專利名稱：：來源于乳的組合物及其用于增強(qiáng)肌肉量或肌肉力量的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生產(chǎn)用作營養(yǎng)補(bǔ)充劑的包含乳制品的組合物。更具體地，本發(fā)明涉及包含乳清生長因子提取物(wheygrowttifactorextract,WGFE)的組合物，以及用于補(bǔ)充進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的個體營養(yǎng)需求的方法。
背景技術(shù)：
：應(yīng)當(dāng)才艮據(jù)本領(lǐng)域的當(dāng)前狀況來理解本發(fā)明。然而，以下論述并不3一承認(rèn)所引用的任何資料在本申請優(yōu)先權(quán)日時已在澳大利亞公開、使用或者作為公知常識的一部分。對人甚至動物應(yīng)用營養(yǎng)補(bǔ)充劑以改善總體健康或者提高例如運(yùn)動成績是公知的。營養(yǎng)補(bǔ)充劑并不意在提供完全飲食所必需的所有營養(yǎng)，而是通常旨在補(bǔ)充飲食攝入以使?fàn)I養(yǎng)更加全面。已經(jīng)認(rèn)識到維生素、礦物質(zhì)和在這種補(bǔ)充劑中存在的其它物質(zhì)發(fā)揮著重要的生理作用，并且某些維生素、礦物質(zhì)和/或其他補(bǔ)充劑成分的缺乏已經(jīng)與某些疾病的發(fā)生、總體健康的下降或運(yùn)動成績的降低聯(lián)系起來。相反，已知營養(yǎng)補(bǔ)充劑在多種條件下增強(qiáng)多種生理狀態(tài)。營養(yǎng)補(bǔ)充劑有許多目標(biāo)對象，例如生病的患者、康復(fù)中的患者、老年人以及執(zhí)行高強(qiáng)度運(yùn)動方案的希望提高成績和/或從這種運(yùn)動中得到恢復(fù)的人。參加健身的人和進(jìn)行高強(qiáng)度體育運(yùn)動的人的營養(yǎng)需求是非常特殊的，無論是降低身體脂肪和增加無脂肪肌肉(leanmuscle)量/尺寸或力量、提高速度和/或耐力和/或改善從高強(qiáng)度運(yùn)動中的恢復(fù)都是如此。蛋白質(zhì)補(bǔ)充劑已被上i^A^廣泛使用，以促進(jìn)肌肉蛋白質(zhì)合成，從而修Jj^肉組織和促進(jìn)肌肉生長。營養(yǎng)補(bǔ)充劑可以以飲品或食品的形式提供，包括應(yīng)用時與液體混合的蛋白質(zhì)粉、營養(yǎng)棒和點(diǎn)心、片劑、膠嚢和其它制品。市售的合適蛋白質(zhì)源包括水解的乳蛋白質(zhì)、S^白酸鹽、大豆蛋白分離物和M濾的脫脂乳制備的乳蛋白濃縮物。也可以利用基于其它蛋白質(zhì)源(如乳清蛋白質(zhì))的營養(yǎng)補(bǔ)充劑，并且可以以果汁的形式提供，但是認(rèn)為這是不夠的，因?yàn)樗鼈兾赐瑫r拔^供脂質(zhì)源(WO02/15720)。此外，還考慮到一些來源于乳的蛋白質(zhì)不易，吸收，或者不能承受消化系統(tǒng)的嚴(yán)苛環(huán)境，從而不具有治療作用。乳清生長因子提取物就是這樣一種迄今仍認(rèn)為不能用作營養(yǎng)補(bǔ)充劑的乳制品，因?yàn)轭A(yù)計所述提取物中的任何生物活性蛋白質(zhì)在經(jīng)吸收后都將喪失活性。盡管如此，有報導(dǎo)說乳清蛋白質(zhì)補(bǔ)充劑能夠在參加抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的人中在增強(qiáng)肌肉量/尺寸和力量方面提供益處。已有報導(dǎo)說參加健身的人可利用乳清蛋白質(zhì)分離物(wheyproteinisolate,WPI)和乳蛋白分離物(milkproteinisolate,MPI)快速獲得無脂肪肌肉量/尺寸并減少身體脂肪。WPI富含支鏈絲酸，被認(rèn)為是"快速"發(fā)揮作用的，而MPI主要是絲白，代謝較慢并且更有效地促進(jìn)肌肉生長。卵白蛋白是提供高質(zhì)量氨基酸源的一個備選方案。最近的數(shù)據(jù)表明，運(yùn)動之前和/或之后補(bǔ)充蛋白質(zhì)能夠刺激更強(qiáng)的蛋白質(zhì)合成，盡管肌肉量的增加是少且可變的(Andersen等，Metabolism,2005，54(2):151國156)。