專(zhuān)利名稱(chēng)：在影響呼吸道的炎癥病狀中氣道施用活化的蛋白c的制作方法
在影響呼吸道的炎癥病狀中氣道施用活化的蛋白c在申請(qǐng)中或在當(dāng)前申請(qǐng)中引用的所有專(zhuān)利和非專(zhuān)利文獻(xiàn)也通過(guò)整體引 用而將它們?cè)诖艘?。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明提供了阻止兒童和成年人與血纖蛋白沉積相關(guān)的任何疾病中呼 吸道(特別是肺泡和/或細(xì)支氣管)空隙中急性、復(fù)發(fā)性和慢性血纖蛋白沉積的方法。這些疾病包括炎癥性肺部疾病(例如急性肺損傷(acute lung injury, ALI)),其可與直接或間接的肺部創(chuàng)傷有關(guān)，例如，在呼吸器治 療之后(呼吸器i秀導(dǎo)的月市損傷(ventilatory Induced Lung Injury, VILI)); 炎癥病況，例如自體免疫疾病、胰腺炎、吸入性肺炎；有毒煙霧的吸入； 急性呼吸窘迫綜合征(ARDS),其是急性肺損傷的更嚴(yán)重的表現(xiàn)；感染， 如敗血癥、嚴(yán)重的敗血癥和膿毒性休克；任何原因的肺炎；急性和慢性支 氣管肺泡疾病，纖維化性肺泡炎，細(xì)支氣管炎，嚢性纖維化以及具有嚴(yán)重 氣道高反應(yīng)性的疾病，例如支氣管哮喘和藥物誘發(fā)的肺功能不全，例如， 在化療如博來(lái)霉素化療之后。在本發(fā)明的方法中，抗凝血?jiǎng)├缁罨牡?白C通過(guò)氣道施用向氣管內(nèi)、支氣管內(nèi)或肺泡腔施用，無(wú)論這些抗凝血?jiǎng)?是源自血漿還是通過(guò)重組DNA技術(shù)制備的。這些方法在臨床醫(yī)學(xué)、特別是 危重或重癥監(jiān)護(hù)醫(yī)學(xué)和呼吸醫(yī)學(xué)中是有用的。發(fā)明背景血纖蛋白在呼吸道的空隙、特別是肺泡和細(xì)支氣管空隙中的沉積是以 下病況的常見(jiàn)并發(fā)癥例如由創(chuàng)傷引起的全身性炎癥病狀，敗血癥，嚴(yán)重 敗血癥和膿毒性休克，藥物(例如，由于氨曱喋呤、博來(lái)霉素或西羅莫司) 誘發(fā)的ALI、 ARDS或肺炎(Amigues L, Klouche K， Massanet P, Gaillard N, Garrigue V, Beraud JJ， Mourad G. Sirolimus-associated acute respiratory distress syndrome in a renal transplant recipient. Transplant Proc. 2005;37:2830-1.),呼 p及器i秀導(dǎo)的月市損傷(VILI) ( Maclntyre NR. Current issues in mechanicalventilation for respiratory failure. Chest. 2005;128:561S-567S )和繼發(fā)于機(jī)械通 氣的肺部損傷(VILI (The Acute Respiratory Distress Syndrome Network: Ventilation with lower tidal volumes as compared with traditional tidal volumes for acute lung injury and the acute respiratory distress syndrome. N Engl J Med. 2000;342:1301-1308 )。這些病況引起凝結(jié)的全身激活，最終^I起血纖蛋白在血管內(nèi)和血管外 間隙(即肺泡和支氣管區(qū)室中)沉積。同時(shí)，炎癥性活化引起致炎細(xì)胞因 子，例如肺瘤壞死因子a ( 丁NF-a)、白細(xì)胞介素l-卩(IL-1 |3)、白細(xì)月包介 素6 (IL-6)和白細(xì)胞介素8 (IL-8)從活化的炎性細(xì)胞釋放。血管內(nèi)血纖 蛋白沉積和肺部空隙中致炎細(xì)胞因子的釋放引起組織損傷，所述組織損傷 的特征是肺泡毛細(xì)血管膜的通透性提高，伴有彌散性肺泡損傷以及富含血 漿蛋白(包括凝血系統(tǒng)成分)的水腫液體在肺泡中累積，以及降低表面活 性劑的產(chǎn)生。結(jié)果，在肺泡管和空隙中形成富含血纖蛋白的透明膜。在后 期，發(fā)生嗜中性粒細(xì)胞和其他炎性細(xì)胞的大量浸潤(rùn)，隨后是滲出物的結(jié)構(gòu) 化和纖維化。Bellingan GJ, 2002: "The pathogenesis of ALI/ARDS", Thorax 57:540-546已經(jīng)描述和綜述了這種病理順序。對(duì)應(yīng)于這種病理的臨床病況被 稱(chēng)為ALI或ARDS,不同之處僅在于A(yíng)RDS更嚴(yán)重、并且特征是更嚴(yán)重的 低氧血癥，使得動(dòng)脈Po2與吸入氧氣分率的比例(Pa02/FI02) S200 mmHg。 ALI和ARDS作為全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)的一部分發(fā)生，其可以由于感染性或非感染性原因引起， 例如胰腺炎或直接或間接肺部創(chuàng)傷；當(dāng)SIRS的原因是感染性的時(shí)，它稱(chēng)為 敗血癥；當(dāng)與器官功能障礙相關(guān)聯(lián)時(shí)敗血癥凈皮定義為嚴(yán)重?cái)⊙Y；當(dāng)與顯 著低血壓相關(guān)時(shí)敗血癥被定義為膿毒性休克。相似順序的病理事件也在由于各種原因(包括病毒、細(xì)菌和真菌4某介 物)導(dǎo)致的月巿炎(例如月市孢子蟲(chóng)性月市炎(Pneumocystis carinii pneumonia, PCP))、細(xì)支氣管炎(例如繼發(fā)于病毒性肺炎和/或肺移植物抗宿主疾病 (GVHD))中發(fā)生。在受炎性過(guò)程影響的那些肺區(qū)域中也引起肺泡滲出物 和血纖蛋白沉積。已經(jīng)指出的是(例如，Levi M et al.， 2003: "Bronchoalveolar coagulation and fibrinolysis in endotoxemia and pneumonia", Crit Care Med 31:S238-S242)，肺部對(duì)于敗血癥的血纖蛋白沉積特別敏感，比其他器官顯示出更大的程度的這一現(xiàn)象。廣泛局部血纖蛋白沉積提示可能涉及凝結(jié)的 局部活化或局部生理調(diào)節(jié)系統(tǒng)被擾動(dòng)。在支氣管肺泡區(qū)室中，在肺泡巨噬細(xì)胞和在上皮細(xì)胞中局部表達(dá)的組織因子(TF)似乎在凝結(jié)起始中起到關(guān) 鍵作用，而抗凝血酶和蛋白c系統(tǒng)導(dǎo)致的生理性抗凝作用不起作用。已經(jīng) 記載，在患有由于敗血病性和非敗血病性原因?qū)е碌腁LI/ARDS的患者中， 蛋白C系統(tǒng)^皮顯著地破壞，并有在A(yíng)LI/ARDS中存在蛋白C途徑的循環(huán)和 月t泡內(nèi)護(hù)L舌L的"i正才居(Ware LB et al., 2003: "Protein C and thrombomodulin in human acute lung injury", Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 285丄514-L521 )。