專利名稱：：抗感染的方法抗感染的方法本發(fā)明涉及抗感染的方法，尤其涉及抗寄生性原生動物感染的方法。本說明書中的現(xiàn)已發(fā)表文獻中的清單和討論不應(yīng)當(dāng)視為是對該文獻是本
技術(shù)領(lǐng)域：
狀況的一部分或者是共知常識的確認。在近些年，抗藥性原生寄生蟲感染的發(fā)生率顯著地增加，導(dǎo)致在發(fā)展中國家和西方世界的死亡數(shù)量升高。開發(fā)出的針對此問題的策略包括開發(fā)新的藥物，采用嚴格的治療方案和廣泛的公共教育計劃。將高活性藥物試劑遞送到其作用位點，并在其他細胞和組織中具有最小的副作用的可能方法是使用前體藥物。前體藥物已經(jīng)被了解許多年，并已經(jīng)使用在多個醫(yī)學(xué)適應(yīng)癥中。它們被定義為化學(xué)實體，其在代謝或非代謝系統(tǒng)中被修飾，從而導(dǎo)致具有所需藥學(xué)活性的種類形成或釋放。在許多情況下，使用前體藥物形式，通過改變藥物的物理化學(xué)性質(zhì)(例如親脂性)來修飾藥物的藥代動力學(xué)。在這些情況下，對前體藥物的修飾通常是非特異的，并通過非酶促降解方式或通過普遍的酶類的代謝作用而發(fā)生。然而，也可以使用前體藥物形式使活性藥學(xué)試劑只靶向特異位點，其通常通過利用能夠催化前體藥物修飾反應(yīng)的酶類的差異分布。在癌癥化療領(lǐng)域，通過靶特異酶類對前體藥物的活化在很長時間里都是研究的目標(biāo)，并且合成、測試了許多潛在的前體藥物以期某種腫瘤特異的酶能夠?qū)⑦@些前體藥物特異地轉(zhuǎn)化為有力的抗腫瘤試劑。許多研究者仍然活躍在此領(lǐng)域，利用設(shè)計成被多種酶類活化的前體藥物，這些酶類包括卩-葡萄糖醛酸酶(Woessneretal(2000)AnticancerResearch20，2289-2296)、DT心肌黃酶(Loadmanetal(2000)BiochemicalPharmacology59，831-837)和胸苷酸合成酶(Collinsetal(1999)ClinicalCancerResearch5，1976-1981)。作為此種前體藥物單一治療策略的替代方法，一些研究者試圖在施用前體藥物前將所需的酶遞送到腫瘤處。這樣的方法，經(jīng)常被稱為抗體介導(dǎo)的酶前體藥物療法(ADEPT)，其已經(jīng)在WO88/07378中被公開。在這個實施例中，該酶與能夠與腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合的單克隆抗體連接。在這種方法中，該酶被遞送到腫瘤位點上，在此其能夠作用于合適的前體藥物。相似的策略公開在，例如WO96/03151中，其中編碼酶的基因被遞送到腫瘤處，并一旦出現(xiàn)就表達所需的酶。這種策略經(jīng)常被稱為基因介導(dǎo)的酶前體藥物療法(GDEPT)。許多這些靶向策略中的一個重要原則是遞送到腫瘤位點的酶對宿主不應(yīng)是內(nèi)源性的(Aghieta1(2000)JGeneMed2，148-164)。內(nèi)源性酶類的出現(xiàn)會導(dǎo)致前體藥物的非特異性活化以及對正常組織的毒性。因此，這些酶-前體藥物療法研究的絕大部分使用細菌酶類(如羧肽酶G2、e-內(nèi)酰胺酶和硝基還原酶)來實施。盡管在位點特異前體藥物活化領(lǐng)域，至今的大多數(shù)工作集中在抗癌治療上，但最近已有來改造這類技術(shù)用于抗細菌應(yīng)用的努力。例如，WO99/32113描述了由細胞毒部分和p-內(nèi)酰胺部分組成的前體藥物的使用。在周質(zhì)空間包含P-內(nèi)酰胺酶的革蘭氏陰性細菌中，前體藥物被剪切而釋放細胞毒部分，而細胞毒部分隨后繼續(xù)干擾重要的細胞功能。然而這些前體藥物被限制在其應(yīng)用寬度內(nèi)，因為不是所有的細菌都表達P-內(nèi)酰胺酶，并且革蘭氏陽性細菌傾向于排出p-內(nèi)酰胺酶，從而失去了前體藥物的大部分有益的毒性定位作用。