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，包含乳清生長因子提取物的組合物顯著提高肌肉力量的增加，這超過了現(xiàn)有技術(shù)中的組合物(包括僅含WPI的組合物)所達(dá)到的效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及能使進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的人們進(jìn)一步提高其肌肉力量的組合物和方法。因此，本發(fā)明的一個目的是提供用于提高肌肉力量的對現(xiàn)有技術(shù)有所改進(jìn)的組合物和方法。才艮據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供骨骼肌力量增強(qiáng)組合物，其中包含乳清生長因子提取物，所述乳清生長因子提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供骨骼肌力量增強(qiáng)組合物，其中包含乳清生長因子提取物，所述乳清生長因子4^取物通過包括以下步驟的方法分離自乳制品a)將所述乳制品應(yīng)用于SPSepharose陽離子交換柱，b)用低離子強(qiáng)度的緩沖液洗滌該柱，c)在pH6.5下用緩沖液洗脫WGFE級分，該緩沖液包含0.4-0.5M的NaCl或者相當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供骨骼肌力量增強(qiáng)組合物，其中包含乳清生長因子提取物，所述乳清生長因子提取物通過包括以下步驟的方法分離自乳制品a)將所述乳制品應(yīng)用于SPSepharose陽離子交換柱，b)用包含0.008M或更低濃度NaCl的緩沖液洗滌該柱，c)在pH6.5下用緩沖液MWGFE級分，該緩沖液包含0.4M的NaCl或者相當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度。在本發(fā)明的另一方面中，提供根據(jù)上述的組合物，其中所述乳清生長因子提取物從選自以下的乳制品中分離全乳、干酪乳清、凝乳酶酪蛋白乳清(rennetcaseinwhey)、酸性S^白乳清或其濃縮物或者脫脂乳。在本發(fā)明的另一方面中，提供根據(jù)上述的組合物，其用作肌肉力量和/或尺寸增強(qiáng)劑。在本發(fā)明的另一方面中，提供改善進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，其包括對該受試者施用有效量的包含乳清生長因子提取物的組合物，所述乳清生長因子提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。在本發(fā)明的另一方面中，提供改善進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，其包括對該受試者施用有效量的包含乳清生長因子提取物的組合物，所述乳清生長因子^^取物通過包括以下步驟的方法分離自乳制品a)將所述乳制品應(yīng)用于SPSepharose陽離子交換柱，b)用低離子強(qiáng)度的緩沖液洗滌該柱，c)在pH6.5下用緩沖液洗脫WGFE級分，該緩沖液包含0.4-0.5M的NaCl或者相當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度。在本發(fā)明的另一方面中，提供改善進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，其包括對該受試者施用有效量的包含乳清生長因子^l取物的組合物，所述乳清生長因子^^取物通過包括以下步驟的方法分離自乳制品a)將所述乳制品應(yīng)用于SPS印harose陽離子交換柱，b)用包含0.008M或更低濃度NaCl的緩沖液洗滌該柱，c)在pH6.5下用緩沖液洗脫WGFE級分，該緩沖液包含0.4M的NaCl或者相當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度。在本發(fā)明的另一方面中，提供改善進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，其中每日劑量中所施用的乳清生長因子提取物為至少5mg/kg體重至12.5mg/kg體重。優(yōu)選地，乳清生長因子4^取物的日劑量為至少25mg/kg體重。在本發(fā)明的另一方面中，提供通過陽離子交換層析分離自乳制品的乳清生長因子《^取物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于治療需要改善骨骼肌力量和/或尺寸的受試者。在本發(fā)明的另一方面中，提供通過上述方法分離自乳制品的乳清生長因子提取物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于治療需要改善骨骼肌力量和/或尺寸的受試者。