專(zhuān)利名稱(chēng)：：核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種在將核酸給予來(lái)自動(dòng)物的細(xì)胞或生物時(shí)能夠保護(hù)核酸不被分解并將其高效率地轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的、低毒性且安全性高的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物、及核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物。
背景技術(shù)：
：近年，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮生理活性功能的核酸。例如，已知siRNA(smallinterferingRNA:小干4尤RNA)可引起存在于細(xì)胞內(nèi)的靶基因的mRNA分解，阻礙靶基因表達(dá)(RNAinterference:RNA干涉)。由此RNA干涉產(chǎn)生的阻礙靶基因表達(dá)的功能導(dǎo)致特定基因或基因組的異常表達(dá)，在減輕所患疾病癥狀乃至治療方面是有用的，故人們期待將siRNA開(kāi)發(fā)用作治療藥。但是，為了將以siRNA為首的核酸用作治療藥等，重要的是使siRNA在靶細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能，因此，確立使核酸有效地轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)必不可少。作為將外來(lái)性核酸分子或基因轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒及皰滲病毒等在內(nèi)的多種病毒被用于人難治性疾病的治療。但是，由于存在感染性、免疫反應(yīng)性、生產(chǎn)率等問(wèn)題，在治療中有難度。因此，人們正在開(kāi)發(fā)一種能克服來(lái)自病毒的問(wèn)題、且可用于將核酸分子轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的非病毒性載體。目前為止，作為促進(jìn)siRNA等核酸向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的非病毒性核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體，例如，專(zhuān)利文獻(xiàn)l中公開(kāi)了特定結(jié)構(gòu)的陽(yáng)離子性脂質(zhì)。但是，專(zhuān)利文獻(xiàn)l中公開(kāi)的陽(yáng)離子性脂質(zhì)，具有在給予培養(yǎng)細(xì)胞或生物體時(shí)呈現(xiàn)毒性的缺點(diǎn)。另外，專(zhuān)利文獻(xiàn)2中，作為毒性較低、可將siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的載體組合物，公開(kāi)了含有兩親性化合物及聚陽(yáng)離子的組合物。但是，即使是專(zhuān)利文獻(xiàn)2中公開(kāi)的組合物，在將充分量的siRNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)時(shí)，其對(duì)細(xì)胞的毒性方面依然存在問(wèn)題。以上述現(xiàn)有技術(shù)為背景，人們期待開(kāi)發(fā)出低毒性、能夠使以siRNA為代表的核酸高效率地轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。專(zhuān)利文獻(xiàn)l:特表2002-529439號(hào)7>報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2:特表2005-508394號(hào)乂>才艮
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的在于解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題。具體而言，本發(fā)明的目的在于提供一種在將siRNA等核酸給予來(lái)自動(dòng)物的細(xì)胞或生物時(shí)能夠保護(hù)核酸不被分解并將其高效率地轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的、低毒性且高安全性的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物、及含有該載體組合物和核酸的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物。本發(fā)明人等為了解決上述問(wèn)題進(jìn)行了潛心研究，發(fā)現(xiàn)組合含有(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的組合物，毒性低且能夠保護(hù)核酸不被分解并使其高效率地轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)，作為核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體是有用的。本發(fā)明是基于上述發(fā)現(xiàn)，通過(guò)進(jìn)一步反復(fù)研究而完成的。即，本發(fā)明提供下述方案的發(fā)明項(xiàng)l.一種核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其特征在于，含有(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)。項(xiàng)2.如項(xiàng)1所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中還含有(C)油性基材。項(xiàng)3.如項(xiàng)1所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，(A)成分為3(3-[N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基曱?；鵠膽固醇、及/或3|3-[N，，N，，N，-三甲基氨基乙烷]碘化膽固醇。項(xiàng)4.如項(xiàng)1所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，(B)成分為選自二曱基二(十八烷基)溴化銨鹽、二油酰基三曱基銨丙烷、及N-(1-(2，3-雙(油酰氧基)丙基)-N,N，N-三甲基銨鹽酸鹽中的至少1種。項(xiàng)5.