專利名稱：：改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和記憶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種通過食物方式改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的方法，更具體地，本發(fā)明涉及一種通過給用唾液酸的食物源改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的方法。
背景技術(shù)：
：公認(rèn)母乳和母乳喂養(yǎng)是喂養(yǎng)嬰兒的優(yōu)選方式。公認(rèn)的母乳喂養(yǎng)的益處之一是最佳的智力發(fā)育。對于消耗嬰兒配方食品(formula)的嬰兒，已經(jīng)進(jìn)行了實(shí)質(zhì)性的努力，以提供當(dāng)與母乳喂養(yǎng)的嬰兒中所觀察到的智力發(fā)育相比，能支持最佳智力發(fā)育的配方組合物。與其它的靈長類動物相比，成人的腦重較體重發(fā)育快四倍，但是嬰兒在出生時相對地發(fā)育不成熟。Parker,S.T.等人，OriginofIntelligence,pp.313-345,TheJohnsHopkinsUmv.Press,Baltimore,MD(1999)。因此，腦生長在出生前后都迅速地進(jìn)行，使得對腦發(fā)育所需的生源物的供應(yīng)存在巨大的需求。在早期腦發(fā)育的關(guān)鍵階段，營養(yǎng)欠佳可能對認(rèn)知功能具有長期影響一這是重大公共衛(wèi)生和臨床所關(guān)切的問題。Lucas,A.等人，BMJ，217:1481-1487(1998),和Lucas,A.等人，Lancet,339:261-264(1992)。在早產(chǎn)嬰兒中進(jìn)行的隨機(jī)、雙盲和對照試驗(yàn)中，那些喂食標(biāo)準(zhǔn)的嬰兒配方食品的而非營養(yǎng)物質(zhì)強(qiáng)化配方食品的嬰兒在8歲時具有低的言語智商(IQ)。參見Lucas，同處，(l"8)。令人不安地是，喂食標(biāo)準(zhǔn)配方食品的男嬰幾乎半數(shù)具有低于正常的IQ,而喂食強(qiáng)化乳的男嬰僅有13%具有低于正常的IQ。這些研究突出顯示了越來越多的早產(chǎn)嬰兒和低出生體重嬰兒受到營養(yǎng)欠佳的潛在威脅。人乳所獨(dú)有的特定組分具有支持腦迅速生長的能力。特別地，唾液酸(神經(jīng)氨酸的N-和O-取代衍生物家族；特別是N-乙酰神經(jīng)氨酸，即NANA)作為人乳低聚糖的組分大量存在(高達(dá)1g/1),并且還形成腦神經(jīng)節(jié)苷脂和糖蛋白的末端官能殘基。Wang,B.等人，Am.J.Clin.Nutr.,74:510-515(2001),牙口Carlson,S.E.，AmJ.Clin.Nutr.，41:720-726(1985)。唾液酸組分在剛生產(chǎn)后的人乳中以最高濃度存在。Idota等人，于J.ofJapaneseSoc.ofNutr.andFoodSci.(NihonEiyoShokuryoGakkai-shi),47(5):363-367(1994)表明，在產(chǎn)后3到482天，人母乳中的唾液酰乳糖(sialyllactose)含量急劇降j氐。實(shí)際上，最高濃度的唾液酸在人腦的大腦皮質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)。Schauer,R.,Sialicacids,Chemistry,MetabolismandFunction,Springer-Verlag,Wien，NewYork(1982),和Svennerholm,L.等人，BiochemBiophysActa,1005:109-117(1989)。特別地，神經(jīng)細(xì)胞粘著分子(NCAM)是唾液酸化(sialydated)蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)似乎在學(xué)習(xí)和記憶中起重要作用。其參與各種形態(tài)發(fā)生事件，包括細(xì)胞遷移、軸突長出、路徑尋找、芽殖、再生和突觸可塑性。Nakayama,丄等人，VirchowsArchiv，433:419-426(1998),Mahal,L,K.等人,J.Biol.Chem.,277:9255-9261(2002),和Ong,E.等人，Glycobiology，8:415-424(1998)。在嚙齒類動物中，NCAM多唾液酸化的程度與學(xué)習(xí)和記憶提高有關(guān)。Cremer，H.等人,Nature,367:455-459(1994)。研究已表明，在通過腹膜內(nèi)注射給用N-乙酰神經(jīng)氨酸(NANA)的大鼠仔鼠(ratpups)的腦中的大部分NANA被并入突觸小體部分中。Morgan,B.L.G.等人,Br.J.Nutr.，46:231-238(1981)。之后，Carlson,S.E.等人，于J.Nutr.，116:881-886(1986)表明，經(jīng)口給用和腹膜內(nèi)給用N-乙酰神經(jīng)氨酸比葡萄糖注射更顯著地產(chǎn)生大腦和小腦的神經(jīng)節(jié)苷脂和糖蛋白的N-乙酰神經(jīng)氨酸。Morgan,B.L.G.等人，于J.Nutr.,110:416-424(1980)還表明，腹膜內(nèi)注射N-乙酰神經(jīng)氨酸的營養(yǎng)不良大鼠仔鼠比注射葡萄糖的同窩鼠(littermates)更快地學(xué)習(xí)迷宮，并顯示出降^f氐的由營養(yǎng)不良所導(dǎo)致的預(yù)期行為異常。牛乳基配方食品中通常具有低唾液酸含量。在一項(xiàng)研究中，在若千酪蛋白/乳清組合配方食品中，唾液酸的濃度低于200毫克唾液酸/升。此外，大豆蛋白質(zhì)基配方食品與牛乳基配方食品相比，含有實(shí)質(zhì)上更低濃度的唾液酸。因此，不含乳糖的大豆蛋白質(zhì)基配方食品具有極低的唾液酸含量。在有些情況下，研究已表明增補(bǔ)有唾液酸或含唾液酸的物質(zhì)的食物提供某些益處。有幾種已知的以各種結(jié)合形式存在的唾液酸源，它們包括，但不限于，游離的N-乙酰神經(jīng)氨酸(或唾液酸)、j氐聚糖唾液酰乳糖、含唾液酸的神經(jīng)節(jié)苷脂、和蛋白質(zhì)酪蛋白巨肽(caseinmacropeptide(CMP)),還稱為糖巨肽(glycomacrop印tide(GMP))、和當(dāng)?shù)米耘Ｈ闀r的酪蛋白糖巨肽(CGMP)，等等。生產(chǎn)CGMP的方法在美國專利申請20040022918中描述，該申請教導(dǎo)了通過使用粗制凝乳酶凝結(jié)牛乳從牛乳中生產(chǎn)乳酪，引起凝結(jié)物當(dāng)擠出乳清時結(jié)成凝乳。由于粗制凝乳酶對k酪蛋白的作用，酪蛋白糖巨肽(CMP)從酪蛋白中分離，并且約90%的CMP通常與乳清一起除去。CMP是非同質(zhì)的蛋白質(zhì)族，其含有k酪蛋白的所有的遺傳性變異物和翻譯后修飾物(Y糊等人,Reprod.Nutr.Dev.,34:527-537(1994))。主要的碳水化合物是唾液酸。糖巨肽即GMP是CMP的主要(50%到75%)成分。GMP的碳水化合物含量使得其可溶于12%的三氯乙酸溶液中。若干分析測量技術(shù)包括預(yù)處理，其牽涉TCA溶液，該溶液可除去至少部分的非糖基化CMP。例如，在TheOfficialJournaloftheEuropeanCommunities(L228/10AnnexIV)中公開的方法詳述了測量乳制品中GMP的HPLC方法，并且使用GMP含量來計(jì)算樣品中存在的乳酪乳清含量。從乳中生產(chǎn)CGMP的其它方法由Brody,E.P.在Br.J.ofNutr.,84(Suppl.1):S39-S46(2000)中描述。向某些營養(yǎng)配方食品中添加唾液酸或唾液酸源已經(jīng)在美國專利6,506,422中討論，該專利公開了用于對罹患苯丙酮尿癥的患者給用含有酪蛋白糖巨肽和除了苯丙氨酸之外的補(bǔ)充性必需氨基酸的特定的營養(yǎng)配方食品。未提及在嬰兒配方食品中發(fā)現(xiàn)的唾液酸含量。美國專利6,270,827公開了含有人乳蛋白質(zhì)或重組寄主抗性因子(其中之一是重組人k-酪蛋白)以增補(bǔ)人工合成的嬰兒配方食品的配方食口口o美國專利4,762，822公開了在嬰兒配方食品中使用N-乙酰神經(jīng)氨酸或含唾液酸的神經(jīng)節(jié)苷脂以保護(hù)新生兒免受導(dǎo)致胃腸疾病的生物體的威脅。國際專利申請WO01/60346A2公開了含有作為生物前物質(zhì)的低聚糖低聚果糖和唾液酰乳糖的營養(yǎng)配方物質(zhì)以促進(jìn)消化道中雙歧桿菌的生長，這些營養(yǎng)配方物質(zhì)可與嬰兒配方食品聯(lián)合使用。WO-A-0049885描述了用于解決骨病或牙病的乳蛋白水解產(chǎn)物。酪蛋白糖巨肽(CGMP)提取自甜乳清(sweetwhey),通過電滲析、陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂、蒸發(fā)、噴霧千燥、超濾和冷凍干燥方法的組合來進(jìn)行，并用于增補(bǔ)食物或液體腸組合物。雖然已經(jīng)報(bào)道了唾液酸的食物給用可用于若千目的，但是還沒有關(guān)于使用唾液酸的食物增補(bǔ)來影響哺乳動物的學(xué)習(xí)或記憶行為的報(bào)道。因?yàn)槭澄镌鲅a(bǔ)是一種對受試者特別是嬰幼哺乳動物給用各種作用劑的容易的和被廣泛接受的方法，所以其可用于提供這樣一種方法，通過該方法，哺乳動物的學(xué)習(xí)和記憶行為可以通過食物方式得到改善。這種方法可特別地用于需要改善學(xué)習(xí)和記憶行為的新生的哺乳動物受試者。
