專利名稱：：固體疫苗制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種固體疫苗制劑，它適于粘膜給藥，并且含有作為活性物質(zhì)的至少一種抗原，其中該制劑含有一種懸浮液的凍干物，此懸浮液含有含氧金屬鹽，抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(1)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。本發(fā)明還涉及上述凍干物制備粘膜給藥的固體疫苗制劑的應(yīng)用和這些制劑用于疫苗接種或治療變態(tài)反應(yīng)或者減輕受試者變態(tài)反應(yīng)的癥狀的應(yīng)用。本發(fā)明的
背景技術(shù)：
海藻糖是一種非還原的二糖，它由兩個(gè)葡萄糖單體組成。它存在于許多生物中，包括細(xì)菌、真菌和脊推動(dòng)物，以及一些植物。已知海藻糖可穩(wěn)定蛋白質(zhì)。US-A-4578270公開了制備凍干疫苗的方法，其中吸收在不溶性載體上的抗原和保護(hù)劑的混合物接受冷凍干燥，這些載體諸如為氫氧化鋁和磷酸鋁凝膠。此保護(hù)劑例如可為蛋白質(zhì)、多肽、多糖和其他合成保護(hù)劑膠體。特別是，應(yīng)用分子量為40000的葡聚糖以及葡聚糖和多糖的組合。保護(hù)劑的用量為該抗原溶液的0.5至10%。在應(yīng)用時(shí)，用緩沖劑對(duì)該凍干疫苗進(jìn)行重新構(gòu)成。US-A-5902565公開了制備干燥的微球顆粒形式的疫苗制劑，隨后可將該制劑加入液體制劑或加入固體丸劑或植入物中的方法。完全保留了鋁凝膠的凝膠形成性能。US-A-5902565的一個(gè)方面涉及生產(chǎn)即刻釋放疫苗的方法，該方法包括形成一種吸附于鋁鹽佐劑的免疫原含水懸浮體，以及將該懸浮體噴霧干燥?？蛇x擇的是，該懸浮體含有一種蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑，諸如糖和糖衍生物，例如海藻糖、葡聚糖和葡糖胺。EP-B1-0130619公開了制備凍干滅活純化乙肝病毒表面抗原的疫苗制劑的方法，該方法包括將鋁凝膠和穩(wěn)定劑加入抗原，并將此混合物冷凍干燥。此穩(wěn)定劑可為氨基酸，膠體物質(zhì)和多糖，諸如單糖、二糖(例如乳糖、麥芽糖和蔗糖)和糖醇。Gribbon等(DevBiolStand.Basel,Karger，1996，vol87，pp193-199)公開了將海藻糖用作穩(wěn)定劑對(duì)疫苗進(jìn)行穩(wěn)定的研究。將明礬用作佐劑的白喉和破傷風(fēng)抗原疫苗的市售制劑與海藻糖混合，使該混合物接受冷凍干燥，獲得一種千燥粉末。將此粉末貯存在45C達(dá)35周，然后測(cè)定重建的破傷風(fēng)類毒素的活性。35周后，其恢復(fù)的活性為相應(yīng)新鮮濕對(duì)照品的94%。另外，將海藻糖的穩(wěn)定和保護(hù)作用與葡萄糖和蔗糖進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)海藻糖更為有效。Maa等(JournalofPharmaceuticalSciences,Vol.92，No.2，F(xiàn)ebruary2003)提供了一項(xiàng)關(guān)于明礬作為佐劑的疫苗干燥粉末制劑的穩(wěn)定性研究，該制劑中含有乙肝表面抗原或白喉和破傷風(fēng)類毒素。對(duì)各種干燥技術(shù)進(jìn)行了試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在防止明礬凝膠凝結(jié)和保持免疫原性方面，噴霧冷凍千燥優(yōu)于冷凍千燥、噴霧干燥和風(fēng)干。另外還對(duì)各種穩(wěn)定劑防止明礬凝膠凝結(jié)的作用進(jìn)行了試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其作用較小。Maa等(PharmaceuticalResearch,Vol.20，No.7，July2003)中將海藻糖、甘k醇和葡聚糖的組合用作穩(wěn)定劑，此2者的比例優(yōu)選為3/3/4。該文獻(xiàn)公開了表皮粉末免疫接種(EPI),沒有建議粘膜給藥。W002/101412公開了一種粉末的制備方法，其中將含水溶液或懸浮液進(jìn)行噴霧冷凍干燥。此含水溶液的固體含量至少為20%(重量)，而且該溶液含有一種或多種賦形劑，這些賦形劑選自l)鋁鹽或鈣鹽佐劑，2)非晶形賦形劑，例如海藻糖，3)結(jié)晶賦形劑，例如甘露醇，4)聚合物，例如葡聚糖。提到了大量特異的明礬為佐劑的抗原組合物，包括(a)海藻糖、甘露醇和葡聚糖的組合，以及(b)海藻糖、甘氨酸和葡聚糖的組合。描述到該粉末可用于通過無針注射裝置的給藥。WO01/93829涉及一種凝膠形成的自由流動(dòng)粉末，它適于用作疫苗，可通過噴霧干燥或噴霧冷凍干燥含水懸浮液而制備該疫苗，此含水懸浮液含有吸附于鋁鹽或鈣鹽佐劑、糖類、氨基酸或其鹽的抗原，以及膠體物質(zhì)。據(jù)說應(yīng)用一種無針注射器，該粉末可用于疫苗的經(jīng)皮傳送。W095/33488公開了減少或防止物質(zhì)脫水和再水合中發(fā)生聚集的方法，此物質(zhì)諸如氫氧化鋁和磷酸鋁。該文件提供了海藻糖對(duì)磷酸鋁聚集影響的實(shí)驗(yàn)性研究，其中將含有15%海藻糖和不含15%海藻糖的磷酸鋁懸浮液接受i.a.冷凍干燥。發(fā)現(xiàn)該濃度的海藻糖防止了再水合時(shí)的聚集。疫苗制劑應(yīng)用延長(zhǎng)時(shí)效期給予的多次皮下免疫進(jìn)行常規(guī)特異變應(yīng)性接種。此過程分為兩個(gè)階段，劑量增長(zhǎng)期和維持期。在劑量增長(zhǎng)期中應(yīng)用增加劑量，通常周期為16周，起始采用微小劑量。當(dāng)達(dá)到推薦的維持劑量時(shí)，則在維持期中采用此劑量，通常每6周進(jìn)行一次注射。由于存在過敏性副反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)(盡管大體上非常罕見但對(duì)生命構(gòu)成威脅)，所以每次注射后，患者必須接受醫(yī)學(xué)觀察30分鐘。另外，診所應(yīng)當(dāng)配備必要設(shè)備以便急救。毫無疑問，基于不同給藥途徑的疫苗將會(huì)消除或減小現(xiàn)有皮下給藥疫苗所固有的變態(tài)反應(yīng)副反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，而且將會(huì)便于更廣泛的使用，甚至可以在家進(jìn)行自行接種。皮下給藥的常規(guī)變應(yīng)性疫苗中，變應(yīng)原通常存在于氫氧化鋁凝膠充當(dāng)佐劑的懸浮液中。尚未完全清楚氫氧化鋁充當(dāng)佐劑的功能背后的機(jī)制，但是相信氫氧化鋁的佐劑作用是由于其貯存作用，以此利于變應(yīng)原在機(jī)體中延長(zhǎng)釋》文?；跉溲趸X的疫苗制劑的缺點(diǎn)是在貯存和運(yùn)輸期間它們需要冷藏。另外，冷凍和冷凍干燥減小了疫苗制劑的效力和物理性質(zhì)，諸如沉降速度和流動(dòng)性。WO04/047794公開了一種快速溶解、非壓制固體變應(yīng)原疫苗劑型，它適于一種變應(yīng)原的口腔粘膜給藥，含有作為活性劑的變應(yīng)原和一種基質(zhì)，此基質(zhì)由諸如明膠或淀粉的基質(zhì)形成劑組成。WO00/45847提出一種經(jīng)過粘膜傳送免疫原物質(zhì)的疫苗，它含有至少一種免疫原物質(zhì)和一種粘膜傳送系統(tǒng)，該系統(tǒng)含有含氧金屬鹽。在此申請(qǐng)的實(shí)施例中，通過口腔管飼法(直接達(dá)到胃部)應(yīng)用該疫苗，或者將其作為溶液經(jīng)腹膜內(nèi)給藥。因此，沒有任何實(shí)施例描述到用于粘膜給藥的固體制劑，諸如舌下給藥。EP1516615涉及一種固體給藥粘膜粘著圓片或薄膜制劑，它適于透膜傳送，其中圓片或薄膜由穩(wěn)定的多元醇和溶解或分散其中的治療劑構(gòu)成。此多元醇例如可為海藻糖，治療劑可為抗原和佐劑。此申請(qǐng)未提出含有含氧金屬鹽、抗原及一種或多種賦形劑的含水懸浮液的凍干物固體疫苗制劑，而且特別是未提出含有變應(yīng)原、氫氧化鋁及一種或多種賦形劑的含水懸浮液的凍干物疫苗制劑。US5,591,433涉及含有變應(yīng)原的口服制劑，該變應(yīng)原微嚢包封在腸溶衣中。本發(fā)明的目的是提供一種用于粘膜給藥的改良的固體疫苗制劑。發(fā)明總結(jié)本發(fā)明涉及一種固體疫苗制劑，該制劑含有一種懸浮液的凍干物，此懸浮液含有一種含氧金屬鹽，至少一種抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(l)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。本發(fā)明還涉及一種懸浮液的凍千物在制備一種粘膜給藥的固體疫苗制劑中的應(yīng)用，此懸浮液含有一種含氧金屬鹽，至少一種抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(l)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。另一方面，本發(fā)明涉及受試者免疫接種的方法，其中包括將有效量的上迷固體制劑進(jìn)行粘膜給藥。