專利名稱：一種可溶于水、以銀的化合物和胱氨酸為主要成分、具有抗病毒活性的制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可溶于水的、具有抗病毒活性的制劑，屬于藥用化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明也涉及本制劑的制備方法。本發(fā)明可用于生產(chǎn)治療病毒感染、細(xì)菌感染和其它感染的成藥。
本發(fā)明的目的是制造高效的抗病毒藥品，特別適用于治療病毒性肝炎、耐抗生素的細(xì)菌感染，包括HIV感染。
本發(fā)明的本質(zhì)是提供一種抗病毒、以銀的化合物和天然氨基酸L-胱氨酸為主要成分，成分符合C6H19N4O6S2LiAg2(表1)的新制劑。

背景技術(shù)：
Merck公司的名為“Argochrom”的制劑，(大概于1916～1945年間在德國(guó)生產(chǎn)，戰(zhàn)前進(jìn)口到前蘇聯(lián))它的成分符合1914年開(kāi)始生效的奧地利專利No.69476，在1920年前德文名稱為“Silber Methylen Blau”。還有根據(jù)德國(guó)1914年1月7日頒布的專利No.268968，類別12p，組別16-原本，生產(chǎn)的“Gegonon”制劑很著名(見(jiàn)ВотчалБ.Е.手冊(cè)和其它的“藥品”書籍М.-Л.ОНТИ，1934年)。
上述制劑含有離子狀態(tài)的和有機(jī)分子——配體緊密結(jié)合的銀。上述制劑的不足之處是制劑中所含的銀的有效生物利用率低，這是因?yàn)椤癆rgochrom”的配體為合成染料——亞甲藍(lán)，而“Gegonon”的配體是高分子載體——蛋白(月示)(albumose)。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提高銀離子穿透生物膜的效能。如果是口服或者直腸用藥，從滲透入血管開(kāi)始，使銀離子有效達(dá)到病變細(xì)胞，穿透細(xì)胞膜，最后終止感染原的生命活動(dòng)。
實(shí)現(xiàn)目的的方法是制造一種可溶于水的且溶液耐光的銀制劑，即穩(wěn)定的銀和天然氨基酸L-胱氨酸的金屬絡(luò)合物，其中一個(gè)胱氨酸分子與兩個(gè)銀離子緊密結(jié)合。
也提供一種新的可溶于水的抗病毒藥品(物質(zhì))的制備方法。該方法就是在常溫條件下，將下列成分胱氨酸、氫氧化鋰、硝酸銀和氨，按摩爾比例1∶2∶2∶8混合合成，先將胱氨酸溶于水中，加入氫氧化鋰使其轉(zhuǎn)變成鋰鹽，再往制得的溶液中添加預(yù)先配制好的硝酸銀的氨絡(luò)合物[Ag(NH3)2]NO3，其中[Ag(NH3)2]NO3通過(guò)計(jì)算量的硝酸銀溶液和25％的氨的水溶液混合在一起制得。反應(yīng)物在常溫下放置6小時(shí)，然后在40～50℃條件下真空濃縮至原來(lái)體積的1/4，濃縮時(shí)所需產(chǎn)品——黃色的、分散狀的細(xì)小沉淀物劇烈析出，把得到的懸浮液和當(dāng)量體積的乙醇混合，其中乙醇按4等份加入，懸浮液冷卻至+4～+6℃并保持12小時(shí)。把形成的黃色沉淀物過(guò)濾出來(lái)，用乙醇沖洗，常溫下真空干燥至重量不變。

上面的結(jié)構(gòu)式符合分子式C6H19N4O6S2LiAg2的成分構(gòu)成。

具體實(shí)施例方式 合成方法實(shí)施例 往1升的圓底燒瓶中加入24.00克的胱氨酸、8.40克的氫氧化鋰和100毫升的蒸餾水。常溫條件下使用磁力攪拌器攪拌反應(yīng)物，直至各種原始成分全部溶解。
往300毫升的玻璃杯中加入33.97克的硝酸銀和50毫升的蒸餾水。硝酸銀溶解后，在強(qiáng)力攪拌下注入54.4毫升25％的氨的水溶液。
常溫條件下利用磁力攪拌器攪拌的同時(shí)，往胱氨酸的二鋰鹽均勻溶液中注入硝酸銀的氨絡(luò)合物溶液。反應(yīng)物漸漸呈黃色，1～2小時(shí)內(nèi)顏色越來(lái)越濃。6小時(shí)后使用旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器，在40～50℃溫度范圍內(nèi)將反應(yīng)物濃縮至50毫升，濃縮時(shí)黃色的、分散狀的細(xì)小沉淀物劇烈析出。把懸浮液轉(zhuǎn)移到500毫升的玻璃杯中，在機(jī)械攪拌器的強(qiáng)力攪拌下，按50毫升一份，在30分鐘內(nèi)將200毫升乙醇加入到杯中。懸浮液攪拌30分鐘后，在冰箱(+4～+6℃)中放置12小時(shí)。把形成的黃色沉淀物過(guò)濾出來(lái)，用300毫升的乙醇仔細(xì)沖洗沉淀物，常溫下真空干燥至重量不變。
表1中給出的成分分析數(shù)據(jù)是利用成分自動(dòng)分析儀測(cè)量出的。金屬含量利用原子吸附法確定。
表1
生物活性的實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，研究了命名為“Argobiocin 2S”的銀與胱氨酸的絡(luò)合制劑的細(xì)胞毒性和抗病毒活性。