發(fā)明內(nèi)容因此，簡要地講，本發(fā)明涉及改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的新方法，該方法包括給用足夠改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的量的酪蛋白糖巨肽。本發(fā)明還涉及增加哺乳動物的腦蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的新方法，該方法包括對哺乳動物給用足夠增加哺乳動物的腦蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的量的酪蛋白糖巨肽。本發(fā)明還涉及改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的新方法，該方法包括確定是否哺乳動物是需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶的哺乳動物；并且，如果是這樣的話，對哺乳動物給用足夠改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的量的酪蛋白糖巨肽。因此，值得提及的是，由本發(fā)明所獲得的若干優(yōu)點(diǎn)之一是提供了這樣的方法，通過該方法，哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶4亍為通過食物方式得以改善，并且還提供了這樣的方法，該方法可特別地用于需要改善學(xué)習(xí)和記憶為的新生的哺乳動物受試者。圖1是可用于測試小豬的學(xué)習(xí)和記憶行為的8臂迷宮的示意圖；圖2是圖1所示的8臂迷宮的臂之一的示意圖；圖3表示在測試小豬的學(xué)習(xí)行為中使用的目一見標(biāo)志(visualcues),在學(xué)習(xí)任務(wù)1中使用(A)和在學(xué)習(xí)任務(wù)2中使用(B)。圖4是表示在任務(wù)1中學(xué)習(xí)對目視標(biāo)志作出正確響應(yīng)的四組中的每一組中的小豬比率作為試驗(yàn)次數(shù)的函數(shù)曲線，其中第4組小豬(表現(xiàn)第二好)接受了含842mg/L唾液酸并增補(bǔ)了酪蛋白糖巨肽(240mg/kg/天的唾液酸)的食物，其中第3組小豬(表現(xiàn)第三好)接受了含600mg/L唾液酸并增補(bǔ)了酪蛋白糖巨肽(171mg/kg/天的唾液酸)的食物，其中第2組小豬(表現(xiàn)最好)接受了含250mg/L唾液酸并增補(bǔ)了酪蛋白糖巨肽(71mg/kg/天的唾液酸)的食物，以及第1組小豬(表現(xiàn)最差)接受了含77mg/L唾液酸(25mg/kg/天的唾液酸)但是未增補(bǔ)酪蛋白糖巨肽的食物；圖5是表示在任務(wù)2中學(xué)習(xí)對目視標(biāo)志作出正確響應(yīng)的四組中的每一組中的小豬比率作為試驗(yàn)次數(shù)的函數(shù)曲線，其中第4組小豬(表現(xiàn)最好)接受了含842mg/L唾液酸并增補(bǔ)了酪蛋白糖巨肽(240mg/kg/天的唾液酸)的食物，第3組小豬(表現(xiàn)第二好)接受了含600mg/L唾液酸并增補(bǔ)了酪蛋白糖巨肽(171mg/kg/天的唾液酸)的食物，第2組小豬(表現(xiàn)第三好)接受了含250mg/L唾液酸并增補(bǔ)了酪蛋白糖巨肽(71mg/kg/天的唾液酸)的食物，以及第l組小豬(表現(xiàn)最差)接受了含77mg/L唾液酸(25mg/kg/天的唾液酸)但是未增補(bǔ)酪蛋白糖巨肽的食物；圖6是在任務(wù)1和任務(wù)2中每組小豬的錯誤總數(shù)的柱狀圖，表明未增補(bǔ)酪蛋白糖巨肽的食物的組中的小豬在每種任務(wù)中的錯誤總數(shù)最高，在所有水平的增補(bǔ)都改善了小豬的學(xué)習(xí)能力；圖7表示兩個柱狀圖，其中圖(A)表示對于任務(wù)1中的記憶測試，四組中的每一組中小豬的平均錯誤次數(shù)，圖(B)表示對于任務(wù)2中的記憶測試，四組中的每一組中小豬的平均錯誤次數(shù)；圖8表示兩個柱狀圖，其中圖(A)表示在研究的每一周，四組小豬的每一組之間的血漿氳化可的松水平的比較，圖(B)表示在為期五周的研究的每一周，合并的試驗(yàn)組和對照組之間的血漿氫化可的松水平的比4交；圖9是表示在試驗(yàn)組和對照組之間的腦灰質(zhì)內(nèi)唾液酸濃度的比較的柱狀圖，該圖表明在接受酪蛋白糖巨肽食物增補(bǔ)的小豬的腦內(nèi)具有更高的唾液酸含量；圖IO表示兩個分布圖，是腦額皮層組織內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的濃度對(A)任務(wù)1中小豬學(xué)習(xí)目視標(biāo)志的試驗(yàn)次數(shù)和對(B)任務(wù)2中小豬學(xué)習(xí)目視標(biāo)志的試驗(yàn)次數(shù)的圖，其中兩個圖都表明腦額皮層組織內(nèi)較高水平的蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸與小豬的學(xué)習(xí)行為改善有關(guān)；圖ll表示兩個分布圖，是腦額皮層組織內(nèi)神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合唾液酸的濃度對(A)任務(wù)1中小豬學(xué)習(xí)目視標(biāo)志的試驗(yàn)次數(shù)和對(B)任務(wù)2中小豬學(xué)習(xí)目視標(biāo)志的試驗(yàn)次數(shù)的圖，其中兩個圖都表明腦額皮層組織內(nèi)較高水平的神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合唾液酸與小豬的學(xué)習(xí)行為改善有關(guān)；圖12表示在記憶檢測任務(wù)1中第4組小豬的錯誤次數(shù)對腦額皮層組織內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸濃度的函數(shù)圖，并表明在記憶檢測中，腦額皮層組織內(nèi)具有較高水平的蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的小豬犯錯更少，并且與具有較低水平的唾液酸的小豬相比具有改善的記憶行為；和圖13是表示在整個試驗(yàn)的持續(xù)期間，四組中每組小豬的平均體重增加圖，該圖表明每組的食物與滿足小豬的全面營養(yǎng)需要是相匹配的。具體實(shí)施方式根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為可以通過對哺乳動物給用足夠改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的量的酪蛋白糖巨肽得以改善。在有用的實(shí)施方案中，酪蛋白糖巨肽可被引入到配方食品中。目前已表明，喂食了含77mg/L唾液酸(無增補(bǔ))、和通過對食物增補(bǔ)酪蛋白糖巨肽而提供250mg/L、600mg/L以及842mg/L唾液酸的食物的小豬在學(xué)習(xí)行為和記憶行為兩方面都表現(xiàn)出差異。實(shí)際上，可以表明，接受了增補(bǔ)有酪蛋白糖巨肽的食物的小豬，相對于接受了雖然在別的方面營養(yǎng)充分但無增補(bǔ)的食物的小豬，在學(xué)習(xí)行為和記憶行為兩方面都得到了改善。