專利名稱：：緩釋的抗感染藥的制作方法緩釋的抗感染藥相關申請本申請是2004年12月28日登記的美國專利申請序列No.11/023,971的繼續(xù)申請，后者是2003年10月29日登記的美國專利申請序列No.10/696,389的繼續(xù)申請，該申請要求享有2002年10月29曰登記的美國臨時專利申請序列No.60/421,923的權益。介紹某些適于吸入給藥的緩釋技術使用脂質體和脂質復合物通過緩釋和尋靶能力以及提高藥物在疾病位點的吸收來向肺部和全身提供延長的藥物治療效果。本發(fā)明包括一種脂質體抗感染藥物，以及使用脂質體或脂質-復合抗感染藥物來治療肺部感染的方法。正如Goodman和Gilman's在ThePharmaceuticalBasisofTherapeutics第八版中所報導的,"由于腎中毒和耳中毒發(fā)病率與氨基糖苷積累達到的濃度有關，因此減少這些藥物在腎功能損傷患者中的維持劑量是至關重要的。"由于氨基糖苷能夠導致前庭或聽覺功能障礙和腎中毒而不顧患者的損傷，因此減少維持劑量通常是重要的。本發(fā)明顯著降低了毒性，因此允許使用比慣用劑量高的劑量。嚢性纖維化(CF)患者的肺中具有厚的粘液和/或痰液分泌物、頻繁的相繼感染和由細菌入侵產生的生物薄膜。所有這些液體和材料都為抗感染藥有效地尋靶感染制造了障礙。本發(fā)明克服了這些障礙，甚至能夠降低劑量(在總量或在頻率上)，因此減少了藥物代給患者的負擔。對于肺部感染，通常本發(fā)明所提供的劑量方案提供了一種減輕藥物負擔的方法。對于脂質藥物傳輸系統來說，通常期望盡可能地降低脂質與藥物(L/D)的比例以使脂質負擔最小化從而避免體內的飽和效應。對于通過吸入進行的肺傳輸來說，這一點是特別正確的因為對于長期使用來說，脂質體的劑量可以會超過清除率并因此限制給藥并且因此限制藥物產品的效果。低L/D比將使得在達到劑量/清除率閾值之前能夠給予更多的藥物。發(fā)明簡介通過本文所公開的注入法，能夠制備出基本不含中等尺寸(<1pm)的陰離子脂質的脂質體，該脂質體以一般為約4:1到約0.5:1的脂質/抗感染藥物重量比來包埋抗感染藥物。測量了脂質體的包埋體積，由這些數字能夠計算出在抗感染藥物表現為溶解物(即，其不會與脂質體膜相互作用但能夠與水一起理想地包埋)時的理論包埋量。通過該對比，觀察到的包埋量數值比預期的高3-5倍，這表明發(fā)生了特異性的相互作用使得包埋量大于預期值并且脂質/抗感染藥物比小于預期值。脂質體形成于其中的溶液含有一定濃度的抗感染藥物，脂質體內抗感染藥物的濃度應當與溶液中的濃度大體相同。然而，計算出的內部抗感染藥物濃度至少是溶液中濃度的約3倍高。部分地，本發(fā)明的特征在于一種脂質體抗感染藥物制劑，其包含脂質制劑和抗感染藥物，其中所述脂質制劑基本上不含陰離子脂質，并且其中脂質與抗感染藥物的重量比為約4:1到約1:1。在某些實施方式中，脂質與抗感染藥物的重量比為約3:1到約1:1，2:1到約1:1，或為約1:1。在一些實施方式中，本發(fā)明涉及一種包含抗感染藥物的脂質制劑，其中脂質與抗感染藥物的比為約1:1或更低，為約0.75:1或更低，或為約0.5:1或更低。在某些實施方式中，脂質抗感染制劑所包含的脂質體的平均直徑為約0.2pm到約l.Opm。在某些其它實施方式中，所述平均直徑為約0.2]im到約0.5pm。在某些其它實施方式中，所述平均直徑為約0.2pm到約0.3,。在某些實施方式中，所述抗感染藥物可以是本領域通常已知的任何抗感染藥物。在某些實施方式中，所述抗感染藥物可以是氨基糖苷，其包括但不限于，阿米卡星、妥布霉素或慶大霉素，或者它們的藥學上可接受的鹽。在某些實施方案中，脂質制劑包含中性脂質。在某些實施方案中，脂質制劑不含陰離子脂質。在某些其它實施方案中，所述脂質是磷脂，其包括但不限于，卯磷脂例如二棕櫚酰磷脂酰膽堿或二油酰磷脂酰膽堿；或者所述脂質可以是類固醇例如甾醇，其包括但不限于，膽固醇；或者所述脂質可以是它們的組合。部分地，本發(fā)明的特征在于上述脂質抗感染藥物制劑的制備方法，其包括在低于中性脂質至少一種脂質組分的相變溫度下向抗感染藥物的水或醇溶液或混合物中注入脂質-醇溶液或混合物，其中注入是從上方進行的。在某些實施方式中，所述醇是乙醇。在某些實施方式中，脂質-醇溶液或混合物的濃度為約10到約30mg/mL。在某些實施方式中，抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的濃度為約20到約70mg/mL。在某些實施方式中，中性脂質-醇溶液或混合物的濃度為約10到約30mg/mL,并且抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的濃度為約20到約70mg/mL。然而，本領域普通技術人員能夠理解，所述濃度是可以根據其所包含的脂質和/或抗感染藥物而改變或優(yōu)化的。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中抗感染藥物選自以下藥物氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、(3-內酰胺、|3-內酰胺和(3-內酰胺酶抑制劑、氯霉素、大環(huán)內酯、林可霉素、氯潔霉素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜類、氯苯吩。秦、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嗜啶、咪唑類、三唑類、灰黃霉素、特康唑、布康唑、環(huán)己吡酮乙醇胺(ciclopirax)、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)躊退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中抗感染藥物是氨基糖苷。在進一步的實施方式中，抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖普。在進一步的實施方式中，抗感染藥物是阿米卡星。在進一步的實施方式中，抗感染藥物是慶大霉素。在進一步的實施方式中，抗感染藥物是妥布霉素。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中所述脂質制劑是脂質體。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中所述脂質制劑包含磷脂。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含類固醇。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含甾醇。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含二椋櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含膽固醇。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含磷脂和類固醇。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含磷脂和甾醇。在某些實施方式中，所述脂質制劑包含DPPC和膽固醇。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的制劑，其中所述脂質制劑包含DPPC、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)和膽固醇。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的制劑，其中所述脂質制劑包含的DPPC和膽固醇的摩爾比為約20:1、10:1、5:1、2:1或1:1。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的制劑，其中所述脂質制劑包含的DPPC、DOPC和膽固醇的摩爾比為約5-20:1-20:0.5-1。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中所迷脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中所述脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質制劑包含磷脂和甾醇。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及上述的脂質制劑，其中所述脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質制劑包含DPPC和膽固醇。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及包含抗感染藥物的脂質制劑的制備方法，其包括將脂質溶液或混合物的物料流與抗感染藥物溶液或混合物的物料流混合，其中二種物料流是在管線內混合的。在某些實施方式中，在在管線內混合之前兩種物料流先進入一個Y形連接器中。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中脂質溶液或混合物物料流和抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約700到約900mL/mm的總流量混合的。在某些實施方式中，脂質溶液或混合物物料流和抗感染藥物溶液或混合物料流是以約800mL/min的總流量混合的。在某些實施方式中，脂質溶液或混合物物料流是以約200到約400mL/min的流量加入的。在某些實施方式中，脂質溶液或混合物物料流是以約300mL/min的流量加入的。在某些實施方式中，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約400到約600mL/min的流量加入的。在某些實施方式中，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約500mL/min的流量加入的。在某些實施方式中，脂質溶液或混合物物料流是以約300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以在約500mL/min的力fu量力o入的。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中混合物料流的溫度是約30-40°C。在某些實施方式中，脂質溶液或混合物的溫度是約3(TC,抗感染藥物溶液或混合物的溫度是約30°C。在某些實施方式中，脂質溶液或混合物的溫度是約50°C,抗感染藥物溶液或混合物的溫度是室溫。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中含有抗感染藥物的脂質制劑的制備方法進一步包括在混合后將混合物物料流用水稀釋至少約20秒的步驟。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物的濃度是約30到約50mg/mL。在某些實施方式中，抗感染藥物溶液或混合物的濃度是約40到約50mg/mL。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中脂質溶液或混合物物料流是以約300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以約500mL/min的流量加入的；混合物料流的溫度是約30-4(TC;混合后將混合物料流用水稀釋至少約20秒；并且抗感染藥物溶液或混合物的濃度是約40到約50mg/mL。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述溶液或混合物是含水的或是含醇的。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述抗感染藥物選自氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、(3-內酰胺、P-內酰胺和(3-內酰胺酶抑制劑、氯霉素、大環(huán)內酯、林可霉素、氯潔霉素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜類、氯苯吩嗪、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嘧t定、咪唑類、三唑類、灰黃霉素、特康唑、布康唑、環(huán)己吡酮乙醇胺、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)癬退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。在某些實施方式中，所述抗感染藥物是氨基糖普。在進某些實施方式中，所述抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖苷。在某些實施方式中，所述抗感染藥物是阿米卡星。在某些實施方式中，所述抗感染藥物是慶大霉素。在某些實施方式中，所述抗感染藥物是妥布霉素。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質包含磷脂。