如項(xiàng)1所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，相對(duì)于100重量份(A)成分，以10200重量份的比例含有(B)成分。項(xiàng)6.如項(xiàng)1所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，所述組合物為siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)用載體。項(xiàng)7.—種核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，其中含有核酸及項(xiàng)1至5中任一項(xiàng)所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。項(xiàng)8.如項(xiàng)7所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，其中，核酸為siRNA。項(xiàng)9.一種核酸導(dǎo)入方法，其特征在于，通過(guò)使項(xiàng)7所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物與細(xì)胞接觸，使核酸導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)。項(xiàng)IO.(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的組合在制造核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物及核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，可以得到下述優(yōu)異的效果。(1)能夠有效率地將核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)，使核酸在細(xì)胞內(nèi)有效地發(fā)揮功能。(2)能夠抑制核酸在生物體內(nèi)或培養(yǎng)液中分解。(3)毒性低、安全性高。所以，上述核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物及核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物可以用于通過(guò)導(dǎo)入核酸進(jìn)行的各種疾病的治療，特別是對(duì)用低分子化合物等難于治療的難治性疾病的治療有效。另外，本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物可以進(jìn)行凍干處理，因此，也具有可在凍干狀態(tài)下保存的優(yōu),泉。是表示在試驗(yàn)例l中使用各種受試試樣處理細(xì)胞后，通過(guò)熒光顯微鏡觀察來(lái)自細(xì)胞中的核酸的熒光像的結(jié)果的圖。是表示在試驗(yàn)例2中使用各種受試試樣處理細(xì)胞后，測(cè)定細(xì)胞的熒光素酶活性的結(jié)果的圖。[圖3]是表示在試驗(yàn)例3中測(cè)定大鼠的肺中腦啡肽酶(NEP)活性的結(jié)果的圖。是表示在試驗(yàn)例4中使用各種受試試樣處理后的活細(xì)胞數(shù)的測(cè)定結(jié)果的圖。是表示在試驗(yàn)例5中將大鼠的肺組織切片用蘇木精-伊紅染色的結(jié)果的圖。圖中，蘇木精將核核糖體等染成藍(lán)綠色，伊紅將細(xì)胞質(zhì).纖維.紅細(xì)胞染成紅色。具體實(shí)施例方式以下，詳細(xì)地r說(shuō)明本發(fā)明。核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的特征在于，含有(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物可以作為用于將核酸轉(zhuǎn)運(yùn)(導(dǎo)入)至細(xì)胞內(nèi)的核酸載體使用。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物適用的核酸，只要是必需轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的核酸即可，對(duì)其種類(lèi)或結(jié)構(gòu)沒(méi)有特殊的限定。作為該核酸的具體例，可以舉出siRNA、mRNA、tRNA、rRNA、cDNA、miRNA(微RNA)、核酶、反義寡核苷酸、誘飾寡核苷酸、質(zhì)粒DNA、肽核酸、三鏈形成性寡核苷酸(TriplexFormingOligonucleotide,TFO)、基因方面特別有用。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體適用的核酸，可以是來(lái)自人、動(dòng)物、植物、細(xì)菌、病毒等的核酸，另外，也可以是通過(guò)化學(xué)合成制造的核酸。進(jìn)而，上述核酸可以是單鏈、雙鏈、三鏈中的任一種，并且對(duì)其分子量也沒(méi)有特殊的限定。另外，本發(fā)明中，核酸可以為被化學(xué)、酶或肽修飾的核酸。本發(fā)明中，核酸可以單獨(dú)使用l種，也可以2種以上適當(dāng)?shù)亟M合使用。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中使用的具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)(以下，有時(shí)也表示為"(A)成分")，是指具有甾核(環(huán)戊烷多氫菲環(huán)；C17H28)、顯示陽(yáng)離子性的脂質(zhì)。作為本發(fā)明中使用的具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)，只要是藥理學(xué)上允許的脂質(zhì)即可，沒(méi)有特殊的限制，作為具體例，可以舉出3P-[N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基曱?；鵠膽固醇(DC-Chol)、3|3-[N，，N，，N，-三甲基氨基乙烷]碘化膽固醇(TC-Chol)、(N，，N-雙胍乙基氨基乙烷)氨基曱酰-膽固醇(bis(guanidinium)-tren-cholesterol)(BGTC)、N-膽甾烯基氧基羰基-3，7-二氮雜壬烷-l，9-二胺、(3-丙氨酸-二乙醇胺-膽固醇、N4-精胺膽固醇氨基曱酸酯(GL-67;N4-sperminecholesterylcarbamate)、N[N4-3-氨基丙基亞精胺]膽固醇氨基曱酸酉旨(GL-78;N[N4-3-aminopropylspermidine]cholesterylcarbamate)、！