專利名稱：：含磁性鐵氧化物顆粒的組合物及所述組合物在磁性顆粒成像中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及在可藥用殼內(nèi)含有磁性鐵氧化物顆粒(magneticironoxideparticles)的復(fù)合物(complexes)，所i^粒具有20nm-lnm的直徑，顆?？傊奔姾舜敖?jīng)比小于6，以及這些復(fù)合物在磁M粒成像(MPI)中的用途。特別雌這些組合物在檢查胃腸道、心臟的脈管系統(tǒng)和顱部件中的用途，在診斷動脈硬化、梗塞、以及腫瘤和轉(zhuǎn)移例如淋巴系統(tǒng)的腫瘤和轉(zhuǎn)移中的用途。
背景技術(shù)：
：在成像方法中，尤雜醫(yī)學(xué)診斷部分中，在常規(guī)的成像方法如X射線診斷和磁共振成像(MRI)中，造影劑己經(jīng)導(dǎo)致了相當(dāng)大的對比度改善?？捎糜贛RI的造影劑可根據(jù)其作用機(jī)理進(jìn)行區(qū)浙縱向弛豫的正增強(qiáng)(positiveampl迅cation)或影響，或橫向弛豫的負(fù)增強(qiáng)(negativeamplification)或影響)。該效應(yīng)以單位mM1xs"表示為T！和T2弛豫度(relaxivity)。R！和R2定義為1A^和1/T2相對于造影劑濃度的曲線中上升的陡度(steepness)。R2/R,的比值決定造影劑是否主要具有T降^i(R顯著高于R2)或T2斷氐安她(Krombach等,(2002)R6fo174:819-829)。正^it影劑(positivecontrastagent)(又名弛豫增強(qiáng)或乃增大造影齊O)增強(qiáng)灌注區(qū)域的信號強(qiáng)度。負(fù)^it影郭J(negativecontrastagent)(又名磁化與susceptibility)增強(qiáng)或T2增誠影齊(J)在T2力口豐膽列(sequence)中降低灌注區(qū)域的信號弓販。適宜的MRI造影劑已經(jīng)描述于現(xiàn)有技術(shù)中。例如，EP0525199描述了含有與多糖復(fù)合的磁性鐵氧化物的藥物制齊吸雜MRI中作為造影劑的用途。在一雌的實船案中，超頓磁性鐵氧化物核(ironoxidecores)具有2nm至30nm的尺寸。適宜制劑中復(fù)合物的尺寸(核加上多糖殼)為10nm至500腦。然而，具體的公開僅涉及具有直徑為10.1nm的鐵氧化物核的復(fù)合物。EP0543020公開了極相似的顆粒。然而，在該情況中，趟頓磁性鐵氧化物顆粒與羧基多糖復(fù)合。還描述了這些復(fù)合物在MRI中作為造影劑的用途。使用羧基葡聚糖作為殼物質(zhì)改善了制齊啲藥理學(xué)性質(zhì)。在一ttit的實施方案中，鐵氧化物核的尺寸為20nm至30nm。然而，具體公開的復(fù)合物只含直徑最大為8.8nm的鐵氧化物核。US5,492,814描述了單晶鐵氧化物顆粒及其M3iMRI檢查生物組織的用途。1至10nm的范圍被指定為鐵氧化物核的雌尺寸；然而，實施例只具體公開了具有直徑為2.9+/-1.3nm的鐵核的顆粒。為了改善在函中作為造影劑的適用性，所公開的顆粒優(yōu)選為單晶顆粒，即，整個顆粒的晶體結(jié)構(gòu)是均勻的且無任何分f單晶體。最近，己經(jīng)描述了一種用于在醫(yī)療部門成像的新方法。在該情形中，在移動磁場中對顆粒磁化3破的變4爐行了測量。該變化用來測定磁,粒在檢查區(qū)域的空間分布(參見，例如，DE10151778A1和DE10238853Al)。這種新技術(shù)已被稱為磁性顆粒成像(MPI)。同一申請人:的這些申請及其它申請?zhí)岬接糜贛PI方法的顆粒必須具有的許多性質(zhì)。例如，顆粒可以是鐵磁性(ferromagnetic)和亞鐵磁性(ferrimagnetic)顆粒，因此與MRI方法中己知的顆粒相似。不過，T和T2弛豫對要用于MPI的顆粒的性能沒有影響。由于用于MRI和MPI方法中成像的根本上不同的物理現(xiàn)象，在現(xiàn)有技術(shù)中所描述的作為用于MRI的造影劑的顆粒的適用性，并不能決定i繊粒是否適合于MPI。財卜，公開了顆粒必須小到只有單個磁疇(單噴monodomain))能夠在其中形成而不育g產(chǎn)生Weiss區(qū)域(Weissregion)。據(jù)推測，取決于材料，適宜的單疇顆粒應(yīng)該具有在20nm至大約800nm之間的理想尺寸。提到磁鐵礦0^304)作為用于單疇顆粒的適宜材料。MPI是一種尤，診斷應(yīng)用方面非常有前途的新方法，因為就儀^l而言所需的費(fèi)用比MRI低很多。這是因為，與在MRI中不同，在MPI中不需要大的均勻磁場并因而不需要巨大的超導(dǎo)磁鐵，其中該巨大的超導(dǎo)磁鐵使得MRI診斷如此昂貴并使其難以廣泛應(yīng)用。不過，為了使這種新技術(shù)廣泛應(yīng)用，必須研制允許高空間分辨率、無風(fēng)險給藥和在測量過程中低磁場^^的磁性顆粒。因此需要提供適合于MPI診斷的顆粒。
發(fā)明內(nèi)容在下面更詳細(xì)描述本發(fā)明之前，應(yīng)當(dāng)指出本發(fā)明不局限于本文中描述的特定的方法、方案和試劑，因為這些都可以變化。本文中所用的術(shù)語只用于描述特別ttit的實施方案，所述術(shù)語不旨在限律體發(fā)明的范圍，后者僅僅受所附權(quán)利要求書限制。除非另有定義，否則用于本文中的技^口科學(xué)術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員指定給它們的含義。雌地，本文中的術(shù)語以在'Amultilingualglossaryofbiotechnologjcalterms:(IUPACRecommendations)",Leuenberger,H.GW,Nage^B.andKlbl,H.eds.(1995),HelveticaChimicaAcACH4010Basel,Switzerland)中定義的含義使用。本說明書中引用了許多文獻(xiàn)。本文中引用的每一份文獻(xiàn)(包括所有專利、專利申請、科技出版物、操作說明書、廠家建議荀都在此作為參考文獻(xiàn)全文引入。然而，這些文獻(xiàn)之一的皿無論如何不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是意味著以所述出版物的發(fā)明的在先日期來否認(rèn)本發(fā)明的權(quán)利。本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，含有磁性鐵氧化物核的顆粒，其具有特定的尺寸和特定的鐵氧化物核直徑與齡顆粒的比，特別適合于MPL因此本發(fā)明的第一主題是一種在可藥用殼中含有直徑為20nm至l^m的磁性鐵氧化物核的顆粒，顆?？傊睊旌酥睆街刃∮?。Aff周知將純鐵氧化物核纟^患者會導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用。血小板聚集和血壓ayi降低己有記載。為了避免這些副作用，其在一些瞎況下可肖脆害生命，將根據(jù)本發(fā)明顆粒的^ft化物核用可藥用殼包圍。本發(fā)明上下文中的"可藥用殼"是物質(zhì)或物質(zhì)混合物的層，其基本上完全包圍鐵氧化物核并遮隔(screenoff)鐵氧化物核，使得當(dāng)纟^f患者時，不出現(xiàn)已知的危害生命的副作用。本發(fā)明中該物質(zhì)或物質(zhì)混合物是生物可卩絲的，即可裂解為可被身體利用的小單元和/或可被腎排除。顆粒優(yōu)選以膠體7K溶液或分散體形式給予患者。因此需要該物質(zhì)或該物質(zhì)混合物是親水性的并防止顆粒的沉淀且^E^^液穩(wěn)定。在現(xiàn)有技術(shù)中描述了許多這類物質(zhì)(參見，例如，US5,492,814)。在一m的實施方案中，可藥用殼包括合成聚合物或共聚物，淀粉或其衍生物，葡聚糖或其衍生物，環(huán)糊精或其衍生物，月旨肪酸，多糖，卵磷脂或甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯或其衍生物。i^包括上述ttit物質(zhì)的混合物。