Smyth等人((1998)J.OrgChem.63，7600-7618)弓l入了S-aminosulfenimino-青霉素。這些化合物都是P-內(nèi)酰胺酶抑制劑和遞送多種試劑進入(3-內(nèi)酰胺酶陽性細菌的有效前體藥物模板。然而對于如上討論的P-內(nèi)酰胺酶衍生物，這些化合物在革蘭氏陽性細菌中的應(yīng)用有限，因為它們穿過外層膜的孔結(jié)構(gòu)速度慢，從而需要以不希望的高細胞外濃度以在革蘭氏陰性細菌中實現(xiàn)顯著地效果。卩-內(nèi)酰胺酶依賴性前體藥物的潛在缺點的去除已經(jīng)展現(xiàn)在WeiandPei的文章中((2000)Bioorg.Med.Chem.Lett.10，1073-1076)。這些研究者在概念上證明將細胞毒抗細菌試劑的5'二肽衍生物作為可被細菌肽去甲酰酶活化的前體藥物的應(yīng)用。使用這些前體藥物的初步結(jié)果顯示出相當(dāng)弱的抗細菌活性，然而這被推測是由于細胞對這些化合物的低攝入量造成的。人類寄生蟲病在世界上許多地方都是地方病。例如，利士曼病(通過一些種類的沙蠅的叮咬而被傳遞的由專性細胞內(nèi)原生蟲所引起的一種寄生性疾病)在全球熱帶和亞熱帶和歐洲南部的大約90個熱帶和亞熱帶國家中都有發(fā)現(xiàn)。世界上的皮膚利士曼病例中大于90%出現(xiàn)在非洲、阿爾及利亞、巴西、伊朗、伊拉克、秘魯、沙特阿拉伯和敘利亞。然而，在美國統(tǒng)計的病例中，大約75%是從拉丁美洲獲得，其中利士曼病出現(xiàn)在從北墨西哥(有時在南得克薩斯的鄉(xiāng)村)直到北阿根廷的范圍內(nèi)。世界上的內(nèi)臟利士曼病例中大于90%出現(xiàn)在孟加拉、巴西、印度、尼泊爾和蘇丹。相似地，査格斯病(通過錐蝽類昆蟲(triatomineinsects)傳遞給人類的鞭毛原生寄生蟲——克氏錐蟲所引起)的地理分布從墨西哥擴展到阿根廷南部。該疾病影響到1600-1800萬人口，并且大約1億人口(即大約占拉丁美洲人口的25%)處于換查格斯病的危險中。甚至只在寄生蟲地方病地區(qū)內(nèi)短暫停留也可能被感染，并且環(huán)球旅行的增加使得寄生蟲病成為發(fā)達國家的一個問題。已經(jīng)報道了對現(xiàn)在使用藥物的耐受性。耐受性問題需要使用毒性更高的藥物，并且由于藥效越來越低，所以需要發(fā)現(xiàn)新藥。本發(fā)明人現(xiàn)在驚人地發(fā)現(xiàn)硝基還原酶也似乎在特定的寄生性原生有機體中表達，并提出采他子卡(tretazicar)可在動物(例如人類)中高效地抵御寄生性侵染，這是因為動物(例如人類)宿主對該試劑不敏感而寄生蟲會被毒性作用。本發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)表明采他子卡可極其有效地針對特定的原生寄生蟲，從而本發(fā)明的主題是提供采他子卡作為高效的抗寄生蟲試劑。本發(fā)明第一方面提供了抗寄主有機體的寄生性原生動物感染的方法，該方法包括對寄主有機體施用采他子卡。寄主有機體優(yōu)選地是動物，更優(yōu)選地是哺乳動物并且最優(yōu)選地是人類。用本發(fā)明的方法進行治療的非人類哺乳動物包括馬、牛、豬、山羊、綿羊、犬、貓等。"抗感染"的含義包括該感染被根除或該感染被基本抑制。應(yīng)當(dāng)認識到為有效地治療寄主有機體，沒有必要殺死寄主有機體內(nèi)的所有寄生蟲。本發(fā)明第二方面提供了采他子卡在制備抗動物寄生性原生動物感染的藥物中的用途?；衔锊伤涌ㄊ?5-(氮丙啶-l-基)-2,4-二硝基苯甲酰胺(CB1954))，其結(jié)構(gòu)如下所示。采他子卡現(xiàn)在已經(jīng)用做抗癌癥試劑。