^4-精胺膽固醇甲酰胺(GL-90;N4-sperminecholesterylcarboxamide)、Nl，N8-雙(灃奮氨酸曱酰胺)-N4-亞精胺膽固醇氨基曱酸酯(GL-95;N1,N8-Bis(argininccarboxamide)-N4-spermidinecholesterylcarbamate)、N-[N1，N4，N8-三(3-氨基丙基)亞精胺]膽固醇氨基甲酸酯(GL-96;N-[N1，N4，N8-Tris(3-aminopropyl)spermidine]cholesterylcarbamate)等膽固醇衍生物(具有膽固醇骨架的陽(yáng)離子性脂質(zhì))；角鯊胺(Squalamine)、3a,7a，12a-三(3-氨基丙氧基)-5卩-膽烷-24-(N,N-雙(3-氨基丙基)胺(3a,7a，12a-Tris(3-aminopropoxy)-5(3-cholan-24-(N,N-bis(3-aminopropyl)amine)、3a,7a，12a-三(3-氨基丙氧基)-5卩-膽烷-24-(N-(N-(3-氨基丙基))-3-氨基丙基)-胺(3a，7a,12a-Tris(3—aminopropoxy)-5b-cholan-24-(N-(N-(3-aminopropyl))-3-aminopropyl)-amine)、3a，7a,12a_三(3-疊氮基丙氧基)-5(3-膽烷-24-(N，N-雙(2-氰基乙基)胺)(3a,7a，12a-Tris(3-azidopropoxy)_5b_cholan-24-(N，N-bis(2_cyanoethyl)amine))、3a,7a，12a-三(3-疊氮基丙氧基)-5P-膽烷-24-(N-(千基氧基羰基)-N-(羥基丙基)-胺)(3a，7a，12a-Tris(3_azidopropoxy)-5b_cholan-24-(N-(benzyloxycarbonyl)-N-(3-hydroxypropyl)-amine))等甾族化合物結(jié)合的陽(yáng)離子性脂質(zhì)；傘狀精胺復(fù)合體(Umbrella-spermineconjugates)等膽酸結(jié)合的陽(yáng)離子性脂質(zhì)；甾醇糖香結(jié)合的陽(yáng)離子性脂質(zhì)；甾類(lèi)皂苷結(jié)合的陽(yáng)離子性脂質(zhì)等。上述具有甾核的陽(yáng)離子性單純脂質(zhì)可以單獨(dú)使用l種，或任意組合2種以上使用。作為具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)，優(yōu)選舉出膽固醇衍生物(具有膽固醇骨架的陽(yáng)離子性脂質(zhì))，更優(yōu)選舉出3(3-[N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基曱酰基]膽固醇、及3(3-[N，，N，，N，-三曱基氨基乙烷]碘化膽固醇(TC-Choi)。作為本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中使用的季銨鹽型陽(yáng)離子性脂質(zhì)(以下，有時(shí)也表示為"(B)成分")，只要在藥理學(xué)上允許即可，沒(méi)有特殊限制。作為其具體例，可以舉出二甲基二(十八烷基)溴化銨鹽(DDAB)、1,2-二肉豆蔻酰基-3-三曱基銨丙烷、1,2-二油?；?3-三曱基銨丙烷(DOTAP)、1，2-二油酰基-3-三甲基銨丙烷甲基硫酸鹽、1,2-二椋櫚酰基-3-三甲基銨丙烷、1，2-二硬脂?；?3-三曱基銨丙烷、N-(1-(2,3-雙(油酰氧基)丙基)-N，N，N-三曱基銨鹽酸鹽(DOTMA)、二肉豆蔻?；趸谆u基乙基溴化銨鹽(DMRIE)、二油酰氧基丙基二曱基羥基乙基溴化銨(DORIE)、二曱基二(十二烷基)溴化銨、N-(a-三甲基銨基乙?；?-二(十二烷基)-D-谷氨酰胺鹽酸鹽、N-(a-三甲基銨基乙?；?-O,0，-雙-(1H,1H，2H，2H-全氟癸烷基)-L-谷氨酰胺鹽酸鹽、O,O，-二(十二烷?；?-N-(a-三曱基銨基乙?；?二乙醇胺鹽酸鹽、甲基烯丙基二(十二烷基)溴化銨、N-{p-(w-三曱基銨基丁基氧基)-苯甲?；?-二(十二烷基)-L-谷氨酰胺鹽酸鹽、9-(w-三曱基銨基丁基)-3,6-雙(十二烷?；?啼唑溴化物、二甲基二(十八烷基)銨鹽酸鹽、N-w-三曱基銨基癸?；?二(十六烷基)-D-谷氨酰胺溴化物、N-{p-(w-三曱基銨基己基氧基)-苯甲?；鶀-二(十四烷基)-L-谷氨酰胺溴化物、p-(w-三甲基銨基癸基氧基)-p，-辛氧基偶氮苯溴化物鹽(MC-1-0810)、p-{w-(b-羥基乙基)二甲基-銨基-癸基氧基}-p，-辛氧基偶氮苯溴化物鹽(MC-3-0810)、O，0，，0，，-三(十二烷?；?-N-(w-三甲基-銨基癸酰基)-三(羥基曱基)氨基曱烷溴化物鹽(TC-l-12)、1,2-二月桂基-甘油-3-乙基磷酸膽堿、1,2-二肉豆蔻酰基-甘油-3-乙基磷酸膽堿、1,2-二椋櫚?；?甘油-3-乙基磷酸膽石咸、1，2-二硬脂?；?甘油-3-乙基磷酸膽堿、1,2-二油酰基-甘油-3-乙基磷酸膽堿、1-棕櫚酰基-2-油?；?甘油-3-乙基磷酸膽堿等。上述季銨鹽型陽(yáng)離子性脂質(zhì)可以單獨(dú)使用l種，也可以任意組合2種以上使用。上述季銨鹽型陽(yáng)離子性脂質(zhì)中，優(yōu)選舉出二曱基二(十八烷基)溴化銨鹽(DDAB)、二油酰基三曱基銨丙烷(DOTAP)、N-(1-(2，3-雙(油酰氧基)丙基)-N，N，N-三曱基銨鹽酸鹽(DOTMA)、0,0，-二(十二烷酰基)-N-(a-三甲基銨基乙?；?二乙醇胺鹽酸鹽(DC-6-12,n=12;及DC-6-14,n=14)、p-{w-(b-羥基乙基)二曱基-銨基-癸基氧基}-p，-辛氧基偶氮苯溴化物鹽(MC-3-0810)、及O,O，，0"-三(十二烷?；?-N-(w-三曱基-銨基癸酰基)-三(羥基曱基)氨基曱烷溴化物鹽(TC-1-12),更優(yōu)選舉出二曱基二(十八烷基)溴化銨鹽(DDAB)、二油?；龝趸@丙烷(DOTAP)、N-(1-(2,3-雙(油酰氧基)丙基)-N,N,N-三曱基銨鹽酸鹽(DOTMA)。另外，本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中，對(duì)(A)成分和(B)成分的配合比率沒(méi)有特殊的限制，從將核酸有效地轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的觀點(diǎn)考慮，相對(duì)于100重量份(A)成分，(B)成分為10200重量份，優(yōu)選為30~150重量份，更優(yōu)選為75~125重量份。另外，相對(duì)于本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體的總量，(A)成分和(B)成分的總量例如可以為10~100重量％，優(yōu)選為20~80重量％,更優(yōu)選為40~70重量％。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，除上述(A)及(B)成分之外，還可以含有油性基劑(以下，有時(shí)也稱(chēng)為(C)成分)。