本發(fā)明尤其涉及治療變態(tài)反應(yīng)或減輕變態(tài)反應(yīng)癥狀的方法，它包括將有效量的上述固體制劑進(jìn)行粘膜給藥，此制劑至少含有一種變應(yīng)原。本發(fā)明基于這種認(rèn)識(shí)，即在粘膜給藥的固體疫苗制劑中包含佐劑是可取的，而且該佐劑具有粘膜粘著特性也是可取的。另外還認(rèn)識(shí)到，諸如氫氧化鋁的含氧金屬鹽既具有佐劑特性，也具有粘膜粘著特性，因此這種物質(zhì)可成為粘膜給藥的固體疫苗制劑中所應(yīng)用的理想選擇。本發(fā)明基于這種發(fā)現(xiàn)，即海藻糖、蔗糖和某些其他賦形劑在防止氫氧化鋁和相應(yīng)的含氧金屬鹽對(duì)冷凍干燥的不良作用方面具有高度的特性，而且因此含氫氧化鋁的固體物質(zhì)易于再水合，形成具有多種特性的鋁凝膠，冷凍干燥方法對(duì)這些特性影響的程度很小，這種固體物質(zhì)是通過對(duì)氫氧化鋁以及海藻糖、蔗糖和某些其他賦形劑進(jìn)行冷凍干燥而獲得的。本發(fā)明還基于這種認(rèn)識(shí)，即海藻糖、蔗糖和某些其他賦形劑的上述驚人功能性可用于制備固體疫苗制劑，諸如快速溶解片劑，可將其設(shè)計(jì)為當(dāng)與粘膜接觸時(shí)即進(jìn)行再水合，這種固體疫苗制劑含有含氧金屬鹽佐劑，諸如氫氧化鋁。因此，本發(fā)明提出了制備粘膜給藥的固體疫苗制劑的可能性，該疫苗制劑含有含氧金屬鹽佐劑，諸如氫氧化鋁。附圖簡(jiǎn)述附圖1顯示各種抑制劑制劑對(duì)Derp-特異性IgE與生物素化Derp結(jié)合的抑制度。附圖2顯示各種抑制劑制劑對(duì)Derp-特異性IgE與生物素化Derp結(jié)合的抑制度。附圖3顯示這三對(duì)試驗(yàn)制劑效力估計(jì)值的比較。附圖4顯示用不同Phlp制劑對(duì)小鼠免疫三次的Phlp特異性IgG水平。附圖5顯示用不同Derp制劑對(duì)小鼠免疫兩次(上圖)和五次(上圖)的Derp1特異性IgG水平。附圖6表明免疫程序過程中Derp1特異性IgG隨時(shí)間的發(fā)展。本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供一種固體疫苗制劑，該制劑含有一種懸浮液的凍干物，此懸浮液含有含氧金屬鹽，至少一種抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(l)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。本發(fā)明還涉及一種懸浮液的凍干物在制備一種固體疫苗制劑中的應(yīng)用，此懸浮液含有含氧金屬鹽，至少一種抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(1)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。此懸浮液適宜為含水懸浮液。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖醇的賦形劑。在本發(fā)明的再一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自氨基酸及其藥物可接受的鹽的賦形劑。在本發(fā)明的另外一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑和一種選自糖醇的賦形劑。在本發(fā)明的另外一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑和一種選自氨基酸及其藥物可接受的鹽的賦形劑。在本發(fā)明的另外一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖醇的賦形劑和一種選自氨基酸及其藥物可接受的鹽的賦形劑。在上述本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑、一種選自糖醇的賦形劑和一種選自氨基酸及其藥物可接受的鹽的賦形劑。此處所用的糖類指單糖、二糖和寡糖。該糖適宜選自葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、纖維二糖、棉子糖、異麥芽糖和環(huán)糊精。該糖優(yōu)先選自海藻糖和蔗糖。此處所用的糖醇指糖(適宜為單糖)的氫化形式，該糖的羰基被還原為一級(jí)羥基或二級(jí)羥基。該糖醇適宜選自甘露醇、山梨醇、木糖醇、甘油、赤蘚醇、阿糖醇和蒜糖醇，并且該糖醇優(yōu)選為甘露醇。該氨基酸適宜選自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、賴氨酸、脯氨酸、絲氨酸和組氨酸，以及它們藥物可接受的鹽。此氨基酸優(yōu)選為甘氨酸。該氨基酸的鹽可為堿或堿土金屬鹽，諸如鈉、鉀或鎂鹽，或者與其他氨基酸形成的鹽，諸如谷氨酸鹽或天門冬氨酸鹽。在另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有附加的賦形劑，它為一種聚合物。該聚合物可選自葡聚糖、麥芽糖糊精、淀粉、纖維素、明膠、瓊脂糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)和聚乙二醇(PEG)。該聚合物優(yōu)選葡聚糖。因此，在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑，諸如海藻糖和蔗糖；一種選自糖醇的賦形劑，諸如甘露醇；以及一種為聚合物的賦形劑，諸如葡聚糖。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑，諸如海藻糖或蔗糖；一種選自氨基酸及其藥物可接受的鹽的賦形劑，諸如甘氨酸；以及一種為聚合物的賦形劑，諸如葡聚糖。在本發(fā)明另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖醇的賦形劑，諸如甘露醇；一種選自氨基酸及其藥物可接受的鹽的賦形劑，諸如甘氨酸；以及一種為聚合物的賦形劑，諸如葡聚糖。在本發(fā)明另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖類的賦形劑，諸如海藻糖或蔗糖；以及一種為聚合物的賦形劑，諸如葡聚糖。在本發(fā)明另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自糖醇的賦形劑，諸如甘露醇；以及一種為聚合物的賦形劑，諸如葡聚糖。在本發(fā)明另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有一種選自氨基酸及其藥物可接受鹽的賦形劑，諸如甘氨酸；以及一種為聚合物的賦形劑，諸如葡聚糖。各種等級(jí)的葡聚糖都是可利用的，適宜葡聚糖的分子量大于10000，諸如平均分子量為10000至200000。該葡聚糖的分子量?jī)?yōu)選為40000、60000或70000道爾頓。按照本發(fā)明的一種實(shí)施方式，該懸浮液含有蔗糖和甘露醇的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有蔗糖、甘氨酸和葡聚糖的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有海藻糖和甘露醇的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有蔗糖、甘露醇和葡聚糖的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有海藻糖、甘氨酸和葡聚糖的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有海藻糖、甘露醇和葡聚糖的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有海藻糖和甘氨酸的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有蔗糖和甘氨酸的混合物。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該懸浮液含有甘氨酸和甘露醇的混合物。本發(fā)明所用賦形劑的優(yōu)選組合為糖、糖醇或氨基酸或其藥物可接受鹽、以及聚合物的組合。當(dāng)該懸浮液含有蔗糖和甘露醇時(shí)，蔗糖與甘露醇的重量比適宜為1:4至4:1，或者1:2至2:1，例如為1:4、3:2、2:3、4:1、2:1、1:2或l:l，而且該比率優(yōu)選為l:l。當(dāng)該懸浮液含有蔗糖、甘氨酸和葡聚糖時(shí)，蔗糖、甘氨酸與葡聚糖的重量比適宜為5:4:1、4:5:1、3:5:2、2:5:3、4:4:2、3:4:3、2:4:4、6:3:1、7:2:l和8:1:1,而且蔗糖、甘氨酸與葡聚糖的重量比優(yōu)選為5:4:1。當(dāng)該懸浮液含有海藻糖和甘露醇時(shí)，海藻糖與甘露醇的重量比適宜為1:4至4:1，或者1:2至2:1，例如為1:4、3:2、2:3、4:1、2:1、1:2或1:1，而且該重量比優(yōu)選為1:1。當(dāng)該懸浮液含有蔗糖、甘露醇和葡聚糖時(shí)，蔗糖、甘露醇與葡聚糖的重量比適宜為5:4:1、4:5:1、3:5:2、2:5:3、4:4:2、3:4:3、2:4:4、6:3:1、7:2:l和8:1:1，而且該重量比優(yōu)選為3:5:2。當(dāng)該懸浮液含有海藻糖、甘露醇和葡聚糖時(shí)，海藻糖、甘露醇與葡聚糖的重量比適宜為5:4:1、4:5:1、3:5:2、2:5:3、4:4:2、3:4:3、2:4:4、6:3:1、7:2:1或8:1:1。