采他子卡的注冊號是C.A.S.No21919-05-1，并且其合成已在Khan&Ross(1969/70)"Tumourgrowthinhibitorynitrophenylaziridinesandrelatedcompounds:structure-activityrelationships"Chem-BiolInteractions1,27-47andinCobbetal(1969)Biochem.Pharmacol.18，1519-1527中得到描述。該化合物能夠根除特定的大鼠腫瘤("沃克腫瘤"Walkertumour)，而對多種其他腫瘤作用很小或沒有作用(Cobbetal(1969)Biochem.Pharmacol.18，1519-1527)，并且在臨床腫瘤研究中未表現(xiàn)出治療益處(Knoxetal(1993)CancerandMetastasisRev.12，195-212)。已表明沃克腫瘤中的硝基還原酶能夠通過還原其4-硝基基團而形成化合物5-氮丙啶-4-羥基氨基-2-硝基苯甲酰胺來活化081954，其中該化合物在細胞內(nèi)硫脂存在時是有效的親電性DNA交聯(lián)劑(Knoxetal(1988)Biochem.Pharmacol.37,4661-4669;Knoxetal(1991)Biochem.Pharmacol.42，1691-1697)。人類細胞中的相應(yīng)酶的還原動力學(xué)較慢，從而賦予人類細胞對CB1954的不敏感性(Bolandetal(1991)Biochem.Pharmacol.41，867-875)。在細菌的一些機制研究中，已發(fā)現(xiàn)CB1954在硝基還原酶陰性菌株內(nèi)具有減低的毒性(VenittandCrofton-Sleigh(1987)Mutagenesis2,375-381)。通過原生寄生蟲相關(guān)的酶類活化采他子卡以形成抗寄生蟲試劑。術(shù)語"原生寄生蟲相關(guān)的酶類"是指酶或其異構(gòu)體，所述酶或其異構(gòu)體對構(gòu)成感染的原生寄生蟲具有特異性或所述酶或其異構(gòu)體被寄主有機體以功能性形式低限度地表達，從而宿主有機體賦予采他子卡任何活化，，其中所述的表達不足以引起不可接受的寄主毒性，而所述酶由原生寄生蟲表達。通常，寄生蟲相關(guān)的酶在活化該化合物方面，其活性是寄主有機體內(nèi)出現(xiàn)的酶10倍或20倍或50倍或100倍或500倍或1000倍。應(yīng)當(dāng)認識到，寄主有機體內(nèi)源性的酶基本上不能改變采他子卡，采他子卡基本上是被原生寄生蟲中一種或多種酶活化。"被活化以形成抗寄生蟲試劑"的含義包括采他子卡被轉(zhuǎn)化成有細胞毒性(特別對原生寄生蟲有細胞毒性)的形式。相似地，應(yīng)當(dāng)認識到本發(fā)明的方法和藥物特別適用于抗原生寄生蟲感染，其中原生寄生蟲是包含能夠?qū)⒉伤涌ɑ罨癁榛旧蠟榧毎拘问降拿赶到y(tǒng)的寄生蟲。確定某一原生寄生蟲是否對采他子卡應(yīng)答的一個方法在實施例中描述。這樣的原生寄生蟲被采他子卡所殺死。適當(dāng)?shù)兀苡貌伤涌ㄖ委煹脑纳x感染是采他子卡的IQ。低于10微摩爾，優(yōu)選的低于5微摩爾，更優(yōu)選的低于l微摩爾的原生寄生蟲感染。確定某一原生寄生蟲是否包含能夠?qū)⒉伤涌ɑ罨癁榛旧蠟榧毎拘问降拿傅钠渌椒ㄊ潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的。這些方法包括但不局限于使用合適的計算機程序，例如威斯康辛大學(xué)遺傳計算小組的GAP程序，以比較原生動物的基因序列和已知包含硝基還原酶物種的基因序列或應(yīng)用分類技術(shù)，從而在用采他子卡測試前檢測、分離純化了相關(guān)的酶。采他子卡被認為一旦被寄生蟲內(nèi)的酶系統(tǒng)活化成細胞毒形式，其就能夠共價交聯(lián)原生寄生蟲的核酸。由于采他子卡只在被寄生蟲相關(guān)的酶活化時才變成具有這樣的能力，所以認為在寄主細胞中采他子卡的出現(xiàn)不具有危險，這是因為寄主細胞中不具有相匹配的酶活性。