這種改善是意想不到的，其原因在于，發(fā)明人認(rèn)識到了先前未知的使用酪蛋白糖巨肽對在其它方面營養(yǎng)充分的食物進(jìn)行食物增補(bǔ)可以改善學(xué)習(xí)和記憶的研究結(jié)果。另外，現(xiàn)有技術(shù)表明在減少食物攝取和在食物中引入CGMP之間存在相關(guān)性。例如參見美國專利公開20040077530和20030059495。因?yàn)闇p少食物攝取更通常與降低的智力敏銳性有關(guān)，而不是與學(xué)習(xí)和記憶改善有關(guān)，因此，對于CGMP的食物增補(bǔ)實(shí)際上改善上述表現(xiàn)(如本發(fā)明所示的)是意想不到的。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)酪蛋白糖巨肽對于用于改善學(xué)習(xí)和記憶行為的食物增補(bǔ)而言是意想不到的良好來源。這是令人驚訝的，因?yàn)榕Ｈ橥ǔ：^少的唾液酸，并且，例如，與唾液酸結(jié)合的大分子與在人乳中發(fā)現(xiàn)的那些大分子不同。雖然如此，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)酪蛋白糖巨肽是令人驚訝的改善學(xué)習(xí)和記憶行為的有效的營養(yǎng)增補(bǔ)劑，并且此外，CGMP相對便宜、容易獲得并且對于嬰兒而言是營養(yǎng)學(xué)安全的。本發(fā)明可用于任何的哺乳動物。然而，其可特別地用于人。哺乳動物可以處于任何年齡。然而，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)哺乳動物處在約1天到約4歲之間時本發(fā)明的方法特別有用。這一年齡段意味著，當(dāng)哺乳動物是人時包括嬰兒和學(xué)步嬰孩(toddlers)。優(yōu)選哺乳動物是新生的哺乳動物。如本文中使用的，術(shù)語"新生的"意在描述從出生到約兩歲之間的年齡。當(dāng)哺乳動物是需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的哺乳動物時本發(fā)明的方法特別有用。當(dāng)本文使用術(shù)語"需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為，，時，他們意在描述，無論程度或大或小，都可受益于學(xué)習(xí)行為和/或記憶行為改習(xí)和/或記憶的哺乳動物的步驟；并且，如果是這樣的話，對哺乳動物給用包括有效量的酪蛋白糖巨肽的配方食品。術(shù)語"學(xué)習(xí)行為的改善"意在包括受試者的學(xué)習(xí)能力的任何改善，無論改善程度如何輕微。術(shù)語"記憶行為的改善，，意在包括受試者的記憶行為的任何改善，無論改善程度如何輕孩i。學(xué)習(xí)和/或記憶行為的改善可以通過任何的一種或多種可用于檢驗(yàn)人嬰兒的學(xué)習(xí)和記憶行為的試驗(yàn)進(jìn)4于測量。這些試-驗(yàn)的例子包括4旦不限于theFaganTestofInfantIntelligence(FTII)、theDunstadaptationoftheUzgiris-HuntObjectPermanenceScale(OP)、theCrossModalTransfer(CMT)test、theBayleyScalesofInfantDevelopmentSecondEdition,MentalDevelopmentIndex(MDI)、theBayleyInfantNeurodevelopmentScreener(BINS)、禾口theAmiel-TisonNeurologicExam(AT)。關(guān)于檢驗(yàn)人嬰兒學(xué)習(xí)和記憶的進(jìn)一步信息可見于Bayley，N.，ManualfortheBayleyscalesofinfantdevelopment.PsychologicalCorporation,NewYork(1969);Bates,丄E.等人，ChildDev.,50:794-803(1979);和Black,M.M.等人，BayleyScalesofInfantDevelopmentIIAssessment,UnlimitedLearningResources,Winston-Salem,NC(2003)。據(jù)信在哺乳動物中特別是在人中，對學(xué)習(xí)和/或記憶行為的改善的需要可以由本領(lǐng)域中已知的任何多種因素引起。例如，營養(yǎng)不良、環(huán)境因素的存在如某些金屬的攝入、氧剝奪、創(chuàng)傷、疾病和其它因素可以引起對這種改善的需要。在一種情況中，正如以上所討論的，現(xiàn)有技術(shù)已推斷指出，在一些新生的哺乳動物的認(rèn)知能力和某些營養(yǎng)成分(唾液酸已被證明是這些營養(yǎng)成分之一)的飲食含量之間存在一定程度的關(guān)聯(lián)。因此，據(jù)信，在本發(fā)明中，當(dāng)哺乳動物的營養(yǎng)需要的至少一部分通過含低于約100mg/L的唾液酸的配方食品被供給時，并且，特別地，當(dāng)哺乳動物的營養(yǎng)需要的基本上全部通過給用含低于約100mg/L唾液酸的配方食品被供給時，顯示出對學(xué)習(xí)和/或記憶行為的改善的需要，或者可確定哺乳動物是需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶的哺乳動物。當(dāng)使用通過某種配方食品"哺乳動物的營養(yǎng)需要的至少一部分被供給"的表述時，其是指，對于哺乳動物從出生到目前年齡期間的至少大部分時段，哺乳動物的營養(yǎng)需要的至少25%通過配方食品被供給。優(yōu)選對于哺乳動物從出生到目前年齡的至少大部分時段，哺乳動物的營養(yǎng)需要的被供給分?jǐn)?shù)為至少50%、更優(yōu)選為75%,然而更優(yōu)選是基本上全部的哺乳動物的營養(yǎng)需要。由于同人乳(特別是初乳和早期哺乳期間產(chǎn)生的乳)中的唾液酸水平相比，大豆蛋白質(zhì)和牛乳蛋白質(zhì)中含有低水平的唾液酸，據(jù)信接受其中大部分蛋白質(zhì)是大豆蛋白質(zhì)或牛乳蛋白質(zhì)并且其中唾液酸水平低于約100mg/L的配方食品的哺乳動物是需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的哺乳動物。特別是，據(jù)信當(dāng)配方食品中所含的至少約75wt。/。的蛋白質(zhì)是大豆蛋白質(zhì)或牛乳蛋白質(zhì)時尤其如此，當(dāng)配方食品中所含的基本上全部的蛋白質(zhì)是大豆蛋白質(zhì)或牛乳蛋白質(zhì)時更是如此。實(shí)際上，據(jù)信，當(dāng)哺乳動物的營養(yǎng)需要通過唾液酸的提供量低于從母乳喂養(yǎng)中通常獲得的量的食物被供給時，顯示出哺乳動物對改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的需要。當(dāng)使用"哺乳動物的營養(yǎng)需要被供給"的表述時，其是指，對于哺乳動物從出生到目前年齡的至少大部分時段，哺乳動物的營養(yǎng)需要被供給。術(shù)語"唾液酸的提供量低于從母乳喂養(yǎng)中通常獲得的量的食物，，是指包括液體配方食品的食物，該液體配方食品的唾液酸含量低于約100mg/L。在其它實(shí)施方案中，并且在一些實(shí)施方案中，該液體配方食品的唾液酸含量低于約200mg/L。在本發(fā)明中，包括酪蛋白糖巨肽的配方食品可以通過任何的腸給用形式對哺乳動物給用。如本文中使用的，腸給用包括對哺乳動物的胃腸道的任一點(diǎn)給用配方食品，包括但不限于經(jīng)口給用和腸管給用。盡管酪蛋白糖巨肽可以原態(tài)給用于哺乳動物，沒有任何相伴的化合物或材料，酪蛋白糖巨肽還可作為配方食品的一種成分以提供CGMP。包括酪蛋白糖巨肽的配方食品可以是任何的營養(yǎng)配方食品，優(yōu)選是嬰兒配方食品。在一些實(shí)施方案中，嬰兒配方食品是包括碳水化合物、脂類和蛋白質(zhì)的營養(yǎng)全面的嬰兒配方食品。本發(fā)明使用的嬰兒配方食品可以是營養(yǎng)全面的配方食品，或者其可以是強(qiáng)化配方食品。通常，配方食品包含適當(dāng)類型和量的脂類、碳水化合物、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)。脂類或脂肪的量通常為約3到約7g/100千卡。蛋白質(zhì)的量通常為約1到約5g/100千卡。碳水化合物的量通常為約6到約16g/100千卡。如本文中使用的，術(shù)語"配方食品"例如是指人造組合物，不被解釋為包括母乳。