在某些實施方式中，所述脂質包含類固醇。在某些實施方式中，所述脂質包含甾醇。在某些實施方式中，所述脂質包含DPPC。在某些實施方式中，所述脂質包含膽固醇。在某些實施方式中，所述脂質包含磷脂和甾醇。在某些實施方式中，所述脂質包含DPPC和膽固醇。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質體包含磷脂和甾醇。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質包含DPPC和膽固醇。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中在所述脂質制劑中脂質與抗感染藥物的比為約1:1或低于1:1。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中在所述脂質制劑中脂質與抗感染藥物的比為約0.75:1或低于0.75:1。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中在所述脂質制劑中脂質與抗感染藥物的比為約0.5:1或低于0.5:1。在某些實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，抗感染藥物是阿米卡星，所述脂質包含DPPC和膽固醇，并且脂質與抗感染藥物的比為約1:1或低于1:1。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及在需要的患者中治療肺部感染的方法，其包括向患者給藥以治療有效量的脂質抗感染藥物制劑，所述脂質抗感染藥物制劑包含脂質制劑和抗感染藥物，其中所所述抗感染藥物的劑量為約100mg/天或少于100mg/天。在進一步的實施方式中，所述抗感染藥物的劑量為約30mg到約50mg每兩天。在進一步的實施方式中，所述抗感染藥物的劑量為約30mg到約50mg每三天。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所所述脂質體的平均直徑為約0.2pm到約1.0jam。在進一步的實施方式中，所述脂質體的平均直徑為約0.2pm到約0.5|nm,或約0.2pm到約0.3在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中肺感染是嚢性纖維化的結果。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述脂質與抗感染物的重量比為約4:1到約0.5:1,約3:1到約0.5:1,約2:1到約0.5:1,或者約1:1到約0.5:1。在另一實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的方法，其中所述抗感染藥物選自氨基糖苷、四環(huán)素、磺胺、對氨基苯曱酸、二氨基嘧啶、喹諾酮、|3-內酰胺、(3-內酰胺和(3-內酰胺酶抑制劑、氯霉素、青霉素、頭孢菌素、大環(huán)內酯、林可霉素、氯潔霉素、皮質類甾醇(coricosteroids)、前列腺素、奇霉素、多粘菌素B、粘菌素、萬古霉素、桿菌肽素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、氨基水楊酸、環(huán)絲氨酸、巻曲霉素、砜類、氯苯吩嗪、瑟利德米、多烯抗真菌劑、氟胞嘧啶、咪唑類、三哇類、灰黃霉素、特康哇、布康口坐、環(huán)己吡酮乙醇胺、環(huán)吡酮胺、卣丙炔氧苯、發(fā)癬退、萘替芬、特比萘芬或它們的組合。在另一個實施方式中，所述抗感染藥物是氨基糖苷。在另一個實施方式中，所述抗感染藥物是阿米卡星。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述脂質制劑包含中性脂質。在另一個實施方式中，用于制備脂質制劑的脂質全部是中性脂質。在另一個實施方式中，所述脂質體不含陰離子脂質。在另一個實施方式中，所述脂質制劑包含磷脂。在另一個實施方式中，脂質制劑包含甾醇。在另一個實施方式中，所述脂質制劑包含DPPC和膽固醇。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，并且脂質制劑包含DPPC和膽固醇。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質與抗感染藥物的重量比為約4:1到約1:1,并且脂質制劑包含DPPC和膽固醇。在進一步的實施方式中，所述重量比為約3:1到約1:1,2:1到約1:1,或者為約l:l。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質與抗感染藥物的重量比為約4:1到約1:1,脂質制劑包含DPPC和膽固醇，并且肺部感染是嚢性纖維化的結果。在一個進一步的實施方式中，所述重量比為約3:1到約1:1，2:1到約1:1,或者為約1:1。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質與抗感染藥物的重量比為約4:1到約0.5:1，脂質制劑包含DPPC和膽固醇，并且脂質體的平均直徑為約0.1pm到約0.5|um。在進一步的實施方式中，所述平均直徑為約0.2pm到約0.4pm,或約0.2|um到約0.3|tim。在另一個實施方式中，本發(fā)明涉及如上所述的治療方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星，脂質與抗感染藥物的重量比為約4:1到約0.5:1，脂質制劑包含DPPC和膽固醇，肺部感染是由嚢性纖維化導致的，并且脂質體的平均直徑為約0.1到約1.0jim。在進一步的實施方式中，所述平均直徑為約0.2iiim到約0.5|LAm,或為約0.2|im到約0.3,。從下述說明書、附圖和權利要求來看本發(fā)明的這些實施方式，其它實施方式，和它們的特征和特性是顯而易見的。附圖簡介圖1描述了在患有嚢性纖維化的患者中所看到的痰液/生物薄膜的圖2描述了本發(fā)明藥物的尋靶和庫存作用的示意圖。圖3和圖4描述了多種形式的阿米卡星的細菌學活性示意圖。圖5描述了脂質體/復合的阿米卡星和妥布霉素的緩釋示意圖。圖6描述了關于單體或復合的環(huán)丙沙星的數據。圖7描述了多種劑量方案給出的肺中藥物殘留的示意圖。圖8描述了制備脂質體抗感染制劑的兩物料流管線內注入法的示意圖。圖9描述了硫酸阿米卡星與乙醇/水的混溶性。直線代表室溫(RT)和40。C下，能夠與乙醇溶液混溶的最大阿米卡星濃度(堿)。在較高的濃度下阿米卡星形成了單獨的液相(凝聚層)，其后來沉淀為晶體。垂直的線表示在脂質/阿米卡星注入混合物(300/500份)中的和加入200份水后的乙醇濃度。發(fā)明詳述本發(fā)明公開了一種包含感染藥物的脂質制劑，其中該脂質制劑的尺寸以及脂質與藥物的比要比先前已知的小。本發(fā)明還公開了這些脂質制劑的制備方法。/.定義為了方便，在進一步描述本發(fā)明前，此處收集了說明書、實施例和所附權利要求中使用的某些術語。這些定義應當根據發(fā)明公開的其余部分來理解，并且由本領域技術人員理解。除非另外定義，本文使用的所有技術和科學術語的意思與本領域普通技術人員理解的相同。本文中冠詞"一個"和"一種"用于指代該冠詞表示的一個或多于一個(即至少一個)這樣的語法目的。例如"一種組分"是指一種或多于一種的組分。術語"生物可利用的"是本領域公認的，是指允許被所給予的個體或者患者吸收、摻入、或其它生理學可獲得的本發(fā)明的一種形式，或給予量的一部分。術語"包括"和"包含"是用于表示包含在內的，開放的意思，是指可以包含其它成分。術語"包嚢的"和"包嚢"是指將抗感染藥物吸附在脂質基制劑的表面上、在雙層或兩個單層之間的間隙區(qū)域結合抗感染藥、在雙層之間的空間內包埋抗感染藥、或在雙層的最內層或單層所圍繞形成的空間內包埋抗感染藥。本文中術語"包括"是用于指"包括但不限于"。"包括"和"包括但不限于"可以互換使用。本文所討論的術語"脂質抗感染藥物制劑"或"Lip-抗感染藥物"或"Lip-An"是指任何形式的抗感染藥物組合物，其中按重量計至少約1%的抗感染藥物與脂質相關，其或者作為與脂質復合物的一部分，或者作為脂質體，在該脂質體中抗生素可以處于水相或疏水的雙層相或脂質體雙層的分界面首基區(qū)域中。優(yōu)選地，至少約5%，或至少約10%,或至少約20%,或至少約25%能夠如上所述地結合。結合可以通過用過濾器分離而測定，其中脂質和脂質-結合的抗感染藥物得到保留而抗感染藥物單體則在濾液中。"脂質體抗感染藥物制劑"是指其中脂質基是脂質體形式的脂質抗感染藥物制劑。術語"哺乳動物"是本領域已知的，示例性的哺乳動物包括人、靈長類動物、牛、豬、狗、貓和嚙齒類動物(例如，小鼠和大鼠)。通過本方法治療的"患者"、"個體"或"宿主"可指人或非人類動物。術語"藥學上可接受的鹽"是本領域公認的，是指化合物的相對無毒的無機和有機酸加成鹽，其包括，例如那些包含于本發(fā)明組合物中的鹽。術語"溶劑注入"是一種方法，其包括將一種或多種脂質溶解于少量的，優(yōu)選最小限度量的方法相容的溶劑中形成脂質懸浮液溶液(優(yōu)選溶液)，然后將該溶液加入到含有生物活性劑的含水介質中。代表性的方法相容的溶劑是在例如透析的含水處理中可被洗去的溶劑。被冷/熱循環(huán)的組合物優(yōu)選通過溶液注入形成，其中乙醇注入是優(yōu)選的。優(yōu)選醇作為溶劑。"乙醇注入"是一類溶液注入，該方法包括將一種或多種脂質溶于少量，優(yōu)選最小限度量的乙醇中形成脂質溶液，然后將該溶液加入到含有生物活性劑的含水介質中。"少量"的溶劑是在注入過程中適合于形成脂質體或脂質復合物的量。術語"溶液注入"還可以包括管線內注入法，其中制劑組合物的兩種物料流首先進行在管線內混合。術語"基本上不含"是本領域公認的，其是指微小或比微小更小的量。術語"治療劑"是本領域公認的，是指任何的化學部分，所述化學部分是能夠局部或全身地作用于個體的生物學、生理學或藥理學活性物質。治療劑，也稱作"藥物"，其實例描述于公知的參考文獻種，例^口MerckIndex,thePhysiciansDeskReference,口ThePharmacologicalBasisofTherapeutics,它們包括j旦不限于藥品；維生素；礦物補充物；用于處理、預防、診斷、治療或緩解疾病或病癥的物質；影響身體結構或機能的物質；或者前藥，在被置于生物學環(huán)境后它們變?yōu)樯飳W活性的或活性更高。本文所使用的術語"治療有效量"是指包含根據本發(fā)明的脂質抗感染藥物制劑的化合物、材料或組合物能夠通過抑制肺部感染而有效地產生一些期望的治療效果的量。術語"治療"是本領域公認的，其是指使任何病癥或疾病的至少一種癥狀得到治療和改善。術語"治療"還指預防性的治療，其作用是防止或預防病癥或疾病?？垢腥舅幬锸悄軌虻挚垢腥镜脑噭?，所述感染例如細菌、分枝桿菌、真菌、病毒或原生動物感染。本發(fā)明所涉及的抗感染藥物包括但不限于氨基糖苷(例如，鏈霉素、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、萘替米星和卡那霉素等)，四環(huán)素(例如金霉素、土霉素、曱烯土霉素、強力霉素和米諾環(huán)素等)，磺胺類藥物(例如，磺胺、磺胺嘧啶、新諾明(sulfamethaoxazole)、磺胺異噁唑和磺胺醋酰等)，對氨基苯曱酸，二氨基嘧啶(例如甲氧節(jié)氨嘧啶，其經常與新諾明和吡。秦酰胺等結合使用)，喹諾酮(例如萘啶酮酸、噌"惡星、環(huán)丙沙星和諾氟殺星等)、青霉素(例如青霉素G、青霉素V、氨節(jié)青霉素、羥氨芐青霉素、氨下青霉素酞酯、羧千青霉素、卡茚西林、羧噻吩青霉素、阿洛西林、美洛西林和哌拉西林等)，耐青霉素酶青霉素(例如曱氧西林、囉灑西林、氯唑西林、雙氯西林和萘夫西林等)，第一代頭孢菌素(例如頭孢羥氨千、頭孢氨千、頭孢拉定、頭孢瘞吩、頭孢吡令和頭孢唑啉等)，第二代頭孢菌素(例如氯孢菌素、頭孢羥唑、頭孢尼西、頭孢西丁、頭孢替坦、頭孢氨呋將、頭孢呋辛酯、頭孢美唑、頭孢丙烯、氯碳頭孢和頭孢雷特等)，第三代頭孢菌素(例如氨曱苯唑頭孢菌素、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢唑肟、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢克將、頭孢泊將和頭孢布烯等)，其他(3-內酰胺(例如亞胺培南、美羅培南、氨曲南、棒酸、舒巴坦和他唑巴坦等)，卩內酰胺酶抑制劑(例如棒酸)，氯霉素，大環(huán)內酯(例如紅霉素、阿奇霉素和克拉霉素等)，林可霉素，氯潔霉素，奇霉素，多粘菌素B，多粘菌素(例如多粘菌素A、B、C、D、El(粘菌素A)、或E2以及粘菌素B或C等)粘菌素，萬古霉素，桿菌肽素，異煙肼，利福平，乙胺丁醇，乙石危異煙胺，氨基水楊酸，環(huán)絲氨酸，巻曲霉素，砜類(例如氨苯砜和索發(fā)克松鈉等)，氯苯吩。秦，瑟利德米，或者能夠被脂質包嚢的任何其它抗菌劑?？垢腥舅幬锟梢园拐婢幬?，包括多烯抗真菌劑(例如兩性霉素B、制霉菌素和游霉素等)，氟胞嘧啶，咪唑類((例如n-p羞康唑、克霉唑、益康唑和酮康唑等)，三唑類(例如伊曲康唑和氟康唑等)，灰黃霉素，特康唑，布康唑，環(huán)己吡酮乙醇胺，環(huán)吡酮胺，卣丙炔氧笨，發(fā)辨退，萘替芬，特比萘芬或者能夠被脂質包嚢或復合的其它任何抗真菌劑。