。從經(jīng)濟(jì)性方面考慮，更優(yōu)選噴霧干燥法。排風(fēng)溫度越是高溫，生產(chǎn)效率越提高，微藻類的品質(zhì)良好，乳酸菌數(shù)也不降低，因此，千燥處理時(shí)的干燥溫度優(yōu)選在產(chǎn)品溫度為30~70°C的范圍進(jìn)行干燥處理，更優(yōu)選在40~60。C的范圍。另外，本發(fā)明中的產(chǎn)品溫度是指干燥后的試樣溫度。調(diào)制成片劑時(shí)，例如，可將上述所得的粉末按公知的壓片法來壓片。調(diào)制成液體制劑時(shí)，例如，可將上述所得的粉末分散在水中，可將培養(yǎng)結(jié)束的乳酸菌培養(yǎng)物直接使用或用水等稀釋來調(diào)制?；颊邔?duì)本發(fā)明的降血壓劑的攝取量，優(yōu)選考慮患者的性別、年齡、癥狀等決定。通常，按乳酸菌培養(yǎng)物換算，優(yōu)選為0.2~10g/日、特別優(yōu)選為0.5~8g/日。這些量可以一次都揭j又，也可以將l日的攝取量分為數(shù)次攝取。接著，對(duì)本發(fā)明的降血壓劑的降血壓作用進(jìn)行說明。關(guān)于上述所得到的乳酸菌培養(yǎng)物，本發(fā)明人們使用試驗(yàn)動(dòng)物確認(rèn)了對(duì)于被認(rèn)為是各種生活習(xí)慣病的主要原因的高血壓癥的效果。即，對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR系)，將螺旋藻乳酸菌培養(yǎng)物和小球藻乳酸菌培養(yǎng)物混合到固體飼料中，進(jìn)行自由攝取后測定血壓，確認(rèn)其降血壓作用。試驗(yàn)組中，作為對(duì)象組設(shè)定給予固體飼料的組，另外作為將被試驗(yàn)物質(zhì)混合在飼料中的組，設(shè)定了將螺旋藻散料(被試驗(yàn)物質(zhì)l)混合到固體銅料中的組、將螺旋藻乳酸菌培養(yǎng)物(被試驗(yàn)物質(zhì)2)混合到固體飼料中的組、將小球藻散料(被試驗(yàn)物質(zhì)3)混合到固體飼料中的組、將小球藻乳酸菌培養(yǎng)物(被試驗(yàn)物質(zhì)4)混合到固體飼料中的組。結(jié)果表明，將螺旋藻乳酸菌培養(yǎng)物或小球藻乳酸菌培養(yǎng)物混合到固體飼料中的組，與對(duì)照組、混合了螺旋藻散料、小球藻散料的組相比，都有強(qiáng)的降血壓作用(參照試—驗(yàn)例)。另外，為了確認(rèn)乳酸菌培養(yǎng)物的安全性，通過小鼠考察急性毒性。小鼠使用出生后5周的鼠齡的ddY-N系小鼠(體重20~26g)雌、雄各10只。給藥方法為將培養(yǎng)物細(xì)粉碎，懸浮于CMC1%的溶液中，經(jīng)口強(qiáng)制給藥一次利用胃管可給藥的最高濃度10質(zhì)量％的懸浮液。將培養(yǎng)物給藥后，觀察一周。雌、雄的LDso均為6000mg/kg以上，確認(rèn)了其作為食品的安全性。實(shí)施例接著，示出實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。但本發(fā)明并不僅限于以下的實(shí)施例。(實(shí)施例l)使用螺旋藻的乳酸菌培養(yǎng)物的調(diào)制(1)和乳酸菌數(shù)的測定在2500L容量的培養(yǎng)槽中裝入低聚半乳糖25kg、自來水825kg,加熱滅菌后加入螺旋藻散料100kg,接種乳酸菌短乳桿菌的種培養(yǎng)液50kg。在37。C，通氣螺旋槳攪拌72小時(shí)來培養(yǎng)乳酸菌。將培養(yǎng)時(shí)間為0、9、12、15、18、24、48和72小時(shí)的培養(yǎng)液取樣，測定乳酸菌數(shù)。另外，乳酸菌數(shù)的測定按照以下的順序進(jìn)行。將乳酸菌培養(yǎng)液1.Oml懸浮在磷酸緩沖生理鹽水19ml中調(diào)制懸浮液。將此懸浮液進(jìn)一步用磷酸緩沖生理鹽水稀釋成10倍、102倍、103倍、104倍、105倍、106倍和107倍，得到試樣稀釋液。在1000ml的MRS培養(yǎng)基(Merck生產(chǎn)，Cat.No.10661)中添加15g的瓊脂而制成的MRS瓊脂培養(yǎng)基上涂抹0.1ml的稀釋液，在35。C下培養(yǎng)48小時(shí)。使用能夠確認(rèn)乳酸菌菌落為30300個(gè)的瓊脂培養(yǎng)基，測定該瓊脂培養(yǎng)基的菌落數(shù)，將此菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)而得到的數(shù)作為乳酸菌的菌落數(shù)。(氨基酸量的測定)將取樣的各培養(yǎng)液的一部分進(jìn)行噴霧干燥后用于氨基酸分析。將螺旋藻的乳酸菌培養(yǎng)物各200mg添加到5mL水中之后，使之懸浮，放置30分鐘。