蛋白質(zhì)源可以是本領(lǐng)域中使用的任何蛋白質(zhì)源，可以包括例如脫脂乳、乳清蛋白、酪蛋白、大豆蛋白質(zhì)、水解蛋白和氨基酸。脂類源可以是本領(lǐng)域中使用的任何脂類源，例如植物油，如棕櫚油、大豆油、棕櫚油精(palmoleinoil)、玉米油、低芥酸菜子油、椰子油、中鏈甘油三酯油、高油酸向日葵油和高油酸紅花油。碳水化合物源可以是本領(lǐng)域中使用的任何碳水化合物源，諸如例如乳糖、葡萄糖聚合物、淀粉糖漿固形物、麥芽糖糊精、蔗糖、淀粉和米糖漿固形物。方便地，可使用幾種市售的嬰兒配方食品作為用于CGMP添加的基本配方食品。例3口，含有纟失的EnfamilLipil(購自MeadJohnson&Company,Evansville,Indiana,U.S.A.)可以增補(bǔ)有效量的CGMP并可用于實(shí)踐本發(fā)明的方法。適用于本發(fā)明的特定的嬰兒配方食品在本文實(shí)施例中有述。制劑中來自全部蛋白質(zhì)源的總蛋白質(zhì)濃度應(yīng)當(dāng)在營養(yǎng)學(xué)上適合于嬰兒，總蛋白質(zhì)濃度通常為約12g/L到18g/L,在一些實(shí)施方案中，可為約14g/L。制劑中的總唾液酸濃度可為約200到約MOOmg/L。優(yōu)選本發(fā)明的配方食品包括唾液酸濃度為至少約200mg/L的液體。在一些實(shí)施方案中，更優(yōu)選配方食品包括唾液酸含量為至少約300mg/L、更優(yōu)選唾液酸含量為至少約600mg/L的液體。優(yōu)選的配方食品包含高達(dá)6g/L的酪蛋白糖巨肽(CGMP)或相關(guān)的蛋白質(zhì)級分(購自不同來源)，其包含約81%的蛋白質(zhì)和約40到約300mg的唾液酸/克蛋白質(zhì)，但是，通常為約40到60mgSA/gm蛋白質(zhì)，并且，因此，貢獻(xiàn)了約194到約1^8mg的唾液酸/升配方食品，但是通常為約194到290mgSA/升的配方食品；或高達(dá)約6g/L的具有增高濃度的唾液酸的CGMP級分?？捎糜诒景l(fā)明的酪蛋白糖巨肽通常可來自任何來源并且可以是適用于營養(yǎng)目的或供包含在嬰兒配方食品中之用的任何純度或級別。酪蛋白糖巨肽可使用適當(dāng)?shù)募庸し椒ㄌ崛∽匀椤＠?，酪蛋白糖巨肽可以提取自乳清蛋白濃縮物所得的存留物(retentate)。這可以通過從存留物中至少部分地除去乳糖并然后添加乙醇引發(fā)沉淀來進(jìn)行。然后收集上清液并干燥以提供酪蛋白糖巨肽。以不與本文所述信息相沖突的程度被全文引入本文作為參考的美國專利5,216,129提供了這一方法的更詳細(xì)說明?？捎糜诒景l(fā)明方法的CGMP還可根據(jù)美國專利6,555,659、5,280,107、5,968,586和5,075,424中所述的技術(shù)和PCT/US94/15952和WO03/049547中所述的技術(shù)生產(chǎn)?；蛘?，CGMP可購自例如以下的商業(yè)來源，TheTatuaCo-operativeDairyCompanyLimited,Tatuanui,Morrinsville,NewZealand,MDFoodsIngredientsambaofDK-6920Videbaek,Denmark,或購自DMVInternationalofNCB-laan80，NL-5460BAVeghel，TheNetherlands。在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選酪蛋白糖巨肽或包含酪蛋白糖巨肽的配方食品以足夠?qū)Σ溉閯游锾峁?00mg/kg/天的唾液酸的量被給用，在一些實(shí)施方案中，更優(yōu)選對哺乳動物提供200mg/kg/天的唾液酸。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，優(yōu)選配方食品的總蛋白質(zhì)含量為12到16克/升，其中總蛋白質(zhì)含量的不多于40wt。/。由酪蛋白糖巨肽提供。更優(yōu)選配方食品的總蛋白質(zhì)含量為13到15克/升，其中總蛋白質(zhì)含量的不多于30wt。/。由酪蛋白糖巨肽提供。在一個實(shí)施方案中，配方食品的蛋白質(zhì)含量由酪蛋白糖巨肽和大豆蛋白質(zhì)提供。本發(fā)明的一些實(shí)施方案包括使用新的CGMP產(chǎn)品，該產(chǎn)品含有的唾液酸水平高于通常在市售的標(biāo)準(zhǔn)CGMP產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的唾液酸水平。這些新產(chǎn)品可單獨(dú)使用或組合使用，基于各種來源成分中的唾液酸含量計(jì)，以獲得可模擬在母乳中發(fā)現(xiàn)的唾液酸水平。在一個實(shí)施方案中，酪蛋白糖巨肽包括具有增高濃度的唾液酸的酪蛋白糖巨肽。如本文中使用的，術(shù)語"具有增高濃度的唾液酸的CGMP"是指經(jīng)過處理以增加唾液酸水平、并且其中唾液酸的水平以4壬〗可量表示都高于處理之前的水平的含酪蛋白糖巨肽(CGMP)級分的乳。具有增高濃度的唾液酸的CGMP產(chǎn)品在以下的參考例2和3中有述。作為這種產(chǎn)品之一，其例子在參考例2中有述，并且在本文中可稱為"具有增高濃度的唾液酸的CGMP"、或"高唾液酸CGMP"。高唾液酸CGMP的唾液酸含量為高于約60mg/gm蛋白質(zhì)。優(yōu)選唾液酸含量高于約100mg/gm蛋白質(zhì)，更優(yōu)選高于約150mg/gm蛋白質(zhì)，然而更優(yōu)選唾液酸含量為高于200mg/gm蛋白質(zhì)。通常，該產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量，相對于干燥粉末產(chǎn)品而言，為約50wt%-60wt%,以及唾液酸含量為約190-230mg/gm蛋白質(zhì)或約100-130mg/gm粉末。相比之下，常規(guī)的CGMP干燥4分末(例如，得自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLimited的糖巨肽)包含81wty。的蛋白質(zhì)，并且唾液酸含量為約52mg/gm蛋白質(zhì)，或42mg/gm粉末。因此，顯而易見，高唾液酸CGMP的唾液酸含量增高超過常規(guī)的糖巨肽粉末的約3倍(按粉末重量計(jì))和約4倍(按該產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量計(jì))。為了比較的目的，電滲析(ED)乳清粉末含有約14%的蛋白質(zhì)(按干重計(jì))，并且含有約30mg的唾液酸/gm蛋白質(zhì)，或約4.3mg的唾液酸/gm粉末。在嬰兒配方食品中使用高唾液酸CGMP作為蛋白質(zhì)源的優(yōu)點(diǎn)是，可以增加配方食品的唾液酸含量而無需替換不適當(dāng)量的在配方食品中使用的常規(guī)蛋白質(zhì)源。這一特征的用處在于對配方食品中的蛋白質(zhì)的氨基酉復(fù)纟且成(aminoacidprofile)的石皮i不小生最小。在高唾液酸CGMP的特定實(shí)施方案中，該產(chǎn)品的氨基酸蘇氨酸水平低于該新產(chǎn)品所衍生自的糖巨肽中的該氨基酸水平。如本文中所使用的，這類高唾液酸CGMP被稱為"具有增高濃度的唾液酸和降低濃度的蘇氨酸的CGMP"，或"具有降低濃度的蘇氨酸的高唾液酸CGMP",這類產(chǎn)品的例子在以下的參考例3中有述。具有降低濃度的蘇氨酸的高唾液酸CGMP的唾液酸含量高于約60mg/gm蛋白質(zhì)，蘇氨酸濃度低于約15mg/16gm氮。優(yōu)選唾液酸含量高于約100mg/gm蛋白質(zhì)，更優(yōu)選高于約150mg/gm蛋白質(zhì)，還更優(yōu)選唾液酸含量高于200mg/gm蛋白質(zhì)。典型地，具有降低濃度的蘇氨酸的高唾液酸CGMP可以具有的唾液酸含量為約85到約150毫克唾液酸(SA)/克粉末，優(yōu)選約90到約140毫克SA/克粉末，這一唾液酸含量可與高唾液酸CGMP的唾液酸含量相比。然而，具有降低濃度的蘇氨酸的高唾液酸CGMP的蘇氨酸含量僅是市售CGMP產(chǎn)品的約四分之一。優(yōu)選地，蘇氨酸含量低于約10g/16g氮，更優(yōu)選低于約7gm/16gm氮，甚至更優(yōu)選低于約5g/16g氮，還更優(yōu)選低于約4g/16g氮。換種方式說，蘇氨酸含量低于蛋白質(zhì)的氨基酸總重量的約8wt%,優(yōu)選低于約6%,更優(yōu)選低于約4%，還更優(yōu)選低于約3%。由這種類型的唾液酸強(qiáng)化產(chǎn)品提供的優(yōu)點(diǎn)是，除了正如以上所討論的增加唾液酸而對氨基酸組成的破壞性減少之外，還可以控制嬰兒配方食品中蛋白質(zhì)源的蘇氨酸水平。