配合油性基劑，利用其特性，由此能夠控制核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的核酸導(dǎo)入效率。例如通過(guò)配合油性基劑調(diào)整核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的比重，可以控制細(xì)胞和核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的接觸性，改善體外的導(dǎo)入效率。另外，例如通過(guò)配合具有溫度感受性功能的油劑作為油性基劑，能夠在規(guī)定的溫度條件下使核酸載體的芯破碎，誘發(fā)細(xì)胞表面的波動(dòng)，提高核酸的導(dǎo)入效率。進(jìn)而，例如通過(guò)配合具有外部刺激破碎性的油劑作為油性基劑，可以通過(guò)外部刺激使核酸載體組合物的芯破碎，誘發(fā)細(xì)胞表面的波動(dòng)，提高核酸的導(dǎo)入效率。作為本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中配合的油性基材，例如可以舉出，全氟化碳、全氟戊烷、溴代全氟辛烷、全氟己烷、全氟三丁基胺、大豆油、精制大豆油、氫化大豆油、大豆油非皂化物、角堇烯、蓖麻油、丁香油、三油酸脫水山梨糖醇酯、松節(jié)油、紅花油、紅花油脂肪酸、油酸、棕櫚油、菜子油、雜醇油、橄欖油、亞麻仁油、芝麻油、葉綠素油、巴豆油、佛手油、雪松油、橙油、茴香油、桉樹(shù)油、玉米油、熏衣草油、馬郁蘭油、檸一蒙油、棉籽油、椰子油、蛋黃油、玫瑰花油、松油、杏仁油、花生油、山茶油、白樟油、春黃菊油、桂皮油、薄荷油、酯化玉米油、生姜油、羅馬春黃菊油、蛇油、留蘭香油(spearmintoil)、向日葵油、可可脂、小麥胚芽油、氧化鋅油、氬化油、氬化植物油、輕質(zhì)液體石蠟、液體石蠟、中鏈脂肪酸三甘油酯、貂油(minkoil)、苦橙油、聚氧乙烯荒麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油IO、聚氧乙烯氫化蓖麻油100、聚氧乙烯氫化蓖麻油20、聚氧乙烯氫化蓖麻油40、聚氧乙烯氫化蓖麻油5、聚氧乙烯氫化蓖麻油50、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、聚氧基35蓖麻油、操作油等。上述油性基劑中，全氟戊烷具有溫度感受性，具有在29.5。C下通過(guò)沸騰氣化的特性。另外，全氟己烷、溴代全氟辛烷、及全氟三丁基胺具有下述特性，即具有外部刺激破碎性，在由超聲波照射產(chǎn)生的刺激等來(lái)自外部的刺激作用下，使載體組合物的芯產(chǎn)生空腔，使其破碎。含有該油性基劑時(shí)，作為該油性基劑的比例，只要不妨礙本發(fā)明的效果即可，沒(méi)有特殊的限制，例如可以為下述比例，即相對(duì)于IOO重量份上述(A)成分及(B)成分的總量，該油性基材為0.150重量份，優(yōu)選為130重量份，更優(yōu)選為520重量份。進(jìn)而，本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中根據(jù)需要也可以含有膜融合性脂質(zhì)(輔助脂質(zhì))。通過(guò)含有上述膜融合性脂質(zhì)，能夠進(jìn)一步提高核酸向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)效率。作為上述膜融合性脂質(zhì)，例如可以舉出，二油?；字Ｒ掖及?、二油?；字Ｄ憠A、反式磷脂?；字；掖及?、1,2-雙(IO，12-二十三烷二酰基)-磷酸乙醇胺、1，2-二反油?；姿嵋掖及贰?,2-二(十六烷基)磷酸乙醇胺、1，2-二己?；姿嵋掖及贰?，2-二月桂?；姿嵋掖及?、1，2-二亞油?；姿嵋掖及?、1,2-二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺、1,2-二油?；姿嵋掖及?、1,2-二椋櫚油?；姿嵋掖及?、1，2-二棕櫚酰基磷酸乙醇胺、1,2-二植烷酰磷酸乙醇胺、1,2-二硬脂酰基磷酸乙醇胺、1-棕櫚酰基-2-油?；姿嵋掖及?、1-棕櫚?；?2-(10，12-二十三烷二酰基)磷酸乙醇胺、1,2-二油?；姿嵋掖及?N-己酰胺、1，2-二棕櫚?；姿嵋掖及?N-己酰胺、N，N-二曱基-l，2-二油?；姿嵋掖及贰,N-二曱基-l,2-二棕櫚?；姿嵋掖及?、N-十二烷酰基-l,2-二棕櫚?；姿嵋掖及?、N-十二烷酰基-l，2-二油?；姿嵋掖及贰?，2-二油?；姿嵋掖及?N-十二烷基胺、1，2-二椋櫚?；姿嵋掖及?N-十二烷基胺、1,2-二油酰基磷酸乙醇胺-N-戊二酰、1,2-二棕櫚?；姿嵋掖及?N-戊二酰、1,2-二油?；姿嵋掖及?N-乳糖、1,2-二油?；姿嵋掖及?N-[4(p-馬來(lái)酰亞胺甲基)環(huán)己烷-羧酸鹽、二棕櫚酰磷酸乙醇胺-N-[4(p-馬來(lái)酰亞胺曱基)環(huán)己烷-羧酸鹽、1，2-二棕櫚?；姿嵋掖及?N-[4(p-馬來(lái)酰亞胺苯基)丁酰胺、1，2-二油?；姿嵋掖及?N-[4(p-馬來(lái)酰亞胺苯基)丁酸鹽]、N-曱基-1,2-二油酰基磷酸乙醇胺、N-甲基-二棕櫚酰基磷酸乙醇胺、1,2-二油酰基磷酸乙醇胺-N-[3-(2-吡啶二硫)丙酸鹽、1,2-二棕櫚?；姿嵋掖及?N-[3-(2-吡啶二硫)丙酸鹽、N-(琥珀酰)-1,2-二油?；姿嵋掖及?、N-(琥珀酰)-1,2-二棕櫚?；姿嵋掖及返取Ｆ渲?，在本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中優(yōu)選使用二油酰基磷脂酰乙醇胺。含有該膜融合性脂質(zhì)時(shí)，作為該膜融合性脂質(zhì)的比例，只要不妨礙本發(fā)明的效果即可，沒(méi)有特殊的限制，可以舉出下述比例，即相對(duì)于100重量份上述(A)成分及(B)成分的總量，該膜融合性脂質(zhì)為1~500重量份，優(yōu)選為10250重量^f分，更優(yōu)選為25~IOO重量份。根據(jù)使用形態(tài)，本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物可以含有等滲劑、賦形劑、稀釋劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、保存劑等各種添加劑。上述添加劑的配合量，可以根據(jù)核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體的使用形態(tài)適當(dāng)?shù)卦O(shè)定。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物通過(guò)混合上述(A)成分、(B)成分、及根據(jù)需要混合其他成分而制造。