討論和實施例是主要針對阿米卡星的，但并不是意圖將本申請的范圍限于該抗感染藥物?？梢允褂盟幬锏慕M合。優(yōu)選的抗感染藥物包括氨基糖普、*諾酮、多烯抗震真菌劑和多粘霉素。能夠用于本發(fā)明脂質抗感染藥物制劑中的合適的抗感染藥物的還包括抗感染藥物的藥學上可接受的加成鹽和復合物。在化合物可以具有一個和多個手性中心的情況中，除非特別說明，本發(fā)明包括每種單獨的外消旋化合物以及每種單獨的非外消旋化合物。在抗感染藥物具有不飽和碳碳雙鍵的情況中，順式(Z)和反式(E)異構體均在本發(fā)明的范圍之內。在抗感染藥物可以以互變異構形式存OOR'在的情況下，例如酮-烯醇互變異構體，例如J、和^^,每一種互變異構形式都被認為包含在本發(fā)明的范圍內，無論其是以平衡形式還是以一種被R，適當取代的固定形式存在。在任何情況下任何取代基的含義都與其在任何其它情況下的含義無關，或者與任何其它情況下任何其它取代基的含義無關。能夠用于本發(fā)明脂質抗感染藥物制劑的合適的抗感染藥物的還包括鉑化合物的前藥。前藥被認為是能夠在體內釋放活性母體化合物的任何共價鍵合的載體。丄y^孝J染在肺部感染(例如嚢性纖維化患者)中，能夠用本發(fā)明方法治療的是假單胞菌(例如，銅綠假單胞菌(尸aen/g,'"ora)、食酸假單胞菌(尸.p"w"'wM,7w)、惡臭假單胞菌(尸pw"t^)、焚光假單胞菌(7V/womscera)和食酸假單胞菌(尸.acWovoraw)),葡萄球菌，耐曱氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，鏈球菌(包括肺炎鏈球菌(5y，fococcws戶e訓ow/ae))，大腸桿菌(￡^c/zer/c/7/》co//),克氏軒菌(A7e&,e〃a)，腸桿菌(￡"&ro/)(3"er),沙雷菌(Serra"a),嗜血桿菌(//ae,//n7z^),耶爾森氏菌pesos(1fewm'a/^cw)，類鼻疽伯克霍爾德氏菌(ZwA/zo/i/m'a戸ewdo廳〃ez'),洋蔥伯克霍爾德氏菌(j8.ce/"cz'a),椰毒伯克霍爾德氏菌(S.g/flAo/,),吩。秦伯克霍爾德氏菌(5.ww/"vora/w),越南伯克霍爾德氏菌(S.v/eMaw/e朋m)，結核菌分枝桿菌(A^yco/^"en力wfw6ercw/oi^')，鳥分才支4干菌復合菌(A/."v/wwcow//e;c)(MAC)(鳥分枝桿菌和胞內分枝桿菌(M,'",race〃w/we))，堪薩斯分枝桿菌(MA朋m^,')，蟾分枝桿菌(M)，海洋分4支^f干菌(A</_ma〃"wm),潰瘍分枝桿菌(Mw/cera/w')或偶發(fā)分枝桿菌復合菌(M/b自"應co—a)(偶發(fā)分枝桿菌和龜分枝桿菌(Mc/ze/匿z))感染。本發(fā)明的一個實施方式包括一種治療方法，所述方法包括給藥以治療有效量的脂質抗感染藥物制劑。當下文中沒有提供特定的劑量時，如果是通過噴霧器向肺傳送的，則本發(fā)明優(yōu)選的劑量是最小單體藥物(當然其也可以是鹽)有效量的50%或小于50%,35%或小于35%,20%或小于20%,10%或小于10%,從而使肺中的CFU計數在14天的治療療程中減少一個數量級。藥物當量是累積數量，其將在應用本發(fā)明藥物給藥方案的劑量周期中使用。本段中所定義的最小單體藥物當量是一個"相當于單體藥物的量"。本發(fā)明的非-CF治療實施方式可以使用任何動物，雖然優(yōu)選的是人。針對所給定的動物測定這種動物的相對用量。劑量方案優(yōu)選是一天一次或少于一天一次。在優(yōu)選的實施方式中，劑量方案是每兩天一次，每三天一次，每周一次或者更少。例如，劑量方案可以是每兩天使用50%或者小于50%的單體藥物當量，或者是比這更少的劑量?；蛘?，例如所述劑量可以是每天使用35%或小于35%的單體藥物當量。參見圖3和4的動物數據，它們顯示本發(fā)明的脂質抗感染藥物制劑比藥物單體更有效。為了治療感染，抗感染藥物的有效量是臨床醫(yī)師可獲知的，但是其包括對治療、減輕、改善、消除或預防所要治療的疾病或所要避免或治療的病癥的一種或多種癥狀有效的量，或者是對使疾病或病癥產生臨床上可識別的病理學變化的有效的量。改善包括在所預防性治療的動物中，感染的發(fā)病率或嚴重性的減少。在某些實施方式中，有效量是在肺部感染癥狀出現后對治療或改善有效的量。在某些其它實施方式中，有效量是在所預防性治療的動物中對治療或改善感染的平均發(fā)病率或嚴重性有效的量(是通過統計學研究測定的)。脂質體或其它脂質傳輸系統可以作為霧化噴霧、粉末或氣霧劑進行吸入給藥，或者進行鞘內給藥。吸入給藥是優(yōu)選的。總的結果是，與藥物單體或胃腸外形式的藥物相比，其降低了給藥頻率并且提高了治療指數。脂質體或其它脂質制劑是特別有利的，這是由于它們具有在與肺泡襯里或肺泡表面活性物質相容的同時還能夠保護藥物的能力。本發(fā)明包括用于治療肺部革蘭氏陰性感染的方法。一個有效地得到治療的感染是CF患者中的慢性假單胞菌感染。已知的用氨基糖苷對肺部感染進行的治療(例如在CF患者中)通常包括通過吸入每天給藥以大約200-600mg的阿米卡星或妥布霉素。在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明允許通過每天給藥以100mg或小于100mg(或者如果劑量不太頻繁，則其在標準化后相當于100mg每天)的阿米卡星來進行治療。在又另一個實施方式中，每天給藥以60mg或小于60mg的阿米卡星。在仍另一個實施方式中，進行每兩天不超過一次的大約30到50mg的給藥。最優(yōu)選的實施方式包括每隔一天或每三天給藥大約30到50mg。5.財稀屏本發(fā)明組合物中所用的脂質可以是合成、半合成或天然存在的脂質，包括磷脂、生育酚、甾體、脂肪酸、糖蛋白例如白蛋白、陰離子脂質和陽離子脂質。脂質可以是陰離子的、陽離子的或是中性的。在一個實施方式中，脂質制劑基本上不含陰離子脂質。在一個實施方式中，脂質制劑僅包含中性脂質。在另一個實施方式中，脂質制劑不含陰離子脂質。在另一個實施方式中，脂質是磷脂。磷脂包括卵磷脂酰膽堿(EPC),卵磷脂酰甘油(EPG),卵磷脂酰肌醇(EPI),卯磷脂酰絲氨酸(EPS),卵磷脂酰乙醇胺(EPE)和卵磷脂酸(EPA);大豆對應物，大豆磷脂酰膽堿(SPC);SPG，SPS,SPI,SPE,和SPA;氫化卯和大豆對應物(例如，HEPC,HSPC)，其它的由脂肪酸在甘油的2和3位的酯鍵所構成的磷脂，其中所述甘油含有12到26個碳原子的鏈并且在甘油的1位具有不同的端基，包括膽堿，甘油，肌醇，絲氨酸，乙醇胺以及相應的磷脂酸。這些脂肪酸上的鏈可以是飽和或不飽和的，并且所述磷脂可以由不同鏈長度和不同不飽和度的脂肪酸組成。特別是，制劑的組成可以包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC),天然存在的肺表面活性物質的一種主要成分，和二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)。其它實例包括二肉豆蔻?；字Ｄ憠A(DMPC)和二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(DMPG)，二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG),二硬脂酰基磷脂酰膽堿(DSPC)和二硬脂?；字８视?DSPG),二油?；字；掖及?DOPE)和混合磷脂如棕櫚酰硬脂?；字Ｄ憠A(PSPC)和棕櫚酰硬脂酰基磷脂酰甘油(PSPG)，driacylglycerol,二酰甘油，seranide,鞘氨醇，鞘磷脂和單?；字鐔?油?；?磷脂酰乙醇胺(MOPE)。所使用的脂質可以包括脂肪酸、磷脂和甘油酯，甾體，磷脂酰甘油(PGs),磷脂酸(PAs)，磷脂酰膽堿(PCs),磷脂酰肌醇(Pis)和磷脂酰絲氨酸(PSs)的銨鹽。脂肪酸包括碳鏈長度為12到26個碳原子的脂肪酸，其可以是飽和或不飽和的。一些具體的例子包括肉豆蔻酰胺、棕櫚酰胺、月桂酰胺、硬脂酰胺、二月桂酰乙基磷酸膽堿(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸膽堿(DMEP)、二棕櫚酰乙基磷酸膽堿(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸膽堿(DSEP)、N-(2,3-二-(9-(Z)-十八烯基氧)-丙-l-基-N,N,N-三甲基銨氯化物(DOTMA)和1,2-二(油酰氧)-3-(三曱基銨基)丙烷(DOTAP)。甾體的實例包括膽固醇和麥角固醇。PGs,Pas,Pis，PCs和PSs的實例包括DMPG，DPPG,DSPG,DMPA,DPPA,DSPA,DMPI,DPPI,DSPI,DMPS,DPPS和DSPS,DSPC,DPPG,DMPC,DOPC，卵PC。由卵磷脂，例如DPPC,組成的脂質體或脂質抗感染制劑能夠幫助肺部細胞例如肺泡巨噬細胞的吸收并且有助于抗感染藥劑在肺部的緩釋(Gonzales-Rothi等人(1991))。帶負電荷的脂質例如PGs、Pas、PSs和PIs，除了能夠減少粒子的聚集以外，還可以在吸入制劑的緩釋特性以及在制劑穿過肺部(轉胞吞作用)以便全身性吸收的傳輸中起作用。甾醇化合物被認為影響了制劑的釋放和滲濾特性。脂質體是含有包埋含水容積的完全閉合的脂質雙分子層膜。脂質體可以是單層泡嚢(具有單一薄膜雙分子層膜)或多層泡嚢(是以多層薄膜雙分子層膜為特征的洋蔥狀結構，每一層通過含水層二彼此分離)。所述雙分子層由兩個具有疏水"尾"區(qū)域和親水"頭"區(qū)域的脂質單層組成。薄膜雙分子層的結構是脂質單層的疏水(非極性)"尾，，朝向雙分子層的中心，而親水性"頭"朝向水相。脂質抗感染制劑是脂質和抗感染藥物的結合。該結合可以是共價的、離子的、靜電的、非共價的或者是立體化學的。這些復合物是非-脂質體的并且不能包埋另外的水溶性溶質。這樣的復合物的實例包括兩性霉素B的脂質復合物(Janoff等人，Proc.NatAcad.ScL，85:61226126，1988)和心磷脂與阿霉素的復合物。脂質籠合物是用一種或多種脂質形成的三維的、籠樣的結構，其中所述結構包埋有生物活性劑。這樣的籠合物也被歸入本發(fā)明的范圍。前體脂質體是在與含水溶液浸漬接觸后能夠變?yōu)橹|體或脂質復合物的制劑。攪拌或其它的混合操作是必要的。這樣的前體脂質體也;f皮歸入本發(fā)明的范圍內。脂質體可以通過許多方法制備(例如，參見，Bally,Cullis等人的，BiotechnolAdv.5(1):194,1987)。Bangham'sprocedure(J.Mol.Biol.,JMoIBiol.13(1):238畫52，1965)制備了普通的多層泡嚢(MLVs)。Lenk等人，(美國專利號4,522,803、5,030,453和5，169,637),Fountain等人(美國專利號4,588,578)和Cullis等人(美國專利號4,975,282)公開了制備下述多層脂質體的方法，所述多層脂質體在其各個含水間隔中具有基本上相等的層間溶質分布。Paphadjopoulos等人在美國專利號4,235,871中公開了通過反向蒸發(fā)來制備寡層脂質體。單層泡嚢可以由MLVs通過許多技術來制備，例如Cullis等人(美國專利號5,008,050)和Loughrey等人的(美國專利號5,059,421)擠壓方法。超聲處理和勻質化作用可以用于由較大的脂質體制備較小的單層月旨質體(參見，例長口Paphadjopoulos等人,Biochim.Biophys.Acta.，135:624-638，1967;D飄er,美國專利號4,515,736;和Chapman等人，LiposomeTechnol.,1984,第1-18頁)。Bangham等人(J.Mol.Biol.,1965,13:238-252)最初的脂質體的制備方法包括將磷脂懸浮于有機溶劑中，然后蒸干，在反應容器中留下磷脂薄膜。接下來，加入適量的含水相，使混合物"膨脹，，，通過機械手段將所得的由多層泡嚢(MLVs)組成的脂質體分散。該制備方法為Paphadjopoulos等人描述的小的超生處理單層泡嚢(Biochim.Biophys,Acta.,1967,135:624-638)和較大的單層泡嚢的開發(fā)提供了基礎。可以將制備大單層泡嚢(LUVs)的技術，例如，反相蒸發(fā)法、注入法和清潔劑稀釋法，用于制備脂質體。在本文中可以發(fā)現對制備脂質體的這些以及其它方法的回顧。將Liposomes,MarcOstro編輯，MarcelDekker,Inc.,NewYork,1983,第l章，的相關部分引入本文以作參考。還參見Szoka,Jr.等人，(1980,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，9:467),也將該文獻的相關部分引入本文以作參考。用于制備泡嚢的其它技術包括那些形成反相蒸發(fā)泡嚢(REV)的技術，Papahadjopoulos等人，美國專利號4,235,871。另一類可使用的脂質體是那些特征在于層溶質分布大體相等的脂質體。如在Lenk等人的美國專利號4,522,803中所定義的，該類脂質體被命名為穩(wěn)定的多層泡嚢(SPLV),其包括Fountain等人的美國專利號4,588,578中所描述的單相泡嚢和如上所述的冷凍和熔化的多層泡嚢(FATMLV)。許多甾醇和它們的水溶性衍生物例如膽固醇半琥珀酸酯已經被用于形成脂質體；特別是參見Janoff等人的美國專利號4,721,612,該文獻是在1988年1月26日發(fā)行的，題目為"SteroidalLiposomes."