同時(shí)，局部纖維蛋白溶解作用顯著抑制，即，在受損傷的肺中凝結(jié)被 局部上調(diào)，而纖維蛋白溶解作用活性被顯著降低。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是通過(guò)向氣道內(nèi)局部施用來(lái)應(yīng)用相關(guān)抗凝劑或能夠阻斷 凝結(jié)的局部起始的試劑，通過(guò)解決凝結(jié)系統(tǒng)的局部肺部活化和抗凝機(jī)制的 局部缺陷，來(lái)改進(jìn)ALI、 ARDS、肺炎和炎癥性肺部疾病的治療。通過(guò)這種 方式，可以在受影響的氣道中達(dá)到這些試劑的高局部濃度，從而與同一試 劑的全身性(靜脈內(nèi))施用相比，血管外血纖蛋白沉積可以被更有效地抑 制，但同時(shí)避免或降低了全身性副作用。這些試劑的氣道施用可以單獨(dú)給 予，或作為對(duì)同一試劑或其他試劑的靜脈內(nèi)施用的補(bǔ)充來(lái)給予。由于凝結(jié) 和炎癥之間的"串音，，，這些試劑的氣道施用預(yù)期也通過(guò)降低局部凝血酶活化本發(fā)明的 一個(gè)方面涉及在患有引起這種血纖蛋白沉積的炎癥性和/或傳 染性肺部狀況的人受試者中降低氣道中、特別是在肺泡或支氣管肺泡間隙 中血管外血纖蛋白沉積的方法，所述方法包括經(jīng)由氣道施用無(wú)論是從血漿 純化的還是通過(guò)DNA重組技術(shù)獲得的抗凝劑。發(fā)明的詳細(xì)"i兌明本發(fā)明涉及通過(guò)任何適合的方法，向包括成年人和兒童的人受試者氣 道施用，無(wú)論怎樣制備的純化或濃縮的人活化的蛋白C( activated protein C， APC)或其衍生物，包括但不限于，氣管內(nèi)的、支氣管內(nèi)的或肺泡內(nèi)的施用，5來(lái)防止或降低氣道、特別是肺泡或支氣管肺泡空隙中的血管外血纖蛋白沉 積。這種血纖蛋白沉積可能由急性狀況、復(fù)發(fā)性狀況或慢性狀況引起，可 以由于各種原因引起，包括但不限于直接或間接的創(chuàng)傷、炎癥或感染，由 于藥物誘發(fā)的氣道和肺間質(zhì)中血纖蛋白沉積、先天疾病如嚢性纖維化，或由于這些可能的原因的組合。例如，據(jù)信本發(fā)明的方法在治療以ALI或 ARDS為特征的肺泡血纖蛋白沉積中是有用的，所述ALI或ARDS在大部 分患有不同程度的敗血癥的患者中、在患有嚴(yán)重的肺炎、梗阻性細(xì)支氣管 炎和纖維化肺泡炎的患者中出現(xiàn)。定義親和性在受體和它們的配體之間，例如抗體和它的抗原之間的結(jié)合 強(qiáng)度。氨基酸殘基存在于多肽鏈中的氨基酸的部分，在所述多肽鏈中氨基 酸與其他氨基酸通過(guò)肽(酰胺)鍵連接。在此描述的氨基酸殘基優(yōu)選的是"L" 同分異構(gòu)形式。然而，氨基酸涵蓋每種氨基酸，例如L-氨基酸、D-氨基酸、 a-氨基酸、(3-氨基、i氨基酸、天然氨基酸和合成氨基酸等等，只要多肽保 持了期望的功能性質(zhì)。進(jìn)一步包括的是已經(jīng)被修飾的天然或合成氨基酸。 NH2是指存在于多肽的氨基末端的游離氨基。COOH是指存在于多肽的羧 基末端的游離羧基。在此使用氨基酸殘基的標(biāo)準(zhǔn)多肽縮寫(xiě)。要注意的是，在此通過(guò)公式表示的所有氨基酸殘基序列在常規(guī)的氨基 末端到羧基末端的方向上具有從左到右的方向。此外，要注意的是，在氨 基酸殘基序列開(kāi)始或末端的破折號(hào)代表與具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的其 它序列之間的肽鍵，或與氨基末端基團(tuán)如NH2或乙酰基、或與羧基末端基 團(tuán)如COOH之間的共價(jià)鍵。修飾的氨基酸其中其任意基團(tuán)被化學(xué)修飾的氨基酸。特別是，在a-氨基酸中a-碳原子處被化學(xué)修飾的修飾氨基酸是優(yōu)選的。多肽用語(yǔ)多肽是指包含氨基酸殘基的分子，所述氨基酸殘基在鄰近 氨基酸殘基之間不含有酰胺鍵之外的鍵。術(shù)語(yǔ)"肽"也相應(yīng)地被使用。APC分子本發(fā)明涉及一個(gè)或多個(gè)APC分子在制備用于局部治療急性和血管外肺部血纖蛋白沉積的藥物中的用途。在此使用術(shù)語(yǔ)"APC分子，，是指任何能夠結(jié)合于凝血因子Va和Villa并對(duì)它們進(jìn)行蛋白水解破壞、并能夠結(jié)合和中 和PAI-1 、和/或特異性結(jié)合蛋白C受體(內(nèi)皮蛋白C受體(endothelial protein C receptor), EPCR)的分子。分析用于本發(fā)明的APC分子的功能活性的方 》去包4舌由Gmber A, Griffin JH. Direct detection of activated protein C in blood from human subjects. Blood. 1992 May 1;79 (9) :2340-8和Strandberg K， Kjellberg M, Knebel R, Lilja H, Stenflo J. A sensitive immunochemical assay for measuring the concentration of the activated protein C-protein C inhibitor complex in plasma: use of a catcher antibody specific for the complexed/cleaved form of the inhibitor. Thromb Ha畫(huà)st. 2001 ;86 ( 2 ) :604-10.描述的那些。要理解的是，本發(fā)明中使用的APC分子的活性與天然APC相比其效力 可以較低或較高。APC是維生素K依賴(lài)性絲氨酸蛋白酶，是蛋白C的活化形式。APC具 有抗凝血?jiǎng)┖屠w溶酶原(profibrinolytic )性質(zhì)。人蛋白C是461個(gè)氨基酸 的多肽，其經(jīng)歷若干翻譯后修飾，產(chǎn)生活化的蛋白C。這些修飾包括1) 42個(gè)氨基酸的信號(hào)序列的裂解；2)賴(lài)氨酸和精氨酸殘基(位置156和157) 的裂解來(lái)產(chǎn)生2-鏈的無(wú)活性酶原(155氨基酸殘基的輕鏈經(jīng)由二疏鍵與262 氨基酸殘基的重鏈連接)；3 )位于氨基末端45個(gè)殘基(g/a-結(jié)構(gòu)域)內(nèi)的9 個(gè)谷氨酸殘基的維生素K依賴(lài)性羧化作用；以及4)在四個(gè)位點(diǎn)(一個(gè)在 輕鏈中，三個(gè)在重鏈中)上碳水化合物的附著。最后，2-鏈的酶原可以通過(guò) 除去重鏈N-末端處的十二肽來(lái)活化。本發(fā)明進(jìn)一步包括重組的或合成地或轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的人APC多肽的用 途。因而在一個(gè)實(shí)施方式中，所述APC分子是APC的同源物。意圖根據(jù)本發(fā)明施用的人活化的蛋白C包括天然發(fā)生的人活化的蛋白 C，或其生物學(xué)活性類(lèi)似物，無(wú)論是從血漿制備的還是重組地或轉(zhuǎn)基因地或 合成地產(chǎn)生的。重組的活化的蛋白C可以包括修飾(例如，氨基酸取代和/ 或缺失和/或異源氨基酸序列的添加)，其可以產(chǎn)生具有增強(qiáng)的生物活性的 類(lèi)似物。