通過氮雜環(huán)丙烷(或芥末)基團將采他子卡結(jié)合到寄主細胞組分上，只會造成很小的細胞破環(huán)危險，這是因為據(jù)認為任何單功能結(jié)合(mono-functionally)的化合物可被寄主的修復(fù)性酶過程所去除(Knoxetal(2003)CurrentPharmaceuticalDesign9,2091-2104)。我們認為負責(zé)活化該化合物的寄生蟲相關(guān)的酶，在例如氧化和低氧條件下都具有硝基還原酶活性。在一個具體實施方式中，采他子卡可用于選擇性抑制那些對現(xiàn)在使用的一種或多種抗生素具有耐受性的寄生蟲。在本發(fā)明的一個具體實施方式中，動物也被施用一種或多種已知的用于寄生蟲感染的化合物。所述的采他子卡和一種或多種其他化合物可一起或相繼施用。用于抗寄生蟲感染的已知化合物包括米索硝唑(Misonidazole)、如硝呋替莫(Nifurtimoxs)和RSU1069的硝基雜環(huán)化合物(nitroheterocyclics)、如葡萄糖酸銻鈉的芐硝唑(Benznidazole)和如米替福新(Miltefosine)的乙酰膽堿衍生物。這樣，本發(fā)明其他方面提供了采他子卡和一種或多種其他已知的用于動物抗寄生蟲感染的化合物的組合在制備抗動物寄生蟲感染藥物中的用途；以及采他子卡在制備動物抗寄生蟲感染藥物中的用途，其中動物被施用一種或多種其他已知的用于動物抗寄生蟲感染的化合物；以及一種或多種其他已知用于動物抗寄生蟲感染的化合物在制備抗動物寄生蟲感染藥物中的用途，其中動物被施用采他子卡。本發(fā)明的方法和藥物在抗克氏錐蟲(7^盧mwomacn^')、布氏錐蟲(77.6wce/)、利什曼原蟲(i^^/mam'as/^.)尤其是嬰兒利什曼原蟲(丄.^/anYwm)、隱孢子蟲(C/^ptos/onW/wmw/.)和賈第鞭毛蟲(G/aW/as//.)中的一種或多種的感染方面具有特別的用途。本發(fā)明另一方面提供了采他子卡與一種或多種其他已知的用于寄主有機體抗寄生蟲感染的化合物的組合。該組合可包裝并用于藥物。在另一具體實施方式中，該組合可另外與藥學(xué)可接受的載體組合以形成藥學(xué)組合物。藥學(xué)組合物可包括，例如采他子卡和滅菌的無熱源水。通常，該藥學(xué)組合物為液體形式，其存在于用鹽溶液稀釋的聚乙二醇/N-甲基吡咯垸酮(PEG/NMP)中(Chung-Fayeetal(2001)ClinicalCancerResearch7,2662-2668)。優(yōu)選的具體實施方式是口服施用的藥學(xué)組合物。方便地，該藥物組合物是包含采他子卡的明膠膠囊。通常，該藥物組合物是可以腸道釋放的膠囊或片劑，例如利用能夠在腸內(nèi)溶解的包衣。制備這樣的膠囊和片劑的方法是本領(lǐng)域已知的。所鑒定的一種或多種化合物以合適的形式以及抗感染有效的量施用于寄主有機體。合適地，獸醫(yī)(在非人類動物的情況下)或醫(yī)療(在人類的情況下)從業(yè)者能夠選擇恰當(dāng)?shù)氖┯猛緩胶颓‘?dāng)?shù)膭┝炕騽┝糠桨浮Ｒ钥辜纳x感染有效量以單劑量或者多劑量施用一定量的采他子卡。對施用于動物(包括人類)，恰當(dāng)?shù)氖┯猛緩桨ǖ痪窒抻陟o脈內(nèi)、透皮和吸入方式。通常，對于通過輸注對人類施用，施用采他子卡的一次劑量(dose)最多為30mg/ml?？诜┯靡彩呛线m的，例如使用如上討論的明膠膠囊。采他子卡可通過多種依賴感染性試劑的性質(zhì)和定位的途徑給藥。因此，提供了多種不同藥學(xué)形式的組合物，這些對本領(lǐng)域技術(shù)人員是清楚的。現(xiàn)在通過參照以下的圖和非限制性的實施例更詳細地描述本發(fā)明。圖1顯示采他子卡在BALB/c小鼠中對杜氏利什曼原蟲HU3aJo"oww/7/[/3)的活性(每日腹腔給藥)。圖2顯示采他子卡在BALB/c小鼠中對杜氏利什曼原蟲HU3的活性(每日靜脈內(nèi)給藥)。圖3顯示采他子卡在BALB/c小鼠中對杜氏利什曼原蟲HU3的活性(每日靜脈內(nèi)給藥)。