核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物是含有上述核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物和核酸的組合物，在該核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物中，核酸與核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的配合成分通過(guò)離子鍵或疏水鍵形成復(fù)合體，提高核酸向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)率。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物通過(guò)混合上述核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物和核酸，或以任意順序混合核酸及上述核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的配合成分而進(jìn)行制造。本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物中，作為核酸和核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的配合比率，根據(jù)使用的核酸或核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體的種類(lèi)或?yàn)楹怂徂D(zhuǎn)運(yùn)對(duì)象的細(xì)胞的種類(lèi)等而不同，例如，可以舉出以下比例，即相對(duì)于IOO重量份核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中所含的(A)及(B)成分的總量，核酸為O.l~300重量份，優(yōu)選為1100重量份，更優(yōu)選為2.550重量份。另夕卜，作為核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物中所含的(A)及(B)成分的總量，相對(duì)于該組合物的總量，例如可以舉出10~90重量％,優(yōu)選為30~80重量％,更優(yōu)選為50~70重量％。根據(jù)使用形態(tài)，本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物可以含有等滲劑、賦形劑、稀釋劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、保存劑等多種添加劑。上述添加劑的配合量可以根據(jù)核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物的使用形態(tài)適當(dāng)?shù)卦O(shè)定。本發(fā)明中，作為核酸被轉(zhuǎn)運(yùn)的細(xì)胞，可以舉出培養(yǎng)細(xì)胞、從生物體中萃取的細(xì)胞(包含抹化的細(xì)胞)、生物體內(nèi)存在的細(xì)胞等。作為本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物的使用狀態(tài)，只要能使該核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物與作為核酸導(dǎo)入對(duì)象的細(xì)胞接觸即可，沒(méi)有特殊限制。例如，向生物體內(nèi)的細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)核酸時(shí)，例如可以舉出向組織中直4妄注入；向靜脈、皮下、肌肉、腹腔、目艮內(nèi)、消化器官內(nèi)、牙內(nèi)等注射；從鼻腔、口腔、肺等吸入給予；口服給予；通過(guò)皮膚的透皮給予；及通過(guò)口腔粘膜、陰道粘膜、眼粘膜、直腸粘膜、子宮粘膜的經(jīng)粘膜給予等。另外，在向培養(yǎng)細(xì)胞或從生物體萃取的細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)核酸的情況下，可以舉出將核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物預(yù)先添加到培養(yǎng)基中，在該狀態(tài)下培養(yǎng)細(xì)胞的方法。需要說(shuō)明的是，向培養(yǎng)細(xì)胞或從生物體萃取的細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)核酸時(shí)，即使在血清存在下也可以將核酸轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)。實(shí)施例以下，根據(jù)實(shí)施例等詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限定于此。實(shí)施例l制備下述組成的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。二曱基二(十八烷基)溴化銨鹽0.9|ig3(3-[N-(N，，N，-二曱基氨基乙烷)-氨基甲酰基]膽固醇0.9pg二油?；字Ｒ掖及?.9pg丙三醇40.5|ig精制水2^1OPTI-MEM培養(yǎng)基(Invitrongen社制)_^±總量50nl實(shí)施例2首先，制備下述組成的含核酸的液體。siRNA2pmo1OPTI-MEM培養(yǎng)基(Invitrongen社制)_適量總量50pl然后，將50pl上述所得的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物和50iil含有核酸的液體混合，在室溫下培養(yǎng)20分鐘，由此制備siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物。實(shí)施例3制備下述組成的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。二曱基二(十八烷基)溴化銨鹽0.5mg3|3-[N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基曱?；鵠膽固醇0.5mg二油酰基磷脂酰乙醇胺0.5mg蔗糖88.9mg精制水_總量l.Oml實(shí)施例4制備下述組成的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。二甲基二(十八烷基)溴化銨鹽0.5mg3(3-[N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基甲?；鵠膽固醇0.5mg二油酰基磷脂酰乙醇胺0.5mg精制水_悉量l.Oml試驗(yàn)例1為了評(píng)價(jià)實(shí)施例2的siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物向細(xì)胞內(nèi)的siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)性，以A549細(xì)胞(來(lái)自人肺癌的細(xì)胞抹；日本制藥社制)為模型細(xì)胞進(jìn)行以下試驗(yàn)。