例如，APC可以使用真核細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)(例如，人腎臟293、HEPG-2、 LLC-MK2、 CHO或AV12細(xì)胞)、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因植物或體外系統(tǒng)來(lái) 產(chǎn)生。在這些系統(tǒng)中，蛋白可以作為無(wú)活性的前體產(chǎn)生，其在純化之后通 過(guò)凝血酶裂解來(lái)活化，并被配制用于施用。^:為選擇，APC可以通過(guò)蛋白C的活化形式的直接分泌來(lái)產(chǎn)生。產(chǎn)生、純化、活化和配制APC的細(xì)節(jié)是本領(lǐng)域已知的，例如，在美國(guó)專(zhuān)利NO. 6,156,734中描述了，通過(guò)完全引用將其合并在此。并且，在美國(guó) 專(zhuān)利NO. 4,981,952; 4,775,624和4,992,373中描述了可以用于這些方法的 APC基因和質(zhì)粒，通過(guò)引用將其合并在此?；罨牡鞍證也可以從商業(yè)來(lái) 源獲得。例如，可以用于本發(fā)明的APC的特定實(shí)例是由Eli Lilly and Company, 以XIGRIS (TM)(活化的重組人蛋白C)的名稱(chēng)生產(chǎn)的。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述APC分子是APC類(lèi)似物。 "APC類(lèi)似物"被定義為相對(duì)于A(yíng)PC具有一個(gè)或多個(gè)(例如，20個(gè)或更少， 例如17個(gè)或更少，例如15個(gè)或更少，例如13個(gè)或更少，例如11個(gè)或更 少，例如9個(gè)或更少，例如7個(gè)或更少，例如5個(gè)或更少，例如3個(gè)或更 少，例如2個(gè)或更少，例如1個(gè)或更少)的氨基酸取代、缺失、倒位或添 加的分子，并且可以包括D-氨基酸形式。WO 01/57193中也描述了 APC類(lèi)似物，包括從在SEQ ID NO: 1中含 有以下氨基酸取代中至少兩種的蛋白C類(lèi)似物產(chǎn)生的APC類(lèi)似物以及其藥 學(xué)上可接受的鹽位置10的His用Gln取代；位置11的Ser用Gly取代； 位置12的Ser用Lys取代；位置32的Gin用Glu取代；位置33的Asn用 Asp或Phe耳又代；以及位置194、 195、 228、 249、 254、 302、或316的氨 基酉臾用選自Ser、 Ala、 Thr、 His、 Lys、 Leu、 Arg、 Asn、 Asp、 Glu、 Gly牙口 Gin的氨基酸或其酰胺形式取代。本發(fā)明中使用的優(yōu)選的APC分子還包括APC的類(lèi)似物和其衍生物，在 所述APC類(lèi)似物中，在原始序列中不存在的一個(gè)或多個(gè)氨基酸被添加或缺 失。這些類(lèi)似物是，例如，在EP 0 946 715中描述的，其中蛋白CGla結(jié)構(gòu) 域被其他維生素K依賴(lài)性多肽，例如因子VII、因子X(jué)和凝血酶原的Gla 結(jié)構(gòu)域替代。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，APC類(lèi)似物與野生型蛋白相比展現(xiàn)了增 強(qiáng)的抗凝血?jiǎng)┗钚?。在?yōu)選的實(shí)施方式中，所述類(lèi)似物具有比野生型蛋白 更高的對(duì)其底物的結(jié)合親和性，所述底物例如FVa和FVIIIa。在又一個(gè)實(shí) 施方式中，與野生型蛋白相比，所述APC類(lèi)似物對(duì)其抑制物具有更低的結(jié) 合親和性，所述抑制物例如蛋白C抑制物、a-抗胰蛋白酶或纖溶酶原激活 物抑制物-1。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，APC類(lèi)似物展現(xiàn)了與野生型蛋白相比增強(qiáng)的纖溶酶原活性。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，與野生型蛋白相比， 所述類(lèi)似物具有對(duì)PAI-1的更高的結(jié)合親和性。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述APC類(lèi)似物能夠抑制PAI-1。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所迷修飾引起APC 類(lèi)似物的穩(wěn)定化。這種類(lèi)似物例如在專(zhuān)利申請(qǐng)WO 99/20767和WO 03/073980中描述的，通過(guò)完全引用將它們合并在此。APC類(lèi)似物可以根據(jù) 本發(fā)明單獨(dú)地使用、或與其他APC類(lèi)似物和/或同源物和/或衍生物和/或共 輒物組合地1"吏用。例如，具有對(duì)FVa和/或FVIIIa更高結(jié)合親和性的APC 類(lèi)似物可以與能夠選擇性結(jié)合并抑制PAI-1的APC同源物組合使用。在本發(fā)明的另 一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述APC分子是APC衍生物。 "APC衍生物"被定義為具有APC或APC的類(lèi)似物的氨基酸序列、但另外包 含一個(gè)或多個(gè)其氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)、a-碳原子、末端氨基或末端羧基的化學(xué)修 飾的分子?；瘜W(xué)修飾包括但不限于，添加化學(xué)部分、產(chǎn)生新的鍵、以及除 去化學(xué)部分。氨基酸側(cè)鏈上的修飾包括，無(wú)限制地，賴(lài)氨酸s-氨基的?；?作用、精氨酸、組氨酸或賴(lài)氨酸的N-烷基化、谷氨酸或天冬氨酸羧基基團(tuán) 的烷基化、以及谷氨酰胺或天冬酰胺的脫酰胺作用。末端氨基的修飾包括， 但不限于，脫氨基、N-低級(jí)烷基、N-二低級(jí)烷基和N-?；揎棥Ｄ┒唆然?的修飾包括，但不限于，酰胺、低級(jí)烷基酰胺、二烷基酰胺和低級(jí)烷基酯 修飾。低級(jí)烷基是C1-C4烷基。此外， 一個(gè)或多個(gè)側(cè)鏈基團(tuán)，或末端基團(tuán)， 可以由普通的熟練蛋白質(zhì)化學(xué)家已知的保護(hù)性基團(tuán)來(lái)保護(hù)。氨基酸的a-碳 可以被單曱基化或二甲基化。APC分子的同源物在此指定的一種或多種序列的同源物可以與限定的序列相比在一個(gè)或 多個(gè)氨基酸上改變，但能夠行使相同的功能，即，同源物可以被視為預(yù)先 確定的序列的功能等效物。因而，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述APC分子是任何在此 公開(kāi)的分子的同源物，例如選自由以下組成的組的任何分子的同源物 APC XIGRIS 活4匕的Drotrecogin-a因而，在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述APC分子是與在此公開(kāi)的任何分子相比含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、倒位、添加或缺失的肽，例如選自由以下組成的組的分子<formula>formula see original document page 10</formula>