實施例l:采他子卡的抗寄生蟲活性使用整合的體外篩選系統(tǒng)針對大量寄生性有機體篩選采他子卡，并針對該有機體所選擇的治療進行了比較(表l)。如表1所示，采他子卡對嬰兒利什曼蟲和克氏錐蟲極其有效，其比已有的試劑有效得多。對大量人細胞系的細胞毒分析通常得到的ICso值>50^iM，并且針對這兩種有機體的治療比率因而很可觀(對克氏錐蟲>16，000，對嬰兒利什曼蟲>625)。盡管不如蘇拉明(suramin)有效，采他子卡針對克氏錐蟲的治療比率仍>10。未觀察到針對蛇形毛圓線蟲(r.coZwZn/orm/s)或鐮狀癥原蟲CP/aswoA'wm/a/";parwm)的觀!j試菌株的活性，推測可能因為它們不表達能夠?qū)⒉伤涌ɑ罨癁榧毎拘问降拿赶到y(tǒng)?？紤]到采他子卡已經(jīng)證明的臨床可接受性，該試劑代表了治療寄生性感染的新型前體藥物途徑，尤其是治療利什曼病(leishmaniasis)和査格斯病(Chagas5disease)0表1.采他子卡針對特定寄生蟲的體外數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>在BALB/c和SCID小鼠中測試采他子卡針對杜氏利什曼原蟲的體內(nèi)活性。動物的感染和治療如Croft禾nYardley描述的進行，可參考(Croft&Yardley(1999)Animalmodelsofvisceralleishmaniasis.InHandbookofAnimal一delsofInfection,Zak，O.(ed)pp783-787,AcademicPress,London)。在治療結(jié)束時，對小鼠稱重以給出藥物毒性的評估。從剛處死的動物中取出肝臟并稱重。其后用肝臟在顯微鏡載玻片上制備涂片，并用甲醇固定、吉姆薩染料染色。對每個實驗動物，通過顯微鏡確定每500個肝臟細胞的寄生蟲數(shù)。該數(shù)字乘以總肝臟重量(mg)，并用作計算處理和未處理動物之間寄生蟲載量差異的基礎(chǔ)(00&&Yardley,1999同上)。如圖1-3所示，針對采他子卡濃度，抑制的寄生蟲數(shù)量存在顯著的對數(shù)/線性劑量反應(yīng)。在這些實驗中未觀察到通過測量體重下降測量到的藥物相關(guān)毒性，并且直到使用10mg/kgx5的劑量時，仍未觀察到顯著的毒性。得到的EDso值顯示在表2中。采他子卡在BALB/c和免疫缺陷SCID小鼠中相等的活性說明該治療不是免疫依賴的。這可以從假設(shè)的作用機制中預(yù)知。在這些實驗中，使用以其MTD(15mg/kgx5SC)的葡萄糖酸銻鹽作為對照化合物。該劑量在BALB/c小鼠中的寄生蟲計數(shù)中只達到52+-15.2%抑制，并且在SCID小鼠中只有很小的作用。已知葡萄糖酸銻鹽的體內(nèi)功效是T細胞依賴的(Murrayetal(1993)[Lambda]ntimicrob.AgentsChemother.37,1504-1505)。在動物模型中，采他子卡的活性顯著比標(biāo)準(zhǔn)抗利什曼藥物高(將表1中的數(shù)據(jù)與Croft&Yardley，1999同上中的數(shù)據(jù)比較)。采他子卡在體內(nèi)也對克氏錐蟲有效。如在表3中顯示的，被感染但未治療的BALB/c小鼠平均只存活13.8天。在0.3mg/kg(腹腔內(nèi)x5，每日)的劑量下，所有動物終止實驗前存活50天。然而，此劑量下，在第13天仍可以在血液中檢測到寄生蟲。3mg/kg(腹腔內(nèi)x5，每日)的劑量從血液中清除掉所有的寄生蟲。而需要45mg/kg(口服x5每日)劑量的節(jié)硝唑以產(chǎn)生相等的效果。表2.采他子卡針對杜氏利什曼原蟲HU3的活性<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>感染的新型前體藥物途徑，尤其是治療利什曼病和查格斯病。