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供包含乳清生長因子提取物和其他蛋白質(zhì)源的骨骼肌力量增強(qiáng)組合物，所述乳清生長因子4C取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，所述其他蛋白質(zhì)源是乳清蛋白質(zhì)，優(yōu)選乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)，更優(yōu)選包含以下的乳清蛋白質(zhì)分離物水分5.0%脂肪0.5%pH(5。/。溶液)6.3灰分3.7%乳糖0.5%蛋白質(zhì)(TNx6.38)90.0%鈉0.7%磷0.3%鉀0.15%在本發(fā)明的另一方面中，提供提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，包括對所述受試者施用有效量的組合物，所^ia合物包含乳清生長因子提取物和其他蛋白質(zhì)源，例如乳清，優(yōu)選WPI。在本發(fā)明的另一方面中，提供提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，包括對所述受試者施用組合物，所^ia合物^^有效量的乳清生長因子提取物以及分開^的其他蛋白質(zhì)源，所述提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。優(yōu)選地，每日劑量中所施用的其他蛋白質(zhì)源為至少225mg/kg體重(干重)，優(yōu)選至少435mg/kg體重(干重)。在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的組合物每兩天或三天一次至多達(dá)每天至少一次地施用，優(yōu)選在抗阻運(yùn)動訓(xùn)練之前施用和/或之后立即施用，更優(yōu)選在抗阻運(yùn)動訓(xùn)練之后立即施用，最優(yōu)選在運(yùn)動4L后20分鐘至2小時施用。在本發(fā)明的另一方面中，提供通過陽離子交換層析分離自乳制品的乳清生長因子4^取物和其他蛋白質(zhì)源用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于治療需要改善骨骼肌力量和/或尺寸的受試者。在本發(fā)明的另一方面中，提供包含本發(fā)明組合物的食品或飲品，其用于提高進(jìn)行抗P且運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法中。在本發(fā)明另一方面中，提供本發(fā)明組合物用于生產(chǎn)提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的食品或飲品的用途。圖1對于成年受試者腿部推蹬(legpress)的CybexNORM測力計重復(fù)最大力量測試結(jié)果，該測試在試驗(yàn)開始時(訓(xùn)練前)以及通過在3小時抗阻運(yùn)動訓(xùn)練之后立即施用20gWPI(A組)、1gWGFE+20gWPI(Bl組)、或2gWGFE+20gWPI(B2組)處理6和12周后(訓(xùn)練后)在靜息時進(jìn)行。結(jié)果表示為平均值士SEM。圖2在抗P且運(yùn)動訓(xùn)練并用20gWPI(A組)、1gWGFE+20gWPI(Bl組)、或2gWGFE+20gWPI(B2組)處理12周后(訓(xùn)練后)，成年受試者股外側(cè)肌中纖維類型組成的變化百分比。結(jié)果表示為平均值士SEM。圖3試驗(yàn)開始時(訓(xùn)練前)和用20gWPI(A組)、1gWGFE+20gWPI(Bl組)、或2gWGFE+20gWPI(B2組)處理12周后(訓(xùn)練后)，在靜息時和3小時抗阻運(yùn)動訓(xùn)練后成年受試者股外側(cè)肌中Pax7和多配體蛋白聚糖3(Syndecan3)基因(mRNA)表達(dá)的倍數(shù)變化。結(jié)果表示為平均值士SEM。圖4A:在48小時中應(yīng)答于濃度為0.04-5mg/ml的LP(WGFE)或初乳刺激的L6成肌細(xì)胞生長測定。每個點(diǎn)代表一式三份測定的算術(shù)平均值士SEM。包括10%FCS作為陽性對照。初乳由MurrayGoulburnCo-OpPtyLtd.生產(chǎn)。4B:48小時中的L6成肌細(xì)胞生長測定，其測量針對最高為10mg/ml的LP(WGFE)的劑量反應(yīng)。