當(dāng)該懸浮液含有海藻糖、甘氨酸和葡聚糖時(shí)，海藻糖、甘氨酸與葡聚糖的重量比適宜為5:4:1、4:5:1、3:5:2、2:5:3、4:4:2、3:4:3、2:4:4、6:3:1、7:2:1和8:1:1。當(dāng)該懸浮液含有海藻糖和甘氨酸時(shí)，海藻糖與甘氨酸的重量比適宜為1:4至4:1，或者1:2至2:1，例如為1:4、3:2、2:3、4:1、2:1、1:2或1:1，而且該重量比優(yōu)選為1:1。當(dāng)該懸浮液含有蔗糖和甘氨酸時(shí)，蔗糖與甘氨酸的重量比適宜為1:4至4:1，或者1:2至2:1，例如為1:4、3:2、2:3、4:1、2:1、1:2或l:l,而且該重量比優(yōu)選為1:1。當(dāng)該懸浮液含有甘露醇和甘氨酸時(shí)，甘露醇與甘氨酸的重量比適宜為1:4至4:1,或者1:2至2:1,例如為1:4、3:2、2:3、4:1、2:1、1:2或1:1，而且該重量比優(yōu)選為1:1。上述懸浮液可另外含有0.1-5%(重量)的表面活性劑，例如聚乙二醇脫水山梨醇單月桂酸酯(Tween20)、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯(Tween80)、聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物(Pluronic)。按照一種實(shí)施方式，本發(fā)明的制劑為片劑。該片劑可為非壓制片(例如快速溶解片)。按照本發(fā)明的另一種實(shí)施方式，該片劑為壓制片。上述任一種片劑可用于舌下給藥。本發(fā)明的制劑也可為粉劑。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該制劑為微粒形式。另外，該制劑可為顆粒。在另一種實(shí)施方式中，該制劑為膠嚢劑，它含有凍干物。該膠嚢中所含的凍干物的形式可為粉劑、微?；蝾w粒劑。在一種實(shí)施方式中，該膠囊含有如下所迷的包被微粒?？乖景l(fā)明的固體制劑可含有一種抗原，或者抗原可為一種以上。變應(yīng)原本發(fā)明的特殊實(shí)施方式中，該抗原為變應(yīng)原。該變應(yīng)原可為任意天然存在的蛋白質(zhì)，已報(bào)告當(dāng)它們反復(fù)暴露于個(gè)體時(shí)，它們可誘導(dǎo)變應(yīng)性反應(yīng)，即IgE介導(dǎo)的反應(yīng)。天然存在變應(yīng)原的實(shí)例包括花粉變應(yīng)原(樹、草藥、雜草和草花粉變應(yīng)原)、昆蟲變應(yīng)原(吸入性、唾液和毒液變應(yīng)原，例如螨變應(yīng)原、蟑螂和蠓變應(yīng)原、膜翅目毒液變應(yīng)原)、動(dòng)物毛發(fā)和皮屑變應(yīng)原(例如來自狗、貓、馬、大鼠、小鼠等的變應(yīng)原)以及食物變應(yīng)原。樹、草和草藥的重要變應(yīng)原是來自下列的那些變應(yīng)原殼斗目、木犀目、松杉目和懸鈴木科，包括i.a.樺樹(樺屬)、榿木(榿木屬)、榛樹(榛屬)、鵝耳櫟(鵝耳櫟屬)和橄欖樹(木樨欖屬)、雪松(柳杉屬和檜屬)、懸鈴木(懸鈴木屬)；禾本目，包括i.a.黑麥草屬、梯牧草屬、早熟禾屬、狗牙根屬、鴨茅屬、絨毛草屬、Phalaris、黑麥屬和高梁屬的草；菊目和蕁麻目，包括i.a.豚草屬、蒿屬和墻草屬的草。其他重要的吸入性變應(yīng)原是表皮螨屬和嗜霉螨屬的塵螨、例如嗜鱗螨屬、食甜螨屬和食酪螨屬的儲(chǔ)螨的變應(yīng)原；例如小蠊屬、大蠊、搖蚊屬和頭梳蚤屬等蟑,、蠓和跳蚤的變應(yīng)原；以及諸如貓、狗和馬等哺乳動(dòng)物的變應(yīng)原；毒液變應(yīng)原，包括叮或咬昆蟲的變應(yīng)原，諸如膜翅目分類規(guī)則那些昆蟲，包括蜜蜂(蜜蜂科)、黃蜂(胡蜂總科)和螞蟻(蟻科)。來自真菌的重要吸入性變應(yīng)原是i.a.鏈格孢屬和分子孢子菌屬的那些變應(yīng)原。本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方式中，該變應(yīng)原為Betv1、Alng1、Coral和Carb1、Quea1、Cryj1、Cryj2、Cupa1、Cups1、Juna1、Juna2、juna3、Olee1、Ugv1、Pla11、Plaa2、Araba1、Amba2、Ambt5、Artv1、Artv2Parj1、Parj2、Parj3、Salk1、Avee1、Cynd1、Cynd7、Dacg1、Fesp1、Hoi11、Lolpl和5、Phaa1、Pasn1、Phip1、Phip5、Phip6、Poap1、Poap5、Secc1、Secc5、Sorh1、Derf1、Derf2、Derp1、Derp2、Derp7、Derm1、Eurm2、Glyd1、Lepd2、Biot1、Tyrp2、Blag1、Blag2、Pera1、Feld1、Canf1、Canf2、Bosd2、Equc1、Equc2、Equc3、Musm1、Ratn1、Apism1、Apim2、Vesv1、Vesv2、Vesv5、Dolm1、Dilm2、Dolm5、Pola1、Pola2、Pola5、Soli1、Soli2、Soli3和So1i4、Alta1、Clah1、Aspf1、Bosd4、Maid1、Glym1、Glym2、Glym3、Arah1、Arah2、Arah3、Arah4、Arah5或任何這些分子育種而獲得的shufflanthybrids。本發(fā)明最優(yōu)選的實(shí)施方式中，該變應(yīng)原為草花粉變應(yīng)原或塵螨變應(yīng)原或豚草變應(yīng)原或雪松花粉或貓變應(yīng)原或樺樹變應(yīng)原。適宜的草變應(yīng)原選自Phlp1、Phip5和Phlp。樺樹花粉變應(yīng)原為Betv1。豚草變應(yīng)原選自Artvl和Artv2。本發(fā)明另一種實(shí)施方式中，此固體疫苗制劑至少含有兩種不同類型的變應(yīng)原，它們的變應(yīng)性來源或者相同或者不同，例如草組l和草組5變應(yīng)原或螨組1和組2變應(yīng)原，它們分別來自不同的螨和草種，如短小和巨大豚草變應(yīng)原的雜草抗原，如交鏈孢屬和枝孢屬的不同真菌變應(yīng)原，如樺木、榛木、鵝耳櫟、橡樹和榿木變應(yīng)原的樹變應(yīng)原，如花生、大豆和奶變應(yīng)原的食物變應(yīng)原。此固體疫苗制劑中所加入的變應(yīng)原的形式可為提取物、提取物的混合物、純化的變應(yīng)原、改性變應(yīng)原、重組變應(yīng)原或重組變應(yīng)原的突變體。變應(yīng)原提取物可天然含有同一變應(yīng)原的一種或多種異構(gòu)體，而重組變應(yīng)原通常僅代表變應(yīng)原的一種異構(gòu)體。在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，該變應(yīng)原的形式為提取物。在另一種優(yōu)選實(shí)施方式中，該變應(yīng)原為重組變應(yīng)原。在另一種優(yōu)選實(shí)施方式中該變應(yīng)原為天然存在的低IgE-結(jié)合突變體或重組低IgE-結(jié)合突變體。重組變應(yīng)原指應(yīng)用表達(dá)系統(tǒng)，通過重組技術(shù)而產(chǎn)生的變應(yīng)原。這些變應(yīng)原可為等摩爾量的，或者這些變應(yīng)原的比率變化優(yōu)選至1:20。本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，低IgE結(jié)合變應(yīng)原為按照W099/47680、W002/40676或W003/096869公開的變應(yīng)原。微生物劑本發(fā)明的另一種特殊實(shí)施方式中，該抗原為一種微生物劑。特別是該微生物劑為病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲或其任意部分。微生物劑的實(shí)例為弧菌種、沙門氏菌種、博代氏桿菌種、嗜血桿菌種、鼠弓形體、巨細(xì)胞病毒、衣原體種、鏈球菌種、諾瓦克病毒、大腸埃希氏桿菌、幽門螺桿菌、貓胃螺桿菌、輪狀病毒、淋病奈瑟氏球菌、腦膜炎奈瑟氏球菌、腺病毒、愛巴病毒、日本腦炎病毒、卡氏肺嚢蟲、單純皰瘆病毒、梭狀芽孢桿菌種、呼吸道合胞體病毒、克雷白氏桿菌種、志賀氏菌種、綠膿桿菌、細(xì)小病毒、彎曲桿菌種、立克次體種、水痘帶狀皰滲病毒、耶爾森氏菌種、羅斯河病毒、J.C.病毒、馬紅球菌、卡他莫拉菌、伯氏疏螺旋體、溶血性巴斯德氏菌、脊髓灰質(zhì)炎病毒、流感病毒、霍亂弧菌和腸傷寒沙門氏桿菌血清變型。微生物劑的其他實(shí)例是可預(yù)防或減輕下列疾病癥狀的那些流行性感冒、結(jié)核、腦膜炎、肝炎、百日咳、脊髓灰質(zhì)炎、破傷風(fēng)、白喉、癡疾、霍亂、皰瘆、傷寒、HIV、AIDS、麻疹、萊姆病、旅行者腹瀉、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、中耳炎、登革熱、狂犬病、副流感、風(fēng)滲、黃熱病、痢疾、軍團(tuán)病、弓形體病、Q熱、出血熱、阿根廷出血熱、齲齒、恰加斯氏病、大腸埃希氏菌引起的尿路感染、肺炎球菌病、流行性腮腺炎和基孔貢雅病。含氧金屬鹽適宜含氧金屬鹽的實(shí)例例如為那些金屬鹽，其中陽(yáng)離子選自Al、K、Ca、Mg、Zn、Ba、Na、Li、B、Be、Fe、Si、Co、Cu、Ni、Ag、Au和Cr。含氧化合物的陰離子可為有機(jī)或無機(jī)陰離子，或者有機(jī)和無機(jī)陰離子的聯(lián)合。