銀籍遂膽査格斯氏病體外篩選模型克氏錐蟲(MHOM/CL/00/Tulahuen):克氏錐蟲終顛潘應(yīng)潛孝使用被P半乳糖苷酶(LacZ)基因轉(zhuǎn)染的克氏錐蟲(MHOM/CL/00/Tulahuen)(Buckneretal(1996)AntimicrobialAgentsandChemotherapy40(11),2592-2597)。該菌株維持在L-6(從EuropeanCollectionofAnimalCellCultures(ECACC,Salisbury,UK)獲得的大鼠骨骼肌成肌細胞系)細胞層中，該細胞層存在于添加10%熱滅活胎牛血清的RPMI1640w/o酚紅培養(yǎng)基中。所有的培養(yǎng)和分析在37。C、含5。/。C02的空氣環(huán)境下進行。秀激敏微力W在100%DMSO(二甲基亞砜)中制備20mg/ml的采他子卡貯液。使用前將該貯液保存在室溫陰暗處。在分析中，使用完全培養(yǎng)基將該化合物進一步稀釋到恰當(dāng)?shù)臐舛?。在滅菌?6孔微滴平盤中進行，每孔中包含lOOpl的培養(yǎng)基，內(nèi)含2xlO3個L-6細胞。24小時后，向孔中添加5(Hil含有從培養(yǎng)物中獲得的5x103個鞭毛蟲期錐期血液形式(trypomastigotebloodstreamforms)的錐蟲懸浮液。48小時后，從孔中去除培養(yǎng)基，并用含或不含系列藥物稀釋物的lO(Hd新鮮培養(yǎng)基替換。溫育72小時后，在倒置顯微鏡下檢査平板以確認對照的生長和無菌狀態(tài)，并測定最小抑制濃度(MIC):這是最小的藥物濃度，在此濃度下不能觀察到與對照孔相比，正常形態(tài)的錐蟲。硝呋替莫用做參照藥物。向所有孔中添加底物CPRG/Nonidet(50pl)。在2-6小時內(nèi)可見顏色反應(yīng)，并在540nm處讀取光度值。將與對照孔相比寄生蟲負載(寄生蟲數(shù)量)減少的百分比轉(zhuǎn)到圖形程序(EXCEL)中，確定S形抑制曲線并且計算IC5()值。微廢遂在4個濃度(30-10-3-1嗎/ml)下每個濃度3次測試該化合物。硝呋替莫作為參照藥物。當(dāng)ICso高于15嗎/ml時，該化合物被歸類為無效。當(dāng)IC5Q在15-5嗎/ml時，該化合物被認為是中度有效。當(dāng)IC5Q低于5嗎/ml時，該化合物被歸類為高活性，并在第二次篩選中進一步被評估。第二次艇使用相同的規(guī)程，并使用恰當(dāng)調(diào)整的擴展劑量范圍確定IC5o。利什曼病體外篩選終A微層孝使用利什曼原蟲(杜氏利什曼原蟲LeishmaniadonovaniMHOM/ET/67/L82,也稱為LV9,HU3)的一株。該株維持在敘利亞倉鼠(Mesocricetusauratus)中。從感染的倉鼠的脾臟收集無鞭毛體，并使用斯塔博(Stauber)技術(shù)評定脾臟的寄生蟲負載。用腹腔注射2ml的2%可溶性淀粉來刺激巨噬細胞的產(chǎn)生，其后1或2小時收集原發(fā)性腹膜小鼠(CD1)巨噬細胞。所有的培養(yǎng)和分析在37。C、含5%(:02的空氣環(huán)境下進行。微敎微分,在100%DMSO中制備20mg/ml的采他子卡貯液并保存在室溫陰暗處。在分析中，貯液在添加10。/。熱滅活胎牛血清的RPMI1640中預(yù)稀釋到60mg/ml。分析在滅菌的16孔組織培養(yǎng)片中進行，每孔中包含50|J該化合物的稀釋物以及巨噬細胞/寄生蟲接種物(4x105個巨噬細胞/ml和4xl()S個寄生蟲/ml)。接種物在添加10%熱滅活胎牛血清的RPMI1640中制備。將寄生蟲生長與對照孔(100%寄生蟲生長)相比較。溫育5天后，用10%吉姆薩溶液對細胞染色后，在顯微鏡下評定寄生蟲的生長。通過計數(shù)每100個巨噬細胞中被感染的巨噬細胞數(shù)量來評估每孔的感染水平。結(jié)果表示為與對照孔相比寄生蟲負載的降低百分比，并將結(jié)果轉(zhuǎn)到圖形程序(EXCEL)中，確定S形抑制曲線并且計算IQo值。微,遂在4個濃度(30-10-3-1昭/ml)下每個濃度4次測試該化合物。斯銻黑克(Pentostan^)(葡萄糖酸銻鈉)作為參照藥物。