每個點(diǎn)代表一式三份測定的算術(shù)平均值士SEM。4C:在48小時中應(yīng)答于5mg/mlLP(WGFE)的以及未剌激的L6成肌細(xì)胞生長測定。圖示的值表示在3個獨(dú)立試驗(yàn)中獲得的平均應(yīng)答的算術(shù)平均值士SEM。圖5:在48小時中應(yīng)答于100mg/mlCPI(WPI)或100mg/mlFMP(WGFE)或其它乳級分如初乳、乳鐵蛋白(LF)和10%FCS('+ve，對照)的BalbC3T3成纖維細(xì)胞生長測定。圖示的值表示在3個獨(dú)立試驗(yàn)中獲得的平均應(yīng)答的算術(shù)平均值士SEM。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及能使進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的人提高其肌肉力量的組合物和方法。因此，本發(fā)明的一個目的是提供用于提高肌肉力量的對現(xiàn)有技術(shù)有所改進(jìn)的組合物和方法。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供包含乳清生長因子提取物的骨骼肌力量增強(qiáng)組合物，所述乳清生長因子提取物通過陽離子交換層析分離自乳制用于本發(fā)明的乳清生長因子提取物可以通過如澳大利亞專利號645589(PCT/AU91/00303)(其通過參考并入本文)中所述方法分離自乳、脫脂乳、乳衍生物、乳清、初乳和初乳衍生物。這種方法基本上依賴于強(qiáng)陽離子交換層析^初始材料中選擇性提M性蛋白質(zhì)，從而組成乳清生長因子提取物。產(chǎn)生WGFE級分的方法生產(chǎn)用于本發(fā)明的WGFE的一種優(yōu)選方法是使用裝有SP(磺丙基)Sepharose的柱。對該柱應(yīng)用乳制品(優(yōu)選脫脂乳)流，直至所應(yīng)用的乳體積達(dá)到^柱中的樹脂體積的高達(dá)1000倍。用低離子強(qiáng)度(<0.008MNaCl或相當(dāng))的緩沖液去除柱中殘留的乳10分鐘。用緩沖液從所述柱中洗脫WGFE級分，該緩沖液包含相當(dāng)于0.4-0.5MNaCl(然而其它陽離子也是適合的)、最優(yōu)選0.4MNaCl的鈉離子。流動相可具有4艮寬的pH范圍，比如4.5-9.0，優(yōu)選5.5-7.5，最優(yōu)選約6.5。在上限和下限時，蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)結(jié)合陽離子交換樹脂的能力都受到影響。5.5-7.5范圍內(nèi)的pH提供最高WGFE產(chǎn)率。適于吸附WGFE組分的陽離子交換樹脂類型可以包括如Sepharose陽離子交換樹脂珠之類的樹脂。例如，分別包含磺丙基官能團(tuán)和羧曱基基團(tuán)的SPSepharoseBigBeads和CMSepharose珠(GEHealthcare的產(chǎn)品)是適合的。陽離子交換樹脂珠的大小優(yōu)選為45-300nm。對于本發(fā)明的WGFE純化而言，45-165jim和100-300nm范圍內(nèi)的兩種SPSepharose,是適合的。可對WGFE級分進(jìn)行的進(jìn)一步處理之一是通過如透析或超濾進(jìn)行脫鹽。因此，在本發(fā)明的另一方面中，提供根據(jù)上述的組合物，其中所述乳清生長因子拔_取物分離自乳清或脫脂乳。用作初始材料的乳清可以是干酪乳清、凝乳酶酪蛋白乳清、酸性酪蛋白乳清或其濃縮物。用于本發(fā)明的乳清生長因子提取物和蛋白質(zhì)源的量應(yīng)足以實(shí)現(xiàn)對肌肉力量和/或尺寸增加的改善或者具有療效。在本發(fā)明的另一方面中，提供給藥方案，其中每日劑量中施用的乳清生長因子提取物的量為至少5mg/kg體重至12,5mg/kg體重。優(yōu)選地，乳清生長因子提取物的日劑量為至少25mg/kg體重。在本發(fā)明的另一方面中，提供改善進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法，包括對所述受試者施用有效量的包含乳清生長因子提取物的組合物。與僅施用蛋白質(zhì)源的受試者相比，當(dāng)所述組合物包含其他蛋白質(zhì)源(可以是任何適于消費(fèi)的蛋白質(zhì)源，比如WPI)時，運(yùn)動后肌肉力量增加。所述蛋白質(zhì)源可得自全乳，優(yōu)選得自乳清蛋白質(zhì)，更優(yōu)選得自乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)?？