根據(jù)“利用牛胚胎腎細(xì)胞培養(yǎng)物和牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物鑒定藥品的細(xì)胞毒性方法指南”(Колесников等合著，2002)測(cè)定制劑的細(xì)胞毒性。
所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)了3次。按常用的方法(АШмарин等合著，1974)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。
確定制劑對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞毒性 為了測(cè)定制劑對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)物的毒性，利用96孔板微量法培養(yǎng)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物，往細(xì)胞培養(yǎng)物的兩晝夜單層中加入待測(cè)制劑，劑量為10mg/ml；1mg/ml；100μg/ml；10μg/ml；1μg/ml；0.1μg/ml；0.01μg/ml；0.001μg/ml，制劑的每一種稀釋度使用4個(gè)含有細(xì)胞培養(yǎng)物單層的小孔。根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)物單層的變化程度確定制劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用，進(jìn)行3晝夜的觀察。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2
“Argobiocin 2S”制劑的毒性劑量為10mg/ml。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定“Argobiocin 2S”制劑對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物的毒性劑量為10mg/ml，對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物的無(wú)毒性劑量為1mg/ml。
為了測(cè)定制劑的最小細(xì)胞毒性劑量，利用96孔板微量法培養(yǎng)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物，往細(xì)胞培養(yǎng)物的兩晝夜單層中加入待測(cè)制劑，劑量為10；5；2.5；1.25mg/ml，制劑的每一種稀釋度使用4個(gè)含有細(xì)胞培養(yǎng)物單層的小孔。根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)物單層的變化程度確定制劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用，進(jìn)行3晝夜的觀察。實(shí)驗(yàn)重復(fù)了3次。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3
“Argobiocin 2S”制劑對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物最小的細(xì)胞毒性劑量為6.67±1.36mg/ml，最大的無(wú)毒性劑量為3.33±0.68mg/ml。
這就是說(shuō)，“Argobiocin 2S”制劑對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物最大的細(xì)胞毒性劑量為10mg/ml，最小的毒性劑量為6.67±1.36mg/ml；“Argobiocin 2S”對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物的最大的無(wú)毒性劑量為3.33±0.68mg/ml。
檢測(cè)制劑對(duì)于牛病毒性腹瀉病毒的抗病毒活性。方法如下用劑量不低于1～10T DC/cell的病毒感染細(xì)胞培養(yǎng)物的單層，1.5小時(shí)后用不含血清的培養(yǎng)基沖洗，把對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物最大無(wú)毒性劑量的制劑加入進(jìn)去(實(shí)驗(yàn))，或者加入進(jìn)去稀釋的培養(yǎng)基(對(duì)照)，在這樣的生物系統(tǒng)中經(jīng)過(guò)72小時(shí)的病毒培養(yǎng)后測(cè)定培養(yǎng)液的滴度。根據(jù)實(shí)驗(yàn)試樣和對(duì)照試樣的病毒感染活性的不同結(jié)果，計(jì)算出制劑的抗病毒效果(Мейхи編著的病毒學(xué)和方法匯編，1988，和平出版社)。制劑的抗病毒效果用1g TCD50/0.1ml表示病毒滴度的下降。(病毒學(xué)問(wèn)題，Львов等著，1986，No.2)。