。Mayhew等人描述了通過將抗菌劑和抗病毒劑包埋于包含ot-生育酚及其某些衍生物的脂質體中來降低抗菌劑和抗病毒劑的毒性的方法。并且，許多生育酚和它們的水溶性衍生物已經被用于形成脂質體，參見Janoff等人，美國專利號5,041,278。6.教備才法用于形成脂質體或者脂質抗感染藥物制劑的方法包括"溶劑注入"法。該方法包括將一種或多種脂質溶于少量的，優(yōu)選最小限度量的方法相容的溶劑中以形成脂質懸浮液或溶液(優(yōu)選溶液)，然后將該溶液注入到含有抗感染藥物的含水介質中。代表性的方法相容的溶劑是那些在諸如透析或透濾的水處理中能夠被洗去的溶劑。"乙醇注入"是一類溶液注入，該方法包括將一種或多種脂質溶于少量，優(yōu)選最小限度量的乙醇中以形成脂質溶液，然后將該溶液注入到含有抗感染藥物的含水介質中。"少量"的溶劑是在注入過程中適合于形成脂質體或脂質復合物的量。這樣的方法描述于Lee等人，2003年8月4日登記的美國專利申請10/634,144,Pilkiewicz等人，2003年3月5日登記的美國專利申請10/383,173，和Boni等人，2003年3月5日登記的美國專利申請10/383,004，在此將這些專利申請的全部內容引入作為參考。將脂質-醇溶液注入含有抗感染藥物的水或酒精溶液或混合物的步驟可以高于或低于含有抗感染藥物的水或醇溶液或混合物的表面進行。優(yōu)選地，所述步驟是在高于所述溶液或混合物的表面進行的。脂質體還可以通過共同未決的專利申請2003年3月5日登記的10/383,004、2003年8月4日登記的10/634,144、2002年8月20日登記的10/224,293;和2003年10月29日登記的10/696,389中描述的方脂質體或脂質制劑的尺寸可以^t過許多方法獲得、，;列如擠出、超聲處理和勻質化技術，這些都是本領域普通技術人員所熟知的并且容易實施。擠出包括在壓力下使脂質體一次或多次地通過具有規(guī)定孔尺寸的過濾器。雖然過濾器通常是由聚碳酸酯制成的，但是過濾器可以由任何下述耐久的材料制成，其中所述材料不會與脂質體相互作用并且是足夠堅固的以便能夠在足夠的壓力下進行擠出。優(yōu)選的過濾器包括"直通"過濾器，因為它們通常能夠經得起本發(fā)明優(yōu)選擠出方法的較高的壓力。也可以使用"曲徑"過濾器。擠出還可以使用不對稱過濾器，例如AnoporeTM過濾器，其包括使脂質體擠出通過枝狀-孔型氧化鋁多孔過濾器。還可以通過超聲處理來減小脂質體或脂質制劑的尺寸，其利用聲能來分裂或裁剪脂質體，脂質體將自然地重整為較小的脂質體。超聲處理是通過將含有脂質體懸浮液的玻璃管浸漬到由水浴型聲波儀產生的聲波震心中而進行的?；蛘撸梢允褂锰结樞吐暡▋x，其中聲能是通過直接與脂質體懸浮液接觸的鈦探針的振動產生的?？梢允褂脛蛸|化和碾壓設備來將較大的脂質體或脂質制劑分解為較小的脂質體或脂質制劑，所述勻質化和碾壓設備例如GiffordWood勻化器、Polytron或Microfluidizer?？梢允褂帽绢I域熟知的方法將所得的脂質體制劑分割成勻質的種群；所述方法例如切向流過濾。在該方法中，不同尺寸的脂質體或脂質制劑種群被穿過切向流過濾器，由此產生了具有最高和/或最低尺寸限制的脂質體種群。當使用了兩種不同尺寸即具有不同孔徑的過濾器時，小于第一孔徑的脂質體穿過過濾器。通過第二過濾器對該濾液進行切向流過濾，所述第二過濾器的孔徑比第一過濾器小。該過濾的滯留物是尺寸分別大于和小于由第一和第二過濾器的孔徑所限定的尺寸范圍的脂質體/復合物種群。Mayer等人發(fā)現使用橫跨膜離子梯度可以緩解與親脂性可電離生物活性劑例如抗腫瘤劑，如阿霉素或長春花生物》威，的包埋效率有關的問題。除了能夠引發(fā)更大量的吸收外，這樣的跨膜梯度還能夠起到增加抗感染藥物在脂質體制劑中的滯留的作用。脂質抗感染藥物制劑具有緩釋抗感染效果和較低的毒性，這使其具有較低的給藥頻率和提高的治療指數。在臨床前動物研究中以及在與以相等劑量水平吸入的妥布霉素(非脂質體或脂質基的)的對比中，脂質體阿米卡星在從給藥后不久到24小時后的這段時間內顯示具有的肺部藥物水平是妥布霉素的二到幾百倍。此外，脂質體阿米卡星能夠使上述水平保持遠遠超過24小時。在用來模擬CF患者中出現的假單胞菌感染的動物模型中，脂質體阿米卡星在與氨基糖苷單體比較時顯示出動物肺部感染的明顯;肖除。肺表面活性物質使得肺在呼吸過程中能夠膨脹和收縮。這是通過用脂質和蛋白的結合物包覆肺臟而實現的。脂質是作為單分子層存在的，所述單分子層具有直接向外的疏水鏈。脂質代表了80%的肺表面活性物質，大多數脂質是卯磷脂，其中50%是二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)(Veldhuizen等人，1998)。表面活性蛋白(SP)具有保持結構和促進肺表面活性物質象呼吸期間進行的那樣膨脹和收縮的功能。在這些表面活性蛋白中，特別是SP-B和SP-C具有溶胞性質，其能夠溶解脂質體(Hagwood等人，1998;Johansson,1998)。這種溶胞性質可以促進脂質體的逐步分解。脂質體還可以通過噬菌作用直接被巨噬細胞吞噬(Couveur等人，1991;Gonzales-Roth等人，1991;Swenson等人，1991)。脂質體被肺泡巨噬細胞攝取的另一個含義是藥物被輸送到了患病位點。用于形成吸入用脂質體或脂質制劑的脂質優(yōu)選是與肺表面活性物質中存在的內生脂質相同的脂質。脂質體由能夠包埋所需藥物的雙分子層組成?？梢詫⑺鼈冊O置成同心雙分子層的多層泡嚢，其中藥物被包埋在不同層的脂質內部或各層之間的含水空間內部。本發(fā)明利用獨特的方法創(chuàng)造出獨特的脂質體或脂質抗感染藥物制劑。所述方法和這些方法的產品均是本發(fā)明的一部分。在一個特別優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的脂質體抗感染藥物制劑是通過管線內浸注入制備的，其中脂質溶液物料流是在管線內與抗感染藥物溶液物料流混合的。例如，如圖8中所描述的，兩種溶液可以在前部裝有Y形連接物的混合管內部進行在管線內混合。以這樣的方式，管線內注入法不同于上述的注入法，在后者中脂質溶液是作為加入到大量抗感染藥物溶液中的物料流注入的。意想不到的是，本方法產生了較低的脂質對藥物比和較高的包嚢效率。所述方法可以通過優(yōu)化參數例如流量、溫度、抗感染藥物濃度和在注入步驟后進行鹽加成而得到進一步的改善。保持總流量為800mL/min而改變各物料單獨的流量。為了實現上述條件，使用了兩個設置為不同泵速的單獨的泵。將混合后的溶液注入到含有NaCl溶液的燒杯中保持10秒，以使最終的NaCl濃度為1.5%,最終的乙醇濃度不超過30%?；旌虾螅筶mL的等分部分流過SephadexG-75凝膠過濾柱以從包嚢的阿米卡星中分離出阿米卡星單體。收集1mL具有最高密度(通過可視渾濁度來確定)的部分以用于進一步的分析。所獲得的結果顯示于表1中。增大脂質/阿米卡星流量比，在所述流量比到達300/500mL/min之前所產生的L/D幾乎為恒定值。隨著脂質流量的進一步增加，L/D開始增加并且粒子尺寸也開始變大。同時，較高的脂質流量在加入了更多脂質物質的同時還提供了較好的阿米卡星回收率(包嚢效率)。表l.流量對阿米卡星包嚢的影響。*<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>*脂質和阿米卡星溶液保存在40°C。阿米卡星原液為50mg/mL。在注入前加入NaCl10%溶液以獲得1.5%的最終濃度。注入時間為10s?；旌瞎荛L10cm;6-元管線內攪拌器設置在0cm處。脂質/阿米卡星流量為300/500mL/min的第3批顯示出最好的L/D和粒子尺寸，以及合理的高阿米卡星回收率。因此決定在所有的進一步的實驗中均使用這樣的流量。如表2中所顯示的，為了重復選擇條件時的結果，制備了一個使用透濾法完全洗滌的批次(第6批)。在注入前向燒杯中加入NaCl10%溶液以使最終濃度為2%(作為與表1批次中的1.5%的對比)。所得L/D(1.71)不如表1中第3批中的好，并且粒子尺寸較大。這可能是由于在脂質體形成初期用濃高度的NaCl接觸脂質體所帶來的不良影響。與用透濾法洗滌的樣品相比，使用凝膠-過濾柱分離(洗滌)的樣品傾向于具有較好的L/D。這可能與應力脂質體實驗的不同等級有關，或者是簡單地由于在凝膠過濾柱上分離的樣品含有一部分具有較好L/D的脂質體，其并不能代表整個種群。表2.完全洗滌批次的總結。改變的方法參數是溫度、阿米卡星原藥濃度以及其它(參見下面的表3)。將所有批次均濃縮到接近最大程度直到入口壓力達到IOPSI。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>*第3列代表了臨注入前的脂質和阿米卡星溶液的溫度，和洗滌(透濾法)過程中的溫度。RT-室溫。"VOL尺寸"是容重粒子尺寸。表3.第l-18批的操作條件。*<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>610010200注入前1,5透濾70510100注入前1.5(Seph柱)810510150注入期間1.5透濾91010150注入期間1.5透濾10105101005'后1.52倍稀釋1110510150剛注入后1.52倍稀釋12105mo18020"后1,52倍稀釋13105H2018030"后1.52倍稀釋1410H2018030"后1.5透濾15101.518030"后1.5透濾1660無0.9180注入期間0.9透濾1760無1.5180注入期間1.5透濾186001.5180注入期間1,5透濾*將脂質和阿米卡星溶液以300/500mL/min的速度注入30s(實施例6-10)或20s(實施例11-18)。加入另外的含水溶液(NaCl或水)(其份數相當于500份的阿米卡星體積)。(5./Z)模伴溫,的影詢除了加入NaCl溶液的量較少以外，其它設置保持與第3批中的相同，制得的最終濃度為1.0%。在開始注入前再次加入溶液，因為注入時間較短所以難以在注入期間進行加入。同時，在注入期間在流動壓力的作用下管線內攪拌器被移到混合管的末端。攪拌器的位置為距管前端5cm處，而不是第3批中的2cm處。這可能是重要的，因為在第20批中在相同溫度，40/44°C，的條件下獲得的L/D比為0.55,這幾乎是第3批中的一半。通過比較不同注入溫度下的阿米卡星的包嚢情況，意外地發(fā)現，較低的溫度給出了較好的L/D。在所試驗的溫度中，脂質/阿米卡星溫度為30/3(TC和50/RT時給出了相似的L/D比，為0.32和0.37。另一方面，如在第1-5批中，用凝膠-過濾進行洗滌的樣品的數值低，該數值可能小于如果用透濾法洗滌該批次時所獲得的數值。表4.溫度對阿米卡星包嚢的影響。*<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>*將脂質和阿米卡星溶液以300/500mL/min的速度注入30s。阿米卡星原液為50mg/mL。在注入前加入NaCl10%溶液以獲得最終1.0%的濃度?；旌瞎荛L10cm,6-元管線內攪拌器位于5cm處。在單獨的實驗中發(fā)現，在30。C和3(TC下或者在50。C和22。C下混合卯％乙醇和水分別產生了相似的最終溫度，所述溫度為接近36。C。這提示，對于阿米卡星包嚢來說重要的是最終混合物的溫度而不是單獨各組分的溫度。實施例6-15中使用的溫度是50。C/RT。實施例16-18中使用的兩種物料流的溫度是30。C和3(TC，其獲得了相當的結果，雖然觀察到的阿米卡星包嚢稍少一些。6./c;^入y^》p入含;^溶濕^謬^的彩喊接下來將注意力集中到NaCl溶液加入步驟和洗滌方法上。在多個方面改變工藝參數。在流量為300/500的注入步驟剛結束時，混合物中乙醇的濃度達到34%。在該濃度下阿米卡星具有有限溶解度(參見圖9)。如果實驗從50mg/mL的阿米卡星原液開始，則在與脂質溶液混合后阿米卡星的總量將超過30mg/mL,假設包嚢效率為50%，則其中至少一半(15mg/mL)是阿米卡星單體。這高于其在34%乙醇中的溶劑度極限。該問題的一個可行解決方案就是向具有脂質/阿米卡星混合物的容器中加入更多的水。例如，向800份的脂質/阿米卡星中加入200份的水(或NaCl溶液)，這將使乙醇減少到27%(圖9)。這使阿米卡星能夠在15mg/mL甚至更高的濃度下溶解，其中所述更高的濃度取決于溫度。此外，加入NaCl可以使?jié)B透條件穩(wěn)定化。當在200-300mg/mL的內部濃度下形成脂質體并包嚢阿米卡星時，僅有~15mg/mL左右的阿米卡星沒有被包嚢。缺少鹽水將導致滲透不平衡，其隨后將導致阿米卡星的漏失。向800份的脂質/阿米卡星中加入150份的10%NaCl將產生約15。/。的最終NaCl濃度(脂質體外)。針對注入操作進行了很多批次的實驗，其中包括在不同時間加入不同量的NaCl溶液(或者在一些批次中加入的是水)(參見表5，匯編自表2和3)。從表中可以看出一般趨勢，從而得到以下結論—為了獲得低L/D(如果使用的是短混合管)，則必須在注入和加入含水溶液之間存在一定的時間間隔。在第6-15批中，那些具有20s或更長時間間隔的批次具有低的L/D。這可能說明脂質體不是完全在物料流混合之后立即形成的。當使用較長的混合管時(第16-18批)，其能夠提供較長的混合時間，所以不需要時間間隔。一加入高濃度的NaCl溶液來平衡滲克壓度實際上并不會幫助保留阿米卡星。實際上，在適當的時間間隔后加入純水產生了最低的L/D和總阿米卡星濃度?！