蓮腗urrayGoulburnCoOpCompanyLtd.購得商品名為NatraProTM的這樣一種乳4蛋白質(zhì)分離物。NatraProTMWPI的典型組成包括<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物還包含蛋白質(zhì)源，并且在給藥方案中，每日劑量中所施用的蛋白質(zhì)源為至少225mg/kg體重(干重)，優(yōu)選至少435mg/kg體重(干重)。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可以在訓(xùn)練當(dāng)天或者訓(xùn)練當(dāng)天和/或其它時間施用這樣的組合物，只要施用方案導(dǎo)致肌肉力量和/或尺寸增加即可。優(yōu)選在運(yùn)動當(dāng)天施用，更優(yōu)選',在運(yùn)動之前施用和/或運(yùn)動之后立即施用。更優(yōu)選在運(yùn)動后20分鐘至2小時進(jìn)行施用。因此，在本發(fā)明的一個優(yōu)選方面中，提供如上所述的方法，其中在運(yùn)動之后立即施用。在本發(fā)明的另一方面中，提供乳清生長因子提取物用于生產(chǎn)藥物的用途，所述藥物用于治療需J^提高骨骼肌力量和/或尺寸的受試者。例如，肌肉萎縮的患者或者老年人可能需要進(jìn)行抗f^動訓(xùn)練，以再次建立其肌肉力量。包含本發(fā)明組合物的藥物可以進(jìn)一步幫助受試者恢復(fù)其肌肉力量。此外，本發(fā)明的組合物可用于在期望提高肌肉力量的非人哺乳動物比如馬、靈緹犬(greyhound)等中提高肌肉力量。在本發(fā)明的另一方面中，提供包含本發(fā)明組合物的食品或飲品，其用于提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的方法。在本發(fā)明另一方面中，提供本發(fā)明組合物用于生產(chǎn)提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中骨骼肌力量和/或尺寸的食品或飲品的用途。應(yīng)當(dāng)理解，可以以片劑或膠嚢劑的形式生產(chǎn)用于對進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者施用的本發(fā)明組合物。WPI通常包含約90%(重量/體積)蛋白質(zhì)；因此，20gWPI包含約18g(重量/體積)蛋白質(zhì)作為營養(yǎng)源。乳清生長因子提取物通常包含約85%(重量/重量)蛋白質(zhì)；因此，2g乳清生長因子4I:取物包含約1.7g(重量/體積)蛋白質(zhì)作為營養(yǎng)源。應(yīng)當(dāng)理解，在本文中描述的發(fā)明并不僅限于所公開特征的具體實(shí)施例。實(shí)施例實(shí)施例l:臨床試驗(yàn)實(shí)施了一項(xiàng)臨床試驗(yàn)，其中20名年輕男性參加了三個月的隨機(jī)雙盲抗阻訓(xùn)練計劃。根據(jù)澳大利亞專利號645589(PCT/AU91/00303)概括描述的方法(更詳細(xì)描述見上文)制備乳清生長因子提取物。每種乳清蛋白質(zhì)制劑均包^^人工^5^劑(NutrasweetTM，NutrasweetCompany,USA)。在每次運(yùn)動(exercisesession)后立即服用乳清蛋白質(zhì)制劑，每個受試者在監(jiān)督下每周完成三次運(yùn)動。將受試者隨機(jī)分配至三個補(bǔ)充劑組之一A組NatraPro(WPI);20g/劑量；n=7Bl組NatraPro(WPI)加WGFE;20gWPI加1gWGFE/劑量；B2組NatraPro(WPI)加WGFE;20gWPI加2gWGFE/劑量；NatraProTMWPI的典型組成包括n=6ii=,水分脂肪pH(5%溶液)灰分乳糖蛋白質(zhì)(TNx6.38)鈉磷鈣5.0%0.5%6.33.7%0.5%90.0%0.7%0.3%0.15%本發(fā)明的WGFE的典型組成包括:水分脂肪pH(5%溶液)5.0%<0.5%6.7%灰分1.5%pH(2%溶液)5.5-6.5通過應(yīng)用CybexNORM測力計檢測腿伸展力來分析肌肉力量。肌肉分析應(yīng)用透皮針活檢技術(shù)從右腿股外側(cè)肌收集肌肉樣品。對切下的肌肉組織進(jìn)行目測檢查，仔細(xì)地解剖去除任何脂肪或結(jié)締組織，通過吸附去除多余的血，并立即冷凍在液氮中用于后續(xù)分析。將一部分肌肉組織包埋在水性包埋^h質(zhì)中，并在用液氮冷卻的異戊烷中冷凍，用于后續(xù)的免疫組織化學(xué)分析。