這在為了減小或消除高蘇氨酸尿癥(hyperthreoninuna)或其它由食物中的高水平蘇氨酸所引起或加重的病癥的可能性的某些實(shí)施方案中是合乎需要的。例如，可用于本發(fā)明的嬰兒配方食品可配置為具有至少200毫克/升的唾液酸含量和12到16克/升的總蛋白質(zhì)含量，其中總蛋白質(zhì)含量的不多于40wt。/。由具有增高濃度的唾液酸的CGMP提供。優(yōu)選地，這種嬰兒配方食品具有13到15克/升的總蛋白質(zhì)含量，其中總蛋白質(zhì)含量的不多于30wt。/。由具有增高濃度的唾液酸的CGMP提供，更優(yōu)選地，這種嬰兒配方食品具有13到15克/升的總蛋白質(zhì)含量，其中總蛋白質(zhì)含量的不多于15%由具有增高濃度的唾液酸的CGMP提供。此外，例如，可用于本發(fā)明的嬰兒配方食品可配置為具有至少400毫克/升的唾液酸含量和13到15克/升的總蛋白質(zhì)含量，其中總蛋白質(zhì)含量的不多于15wt。/。由具有增高濃度的唾液酸的CGMP提供。可用于本發(fā)明的增補(bǔ)有酪蛋白糖巨肽的配方食品可以與任何其它的市售嬰兒配方食品相同的方式被使用。其可以生產(chǎn)為粉末形式，用于之后與液體重新構(gòu)建，或者其可制備為液體形式。配方食品應(yīng)當(dāng)以與任何其它類似產(chǎn)品相同的方式進(jìn)行包裝、儲存、處置和分配，并且通常以相同的方式被使用。以下實(shí)施例描述了本發(fā)明的示例性實(shí)施方案。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，基于說明書或本文公開的本發(fā)明實(shí)踐，在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)的其它實(shí)施方案是顯而易見的。說明書以及實(shí)施例僅僅是示例性的，本發(fā)明的范圍和精神僅僅由權(quán)利要求闡述。在實(shí)施例中，除非另有說明，所有的百分比為重量對重量的百分比。參者例1.本參考例說明了在可供本發(fā)明使用的適于添加唾液酸的市售嬰兒配方食品中的營養(yǎng)組分。表l:嬰兒配方食品(含鐵EnfamilLipil)的營養(yǎng)信息<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>該特定的配方食品的成分為降低濃度的(reduced)礦物乳清，脫脂乳，植物油(棕櫚油精，大豆油，椰子油，和高油酸向日葵油)，乳糖，以及低于1%:高山被孢霉油(Mortierellaalpineoil),隱曱藻油(crypthecodiniumcohniioil)，維生素A棕櫚酸酯，維生素D3,維生素E乙酸酯，維生素K1,鹽酸硫胺素，鹽酸維生素B6，維生素B12,煙酰胺，葉酸，泛酸輛，生物素，抗壞血酸鈉，肌醇，氯化釣，磷酸鈣，硫酸亞鐵，硫酸鋅，硫酸錳，硫酸銅，氯化鈉，枸櫞酸鈉，枸櫞酸鉀，氬氧化鉀，亞硒酸鈉，?；撬幔丝嗨?腺苷5'-—磷酸，胞苷5'-—磷酸，鳥苷5'-—磷酸二鈉，尿苷5'-—磷酸二鈉)。為了使用該特定配方食品來實(shí)踐本發(fā)明，有必要向配方食品中添加例如足夠?yàn)楸?中所述的組成提供約250毫克/升到約"00毫克/升唾液酸的量的酪蛋白糖巨肽。這一唾液酸的添加量將作為蛋白質(zhì)總量的一部分(每100卡路里約2.1克的總蛋白質(zhì))。實(shí)施例1.本實(shí)施例說明了用于總唾液酸含量為約250毫克/升的特定的蛋白質(zhì)源組合。表2所列成分將用于替換表1所述的配方食品中的蛋白質(zhì)組表2:蛋白質(zhì)源組成A<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注解:a.表中的"SA"指唾液酸。b.CGMP指酪蛋白糖巨肽。實(shí)施例3.本實(shí)施例說明了用于總唾液酸含量為約600毫克/升的特定的蛋白質(zhì)源組合。表4所列成分將用于替換表1所述的配方食品中的蛋白質(zhì)組表4:蛋白質(zhì)源組成B<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注解:a.表中的"SA"指唾液酸。b.CGMP指酪蛋白糖巨肽。實(shí)施例4.表5說明了具有的總唾液酸含量為約250mg/L的嬰兒配方食品的全面營養(yǎng)配方的例子。表5:示例性的含唾液酸的嬰兒配方食品組成<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表6和表7表示在表5中所述的配方食品中的特定組分的含量，以1)重量對重量百分比，2)重量對體積百分比，和3)卡路里百分比表示。該特定配方食品的比重為1.0310986。表6:嬰兒配方食品組成<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表7:嬰兒配方食品熱量分布<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>實(shí)施例5.表8說明實(shí)施例4表示的配方食品每100卡路里以及每100毫升配方食品的營養(yǎng)含量。表8:嬰兒配方食品的營養(yǎng)含量<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>注解:核苷酸和相應(yīng)核苷的總數(shù)以核苷酸重量表示。參者例2.本參考例說明具有增高濃度的唾液酸的CGMP產(chǎn)品的生產(chǎn)。使用陰離子色譜法分級分離GMP富集的乳酪乳清級分，得到唾液酸增高的級分。該產(chǎn)品的氨基酸組成類似于目前市售的GMP(購自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLimited，Tatuanui,Morrinsville,NewZealand)的氨基酸組成，但是含有的唾液酸含量是目前可獲得的GMP產(chǎn)品的1.5-3倍。如果需要，唾液酸增高的級分可以通過例如電滲析進(jìn)行脫鹽處理，然后千燥，得到干燥粉末產(chǎn)品，然后其可用于引入到液體或干燥的嬰兒配方食品混合物。該產(chǎn)品是高唾液酸CGMP并且從本申請的申請日起可購自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLimited,產(chǎn)品名稱為X4738、X4739、X4740和X4741。這些物質(zhì)的蛋白質(zhì)含量、唾液酸含量和氨基酸組成在表9中描述。表9:四種高唾液酸CGMP產(chǎn)品例子的氨基酸組成和唾液酸含量。<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>參者例3.本參考例說明具有增高濃度的唾液酸和降低濃度的蘇氨酸的CGMP產(chǎn)品的生產(chǎn)。富集GMP的乳酪乳清級分經(jīng)歷部分蛋白水解然后使用陰離子色譜分離法進(jìn)行分級分離，得到的級分具有增高的唾液酸含量和降低的蘇氨酸含量。該產(chǎn)品含有的唾液酸含量是目前可獲得的GMP產(chǎn)品的1.5到3倍，但是蘇氨酸含量減少到起始GMP物質(zhì)的約四分之一。如果需要，唾液酸增高的低蘇氨酸級分可以通過例如電滲析進(jìn)行脫鹽處理，并可進(jìn)行干燥，得到干燥粉末產(chǎn)品，然后其用于引入到液體或干燥的嬰兒配方混合物。該產(chǎn)品為具有低蘇氨酸含量的高唾液酸CGMP并JU人本申i會的申i會日起可以獲自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLimited,Tatuanui，Morrisnville,NewZealand,產(chǎn)品名稱為W4733。該物質(zhì)的蛋白質(zhì)含量、唾液酸含量和氨基酸組成在表10中描述。表10:具有低蘇氨酸含量的高唾液酸CGMP的氨基酸組成和唾液<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>氨基酸水平用每16克氮的氨基酸克數(shù)表示CGMP粉末是購自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLtd.的糖巨肽ED乳清粉末是市售的電滲析乳清粉末樣品W4731、W4733和W4735是購自TatuaCo-OperativeDairyCompanyLimited,Tatuanui,Morrinsville,NewZealand的具有〗氐蘇氛酸含量的高唾液酸CGMP值得注意的是，該新產(chǎn)品的蘇氨酸濃度是市售CGMP的約四分之一。因此，可以相信，在嬰兒配方食品中使用具有低蘇氨酸含量的高唾液酸CGMP可以提供這樣的配方食品，該配方食品在約14克蛋白質(zhì)/升的正常且可取的蛋白質(zhì)濃度下具有高水平的唾液酸，還可以提供合乎需要的氨基酸組成和低水平的蘇氨酸。