在一個(gè)實(shí)施方式中，所述取代、缺失或添加的數(shù)目是20個(gè)氨基酸或更 少，例如15個(gè)氨基或更少、例如10個(gè)氨基或更少、例如9個(gè)氨基或更少、 例如8個(gè)氨基或更少、例如7個(gè)氨基或更少、例如6個(gè)氨基或更少、例如5 個(gè)氨基或更少、例如4個(gè)氨基或更少、例如3個(gè)氨基或更少、例如2個(gè)氨 基或更少(例如l)、或這些數(shù)量之間的任何整數(shù)。在本發(fā)明的一個(gè)方面， 所述:f又代包括一個(gè)或多個(gè)保守性取代，例如20個(gè)或更少的保守性取代、例 如18個(gè)或更少、例如16個(gè)或更少、例如14個(gè)或更少、例如12個(gè)或更少、 例如10個(gè)或更少、例如8個(gè)或更少、例如6個(gè)或更少、例如4個(gè)或更少、 例如3個(gè)或更少、例如2個(gè)或更少的保守性取代。"保守的"取代表示氨基酸 殘基被另一個(gè)屬于同一氨基酸組的相關(guān)氨基酸殘基取代，例如，具有疏水 性側(cè)<隨的那些、具有芳香族側(cè)鏈的那些、具有4^性側(cè)鏈的那些、具有酸性 側(cè)鏈的那些、具有輕基側(cè)鏈的那些以及具有非電離極性側(cè)鏈的那些。保守 性取代的實(shí)例包括一個(gè)疏水性殘基例如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或曱硫 氨酸對(duì)另一個(gè)的取代，或一個(gè)堿性殘基對(duì)另一個(gè)的取代，例如精氨酸對(duì)賴(lài) 氨酸的取代，或一個(gè)酸性殘基對(duì)另一個(gè)的取代，例如谷氨酸對(duì)天冬氨酸的 取代，或一個(gè)非電離極性殘基對(duì)另一個(gè)的取代，例如谷氨酰胺對(duì)天冬酰胺 的取代，等等。以下的表格列出了說(shuō)明性的、但非限制性的保守性氨基酸 取代。初始?xì)埢痉缎缘奶鎿QAlaSer, Thr, Val, GlyArgLysAsnHis, SerAspGlu, AsnCysSerGinAsn, HisGluAsp, GluGIyAla, SerHisAsn, GinHeLeu, Val, ThrLeulie, ValLysArg， Gin, Glu, ThrMetLeu, He, ValPheLeu， TyrSerThr, Ala, AsnThrSer, AlaTrpArg, SerTyrPheVallie, Leu, AlaProAa適合于本發(fā)明的用途和方法的其他APC同源物是與在此公開(kāi)的任何分 子具有大于百分之50的序列同一性、優(yōu)選的大于百分之90的序列同一性 (例如，大于91。/。的序列同一性，例如大于92。/。的序列同一性，例如大于 93%的序列同一性，例如大于94%的序列同一性，例如大于95。/。的序列同 一性，例如大于96%的序列同 一性，例如大于97%的序列同 一性，例如大 于98%的序列同一性，例如大于99%的序列同一性，例如大于99.5%的序 列同一性)的肽序列，所述在此公開(kāi)的任何分子例如選自以下構(gòu)成的組的 分子■ APC-XIGRIS.Drotrecogin-a如在此使用的，序列同一性是指使用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)算法在兩個(gè)分 子之間進(jìn)行的比較。對(duì)于本發(fā)明用于計(jì)算序列同 一 性的優(yōu)選的算法是同一性百分比。對(duì)于匹配、錯(cuò)配以及插入和缺失的參數(shù)值選擇是任意的，盡管某些參數(shù)值已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)與其他值相比產(chǎn)生生物學(xué)上更現(xiàn)實(shí)的結(jié)果。對(duì)于Smith-Waterman算法的一個(gè)優(yōu)選的參數(shù)值組在"最大相似性片段，，方法中 闡述，其使用了 l的值用于匹配的殘基，-1/3的值用于錯(cuò)配的殘基(殘基是 單個(gè)核香酸或單個(gè)氨基酸)(Waterman, Bull. Math. Biol. 46, 473-500 (1984))。插入和缺失(indels) ， x,被加權(quán)為其中k是給定的插入或缺失中殘基的數(shù)目(同上)。例如，與42個(gè)氨基酸殘基序列除了 18個(gè)氨基酸取代和3個(gè)氨基酸的 插入之外其余都相同的序列，將由以下給出同 一性百分比[(1 x42匹配)-(1/3 xl8錯(cuò)配)-(1+3/3 indels ) ]/42=81%同一性在本發(fā)明的 一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，當(dāng)計(jì)算序列同 一性時(shí)分子末端的 截?cái)嗖槐豢紤](即，如果一個(gè)分子比另一個(gè)長(zhǎng)，僅分子的重疊段被用于序 列同一性分析)；在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，截?cái)啾凰阕魅笔?。APC同源物可以包括D-氨基酸形式，可以是相對(duì)于在此公開(kāi)的任何分 子具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、倒位或添加的分子，所述在此公開(kāi) 的分子例如選自由以下組成的組的分子 APC-XIGRIS-Drotrecogin- oc在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，APC分子是與APC相比含有一個(gè) 或多個(gè)氨基酸取代、倒位、添加或缺失的肽。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述取 代、缺失或添加的數(shù)目是20個(gè)氨基酸或更少，例如15個(gè)氨基或更少、例 如10個(gè)氨基或更少、例如9個(gè)氨基或更少、例如8個(gè)氨基或更少、例如7 個(gè)氨基或更少、例如6個(gè)氨基或更少、例如5個(gè)氨基或更少、例如4個(gè)氨 基或更少、例如3個(gè)氨基或更少、例如2個(gè)氨基或更少(例如1 )、或這些 數(shù)量之間的任何整數(shù)。在本發(fā)明的一個(gè)方面，所述取代包括一個(gè)或多個(gè)保 守性取代。以上給出了適合的保守性取代的實(shí)例。適合于本發(fā)明的用途和方法的其他APC同源物是來(lái)自蛋白C序列的肽 序列，與(1) SEQ ID NO: 1和/或與(2)其截短的序列具有大于百分之 50的序列同一性、和優(yōu)選的大于百分之90的序列同一性(例如，大于91% 的序列同一性，例如大于92%的序列同一性，例如大于93%的序列同一性， 例如大于94%的序列同一性，例如大于95。/。的序列同一性，例如大于96%12的序列同一性，例如大于97%的序列同一性，例如大于98%的序列同一性， 例如大于99。/。的序列同一性，例如大于99.5°/。的序列同一性)。如在此^f吏用 的，序列同 一性是指使用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)算法在兩個(gè)分子之間進(jìn)行的比 較。對(duì)于本發(fā)明計(jì)算序列同一性的優(yōu)選的算法是如上所述的Smith-Waterman算法。APC同源物也可以是相對(duì)于人APC具有 一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、缺失、 倒位或添加的分子，并可以包括D-氨基酸形式。