及A^炎承在差厲衷這分浙根據(jù)生產(chǎn)商的說明書使用totallyrna試劑盒和試劑(AmWonInc.)從骨骼肌樣品中提取RNA。使用Agilent2100生物分析儀(AgilentTechnologies,Inc.)測定總RNA濃度和質(zhì)量。隨后，使用AMV逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒方案和試劑(Promega)將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。應(yīng)用經(jīng)PrimerExpress2.0軟件設(shè)計的基因特異性引物在AppliedBiosystems7500實(shí)時pcr系統(tǒng)上實(shí)施基因表達(dá)分析。^建逸織必夢將每個樣品的連續(xù)切片(10nm)包埋在顯微鏡載片上，用于M蛋白重鏈纖維類型的分析?；贐ehan的方案，應(yīng)用基于M^蛋白快和慢亞型的免疫組織化學(xué)技術(shù)ilb險查纖維類型分布以及肌肉橫截面積。使用標(biāo)準(zhǔn)免疫組織化學(xué)技術(shù)和針對目的蛋白質(zhì)的抗體來實(shí)施蛋白質(zhì)的細(xì)胞定位。結(jié)果結(jié)果表示為平均值土SEM，使用Bonforoni事后檢驗(yàn)通過雙因素ANOVA計算顯著性。在訓(xùn)練之前和之后均未觀察到年齡、體重、身高或BMI值方面的顯著差異。表l-受試者特征<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>所有受試者在12周的力量訓(xùn)練中均顯示骨骼肌力量的改善。NatraProWPI(Bl)組顯示比(A)組高約23%的腿部推蹬力量提高，而NatraProWPI(B2)組顯示比^l接受蛋白質(zhì)源的受試者(NatraProWPI(A)，圖1)高35%的腿部推蹬力量提高。骨骼肌纖維類型變化通逸沲用乳清生長因子提取物而改變了劃分為l型('lt/氧化)或2型(快/糖酵解)肌纖維的百分比，其導(dǎo)致2B型(多l(xiāng)t糖酵解)纖維類型比例增加并且l型(慢)纖維類型比例相應(yīng)減少的趨勢(圖2)。基因表達(dá)分析基因表達(dá)和協(xié)調(diào)(coordination)的提高是活化位于肌肉床(musclebed)內(nèi)的干細(xì)胞(衛(wèi)星細(xì)胞)的必需過程(Anderson&Wozniak,CanJPhysiolPharmacol.2004;82(5):300-10)。衛(wèi)星細(xì)胞是一種成體干細(xì)胞類群，其在成熟之前迅速增殖，并最終與現(xiàn)有肌纖維融合或者連接在一起以產(chǎn)生新的肌纖維。衛(wèi)星細(xì)胞活化的調(diào)節(jié)因子包括多配體蛋白聚糖-3(衛(wèi)星細(xì)胞增殖所必需的跨膜硫^t素蛋白IMI)、Pax-7(衛(wèi)星細(xì)胞活化必需的和肌肉組織修復(fù)所必需的未知功能蛋白質(zhì))(Seale等，DevBiol.2004;15;275(2):287國300,Cornelison等，DevBiol.2001;239(1):79畫94)。Pax7和多配體蛋白聚糖3的表達(dá)在訓(xùn)練12周之后通常增加，施用乳清生長因子提取物時更加明顯(圖3)。數(shù)據(jù)支持WGFE提高抗阻運(yùn)動訓(xùn)練之后的肌肉力量和/或尺寸。數(shù)據(jù)還支持，WGFE與其他蛋白質(zhì)源如WPI組合施用時，力量增加的提高比單獨(dú)施用WPI(—種已知由進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練受試者所使用的蛋白質(zhì)源)時所觀察到的程度更高。作為對這一點(diǎn)的支持，觀察到施用乳清生長因子提取物促進(jìn)肌纖維類型由慢(1型)向快(2型)轉(zhuǎn)變，并且提高肌肉干細(xì)胞活化基因Pax7和多配體蛋白聚糖3的表達(dá)。實(shí)施例2:WGFE對L6成肌細(xì)胞生長的影響實(shí)施體外肌細(xì)胞生長研究，其中L6成肌細(xì)胞在WGFE(LP)、初乳、10%胎牛血清(FCS)、或者僅培養(yǎng)基(未刺激的)存在下培養(yǎng)。按照實(shí)施例1制備乳清生長因子4^取物。圖4A:在48小時中應(yīng)答于濃度為0.04-5mg/mlWGFE或初乳刺激的L6成肌細(xì)胞生長測定。每個點(diǎn)代表一式三份測定的算術(shù)平均^iiSEM。在48小時中用5mg/mlWGFE進(jìn)行刺激時，細(xì)胞數(shù)有約2倍的增加。