使用離心分離機(jī)(3000rpm,IO分鐘)分離成上清液和不溶物，吸取上清液lmL。在其中添加10%(w/v)的三氯醋酸溶液lmL,進(jìn)行離心分離。將得到的上清液用鄰苯二曱醛法(柱后檢測)，進(jìn)行HPLC分析，測定氨基酸量。(HPIX條件)柱曰立#4619(4mmx15cm)溫度60°C(柱后反應(yīng)時(shí)也是同樣的溫度)流速洗l是'液為0.4mL/min.反應(yīng)液為0.5mL/min.檢測熒光檢測器在表1中示出各培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)物中的L-谷氨酸量、GABA量、乳酸菌數(shù)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(實(shí)施例2)使用螺旋藻的乳酸菌培養(yǎng)物的調(diào)制(2)本實(shí)施例除了用50%(w/w)乳酸溶液將pH保持為5.0，將培養(yǎng)溫度保持為3(TC以外，與實(shí)施例l同樣操作培養(yǎng)乳酸菌。將培養(yǎng)時(shí)間為0、9、12、15、18、21、24小時(shí)的培養(yǎng)液取樣，測定GABA量(mg/100g)。(實(shí)施例3)使用螺旋藻的乳酸菌培養(yǎng)物的調(diào)制(3)本實(shí)施例中，除了使用低聚木糖代替低聚半乳糖以外，與實(shí)施例2同樣操作，測定GABA量(mg/100g)。將培養(yǎng)時(shí)間到24小時(shí)為止的實(shí)施例l與實(shí)施例2的GABA量(mg/100g)的比較在圖l中示出，實(shí)施例2和實(shí)施例3的結(jié)果在表2中示出。通過實(shí)施例1~3,選纟奪適宜的pH和培養(yǎng)溫度，從而可在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生更多的GABA。表2_GABA量(mg/100g)i咅養(yǎng)時(shí)間(hr)0912152124實(shí)施例2520105210510900實(shí)施例3525110220530910(實(shí)施例4)使用小球藻的乳酸菌培養(yǎng)物的調(diào)制和乳酸菌數(shù)的測定將實(shí)施例l中的螺旋藻用小球藻代替，除此以外，與實(shí)施例l同樣調(diào)制乳酸菌培養(yǎng)物，測定乳酸菌數(shù)、氨基酸量。在表3中示出各培養(yǎng)時(shí)間的培養(yǎng)物中的L-谷氨酸量、GABA量、乳酸菌數(shù)。表3培養(yǎng)時(shí)間(hr)09121524364872L-谷氨酸(mg/100g)6726656605944481814849L-谷氨酸(mg/100mL)84838374562366GABA(mg/100g)67761180401515505GABA(mg/100mL)111823506463乳酸菌數(shù)(x106/mL)6100010501350185020002800195016(試驗(yàn)例)本發(fā)明的降血壓劑的降血壓作用的確認(rèn)為了明確本發(fā)明的降血壓劑的降血壓作用，使用以下的試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。(試驗(yàn)物質(zhì))對(duì)象組固體飼料MF(OrientalYeastCo.,Ltd.)被試驗(yàn)物質(zhì)l:螺旋藻散料被試驗(yàn)物質(zhì)2:乳酸發(fā)酵螺旋藻(實(shí)施例l得到的乳酸菌培養(yǎng)物)被試驗(yàn)物質(zhì)3:小球藻散料被試驗(yàn)物質(zhì)4:乳酸發(fā)酵小球藻(實(shí)施例4得到的乳酸菌培養(yǎng)物)(被試驗(yàn)物質(zhì)的調(diào)制和給藥)調(diào)制方法將被試驗(yàn)物質(zhì)l~2各自混合15%到固體飼料MF中。給藥途徑經(jīng)口給藥方法自由攝取給藥容量飼料給予量的15%給藥期間8周試驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物品種、系統(tǒng)大鼠、SHR(l組8只)性別、搬入周齡雄性、6周齡馴化時(shí)間拍i入后飼養(yǎng)的同時(shí)馴化約l周，觀察該期間的一般狀態(tài)。(血壓測定法)血壓的測定通過無創(chuàng)性測定尾動(dòng)脈的血壓的Tail-cuff法進(jìn)行。測定方法為試驗(yàn)物質(zhì)給藥前(7周)和給藥后每1周共計(jì)8個(gè)點(diǎn)實(shí)施。血壓在各點(diǎn)的測定各實(shí)施3次，將其平均值作為測定值。