谧⑷牒?min時加入100份10%的NaCl(第9批)給出了有竟爭性的L/D比但是沒有給出良好的總阿米卡星濃度。這可能是由于NaCl,當在早期與相對較高的乙醇濃度同時存在時，導致了聚集和粘性的增加。表5.加入到脂質/阿米卡星混合物中用以調節(jié)乙醇濃度的含水容積和NaCl濃度的作用。沒有顯示所有的變量；參見表2和3。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>一我虐'染秀#^濕^教#先前發(fā)現，使用50mg/mL的阿米卡星原液產生了最好的包埋。當使用常用方法時，將阿米卡星原藥濃度降低到40mg/mL會增力。L/D。使用二-物料流流管線內注入法時，乙醇濃度達到了較高的水平，因此現在50mg/mL的阿米卡星可能不是最大濃度。表6總結了使用多種阿米卡星原藥濃度的影響。40mg/mL給出了類似的或者較好的L/D值，甚至改善了阿米卡星的回收率。相對于恒量的脂質使用較少的阿米卡星并且提供相似的L/D,導致了較高的包嚢百分比(第12批)。將阿米卡星原藥的濃度進一步降低到30mg/mL,雖然回收率仍是令人印象深刻的但其導致L/D稍微有所增加(第13批)。表6.降低阿米卡星原液濃度的同時改善了效率。阿米卡星的回收率是以所獲得的L/D為基礎計算的并且假定脂質的回收率為100%。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>降低阿米卡星原藥的濃度具有另一個含義。其降低了注入前脂質/阿米卡星混合物中阿米卡星單體的濃度，使得其在較高的乙醇濃度下仍保持是可溶解的。假設脂質和阿米卡星是以300/500的比例混合的，阿米卡星原藥是50mg/mL,包嚢有效率是37%,那么初始阿米卡星單體將是~20mg/mL。類似地，包嚢率為52%的40mg/mL的阿米卡星原藥將產生~12mg/mL的阿米卡星單體，包嚢率為46%的30mg/mL的阿米卡星原藥將產生~10mg/mL的阿米卡星單體。7.提高抗感染藥物(例如氨基糖苷如阿米卡星、妥布霉素、慶大霉素)在脂質體中的包埋的方法有幾種。一種方法是制備非常大的脂質體(〉l^im),這樣單位數量的脂質所包埋的體積是大的。該方法獲得的L/D比較小，不能實際用于脂質體吸入劑(噴霧)，其原因是1)噴霧的脂質體(〉0.5pmC遭受較多的破裂釋:，和2;較小的霧滴尺寸是獲得良好的肺部沉積所必需的，該尺寸本身小于約~3pm。因此為了吸入，希望能夠使脂質體的尺寸保持盡可能的小以避免過多的破裂釋放。目前，本文公開的脂質體的平均直徑小于約0.4pm(參見表4)。另一個降低L/D的方法是使用帶負電荷的脂質。以上所列出的氨基糖苷都是高正性的，每種化合物都有4到5個胺。用于治療性制劑的通常是這些氨基糖苷的硫酸鹽。多陽離子特性所帶來的是與帶負電荷的脂質體的強結合。這導致在脂質體形成期間具有較多的包埋?？垢腥舅幬镏苿┑哪康氖窍蚍尾凯h(huán)境提供持續(xù)的釋放。通過巨噬細胞的吸收來快速地清除脂質體是與上述目的背道而馳的。已經有充分的文獻報導，帶負電荷的脂質體所經受的被巨噬細胞攝取的程度比中性脂質體高得多。因此，使用中性脂質體是所希望的。一組能夠使很多藥物包埋在小脂質體中的技術是以梯度負載為基礎的，其中pH梯度、硫酸銨梯度或硫酸鎂梯度被用來負載胺-藥物成為脂質體參見美國專利號5,578,3205,736,1555,837,2795,922,350(pH梯度);5,837,2825,785,987(硫酸鎂梯度);和5,316,771(硫酸銨梯度)。這些技術僅對膜可滲透性胺(中性形式的單-胺是可滲透性的，如亞德利亞霉素和道諾紅霉素)有效。梯度負載對某些抗感染藥物例如氨基糖苷不起作用，因為它們是非滲透性的(太大且電荷過多)。本文中所描述的所有方法均能夠很容易地為大規(guī)模的無菌制造廠所接受。最終脂質體的尺寸可以通過改變脂質組成、濃度、賦形劑和工藝參數而得到調整。本發(fā)明方法所使用的脂質與藥物的比為約4:1到約1:1。在另一個實施方式中，脂質與藥物的比為約3:1到約1:1,2:1到約1:1,約1:1或小于l:l,約0.75:1或小于0.75:1,或者約0.5:1或小于0.5:1。此外，降低了抗感染藥物單體的百分比，所述抗感染藥物單體在產品被滲析后還會存在一段特定的時間。^^部^襲^蘭#庠/差,礙治療感染性疾病例如銅綠假單胞菌的障礙是藥物向上皮細胞上的痰液/生物薄膜障礙內的滲透(圖1),其中所述銅綠假單胞菌是導致嚢性纖維化患者的慢性疾病的主要原因。在圖1中，環(huán)形代表脂質體抗感染藥物制劑，"+"符號代表抗感染藥物單體，"-"符號代表粘蛋白、海藻酸和DNA,實心棒形符號代表銅綠假單胞菌。該障礙是由植入和漂浮的銅綠假單胞菌，所述銅綠假單胞菌是嵌入在海藻酸或來自細菌的外多糖中的，以及來自受損白血球的DNA和來自肺上皮細胞的粘蛋白組成的，所有這些物質均具有凈負電荷(Costerton等人，1999)。這些負電荷結合在一起阻擋了正電性藥物例如氨基糖普的滲透，使它們成為生物學無效的(Mendelman等人，1985)。將抗感染藥物包埋在脂質體或脂質制劑內部可以保護或部分地保護抗感染藥物免受與痰液/生物薄膜的非特異性結合，使脂質體或脂質制劑(具有包埋的氨基糖普)能夠滲透通過(圖1)。阿米卡星已經顯示出對細菌酶類具有高度的抵抗力，因此其提供了比其它氨基糖苷包括妥布霉素和慶大霉素所顯示的更高的易影響臨床分離抹百分比(Price等人，1976)。特別是，銅綠假單胞菌分離林對阿米卡星比對其它氨基糖苷敏感得多，并且顯示無交叉抗藥性(Damaso等人，1976)。從圖2中可以清楚地看出阿米卡星脂質體制劑的緩釋和庫存效果。在該研究中通過氣管內和靜脈內給藥向大鼠提供妥布霉素。此外，通過氣管給予大鼠同樣劑量(4mg/大鼠)的阿米卡星脂質體制劑。數據表明只有阿米卡星脂質體制劑獲得了緩釋和庫存效果。實際上，在給藥后24小時，只有阿米卡星脂質體制劑在動物肺部顯示出了明顯的藥物水平，而兩種妥布霉素制劑所顯示的水平均可忽略不計，認為這主要是由于快速地全身性吸收。這比在肺部增加一百倍的氨基糖普還要好，因為脂質體抗感染藥物制劑證明了下述觀點，即緩釋脂質體制劑抗感染藥物的服用頻率能夠明顯地少于目前批準的TOBI⑧制劑(一種由ChironCorporation,Ameryville,CA制備的妥布霉素吸入劑溶液)。而且，痰液/生物薄膜的存在阻擋了氨基糖普單體的滲透，因為其將抗感染藥物束縛在其表面上(圖1)。因此，在CF患者中需要使用超過1,000gm妥布霉素/克肺組織的劑量才能顯示出治療效果。阿米卡星脂質體制劑克服了這一問題。因此，阿米卡星脂質體制劑中的藥物治療水平所保持的時間比妥布霉素單體的長。結合和滲透的這種促進作用還意味著阿米卡星脂質體制劑可以顯著地減少細菌抗藥性，所述細菌抗藥性通常出現在抗感染藥物以低于最低抑菌濃度存在于體內時。&2秀/七'動力夢阿米卡星的藥代動力學是在氣管內(IT)給予大鼠妥布霉素單體或阿米卡星脂質體制劑后測定的。將這些數據與尾部靜脈注射妥布霉素單體后在肺部獲得的分步進行比較。在所有情況中，給藥劑量均為4mg/大鼠。正如從圖2中所看到的，IT能夠輸送的氨基糖苷沉積物要比注射能夠輸送的大得多。脂質體抗感染藥物技術的庫存效果也得到了證明，因為與IT或IV給予的妥布霉素相比，阿米卡星脂質體制劑在給藥后二十四小時仍在肺部保持有大于一百倍的藥物增加。因此，與妥布霉素單體相比，阿米卡星脂質體制劑中的藥物治療水平能夠保持較長的一段時間。氨基糖苷與CF患者痰液的結合是值得關注的，特別是在如果該結合降低了抗感染藥物的生物學活性時(Hunt等人，1995)。為了確定阿米卡星脂質體制劑是否能夠使生物活性保持的時間段延長，將正常的大鼠通過氣管內滴注給藥以阿米卡星脂質體制劑。接著在第2或24小時時通過支氣管肺泡灌洗法(BAL)將其移出以確定生物活性。用超濾法(0.2微米)濃縮樣品接著進行過濾以除去污染肺臟的微生物。使用TDX檢測儀測定阿米卡星的濃度并用MuellerHinton肉湯稀釋測定法測定其生物活性(銅綠假單胞菌)。結果顯示于表7中。表7.顯示阿米卡星脂質體制劑能夠使生物活性保持時間延長的結果。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>如上表所顯示的，回收的過濾后的阿米卡星脂質體制劑能夠在MuellerHinton肉湯試-驗中殺滅銅綠假單胞菌，甚至在24小時后MIC還為4。在2小時時獲得的MIC為2,其與由過濾后的脂質體/復合阿米卡星原藥所獲得的相似。因此，在肺部24小時后阿米卡星脂質體制劑仍具有活性。24小時時在BAL中未能檢測到以同樣劑量給予的妥布霉素單體。這表明不僅脂質體抗感染藥物制劑仍保留在肺中，而且其還能夠隨時間自由地滲透過痰液/生物薄膜。將這些數據與圖2和表9(在下文中)所顯示的事實相結合，結果是阿米卡星脂質體制劑能夠隨時間釋放出抗感染藥物單體同時又能夠使肺部的抗感染藥物保持在高水平，這證明了該系統可以產生隨時間的緩釋效果的理論。該效果將證明其在降低假單胞菌的生物-負載和由抗感染藥物的水槽水平而引起的抗性發(fā)展方面是重要的。作為對阿米卡星脂質體制劑緩釋以及其持續(xù)抗感染效果的體外證明，將所述制劑培養(yǎng)在來自患有慢性阻塞性肺病(COPD)患者的痰液中，所述痰液中含有PAOI黏液假單胞菌(尸化^/omo憩&)。還將阿米卡星脂質體制劑培養(yǎng)在含有PAOI黏液假單胞菌的海藻酸中。如表8中所示，在兩種情況中均觀察到了隨時間持續(xù)且增高的假單胞菌殺滅作用。表8.假單胞菌體外隨時間的殺滅作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>經典殺滅曲線不適用于脂質體抗感染藥物制劑技術，因為脂質體制劑顯示出抗感染作用逐步增大的抗感染藥物緩釋效果。脂質制劑保護阿米卡星免受痰液和/或海藻酸的影響直至其釋放。觀察到了及時、徹底的殺滅作用，這與對抗感染藥物無干擾或鈍化的緩釋持續(xù)的抗感染效果模型相一致。脂質體阿米卡星制劑的效力是用慢性肺部感染模型研究的(Cash等人，1979)，其中將嵌在瓊脂糖?；|中的銅綠假單胞菌滴入到大鼠的氣管中。建立該黏液假單胞菌屬動物模型以模擬CF患者中所顯示的假單胞菌感染。一些與CF臨床相關的因素包括相似的肺部病理學；免疫復合物障礙的建立；以及通過銅綠假單胞菌林向黏液表型的轉換(Cantin和Woods,1999)。用超過107CFUs的黏液假單胞菌(菌抹PA01)感染大鼠肺部，所述黏液假單胞菌來自CF患者的離析抹，接著用以下物質進行治療(a)氨基糖苷單體，(b)僅使用脂質載體作為非藥物對照，和(c)脂質體阿米卡星制劑。此外，根據在Kirby-Bauer板上殺滅體外銅綠假單胞菌的能力來對制劑進行頭道篩選。對多種脂質體阿米卡星制劑進行了試驗，所述試驗是以不同的脂質組分或制備參數為基礎的，所述不同的組分或制備參數能夠在體外實驗中產生不同的殺滅范圍。設計該實驗的目的是測量由脂質體氨基糖苷制劑獲得的效力相對于氨基糖苷單體的增加。比較空白對照脂質組合物、兩種不同的脂質體阿米卡星制劑和阿米卡星單體以及妥布霉素單體以相同的氨基糖苷濃度用作脂質體抗感染制劑時的情況。此外，還進行了10倍高劑量的阿米卡星單體和10倍高劑量的妥布霉素單體試驗。給藥方案是每日IT給藥共七天。結果(圖3)表明在兩種制劑(脂質組分不同)中的脂質體阿米卡星顯示出CFU水平的明顯降低并且在降低CFU方面要優(yōu)于10倍高劑量的阿米卡星單體或妥布霉素單體。在圖3中，Lip-An-14是DPPC/膽固醇/DOPC/DOPG(42:45:4:9)和10mg/mL的阿米卡星，Lip-An-15是DDPC/膽固醇(1:1),其也為10mg/mL。本文中所有的脂質-脂質和脂質-藥物比均為重量對重量比。設計下一個實驗(圖4)的目的是證明脂質體阿米卡星制劑的緩釋和持續(xù)抗感染能力。給藥方案是隔日給藥共14天，以與先前實驗中的每天給藥共七天進行對比。結果表明兩種制劑(脂質組分不同)中的脂質體阿米卡星的效力比阿米卡星單體或妥布霉素單體的高10到100倍(具有較高的降低CFU水平的能力)。每日600mgTOBI(由ChironCorporation,Ameryville,CA制備的妥布霉素吸入溶液)的人類劑量，或為約375mg/m2,相當于每日9.4mg的大鼠劑量。因此所述數據與10到100倍的人類效力改善直接相關。應當注意的是，在該模型中所能觀察到的最好的情況是log值降低了2個單位。痰液試驗中銅綠假單胞菌減少100倍已經與肺功能的改善相關(Ramsey等人，1993)。脂質體阿米卡星制劑的持續(xù)釋放表明能夠用較低的劑量和/或較少的定量給藥頻率獲得比氨基糖苷單體所獲得的高的細菌生長減少。脂質體阿米卡星制劑的效力是在慢性肺部感染用模型中研究的，其中將嵌在瓊脂糖粒基質中的銅綠假單胞菌通過Sprague/Dawley大鼠的氣管滴入。三天后每日(圖3)或隔日(圖4)給藥以阿米卡星單體或脂質體阿米卡星，給藥劑量為1mg/大鼠或10mg/大鼠的給定氨基糖苷或者1mg/大鼠的脂質體阿米卡星，并用空白脂質體(脂質載體)作為對照，五只大鼠為一組。14天的實驗后，分析勻質化大鼠肺臟(冷凍)中氨基糖苷的含量和活性。用TDX檢測儀進行臨床化學測定，而生物鑒定是通過測量嵌有草枯桿菌(Bacz〃wm^"/w)的瓊脂板上的抑菌區(qū)進行的。結果顯示于表9中表9.脂質體阿米卡星制劑治療大鼠肺部銅綠假單胞菌感染的結果<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>藥物的重量是標準化后的，不包含任何的鹽形式。