包括10%FCS作為陽性對照。還包括由MurrayGoulburnCo-OpCompanyLtd.生產(chǎn)的初乳用于比較目的。圖4B:48小時中的L6成肌細(xì)胞生長測定，其測量針對多至10mg/ml的WGFE的劑量反應(yīng)。每個點(diǎn)代表一式三份測定的算術(shù)平均值土SEM?？瓷先ピ诩s2.5-5mg/ml時達(dá)到最大^^應(yīng)，隨后其隨著WGFE濃度增加到10mg/ml而下降。圖4C:在48小時中應(yīng)答于5mg/mlWGFE的以及未刺激的L6成肌細(xì)胞生長測定。圖示的值表示在3個獨(dú)立試驗(yàn)中獲得的平均應(yīng)答的算術(shù)平均值士SEM。這些數(shù)據(jù)表明，WGFE刺激成肌細(xì)胞的生長，而同樣濃度范圍的初乳幾乎沒有刺激作用，WGFE在1.25-5.0mg/ml有最佳刺激效應(yīng)。此外，經(jīng)WGFE處理的成肌細(xì)胞生長速率約為未經(jīng)處理的細(xì)胞的2倍。實(shí)施例3:WGFE和WPI對成纖維細(xì)胞生長的影響實(shí)施體外成纖維細(xì)胞生長研究，其中BalbC3T3成纖維細(xì)胞在WGFE、WPI、初乳和其它乳級分、10%FCS('+ve，對照)或者僅培養(yǎng)基('Nil')存在下培養(yǎng)。按照實(shí)施例1制備乳清生長因子提取物?？蓮腗urrayGoulburnCoOpCompanyLtd.購得商品名為NatraProTM的WPI。應(yīng)答于初乳、100mg/mlWPI、100mg/mlWGFE或如上所述的多種乳級分培養(yǎng)BalbC3T3成纖維細(xì)胞48小時。圖示的值代表在3個獨(dú)立試驗(yàn)中獲得的平均反應(yīng)的算術(shù)平均值士SEM。這個測定顯示，WGFE比僅使用WPI時在刺激細(xì)胞生長方面有效得多(圖5)。權(quán)利要求1.一種肌肉力量增強(qiáng)組合物，其中包含乳清生長因子提取物(WGFE)，所述乳清生長因子提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。2.—種肌肉力量增強(qiáng)組合物，其中包含乳清生長因子提取物，所述乳清生長因子提取物通過包括以下步驟的方法分離自乳制品a)將所述乳制品應(yīng)用于SPS印harose陽離子交換柱，b)用低離子強(qiáng)度的緩沖液洗滌該柱，c)在pH6.5下用緩沖液洗脫WGFE級分，該緩沖液包含0.4-0.5M的NaCl或者相當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度。3.—種肌肉力量增強(qiáng)組合物，其包含乳清生長因子提取物，所述乳清生長因子提取物通過包括以下步驟的方法分離自乳制品a)將所述乳制品應(yīng)用于SPS印harose陽離子交換柱，b)用包含0.008M或更低濃度NaCl的緩沖液洗滌該柱，c)在pH6.5下用包含0.4MNaCl的緩沖液洗脫WGFE級分。4.權(quán)利要求l、2或3的肌肉力量增強(qiáng)組合物，所述組合物還包含其他蛋白質(zhì)源。5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述蛋白質(zhì)源是乳清蛋白質(zhì)。6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述乳清蛋白質(zhì)是乳清蛋白質(zhì)分離物(WPI)o7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述乳清蛋白質(zhì)分離物包含水分5.0%脂肪0.5%pH(5。/。溶液)6.3灰分3.7%乳糖0.5%蛋白質(zhì)(TNx6.38)90.0%鈉0.7%鱗0.3%鉤0.15%。8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的組合物，其中所述乳清生長因子提取物分離自全乳、干酪乳清、凝乳酶酪蛋白乳清、酸性酪蛋白乳清或脫脂乳。9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述乳清生長因子提取物分離自脫脂乳。10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的組合物，其用作肌肉力量增強(qiáng)劑。11.提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的方法，其包括對所述受試者施用權(quán)利要求1、2或3的組合物，所述組合物中包含有效量的乳清生長因子提取物。