在本發(fā)明的另 一個(gè)實(shí)施方式中，在此的任何預(yù)定序列例如SEQ ID NO: l的所述同源物，可以定義為i) 包含能選擇性結(jié)合凝血因子Va和Villa的氨基酸序列的同源物，和/或ii) 具有與人APC相比基本上相似的或更高的對(duì)凝血因子Va和Villa 的結(jié)合親和性的同源物，和/或iii) 包含能選擇性結(jié)合并抑制PAI-1的氨基酸序列的同源物，和/或iv) 具有對(duì)PAI-1基本上相似的或更高的結(jié)合親和性的同源物，和/或v) 具有對(duì)內(nèi)皮蛋白C受體(ECPCR)基本上相似的或更高的結(jié)合親 和性的同源物，和/或vi) 具有在氣道中沉積之后基本上相似的、更高的或更低的半衰期的 同源物?；瘜W(xué)衍生的APC分子進(jìn)一步理解的是，適合用于本發(fā)明的APC分子可以是化學(xué)上衍生的或 改變的肽，例如，具有非天然氨基酸殘基(如，氨基乙磺酸殘基、P-和 氨基酸殘基和D-氨基酸殘基)、C-末端功能基團(tuán)修飾，例如酰胺、酯和C-末端酮修飾，以及N-末端功能基團(tuán)修飾，例如?；陌?、席夫堿、或環(huán)化， 例如存在于氨基酸焦谷氨酸中的環(huán)化。APC分子共軛物本發(fā)明的APC分子還可以用非多肽部分^f',飾，例如，PEG或糖類(lèi)部分， 來(lái)產(chǎn)生具有對(duì)通過(guò)如人血漿和al-抗胰蛋白酶造成的鈍化抗性提高的APC 化合物，因而展現(xiàn)了提高的體內(nèi)半衰期。優(yōu)選的實(shí)例包括蛋白C共軛物，其中引入了至少一個(gè)額外的體內(nèi)N-糖基化位點(diǎn)。在美國(guó)專(zhuān)利NO. 6,933,367 ("蛋白C或活化的蛋白C樣分子，，)中描述 了適合的實(shí)例，通過(guò)引用將其內(nèi)容合并在此。因而，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，使用的APC分子是N-糖基化的 APC多肽或其類(lèi)似物。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，使用的APC分子是O-糖基化的APC 多肽或其類(lèi)似物。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，所述APC分子，其中已經(jīng)引入至少一個(gè)額外 的N-糖基化位點(diǎn)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，使用的APC分子是進(jìn)一步含有N-連接 的或O-連接的脂肪酸的APC多肽或其類(lèi)似物。APC片段在一個(gè)實(shí)施方式中，所述APC分子可以是APC片段。所述片段是APC、 APC同源物或APC衍生物的一部分。片段的實(shí)例包括EGF樣結(jié)構(gòu)域1或2、 或絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域、或天然APC肽的N-末端或C-末端或兩者的缺失。 APC的片段包含來(lái)自SEQIDNO. 1的至少20個(gè)連續(xù)氨基酸。例如，片段 長(zhǎng)度可以是20個(gè)氨基酸或更多，例如25個(gè)氨基酸或更多，例如30個(gè)氨基 酸或更多，例如50個(gè)氨基酸或或更多，例如100個(gè)氨基酸或更多，例如150 個(gè)氨基酸或更多，例如200個(gè)氨基酸或更多，例如250個(gè)氨基酸或更多， 例如300個(gè)氨基酸或更多，例如350個(gè)氨基酸或更多，例如400個(gè)氨基酸 或更多，例如450個(gè)氨基酸或更多，例如460個(gè)氨基酸，或這些數(shù)量之間 的任何整數(shù)。氣管內(nèi)、支氣管內(nèi)或肺泡內(nèi)施用施用的方法包括但不限于，噴霧、灌洗、吸入、沖洗或滴注，使用其 中已經(jīng)溶解了 一種或多種血液凝結(jié)因子的作為液體的生理學(xué)可接受的組合 物。當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)"氣管內(nèi)、支氣管內(nèi)或肺泡內(nèi)的施用"包括這些施用 的所有形式，借此凝結(jié)因子被分別施用到氣管、支氣管或肺泡中，無(wú)論是 通過(guò)因子溶液的滴注、通過(guò)以粉末形式應(yīng)用因子、或通過(guò)作為煙霧或噴霧 的溶液或粉末或凝膠吸入因子來(lái)容許因子到達(dá)氣道的相關(guān)部分，其中添加或者沒(méi)有添加穩(wěn)定劑或其他賦形劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，氣管內(nèi)、支氣管內(nèi)或肺泡內(nèi)的施用不包括產(chǎn)物 的吸入，但包括滴注或應(yīng)用因子的溶液或含有因子的粉末或凝膠到氣管或 低位氣道中。支氣管內(nèi)/肺泡內(nèi)施用的方法，包括但不限于，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法的支氣管肺泡灌洗(bronchoalveolar labage， BAL )施用，使用其 中溶解了 APC和/或APC同源物和/或衍生物和/或共軛物的生理學(xué)可接受的包括使用干燥形式的含有抗凝劑的噴霧粉末(有或者沒(méi)有賦形劑)，或在 支氣管鏡檢期間在溶液或粉末或凝膠形式中直接施用抗凝血?jiǎng)?。氣管?nèi)施 用的方法包括但不限于，用溶解的活化的蛋白C的類(lèi)似溶液進(jìn)行盲端氣管 洗滌，或吸入含有溶解的活化的蛋白C的噴霧化的液滴，這種液滴通過(guò)使 用適合于這種目的的任何噴霧設(shè)備獲得。本發(fā)明為治療ALI、 ARDS、肺炎和與支氣管肺泡血纖蛋白沉積相關(guān)的 其他狀況的方法提供了有用的新補(bǔ)充。此外，抗凝血?jiǎng)┙?jīng)由氣道的施用預(yù) 計(jì)避免了抗凝血?jiǎng)├鏏PC的全身性施用的不希望的出血副作用，抗凝血 劑例如APC的靜脈內(nèi)使用與包括腦出血在內(nèi)的內(nèi)出血的高發(fā)生率相關(guān)。同 時(shí)，當(dāng)與全身性施用相比時(shí)，抗凝血?jiǎng)┙?jīng)由氣道的應(yīng)用預(yù)計(jì)強(qiáng)化了它們對(duì) 肺中的血管外血纖蛋白沉積的作用。預(yù)計(jì)的是，抗凝血?jiǎng)┖涂寡装Y試劑例 如APC的總劑量可以在空隙內(nèi)局部地單獨(dú)使用，或可以在常規(guī)的靜脈途徑 和本發(fā)明的氣道途徑之間分配以獲得治療的全身性和局部肺部效果之間的 最佳平衡以及降低藥物副作用的發(fā)生率，例如，在患有嚴(yán)重?cái)⊙Y、膿毒 性休克和ARDS的患者中。此外，時(shí)間間隔("機(jī)會(huì)窗口")(在這種時(shí)間 間隔中靜脈內(nèi)使用APC可能是有益的)是有限的。當(dāng)試劑被用在敗血癥后 階段(post-septic phase)或甚至肺泡血纖蛋白沉積占優(yōu)勢(shì)的晚期A(yíng)RDS階 段(例如在A(yíng)LI和ARDS中所見(jiàn)的)，可能期望藥物反應(yīng)的更長(zhǎng)時(shí)間間隔。本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式包括通過(guò)用其中已經(jīng)溶解了適合劑量(例如， 2 mg到5 mg或更多)的APC的灌洗液體(例如，25 ml到100 ml等滲鹽 水)進(jìn)行支氣管肺泡灌洗的方式向患有ARDS的人患者局部支氣管內(nèi)施用 APC。