適宜含氧金屬鹽的實(shí)例例如為那些金屬鹽，其中陰離子選自硫酸鹽、氫氧化物、磷酸鹽、硝酸鹽、碘酸鹽、溴酸鹽、碳酸鹽、水合物、乙酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽和酒石酸鹽，以及它們的混合形式。此含氧金屬鹽還含有配位絡(luò)合物。例如在TheHandbookofChemistryandPhysics56Ed.，SectionB，Chapter7(1975-76)中有配位絡(luò)合物的定義。在上下文中，"混合形式"是要包括各種陰離子的聯(lián)合，以及它們例如與氯化物和石克化物的聯(lián)合。盡管固體疫苗制劑含有含氧金屬鹽，但期待可用另一種VIA族原子，諸如S、Se或Te取代氧。符合本發(fā)明所用的含氧金屬鹽可為任意含氧金屬鹽，只要將其配制在粘膜傳送系統(tǒng)中時(shí)它可具有所需的作用。這種含氧物質(zhì)的實(shí)例為氫氧化鋁、磷酸鋁、^克酸鋁、硫酸鋁鉀、磷酸鈣、Maalox(氫氧化鋁和氫氧化鎂的混合物)、氫氧化鈹、氫氧化鋅、碳酸鋅、氯化鋅和硫酸鋇。優(yōu)選的含氧金屬鹽為氫氧化鋁、磷酸鋁和磷酸鈣。最優(yōu)選的含氧金屬鹽為氫氧化鋁。凍千物的制備先形成含氧金屬鹽、賦形劑和抗原的懸浮液，并可選擇地加入其他基質(zhì)形成劑和/或其他試劑，由此制備含氧金屬鹽、賦形劑和抗原的懸浮液的凍干物。根據(jù)所制成的制劑類型而選擇其他基質(zhì)形成劑和/或其他試劑。此懸浮液優(yōu)選為含水懸浮液。當(dāng)例如氬氧化鋁用作含氧金屬鹽時(shí)，此液體懸浮液中氫氧化鋁的濃度(mgAl/ml)優(yōu)選為0.035-1000mg/ml，更優(yōu)選為0.10-100mg/ml,最優(yōu)選為2-30mg/ml。對(duì)于其他含氧金屬鹽而言，該金屬鹽的濃度(mg陽(yáng)離子/ral)優(yōu)選為0.035-1000mg/ml,更優(yōu)選為0.35-100mg/ml，更優(yōu)選為0.7-75mg/ml，最優(yōu)選為1.5-50mg/ml。當(dāng)抗原為變應(yīng)原時(shí)，此懸浮液中變應(yīng)原的濃度優(yōu)選為0.01-100mg/ml，更優(yōu)選為0.1-10mg/ml。含氧金屬鹽與變應(yīng)原的重量比優(yōu)選為O.I至IOO，更優(yōu)選為1至20。變應(yīng)原吸附于含氧金屬鹽的吸附度通常為添加量的5至99%，更優(yōu)選為10至99%。變應(yīng)原對(duì)含氧金屬鹽的吸附依賴于吸附發(fā)生時(shí)的緩沖系統(tǒng)和反應(yīng)條件，包括溫度和反應(yīng)時(shí)間。含氧金屬鹽的pl通常為2-11。變應(yīng)原蛋白的pl通常為4-9。更優(yōu)選的是，對(duì)變應(yīng)原和含氧金屬鹽進(jìn)行選擇，使變應(yīng)原的pl低于含氧金屬鹽的pl。懸浮液中賦形劑的總濃度優(yōu)選為0.lmM至1.2M,更優(yōu)選為0.5mM至800mM，最優(yōu)選為100至500mM。懸浮液所含賦形劑的重量?jī)?yōu)選為總重量的5-25°/。，更優(yōu)選為10-15%。然后將該懸浮液進(jìn)行冷凍干燥。按照所要制備的固體制劑的類型，例如粉末、微?；蝾w粒，選擇冷凍干燥的方法和技術(shù)。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，將該懸浮液分為小滴，并將其冷凍而獲得冷滴，然后將其進(jìn)行冷凍干燥，而獲得顆粒。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，將適宜量的懸浮液置于容器中，冷凍干燥，獲得餅狀殘余物，然后對(duì)其進(jìn)行研磨，形成微?；蚓哂兴璐笮〉奈⒘７勰?。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，將該懸浮液裝入多層層壓小泡板的凹陷內(nèi)，將該板進(jìn)行凍干，形成非壓制片。然后可選擇地將該板進(jìn)行密封。在另一種實(shí)施方式中，按照US2003/0202978所述，將該懸浮液進(jìn)行噴霧凍干，該懸浮液中固體濃度可選擇地采用較低的濃度，或者按照US2005/0266021中所述進(jìn)行噴霧干燥。粘膜給藥的固體疫苗制劑可通過任何粘膜應(yīng)用本發(fā)明固體疫苗制劑，所述粘膜包括經(jīng)口(通過消化系統(tǒng)粘膜，例如胃腸粘膜)、鼻、陰道、舌下、眼睛、直腸、尿路、乳房?jī)?nèi)、肺、耳鼻喉(otolar)(即通過耳)、頰或口腔粘膜，優(yōu)選通過頰或舌下粘膜，或者胃腸粘膜。已推測(cè)通過此粘膜完成疫苗的粘膜給藥是優(yōu)選的，使此粘膜自然暴露于該抗原。因此，對(duì)于針對(duì)空中傳播的粘膜抗原而產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng)來說，可優(yōu)選采用通過呼吸系統(tǒng)的給藥，優(yōu)選是頰給藥或舌下給藥。相應(yīng)的，對(duì)于針對(duì)與消化系統(tǒng)的粘膜接觸的粘膜劑而產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng)來說，優(yōu)選采用口服給藥。本發(fā)明的固體疫苗制劑可具有任何固體形式，此固體形式適于進(jìn)行粘膜給藥，而且它由凍干物組成或者含有凍千物，包括選自粉末、微粒、顆粒、壓制片、非壓制片、植入物、具有單壁并含凍千物的膠嚢(此凍干物的形式例如為粉末、微?；蝾w粒)，以及內(nèi)含凝聚性包裹劑和凍干物(此凍干物為粉末、微?；蝾w粒形式)的微顆粒。該制劑也可為含有凍干物的膠嚢(例如明膠膠囊)，其凍干物的形式為粉末、顆粒、微?；蚱湫问綖樯鲜霭肽z囊的微顆粒。壓制片凍干物例如為粉末、微粒或顆粒的形式，可將其用于制備壓制片。此壓制片可包括任何常見成片劑或賦形劑。該片也可含有微顆粒形式的凍干物，此微顆粒中含有凝聚性包裹劑。非壓制片在本發(fā)明的特殊實(shí)施方式中，此固體疫苗制劑為一種快速溶解的非壓制片，它適于頰或舌下給藥?？焖偃芙夥菈褐破膶?shí)例公開于US-A-5，648,093、W000/51568、W002/13858、W099/21579、W000/44351、US-A-4，371，516、EP-278877、W02004/047794和W020(M/075875中。通過冷凍干燥可生產(chǎn)那些優(yōu)選的快速溶解非壓制片。優(yōu)選的基質(zhì)形成劑為魚膠和改良淀粉。除了凍干物外，該非壓制片還可包括任何常見的成片劑或賦形劑，諸如佐劑、抗酸劑、稀釋劑、增強(qiáng)劑、粘膜粘著劑、增香劑、掩味劑、防腐劑、抗氧化劑、表面活性劑、粘度增強(qiáng)劑、著色劑、pH修改劑、增甜劑等。根據(jù)常規(guī)制藥程序?qū)@些賦形劑進(jìn)行選擇，變應(yīng)原疫苗制備領(lǐng)域中的熟練技術(shù)人員對(duì)這些選擇方式很清楚。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式中，該片劑含有蛋白穩(wěn)定劑。蛋白穩(wěn)定劑的實(shí)例為聚乙二醇(PEG)，例如PEG300、PEG400、PEG600、PEGIOOO、PEG1500、PEG3000、PEG3050、PEG4000、PEH6000、PEG20000和PEG35000;氨基酸，諸如甘氨酸、丙氨酸、精氨酸；單-、二和三糖，諸如海藻糖和蔗糖；聚乙烯醇(PVA);聚氧化乙烯山梨醇脂肪酸酯(聚山梨醇、吐溫或司盤)；人血清白蛋白(HSA);牛血清白蛋白(BSA)。優(yōu)選PEG用作蛋白穩(wěn)定劑。除了用作蛋白穩(wěn)定劑外，據(jù)信PEG還給劑型的基質(zhì)賦予了彈性。適宜的著色劑包括氧化鐵紅、氧化鐵黑和氧化鐵黃，以及FD&C染料，諸如FD&C藍(lán)No.2和FD&C紅No.40。適宜的增香劑包括薄荷、紅苺、甘草、柑橘、檸檬、美國(guó)柚、焦糖、香草、櫻桃和葡萄香料以及這些香料的組合。適宜的pH修改劑包括檸檬酸、酒石酸、磷酸、鹽酸和馬來酸。適宜的增甜劑包括天冬甜素、丁磺氨鉀和thaumatic。適宜的掩味劑包括碳酸氫鈉、離子交換樹脂、環(huán)糊精包涵化合物、吸附物或微嚢包封活性物。通常佐劑用于提高抗原(例如變應(yīng)原)的吸收，還可提高該抗原(例如變應(yīng)原)的免疫刺激特性。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，除了含氧金屬鹽外，本發(fā)明的片劑中還加入至少一種佐劑。適宜佐劑的實(shí)例為不耐熱腸毒素(LT)、霍亂毒素(CT)(及其去毒部分)、霍亂毒素B(CTB)、聚合脂質(zhì)體、突變體毒素(例如LTK63和LTR72)、微膠嚢、無毒細(xì)菌片段、細(xì)胞因子、殼聚糖、同源不耐熱大腸埃希氏菌(及其去毒部分)、皂角甙、細(xì)菌產(chǎn)物(諸如脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP))、脂質(zhì)體、CpG(免疫刺激DNA序列)、微粒聚合物形式的丙交酯/乙交酯均共聚物等。變應(yīng)原疫苗中佐劑的使用是由于所采用的變應(yīng)原不能穿透應(yīng)當(dāng)通過的屏障。因此這些佐劑可充當(dāng)吸收增強(qiáng)劑或者它們可充當(dāng)免疫刺激劑。