表10的結果表明，兩種脂質體抗感染藥物制劑中均存在氨基糖香并具有活性，而對于氨基糖苷單體，在甚至用IO倍高的劑量時仍只能夠檢測到很少的氨基糖苷。這些進一步的結果證實了脂質體抗感染藥物制劑的緩釋特性，并且還證明了其保留的抗感染藥物仍然具有活性。在上述制劑中只有妥布霉素單體(0.1微克/mL)顯示在腎中具有任何可檢測水平的氨基糖苷。脂質體阿米卡星制劑的緩釋和庫存效果在圖5中得到進一步的證實。將嵌在瓊脂糖?；|中的銅綠假單胞菌通過氣管滴入以使大鼠患有慢性肺部感染，使用與效力研究中所使用的相同的微粒。接著通過氣管內給藥給予大鼠相的劑量(2mg/大鼠)的妥布霉素單體或脂質體阿米卡星(制劑Lip-An-14)。數據表明，所述數據是以微克抗感染藥物每克肺組織為單位隨時間測量的，脂質體抗感染藥物顯示出緩釋和庫存效果，而妥布霉素單體在24小時后顯示的肺部中的水平可忽略不計，認為這主要是由于快速的全身性的吸收。這比在肺部增加一百倍的氨基糖苷還要好，因為被感染大鼠中的脂質體阿米卡星制劑能夠證明下述觀點，即持續(xù)釋放的脂質體抗感染藥物的服用頻率明顯地少于目前批準的TOBI⑧制劑(一種由ChironCorporation,Ameryville,CA制備的妥布霉素吸入劑溶液)。阿米卡星的藥代動力學是通過氣管內(IT)給予大鼠妥布霉素單體或脂質體阿米卡星測定的。給藥劑量為2mg/大鼠。脂質體抗感染藥物技術的庫存效果得到了證明，因為與IT給予的妥布霉素單體相比，脂質體阿米卡星在給藥后二十四小時仍在感染肺部保持有大于一百倍的藥物增加。因此，與妥布霉素單體相比，脂質體制劑中的藥物治療水平能夠保持較長的一段時間。圖7顯示了有效量的抗感染藥物在肺中的顯著停留時間和累積，所述結果證明可以使用相對較不頻繁的劑量。每個劑量均為吸入(如上所述，在大鼠中，3只大鼠為一組)15mg/mL阿米卡星的霧化脂質體阿米卡星制劑(DPPC/膽固醇，1:1)4小時。給藥在第一天；第一、三和五天；或者第一、二、三、四和五天進行。將提供所給出的數據柱狀圖的大鼠在獲得各自的劑量數據柱狀圖后宰殺。所述制劑是如實施例中制備的?？梢允褂孟嗨频目垢腥舅幬飦碇委熂毎麅雀腥救绶翁烤液屯脽岵　Ｔ诜翁烤抑刑烤益咦与S氣霧劑達到肺泡。吸入的孢子被肺泡中的肺巨噬細胞吞下并通過淋巴管傳送到局部氣管支氣管淋巴結或縱隔淋巴結(Pile等人，1998;Gleiser等人，1968)。巨喧細胞位于兩種傳染性通道的中央并且是使宿主自毀于全身性(吸入)炭疽的主要原因。此外，由于其緩釋和尋靶特性，脂質體抗感染藥物制劑技術能夠加強細胞吸收并且能夠將肺泡巨噬細胞和肺上皮細胞用于藥物尋把和傳送。具有這些特征被認為能夠促進下述細胞內感染的治療，所述感染發(fā)生在肺部并且通過巨噬細胞傳送。更重要的是，這些特征能夠使抗感染藥物更加有效，因為脂質體抗感染藥物應能夠被許多患有疾病的細胞吞噬。抗感染藥物將以針對粑標的方式被細胞內釋放，所以進攻感染是在其分散前進行的。所包嚢的藥物可以是已經批準的藥物如環(huán)丙沙星、四環(huán)素、紅霉素或阿米卡星。已經開發(fā)出了脂質體環(huán)丙沙星制劑。在研究中，將該化合物給藥于小鼠，并將其與細胞內給藥的環(huán)丙沙星單體和口服給藥的環(huán)丙沙星單體進行比較，所述三種化合物全部是以同樣劑量給予的(圖6)。每只小鼠的劑量是15mg/kg,每組有三只小鼠。脂質體環(huán)丙沙星是DPPC/膽固醇(9:1)的形式，有效濃度為3mg環(huán)丙沙星/mL，所述制劑是如實施例制備的。脂質與藥物的比按重量計為12.5:1。與口服給藥的環(huán)丙沙星相比，小鼠肺部存在的脂質體環(huán)丙沙星的量比環(huán)丙沙星單體的量高兩個數量級。此外，24小時后只有脂質體環(huán)丙沙星在肺部仍呈現出可檢測的水平，而口服給藥的藥品在不到兩小時時就檢測不到了。該數據支持，使用脂質體環(huán)丙沙星制劑和其它的抗感染藥物如氨基糖苷、四環(huán)素和大環(huán)內酯來治療和預防性防止生物恐怖襲擊所使用的細胞內疾病。S丄/#|沐參^將所要使用的脂質溶于乙醇中以形成脂質-乙醇溶液。將所述脂質-乙醇溶液注入到含有將被包埋的生物活性劑分子的水或乙醇溶液中。脂質自然地形成泡嚢。表IO公開了脂質體抗感染藥物制劑的參數，其中脂質是DPPC和膽固醇。表IO.補充的脂質體抗感染藥物制劑參數。<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>氺DPPC/膽固醇脂質體，其中DPPC/膽固醇的摩爾比為大約1:1。**在計算L/D時僅考慮了阿米卡星的包埋量。關于形成脂質體抗感染藥物制劑的詳細情況可以參見2003年3月5日登記的PCT/US03/06847,將其全部內容引入本文作為參考。包埋體積是脂質體制劑的一個基本特征，其是作為每單位脂質的脂質體內水相體積而確定的。其通常用單位p升/|1摩爾表示。通常認度。較高的包埋體積隨后將導丈較高的藥^J脂質比^即較高的最終制劑總藥物濃度。然而，在脂質體阿米卡星的制劑過程中發(fā)現產生的實際藥物/脂質比率比以包埋體積為基礎預期的比率高3倍以上。表11顯示了4種不同脂質抗感染藥物制劑制品樣品(參見實施例一節(jié)中的實施例2)的結果。表ll.負載在不同方法制備的脂質體中的阿米卡星。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>樣品1和2是通過本文所公開的乙醇注入法制備的，樣品3和4是通過本領域已知的脂質體形成技術制備的。阿米卡星的濃度是通過免疫焚光試驗測量的，所述試驗使用了置于TDx分析器儀上的INNOFLUOSeradyn試劑。脂質是通過反相HPLC測定的，所述HPLC使用的是C-8柱和光散射檢測器。樣品#1-3中的脂質體體積(每單位總體積中脂質體所占的體積)是通過測量總體積和制劑濾失體積中的熒光探針(Sulforhodamine101或Carboxyfluorescein)的濃度而確定的，其中所述濾失體積是在CentriSart過濾裝置中通過離心分離獲得的。由于探針從脂質體所占體積中的排出，所以濾液中的探針濃度高于平均濃度。在樣品#4中，脂質體體積是通過向其中加入固定量的鉀離子后測量樣品中的鉀離子的濃度而確定的，其中向10mL的脂質體懸浮液(Vo)中加入250ul的KC1(V加人)。接著將藥品以4000rpm的轉速離心分離30min并取上層清液用Cole-Parmer鉀壽文感電極測量鉀離子(K)。由于鉀離子從脂質體所占體積中的排出，因此所測得的鉀離子的濃度通常比預期的高。在對照樣試驗中，向10mL鹽水溶液中加入等量的KC1。測量對照KC中的鉀濃度。接著如下估算水和脂質體的體積<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula>已知脂質體體積和脂質濃度后就可以確定包埋體積；，其中Lw和Lm分別是重量和摩爾脂質濃度。脂質的密度假定為接近1mg/mL。如果藥物理想地分散在脂質體內外的含水空間中，則由此就可以計算出樣品將具有的預期脂質/藥物比D。"-"Av"",其中Do是脂質體形成期間的藥物體積濃度，ML是脂質的平均重量分子量。正如所看到的，樣品#1和#2的實際L/D比(1.8和1.9)一致地^f氐于由均勻分布的阿米卡星所預期的比(5.6和6.0),而樣品#3和#4的L/D與理論值接近。在2種脂質抗感染藥物制劑樣品制品之間進行類似的比較，其中所述抗感染藥物是硫酸慶大霉素(參見實施例一節(jié)的實施例3)。表12中的數據表明本文所公開的方法提供了對慶大霉素的意想不到的高包埋。在#5和#6兩個樣品中，實際脂質/藥物比幾乎是理論預期值的兩倍。表12.負載在不同方法制備的脂質體上的慶大霉素<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>*綠/度卓應蘿J^介#的藥物以活性形式在感染附近的釋放是本發(fā)明脂質體藥物制劑作用的一個重要方面。上述尋靶釋放的潛能是通過監(jiān)測下述過程中的藥物釋放而測定的，所述過程為用來自CF患者的痰液進行培養(yǎng)，將其釋放到用銅綠假單胞菌預先培養(yǎng)過的大鼠肺部中，以及測量抵抗銅綠假單胞菌培養(yǎng)物的活性。用本發(fā)明的脂質體阿米卡星制劑直接培養(yǎng)銅綠假單胞菌培養(yǎng)物時的阿米卡星的釋放在前面已經討論過了。為了進一步研究該現象，將脂質體阿米卡星制劑用痰液制備物進行培養(yǎng)，其中所述痰液制備物來自感染有銅綠假單胞菌的嚢性纖維化患者。將咳出的痰液用牛DNaseI和海藻酸裂解酶在37。C下液化2hr。將脂質體氨丁卡制劑或溶解的阿米卡星(1mg/mL的阿米卡星)與液化的痰液或對照物以1:1的比例混合，并在37。C下輕輕搖動。用AbbottTDx分析儀分析一部分樣品的阿米卡星濃度。將完整的脂質體用去污劑細胞溶解于每種樣品的單獨的等分試樣中，所述去污劑為1%的TritonX-100。取每種樣品的上層清液用于分析。48小時后，在上述條件下(80-90%)的阿米卡星以時間依賴的方式從脂質組合物中釋放，這表明在CF肺部的感染位點處可能發(fā)生了藥物釋放。比較藥物單體在已經用含有銅綠假單胞菌的瓊脂粒侵染過的老鼠(3.5x104CFU/大鼠)和那些沒有被侵染的老鼠體內的從脂質體中的釋放。顆粒侵染三天后，使大鼠每日(無細菌的組)或隔日(用所述顆粒侵染的組)地吸入本發(fā)明的脂質體阿米卡星制劑(日劑量大約為6mg/kg)14天。在最后一次治療的24小時后，如上所述地測量總阿米卡星量和阿米卡星單體量。在接種了細菌的大鼠中，平均大約50-70%的被檢測阿米卡星是單體的形式，即從脂質體中釋放的阿米卡星。在沒有接種細菌的大鼠中，大約20-25%的藥物是單體的形式。這些數據強有力地表明阿米卡星單體從從脂質體中的釋放可能是由體內存在的銅綠假單胞菌介導的。釋放和活性的體外試驗是在與肺部藥代動力學試驗相似的條件下進行的，其中前面的內容已經表明抗生素單體在幾小時的時間坐標處得到清除。在無菌的5mLSlide-A-Lyzer筒中用銅綠假單胞菌PAOl(~108/mL)培養(yǎng)不同藥物濃度的阿米卡星單體或脂質體阿米卡星制劑。在這樣的條件下，單體藥物在幾小時的時間坐標處從筒中滲出。24hrs后，從筒中取出樣品并涂板以測量CFU。在初步實驗中，阿米卡星單體僅略^l地減少了這些樣品的CFU,而對以相同阿米卡星濃度(50貼/mL)含有脂質組分的阿米卡星來說則觀察到CFU的log值減少了兩個單位。這些數據表明在存在細菌時阿米卡星實際上是以主動的形式釋放的，并且所述制劑賦予的緩釋特性使得能夠更有效地使用藥物。本發(fā)明脂質體阿米卡星制劑與銅綠假單胞菌或其毒力因子的相互作用導致阿米卡星的釋放可能會直接地釋放到感染位點處。當阿米卡星得到釋放時其能夠主動地抵抗銅綠假單胞菌，并且在細菌附近的緩慢釋放要優(yōu)于非特異性的分散和吸入藥物單體的快速清除。S.5.^入^if,沐/t參教^/,單^^H/y應^#1^教詢本發(fā)明的脂質體阿米卡星制劑在一個實施方式中是納米尺寸的(200-300nm)脂質體-微嚢形式的阿米卡星，所述阿米卡星是被配制用來治療嚢性纖維化患者中的慢性銅綠假單胞菌感染的。將試驗設計為在肺中吸入緩釋的阿米卡星。由于已知肺泡巨噬細胞能夠積極地攝取該尺寸范圍內的粒子，所以脂質體制劑對這些細胞的作用是特別值得關注的。大鼠肺泡巨噬細胞的基本和激發(fā)的功能是通過灌洗獲得的，研究給予和不給予脂質體阿米卡星制劑時的上述功能并與多種對照物進行比較。用PARILCStar霧化器制備脂質體阿米卡星制劑、阿米卡星、安慰劑脂質體和鹽水的氣霧劑，并且使CDIGS雌性大鼠在鼻部專用吸入室中吸入上述氣霧劑。每天吸入治療4hr并連續(xù)進行14天，從而使脂質體阿米卡星組的總酯質的估算每日肺部劑量為大約12mg/kg,安慰劑脂質體組的為11mg/kg。對剩余的老鼠在第43天時實施安樂死。收集每只老鼠的支氣管肺泡灌洗液(BALF)并儲存在-8(TC下以用于隨后的一氧化氮(代表總硝酸鹽)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)分析。通過離心分離收集來自BALF的細胞，計數，并在含和不含脂多糖(LPS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24hr。通過離心分離來濃縮這些培養(yǎng)物的上層清液并分析一氧化氮和TNF-a。BAL巨噬細胞((106)/mL)的吞噬功能是通過測量細菌調理過的熒光微球(0.22(109)/mL)而測定的。14天連續(xù)吸入脂質體阿米卡星制劑、空白的脂質體、溶解的阿米卡星或鹽水沒有在大鼠肺部產生顯著的急性或延遲性炎癥響應，正如BALF中的一氧化氮(硝酸鹽)和TNF-a水平所證明的那樣，其中所述一氧化氮和TNF-a水平沒有明顯的不同于對照樣品，雖然在接受了吸入劑，包括對照樣品，的所有組中均存在早期達到較高NO水平的傾向。所有組中的細胞總病愈率沒有顯著的差異，在所有接受了吸入劑的組中在早期就傾向于具有較多的多形核白細胞白血球。盡管事實上在吸入脂質體的組中在第15天時所述大鼠肺泡巨噬細胞有增大的表現，但大鼠肺泡巨噬細胞在暴露于以上試驗制品的噴霧劑之后仍具有正常的功能。在研究的第15或43天檢測培養(yǎng)基中的肺泡巨噬細胞培養(yǎng)物，所;險測到的硝酸鹽和TNF-a濃度與對照試^r的濃度并無顯著差異。當接受LPS刺激時，巨噬細胞反應正常，產生了大量濃度的一氧乂>備fon/inn6爪4mei^j、4"tvtt"f《，nn6水4mfl由、；玄jt匕P噬細胞對熒光粒的吸收與未處理的對照物相同，這表明這些巨噬細胞仍具有正常的噬菌細胞功能。