在這些廣泛的物質(zhì)種類之中，特別優(yōu)選下列物質(zhì)及其混合物0對于聚合物或共聚物聚氧乙烯脫水山梨醇酯，聚氧乙烯及其衍生物，聚氧丙烯及其衍生物，非離子型表面活性劑，硬脂酸聚烴氧基酯(polyoxylstearates)(35-80)，聚乙烯醇，聚合蔗糖，聚羥烷基甲基丙烯翻安(polyhydroxya]kylmethacrylamides)，乳酸和乙醇酸共聚物，聚原酸酯(polyo池oesters)，聚烷基氰基丙烯酸酯(polya]kylcyanoaciylates)，聚乙二醇，聚丙二醇，聚甘油，多羥基化聚乙烯基基質(zhì)(polyhydroxylatedpolyvinylmatrices)，聚羥乙基天冬酰胺(polyhydroxyethylaspartamides)，聚氮基酸，苯乙烯和馬來酸共聚物，聚己內(nèi)酯，羧基多糖，以及聚酐；(il)對于淀粉衍生物淀粉2-羥甲基醚和羥乙基淀粉；(iii)對于葡聚糖或其衍生物半乳糖Sih葡聚糖(galactosylateddextrans)，孚L糖S4t葡聚糖Clactosylateddextrans;)，胺化葡聚糖，含SH基團(tuán)的葡聚糖，含羧基的葡聚糖，含醛基的葡聚糖，生物素化葡聚糖(biotinylateddextrans);(iv)對于環(huán)糊精P-環(huán)糊精和羥丙MF糊精；(v)對于脂肪酷月桂基硫M，硬脂醱內(nèi)，硬脂酸，脫水山梨醇單月桂酸酯，H^JC山梨醇單油酸酯，脫水山梨醇單棕櫚酸酯和^7jC山梨醇單硬脂酸酯。由于其特別良好的相容性，所以tti^頓葡聚糖和聚乙二酉l(PEG)及其衍生物，尤其是羧基葡聚糖、低分子量PEG(優(yōu)選500至2000g/mol)或高分子量PEG(大于2000g/mol至20,000g/mol)以形成該"^用殼。在特別優(yōu)選的實施方案中，可藥用殼是生物可,軍的。以上公開的多種優(yōu)選物質(zhì)和聚，滿足該性在現(xiàn)有技術(shù)中，已知有多種方法適合于制備帶殼的鐵核。在一些方法中，在第一方法步驟中形成鐵核而在其它步驟中施加殼。不過，也可以在一個反應(yīng)中^'一鍋反應(yīng)"中形成鐵核和殼。已知的方^&括但不限于氣溶膨7jC蒸汽熱解法、化學(xué)氣相沉積法、溶膠-l^法和微乳液法。生成鐵氧化物核的殼的特別ifc^方法例如已經(jīng)描述于EP0543020Bl、EP0186616、EP0525199禾卩EP0656368。優(yōu)選磁性鐵氧化物核含磁鐵礦(magnetite)或磁赤鐵礦(maghemite)或其混合物。在一些實施方案中，可以將其它金屬氧化物加入到鐵氧化物核中，所臉屬氧化物^it自鎂、鋅和鈷。這類其它金屬氧化物可以以總計最多20%的比例加入到鐵氧化物核中。此外，還可以含有低于5%、低于1%的量的錳、鎳、銅、鋇、鍶、鉻、鑭、軋、銪、鏑、鈥、鐿和釤。本發(fā)明顆粒的總直徑(overalldiameter)取決于鐵氧化物核的直徑和包圍后者的可藥用殼的厚度、以及附著于該，面的任何分子?？傊睆降纳舷薷鶕?jù)顆粒在施用于患者的身體之后必須旨^M:毛細(xì)管的假設(shè)來確定。最小直徑的毛細(xì)管通常位于肺部。這類毛細(xì)管仍然可被總直徑為2拜的顆粒Mii。本發(fā)明的顆粒為球:1犬。不過，本發(fā)明也包括長形的或有角的或^^上任何皿的顆粒，^j牛是鐵核的表面基本上被可藥用殼包圍。因此，顆?？傊睆皆谇蜞l(xiāng)粒的情況下為2r，在不規(guī)則形粒的情況下由位于顆粒表面上相距最遠(yuǎn)的二點(diǎn)之間的距離加上水化層的厚度來確定。在此處定義的總直徑必需與本發(fā)明顆粒的均值總直徑(meanoveralldiameter)區(qū)別開，均值總直徑定義為顆豐錄面上所有點(diǎn)離顆粒重心的平均距離加上7jC化層的厚度。因而該均值總直徑也不同于顆粒的平均總直徑，顆粒的平均總直徑涉及一組顆粒，由含在該組中的顆粒的所有均值粒徑的平均働B上水化層得到。總直徑的下限由導(dǎo)致MPI方法中成像改善的鐵氧化物核直徑的下限決定。在一優(yōu)選的實M^案中，顆粒總直徑因此在大約30腦至大約2拜的范圍內(nèi)變化。不過，更i^M頓總直徑在大約40nm至大約500nm之間、更優(yōu)選大約45nm至大約300nm之間、更，大約50nm至大約200nm之間的顆粒。本發(fā)明顆粒的總直徑可通過許多現(xiàn)有技術(shù)已知的直接和間接方法來測定，例如包括電子顯微法和動態(tài)光艦法。imt也，Mil動態(tài)光翻頓啶總直徑。在可得到的現(xiàn)有技術(shù)中，尤其是在，文獻(xiàn)DE10151778Al和DE10238853Al中，描述了申請人設(shè)想適MMPI的顆粒。所述現(xiàn)有技術(shù)只公開了具有直徑為20至800nm的磁性核的顆粒是適宜的，禾口磁性核的實際適宜直徑取決于各自所選擇的磁性材料。沒有公開使用具有直徑為20nm至l拜的鐵氧化物核，顆?？傊睆?核直徑之比小于6的顆粒的教導(dǎo)。因此，鐵氧化物核的優(yōu)iffl徑下限為21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、85、90、95、畫nm。優(yōu)選的直徑上限為500、490、480、470、460、450、440、430、420、410、400、390、380、370、360、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85和80nm。為了定義粒徑的，范圍，上下限的所有組合都是可能的，^f牛是上限值大于下限值，例如40至400畫、50至200腦等。本發(fā)明iM顆粒具有的鐵氧化物核的直徑在大約25nm至大約500nm的范圍內(nèi)。甚至更4繼，鐵氧化物核的直徑在大約30nm至大約200nm的范圍內(nèi)，還更，在大約35nm至大約80nm之間。核的直徑同樣可iffil現(xiàn)有技術(shù)中己知的方法再次測定，包括但不限于所提及的方法，x-射線結(jié)構(gòu)分析法和電子顯微法。由于鐵氧化辦亥不是在所有的情況下都為球形，所以鐵氧化物核的直徑為鐵氧化物核表面上相距最遠(yuǎn)的點(diǎn)之間的距離。該直徑必需與鐵氧化物核的均itm徑(meandiameter)區(qū)別開，鐵氧化物核的均髓徑定義為鐵氧化物核表面上所有點(diǎn)離鐵氧化物核重心的平均距離。因而鐵氧化物核的該均d徑不同于鐵氧化物核的平均直徑，鐵氧化物核的平均直徑指一組顆粒而且作為含在該組中的鐵氧化物核的所有均m:徑的平均值得到。已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)在鐵氧化物核周圍具有可藥用物質(zhì)薄殼的顆粒比具有厚殼同時具有相同鐵氧化物核直徑的顆粒更適合于MPI。在一的實施方案中，因此本發(fā)明顆粒的特征在于顆?？傊睆脚c鐵氧化物核直粒比小于6。更，該t匕ild、于5.5、5.0、4.5、4.0、3.5、3.0、2.9、2.8、2.7、2.6、2.5、2.4、2,3、2.2、2.1、2.0、1.95、1.90、1.85、1.80、1.75、1.60、1.55，或小于1.5。關(guān)于旨顆粒和鐵氧化物核的上m徑，特別優(yōu)選的顆粒具有直徑在大約30至大約200nm之間甚至更在大約35nm至大約80nm之間的鐵氧化物核，且顆?？傊睆脚c^ft化物核直徑之比小于3.0、2.9、2.8、2.7、2.6、2.5、2.4、2.3、2.2、2.1、2.0、1.95、1.90、1.85、1.80、1.75、1.60、1.55或小于1.5。關(guān)于本發(fā)明，術(shù)語"多晶磁性鐵氧化物顆粒'指由至少2個內(nèi)聚的(coherent)晶,成、4纖由3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多晶鵬成的磁性鐵氧化物顆粒。本發(fā)明一個鐵氧化物顆粒中可含晶體的最大數(shù)量僅僅，粒的尺寸限制。在彌粒中比在小顆粒中可含更多的晶體。含在多晶磁性鐵氧化物顆粒中的晶條擇優(yōu)方向(preferreddirection)上的長度ifc^為1-100nm，雌3至50nm。磁鐵礦晶#0^304)的一個晶胞的纖長度為大約1nm。因此，包含在多晶磁性鐵氧化物顆粒中的晶鵬擇優(yōu)方向1纖具有至少3個晶胞，更具有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多個晶胞。