本發(fā)明的非壓制快速溶解片劑可本身具有一定的粘膜粘著性，但是在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，期望還在所述劑型中加入粘膜粘著劑賦形劑，以增加該劑型與口腔粘膜的接觸時(shí)間。適宜的粘膜粘著性賦形劑為聚丙烯酸聚合物，諸如卡波姆及其衍生物；纖維素衍生物，諸如羥丙基曱基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素和羧甲基纖維素鈉；天然聚合物，諸如明膠、藻酸鈉、果膠和甘油。微顆粒派伊爾氏淋巴集結(jié)是位于小腸、大腸和闌尾壁的淋巴結(jié)的集合體，它是人體防御感染物質(zhì)和體外其他物質(zhì)對(duì)人體附著和穿透的重要部分。派伊爾氏淋巴集結(jié)也稱為淋巴濾泡集結(jié)。在呼吸道、直腸、鼻腔、口腔、咽、泌尿生殖道、大腸及其他機(jī)體粘膜組織中也可發(fā)現(xiàn)類似的淋巴濾泡集結(jié)。所述組織通常稱為粘膜相關(guān)淋巴組織(MALT)。已表明配制為微顆粒的藥物活性物質(zhì)可被派伊爾氏淋巴集結(jié)和MALT有效吸收，此微顆粒應(yīng)具有適當(dāng)?shù)拇笮『瓦m宜的理化性質(zhì)。微顆粒的使用涉及防止藥物活性物質(zhì)降解的優(yōu)勢(shì)，在該劑型生產(chǎn)和貯存期間和將此活性物質(zhì)應(yīng)用于患者過程中均具有此優(yōu)勢(shì)。當(dāng)活性物質(zhì)為變應(yīng)原時(shí)，這一點(diǎn)非常重要。眾所周知微嚢包封可用于防止敏感生物活性物質(zhì)的降解。通常，將生物活性物質(zhì)包封在任意數(shù)量的保護(hù)壁材料中，一般此材料為天然的聚合物?？筛鶕?jù)需要而改變此微顆粒中物質(zhì)的量，范圍為小量至高達(dá)微顆粒組合物的95%或以上。此微顆粒的直徑優(yōu)選小于20/4m，更優(yōu)選小于15jum，再優(yōu)選小于10pm，最優(yōu)選小于1至10"m。微嚢包封劑可為任意可生物降解的物質(zhì)，優(yōu)選為聚合劑。此微嚢包封劑優(yōu)選選自聚丙交酯、聚丙交酯-聚(乙二醇)、聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、共聚草酸酯、聚己內(nèi)酯、聚(丙交酯-共-己內(nèi)酯)、聚(酯酰胺、聚原酸酯和聚(8-羥丁酸)，以及聚酐類，最優(yōu)選聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)。微嚢包封劑的其他實(shí)例為聚(丁基-2-氰丙烯酸酯)、聚(3-羥丁酸酯)和富馬酸與癸二酸的聚酐共聚物，聚(FA:SA)。另外，按照本發(fā)明所使用的適宜的微嚢包封劑包括來源于動(dòng)物或植物蛋白的那些物質(zhì)，諸如明膠、糊精，以及大豆、小麥和車前子的蛋白；樹膠，諸如阿拉伯膠、瓜爾膠、瓊脂膠和黃原膠；多糖；淀粉和改良淀粉、藻酸鹽、羧甲基纖維素；角叉菜膠；葡萄聚糖；果膠；合成聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；以及多肽/蛋白或者多糖絡(luò)合物，諸如明膠-阿拉伯膠絡(luò)合物。在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中應(yīng)用兩種或以上的微嚢包封劑。優(yōu)選地，選擇微嚢包封劑，以生產(chǎn)疏水的微顆粒。相信此疏水的微顆粒更易于被MALT吸收，或者更易于通過MALT而發(fā)揮其作用。在一種實(shí)施方式中，所用的微嚢包封劑為乙基丙烯酸酯甲基丙烯酸共聚物的腸溶包衣、羥丙基甲基纖維素乙酸丁二酸酯或其他腸溶包衣，例如參見US專利No.5,591,433。膠嚢本發(fā)明的膠囊可為任意常見類型的膠囊。在本發(fā)明的一種特殊實(shí)施方式中，此膠嚢壁由明膠構(gòu)成。特別是，該膠嚢可適于口服給藥。該膠嚢壁可由與微顆粒相關(guān)的上述任意微嚢包封劑構(gòu)成或涂敷此微嚢包封劑。按照本發(fā)明，該膠嚢可含有懸浮液的凍干物，此懸浮液含有抗原、含氧金屬鹽和賦形劑，其形式為粉末、顆?；蛭⒘?。可選擇的是，此膠嚢可含有上述微顆粒。頰或舌下治療此固體疫苗制劑可用于接種方案中，此方案包括每日應(yīng)用疫苗。另一種接種方案包括隔日、隔兩日或隔三日應(yīng)用疫苗。例如，此接種方案包括疫苗應(yīng)用4周以上，優(yōu)選8周以上，更優(yōu)選12周以上，更優(yōu)選16周以上，更優(yōu)選20周以上，更優(yōu)選24周以上，更優(yōu)選30周以上，最優(yōu)選36周以上。給藥期可為一個(gè)連續(xù)周期?？蛇x擇的是，給藥期也可為不連續(xù)的周期，期間間隔一個(gè)或以上的非給藥期。(總的)非給藥期優(yōu)選小于(總的)給藥期。此疫苗給予受試個(gè)體可為一天一次?？蛇x擇的是，此疫苗給予受試個(gè)體可為一天兩次。此疫苗可為單劑量疫苗?？蛇x擇的是，此疫苗可為多劑量疫苗。標(biāo)準(zhǔn)的增量脫敏治療減輕變態(tài)反應(yīng)的癥狀，該治療中固體制劑形式的變應(yīng)原劑量可被增加到某種最大量，緩解變態(tài)反應(yīng)的癥狀。該片劑單位劑量的優(yōu)選效力為150-1000000SQ-u/片，更優(yōu)選為500-500000SQ-u/片，更優(yōu)選為IOOO-250000SQ-u/片，更優(yōu)選為1500-125000SQ-u/片，最優(yōu)選為1500-75000SQ-u/片。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方式中，該片劑為一種重復(fù)的單劑量，優(yōu)選為1500-75000SQ-u/片。定義本發(fā)明中應(yīng)用下列定義術(shù)語(yǔ)"冷凍干燥，，和"冷凍-干燥，，可相互替換。術(shù)語(yǔ)"凍干物"指冷凍干燥過程所得的任意形式的固體殘余物，例如為餅狀、顆?；蚍勰┬问?。術(shù)語(yǔ)"口腔粘膜的"指與口腔粘膜、咽粘膜和舌下粘膜相關(guān)。術(shù)語(yǔ)"頰的"指與口腔相關(guān)。術(shù)語(yǔ)"舌下"指與口腔舌下面的部位相關(guān)。術(shù)語(yǔ)"SQ"指SQ單位。根據(jù)ALK-Abe116A/S的"SQ生物效能"標(biāo)準(zhǔn)化方法確定SQ單位，100，000SQ單位相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)皮下維持劑量。正常情況下，根據(jù)變應(yīng)原的來源及其所用的生產(chǎn)方法，lmg提取物含有100，OOO至1，000，OOOSQ單位。通過免疫測(cè)定法，即主要變應(yīng)原總含量和變應(yīng)原總活性，可測(cè)定變應(yīng)原的精確量。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:含有氫氧化鋁和各種賦形劑的懸浮液的噴霧冷凍千燥接受噴霧冷凍干燥(SFD)的懸浮液組合物顯示在表l中。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表l:噴霧冷凍干燥的制劑。葡聚糖的分子量為70.OOO道爾頓。應(yīng)用系統(tǒng)冷凍造粒才幾LS2(PowderProAB)對(duì)該制劑進(jìn)4亍冷凍干燥，并應(yīng)用LyovacGT-2冷凍干燥器(PowderPro)或Usifroid冷凍干燥器(ALK-Abell6的FRD0001)對(duì)其進(jìn)行干燥。系統(tǒng)包括兩流體噴嘴，此噴嘴安裝在磁性攪拌器上的玻璃燒杯上面。為減少液體氮的丟失，在玻璃燒杯的頂端放置一個(gè)蓋。此燒杯大約一半裝滿液體氮。停頓2-3分鐘，使此液體氮表面穩(wěn)定。應(yīng)用4I/小時(shí)(適于大多數(shù)制劑)的加料速度將該制劑噴淋至此液體氮中，此加料速度由蠕動(dòng)泵控制。噴霧期間所用的氣壓為0.15巴-0.3巴。持續(xù)攪拌所形成冷凍微粒的分散體，并將其轉(zhuǎn)移至液氮覆蓋的冷凍干燥盤。在盡可能最低的壓力下(相當(dāng)于-33。C左右)，于LyovacGT-2凍干器上進(jìn)行PowderPro干燥。釆用表2的設(shè)置在Usifroid凍干器(FRD0001)上進(jìn)行ALK-Abell6干燥。<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表2:Usifroid凍干器(FRD0001)i殳置粉末的控制由視覺檢查、流動(dòng)性、重建和堆密度組成。通過沉積試驗(yàn)和顯微鏡分析(目測(cè)和偏振光)測(cè)定Alhydrogel特性。應(yīng)用表1中所有的賦形劑組合物制備可接受的粉末，盡管某些粉末有吸收水分的傾向，而這些水分可引起膠粘/大顆粒聚集。在所列舉賦形劑存在的條件下，噴霧冷凍干燥過程不會(huì)對(duì)Alhydrogel造成影響。觀察到沉積方式的變化較小，而應(yīng)用顯微鏡分析未發(fā)現(xiàn)大范圍的凝結(jié)。實(shí)施例2:氫氧化鋁基疫苗制劑的冷凍干燥
背景技術(shù)：