從細菌調理過的微粒的吞噬作用、炎性介質TNF—和NO的產生方面來看，連續(xù)14天吸入脂質體阿米卡星制劑基本上沒有影響肺泡巨噬細胞的功能。本發(fā)明的任何組合物的劑量將依賴患者的癥狀、年齡和體重，要治療或預防疾病的性質和嚴重性，給藥途徑和受試組合物的形式而改變。任何受試制劑都可以以單一劑量或分劑量給予。本發(fā)明組合物的劑量可通過本領域技術人員已知的技術或本文的教導容易地確定。在某些實施方式中，受試化合物的劑量通常在約0.01ng到約10g每千克的范圍內，特別是在約100ng到約50mg每千克的范圍內。對于本發(fā)明任何具體的組合物都需要確定有效劑量或有效量，以及影響制劑給藥周期的任何可能。這可以通過本文所描述的常規(guī)實驗使用一組或多組動物(優(yōu)選每組至少5只動物)或者如果合適的話在人體試驗中完成。任何受試化合物和治療或預防方法的有效性均可以通過下述方法進行評價，即給予組合物，測量一種或多種可應用的指數來評價給藥的作用，以及將這些指數治療后的數值與同一指數治療前的數值進行比較。任何具體受試組合物在給定患者中產生最有效治療的給藥精確時間和量依賴于受試組合物的活性、藥代動力學和生物利用度，患者的生理條件(包括年齡、性別、疾病類型和階段、一般身體狀況和對給定藥物劑量和類型的響應性)，以及給藥途徑等。本文所給出的指導可以用于優(yōu)化治療，例如確定最佳的給藥時間和/或給藥量，這需要的只是進行由監(jiān)測個體和調整劑量和/或時間組成的常規(guī)實驗。在個體接受治療的同時，可以通過在治療期間以預定次數測量一個或多個相關指數來監(jiān)測患者的健康狀態(tài)。治療，包括組合物、用量、給藥次數和制劑，可以根據上述監(jiān)測的結果而被最優(yōu)化?？梢詫颊哌M行周期性的再評估以確定改善的程度。可以基于這些再評估來調整受試組合物的給藥量并且還可能對給藥時間進行調整。治療可以從低于該化合物最佳劑量的較小的劑量開始。此后，可以通過很小的增量增加劑量直到獲得最佳治療效果。4吏用受試組合物可以減少組合物中所含的各個單個試劑(例如抗感染藥物)所需的劑量，因為不同試劑的起效和持續(xù)時間是可以互補的。受試組合物的毒性和治療效果可以通過標準藥學方法在細胞培養(yǎng)或實驗動物中測定，例如測定LD50和ED50。從細胞培養(yǎng)分析和動物研究中獲得的數據可以用于形成在人類中使用的劑量范圍。任何受試組合物的劑量優(yōu)選處在循環(huán)濃度的范圍之內，所述范圍包括低或無毒性的ED50。所述劑量可以在該范圍內變化，這依賴于所采用的劑型和所利用的給藥途徑。對于本發(fā)明的組合物，治療有效量最初可以由細胞培養(yǎng)試驗進行估算。/o.浙^y本發(fā)明的脂質抗感染制劑可以包含水分散系和脂質體。所述制劑可以含有形成脂質體的脂質賦形劑，和提供適當滲透性和pH值的鹽/緩沖液。所述制劑可以包含藥物賦形劑。藥物賦形劑可以是在將任何目標組合物或其組分從身體的一個器官或部位帶入或轉移到另一個器官或部位中所涉及的液體、稀釋劑、溶劑或包嚢材料。每種賦形劑必須都是"可接受的"，也就是與目標組合物及其組分相容并且對患者無害的。合適的賦形劑包括海藻糖、棉子糖、甘露糖醇、蔗糖、亮氨酸、trileucine和氯化釣。其它合適的賦形劑的實例包括(1)糖類，例如乳糖和葡萄糖；(2)淀粉類，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧曱基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)黃芪膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟類；(9)油類，例如花生油、棉子油、紅花油、麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)乙二醇，例如丙二醇；(11)多元醇類，例如甘油、山梨糖醇和聚乙二醇；(12)酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原的水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)其它用于藥物制劑的無毒相容物質。實施例實施例1以下詳細地說明了150mL的脂質體/復合阿米卡星的制備方法?？偝跏俭w積=1.5L乙醇含量=23.5%(v/v)脂質組合物DPPC/膽固醇(摩爾比為1:1)初始[月旨質]二7.6mg/mL初始[石危酸阿米卡星]=57.3mg/mL最終產品的體積=150mLI)復合和注入將7.47gDPPC和3.93g膽固醇在5(TC的水浴中直接溶解在352.5mL乙醇中。將85.95g硫酸阿米卡星直接溶解在1147.5mL的PBS緩沖液中。接著將溶液用10NNaOH或KOH滴定以使pH達到大約6.8。加入352.5mL的乙醇/脂質或者將其注入到1147.5mL的阿米卡星/緩沖液中以獲得1.5L的初始體積。將乙醇/脂質用蠕動泵以@-30mUmin(又稱為注入速度)泵送注入到阿米卡星/緩沖液中，所述阿米卡星/緩沖液是在室溫下在攪拌板上的反應容器中以150RPM的速度快速攪拌著的。將產品在室溫下攪拌20-30分鐘。II)透濾或"洗滌"步驟將混合容器鉤在蠕動泵和透濾筒上。透濾筒是截留分子量為500,000道爾頓的凹膜纖維。在室溫下將產品從反應容器中抽出，接著通過透濾筒倒進混合容器中。在整個彈藥筒內產生了大約7psi的反壓力。所述反壓力迫使阿米卡星單體和乙醇通過中空纖維膜，而脂質體阿米卡星(產品)則留在后面。在室溫下洗滌產品8次。向反應容器中加入(通過另一個蠕動泵)新鮮的PBS緩沖液以補償滲透除去的部分并且保持穩(wěn)定產物的體積。將產品濃縮。實施例2阿米卡星的高脂質體包埋。根據以下方法以多種脂質和抗感染藥物濃度制備四個脂質抗感染藥物制劑樣品。樣品#1.將1.72kg硫酸阿米卡星溶解在23升的鹽水溶液(0.9。/。NaCl)中并通過加入所需量的NaOH將pH調節(jié)到6.5。將脂質_98.2gDPPC和51.8g膽固醇溶解在7升的乙醇中。在勻速攪拌下以600mL/min的流量將脂質溶液注入到阿米卡星溶液中從而形成脂質體。接著將所產生的懸浮液用孔徑為500kD的AmershamHollowFiber筒進行透濾從而得到洗滌，以除去乙醇和未包埋的阿米卡星。對懸浮液進行濃縮使其最終體積為3.5L。樣品#2.方法與樣品#1的類似，只是所有材料的量均按比例縮小100倍。將17.2g石危酸阿米卡星溶解在230mL的鹽水溶液(0.9%NaCl)中并通過加入所需量的NaOH將pH調節(jié)到6.6。將脂質一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在70mL的乙醇中。在勻速攪拌下以300mL/mm的流量將脂質溶液注入到阿米卡星溶液中從而形成脂質體。接著將所產生的懸浮液用AmershamHollowFiber筒進行透濾從而得到洗滌，以除去乙醇和未包埋的阿米卡星。濃縮懸浮液使其最終體積為35m樣品#3.通過被稱為SPLV的方法來制備脂質體。將1.4g硫酸阿米卡星溶解在20mL鹽水溶液(0.9%NaCl)中使pH為3.3。將脂質體，即0.666gDPPC和0.333g膽固醇溶解在40mL二氯曱烷中。在一個500mL的圓底燒瓶中將阿米卡星和脂質溶液混合在一起并簡單地進行超聲處理以形成乳化液。接著將燒瓶連接到BUCHI旋轉蒸發(fā)系統上從而在真空(-5英寸Hg)、501:和勻速旋轉下除去二氯甲烷直至阿米卡星-脂質混合物形成凝膠。當凝膠最終破裂時，將真空逐漸增加到-20英寸Hg并繼續(xù)干燥30多分鐘。所形成的脂質體懸浮液的最終體積是22mL。樣品#4.方法與樣品#3的類似。將1.3g硫酸阿米卡星溶解在20mL鹽水溶液中并通過加入NaOH將pH調節(jié)到6.5。將脂質體，即0.583gDPPC和0.291g膽固醇溶解在35mL二氯甲烷中。跳過超聲處理步驟。在40。C下在旋轉蒸發(fā)系統上進行2hr的除溶劑步驟。最終體積為20mL。實施例3慶大霉素的高脂質體包埋。樣品#5.將20.0g硫酸慶大霉素溶解在230mL鹽水溶液(0.9%NaCl)中并通過加入所需量的硫酸將pH調節(jié)到6.5。將脂質一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在70mL乙醇中。在勻速攪拌下以500mL/min的流量將脂質溶液注入到慶大霉素溶液中來形成脂質體。用AmershamHollowFiber筒通過滲濾作用除去未包埋的慶大霉素和乙醇。濃縮懸浮'液至最鄉(xiāng)冬體積為35mL。樣品#6.方法與樣品#5的類似，除了將17.0g硫酸慶大霉素溶解在230mLNa2SO4的100mM溶液中并通過加入所需量的H2S04將pH調節(jié)到6.5。將脂質一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在75mL乙醇中。實施例4其它鹽形式的阿米卡星的包埋。樣品#7.方法與實施例2中的樣品#2類似。將10.7g阿米卡星堿和4.2g檸檬酸溶解在230mL鹽水溶液(0.9%NaCl)中。所得的阿米卡星-檸檬酸溶液的pH為6.2。將脂質一0.982gDPPC和0.518g膽固醇溶解在70mL乙醇中。在勻速攪拌下以500mL/min的流量將脂質溶液注入到阿米卡星溶液中以形成脂質體。用AmershamHollowFiber筒進行透濾以除去未包埋的阿米卡星和乙醇。濃縮懸浮液至其最終體積為~35mL。實際的脂質/藥物比與樣品#2的類似并且也低于預期值(藥物包埋比預期的高)。認為事實上是，樣品#7中的包埋體積僅為1.5(對比于樣品#2的2.5),預期/實際L/D比高達5.2。因此，脂質體檸檬酸阿米卡鹽，與硫酸阿米卡星一樣，也能夠用高包埋配制。表13.樣品5-7的參數總結。<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table>實施例5大鼠中來自所吸入的脂質體阿米卡星制劑的阿米卡星的生物利用度。在被大鼠吸入后測量來自脂質體的阿米卡星的釋放速度并與吸入的溶解阿米卡星的釋放速度進行比較。將測試物用附著在鼻部專用吸入室上的PariLCStar霧化器霧化。使CD⑧IGS大鼠連續(xù)14天地接受阿米卡星，其中肺部沉積劑量的推定量對于脂質體制劑形式的阿米卡星來說為6mg/kg,對于溶解的阿米卡星為5mg/kg,所述劑量可以作為單次劑量或日劑量。用Polytron儀將肺或其它組織勻質化。從肺部清除阿米卡星的動力學是通過在單次劑量治療后或在多次劑量給藥后的第1天和第28天時在變化的時間點分析肺組織勻漿而檢驗的。阿米卡星的水平是通過在存在或不存在1%TritonX-100時的Abbott丁0乂@分析儀的免疫熒光偏振測量的，所述TritonX-100能夠使阿米卡星從脂質體中釋放出來。在勻質化前，用脂質體刺穿整個肺樣品以在上述條件下檢測阿米卡星的釋放。在含或不含1%TritonX-100的情況下測量單體和總阿米卡星的量以評價藥物的滲出量。用Polytron勻化器在不存在上述去污劑時撒對組織進行勻質化的結果是，刺穿整個肺樣品的脂質體阿米卡星顯示不存在明顯的阿米卡星釋放。然而，1%TritonX-100的加入能夠使所有預期藥物均被回收。因此可以對阿米卡星的總水平(具有去污劑)與肺組織中的可利用單體水平進行直接比較。在以6mg/kg的單次劑量施用脂質體阿米卡星后立刻觀察到了高的阿米卡星總濃度(大約500-600jag/g肺組織)，該濃度在7天時間后緩慢減少大到約50%。來自這些脂質體的阿米卡星單體的瞬時釋放曲線顯示藥物單體具有高的初始濃度，這可能是由于噴霧作用導致的阿米卡星釋放。該階段之后是，在約第24小時處達到最低點，接下來增高，在給藥后96小時時達到279貼/g的最大值。在7天的實驗結束時，留在肺中的大部分(大約50-70%)藥物都是單體形式的。通過吸入給予的可溶解藥物的一小部分似乎也在肺中殘留了很長一段時間。然而，大多數以溶解形式給予的阿米卡星都在幾小時內就消失了，脂質體阿米卡星動物7天后的顯著阿米卡星單體AUC值比接受可溶解阿米卡星的動物的高至少2倍。這一特性的某些方面能夠用適當的清除速率常數和藥物從脂質體中的緩釋速率常數來定量地模型化。14天的連續(xù)給藥后(最后劑量后24小時)，在接受脂質體阿米卡星的大鼠肺部中，有超過20%的總阿米卡星以藥物單體的形式存在(大約650^g/g)。該總藥物單體水平甚至高于吸入了可溶解阿米卡星大鼠中的量(大約500|ig/g)。在健康動物的肺部中，阿米卡星單體是從脂質體阿米卡星制劑的脂質體中以天數為時間坐標緩慢地釋放的。所釋放的藥物單體在肺中具有相對較長的停留時間，正如所看到的，其使藥物單體大量地庫存于在肺部。實施例6管線內注入法管線內注入法的關鍵是將脂質溶液物料流與抗感染藥物溶液物料流通過例如Y形連接器來"管線內"混合，所述Y形連接器連接在一段管子上，該管子被定義為混合管，在該管中進行進一步的混合。從這一點來看，該新方法不同于"傳統的"乙醇注入法，后者是將脂質溶液作為物料流注入到大量的阿米卡星溶液中。阿米卡星和脂質溶液制品將12.0g^L酸阿米卡星溶解在200mL水中并通過加入需要量的25%的NaOH溶液將pH調節(jié)到6.5。將脂質，即1.480gDPPC和0.520g的膽固醇溶解在60mL乙醇和10mL水的混合物中。這樣的量在分別以300/500mL/min的脂質/阿米卡星流量注入后能夠產生300mL的批料。如果需要較大的規(guī)?；虿煌牧髁?