取決于A(yíng)LI或ARDS的早期或晚期階段的持續(xù)時(shí)間，在一天或多天 期間以 一 定間隔重復(fù)這種施用。在滿(mǎn)足APC靜脈內(nèi)施用指標(biāo)的患者中作為補(bǔ)充性或組合性的治療，APC也可以通過(guò)靜脈內(nèi)輸注來(lái)給予。其他優(yōu)選的施用方法可以包括使用以下設(shè)備1. 使用壓縮空氣/氧氣混合物的加壓噴霧器2. 超聲噴霧器3. 電子微泵噴霧器(例如Aeroneb Professional Nebulizer)4. 壓力定量氣霧劑(metered dose inhaler, MDI)5. 干粉吸入器系統(tǒng)(DPI),氣霧劑可以經(jīng)由a)面具遞送，或b)在插管的患者中在機(jī)械通氣期間 經(jīng)由氣管內(nèi)導(dǎo)管來(lái)遞送(設(shè)備1、 2和3)。只要患者能夠自己激活氣霧劑 設(shè)備，設(shè)備4和5也可以由患者不需協(xié)助地使用。包含APC和/或APC同源物和/或衍生物溶液的優(yōu)選濃度在每ml溶液 0.1嗎到10000嗎活性成分的范圍內(nèi)。使用化合物的單體形式，適合的濃 度通常在每ml溶液0.1 (ig到5000 (ig的范圍內(nèi)，例如每ml溶液約O.l嗎 到3000嗎的范圍內(nèi)，特別是在每ml溶液約0.1嗎到1000嗎的范圍內(nèi)， 例如在每ml溶液約0.1嗎到250嗎的范圍內(nèi)。優(yōu)選的濃度將是約0.1到約 5.0 mg,優(yōu)選的從約0.3 mg到約3.0 mg，例如從約0.5到約1.5 mg，特別是 在每ml溶液0.8到l.Omg的范圍內(nèi)。使用多聚體形式的化合物，適合的濃 度通常是在每ml溶液0.1嗎到1000嗎的范圍內(nèi)，例如每ml溶液約0.1嗎 到750 (ig的范圍內(nèi)，特別是在每ml溶液約0.1嗎到500 |ig的范圍內(nèi)，例 如在每ml溶液約0.1嗎到250 |ug的范圍內(nèi)。優(yōu)選的濃度將是每ml溶液約 0.1到約5.0 mg，優(yōu)選的從約0.3 mg到約3.0 mg，例如/人約0.5到約1.5 mg， 特別是在0.8到l.Omg的范圍內(nèi)。適應(yīng)癥本發(fā)明的一個(gè)方面涉及治療或預(yù)防氣道中血管外血纖蛋白沉積的方 法。因而，本發(fā)明涉及治療患有由炎癥性肺部疾病引起的血管外血纖蛋白 沉積、或存在患有由炎癥性肺部疾病引起的血管外血纖蛋白沉積風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。在優(yōu)選的方面，所述炎癥性肺部疾病選自由以下組成的組 ALI .ARDS 急性支氣管肺泡疾病 慢性支氣管肺泡疾病 纖維4匕肺泡炎(fibrosing alveolitis )或 支氣管哮喘 肺泡炎 細(xì)支氣管炎 梗阻性纟田支氣管機(jī)化性月巿炎(Bronchiolitis obliterans-organizing pneumonia, BOP A ) 移植物抗宿主疾病(GVHD) 肺孢子蟲(chóng)性肺炎(PCP) 肺炎，例如吸入性肺炎 藥物誘導(dǎo)的肺炎(例如，由于曱氨蝶呤、博來(lái)霉素或西羅莫司)-纖維化肺泡炎，急性或慢性的-嚢性纖維化.特發(fā)性肺纖維化在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述炎癥性肺部疾病與選自由以下組成的組的 狀況相關(guān)-直接或間接的肺部創(chuàng)傷-胰腺炎.吸入性肺炎 敗血癥.嚴(yán)重?cái)⊙Y，和/或 ■膿毒性休克 肺孢子蟲(chóng)性肺炎(PCP),作為輔助預(yù)防性的或優(yōu)先的治療，或作為 PCP誘導(dǎo)的PCP明顯的ARDS的治療，即，在PCP階段之前或早期，或在 伴隨使用抗肺孢子蟲(chóng)抗生素療法(例如磺胺曱嘈、唑與曱氧芐啶)的明顯的 ARDS中。藥物組合物本發(fā)明中使用的藥物組合物或制劑包括組合于、優(yōu)選的溶于藥學(xué)上可17接受的載體、優(yōu)選的含水載體或稀釋劑的APC制品。所述藥物組合物可以是固體、液體、凝膠或氣霧劑。可以使用各種含水載體，例如0.9%鹽水、 緩沖鹽水、生理學(xué)相容的緩沖液，等等。這些組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù) 人員公知的常規(guī)技術(shù)來(lái)滅菌。產(chǎn)生的水溶液可以包裝使用、或在無(wú)菌條件 下過(guò)濾并凍干，凍干的制品可以在施用之前溶于無(wú)菌水溶液。所述組合物可以含有藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)或佐劑，包括，但不限 于，pH調(diào)節(jié)和緩沖試劑和/或緊張性調(diào)節(jié)試劑，例如，醋酸鈉、乳酸鈉、氯 化鈉、氯化鉀、氯化4丐，等等。所述制劑可以含有藥學(xué)上可接受的栽體和 賦形劑，包括微球體、脂質(zhì)體、微嚢、納米顆粒等等。常規(guī)的脂質(zhì)體一般 由磷脂(中性的或帶負(fù)電的)和/或膽固醇組成。脂質(zhì)體是基于脂雙分子層 的嚢泡結(jié)構(gòu)，所述脂雙分子層圍繞含水區(qū)室。它們可以在它們的物理化學(xué) 性質(zhì)如大小、脂質(zhì)組成、表面電荷和磷脂雙分子層的數(shù)量和流動(dòng)性方面不 同。對(duì)于脂質(zhì)體形成最常用的脂質(zhì)是1,2-二月桂?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿(DLPC) , 1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸膽石咸(DMPC ) , 1，2-二棕櫚酰 基-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DPPC ) , 1,2-二硬脂?；?sn-甘油-3-磷酸膽堿(DSPC), 1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DOPC), 1,2-二肉豆蔻?；?sn-甘油—3-磷酸乙醇胺(DMPE ), 1,2-二棕櫚?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE ), 1,2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE) , 1,2-二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-磷酸(單鈉鹽)(DMPA )， 1,2-二棕櫚?；?sn-甘油-3-磷酸(單鈉鹽)(DPPA )， 1,2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸(單鈉鹽)(DOPA) , 1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘 油—3-[磷酸-rac- ( 1-甘油)](鈉鹽)(DMPG ) ， 1，2-二椋櫚?；?sn-甘油-3-[磷 酸-rac- ( 1-甘油)](鈉鹽)(DPPG ) , 1,2-二油?；?sn-甘油-3-[磷酸-rac- ( 1-甘油)](鈉鹽)(DOPG), 1》二肉豆蔻?