實(shí)施例6.本實(shí)施例說明在嬰兒配方食品中使用具有增高濃度的唾液酸的CGMP級分。具有增高濃度的唾液酸的CGMP產(chǎn)品在嬰兒配方食品中可與乳清粉末或常規(guī)的CGMP粉末相同的方式用作蛋白質(zhì)源。例如，表ll表示其中蛋白質(zhì)內(nèi)容物由常規(guī)來源提供的嬰兒配方食品中可預(yù)期的唾液酸含量。為了避免出現(xiàn)蛋白質(zhì)的氨基酸組成的不適當(dāng)?shù)钠?由合乎需要的嬰兒用標(biāo)準(zhǔn)氨基酸組成造成)，限制了CGMP粉末的使用量。表11:具有由常規(guī)來源提供的蛋白質(zhì)的嬰兒配方食品的唾液酸含量<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>在該配方食品的具有增高濃度的唾液酸的CGMP產(chǎn)品替代。表12表明，當(dāng)這樣作時，配方食品的唾液酸含量超過兩倍并且不進(jìn)一步破壞蛋白質(zhì)的氨基酸組成。表12:具有由常規(guī)來源加上具有增高濃度的唾液酸的CGMP產(chǎn)提供的蛋白質(zhì)的嬰兒配方食品的唾液酸含量<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>如果具有增高濃度的唾液酸的CGMP粉末以上述濃度的兩倍使用并以犧牲脫脂奶并分為代價時，配方食品的唾液酸含量可以增加到如表13所示的濃度。表13:具有由常規(guī)來源加上具有增高濃度的唾液酸的CGMP產(chǎn)品提供的蛋白質(zhì)的嬰兒配方食品的唾液酸含量<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>實(shí)施例7.本實(shí)施例說明了含有酪蛋白糖巨肽的食物對小豬的學(xué)習(xí)行為和記憶行為的效力。方法動物在為期20個月內(nèi)，從商業(yè)豬場購買3日齡、重達(dá)1.5到2.4kg、來自14個不同窩的雄性馴養(yǎng)小豬(Susscrofa)。他們根據(jù)重量分組并隨機(jī)經(jīng)歷4種試驗(yàn)中的一種。在控溫室內(nèi)，根據(jù)試驗(yàn)，將小豬成對圈養(yǎng)在具有混凝土地面的金屬圍欄內(nèi)。圏養(yǎng)圍欄內(nèi)有"休息處"(用毛巾覆蓋的橡膠輪胎)、加熱燈和相同的塑料玩具。鼓勵小豬使用圍欄的遠(yuǎn)端作為廁所并且每天清潔圍欄。燈保持12小時照明(8am到8pm)/黑暗(8pm到8am)的循環(huán)。CGMP增補(bǔ)含有60mg/g唾液酸的酪蛋白糖巨肽(CGMP)由TatuaDairyCooperative(Morrinsville,NewZealand)供應(yīng)并以指定濃度一皮混入小豬的乳代用品WombarooFoodProducts(GlenOsmond,Australia)中。最終乳中唾液酸的量根據(jù)組別有所不同77毫克/升(第一組，未添加CGMP的對照組)，250毫克/升(第二組，低劑量)，600毫克/升(第三組，中等劑量)和842毫克/升(第四組，最高劑量)。這些水平分別代表攝取量為25、71、171和240毫克/千克體重/天。代用品配制為使得無論CGMP的添加量如何，總蛋白質(zhì)攝取仍保持相同。為了保持正常的生長速率，小豬在研究的前兩周內(nèi)接受285毫升乳/千克，在其余周內(nèi)接受230毫升乳/千克。喂食時間為8:00、13:00、18:00和22:30，夜間額外供應(yīng)50毫升乳，每天記錄乳攝取和給用情況。學(xué)習(xí)能力和記憶表現(xiàn)的評價使用8臂放射狀迷宮(圖1和圖2)在23天齡時開始正式的學(xué)習(xí)測試。迷宮是與圏養(yǎng)圍欄相鄰、學(xué)習(xí)面積為4.2mx4.4m、為特制的木結(jié)構(gòu)。在高處安裝攝影機(jī)記錄學(xué)習(xí)和記憶測試。為了減少壓力，允許小豬成對在正式測試開始前的一天探查該迷宮。進(jìn)行了兩種學(xué)習(xí)測試任務(wù)1和任務(wù)2。兩種測試都在1個臂內(nèi)具有可接觸的(accessible)乳，在其余的7個臂內(nèi)具有不能接觸的(inaccessible)乳，因此迷宮的所有8個臂都給出相同的嗅覺信號。在兩種測試中，在臂內(nèi)具有可接觸乳的門上隨機(jī)布置由三個黑點(diǎn)組成的目視標(biāo)志(圖3)。在任務(wù)1(容易的任務(wù))中，在其余的7個門上布置1個黑點(diǎn)。在任務(wù)2(較難的任務(wù))中，在其余的7個門上布置2個黑點(diǎn)。所有的小豬在迷宮逐一地經(jīng)歷測試。在5天內(nèi)進(jìn)行了任務(wù)1的40次試驗(yàn)(每天8次試驗(yàn))，在6天內(nèi)進(jìn)行了任務(wù)2的40次試驗(yàn)。學(xué)習(xí)速度的評價通過成功地學(xué)習(xí)目浮見標(biāo)志的試驗(yàn)次數(shù)和在每次試驗(yàn)中在找到可接觸乳臂的過程中錯誤(錯誤的門)和成功(正確的門)的次數(shù)來確定。每一次小豬進(jìn)入錯誤的門或?qū)⑵湔麄€頭通過錯誤的門被記錄為"錯誤"。只有當(dāng)小豬進(jìn)入正確的門并找到可接觸的乳時才記錄為"成功"。學(xué)會目視標(biāo)志的標(biāo)準(zhǔn)是在3次連續(xù)試驗(yàn)中最大錯誤數(shù)是1。在完成任務(wù)1試驗(yàn)和任務(wù)2試驗(yàn)后兩天，相同的任務(wù)作為"記憶測試"僅進(jìn)行一次試驗(yàn)。所有的測試由二名知曉唾液酸攝取量的經(jīng)過訓(xùn)練的工作人員進(jìn)行，但是結(jié)果在以后通過獨(dú)立的對錄像材料的分析得以確證。壓力評價因?yàn)閴毫捎绊憣W(xué)習(xí)和記憶，使用市售的試劑盒(Coat-A-CountCortisol,診斷產(chǎn)品，Doncaster,Australia)從第7天開始每隔一周測量早晨的血液氫化可的松濃度。試驗(yàn)之間(Inter-assay)和試驗(yàn)之內(nèi)(intra-assay)的變量分別為9%和12%。神經(jīng)節(jié)苦脂結(jié)合唾液酸和蛋白質(zhì)結(jié)合唾液酸的分析在第34或35天，小豬用硫噴妥鈉注射(50毫克/千克)實(shí)施安樂死。從大腦額皮層收集腦組織并在-8(TC下儲存直到分析之前。神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合唾液酸和蛋白質(zhì)結(jié)合唾液酸的確定分別使用公開的方法進(jìn)行(參見Mahal,同處.)。所有的樣品一式兩4分進(jìn)4亍分析并且在每份中的唾液酸的最終濃度用pg/g濕組織表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用采用Cox回歸的Kaplan-Meier存活分析法比較學(xué)習(xí)速度(學(xué)習(xí)目視標(biāo)志的試驗(yàn)次數(shù))的差異，以檢查可能影響學(xué)習(xí)速度的可能的協(xié)變量。使用一般線性模型(UnivariateANOVA)比較平均值(有或者沒有協(xié)變量)。使用Pearson's相關(guān)法檢查錯誤次數(shù)、成功次數(shù)、體重和記憶表現(xiàn)之間的相互關(guān)系。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用用于Windows11Inc，Chicago的SPSS完成。使用的顯箸水平為0.05。結(jié)果學(xué)習(xí)速度在容易的任務(wù)和較困難的任務(wù)中，增補(bǔ)了唾液酸的組學(xué)習(xí)目視標(biāo)志較對照組快(Kaplan-Meier,任務(wù)1中P-0.0014,任務(wù)2中P=0.0177,參見圖4和圖5)。在任務(wù)1中，在40次試驗(yàn)內(nèi)，對照組只有45%達(dá)標(biāo)，而第二組學(xué)習(xí)表現(xiàn)最好(40次試驗(yàn)內(nèi)100%學(xué)會)，然后是第4組(80%)和第3組(70%)。在任務(wù)2中，存在劑量-應(yīng)答關(guān)系(P=0.0177),第4組內(nèi)的所有小豬在30次試驗(yàn)內(nèi)達(dá)標(biāo)。當(dāng)在試驗(yàn)時對體重差異進(jìn)行調(diào)整時組間差異仍顯箸(P>0.05)。學(xué)習(xí)的協(xié)變量可能是小豬使用了其在任務(wù)1中獲得的信息來幫助其在任務(wù)2中學(xué)習(xí)目視標(biāo)志。