在多晶鐵氧化物核中，可在一個或多個晶體之間的界面處形成具有游非晶結(jié)構(gòu)糊隔區(qū)，即多晶磁性鐵氧化物核1繼由50%、更雌由55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多的多晶區(qū)構(gòu)成，而鐵氧化物顆粒的其它部分由無序的非晶區(qū)構(gòu)成。鐵氧化物核中所含的單個晶體可具有相同或不同的長度。多晶磁性鐵氧化物顆粒中所含的最大微晶(crystallite)，即單個晶體，其^MMS當(dāng)小于本發(fā)明顆粒總體積的70%，更優(yōu)選小于65%，小于60%，小于55%，小于50%，小于45%。在本發(fā)明的一實施方案中，在多晶形鐵氧化物核中沒有長程有序，而只有短程有序。這意味著所述顆粒為具有結(jié)晶包含物(crystallineinclusions)的基本上無定形顆粒的形式。在本發(fā)明中，"多晶"既包括^f呈有序的鐵氧化物顆粒又包括短程有序的鐵氧化物顆粒。,^l呈有序的晶體。應(yīng)當(dāng)指出多晶鐵氧化物核也可以形成單疇而不一定導(dǎo)致形成Weiss區(qū)域(Weissregions)。在形成Weiss區(qū)域的能力方面鐵氧化物核的尺寸是關(guān)鍵因素。在一個待別優(yōu)選的實施方案中，鐵氧化物核含至少5^^氧化物單晶。粒中所含晶體的數(shù)目和大小可通過多種不同的方法檢測，包括但不限于電子顯W(TEM)、電子斷層成像(dectrontomography)和X射線衍射。,地，通過TEM測定大小。MPI是基于檢測磁'M粒的位置。在目標(biāo)只在于顯示流體流過區(qū)域的內(nèi)部結(jié)構(gòu)例如顯示胃腸道或顯示冠狀動脈的診斷方法中，向患者提供足量的顆粒，例如通31注射顆粒分1§[體或通過吞服適宜的顆粒^#液或分散體可肯^就足夠了。顆粒，其基本上不與檢查區(qū)域中的結(jié)構(gòu)結(jié)合，然后當(dāng)它們流過檢查區(qū)域時能被觀察到。然而，對于許多診斷應(yīng)用，需要顆粒顯示出對檢查區(qū)域的表面結(jié)構(gòu)的特定親和性。因此，在H纖的實船案中，本發(fā)明的顆粒在其表面上含有一個或多個相同或不同的配體。配體可與表面共^M或非共價^^接。在發(fā)明的上下文中，"配體，是與所給定的物質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)，其ICs。小于10mM，iti^小于lnM，小于900nM，小于800nM，小于700nM，小于600nM，小于500nM，小于400nM，小于300nM，小于200nM，小于100nM，小于90nM，小于80nM，小于70nM，小于50nM，小于40nM，小于30nM，小于20nM。在現(xiàn)有技術(shù)中，已知有多種方法觀啶配體與所纟溯質(zhì)的結(jié)合親和性(IC50或其它參數(shù))。這些方法非限制性地包括ELISA、表面等離子體共振(surfaceplasmonresonance)和方謝性配體結(jié)合測定法，如在GazalS.等(2002)J.MedChem.45:1665-1671中描述的。在一些情況下，可能需要在本發(fā)明顆粒的表面上固定兩種或多種不同配體。這是可能的，例如當(dāng)粒要特異性結(jié)合的表面上有兩種相互鄰近布置的該表面的結(jié)構(gòu)特征時。這可能是這種情況，例如在某些腫瘤細(xì)胞中，其中由于突變，受體的兩種成分永久地相互連接。^OT兩種配體，它們各自對準(zhǔn)兩種結(jié)構(gòu)中的一種，因而導(dǎo)致親和性或特異性相當(dāng)大的增加。在本發(fā)明顆粒的這種的實施方案中，另外還有一種或多種類型的配體固定于由可藥用物質(zhì)構(gòu)成的殼的表面上。f^于構(gòu)成可藥用殼的各種物質(zhì)或物Mt昆合物，可藥用殼本身可能對于所給的物質(zhì)具有親和性。例如，許多多糖具有特定細(xì)胞特異性。因此例如細(xì)胞特異性顆粒的制備并不是在所有瞎況下都需要配體的固定，因為這樣一種親和性還可由可藥用殼產(chǎn)生?？晒潭ㄓ诒砻嫔系呐潴w的最大數(shù)量由表面的大小和各種配體需要的空間決定。通常，配體以單分子層與顆粒表面結(jié)合，其中單M層取決于配體的大小，可導(dǎo)w:徑的顯著增加。選擇適宜的配體時，尤其是{柳大抗體配體時，因此必須注意確保所得配體包M粒的總直徑不會導(dǎo)，粒不再育腿過毛細(xì)管的情況。因此iM配體包覆顆粒的直徑小于2nm，甚至更tte具有如上所述的關(guān)于未包覆顆粒總直徑所說的優(yōu)選的直徑。在這種情況下，可藥用殼的厚度和/或鐵氧化物核的直徑因此必須相應(yīng)縮小。在現(xiàn)有技術(shù)中，公開了多種連接配體的方法。特別優(yōu)選的方法例如公開于US6,048，515。取決于各種可藥用殼，在連接配體之破聯(lián)殼可能是必要的。例如Wei(31eder等已經(jīng)描述il3^類方法。配體的選銷每取決于要MMPI診斷的疾病或病癥。地，與位于顆粒上的配體結(jié)合的結(jié)構(gòu)包含在體液例如血液或淋巴液流過的區(qū)域中，或包含在體液中。因此配體能與細(xì)胞(真核生物的或原核生物吻、細(xì)胞外或病毒表面的結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合。在現(xiàn)有技術(shù)中，已知有多種結(jié)構(gòu)優(yōu)先在病組織或細(xì)胞離這類組織或細(xì)胞的附^ii，因此它們可作為各種疾病的指示。例如，在成年身體中血管的新形成(新血管發(fā)生)限于與月經(jīng)或懷孕有關(guān)的子宮內(nèi)膜和血管創(chuàng)傷之后的愈合過程。然而，眾所周知新血管還在多種增殖性疾病中形成，所述新血管不見于任何體內(nèi)不受增殖性疾病影響的其它點(diǎn)。因此，關(guān)于新血管發(fā)生產(chǎn)生的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，尤其是只見于腫瘤內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)，例如纖維連接蛋白ED-B域(ED-BF)，是可固定于本發(fā)明顆粒表面上的配體的極好的靶?，F(xiàn)有技術(shù)中已知的針對這類與疾病相關(guān)的結(jié)構(gòu)的所有配體都可用于與本發(fā)明顆粒結(jié)合。不過，特別優(yōu)選的配體是能與下列結(jié)構(gòu)之一特異性結(jié)合的配體纖維連接蛋白的ED-BJ|^ED-BF)，endoglin，血管內(nèi)皮生長因子受^(VEGFR)，VEGF族的成員，NRP-1，Angl，Thie2，PDGF畫BB及受體，TGF-(31，TGF國卩受體，,FGF，HGF，MCP-1，整聯(lián)蛋白(|33、Ov|35、as卩0，VE-藥粘蛋白，PECAM(CD31)，ephrins，纖維蛋白溶酶原活化因子，MMPs，PAI-1，NOS，COX-2，AC133,趨化因子，Idl/Id3，VEGFR-1，Ang2，TSP-1，-2，血管抑制素(angiostatins)及相關(guān)纖維蛋白溶酶原kringles，血管內(nèi)皮抑制素(endostatins)(膠原蛋白XVII片段)，血管抑制因子(vasostatin)，血小板因子4(PF4)，TIMPs，MMP抑制劑，PEX，Meth-l，Meth國2，顧國a、國(3、，，IL畫IO，IL-4，IL42，IL"18，催乳激素(M，16K)，VEGI，SPARC的片段，骨橋蛋白片段或maspin，CollXVHI，CM201，抑制素(statins)，尤其是L"抑制素，CD105，ICAM，生長激素抑制素(亞型l、2、3、4或5)或生長、麟抑制素受爛亞型1、2、3、4、5或6)。在現(xiàn)有技術(shù)中己知多種物質(zhì)^細(xì)胞(真核生物的或原核生物的)、細(xì)胞外自毒表面的結(jié)構(gòu)具有親和性。,地，固定于本發(fā)明顆粒上的配體選自多肽、低聚核苷酸、多糖和脂質(zhì)。已知具有特異性親和性的多肽并可通過許多方法包括'噬菌體展示"和免疫法鑒定。在這方面，雌根據(jù)本發(fā)明可以用作配體的蛋白質(zhì)選自抗體，包括人、人源化和嵌合抗體以及抗體片段，包含抗體結(jié)合區(qū)域的片段，例如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fabc、Facb，單鏈抗體，例如單鏈Fvs(scFvs)和雙功能抗辨diabodies)，以及細(xì)胞、細(xì)M卜或病毒受體或其片段的配體。