和目的如果要保持該制劑的效力和特性，則必須將氫氧化鋁(A1(0H)3)基疫苗制劑貯存在冷藏而非冷凍的條件下。另外，疫苗制劑的冷凍干燥既減小疫苗重建后的效力，也減小其基本特性(沉積速度、流動(dòng)性)。海藻糖為一種二糖碳水合物，它已被用作冷凍千燥和貯存過程中穩(wěn)定各種化合物的添加劑。本研究的目的是測(cè)定海藻糖對(duì)疫苗制劑的作用，尤其是在冷凍干燥過程中的作用，此疫苗制劑的形式為氫氧化鋁含水懸浮液和Derp或Phlp變應(yīng)原的提取物的混合物，特別是對(duì)疫苗的物理和化學(xué)特性、活性/效力及免疫原性的作用。方法樣品制備在所有僅對(duì)氫氧化鋁進(jìn)行的分析中，應(yīng)用來自Brenntag的20%Alhydrogel1.3%(灰分殘余物(A1203)含量1.3%w/w;對(duì)應(yīng)的A1(0H)3含量1.99%w/w;鋁含量6.25mgAl/ml±5%)。吸附在4-8。C下,將10°/。變應(yīng)原，1000000SQ/ml與20%Alhydrogel1.3%(灰分殘余物(A1203)含量1.3%w/w;對(duì)應(yīng)的Al(OH)3含量1.99%w/w;鋁含量6.25mgAl/ml±5%)混合過夜，以制備液體制劑。加入附加的70%Coca's緩沖液，其中含或不含海藻糖。在一種情況下，在吸附中應(yīng)用標(biāo)記FITC的Phlp提取物。冷凍干燥將lmL(小鼠免疫方案中采用1.2mL)樣品等分至玻璃小瓶中。在-80X:將這些樣品冷凍5分鐘，然后冷凍干燥過夜。在將樣品再溶解于lmLMilliQ水中之前，對(duì)此冷凍干燥粉末進(jìn)行研究。顯微鏡分析應(yīng)用LeicaTCSSP2/LeicaDC500，進(jìn)行樣品的相襯顯微鏡和熒光顯微鏡分析。還應(yīng)用偏振顯微鏡(OlympusSZ60)對(duì)這些樣品進(jìn)行分析。火箭免疫電泳RIE按照Axelsen等1973[1]所述的方案進(jìn)行RIE。在RIE中，于瓊脂糖凝膠上通過電泳將樣品在一維空間上進(jìn)行分離。在RIE中通過火箭形狀的沉淀物而進(jìn)行蛋白的鑒別。對(duì)于Phlp疫苗，流動(dòng)含有針對(duì)樣品上清液產(chǎn)生的抗Phlp和抗Phlp6的RIE。對(duì)于Derp疫苗，流動(dòng)含有針對(duì)樣品上清液產(chǎn)生的抗Derp、抗Derp1和抗Derp2的RIE。IgE抑制實(shí)驗(yàn)在AdviaCentaur系統(tǒng)上進(jìn)行IgE抑制實(shí)驗(yàn)。將血清樣品(25uL血清混合物，通過混合等量塵螨變應(yīng)性個(gè)體的血清而獲得此血清混合物)與固體相(PMP，順磁顆粒)固定的抗IgE抗體混合。孵育和沖洗后，將抑制劑(提取物、疫苗或凍干和再溶解疫苗)的連續(xù)稀釋物與固定量的生物素化Derp混合。加入丫啶酯標(biāo)記的鏈霉親和素、孵育和沖洗后，將與吸附IgE抗體的固體相結(jié)合的生物素化Derp的量估計(jì)為發(fā)射的光量(RLU)。按照公式1,將所測(cè)定的RLU值轉(zhuǎn)換為結(jié)合度(DoB)i歷，一及z仏公式1，其中RLUi為給定劑量的抑制劑i存在情況下所獲得的讀數(shù)，RLUB^p。。i為背景信號(hào)，RLU卜。為緩沖劑作為抑制劑(0%抑制)時(shí)獲得的信號(hào)。所有RLU值均測(cè)定一式三份，計(jì)算中采用它們的均值。按照公式2將每種試驗(yàn)抑制劑制劑的數(shù)據(jù)集(1og,。Dose，DoB)調(diào)整(GrapPadPrismv.4.03)為L(zhǎng)OG函數(shù)。r_5Do5=5+1+10(1Og￡C50-'。g0<e)*WSa戈2其中B，T，1ogEC50和HS為非線性擬合所測(cè)定的參數(shù)。B為S形曲線的"底部"漸近線，T為S形曲線的"頂部"漸近線，EC50為獲得50%抑制所需的劑量，HS(HillSlope)為陡度或S形曲線的"斜度，，的估計(jì)量。在擬合步驟中直接比較HS值，如果所比較曲線的斜度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無法區(qū)別，則計(jì)算基于常見斜度估計(jì)值的logECW,并在效力比較中應(yīng)用它。應(yīng)用GraphPadPrismv.4.03進(jìn)行所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算。在獨(dú)立的兩天進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn)，在分析前匯總數(shù)據(jù)。應(yīng)用含海藻糖的制劑進(jìn)行小鼠免疫-免疫方案每?jī)芍軐?duì)小鼠進(jìn)行i.p.(腹膜內(nèi))免疫，共進(jìn)行6次，應(yīng)用含有下列組合物的100yl液體制劑1.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip(貓尾草提取物)(PhipAlum)。2.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip，進(jìn)行了冷凍干燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDPhipAlum)。3.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip+100mM海藻糖(PhlpTHIOO)。4.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip+200mM海藻糖(PhlpTH200)。5.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip+300mM海藻糖(PhlpTH300)。6.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip+100mM海藻糖，進(jìn)行了冷凍干燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDPhipTHIOO)。7.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip+200mM海藻糖，進(jìn)行了冷凍干燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDPhipTH200)。8.偶聯(lián)Alhydrogel的Phip+300mM海藻糖，進(jìn)行了冷凍干燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDPhipTH300)。9.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp(Dermatophagoidespteronyssinus提取物)(DerpAlum)。10.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp，進(jìn)行了冷凍干燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDDerpAlum)。11.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp+100mM海藻糖(DerpTHIOO)。12.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp+200mM海藻糖(DerpTH200)。13.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp+300mM海藻糖(DerpTH300)。14.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp+100mM海藻糖，進(jìn)行了冷凍干燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDDerpTHIOO)。15.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp+200mM海藻糖，進(jìn)行了冷凍千燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDDerpTH200)。16.偶聯(lián)Alhydrogel的Derp+300mM海藻糖，進(jìn)行了冷凍千燥，并在應(yīng)用前即刻進(jìn)行再溶解(FDDerpTH300)。每組包括7-8個(gè)小鼠，l-8組使用Balbc/A，9-16組使用SJL。通過在4-8。C下將10%變應(yīng)原，1000000SQ/ml與由Brenntag荻得的20°/。Alhydrogel1.3°/。(灰分殘余物(A1203)含量1.3°/。w/w;對(duì)應(yīng)的A1(0H)3含量1.99%w/w;鋁含量6.25mgAl/ml±5%)混合過夜而制備此液體制劑。加入附加的70%Coca，s緩沖液，其中含或不含海藻糖。按照上述冷凍干燥的方法，將每種制劑的一部分進(jìn)行冷凍干燥。將冷凍干燥的樣品貯存在水箱中，在進(jìn)行每種免疫之前進(jìn)行再溶解。在第0、2、3、5和6次免疫后采集血樣，收集血清，通過下面的方法測(cè)定變應(yīng)原特異性IgG的水平。IgG測(cè)定方法通過直接ELISA法分別測(cè)定1-8組和9-16組的Phlp、Derp1或Derp2特異性IgG。ELISA的步驟是包被變應(yīng)原，封阻，用血清孵育，并用HRP標(biāo)記的抗小鼠IgG進(jìn)行測(cè)定，然后用TMB和酸性酸終止反應(yīng)。在ELISA讀數(shù)器上測(cè)定吸光度。每步驟之間均進(jìn)行沖洗。