；?sn-甘油-3-[磷酸-L-絲氨酸](鈉鹽)(DMPS) ， 1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-[磷酸-L-絲氨酸)(鈉鹽)(DPPS ) , 1,2-二油?；?sn-甘油-3-[磷酸-L-絲氨酸](鈉鹽)(DOPS )，1,2-二油?；?31>甘油-3-磷酸乙醇胺"-(戊二?；?(鈉鹽)和1,1'，2，2'-四肉豆 蔻酰基心磷脂(銨鹽)。由與其他脂質(zhì)或脂質(zhì)體的修飾物組合的DPPC組 成的制劑是優(yōu)選的，例如，與膽固醇和/或磷脂酰膽堿組合。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體特征在于它們?cè)谘鼙谕高^(guò)性提高的身體位置上滲出的 能力上。產(chǎn)生長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的最普通的途徑是將親水聚合物聚乙二醇(PEG ) 共價(jià)連接到脂質(zhì)體的外表面。 一些優(yōu)選的脂質(zhì)是 1，2-二棕櫚?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[曱氧基(聚乙二醇)-2000](銨鹽)，1，2-二椋櫚酰基-sn-甘油—3-磷酸乙醇胺-N-[曱氧基(聚乙二醇)-5000](銨鹽)，1,2-二油酰基-3-三甲基銨-丙烷(氯鹽)(DOTAP)。Avanti， Polar Lipids, Inc, Alabaster, AL提供了可應(yīng)用于脂質(zhì)體的可能的 脂質(zhì)。此外，脂質(zhì)體懸浮液可以包括脂質(zhì)保護(hù)劑，其保護(hù)脂質(zhì)在貯存時(shí)對(duì) 抗自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。親脂性自由基猝滅劑，例如a-生育酚和水溶 性鐵特異性螯合劑，例如ferrioxianine，是優(yōu)選的?？梢垣@得各種方法用于制備脂質(zhì)體，如在Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467 ( 1980 ),美國(guó)專(zhuān)利NO. 4,235,871 4,501,728和4,837,028中描 述的，通過(guò)引用將它們所有的合并在此。另一種方法產(chǎn)生不同大小的多層 泡嚢。在這種方法中，形成泡嚢的脂質(zhì)溶解在適合的有機(jī)溶劑或溶劑系統(tǒng) 中，并在真空下或惰性氣體中干燥來(lái)形成薄的脂質(zhì)膜。如果期望，所述膜 可以再溶解在適合的溶劑，例如叔丁醇中，然后凍干來(lái)形成更均質(zhì)的脂質(zhì) 混合物，其處于更容易水化的粉末樣形式。用靶藥和靶成分的水溶液覆蓋 這種膜，并使其水化， 一般攪動(dòng)15-60分鐘。通過(guò)在更劇烈的攪動(dòng)條件下水 化所述脂質(zhì)，或通過(guò)添加增溶洗滌劑例如脫氧膽酸鹽，產(chǎn)生的多層泡囊的 大小分布可以朝較小的尺寸移動(dòng)。通過(guò)表面活性物質(zhì)在水溶液中形成微團(tuán)(含有疏水部分和一個(gè)或多個(gè) 離子基團(tuán)或者強(qiáng)親水性基團(tuán)的分子)。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常見(jiàn)表面活性劑可以用于本發(fā)明的微團(tuán)。適合 的表面活性劑包括月桂酸鈉、油酸鈉、十二烷基硫酸鈉、八氧乙二醇單十 二烷基醚(octaoxyethylene glycol monododecylether )、 辛苯聚醇 9 和 PLURONIC F-127 ( Wyandotte Chemicals Corp.)。優(yōu)選的表面活性劑是與靜 脈內(nèi)注射相容的非離子聚氧乙烯和聚氧丙烯洗滌劑，例如TWEEN-80、 PLURONIC F-68、 N-辛基-卩-D-他喃葡萄糖苷，等等。此外，磷脂，例如用 于脂質(zhì)體的生產(chǎn)中所描述的那些，也可以用于膠團(tuán)形成。在某些情況下，有益的是包括促進(jìn)活性物質(zhì)向其靶點(diǎn)遞送的化合物。給藥方案以與劑量制劑相容的方式和治療有效的量來(lái)施用制品。施用的量取決 于要治療的受試者，包括，受試者的體重和年齡、要治療的疾病和疾病的狀態(tài)。適合的劑量范圍是每次施用每公斤體重通常數(shù)百微克活性成分的數(shù)量級(jí)，優(yōu)選的范圍是每公斤體重約0.1嗎到IOOOO嗎。使用化合物的單體形 式，適合的劑量通常在每公斤體重0,1嗎到5000 pg的范圍內(nèi)，例如每公斤 體重約O.l pg到3000 iag的范圍內(nèi)，特別是在每公斤體重約O.l iag到1000嗎 的范圍內(nèi)。使用化合物的多聚形式，適合的劑量通常在每公斤體重0.1嗎 到1000 pg的范圍內(nèi)，例如每7>斤體重約0.1 pg到750 pg的范圍內(nèi)，特別 是在每公斤體重約0.1嗎到500嗎的范圍內(nèi)，例如每公斤體重約0.1 pg到 250昭的范圍內(nèi)。優(yōu)選的劑量將是每次施用約0.1到約5.0 mg、優(yōu)選的約 0.3 mg到約3.0 mg,例如約0.5到約1.5 mg,特別是0.8到1.0 mg的范圍內(nèi)。 施用可以進(jìn)行一次，或可以隨后繼續(xù)施用。劑量還將取決于給藥途徑，并 將隨要治療的受試者的年齡、性別和體重改變。多聚體形式的優(yōu)選的劑量 將在每70公斤體重1 mg到70 mg之間。適合的每日劑量范圍是每公斤體重每天通常數(shù)百微克活性成分的數(shù)量 級(jí)，優(yōu)選的范圍每公斤體重每天約0.1嗎到10000嗎。使用化合物的單體 形式，適合的劑量通常在每公斤體重每天0.1略到5000嗎的范圍內(nèi)，例如 每公斤體重每天約0.1 (ig到3000 [ig的范圍內(nèi)，特別是在每公斤體重每天約 0.1 jiig到1000嗎的范圍內(nèi)。使用化合物的多聚形式，適合的劑量通常在每 公斤體重每天0.1嗎到1000 (ig的范圍內(nèi)，例如每公斤體重每天約0.1嗎到 750嗎的范圍內(nèi)，特別是在每公斤體重每天約0.1嗎到500嗎的范圍內(nèi)， 例如每公斤體重每天約0.1嗎到250嗎的范圍內(nèi)。優(yōu)選的劑量將是每公斤 體重每天約0.1到約100 (ig，優(yōu)選的約0,1 iig到約50嗎，例如約0.3到約 30)ag,特別是1.0到10pg的范圍內(nèi)。施用可以進(jìn)4亍一次，或可以隨后繼續(xù) 施用。劑量還將取決于給藥途徑，并將隨要治療的受試者的年齡、性別和 體重改變。多聚體形式的優(yōu)選的劑量將在每70公斤體重每天1 mg到70 mg 之間。藥物包裝本發(fā)明中使用的化合物可以以單劑或多劑、單獨(dú)或與藥學(xué)上可接受的 載體或賦形劑組合施用。根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，所述制劑可以 方便地以單位劑量的形式現(xiàn)。優(yōu)選的是根據(jù)本發(fā)明的化合物在試劑盒中提供。這種試劑盒一般含有劑量形式的活性化合物用于施用。劑量形式含有足夠數(shù)量的活性化合物， 從而當(dāng)施用給受試者時(shí)可以獲得期望的效果。因而，優(yōu)選的是，藥物包裝包含與相關(guān)的劑量方案相應(yīng)的一定數(shù)量的 劑量單位。