適宜的配體為例如血管內(nèi)皮生長因^(VEGF)、表皮生長因子(EG巧、趨化因子或細(xì)胞因子。核酸能參與特異性結(jié)合例如與轉(zhuǎn)錄因子或組蛋白結(jié)合是公知的?？勺鳛榕潴w固定于本發(fā)明顆粒上的優(yōu)選的低聚核苷酸包括DNA、RNA、PNA和適體。特別PNA類，因為其對通常見于患者中的核酸酶具有較高的抵抗性因而因此具有較長的生物半衰期。鑒定特異性結(jié)合的核酸的方法在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的，例如描述于WO93/24508Al、^VO94/08050Al、WO95/07364Al、WO96/27605Al和WO96/34875Al中。在一些情況下，例如由于空間或化學(xué)不相容性的原因，將不可能使配體與顆粒的表面直接結(jié)合。在這些情況下，配體可ffi31^接物與顆粒的表面結(jié)合。在這方面，術(shù)語"連接物"表示優(yōu)選具有一個或兩個化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)的分子，其分別允許一方面與顆粒表面而另一方面與配體共價或非共價偶合。在這對禺合基團(tuán)之間，通常有線型、環(huán)狀或支化區(qū)域，其允許例如在配體和顆粒之間更大的空間隔離和配體的更大移動性。這種線型區(qū)域例如可以是取代^W代的、支化或未支化的、飽和或不飽和的垸,C2至C5Q)，其可被一個或多個O、N禾口/或s原子中斷，或多肽或多核苷酸?？捎糜谶@類連接物的化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)的實例包括，例如氨基、羥基、硫醇或硫醇-反應(yīng)性的、硫氫教sulfhydiyl)、羧基和環(huán)氧基團(tuán)。硫醇反應(yīng)性基團(tuán)包括例如順丁烯二銜馬來銜、氯乙酰基、溴乙?；⒌庖阴；⒙纫阴不?、溴乙,安基、碘乙醐安基氯烷基、溴烷基、碘烷基、吡錠基二硫化物(pyridyldisulfide)和乙烯基磺,基團(tuán)。多種偶^i式劑、偶合基團(tuán)和連接物公開于WO98/47541，該公開在此處作為專門的參考文獻(xiàn)引入。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)固定于藥物活性齊U(pharmaceuticalactiveagents)表面上的聚乙二醇?xì)圫(PEG)和/或聚丙二醇?xì)圫(PPG)導(dǎo)致生物半衰期相當(dāng)大的延長。這樣的實例是PEG化的(PEGylated)脂質(zhì)體或PEG化的蛋白，例如PEG化的EPO。表面PEG化的方法在現(xiàn)有技術(shù)中是公知的。取決于各自所用的可藥用殼物質(zhì)，PEG殘基或PPG殘基可以直接或ffl51^接物共價或非共j介固定于表面上。J4，聚乙二醇和/或聚丙二醇?xì)埢c顆粒的表面非共價地結(jié)合。本發(fā)明的另一主題是一種制備在可藥用殼中含直徑為20nrn至1,的磁性鐵氧化物核且顆粒總直徑/核直徑之比小于6的顆粒的方法，所述方法包括以下步驟(i)在合成聚合物或共聚物、淀粉或其衍生物、葡聚糖或其衍生物、環(huán)糊精或其衍生物、脂肪酸、多糖、卵磷脂或甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯或其衍生物或它們的混合物的存在下，將含鐵(n)鹽和鐵(m)鹽的混合鐵鹽水溶液與堿混合，直至形成顆粒的膠#^發(fā)液，(ii)使含顆粒的溶液ffl31磁力梯度場(magneticgradientfield),(iii)撤除該磁力梯度場，(iv)和回收留在梯度場中的顆粒。本發(fā)明方法的步驟(X)通常不會產(chǎn)生均勻顆粒組，而是產(chǎn)生在一定的帶寬之內(nèi)鐵氧化物核的直徑和^^顆粒的直徑兩者都有差異的顆粒組。這樣的組的平均f失氧化物核直徑作為含在該組中所有均值^ft化物核直徑的平均值得到。在步驟(u)中應(yīng)用磁場梯度導(dǎo)至M擇具有比平均鐵氧化物核直徑大的鐵氧化物核的顆粒。例如，通,擇磁力梯度場的強(qiáng)度和可以M重復(fù)本發(fā)明方法步驟(ii)至(iv)—次、兩次或更多次，并可同時增強(qiáng)梯度場的強(qiáng)度，可以從不均勻的顆粒組中選出具有比平均鐵氧化物核直徑大的平均鐵氧化物核直徑和較薄的可藥用物質(zhì)殼的顆粒組。通常，還在步驟(ii)至(iv)結(jié)束時得到具有較小的核直徑分散的顆粒組。為了從這種顆粒次級組選出至少具有預(yù)先確定的顆?？傊睆降念w粒，可通逝見有技術(shù)中已知的方法如過濾、沉降、逆流離'1X淘洗)等進(jìn)行選擇。本發(fā)明方法所用的鐵(n)和鐵(m)鹽優(yōu)選為濃度為o.i至2m的zK^^形式。二價和三價的鐵離子，混合比為1:3至2:1。適宜的鐵鹽陰離子源自有機(jī)酸例如，檸檬酸、乳酸、乙酸、馬來酸等，或源自無機(jī)酸例如，HC1、H2S04、H2S03、HBr、ffl、HN03或HNQz。堿tfci^自無機(jī)堿例如，NaOH、KOH、LiOH或Al(OH)3和有機(jī)堿?？蓪A以固體或溶液im^溶液的形式加AS阪i^7K溶液中。這種添加^iS行到溶m到pH為10、11或更高。該堿化步驟^t也接著以酸imHC1中和至pH為大約7i0.5。作為其它步驟，步驟(i)可直接接著熱處理、或在中和之后熱處理。在此處，溶液加熱至至少50。C，iti^60。C、65°C、70°C、75°C、80°C、90。C或95。C。如果還沒有進(jìn)行中和，溶液可在加熱后加入酸來中和，然后可y賴卩或者再加熱。如果溶液再加熱，貝W繼加熱至5(TC，更i^60。C、65°C、70°C、75°C、80°C、85°C、90°C、95。C或10(TC働口熱至回流。這種加熱iMS行10併中至10小時。直接在步驟(i)之后或接著i^的每一個其它步驟，即中和和/或加熱步驟之'后，可進(jìn)行一步或多步洗滌和/或滲析步驟。此外，tt^將在步驟(iv)之后得到的顆粒進(jìn)行一步或多步洗滌和滲析步驟。該步驟(或這些步f)的目的優(yōu)選是從顆粒中分離出生產(chǎn)過程中遺留的任何潛在破壞性雜質(zhì)，和調(diào)節(jié)含所i^粒的溶液的pH和/或鹽含量。磁力梯度場用于選捧瞎別適合于mpi方法的顆粒。可用于本發(fā)明方法的磁力梯度場可在很大范圍內(nèi)變化并可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員在考慮各種試驗方案參數(shù)的情況下進(jìn)行設(shè)定。用于分離目的的梯度場必須顯著大于地球場的梯度。分離室中的磁力梯度場可由永磁材料產(chǎn)生或由電流流過的導(dǎo)體產(chǎn)生。關(guān)于本發(fā)明，雌后面的實施方案，因為易于M:切斷電流來消除梯度場。在第4青況中，磁力梯度場ffl5il[除7lc磁材料來消除。梯度場典型地在1mT/m至5000T/m之間。例如如果要保留核直徑〉100nm的顆粒，并且如果以具有低M31率的方^*[驟，則tfci^Z用1-10mT/m的梯度強(qiáng)度。然而，如果要保留較小核直徑例如大約20腿的顆粒，并且如果該方法以高艦率進(jìn)行，貝ij雌應(yīng)用梯度強(qiáng)度>1000T/m。施加梯度場的目的在于集中具有相對大的鐵氧化物核直徑和/或具有雌的，即低總直份核比的顆粒。鑒于本文中提供的教導(dǎo)，根據(jù)平均直徑、本發(fā)明方法制備的顆粒和應(yīng)用的流速，本領(lǐng)域技術(shù)人員可確定可選出這^粒的適宜的梯度場強(qiáng)度。適宜的提供有梯度場的分離裝置例如描述于下面的實施例lb)和lc)和EP0915738Bl中。該裝置可在梯度場區(qū)進(jìn)一步含順磁性物質(zhì)以便必要時增強(qiáng)梯度場。為了回收保留在梯度場中的顆粒，在梯度場已經(jīng)撤除之后，分離，，用適宜的溶液、雌可藥用水溶液沖冼，其中顆粒^Ml械iik/人分離裝置放出。根據(jù)本發(fā)明制備的顆粒4，具有至少150(mMS)—、更皿至少約160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或lOOO(mM'S丫1的T2弛豫度(relaxivity)。