與對(duì)照試樣(沒(méi)有加入制劑)比較，制劑降低病毒的感染滴度不少于21g TCD50/0.1ml(降低到原來(lái)的百分之一)，就認(rèn)定制劑有效。每次實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)使用劑量的毒性進(jìn)行了補(bǔ)充檢測(cè)。
測(cè)定病毒的滴度這樣進(jìn)行。利用微量法(Мейхи編著的病毒學(xué)和方法匯編，1988，和平出版社)使用96孔板中的4排以上的含有牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物的孔，測(cè)定牛病毒性腹瀉病毒的感染滴度。病毒的感染滴度用TCD50/0.1ml(50％的組織細(xì)胞感染量)表示。
檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。
表4
根據(jù)所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)確定制劑“Argobiocin 2S”具有抗病毒作用，與對(duì)照試樣比較，將牛病毒性腹瀉病毒的感染活性降低了2.01 1gTCD50/0.1ml。
根據(jù)所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，確定了制劑對(duì)牛胚胎冠狀動(dòng)脈細(xì)胞培養(yǎng)物的無(wú)毒性劑量，利用該細(xì)胞in vitro培養(yǎng)了牛病毒性腹瀉病毒(病毒性腹瀉——牛的粘膜疾病)。該劑量顯示了很強(qiáng)的抗病毒能力，使病毒的感染活性降低到原來(lái)的百分之一。就是說(shuō)，使用本制劑做為抗病毒制劑主要成分，可以制備新的高效藥物，與當(dāng)前使用的、不含金屬離子的藥物相比，具有不同的作用機(jī)理。
權(quán)利要求
1、一種可溶于水、具有抗病毒活性的制劑，該制劑以銀的化合物和胱氨酸為主要成分，成分符合C6H19N4O6S2LiAg2。
2、一種如權(quán)利要求1所述的可溶于水、具有抗病毒活性的制劑的制備方法，其特征在于，在常溫條件下，將下列成分胱氨酸、氫氧化鋰、硝酸銀和氨，按照摩爾比例1∶2∶2∶8進(jìn)行混合合成；先將胱氨酸溶于水中，加入氫氧化鋰使其轉(zhuǎn)變成鋰鹽，再往得到的溶液中添加預(yù)先準(zhǔn)備好的硝酸銀的氨絡(luò)合物，其中所述硝酸銀的氨絡(luò)合物通過(guò)計(jì)算量的硝酸銀溶液和25％的氨的水溶液混合制得；反應(yīng)物在常溫下放置6小時(shí)，然后在40～50℃條件下真空濃縮至原來(lái)體積的1/4，濃縮時(shí)所需產(chǎn)品——黃色的、分散狀的細(xì)小沉淀物劇烈析出；把得到的懸浮液和當(dāng)量體積的乙醇混合，其中乙醇按4等份加入；懸浮液冷卻至+4～+6℃并保持12小時(shí)；將形成的黃色沉淀物過(guò)濾出來(lái)，用乙醇沖洗，常溫下真空干燥至重量不變。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥用化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種新的、可溶于水的、以銀的化合物和胱氨酸為主要成分，成分符合C6H19N4O6S2LiAg2的抗病毒制劑及其制備方法。本發(fā)明的制劑的制備方法包括在常溫條件下，將下列成分胱氨酸、氫氧化鋰、硝酸銀和氨，按摩爾比例1∶2∶2∶8混合合成。反應(yīng)物在常溫下放置6小時(shí)，然后在40～50℃條件下真空濃縮至原來(lái)體積的1/4，往得到的懸浮液中添加當(dāng)量的乙醇，冷卻至+4～+6℃并保持12小時(shí)。把形成的所需產(chǎn)品——黃色的、分散狀的細(xì)小沉淀物過(guò)濾出來(lái)，用乙醇沖洗，在常溫下真空干燥。
文檔編號(hào)A61P31/12GK101304741SQ200680042201
公開(kāi)日2008年11月12日 申請(qǐng)日期2006年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月25日
發(fā)明者瓦西里·瓦西里耶維奇·特列契亞科夫, 弗拉基米爾·尼古拉耶維奇·西利尼科夫, 瓦連京·維克多羅維奇·弗拉索夫, 弗拉基米爾·亞歷山大羅維奇·里赫捷爾, 奧莉加·弗拉基米羅夫娜·特列契亞科娃, 阿納托利·瓦西里耶維奇·庫(kù)爾巴托夫, 亞歷山大·瓦西里耶維奇·奧布霍夫, 尼古拉·格拉西莫維奇·熱瓦切夫斯基, 亞歷山大·謝苗諾維奇·東琴科, 瓦列里·拉夫倫契耶維奇·吉洪諾夫, 娜塔麗婭·弗拉基米羅夫娜·吉洪諾娃, 尼古拉·阿列克謝耶維奇·什基利, 亞歷山大·加弗利洛維奇·格洛托夫, 達(dá)契亞娜·伊萬(wàn)諾夫娜·格洛托娃, 赫拉姆佐夫 維克多·維克多羅維奇· 申請(qǐng)人:瓦西里·瓦西里耶維奇·特列契亞科夫, 弗拉基米爾·尼古拉耶維奇·西利尼科夫, 瓦列里·菲奧羅維奇·庫(kù)拉金, 魯斯捷姆·拉莎托維奇·扎伊努琳, 戰(zhàn) 軍