當(dāng)ICso高于15昭/ml時，該化合物被歸類為無效。當(dāng)ICso在15-5pg/ml時，該化合物被認為是中度有效。當(dāng)lCso低于5^ig/ml時，該化合物被歸類為高活性，并在第二次篩選中進一步被評估。第二汰,遂使用相同的規(guī)程，并使用恰當(dāng)調(diào)整的擴展劑量范圍確定IC5Q。斯銻黑克(Pentostan^)作為參照藥物。權(quán)利要求1.抗寄主有機體的寄生性原生動物感染的方法，該方法包括對寄主有機體施用采他子卡。2.采他子卡在制備抗動物寄生性原生動物感染的藥物中的用途。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述寄主有機體是動物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法或根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述動物是哺乳動物。5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法或用途，其中所述哺乳動物是人類。6.根據(jù)以上任一項權(quán)利要求的方法或用途，其中引起感染的寄生蟲與將采他子卡活化為細胞毒形式的酶系統(tǒng)相關(guān)。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法或用途，其中所述酶是硝基還原酶。8.根據(jù)以上任一項權(quán)利要求的方法或用途，其中寄主有機體是不內(nèi)源性地包含酶系統(tǒng)的有機體，該酶系統(tǒng)對采他子卡活化的程度會引起對寄主有機體或動物不可接受的毒性。9.根據(jù)以上任一項權(quán)利要求的方法或用途，其中引起感染的寄生蟲是耐受抗生素的寄生蟲耐受性。10.根據(jù)權(quán)利要求2的用途或根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中動物的寄生蟲感染由一種或多種以下寄生蟲引起克氏錐蟲、布氏錐蟲、利什曼原蟲，尤其是嬰兒利什曼原蟲、隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲。11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中寄主有機體也被施用一種或多種已知的用于抗寄生蟲感染的化合物。12.采他子卡和一種或多種其他已知的用于動物抗原生寄生蟲感染的化合物的組合在制備抗動物寄生蟲感染的藥物中的用途。13.采他子卡在制備動物抗原生寄生蟲感染藥物中的用途，其中動物被施用一種或多種其他已知用于動物抗寄生蟲感染的化合物。14.一種或多種其他已知的用于動物抗原生寄生蟲感染的化合物在制備抗動物寄生蟲感染的藥物中的用途，其中所述動物被施用采他子卡。15.采他子卡和一種或多種其他已知的用于寄主有機體抗原生寄生蟲感染的化合物的組合。16.根據(jù)權(quán)利要求15的組合，其中所述寄主有機體是動物。17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合，其用于藥物中。18.藥物組合物，其包含權(quán)利要求16中定義的組合和藥學(xué)可接受的載體。全文摘要抗寄主有機體中寄生性原生動物感染的方法，該方法包括對寄主有機體施用采他子卡。采他子卡是化合物5-(氮丙啶-1-基)-2，4-二硝基苯甲酰胺(CB1954)，并且寄生性感染優(yōu)選地是克氏錐蟲、布氏錐蟲、利什曼原蟲尤其是嬰兒利什曼原蟲、隱孢子蟲和賈第鞭毛蟲的感染。文檔編號A61K31/396GK101282723SQ200680032152公開日2008年10月8日申請日期2006年9月4日優(yōu)先權(quán)日2005年9月3日發(fā)明者理查德·約翰·諾克斯,羅杰·梅爾頓,菲利普·約翰·伯克申請人:莫沃斯技術(shù)有限公司