因此，我們使用任務(wù)1中的錯誤和成功的總次數(shù)作為分析任務(wù)2中的學(xué)習(xí)速度的協(xié)變量。調(diào)整后的組間差異保持高顯著性(P=0.002錯誤作為協(xié)變量和P=0.004成功作為協(xié)變量)，并且在任務(wù)2中的學(xué)習(xí)速度的劑量-反應(yīng)等級未改變。如果考慮任務(wù)l中所有40次試驗(yàn)或僅僅是后20次試驗(yàn)時，研究結(jié)果相似。任務(wù)1的21-40試驗(yàn)中的錯誤次數(shù)還存在顯箸的組間差異。這在使用或不使用1-10試驗(yàn)中的錯誤(P=0.016)作為協(xié)變量時也是如此。對照組的錯誤次數(shù)顯著高于第2組(PK).005)和第4組(P-0.006),但是僅僅稍微高于第3組(P-0.06)。在對任務(wù)2的類似分析中，協(xié)變量是顯著的，但是各組無顯著差別(有或者沒有協(xié)變量)(P〉0.05)(圖6)。使用在所有測試中的總錯誤次數(shù)進(jìn)行的類似分析揭示了在試驗(yàn)組(組合的第2、3和4組)和對照組之間存在顯著差異(P-0.009),在任務(wù)2中組間差異微小(P=0.048)。記憶測試對能達(dá)到學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)的小豬評價了他們在48小時后記住目視標(biāo)志的能力。任務(wù)2的組間總差異是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的(P=0.036),但任務(wù)1并非如此(P=0.165，圖7(A))。在任一任務(wù)中都不存在劑量-應(yīng)答效果。在任務(wù)2中，第3組和對照組大約相當(dāng)(圖7(B))。合并第2、3和4組作為試驗(yàn)組，與對照組(平均值=2.4,p:0.036)相比，有少35%的錯誤次數(shù)(平均值=1.5)。不令人驚訝地是，在所有小豬中，在學(xué)習(xí)期間的錯誤和成功的次數(shù)顯著影響記憶表現(xiàn)。因此，在學(xué)習(xí)期間內(nèi)更高的錯誤次數(shù)預(yù)示了在記憶測試中更高的錯誤次數(shù)(任務(wù)1中P=0.03,任務(wù)2中P=0.029,2-尾Spearman's相關(guān)法)。類似地，在任務(wù)1中，在學(xué)習(xí)期間內(nèi)更高的成功次數(shù)與在記憶測試中更低的錯誤次數(shù)顯著相關(guān)(P=0.007)，然而任務(wù)2并非如此(P=0.20)。體重、體重增加速率和學(xué)習(xí)速度不顯著影響記憶測試中的表現(xiàn)(P〉0.05)。血漿氫^j可的+^在為期5周的研究中，各組中的平均氫化可的松濃度如圖8(A)所示。在所有的組中，第一周和所有其它周之間的差異顯著不同(第1周對第2、3、4和5周；分別為P二0.031、0.015、0.001和0.001)。從第2周開始，所有小豬的氫化可的松濃度平均遞減，但是不顯著(P>0.05)。當(dāng)所有的增補(bǔ)組合并成一個組時，在試驗(yàn)組和對照組之間的差異不顯著(P>0.05,圖8(B))。在第2周，第2組和第3組之間的差異是顯著的(P=0.044)。當(dāng)血漿氫化可的松濃度用作學(xué)習(xí)過程中的協(xié)變量，未觀察到顯著差異(P〉0.05)。腦唾液酸濃度小豬腦額皮層的大部分唾液酸(86%)與神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合，小部分(~13%)與糖蛋白質(zhì)結(jié)合，游離形式小于2%。這可與由Brunngraber,E.G.等人，BrainRes.，38:151-162(1972)和Mahal,L.K.等人在J.Biolo.Chem.,277:9255-9261(2002)的先前/>開的工作相差不大。在腦蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸和CGMP增補(bǔ)濃度之間存在顯著的劑量-應(yīng)答關(guān)系，例如，第4組含有最大量，之后是第3、2和1組。第l組的濃度顯著低于第4組(P=0.001)和第3組(P=0.001)，但不低于第2組(P=0.126)。平均來說，與對照組相比，在CGMP增補(bǔ)組中的灰質(zhì)中蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸高6-10%(P=0.000,表14)。表14:在腦額皮層中隨CGMP增補(bǔ)水平不同，神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合唾液酸、蛋白質(zhì)結(jié)合唾液酸和游離唾液酸的平均水平。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>注解:a."n"是每組的小豬數(shù)。神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的唾液酸的平均濃度也遵循劑量-反應(yīng)等級(相對于對照組，第4、3和2組分別高13%、11%和8%),但是差異沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(分別是P-0.089、0.124和0.299,表14)。當(dāng)所有的CGMP增補(bǔ)組合并成一個組時，在試驗(yàn)組和對照組之間的差異勉強(qiáng)顯著(P-0.07,圖9)。神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的唾液酸的個體間差異大于蛋白質(zhì)結(jié)合唾液酸的個體間差異(神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的唾液酸的CV=~5%,蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的CV=2%)。相同的現(xiàn)象已在由Mahal,L.K.,同處.報(bào)導(dǎo)的人嬰兒腦研究中所有報(bào)道。合并的CGMP試驗(yàn)組相對于對照組，總唾液酸濃度(神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的唾液酸濃度+蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸濃度)稍微高一些(P=0.051),但是游離唾液酸并非如此(P=0.58,圖9)。腦唾液酸與學(xué)習(xí)表現(xiàn)的相關(guān)性在腦額皮層中更高濃度的蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸、神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的唾液酸和總唾液酸與任務(wù)1和任務(wù)2二者中的更快學(xué)習(xí)表現(xiàn)有關(guān)。(參見圖10(A)，圖10(B)，圖11(A)和圖11(B))。無論是參數(shù)相關(guān)性或非參數(shù)相關(guān)性都未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(參見所有的圖10和圖11)。在對記憶任務(wù)的類似分析中，在任務(wù)1和任務(wù)2中都發(fā)現(xiàn)了負(fù)相關(guān)(高唾液酸含量，較少錯誤次數(shù))，但是該結(jié)果也未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P〉0.05)，除了任務(wù)1第4組中的蛋白質(zhì)結(jié)合形式之外(P=0.045,圖12)。在任務(wù)1中的總成功數(shù)和神經(jīng)節(jié)苷脂結(jié)合的唾液酸之間存在顯著的正相關(guān)(P=0.045)，但是任務(wù)2中并非如此(p<0.05)。體重增力口各組中的平均(±SE)起始體重相同(2.1±0.04kg)，動物以類似的速率增加體重(圖13)。盡管在研究的結(jié)尾，對照組的體重增加稍微高于其它組，但是組間的體重增加速率(克/天)沒有顯著差異(P=0.503)。在本說明書中引用的所有參考文獻(xiàn)包括，但不限于，所有的論文、出版物、專利、專利申請、演講、課本、報(bào)告、手稿、小冊子、書本、國際互聯(lián)網(wǎng)址、雜志文章、期刊，等等，都以全文并入本文作為參考。