顆粒的T2弛豫度，在顆粒的膠體7K溶液中于1特斯拉的磁場強(qiáng)度下測定。適宜的測量方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知，也例如在所附實施例中公開。在本發(fā)明方法的一個雌實施方案中，顆粒的總直徑在大約30nm至大約2mhi的范圍內(nèi)變化。不過，甚至到繼使用總直徑在大約40nm至大約500nm之間、更,大約45nm至大約300nm之間、還更優(yōu)選大約50nm至大約200nm之間的顆粒。如己經(jīng)提到的，本發(fā)明顆粒的總直徑可通過許多現(xiàn)有技術(shù)中已知的直接和間接方法測定，例如包括電子顯微法禾呦態(tài)光Mt法。含娜粒中的鐵氧化物核直徑的雌下限為21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、85、90、95、100nm。直徑的ifc&i:限為500、490、480、470、460、450、440、430、420、410、400、390、380、370、360、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85和80nm。為了定義可艦本發(fā)明方法制備的粒徑的雌范圍上赴下限的所有組合都是可能的，條件是上限駄于下限值，例如40至400nm、50至200nm等。根據(jù)本發(fā)明制備的ifcii^粒具有大約25nm至大約500nm的鐵氧化物核直徑。更雌，鐵氧化物核的直徑在大約30nm至大約200腿之間，還更在大約35nm至大約80nm之間。本發(fā)明的另一個主題包括可通財發(fā)明的方法律恪的顆粒。本發(fā)明的另一個主IS包括一種組合物，其中包含在組合物中的至少2%的顆粒，該顆粒在可藥用殼中含有磁性鐵氧化物核，是本發(fā)明的顆粒，過本發(fā)明的方法制備的顆粒。在優(yōu)選的實1案中，本發(fā)明顆粒或根據(jù)本發(fā)明制備的顆粒的比例較高而且為至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。本發(fā)明組合物用于MPI方法的適宜性隨著本發(fā)明顆粒或根據(jù)本發(fā)明制備的顆粒的比例增加而增加。本發(fā)明的另一個主題是一種組，，其中就至少50%的顆粒而言，本發(fā)明顆粒頓財發(fā)明方法帝U備的顆粒的顆粒直徑位于平均顆粒直&i:下10%的范圍內(nèi)。優(yōu)選隨大小分布的均一性增加，由各自顆粒產(chǎn)生的信號也增強(qiáng)。在這方面，特別，至少55%、至少60%、65%、70%、75%、80%、90%、95%的本發(fā)明顆?；蛲ㄟ^本發(fā)明方法制備的顆粒的顆粒直徑處于平均粒子直徑上下10%的范圍內(nèi)。在這方面，平均顆粒直徑具有上面己經(jīng)解釋的含義，即，粒直徑為含在組合物中的所有本發(fā)明顆?；蚋鶕?jù)本發(fā)明制備的顆粒的平均直徑。本發(fā)明的另一個主題是含本發(fā)明組合物的流體。適宜的流體是ZK溶液，其4，緩沖至生理pH，而且可含有鹽、糖等，尤其是當(dāng)它們打算用于腸胃外應(yīng)用時。該流體可含添加劑如防腐劑、穩(wěn)定劑、清潔劑、調(diào)味劑、賦形劑等。根據(jù)施用途徑可加入到診斷溶液中的許多物質(zhì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這些添加劑可毫無例外地加入到本發(fā)明的流體中，除與本發(fā)明顆粒不相，卜。優(yōu)選流體為穩(wěn)定化的膠體溶液形式。本發(fā)明的另一個主題是本發(fā)明的組合物或本發(fā)明流體用于制備診斷工具(diagnosticmeans)的用途，該診斷工具用于磁'M粒成像(MPI)以診斷疾病。在此處im疾病選自增殖性疾病，尤其是腫瘤和轉(zhuǎn)移，炎性疾病，自身免疫性疾病，消化道疾病，動脈硬化，中風(fēng)，鵬，脈管系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、胰腺、肝、腎、腦和膀胱中的病變，以及影響電刺激傳遞的疾病和神經(jīng)退行性疾病。在此處所用的顆粒ttit為上面作為,或特別優(yōu)選公開的顆粒。本發(fā)明的另一個主題是組合物的用途，其中包含在組合物中的至少2%的顆粒在可藥用殼中包含直徑為20腦至l拜的磁性鐵氧化物核鵬?？傊睊旌酥睆街刃∮?，以便制備在磁M粒成像(MPI)中應(yīng)用以診斷疾病的診斷工具。在此M^疾病選自增殖性疾病，尤其是腫瘤和轉(zhuǎn)移，炎性疾病，自身免疫性,，消化道疾病，動脈硬化，中風(fēng)，鵬，脈管系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、胰腺、肝、腎、腦和膀胱中的病變，以及影響頓微傳遞的疾病和神經(jīng)退行性疾病。這類顆粒的雌的鐵氧化物核直徑為戰(zhàn)的直徑，但也包含直徑為至少5nm、至少6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29和30nm的鐵氧化物核?？捎糜诒景l(fā)明這種用途的顆?？蒮fliiid^的方法制備。尤其iMffiii包括以下步驟的方法檢測所^^粒(i)產(chǎn)生具有磁場強(qiáng)度空間格局(spatialcourse)的磁場，以至在檢查區(qū)域中獲得低磁場纟艘的第一局部區(qū)域和較高磁場強(qiáng)度的第二局部區(qū)域，(ii)改變檢查區(qū)域內(nèi)兩局部區(qū)域的空間位置，使得顆粒的磁化強(qiáng)度(magnetization)局部地變化，(lii)記錄4繊于已受這種變化影響的檢查區(qū)域內(nèi)的磁化纟販的信號，(iv)刑介該信號以便獲得有關(guān)檢查區(qū)域內(nèi)磁,?？臻g分布的信息。在這種方法中和在這種方案中，在檢查區(qū)域中產(chǎn)生空間非均勻的磁場。在第一局部區(qū)域中，磁場如此弱以致顆粒的磁化強(qiáng)度或多或少地與外加磁場有差異，即不是飽和的。在第二局部區(qū)域中(即在第一部分之外的其余的檢查區(qū)域中)，磁場強(qiáng)至IJ足以保持顆粒處于飽和狀態(tài)。當(dāng)幾乎所有顆粒的磁化都定向于大約外部磁場的方向時，磁化強(qiáng)度飽和，以致對于磁場的任何更進(jìn)一步的增加，磁化強(qiáng)度以比第一局部區(qū)域中當(dāng)在磁場中產(chǎn)生相應(yīng)增加時的小得多的程度增加。第一局部區(qū)域^為空間相刊spatiallycoherent)區(qū)域；它可以是點(diǎn)狀區(qū)域但也可以是線或表面區(qū)域。取決于構(gòu)造，第一局部區(qū)域被第二局部區(qū)域空間包圍(spatiallysurrounded)。iiil變化檢查區(qū)域內(nèi)兩局部區(qū)域的位置，檢査區(qū)域內(nèi)的(整體)磁化強(qiáng)度會變化。局部區(qū)域空間位置的變化例如可通過暫時改變磁場的方式實施。如果測量檢查區(qū)域內(nèi)的磁化強(qiáng)度或由此受影響的物理參數(shù)，可由此獲得關(guān)于檢查區(qū)域內(nèi)磁^^粒空間分布的信息。為此，例如，接收由于檢查區(qū)域內(nèi)磁化強(qiáng)度的暫時變化在至少一個線圈中產(chǎn)生的信號并進(jìn)行刑介。如果暫時改變的磁場以第一頻帶作用于檢查區(qū)嫩口顆粒上，那么，在被線圈接收到的那對言號中，只對含有一個或多個比第一頻帶的那些高的頻率成分的那^ft號進(jìn)行i刊介。因為顆粒的磁化^M寺性通常不是統(tǒng)性變化，因而產(chǎn)生這些測定的信號。對于涉及該方法和方案的進(jìn)一步說明，參見DE10151778。由于所述文獻(xiàn)詳細(xì)描述了該方法和方案，所以DE10151778的內(nèi)雜此全文引入作為在這一點(diǎn)上的參考。在一優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的組合物或流體的的用途，其中進(jìn)行檢測的設(shè)備包含以下裝置a)產(chǎn)生具有磁場強(qiáng)度空間格局的磁場的裝置，使得在檢查區(qū)域獲得低磁場弓艘的第一局部區(qū)概卩較高磁場纟艘的第二局部區(qū)域，b)變化檢查區(qū)域內(nèi)兩局部區(qū)域的空間位置使得顆粒的磁化強(qiáng)度局部變化的裝置，c)記錄依賴于己，種空間位置變化影響的檢查區(qū)域內(nèi)的磁化強(qiáng)度的信號的裝置，d)評價該信號以便獲得有關(guān)檢查區(qū)域內(nèi)磁性顆?？