因而，在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物包裝包含藥物組合物，所 述藥物組合物包含以上定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接 受的載體、運(yùn)載體和/或賦形劑，所述包裝包含1到7個(gè)劑量單位，從而具有用于一天或多天的劑量單位，或包含7到21個(gè)劑量單位，或其倍數(shù)，從而具有用于一周的施用或幾周的施用的劑量單位。所述劑量單位可以是如上述定義的。藥物包裝可以是用于氣管內(nèi)、支 氣管內(nèi)或肺泡內(nèi)施用的任何適合的形式。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述包裝 是小瓶、安瓿、管、.泡罩包裝、盒或膠嚢的形式。當(dāng)所述藥物包裝包含超過(guò)一個(gè)劑量單位時(shí)，優(yōu)選的是所述藥物包裝具 有一種能將每次施用調(diào)整到僅一個(gè)劑量單位的機(jī)制。優(yōu)選的，試劑盒含有說(shuō)明書(shū)，其標(biāo)明劑量形式實(shí)現(xiàn)希望的效果的用途， 以及在指定的時(shí)間階段內(nèi)服用的劑型數(shù)量。因而，在一個(gè)實(shí)施方式中，所 述藥物包裝包含用于施用所述藥物組合物的說(shuō)明書(shū)。實(shí)施例實(shí)施例160歲的患者患有嚴(yán)重的ARDS,根據(jù)胸放射照相術(shù)判斷不透明區(qū)主要 集中在右肺。使用溶于20 ml生理鹽水中的單次劑量5 mg活化的 drotrecogin-a (Xigris)經(jīng)由支氣管鏡在右下肺葉支氣管中進(jìn)行支氣管肺泡 灌洗(BAL)。沒(méi)有觀(guān)察到明顯的副作用以及氣道出血。第二天，在用BAL 治療的右下肺葉中渾濁在某種程度上得到澄清。另一方面，如Pa02/Fi02比 率所監(jiān)測(cè)的，單次劑量APC沒(méi)有改善氣體交換。實(shí)施例2患Mb何杰金氏淋巴瘤(Mb. Hodgkin)的11歲男孩于2003年首先用 化療治療。在2005年記錄到復(fù)發(fā)，此時(shí)他用放射治療和自體骨髓移植(BMT ) 治療。在收入ICU前進(jìn)行的肺部活檢顯示沒(méi)有肺部移植物抗宿主疾病 (GvHD)的跡象。沒(méi)有淋巴瘤浸潤(rùn)的病征。BMT后9天，因急性肺功能不全(ALI)和連續(xù)高燒伴有敗血癥被收入ICU。首先使用廣譜的經(jīng)驗(yàn)性抗 生素治療。在第4天，氧容量進(jìn)一步降低，盡管有高的PEEP, Pa02/Fi02 比率仍< 200。胸片顯示位于肺野所有4個(gè)象限的雙側(cè)彌散性浸潤(rùn)。超聲心 動(dòng)圖顯示沒(méi)有心臟旁路或瓣膜功能不全，心肌功能正常。沒(méi)有檢測(cè)到其他 器官功能障礙?；颊呋加袉纹鞴俟δ苷系K，伴有嚴(yán)重ARDS。支氣管肺泡灌 洗(BAL)沒(méi)有假絲酵母屬的種、曲霉屬、病毒或細(xì)菌。根據(jù)機(jī)構(gòu)審查委 員會(huì)(IRB)的決定，經(jīng)由噴霧器(Aeroneb )以5 mgx3的劑量開(kāi)始使用 活化的蛋白C (活化的Drotrecogin-a )的吸入療法。在12小時(shí)后3個(gè)劑量 之后，胸片上的浸潤(rùn)被明顯地降低；伴隨地，動(dòng)脈血氧飽和度從85%提高 到95%,而Fi02二1.0。在任何時(shí)候沒(méi)有嚴(yán)重的副作用，例如，APC吸入期 間或之后的氣道出血。在A(yíng)PC的吸入治療開(kāi)始后24小時(shí)，患者由于右心室 衰竭，即急性的肺原性心臟病死于循環(huán)衰竭。
權(quán)利要求
1. 一種治療或預(yù)防人受試者中氣道中、特別是肺泡或支氣管肺泡間隙中血管外血纖蛋白沉積的方法，包括通過(guò)氣管內(nèi)、支氣管內(nèi)或肺泡內(nèi)施用的方式經(jīng)由氣道向所述受試者施用人活化的蛋白C或其生物學(xué)活性衍生物。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述血纖蛋白沉積由炎癥性肺部疾病引起。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中所述炎癥性肺部疾病選自以下組成的組 ALI、 ARDS、肺炎、急性支氣管肺泡疾病、慢性支氣管肺泡疾病、纖維化 肺泡炎或支氣管哮喘。
4. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述炎癥性肺部疾病與選自由 以下組成的組的病況相關(guān)直接或間接的肺部創(chuàng)傷、胰腺炎、吸入性肺炎、 敗血癥、嚴(yán)重?cái)⊙Y和/或膿毒性休克和/或藥物誘發(fā)的急性肺功能不全。
5. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述活化的蛋白C通過(guò)活化的 蛋白C溶液的支氣管肺泡灌洗來(lái)施用。
6. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述活化的蛋白C通過(guò)使用活 化的蛋白C溶液的盲端氣管洗涂來(lái)施用。
7. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述活化的蛋白C通過(guò)引起活 化的蛋白C噴霧溶液的吸入來(lái)施用。
8. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述活化的蛋白C通過(guò)引起噴 霧粉末形式的活化的蛋白C的吸入來(lái)施用。
9. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述活化的蛋白C通過(guò)在支氣 管鏡檢期間直接應(yīng)用活化的蛋白C來(lái)施用。
10. 權(quán)利要求1到9的任一項(xiàng)的方法，其中所述人是成年人。
11. 權(quán)利要求1到9的任一項(xiàng)的方法，其中所述人是兒童。
12. 前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的方法，其中所述APC以每天O.l嗎/kg-約 10mg/kg體重的量施用。
13. 權(quán)利要求1到9的任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括向所述人受試者全身 地施用抗凝血?jiǎng)┳鳛檩o助治療。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中所述人是成年人。
15. 權(quán)利要求13的方法，其中所述人是兒童。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過(guò)氣管內(nèi)、支氣管內(nèi)、或肺泡內(nèi)的途徑經(jīng)由氣道向受試者施用人活化的蛋白C或其生物學(xué)活性衍生物，局部治療急性和慢性血管外肺部血纖蛋白沉積和/或降低與抗凝血?jiǎng)┑娜硇允┯孟嚓P(guān)的對(duì)受試者的不希望的影響的方法。
文檔編號(hào)A61P11/00GK101262879SQ200680031062
公開(kāi)日2008年9月10日 申請(qǐng)日期2006年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月24日
發(fā)明者拉斯·O·厄滕塔爾 申請(qǐng)人:德拉格雷丘爾公司