對本文中引用的參考文獻(xiàn)的討論都只是概括它們的作者的論斷而不是對任何參考文獻(xiàn)構(gòu)成相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)的承認(rèn)。本申請人保留挑戰(zhàn)引用的參考文獻(xiàn)的準(zhǔn)確性和相關(guān)性的權(quán)利。綜上所述，可以獲得本發(fā)明的若千優(yōu)點(diǎn)并獲得其它有利的結(jié)果。脫離本發(fā)明的范圍，因此，在說明書中所包含的和在附圖中所顯示的所有內(nèi)容應(yīng)當(dāng)解釋為是說明性的而非限制性的。另外，很清楚，不同的實(shí)施方案的各個方面可完全或部分地互換。權(quán)利要求1.一種改善需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的方法，該方法包括對哺乳動物給用足夠改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的量酪蛋白糖巨肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中哺乳動物處在約1天齡到約4歲之間。3.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中哺乳動物是新生的哺乳動物。4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中當(dāng)哺乳動物的營養(yǎng)需要的至少一部分由含有低于約100mg/L唾液酸的配方食品提供時，顯示出對改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的需要。5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中當(dāng)哺乳動物營養(yǎng)需要的基本上全部由給用含有低于約100mg/L唾液酸的配方食品提供時，顯示出對改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的需要。6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中配方食品中包含的大部分蛋白質(zhì)是大豆蛋白質(zhì)或牛乳蛋白質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中配方食品中包含的蛋白質(zhì)的至少約75wt。/。是大豆蛋白質(zhì)或牛乳蛋白質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中配方食品中包含的基本上全部的蛋白質(zhì)是大豆蛋白質(zhì)或牛乳蛋白質(zhì)。9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中當(dāng)哺乳動物的營養(yǎng)需要通過唾液酸的提供量低于從母乳喂養(yǎng)中通常獲得的量的食物供給時，顯示出對改善學(xué)習(xí)和/或記憶行為的需要。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中唾液酸的提供量低于從母乳喂養(yǎng)中通常獲得的量的食物包括唾液酸含量低于約100mg/L的液體配方食口C,11.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中唾液酸的提供量低于從母乳喂養(yǎng)中通常獲得的量的食物包括唾液酸含量低于約200mg/L的液體配方食口口o12.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中配方食品的給用包括腸給用。13.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中酪蛋白糖巨肽被引入到作為嬰兒配方食品的配方食品中。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中配方食品是包含碳水化合物、脂類和蛋白質(zhì)的營養(yǎng)全面的嬰兒配方食品。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中蛋白質(zhì)包括選自牛乳蛋白質(zhì)、大豆蛋白質(zhì)及其混合物的物質(zhì)。16.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中酪蛋白糖巨肽以足夠向哺乳動物提供至少約100mg/kg/天的唾液酸的量被給用。17.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中酪蛋白糖巨肽以足夠向哺乳動物提供至少約200mg/kg/天的唾液酸的量被給用。18.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中配方食品包括唾液酸濃度為至少約200毫克/升的液體。19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中配方食品包括唾液酸濃度為至少約300毫克/升的液體。20.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，其中配方食品包括唾液酸濃度為至少約600毫克/升的液體。21.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，包括總蛋白質(zhì)含量為12到16克/升且其中不多于40wt%由酪蛋白糖巨肽提供的配方食品。22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中配方食品包括總蛋白質(zhì)含量為13到15克/升且其中不多于30wt。/。由酪蛋白糖巨肽提供。23.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中酪蛋白糖巨肽包括具有增高濃度的唾液酸的酪蛋白糖巨肽。24.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中具有增高濃度的唾液酸的酪蛋白糖巨肽包括具有降低濃度的蘇氨酸的高唾液酸酪蛋白糖巨肽。25.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中酪蛋白糖巨肽被引入到總蛋白質(zhì)含量為13到15克/升且其中不多于30wt。/o由具有增高濃度的唾液酸且蘇氨酸含量不超過10克/16克氮的酪蛋白糖巨肽提供的配方食品中。26.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中酪蛋白糖巨肽被引入到總蛋白質(zhì)含量為約14克/升且其中不超過4wt。/。為蘇氨酸并且唾液酸含量為至少400毫克/升的配方食品中。27.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括在給用酪蛋白糖巨肽后檢測哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為。28.—種增加哺乳動物的腦蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的方法，該方法包括對哺乳動物給用足夠增加哺乳動物腦蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸的量的酪蛋白質(zhì)糖巨肽。29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中腦蛋白質(zhì)結(jié)合的唾液酸增加至少約5%的量。30.—種改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶4亍為的方法，該方法包4舌確定是否哺乳動物是需要改善學(xué)習(xí)和/或記憶的哺乳動物；并且，如果是這樣的話，蛋白糖巨肽。全文摘要本發(fā)明涉及一種改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的方法，該方法包括對哺乳動物給用足夠改善哺乳動物的學(xué)習(xí)和/或記憶行為的量的酪蛋白糖巨肽。文檔編號A61P25/28GK101287486SQ200680023512公開日2008年10月15日申請日期2006年3月28日優(yōu)先權(quán)日2005年4月29日發(fā)明者B·王,J·布蘭德-米勒,R·J·麥馬洪,S·C·拉姆西申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司;悉尼大學(xué)