12.權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物以至少5mg/kg體重至12.5mg/kg體重的乳清生長因子提取物、優(yōu)選至少25mg/kg體重的乳清生長因子換^取物的日劑量施用。13.權(quán)利要求11或12的方法，其中所述組合物包含其他蛋白質(zhì)源。14.提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的方法，包括對所述受試者施用組合物，所述組合物中包含有效量的乳清生長因子提取物以及分開^的其他蛋白質(zhì)源，所述乳清生長因子提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。15.權(quán)利要求13或14的方法，其中所述組合物以至少5mg/kg體重至12.5mg/kg體重的乳清生長因子提取物、優(yōu)選至少25mg/kg體重的乳清生長因子提取物，以及至少225mg/kg體重的其他蛋白質(zhì)源的日劑量施用。16.權(quán)利要求15的方法，其中所述其他蛋白質(zhì)源為權(quán)利要求5至7中任一項(xiàng)所述的蛋白質(zhì)源。17.權(quán)利要求11至16中任一項(xiàng)的方法，其中所述對受試者的施用按每2天或3天一次至多達(dá)每天至少一次地進(jìn)行。18.權(quán)利要求11至16中任一項(xiàng)的方法，其中所述對受試者的施用在抗阻運(yùn)動訓(xùn)練之前進(jìn)行和/或之后立即進(jìn)行。19.權(quán)利要求11至16中任一項(xiàng)的方法，其中所述施用在抗阻運(yùn)動訓(xùn)練之后立即進(jìn)行。20.權(quán)利要求18的方法，其中所述施用在運(yùn)動之后20分鐘至2小時進(jìn)行。21.乳清生長因子提取物用于生產(chǎn)提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的藥物的用途，所述提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。22.乳清生長因子提取物用于生產(chǎn)提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的藥物的用途，所述^^取物才艮據(jù)權(quán)利要求2或3的方法分離自乳制品。23.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的組合物用于生產(chǎn)提高進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的藥物的用途。24.用于權(quán)利要求11至20中任一項(xiàng)方法的包含權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述組合物的食品、飲品、片劑或膠嚢劑。25.權(quán)利要求24的食品，所述食品為營##或點(diǎn)心的形式。26.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的組合物用于生產(chǎn)改善進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的食品、飲品、片劑或膠嚢劑的用途。27.肌肉力量增強(qiáng)組合物，其基本如說明書實(shí)施例所述。28.乳清生長因子提取物的用途，其基本如說明書實(shí)施例所述。29.提高進(jìn)行抗P且運(yùn)動訓(xùn)練的受試者中肌肉力量和/或尺寸的方法，其基本如說明書實(shí)施例所述。全文摘要本發(fā)明涉及生產(chǎn)用作營養(yǎng)補(bǔ)充劑的包含乳制品的組合物。更具體地，本發(fā)明涉及包含乳清生長因子提取物的組合物，以及用于補(bǔ)充進(jìn)行抗阻運(yùn)動訓(xùn)練的個體營養(yǎng)需求的方法。根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供包含乳清生長因子提取物的組合物用于增強(qiáng)骨骼肌力量的用途，所述提取物通過陽離子交換層析分離自乳制品。文檔編號A61P21/06GK101282763SQ200680037585公開日2008年10月8日申請日期2006年9月8日優(yōu)先權(quán)日2005年9月9日發(fā)明者大衛(wèi)·卡梅倫-史密斯,斯克特·康奈利,米歇爾·羅尼申請人:墨累古爾本合作有限公司