結(jié)果和討論顯微鏡分析和RIE首先測(cè)定海藻糖對(duì)不含抗原的氫氧化鋁的作用。貯存于5'C不含海藻糖和含300mM海藻糖的未處理氫氧化鋁的相襯影像，以及冷凍干燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氫氧化鋁的相襯影像顯示，當(dāng)將樣品貯存在5C下時(shí)海藻糖似乎不影響氬氧化鋁微粒。當(dāng)將氫氧化鋁冷凍干燥時(shí)，甚至在將樣品再溶解后也形成小板結(jié)晶。另外還發(fā)現(xiàn)，冷凍干燥和再溶解的含300mM海藻糖的氬氧化鋁的凝膠結(jié)構(gòu)似乎與貯存于5'C的參照樣品的結(jié)構(gòu)相同。冷凍千燥和再溶解的不舍海藻糖和含300mM海藻糖的氫氧化鋁的偏振顯微鏡影像清楚地顯示在冷凍干燥再溶解的不含海藻糖的氫氧化鋁中形成結(jié)晶。但是當(dāng)在海藻糖存在情況下對(duì)氫氧化鋁進(jìn)行冷凍干燥時(shí)未發(fā)現(xiàn)任何結(jié)晶。貯存于5'C海藻糖濃度為0、50、100、150、200和300mM的FITC標(biāo)記氫氧化鋁Phlp的相襯影像，以及冷凍干燥和再溶解的海藻糖濃度為0、50、100、150、200和300raM的FITC標(biāo)記氫氧化鋁Phip的相襯影像顯示，隨著海藻糖濃度的升高，再溶解樣品中凝膠微粒的結(jié)構(gòu)逐漸保持參照樣品的凝膠結(jié)構(gòu)。從相襯影像中可見，濃度為150-200mM的海藻糖似乎足以保持其凝膠結(jié)構(gòu)。貯存于5。C海藻糖濃度為0、50、100、150、200和300mM的氬氧化鋁Phlp的偏振顯微鏡影像，以及冷凍干燥和再溶解的海藻糖濃度為0、50、100、150、200和300mM的氬氧化鋁Phlp的偏振顯微鏡影像，顯示冷凍干燥氫氧化鋁Phlp，應(yīng)用50mM足以防止結(jié)晶的形成。RIE按照下列完成A)試驗(yàn)樣品為氫氧化鋁Phlp上清液，其中i)氫氧化鋁Phlp已被冷凍千燥和再溶解和ii)將其貯存在5'C,海藻糖濃度為0和300mM，用兔抗Phlp抗體進(jìn)行沉淀，B)試驗(yàn)樣品為標(biāo)準(zhǔn)Phlp溶液，其中含有25000SQ和50000SQ，由兔抗Phlp6抗體沉淀，C)試驗(yàn)樣品為氫氧化鋁Phlp上清液，貯存在5X:，海藻糖濃度為0、50、100、150、200和300mM，用兔抗Phlp6抗體進(jìn)行沉淀，以及D)試驗(yàn)樣品為冷凍干燥和再溶解的氫氧化鋁Phlp上清液，海藻糖濃度為0、50、100、150、200和300mM，用兔抗Phlp6抗體進(jìn)行沉淀，RIE結(jié)果顯示海藻糖存在情況下，可提高上清液中Phlp和Phlp6的量，表明海藻糖的存在可解吸某些Phlp/Phlp6。還觀察到當(dāng)將海藻糖濃度從50升高至300mM時(shí)，Phlp6的解吸略微提高。將不含海藻糖和含300mM海藻糖的FITC標(biāo)記氫氧化鋁Phlp進(jìn)行冷凍干燥和再溶解，以通過相襯顯微鏡觀察Phlp提取物是否吸附于氬氧化鋁凝膠微粒。當(dāng)相襯顯微鏡和熒光顯微鏡的兩種影像重疊形成后，通過這兩種影像對(duì)樣品進(jìn)行分析。似乎FITC標(biāo)記所測(cè)定的熒光與氬氧化鋁凝膠微粒的位置相同，對(duì)于不含海藻糖和含300mM海藻糖的冷凍干燥樣品均如此，表明Phlp提取物吸附于氬氧化鋁凝膠微粒。另外，與沒有海藻糖情況下冷凍干燥的凝膠微粒相比，似乎海藻糖存在情況下冷凍干燥的凝膠微粒更小，分布更均勻，而且與未經(jīng)受冷凍干燥的凝膠微粒更相似。從貯存于5。C不含海藻糖和含300mM海藻糖的未處理氬氧化鋁Derp的相襯顯微鏡影像，以及冷凍千燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氫氧化鋁Derp的相襯顯微鏡影像中可見，海藻糖的存在似乎不對(duì)貯存于5X:的氫氧化鋁凝膠微粒產(chǎn)生影響，但是海藻糖可明確地在冷凍干燥過程中穩(wěn)定氳氧化鋁Derp，其凝膠微粒的結(jié)構(gòu)與ji&存于5'C參照制劑的結(jié)構(gòu)保持相同。從貯存于5X:不含海藻糖和含300mM海藻糖的未處理氫氧化鋁Derp的偏振顯微鏡影像，以及冷凍干燥和再溶解的不含海藻糖和含300mM海藻糖的氫氧化鋁Derp的偏振顯微鏡影像中清晰可見，在不含海藻糖情況下將氫氧化鋁Derp進(jìn)行冷凍干燥時(shí)則形成結(jié)晶，而300mM海藻糖存在情況下將氫氧化鋁Derp進(jìn)行冷凍干燥時(shí)，未發(fā)現(xiàn)任何結(jié)晶。RIE按照下列完成A)試驗(yàn)樣品為氫氧化鋁Derp上清液，其中i)氫氧化鋁Derp已被冷凍干燥和再溶解和ii)將其貯存在5'C，海藻糖濃度為0和300mM，用兔抗Derp抗體進(jìn)行沉淀，B)試驗(yàn)樣品為標(biāo)準(zhǔn)Derp1溶液，其中含有33000SQ、100000SQ和300000SQ，以及氬氧化鋁Derp上清液，其中i)氫氧化鋁Derp已被冷凍干燥和再溶解和ii)將其貯存在5X:,海藻糖濃度為0和300mM，用兔抗Derpl抗體進(jìn)行沉淀，C)試驗(yàn)樣品為標(biāo)準(zhǔn)Derp1溶液，其中含有3300QSQ、100000SQ和300000SQ，以及氫氧化鋁Derp上清液，其中i)氫氧化鋁Derp已被冷凍干燥和再溶解和ii)將其貯存在5。C，海藻糖濃度為0和300raM，用兔抗Derp2抗體進(jìn)行沉淀，RIE結(jié)果顯示海藻糖的存在似乎不引起任何解吸。IgE抑制實(shí)驗(yàn)必須將氫氧化鋁為佐劑的疫苗制劑保持在冰點(diǎn)之上，以防止發(fā)生對(duì)該制劑不可逆的損害，而且將疫苗制劑進(jìn)行冷凍干燥而不影響疫苗的活性是不可能的。已知海藻糖具有蛋白穩(wěn)定特性，而且如下所述此化合物可穩(wěn)定冷凍干燥條件下的氫氧化鋁制劑。附圖l顯示不同抑制劑對(duì)Derp-特異性IgE與生物素化Derp結(jié)合的抑制度，這些抑制劑為Derp提取物溶液(DerpIMP7331-—23,240205)、氫氧化鋁Derp(Dp—Alu-TH-5C-230205)、含300mM海藻糖的氫氧化鋁Derp(Dp_Alu+TH_5C-230205)、氫氧化鋁Derp上清液(Dp—Sup-TH—5C—230205)和含300mM海藻糖的氫氧化鋁Derp上清液(Dp—Sup+TH—5C-230205)。附圖l表明可將海藻糖(300mM)與氫氧化鋁制劑混合，而不對(duì)疫苗活性產(chǎn)生任何可檢測(cè)的變化，而且在上清液中未檢測(cè)到任何活性，表明海藻糖未洗脫任何氫氧化鋁結(jié)合/吸附蛋白。附圖2顯示不同抑制劑對(duì)Derp-特異性IgE與生物素化Derp結(jié)合的抑制度，這些抑制劑為Derp提取物溶液(DerpIMP7331--23,240205)、凍千氫氧化鋁Derp(Dp-Alu-TH-Lyo-230205)、含300mM海藻糖的氫氧化鋁Derp(Dp—Alu+TH-Lyo—230205)、氫氧化鋁Derp上清液(Dp-Sup-TH—LyoSup—230205)和含300mM海藻糖的氫氧化鋁Derp的上清液(Dp—Sup+TH-LyoSup-230205)。附圖2顯示在冷凍干燥和在緩沖液中重建后，海藻糖可保持氫氧化鋁疫苗制劑的效力。如果在冷凍干燥過程中省略海藻糖，則該疫苗將會(huì)喪失其原先效力的85%。附圖3顯示三對(duì)試驗(yàn)組制劑效力估計(jì)值的比較，即使用上述名稱的i)Dp-Alu-TH-Lyo對(duì)Dp-Alu+TH-Lyo,ii)層對(duì)Dp—Alu+TH一Lyo，Hi)IMP對(duì)Dp-Alu-TH-Lyo。對(duì)不同試驗(yàn)組繪制LogEC50值的差值，包括95%可信區(qū)間(CL)。如果試驗(yàn)組的CL包括0，則該值無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；如果不包括O,則該值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。如附圖3所示，凍干和再溶解的含海藻糖氫氧化鋁制劑與未處理參照制劑的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而凍干的不含穩(wěn)定劑的制劑卻明顯喪失效力。小鼠免疫附圖4顯示用不同Phip制劑免疫3次的小鼠中Phip特異性IgG的水平，其中Phip特異性IgG表示為相對(duì)OD值(用稀釋度1:40000的參照樣品的OD值校正稀釋度1:64000的血清樣品的OD值)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)小鼠血清。"Phip鋁，，指氫氧化鋁Phlp,FD指凍干的，TH100，200和300分別指海藻糖100，200和300mM。這些結(jié)果表明，其中的海藻糖在任何濃度下均不抑制對(duì)Phlp的免疫反應(yīng)。如所預(yù)期的那樣，觀察到對(duì)沒有海藻糖存在的情況下凍干的氫氧化鋁Phip的免疫反應(yīng)無明顯減小。附圖5顯示用不同Derp制劑免疫2次(上圖)和5次(上圖)的小鼠中Derpl特異性IgG的水平，其中Derpl特異性IgG表示為相對(duì)OD值(用稀釋度1:4500Q的參照樣品的0D值校正稀釋度1:15000的血清樣品的OD值)，每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)小鼠血清。