，可以按比例調整所述體積。根據以上方法制備的阿米卡星溶液能夠產生大約40mg/mL的阿米卡星(每堿基)溶液。所存在的脂質溶液是DPPC/膽固醇(摩爾比為60/40)，其濃度為大約20mg總脂質/mL溶液(90%的乙醇)。為了更快的溶解，將脂質加熱到40。C。300mL批量所需的精確用量為阿米卡星150mL,脂質90mL，以及60mL額外的鹽水(或水)，在注入后或在注入過程中加入所述鹽水(或水)以調節(jié)最終的乙醇濃度。制造方法。圖8中顯示了注入系統的一個實施方式。使用Y形連接器(ID3.2mm,OD6.4mm)將脂質和阿米卡星溶液以300/500mL/min(即用1/1.67的體積比代替?zhèn)鹘y方法中1/3.35的體積比)的流量進行在管線內混合。使用MasterFlex管L/S25(ID4.8mm)來輸送脂質溶液，使用管L/S17(ID6.4mm)來輸送阿米卡星溶液。為了獲得同步的流量，用一個MasterFlex來驅動兩個泵頭。根據管的橫截面積，理論流量比應該是4.82/6.42=0.562=1/1.78。當將用于阿米卡星管L/S17的泵動力設置在500mL/min時，測量到的流量為~300/500=1/1.67。由于脂質溶液含有90%的乙醇，所以在管線內混合物含有~340/0的乙醇。為了防止阿米卡星沉淀，可以在注入后或注入期間以100-200mL/min的流量加入NaCl溶液(，"殳此時已經形成了脂質體)。因此，最終混合物將具有~27%的乙醇，預計這些乙醇能夠溶解所有的阿米卡星單體。800-1000mL/min的總液體注入流量與當使用兩個透濾筒時的滲透流量相當。這使得同時進行注入和透濾濃縮成為可能。使用Amershamhollowfiber筒UFP-500-C-3MA(隔膜面積140cm,纖維ID0.5mm)通過透濾來洗滌所產生的脂質體懸浮液以除去阿米卡星單體。在第一個步驟中，懸浮液被濃縮到接近原始體積的一半(150mL)。然后，在透濾洗滌期間，將懸浮液進行再循環(huán)，并以-6mL/min的流量向混合物中投入新鮮的鹽水溶液以與滲透流量相匹配并因此保持恒容。繼續(xù)進行透濾直到分配了4倍懸浮液體積的投入鹽水溶液(即4*150mL=600mL)。該透濾/洗滌方法^^皮稱為4次"洗滌"。最后，濃縮懸浮液(進行不投入鹽水的透濾)以獲得具有所需阿米卡星和脂質濃度的最終產品。透濾步驟期間的再循環(huán)流量為~350mL/min,在最后的濃縮步驟中逐漸將該流量降低為~150mL/min以使入口壓力保持低于10PSI。參考文獻1.Veldhuizen,R.,Nag,K.,Orgeig,S.和Possmayer，F.,TheRoleofLipidsinPulmonarySurfactant,Biochim.Biophys.Acta1408:90-108(1998)。2.Hagwood,S.,Derrick,M.和Poulain，F.,StructureandPropertiesofSurfactantProteinB,Biochim.Biophys.Acta1408:150-160(1998)。3.Johansson,J.，StructureandPropertiesofSurfactantProteinC,Biochim.Biophys.Acta1408:161-172(1998)。4.Ikegami,M.和Jobe,A.H.，SurfactantProteinMetabolisminvivo,Biochim.Biophys.Acta1408:218-225(1998)。5.Couveur,P.,Fattel，E.和Andremont,A.,LiposomesandNanoparticlesintheTre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抗感染藥物制劑，其中所述脂質制劑包含磷脂和類固醇。48.如權利要求33所述的脂質抗感染藥物制劑，其中所述脂質制劑包含磷脂和甾醇。49.如權利要求33所述的脂質抗感染藥物制劑，其中所述脂質制劑包含DPPC和膽固醇。50.如權利要求33所述的脂質抗感染藥物制劑，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星。51.如權利要求33所述的脂質抗感染藥物制劑，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質制劑包含磷脂和甾醇。52.如權利要求33所述的脂質抗感染藥物制劑，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質制劑包含DPPC和膽固醇。53.—種包含脂質制劑和抗感染藥物的脂質抗感染藥物制劑的制備方法，其包括將脂質溶液或混合物物料流與抗感染藥物溶液或混合物物料流混合，其中兩種物料流是在管線內混合的。54.如權利要求53所述的方法，其中兩種物料流在進行在管線內混合之前要先進入Y形連接器。55.如權利要求53所述的方法，其中所述溶液或混合物是含水或醇的。56.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體。57.如權利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是氨基糖普。58.如權利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是選自阿米卡星、慶大霉素或妥布霉素的氨基糖苷。59.如權利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是阿米卡星。60.如權利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是慶大霉素。61.如權利要求53所述的方法，其中所述抗感染藥物是妥布霉素。62.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物物料流與抗感染藥物溶液或混合物物料流是以700到900mL/min的總流量混合的。63.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物物料流與抗感染藥物溶液或混合物料流是以800mL/min的總流量混合的。64.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物物料流是以200到400mL/min的流量加入的。65.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物物料流是以300mL/min的流量加入的。66.如權利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物物料流是以400到600mL/min的流量加入的。67.如權利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物物料流是以500mL/min的流量加入的。68.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物料流是以300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以500mL/min的流量力口入的。69.如權利要求53所述的方法，其中混合物料流的溫度是30-40。C。70.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物的溫度是為3(TC,抗感染藥物溶液或混合物的溫度為3(TC。71.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物的溫度為50°C,抗感染藥物溶液或混合物的溫度是室溫。72.如權利要求53所述的方法，其進一步包括在混合后將混合物料流用水稀釋至少20秒的步驟。73.如權利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物的濃度是30到50mg/mL。74.如權利要求53所述的方法，其中抗感染藥物溶液或混合物的濃度是40到50mg/mL。75.如權利要求53所述的方法，其中脂質溶液或混合物料流是以300mL/min的流量加入的，抗感染藥物溶液或混合物物料流是以500mL/min的流量加入的；混合物料流的溫度是30-40°C;混合后將混合物料流用水稀釋至少20秒；并且抗感染藥物溶液或混合物的濃度是40到50mg/mL。76.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含磷脂。77.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含類固醇。78.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含甾醇。79.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含DPPC。80.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含膽固醇。81.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含磷脂和甾醇。82.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質包含DPPC和膽固醇。83.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星。84.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質包含磷脂和甾醇。85.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星，并且所述脂質包含DPPC和膽固醇。86.如權利要求53所述的方法，其中脂質與抗感染藥物的比為1:1或小于1:1。87.如權利要求53所述的方法，其中脂質與抗感染藥物的比為0.75:1或小于0.75:1。88.如權利要求53所述的方法，其中脂質與抗感染藥物的比為0.5:1或小于0.5:1。89.如權利要求53所述的方法，其中所述脂質制劑是脂質體，所述抗感染藥物是阿米卡星，所述脂質包含DPPC和膽固醇，并且脂質與抗感染藥物的比為1:1或小于1:1。90.—種用于肺部感染患者的治療方法，其包括向患者給藥以治療有效量的權利要求1或33所述的脂質抗感染藥物制劑。91.如權利要求90所述的方法，其中所述肺部感染是假單胞菌，銅綠假單胞菌(尸^n^,脂m)、少動假單胞菌(尸/^wc,mo^7")、惡臭假單胞菌(尸pw〃c/a)、熒光假單胞菌(7VZwor^ce朋)和食酸假單胞菌(尸ac/Jovorara)),葡萄球菌，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，MJ求菌,月申炎卡連5求菌(iSVrejf^oc'occz^/wewwom'ae)、大腸斥干菌(￡^c/^n'c/zz.aco//)、克氏桿菌(《/eZw'e〃(2)、腸桿菌(￡>7fera6a"er)、沙雷菌(5"erra"'")、嗜血斥干菌(//"ewo//2,7z^)、耶爾才糴氏菌pesos(yeAS7'w'a)類鼻疽伯克霍爾德氏菌(，ew^顧〃e/)、洋蔥伯克霍爾德氏菌(S.ce/^c/a)、椰毒伯克霍爾德氏菌(S.g/a&o//)、吩，溱伯克霍爾德氏菌(S.ww/"vorara)、越南伯克霍爾德、氏菌(5.W"waw/e^7^)、結核菌分才支4干菌(A<(vco6"c,e〃ww,w厶en:'w/oszJ),鳥分斗支4干菌復合菌(vVf.av/wmcow//e;c)(MAC)、烏分枝桿菌("v,ww)、胞內分枝桿菌(M,"/race〃w/we)、堪薩斯分枝桿菌(A/.y^mm7)、蟾分枝桿菌(M.jce朋p)、海洋分枝桿)、潰瘍分枝桿菌(M.w/cera朋)、偶發(fā)分枝桿菌復合菌(A/./ortw"wmcow//ex)、偶發(fā)分枝桿菌(Af./oWw"wm)或龜分枝桿菌(c/ze/owe,)感染。92.—種用于由嚢性纖維化引起的肺部感染患者的治療方法，其包括向患者給藥以治療有效量的如權利要求1或33所述的脂質抗感染藥物制劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種脂質抗感染藥物制劑，其基本上不含陰離子脂質，其中脂質與抗感染藥物的比為約1∶1到約4∶1，其平均的平均直徑小于約1μm。本發(fā)明還提供了一種制備脂質抗感染藥物制劑的方法，其包括注入步驟。本發(fā)明還提供了一種脂質抗感染藥物制劑，其中脂質與藥物的比為約1∶1或更小，約0.75∶1或更小，后者約0.5∶1或更小，所述制劑是通過管線內注入法制備的。本發(fā)明還涉及一種肺部感染患者的治療方法，其包括向患者給要以治療有效量的本發(fā)明脂質抗感染藥物制劑。本發(fā)明還涉及囊性纖維化患者的治療方法，其包括向患者給藥以治療有效量的本發(fā)明脂質抗感染藥物制劑。文檔編號A61K9/00GK101267806SQ200680034397公開日2008年9月17日申請日期2006年7月19日優(yōu)先權日2005年7月19日發(fā)明者B·S·米勒,L·T·博尼,V·馬利寧,X·李申請人:特蘭薩夫公司