臻g分布的信息的裝置。由于可根據(jù)本發(fā)明使用的顆粒允許特別高的空間分辨率，因此它們可被用于診斷增殖性疾病，尤其是這些疾病的早期階段。增殖性疾病^it自腫瘤、癌變前病癥(precancerouscondition)、發(fā)育異常、子宮內(nèi)膜異位癥和化生(metaplasia)。其它可用可根據(jù)本發(fā)明使用的顆粒診斷的im疾病包括自身免疫性疾病，選自類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、骨關(guān)節(jié)炎、祌經(jīng)病理性疼痛、斑禿、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、急性胰炎、移植排斥、變態(tài)反應(yīng)、肺內(nèi)的變應(yīng)性炎癥、多發(fā)性硬化癥、阿爾茨海默氏病、克羅恩氏病和系統(tǒng)性紅斑狼資。在本發(fā)明的另一實施方案中，本發(fā)明的顆粒和根據(jù)本發(fā)明制備的顆粒可用于采用磁性顆粒的局部加熱方法中，特別優(yōu)選是為了產(chǎn)生高溫(hyperthermia)。對于涉及該方法和方案的進(jìn)一步說明，參見^^O2004/018(B9。由于所述文獻(xiàn)詳細(xì)描述了該方法和方案，WO2004/018039的內(nèi)M此全文引入作為在這一點(diǎn)上的參考。在另一實施方案中，本發(fā)明的新顆粒和根據(jù)本發(fā)明制備的顆?？捎米鞔殴舱癯上?MRI)中的T2增誠影劑。娜粒可用作MRI造影齊似診斷選自下列的疾病和病變增殖性疾病，炎性疾病，自身免疫性疾病，消化道疾病，動脈硬化，中風(fēng)，鵬，脈管系統(tǒng)和心臟、淋巴系統(tǒng)、鵬、肝、腎、腦和膀胱中的病變，以及影響電刺激傳遞的疾病和神經(jīng)退行性疾病。特別^i^頓i繊粒作為MRI造影齊,于肝或脾的成像和診斷這些器官的疾病。i亥顆粒也可以用作血管造影術(shù)的MRI造影劑。以下實施例是用于解釋本發(fā)明而不是將其限制至懼體的實施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員能獲知試驗中敘述的量和溫度的多種變化，所有這些變化屬于所附權(quán)利要求書定義的本發(fā)明的范圍內(nèi)。附圖和圖像說明圖1顯示所制備顆粒的核尺寸的頻數(shù)分布(frequencydistribution),其中頻數(shù)在0至1之間變化。(對應(yīng)于0%至100%)。圖2標(biāo)明A的圖像顯示實施例lc)組合物(殘留物l)的TEM圖像。可看見一些均itt徑為大約35nm的非球狀核。標(biāo)明B的圖像顯示lc)制齊0(殘留物1)的大核的高^f,率TEM?？煽匆娦尉У姆e聚，其已經(jīng)聚集形成更大的多晶°圖3采用三個不同市售Resovist⑧批次進(jìn)行MPI1t查的結(jié)果。示出在所詳歹啲驅(qū)動場頻^m(x柳下所獲得信號的傅立葉幅值(y鄉(xiāng)作為結(jié)果。圖4標(biāo)明A的圖像顯示采用DE10151778的方案和方法產(chǎn)生圖像的模型(phantom)。該模型含多個腔(圖像中顯示為暗點(diǎn))，其填充有Resovist。圖像B顯示該模型的圖像，其中充有Resovi^的腔表現(xiàn)為明亮的區(qū)域。圖5顯示與市售的Resovi,比較的采用實施例lb)和lc)的制劑(兩種不同的平均總直徑)的MPI測量結(jié)果。示出在所詳列的驅(qū)動場頻^if(x軸)下所獲得信號的傅立葉幅值(y軸)作為結(jié)果。實施例實施例i:磁性鐵氧化物顆粒的制備實施例la)起始顆粒分散體的制備將105g特性粘度為0.050dl/g的羧基葡聚糖(CDX)溶于350ml的水中。在氮?dú)獾墓┙o下，向其中加入13.6g氯化與n)四水合物的7jC溶液和140ml1M氯化,)溶銜相當(dāng)于37.8g氯化鐵(ni)六7j^合物)。然后，在15併中內(nèi)向其中加入242ml的3NNaOH溶液，邊加邊攪拌，并將混合物加熱至80°C。M5i加入6NHC1將pH調(diào)至7.0。將混合物在回流下再攪拌1小時。y襯脂，將樣品離'lX2畫g/30^l中)。以相當(dāng)于沉淀物上清液體積的78%的比例加入乙醇。將樣品再次離心(2100g/10^H中)。將沉淀物溶于水中并以水滲析(16h)。用NaOH將該滲析液調(diào)至pH7,2并在減壓下^0將濃輸液通過濾膜(孔徑大小0.2Mm)過濾以獲得186ml的羧基葡聚糖穩(wěn)定的鐵氧化物顆粒的懸浮液。該生產(chǎn)方法相當(dāng)于Resovist②中所含顆粒的生產(chǎn)方法。鐵濃度52mg/ml(鐵含量91%),磁性鐵氧化物的顆粒直徑9nm，顆?？傊睆?1nm，水溶性羧基多糖/鐵重量比1.15，在1特斯拉下磁化3踱98emu/g鐵，丁2弛豫度Z^mM,-1。實施例lb)小顆粒的制備磁力過濾器由環(huán)JM^s(NE1556IBSMagnetBerlin,外徑15mm，內(nèi)徑5mm，高6mm)和安裝在環(huán)形磁體內(nèi)部體積中的分離室組成。分離室由用塑料制成的壁構(gòu)成，并裝有鐵辦直徑大約0.3mm)。將0.8ml的鐵含量為500mmoU和T2弛豫度為大約240(mM'秒)"的鐵氧化物顆粒分散辨根據(jù)實施例la)借助于流體靜壓過濾通過磁力過濾器。由此獲得的濾液的T2弛豫度為41(mM'秒)—1。實施例lc)新磁性鐵氧化物顆粒的制備在回收按照實施例lb)過濾的鐵氧化物顆粒之后，一旦關(guān)掉磁體就可M31沖洗獲得磁力過濾器中的殘留物。產(chǎn)生的顆粒懸浮液(殘留物l)的丁2弛豫度為293(mM衫;r1，按照實施例2、3、4和5表征。在再次進(jìn)行實施例lb)的過濾時，但這次用較弱的磁場，切斷磁體之后獲得的殘留物(殘留物2)的T2弛豫度為388(mM妙)"。實施例2:艦動態(tài)光翻中測定總粒徑采用購自Malvem公司的粒度儀(ZetaSizer3000Hsa)，測量顆粒的平均擴(kuò)散系數(shù)(meandifibsioncoefficients)(弓，加權(quán))并由此計算均低水力直徑。該方法代表測定平均顆?？傊睆降囊环N可能性。不過，在這種情況下，測定的是鐵氧化物核的直徑加上水化層。結(jié)果匯總在下表l中表l<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實施例3:ffl31電子顯微法測定核尺寸采用翻電子顯W(TEM)，富含造影齊啲鐵氧化物核，由于其具有比殼更高的電子密度，因而被放大和拍照。對用這種方法成像的顆粒的尺寸進(jìn)行測量并fflil方文大^m計算出實際的核尺寸。對50至100個顆粒計數(shù)并將結(jié)果CT方圖(histogram)中制圖。也計算平均核直徑(數(shù)量加權(quán))。結(jié)果總結(jié)于圖1中的直方圖和表2的表格中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實施例4:總直紛核比值的測定商由實施例2的直徑和實施例3的核尺寸產(chǎn)生，并匯總在下表3中。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>實施例5:fflii電子顯微法和高分辨率電子顯微法鑒定多晶性顆粒的多晶性通過電子顯微法和高分辨率電子顯微法按照標(biāo)準(zhǔn)方法，例如自電子顯微^(TEM)于CM2000FEG(Philips)顯微鏡上在200kV(HRTEM)下測定。樣品沉積在銅載網(wǎng)上的穿孔上。用這種方法檢測殘留物1的顆粒。結(jié)果以不同的^M率顯示于圖2A和2B。實施例6:f頓磁性鐵氧化物顆粒的MPI實施例6a)用于MPI試驗的樣品的制備在PVC平板(厚1mm,橫向尺寸大約2x2mm2)中鉆直徑0.5mm的孔。一側(cè)用膠帶封住。然后，4柳細(xì)銅絲(0.2mm，有包購，將物廁商加至吼中直到后者被完全充滿。所述物質(zhì)以未稀釋的形式使用。孔的開口側(cè)用膠帶封住并將載玻片粘結(jié)在玻璃纖維增強(qiáng)的量析dipstick)上。