應(yīng)用不同Derp制劑免疫的小鼠的結(jié)果還顯示，海藻糖不抑制變應(yīng)原特異性免疫反應(yīng)(附圖5，兩個(gè)圖)，此與Phlp制劑的數(shù)據(jù)一致。與非凍干制劑相比，不含海藻糖的凍干Derp制劑具有延遲和減弱的反應(yīng)(附圖5，上和下圖)，而在制劑中加入海藻糖可在凍干過程中對(duì)其進(jìn)行保護(hù)，因?yàn)楹Ｔ逄堑膬龈芍苿┲刑禺愋訧gG水平與未凍干的氫氧化鋁Derp的相當(dāng)(附圖5，下圖)。對(duì)于所檢測(cè)的海藻糖濃度來說，其改善的保護(hù)水平相同。附圖6表明免疫程序中Derp1特異性IgG隨時(shí)間的發(fā)展。如上所述，與未接受凍干的氫氧化鋁Derp相比，凍干氫氧化鋁Derp制劑的免疫反應(yīng)發(fā)生時(shí)間更為推遲。在凍干前加入海藻糖大約接近IgG對(duì)非凍干制劑反應(yīng)的發(fā)展，其中300mM海藻糖作為優(yōu)選制劑。結(jié)論顯微鏡和火箭免疫電泳(RIE)對(duì)氫氧化鋁Phlp和氫氧化鋁Derp的分析顯示1.當(dāng)樣品貯存于5。C時(shí)，海藻糖似乎不影響凝膠微粒。2.加入50mM海藻糖，在冷凍干燥過程中此海藻糖的存在可防止結(jié)晶形成。3.相襯影像顯示，海藻糖濃度大于lSOmM情況下，凍干和再溶解制劑的凝膠微粒的結(jié)構(gòu)與未接受冷凍干燥的參照制劑的結(jié)構(gòu)相似。氫氧化鋁Phlp樣品上清液的RIE顯示，海藻糖的存在可引起Phlp和Phlp6的解吸。但是，F(xiàn)ITC標(biāo)記氫氧化鋁Phlp的顯微鏡影像顯示Phlp與該凝膠微粒結(jié)合。氫氧化鋁Derp樣品的RIE分析顯示未檢測(cè)到Derp、Derp1和Derp2的解吸。IgE抑制實(shí)驗(yàn)1.在冷凍干燥過程中海藻糖保護(hù)DerpAlutard疫苗制劑，而且重建的疫苗在效力和組成方面與未接受冷凍干燥的參照制劑相當(dāng)。2.海藻糖不洗脫疫苗制劑的蛋白。3.當(dāng)在緩沖液中重建時(shí)，混合物中不含海藻糖的凍干氫氧化鋁疫苗喪失其85°/。的效力。小鼠免疫1.對(duì)于氫氧化鋁Phlp和Derp制劑來說，其中的海藻糖本身并不抑制免疫反應(yīng)。2.與未接受凍干的氫氧化鋁Derp相比，凍干氫氧化鋁Derp制劑的免疫反應(yīng)發(fā)生時(shí)間更為推遲。在凍干前加入海藻糖大約接近IgG對(duì)非凍干制劑反應(yīng)的發(fā)展，其中300mM海藻糖作為優(yōu)選制。參考文獻(xiàn)AxelsenNH，Kr0llJandWeekeB;1973;AManualofQuantitativeImmunoelectrophoresis-MethodsandApplications;ScandinavianJournalofImmunology;vol.2;Supplementno.權(quán)利要求1.一種固體疫苗制劑，該制劑適于粘膜給藥，而且含有至少一種抗原作為活性物質(zhì)，其中該制劑含有懸浮液的凍干物，此懸浮液含有含氧金屬鹽，抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(1)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。2.按照權(quán)利要求l的制劑，其中該懸浮液含有糖，此糖選自葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、纖維二糖、棉子糖、異麥芽糖和環(huán)糊精。3.按照權(quán)利要求2的制劑，其中該懸浮液含有糖，此糖選自海藻糖和蔗糖。4.按照權(quán)利要求1-3的任一制劑，其中該懸浮液含有糖醇。5.按照權(quán)利要求4的制劑，其中該懸浮液含有糖醇，此糖醇選自甘露醇、山梨醇和蒜糖醇。6.按照權(quán)利要求1-5的任一的制劑，其中該懸浮液含有氨基酸，此氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、絲氨酸、精氨酸、賴氨酸和組氨酸及其藥物可接受的鹽。7.按照權(quán)利要求1-6的任一的制劑，其中該懸浮液含有附加的賦形劑，此賦形劑為聚合物，優(yōu)選為葡聚糖。8.按照上述任一權(quán)利要求的制劑，其中該懸浮液含有下列混合物(a)蔗糖和甘露醇，(b)蔗糖、甘氨酸和葡聚糖，(c)海藻糖和甘露醇，(d)蔗糖、甘露醇和葡聚糖，(e)海藻糖、甘氨酸和葡聚糖，(f)海藻糖、甘露醇和葡聚糖，(g)海藻糖和甘氨酸，(h)蔗糖和甘氨酸，或者(i)甘氨酸和甘露醇。9.按照上述任一權(quán)利要求的制劑，其中抗原為變應(yīng)原。10.按照上述任一權(quán)利要求的制劑，其中含氧金屬鹽為氫氧化鋁。11.按照上述任一權(quán)利要求的制劑，其中該制劑為片劑。12.按照權(quán)利要求ll的制劑，其中該片劑為非壓制片。13.按照權(quán)利要求12的制劑，其中非壓制片為快速溶解片。14.按照權(quán)利要求ll的制劑，其中該片劑為壓制片。15.按照權(quán)利要求11-14任一的制劑，其中該片劑用于舌下給藥。16.按照權(quán)利要求1-IO任一的制劑，其中該制劑為粉末。17.按照權(quán)利要求l-10任一的制劑，其中該制劑為微粒形式。18.按照權(quán)利要求l-10任一的制劑，其中該制劑為顆粒。19.按照權(quán)利要求1-10任一的制劑，其中該制劑為含有凍干物的膠嚢。20.懸浮液的凍干物在制備粘膜給藥的固體疫苗制劑中的應(yīng)用，此懸浮液含有含氧金屬鹽，至少一種抗原和至少一種賦形劑，此賦形劑選自(1)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。21.按照權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中該懸浮液含有糖，此糖選自葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、纖維二糖、棉子糖、異麥芽糖和環(huán)糊精。22.按照權(quán)利要求21的應(yīng)用，其中該糖選自海藻糖和蔗糖。23.按照權(quán)利要求20-22的任一應(yīng)用，其中該懸浮液含有糖醇。24.按照權(quán)利要求23的應(yīng)用，其中此糖醇選自甘露醇、山梨醇和蒜糖醇。25.按照權(quán)利要求20-24的任一應(yīng)用，其中該懸浮液含有氨基酸，此氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、絲氨酸、精氨酸、賴氨酸和組氨酸及其藥物可接受的鹽。26.按照權(quán)利要求20-25的任一應(yīng)用，其中該懸浮液含有附加的賦形劑，此賦形劑為聚合物，優(yōu)選為葡聚糖。27.按照上述權(quán)利要求20-26中任一應(yīng)用，其中該懸浮液含有下列混合物(a)蔗糖和甘露醇，(b)蔗糖、甘氨酸和葡聚糖，(c)海藻糖和甘露醇，(d)蔗糖、甘露醇和葡聚糖，(e)海藻糖、甘露醇和葡聚糖，(f)海藻糖、甘氨酸和葡聚糖，(g)海藻糖和甘氨酸，(h)蔗糖和甘氨酸，或者(i)甘露醇和甘氨酸。28.按照上述權(quán)利要求20-27的任一應(yīng)用，其中抗原為變應(yīng)原。29.按照上述權(quán)利要求20-28的任一應(yīng)用，其中含氧金屬鹽為氫氧化鋁。30.按照上述權(quán)利要求20-29的任一應(yīng)用，其中該制劑為片劑。31.按照權(quán)利要求30的應(yīng)用，其中該片劑為非壓制片。32.按照權(quán)利要求31的應(yīng)用，其中非壓制片為快速溶解片。33.按照權(quán)利要求30的應(yīng)用，其中該片劑為壓制片。34.按照權(quán)利要求30-33任一的應(yīng)用，其中該片劑用于舌下給藥，35.按照權(quán)利要求20-29任一的應(yīng)用，其中該制劑為粉末。36.按照權(quán)利要求20-29任一的應(yīng)用，其中該制劑為微粒形式。37.按照權(quán)利要求20-29任一的應(yīng)用，其中該制劑為顆粒。38.按照權(quán)利要求20-29的任一應(yīng)用，其中該制劑為含有凍干物的膠嚢。39.給受試者免疫接種的方法，包括將有效量的按照權(quán)利要求1-19中任一的固體制劑進(jìn)行粘膜給藥。40.治療變態(tài)反應(yīng)或減輕變態(tài)反應(yīng)癥狀的方法，包括將有效量的按照權(quán)利要求1-19中任一的固體制劑進(jìn)行粘膜給藥，該制劑中至少含有一種變應(yīng)原。41.按照權(quán)利要求39或40中任一的方法，其中通過口腔粘膜進(jìn)行給藥。42.按照權(quán)利要求41的方法，其中通過舌下粘膜進(jìn)行給藥。43.按照權(quán)利要求39-40中任一的方法，其中經(jīng)由口腔，而且通過胃腸道粘膜給藥。全文摘要本發(fā)明涉及一種固體疫苗制劑，它適于粘膜給藥，并且含有作為活性物質(zhì)的至少一種抗原，其中該制劑含有一種懸浮液的凍干物，此懸浮液含有含氧金屬鹽，抗原和一種或多種的賦形劑，此賦形劑選自(1)糖類、(2)糖醇和(3)氨基酸或其藥物可接受的鹽。文檔編號(hào)A61K39/35GK101296705SQ200680040378公開日2008年10月29日申請(qǐng)日期2006年10月4日優(yōu)先權(quán)日2005年10月4日發(fā)明者A·R·倫德迦德,C·赫耶爾,H-H·意普森,L·L·瑪爾柯達(dá)爾,S·桑德卡爾,U·塞帕拉申請(qǐng)人:阿爾克-阿貝洛有限公司