需要說(shuō)明的是，在本試驗(yàn)中，siRNA使用熒光標(biāo)記的GL3-siRNA(靶向螢火蟲(chóng)熒光素酶的siRNA;Dharmacon社，Boulder，CO,USA;有意義5，-CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT,反義5，-UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT)。首先，使用DMEM培養(yǎng)基(Dulbecco-MinimumEssentialMedium)，將A549細(xì)胞調(diào)整至濃度為1.2><105個(gè)/ml，接種上述細(xì)胞，使24-孔培養(yǎng)板中每l孔加入6.0xl(^個(gè)細(xì)胞。接下來(lái)向各孔中添加500lil表l所示的受試試樣，在37。C、5%<:02條件下培養(yǎng)24小時(shí)。然后使用焚光顯微鏡(OlympusIX71fluorescencemicroscope;Olympus,Tokyo,日本)觀察來(lái)自細(xì)胞中的核酸的熒光像，評(píng)價(jià)向細(xì)胞內(nèi)的siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)性。受試試樣印成No圖l中的表示1核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物+siRNA實(shí)施例2的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物2LFA2000+siRNA含有LFA2000(Lipofectamine2000;Invitrogen社制)(1.0mg/mL)、及siRNA(20pmol/ml)的OPTI_MEM培養(yǎng)基NeoPhectin+siRNA含有NeoPhectin(NeoPharm社制)(1.0mg/mL)、siRNA(20pmol/ml)的OPTI-MEM培養(yǎng)基4siRNA含有siRNA(20pmol/ml)的OPTI—MEM培養(yǎng)基所得結(jié)果如圖l所示。僅添加siRNA時(shí)在細(xì)胞內(nèi)未觀察到焚光。另一方面，使用實(shí)施例2的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物時(shí)，或與公知的細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)用載體(LFA2000或NeoPhectin)—起添加siKNA時(shí)，在細(xì)胞內(nèi)觀察到較強(qiáng)熒光。由上述結(jié)果可以確認(rèn)，本發(fā)明的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物具有優(yōu)異的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)能力。試驗(yàn)例2為了評(píng)價(jià)靶基因在蛋白質(zhì)水平的抑制，向細(xì)胞中一過(guò)性導(dǎo)入編碼熒光素酶基因的質(zhì)粒，然后添加上述實(shí)施例2的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，評(píng)價(jià)熒光素酶的表達(dá)量。需要說(shuō)明的是，本試驗(yàn)中，siRNA使用GL3-siRNA(乾向螢火蟲(chóng)熒光素酶的siRNA;Dhamacon社，Boulder,CO,USA;有意義5，_CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT，反義5，_UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT)。具體而言，向5xl()S個(gè)A549細(xì)胞(來(lái)自人肺癌的細(xì)胞抹；日本制藥社制)中添加10mg的pGL3熒光素酶及Renilla焚光素酶(Promega，Madison,WI,USA),使用Nucleofector(AmaxaInc.,Gaithersburg，MD，USA),進(jìn)行電穿孔。使用含有10容量％胎牛血清或不含血清的DMEM培養(yǎng)基(Dulbecco—MinimumEssentialMedium),將導(dǎo)入了pGL3焚光素酶及Renilla熒光素酶的細(xì)胞調(diào)整至1.2xl()S個(gè)/m1,然后，接種到24-孔培養(yǎng)板中，使每1孔加入6.(^104個(gè)細(xì)胞。接下來(lái)，向各孔中添加500pl表2所示的受試試樣，在37。C、5%032條件下培養(yǎng)24小時(shí)。然后，根據(jù)規(guī)定方法使孔中的細(xì)胞溶解得到細(xì)胞溶解液，使用Dual-LuciferaseReporterAssaySystem(Promega，Madison,WI,USA)評(píng)價(jià)該細(xì)胞溶解液的熒光素酶的活性。計(jì)算螢火蟲(chóng)熒光素酶相對(duì)于Renilla熒光素酶的活性的比率(相對(duì)活性％)，由此評(píng)價(jià)熒光素酶的活性。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>所得的結(jié)果如圖2所示。由上述結(jié)果可以確認(rèn)，通過(guò)使用實(shí)施例2的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，無(wú)論培養(yǎng)基中有無(wú)血清，均能夠以高效率向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)siRNA、及在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮該siRNA的功能。試驗(yàn)例3本試驗(yàn)中，作為siRNA,使用大鼠腦啡肽酶(靶向大鼠腦啡肽酶(NM—012608)的siRNA;RNA-TECNV社,Belgium;有意義5，-GCUCCAAAGCCGAAGAAGAdTdT，反義5，-UCUUCUUCGGCUUUGGAGCdTdT)，對(duì)實(shí)施例3的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物在肺組織細(xì)胞內(nèi)的siRNA的功能性及轉(zhuǎn)運(yùn)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過(guò)以1:1的重量比混合實(shí)施例3的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物和siRNA,制備核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物。