然后將樣品在所有側(cè)面上用丙烯酸粘合劑封閉。將樣品按照DE10151778Al中的描述安裝在MPI掃描器中并進(jìn)行觀懂。與DE10151788Al中描述的圖像生成不同，只在不同頻率下針對測定的信號3驢進(jìn)行檢測。為此，在MPI掃描器中應(yīng)用磁力梯度場，如DE10151778A1的圖2和相關(guān)的說明所述的那樣。最大的梯度場強(qiáng)度為3.4T/m410。在該梯度場上疊加交變磁場，如DE10151778Al的圖4a中表示的H(t)。交變場的振幅在梯度場的最大梯度方向上為10mT410，頻率為25.25kHz。在MPI掃描器中樣品可機(jī)械地移動，以便可從不同的觀賦點(diǎn)獲得。此刻，記錄52x52測試點(diǎn)，這些分布在l(MOmn的表面積上。在各點(diǎn)上的測量時間為0.4s。對于在52x52觀賦點(diǎn)上記錄的信號，確定具有最高和最低信號強(qiáng)度的信號值。這些信號值為傅立葉變換的信號，因此是復(fù)數(shù)值。首先，得到最高和最低信號值的實部之間的差和最高和最低信號值的虛部之間的差。然后作為結(jié)果，將在所詳列的交變磁場頻率倍數(shù)(x軸或橫軸)下的兩個所測定的差的平方之和的平方根(y軸或縱軸)作圖。實施例6b){頓Resovist的MPIResovist,—種市售的產(chǎn)品，按照實施例6a)制備和測量。Resovi^中鐵濃度為500mmolFe/1。結(jié)果匯總在圖3中。觀察到高達(dá)約25倍驅(qū)動場頻的信噪比。此外，在3tei微中得到可再現(xiàn)的結(jié)剩3個不同的Resovi^批次)。由此可證明Resovist適合于MPI。實施例6c)j頓根據(jù)實施例lb)的制劑的MPI將實施例lb)懸浮液的鐵濃度調(diào)至500mmolFe/1，然后按照實施例6a)制備制齊訴卩測量。結(jié)果與對比樣品的結(jié)果和實施例6d)的結(jié)果一起顯示于圖5。發(fā)現(xiàn)實施例lb)的組合物(濾銜顯示出比實施例la)的組合物(起始分散體)或Resovist⑧顯著較差的信噪比。實施例6d)使用實施例Ic)的制劑的MPI將實施例lc)懸浮液(殘留物1和殘留物2)的鐵濃度調(diào)至500mmolFeZl，然后按照實施例6a)制備制劑和測量。該結(jié)果與對比樣品的結(jié)果和實施例6c)的結(jié)果一起顯^圖5。發(fā)現(xiàn)含本發(fā)明新顆粒的組合l實施例lc)的制齊0^顯示出比實施例la)的起始分散爛和市售的MR造影齊樹比樣品，Resovist芍和實施例lb)的濾液更好的信噪比。因此含在實施例lc)制劑中的本發(fā)明的新顆粒適舒^爐的MPI。實施例6eM頓Resovist⑧的MPI成像圖4在圖像A中顯示采用DE10151778的方案和方法產(chǎn)生圖像的模型的圖像。該模型含多個腔(在圖像中顯示為暗點(diǎn))，其充有Resovi^。圖4在圖像B中顯示該模型的圖像，其中充有Resovi,的腔表現(xiàn)為明亮的區(qū)域。實施例7:螯合劑鐵氧化物顆粒的合成和偶合多-His-L-選擇蛋白(MECA79)作為體內(nèi)造影劑下文描述NTA(次氮基三乙酸衍生物；a-N-[雙羧甲閨賴氨酸)與按照實施例l)制備的羧基葡聚糖穩(wěn)定的磁性鐵氧化物顆粒的偶合。為此目的，在黑暗中于室溫(RT)將羧基葡聚糖穩(wěn)定的磁性鐵氧化物顆粒在7K溶液中用過量的31倍于顆粒的高碘酸鈉(以羧基葡聚糖為基銜攪拌下氧化30分鐘。然后通過凝膠過濾定量地分離出高碘酸鈉。將葡聚糖磁鐵礦(dextranmagnetites)在磷酸鹽緩沖液(O.lM磷,緩沖液pH7.0)中洗脫。然后將NTA加入到氧化了的葡聚糖磁鐵礦中，并將混，在黑暗中于RT培育2小時，同時偶爾振搖。在該過程中，NTA可以過量偶合到葡聚糖磁鐵礦。然后加入1/10體積的還原劑二甲基硼錄150mM在H20中)，并將混，在黑暗中于RT下再培育2小時，同時偶爾振搖。重復(fù)最后一步，之后在4'C下培育過夜。未結(jié)合的NTA與已經(jīng)和顆粒的表面結(jié)合的NTA的分離:;過濾^濾實現(xiàn)。將顆粒在PBS中或在0.1MHEPES(在每種情況下pH7.0-7.4)中洗脫并M51加入5mg/ml的羧基葡聚糖(最終濃度)使其穩(wěn)定。將顆粒無菌過濾，并加入疊氮化鈉達(dá)到0.1%的最終濃度。然后測定懸浮液的鐵含量和均值粒徑。為了檢測NTA與顆粒的表面偶合的效率，首先將顆粒用10mMEDTA在PBS或O.lMHEPES中在偶爾振搖下于RT培育1小時。然后通過過濾或超濾法除去EDTA，樣品用C,、Ni2+或被螯合劑絡(luò)合的相當(dāng)?shù)亩r離子培育。然后將過量的離子:過濾§濾法與顆粒分離。已與顆粒表面結(jié)合的NTA分子的數(shù)量可通過將結(jié)合離子的ICP測量減去與未修飾的葡聚糖磁^T結(jié)合的離子來測定。實施例8:多-His;選擇蛋白與NTA葡聚糖磁鐵礦的偶合將載有NTA的葡聚糖磁鐵礦首先用N產(chǎn)離刊^ll似的離子)然后用在具有0.2%牛奶(為了減少非特異性結(jié)合)的PBS或0.1MHEPES中用多Ks-標(biāo)記的選擇蛋白M在RT下培育10併中。fflaig宜的超濾單元或31il施加磁場的磁柱(MiltenyiBiotec)除去未結(jié)合的選擇蛋白分子。對產(chǎn)生的造影齊訴勾成物在體外檢觀U其結(jié)合能九例如在小鼠外周淋巴結(jié)的凍結(jié)切片中檢測，然后可用于體內(nèi)成像i微。實施例9:抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)與實施例l)的磁性鐵氧化物顆粒的偶合將實施例l)的懸浮液在皿離心機(jī)中以至少3倍沉^S碎亍純化并用0.02%TritonXlOO乙酸鈉緩沖溶液(pH4.5)等體積吸收。1ml純化的懸浮液用1ml的2%抗生蛋白鏈菌素溶液并在4"C下攪拌60併中。然后加入10mg的EDC。監(jiān)測該過程中的pH值。若pH偏離4.5+/-0.2，貝秘、須用0.01NHC1或0.01NNaOH再調(diào)節(jié)。在攪拌下于4'C繼續(xù)培育大約16小時，然后ilii用1M乙醇胺培育15分鐘結(jié)束。M多次離心^鄉(xiāng)生蛋白鏈菌素己結(jié)合在其上的磁性鐵氧化物顆粒與未結(jié)合的蛋白質(zhì)和與副產(chǎn)物分離。偶合操作的成功M:添加多生物素修飾的bsa進(jìn)行的聚集i(^ia正明。在添加生物素-BSA-聚集的抗生蛋白辛連菌素之后，功能化的鐵氧化物顆粒導(dǎo)致看得見的聚集體，而另一方面未處理的鐵氧化物顆粒不會顯示出任何聚集因而在分散體中保持穩(wěn)定。有關(guān)偶合成功的定量結(jié)論可通過在固定的生物素-BSA上的SurfacePlasmonResonance(BioCore，BioCore2000)獲得。實施例10:MECA79抗體與實施例9)的抗生蛋白鏈菌素功能化的磁性鐵氧化物顆粒的結(jié)合將實施例9)的抗生蛋白鏈菌素己經(jīng)結(jié)合的磁性鐵氧化物顆粒針對Hepes緩沖液/TritonX100溶液0.01q/。用兩倍離心進(jìn)行純化，緩沖并濃縮。將純化的微囊，此刻結(jié)合生物素，用1mg的生物素化的MECA79抗體培育1小時然后洗滌。以同樣的方法，可^ffl生物素化的同型IgM抗辨例如克隆R4-22)制備對照瀬粒。所用抗體量的50M結(jié)合到微囊(BioCore測量用抗IgM-FITC抗體飽和的柱)。MECA9抗體識別"外周淋巴結(jié)地址素"，一種只見于外周禾口腸系膜淋巴結(jié)的高內(nèi)皮小靜脈上的配體基團(tuán)。實施例ll:抗小鼠CD105抗體與磁性鐵氧化物顆粒的偶合以類似于實施例IO)的方式，將生物素化的抗小鼠CDIO5抗體與實施例9)的抗生蛋白HI菌素功能化的磁性鐵氧化物顆粒結(jié)合。CD105抗體識別血管生成特異性受體并可用于圖像輔助的腫瘤診斷。實施例12:抗小鼠ICAM-1抗體與磁性鐵氧化物顆粒的偶合以對以于實施例IO)的方式，將生物素化的抗小鼠ICAM-1抗體與實施例9)的抗生蛋白鏈菌素功能化的磁性鐵氧化物顆粒結(jié)合。ICAM-1抗體識別小鼠體內(nèi)的炎癥中心，例如在自身免MWM炎(EAE)實驗?zāi)Ｐ椭?。EAE模型用作多發(fā)性硬化癥的體內(nèi)疾病模型。權(quán)利要求1.一種顆粒，在可藥用殼中含有直徑為20nm至1μm的磁性鐵氧化物核，其特征在于顆粒總直徑/核直徑之比小于6。