另外，在試驗(yàn)實(shí)施之前確認(rèn)供試驗(yàn)動(dòng)物的最高血壓的平均值各動(dòng)物都是平均160mmHg以上，進(jìn)行試-險(xiǎn)。結(jié)果在表4中示出。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>在表5和圖2中，以第O周的血壓為基準(zhǔn)，將第X周的血壓上升率用下式評(píng)價(jià)并示出結(jié)果。血壓上升率(％)=(第X周的血壓-第O周的血壓)/(第0周的血壓)x100(%)表5<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>從本試驗(yàn)例可明顯看出，螺旋藻乳酸菌培養(yǎng)物和小球藻乳酸菌培養(yǎng)物與各自培養(yǎng)前的螺旋藻散料和小球藻散料相比，能觀察到對(duì)血壓上升的抑制效果。可知，例如，在6周后，對(duì)象組中可見約30%的血壓上升，與此相對(duì)，螺旋藻和小球藻將上升率抑制為2025%，進(jìn)而，在本發(fā)明的螺旋藻和小球藻的乳酸菌發(fā)酵品中抑制為12~15%左右，確認(rèn)了本發(fā)明的乳酸發(fā)酵品的降血壓作用。工業(yè)上的可利用性本發(fā)明可用于醫(yī)藥品工業(yè)、健康食品、食品等領(lǐng)域。權(quán)利要求1.一種降血壓劑，其特征在于，其將在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌而得到的乳酸菌培養(yǎng)物作為有效成分。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，所述微藻類為螺旋藻、小球藻、或螺旋藻和小球藻的混合物。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，所述乳酸菌為屬于乳桿菌屬的乳酸菌。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，所述乳酸菌為屬于乳球菌屬的乳酸菌。5.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，所述乳酸菌為屬于腸球菌屬的乳酸菌。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，乳酸菌的培養(yǎng)進(jìn)行15~72小時(shí)。7.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，乳酸菌培養(yǎng)開始時(shí)的乳酸菌數(shù)，按固體成分換算，每lg微藻類為1x105~1011個(gè)，繼續(xù)培養(yǎng)到乳酸菌成為培養(yǎng)開始時(shí)的乳酸菌數(shù)的10~1000倍。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，培養(yǎng)液還含有糖類。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的降血壓劑，其中，所述糖類為低聚半乳糖。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的降血壓劑，其中，所述糖類為低聚木糖。11.一種制造降血壓劑的方法，進(jìn)行在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌的工序，將由該工序得到的乳酸菌培養(yǎng)物作為有效成分，從而制造降血壓劑。12.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，所述培養(yǎng)液中所含的微藻類的含量為O.l~30質(zhì)量％。13.根據(jù)權(quán)利要求l所述的降血壓劑，其中，所述乳酸菌為選自德氏乳桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、短乳桿菌、乳酸乳球菌、明串珠菌屬某些種、酪黃腸球菌所組成的組中的一種或兩種以上。14.用于高血壓癥的治療的權(quán)利要求l所述的降血壓劑的用途。15.使用^L利要求1所述的降血壓劑治療高血壓癥的方法。全文摘要本發(fā)明涉及一種降血壓劑，其將在含有微藻類和乳酸菌的培養(yǎng)液中培養(yǎng)乳酸菌而得到的乳酸菌培養(yǎng)物作為有效成分。文檔編號(hào)A61K36/02GK101160136SQ20068001201公開日2008年4月9日申請(qǐng)日期2006年4月13日優(yōu)先權(quán)日2005年4月15日發(fā)明者佐渡山惠一,吉川典孝,宮城健,平橋智裕,榊原正樹,稻福桂一郎申請(qǐng)人:大日本油墨化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社