然后，用適當(dāng)?shù)妮d體(8.89w/v%的蔗糖水溶液)稀釋該核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物得到試驗(yàn)液"吏用IA-IB吸入(inhalation)裝置(PE麗CENTURY，Philadelphia,PA,USA),將體重250-320g的雄性SD大鼠(SLC，Tokyo,日本)用吸入麻醉劑異氟烷(日本制藥抹式會(huì)社制)麻醉，在該麻醉狀態(tài)下經(jīng)肺給予此大鼠0.4mL上述所得的試驗(yàn)液。需要說(shuō)明的是，適當(dāng)?shù)叵♂尯怂徂D(zhuǎn)運(yùn)用組合物，制備上述試驗(yàn)液使siRNA的給予量為0.040.12mg/kg(大鼠)。經(jīng)肺給予24小時(shí)后，將乙醚麻醉的大鼠背位固定。沿著正中線將大鼠開(kāi)腹，從腹部下大靜脈放血致死。然后，從大鼠中摘出肺，用冰冷的生理鹽水洗滌。使用摘出的肺，測(cè)定模型靶基因NEP(中性?xún)?nèi)肽酶)的mRNA表達(dá)量及為管家基因的GAPDH(3-磷酸甘油醛脫氫酶)的mRNA表達(dá)量。進(jìn)而，測(cè)定摘出的肺中的大鼠腦啡肽酶(NEP)活性。其具體測(cè)定方法及結(jié)果如下所述。需要說(shuō)明的是，作為對(duì)照，在相同條件下只給予載體，相同地進(jìn)行試驗(yàn)。另外，為了比較，使用靶向EGFP(增強(qiáng)型綠色熒光蛋白)的siRNA(Takara，日本；有意義5，-GAACGGCAUCAAGGUGAACTT,反義5，-GUUCACCUUGAUGCCGUUCTT)代替大鼠腦啡肽酶，相同地進(jìn)行試驗(yàn)。<NEPmRNA及GAPDHmRNA的定量方法及結(jié)果〉使用RNeasyMiniKit(QIAGEN,Germany)從摘出的肺的一部分中進(jìn)行總RNA的分離精制。使用SuperscriptIIIFirst-StrandSynthesisSystemforRT-PCR(Invitrogen，California,USA)由mRNA合成cDNA。使用制備的cDNA,通過(guò)實(shí)時(shí)PCR法定量模型靶基因NEP(中性?xún)?nèi)肽酶)的mRNA量。另外，相同地測(cè)定為管家基因的GAPDH(3-磷酸甘油醛脫氫酶)的mRNA量。計(jì)算出NEPmRNA相對(duì)于GAPDHmRNA的比率，通過(guò)比較，評(píng)價(jià)腦啡肽酶mRNA表達(dá)抑制。由上述結(jié)果可知，給予量為0.08mg/kg的腦啡肽酶-siRNA即可顯著地抑制肺中腦啡肽酶mRNA表達(dá)。其用量與作為體內(nèi)RNAi效果的現(xiàn)有寺艮道的用量相比較低，由此可知通過(guò)使用實(shí)施例3中所得的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，能夠高效率地將siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)至肺組織的細(xì)胞內(nèi)?！创笫竽X啡肽酶(NEP)活性的測(cè)定方法及結(jié)果〉將摘出的肺的一部分勻漿，測(cè)定勻漿物中大鼠腦啡肽酶的活性。大鼠腦啡肽酶(NEP)活性的測(cè)定，是在存在或不存在為NEP特異性阻礙劑的膦酰二肽(phosphoramidon)(SIGMA)的條件下，測(cè)定為NEP基質(zhì)的DAGNPG(N—Dansyl—D—Ala-Gly-p-nitro-Phe—Gly:SIGMA)在一定時(shí)間內(nèi)水解多少，由在阻礙劑存在時(shí)和不存在時(shí)的分解物生成量的差計(jì)算NEP活性。此時(shí)使用的大鼠的肺的勻漿量為50mL，基質(zhì)DAGPNG的濃度為lmM,存在阻礙劑時(shí)添加10mM膦酰二肽，總量為100mL，進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)在37。C下進(jìn)行10分鐘，在9(TC下培養(yǎng)10分鐘使反應(yīng)停止，測(cè)定此時(shí)生成的分解物DAG(Dansyl-D-Ala-Gly)的量，算出NEP活性。需要說(shuō)明的是，分解物DAG的生成量通過(guò)測(cè)定此分解物的熒光而求出，熒光的測(cè)定是在360nm下激發(fā)，測(cè)定535nm的發(fā)光。所得結(jié)果如圖3所示。由上述結(jié)果可知，給予量為0.4mg/kg的NF-siRNA即可顯著抑制肺中的NEP活性。所以，由上述結(jié)果也可以確認(rèn)，通過(guò)使用實(shí)施例3中得到的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，能夠高效率地將siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)至肺組織的細(xì)胞內(nèi)。試驗(yàn)例4使用PremixWST-1cellproliferationassaysystem(Takara,Siga，日本)評(píng)價(jià)實(shí)施例l中得到的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的細(xì)胞毒性。具體而言，使用DMEM培養(yǎng)基(Dulbecco-MinimumEssentialMedium)，在96-孔培養(yǎng)板上將A549細(xì)胞(來(lái)自人肺癌的細(xì)胞抹；日本制藥社制)調(diào)整至濃度為(lxl()S)個(gè)/m1,進(jìn)行接種，使各孔的細(xì)胞數(shù)為104個(gè)。接下來(lái)，向各孔添加受試試樣[實(shí)施例l的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體、LFA2000(Lipofectamine2000;Invitrogen社制)、及NeoPhectin(NeoPharm社制)]使其濃度為220ng/ml。然后，向各孔中添加10iil的PremixWST-l溶液，在37。C下培養(yǎng)l小時(shí)后，使用酶標(biāo)儀(MicroplateReader)(Tecan,Maennedorf,Switzerland)測(cè)定各孔在450nm的吸光度。另外，作為對(duì)照，相同地測(cè)定添加培養(yǎng)基代替受試試樣的孔。A450的吸光度是指來(lái)自甲膪色素的吸光度，該色素是WST-l在還原酶作用下形成的。由于該吸光度和活細(xì)胞具有直線關(guān)系，所以可制作播種的活細(xì)胞數(shù)和吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線?