2.根據(jù)豐又利要求1的顆粒，其特征在于該可藥用殼穩(wěn)定膠體溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的顆粒，其特征在于該可藥用殼包含合成聚合物或共聚物、淀粉或其衍生物、葡聚糖或其衍生物、環(huán)糊精或其衍生物、月旨肪酸、多糖、卵磷脂或甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯或其衍生物，或它們的混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3的顆粒，其中①合成聚合物或共聚物選自由聚氧乙烯脫水山梨醇酯、聚氧乙烯及其衍生物、聚氧丙烯及其衍生物、非離子型表面活性劑、硬脂酸聚烴氧基酯(35-80)、聚乙烯醇、聚合蔗糖、聚羥基烷基甲基丙烯翻安、乳酸和乙醇酸共聚物、聚原酸酯、聚烷基氰基丙烯酸酯、聚乙二醇、聚丙二醇、聚甘油、多羥基化聚乙烯基基質(zhì)、聚羥乙基天冬翻安、聚氨基酸、苯乙烯和馬來酸共聚物、聚己內(nèi)酯、羧基多糖和聚酐組成的組；(ii)淀粉衍生物選自由淀粉2-羥甲基醚和羥乙基淀粉組成的組；(ui)葡聚糖或其衍生物選自由半乳糖S^七葡聚糖、乳糖基化葡聚糖、胺化葡聚糖、含SH基團(tuán)的葡聚糖、含羧基的葡聚糖、含醛基的葡聚糖、生物素化葡聚糖組成的組；(iv)環(huán)糊精選自由|3-環(huán)糊精和羥丙餅糊精組成的組；(v)脂肪,自由月桂基硫lM、硬脂酸鈉、硬脂酸、脫水山梨醇單月桂酸酯、脫水山梨醇單油酸酯、脫水山梨醇單棕櫚酸酯和脫水山梨醇單硬脂酸酯組成的組。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任何一項的顆粒，其特征在于磁性鐵氧化物核包含磁鐵礦或磁繊礦或其混合物。6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任何一項的顆粒，其特征在于鐵氧化物核含至少五，氧化物單晶。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任何一項的顆粒，其特征在于顆?？傊睆綖?0nm至2,。8.根據(jù)禾又利要求1至7任何一項的顆粒，其特征在于鐵氧化物核的直徑為30至500nm。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項的顆粒，其特征在于鐵氧化物核是多晶的。10.根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項的顆粒，其特征在于聚乙二醇和/或聚丙二醇?xì)埢怨矁r或非共價方式連接到顆粒表面。11.一種制備顆粒的方法，其中所M粒在可藥用殼中含有直徑為20nm至l拜的磁性鐵氧化物核并M?？傊睊旌酥盺t比小于6，所述方、跑含以下步驟(i)在合成聚合物或共聚物、淀粉或其衍生物、葡聚糖或其衍生物、環(huán)糊精或其衍生物、脂肪酸、多糖、卵磷脂或甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯或其衍生物或它們的混合物的存在下，將含鐵(n)鹽和鐵(m)鹽的混合鐵鹽水溶液與堿7jC溶液混合，直到形成顆粒的膠，液，(ii)使含顆粒的溶M31磁力梯度場，(iii)撤除該磁力梯度場，(iv)和回收留在梯度場中的顆粒。12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其特征在于，在進(jìn)一步的步驟中，選擇具有預(yù)定顆粒總直徑的顆粒。13.可根據(jù)權(quán)利要求11或12的方法制備的顆粒。14.一種組合物，其特征在于包含在組合物中的至少2%的顆粒，該顆粒在可藥用殼中含有磁性鐵氧化物核，是t又利要求1至10任一項的顆?；騮又利要求13的顆粒。15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其特征在于I51利要求1至10任一項顆粒的粒徑^t又利要求13的顆粒的粒徑滿足至少50%的顆粒在平均粒徑上下10%的范圍之內(nèi)。16.—種流體，其特征在于它含有權(quán)利要求14或15的組合物。17.根據(jù)權(quán)利要求16的流體，其特征在于該流體為穩(wěn)定的膠#^液形式。18.權(quán)利要求14或15的組合物^^又利要求16或17的流體的用途，用以制備用于磁f，粒成像(MPI)的診斷工具以診斷選自下列的疾病增殖性疾病，炎性疾病，自身免疫性疾病，消化道疾病，動脈硬化，中風(fēng)，，脈管系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、胰腺、肝、腎、腦和膀胱的病變，以及影響電刺激傳遞的疾病和神經(jīng)退行性疾病。19.組合物的用途，其特征在于包含在組合物中的至少2%的顆粒在可藥用殼中包含磁性鐵氧化物核，其中該磁性鐵氧化物核具有20nm至lMm的直徑并M?？傊睊旌酥睆街刃∮?，以便制備用于磁性顆粒成像(MPI)的診斷工具以診斷下列疾病增殖性疾病，炎性疾病，自身免疫性疾病，消化道疾病，動脈硬化，中風(fēng)，梗塞，脈管系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、胰腺、肝、腎、腦和膀胱的病變，以及影響ttU激傳遞的疾病和神經(jīng)退行性疾病。20.根據(jù)權(quán)利要求18或19的用途，其中通過包括以下步驟的方法檢測顆粒(i)產(chǎn)生具有磁場強(qiáng)度空間格局的磁場，以至在檢查區(qū)域中獲得具有低磁場強(qiáng)度的第一局部區(qū)域和具有較高磁場強(qiáng)度的第二局部區(qū)域，(ii)改變檢查區(qū)域內(nèi)兩個局部區(qū)域的空間位置，使得顆粒的磁化強(qiáng)度局部地發(fā)生變化，(ill)記錄儘于檢查區(qū)域內(nèi)已被這種變化影響的磁化3贓的信號，(iv)刑介該信號以便獲得有關(guān)檢查區(qū)域內(nèi)磁鵬?？臻g分布的信息。21.根據(jù)權(quán)利要求20的用途，其特征在于實施檢測的設(shè)備包括下列裝置a)產(chǎn)生磁場的錢，該磁場具有磁場纟販空間格局，使得在檢查區(qū)職得具有低磁場強(qiáng)度的第一局部區(qū)域和具有較高磁場強(qiáng)度的第二局部區(qū)域，b)改變檢查區(qū)域內(nèi)兩個局部區(qū)域的空間位置使得顆粒的磁化強(qiáng)度局部地發(fā)生變化的裝置，c)記錄信號的，，該信號依賴于檢查區(qū)域內(nèi)已被這種空間位置變化影響的磁化強(qiáng)度，d)評價該信號以便獲得有關(guān)檢查區(qū)域內(nèi)磁性顆粒空間分布的信息的裝置。22.根據(jù)權(quán)利要求18至21任一項的用途，其特征在于增殖性疾病選自腫瘤，癌變前的病癥，發(fā)育異常，子宮內(nèi)膜^^立癥和化生。23.根據(jù)權(quán)利要求18至21任一項的用途，其特征在于自身免疫病選自類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，骨關(guān)節(jié)炎，神經(jīng)病理性疼痛，斑禿，銀屑病，銀屑病關(guān)節(jié)炎，急性胰炎，移植排斥，變態(tài)反應(yīng)，月市內(nèi)的變應(yīng)性炎癥，多發(fā)性硬化癥，阿爾茨海默氏病，克羅恩氏病和系統(tǒng)性紅斑狼屯。全文摘要本發(fā)明涉及在藥學(xué)上可接受的殼中含有磁性鐵氧化物顆粒的復(fù)合物，該顆粒具有20nm至1μm的直徑，顆?？傊睆?核直徑的比小于6，以及涉及這些復(fù)合物在磁性顆粒成像(MPI)中的用途。特別優(yōu)選的是這些組合物在胃腸道、心血管系統(tǒng)和顱構(gòu)件檢查中，動脈硬化、梗死形成及腫瘤和轉(zhuǎn)移例如淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移的診斷中的用途。文檔編號A61K49/18GK101378785SQ200680023436公開日2009年3月4日申請日期2006年6月29日優(yōu)先權(quán)日2005年6月29日發(fā)明者A·布里爾,B·格萊克,H·-J·韋因曼,H·皮特什,J·湯森,J·韋澤內(nèi)克,M·羅勒,M·羅塞,R·拉瓦澤克申請人:拜爾先靈制藥股份公司;皇家飛利浦電子股份有限公司