；谒玫臉?biāo)準(zhǔn)曲線求出受試試樣的細(xì)胞數(shù)。所得的結(jié)果如圖4所示。由上述結(jié)果可知，即使添加實(shí)施例l的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，細(xì)胞數(shù)也幾乎不減少，由此可確認(rèn)該核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物的毒性低、安全性高。試-瞼例5使用精制水將500pg實(shí)施例4的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物稀釋至0.4mL,制備得到試驗(yàn)液，使用Penncentury社的lA-IC裝置，將上述試驗(yàn)液經(jīng)肺給予體重250-320g的雄性SD大鼠(SLC，Tokyo，日本)。將給藥后的大鼠放回籠中，按照通常的飼養(yǎng)條件進(jìn)行飼養(yǎng)。經(jīng)肺給予24小時(shí)后，向大鼠腹腔內(nèi)給予50mg/kg(lmL/kg)戊巴比妥(Nembutal,日本制藥抹式會(huì)社)進(jìn)行麻醉，背位固定大鼠。將大鼠沿著正中線開(kāi)腹，從腹部下大靜脈放血致死。接下來(lái)，從大鼠中摘出肺，用冰冷的生理鹽水洗滌。制作摘出的肺的組織切片，使用蘇木精-伊紅將其染色，通過(guò)顯微鏡觀察，評(píng)價(jià)核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物對(duì)肺組織的毒性。另外，為了比較，使用LFA2000(Lipofectamine2000;Invitrogen^土制)、或NeoPhectin(NeoPharm^土制)4戈替實(shí)施例4的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，在與上述相同的條件下進(jìn)行試驗(yàn)。但是，由于給予500pg的LFA2000時(shí)使大鼠致死，所以將LFA2000的給予量改為250jig，進(jìn)4亍試驗(yàn)。所得結(jié)果如圖5所示。由此可知，肺局部給予LFA2000或NeoPhectin時(shí)引起炎癥，部分觀察到浮腫，而在給予實(shí)施例4的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物時(shí)，此炎癥癥狀減輕。由此結(jié)果可知，實(shí)施例4的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物即使在肺局部給予后仍為低毒性、且安全性高。權(quán)利要求1、一種核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其特征在于，含有(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)、及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)。2、如權(quán)利要求l所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中還含有(C)油性基材。3、如權(quán)利要求l所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，(A)成分為3P-[N-(N，，N，-二甲基氨基乙烷)-氨基曱酰基]膽固醇、及/或3卩-[N，，N，，N，-三曱基氨基乙烷]碘化膽固醇。4、如權(quán)利要求l所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，(B)成分為選自二曱基二(十八烷基)溴化銨鹽、二油?；龝趸@丙烷、及N-(1-(2,3-雙(油酰氧基)丙基)-N,N,N-三曱基銨鹽酸鹽中的至少l種。5、如權(quán)利要求l所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，其中，相對(duì)于100重量份(A)成分，以10200重量份的比例含有(B)成分。6、如權(quán)利要求l所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，所述組合物為siRNA轉(zhuǎn)運(yùn)用載體。7、一種核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，含有核酸及權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。8、如權(quán)利要求7所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物，其中，核酸為siRNA。9、一種核酸導(dǎo)入方法，其特征在于，通過(guò)使權(quán)利要求7所述的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物與細(xì)胞接觸，使核酸導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)。10、(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)的組合在制造核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物中的用途。全文摘要本發(fā)明的目的在于提供一種在將siRNA等核酸給予來(lái)自動(dòng)物的細(xì)胞或生物時(shí)能夠保護(hù)核酸免于分解并使其高效地轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的、低毒性的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物，及含有該載體組合物和核酸的核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物。本發(fā)明通過(guò)組合(A)具有甾核的陽(yáng)離子性脂質(zhì)及(B)季銨鹽型的陽(yáng)離子性脂質(zhì)，將其配合，制備核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物。另外，混合該核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用載體組合物和核酸來(lái)制備核酸轉(zhuǎn)運(yùn)用組合物。文檔編號(hào)A61K47/44GK101291678SQ20068003895公開(kāi)日2008年10月22日申請(qǐng)日期2006年10月17日優(yōu)先權(quán)日2005年10月18日發(fā)明者豐福秀一,佐藤正子,關(guān)口和生,宮尾英男申請(qǐng)人:大塚制藥株式會(huì)社