專利名稱：純化和去除內(nèi)毒素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及純化方法，具體而言涉及從植物提取物中去除內(nèi)毒素的方法。
背景技術(shù)：
近千年來(lái)，已經(jīng)知道植物4^取物的治療用途和其他用途。不斷JL艮的高 新技術(shù)已經(jīng)被應(yīng)用于從草本和其他植物中提:^價(jià)值的物質(zhì)，特別是油。其 產(chǎn)品一M用于口服。
當(dāng)然希望從植物4^取物中去除污染物。US6024998描述了一種用于去除在 飲^植物制品中存在的不需要的親脂性污染物的方法。這些污染物包括殺蟲劑 和^4^生物質(zhì)，這些泰性物質(zhì)一^:^L物生長(zhǎng)過(guò)程中被施用，而且可以在土壤 中積累并^Mt物部分中殘留。
US6024998中描述的方法包含扭所述植物制品與親脂相混合，污染物溶解 于所述親脂相中并由JW^l縮，然后例M過(guò)過(guò)濾去除該親脂相。以這，種方式， 可以保留整個(gè)的植物提取物而去除外源的物質(zhì)。
WO03/101479描述了一種可含有甘菊提取物的治療產(chǎn)品。已表明，當(dāng)通過(guò)注 射(優(yōu)選的方iO給予該產(chǎn)品的時(shí)候，該^1取物可能具有可用于減少炎癥的抗炎性 質(zhì)。
在細(xì)胞壁中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)毒素類型是致熱原，所iiit熱原是注射制劑的不良的組 分。最大調(diào)節(jié)極限-^為75 EU/ml，小于IOO EU/ml的初始目標(biāo)是合適的。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)在已經(jīng)知道，內(nèi)毒素一般是不能被選擇性除去的水溶性物質(zhì)，如果能 被除去的話，也不能通過(guò)US6024998中描述的方法將它們選擇地除去。然而，現(xiàn)在已經(jīng)知道，內(nèi)毒素具有能與親脂物質(zhì)形成復(fù)合物的脂質(zhì)基團(tuán)，并且可以通過(guò) 類似的方法^皮去除。
根據(jù)本發(fā)明，在一種用于純化水性組^ (包含具有脂質(zhì)基團(tuán)的水溶l"生污染 物)的方法中，所述組合物與一種親脂組分接觸，所述親脂組分與所述污染物形
成復(fù)合物；然后是去除比所述復(fù)合物的大小更大的物質(zhì)的第一去除步驟，以及去 除所述復(fù)^的第二去除步驟。
在所述新方法中，所述第二去除步驟-^l^濾，除去與所述親脂組分復(fù)合 的內(nèi)毒素。所述第一忠慮步M，的去除步驟是除去將ia^所i^濾過(guò)程的較
;J^且分所必須的。


圖1A和1B都是;J^呈圖，表示本發(fā)明的實(shí)施方案所涉及的步驟。
具體實(shí)施例方式
在本發(fā)明中使用的親脂組分可以與US6024998中描述的相同。鑒于這樣的 組分可以形成親脂相的相對(duì)較大的液滴(其中溶解了親脂污染物)，本發(fā)明的一個(gè) 特棘于這樣的物質(zhì)還可以與通常水溶的襯(例如內(nèi)毒素)中的脂質(zhì)基團(tuán)復(fù)合； 所述復(fù)合物的大小可以通it^濾除去，而不能通itA以除去所述液滴的微孔過(guò)濾 除去。因此，雖然本發(fā)明中使用的物質(zhì)可能與l^技術(shù)中的那些相同，但是方法 顯然是不同的。
內(nèi)毒素以及抗原主要是具有側(cè)鏈的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)基團(tuán)的碳水化合物；所 述脂質(zhì)基團(tuán)的存在使其足以與合適的親脂物質(zhì)形成復(fù)合物，而不損害所述碳 水化合物分子的通常的水溶性質(zhì)。這些致熱的分子在注射時(shí)可能具有炎癥效 應(yīng)，因此最好盡可能地把它們從注射藥劑中除去。
本發(fā)明特別適合于^^甘菊中去除不需要的組分，用于制備WO03/101479 中描述的藥劑。甘菊植物(西洋甘菊(他"/car/a recw"&))的花頭(頭狀花序 (ca/^7w/W)由兩部分構(gòu)成，即黃色盤狀或管狀花或小花(/7ores ^/6//br邁2's 或'^/62T7on^和白色的放射花或小花(/7ore;y7/^/^&a)。前者特別值得注意。 通過(guò)本發(fā)明，可以通過(guò)以下方式獲得有用的產(chǎn)品把管狀花與甘菊頭/植抹的其 他部分分離，在水中提取所述分離的黃色部分，并且分離所述提取物/去除內(nèi)毒
素。然而，本發(fā)明適用于任何草本或其他的植物制品；這些植物的實(shí)例在 US6024998中給出，其內(nèi)錢過(guò)引用的方式納A^文。
適合于在本發(fā)明中使用的親脂組分也在US6024998中有所記載。該組分 可以源自于動(dòng)物、植物、礦物或是合成的。它優(yōu)選是無(wú)毒的。合適的物質(zhì)的 實(shí)例包括可可脂(cocoa butter)和椰子脂等脂肪；天然油、葵花油和分餾椰 子油等油；硬月旨(stearin)、希蒙得木油(jojoba oil)、蜂蠟、鯨蠟(spermaceti) 和棕櫚蠟(camauba wax)等蠟；石蠟，包括凡士林；脂質(zhì)；以及固醇類 (sterols)。所有這些化合物(不管是單獨(dú)使用還是作為混合物使用)優(yōu)選符 合以下的要求德國(guó)藥典(Deutsches Arzneibuch)、英國(guó)藥典(British Pharmacopoeia)、歐洲藥典(European Pharmacopeia)或美國(guó)食用4匕學(xué)品集(US Food Chemical Codex)。特別優(yōu)選的物質(zhì)是miglyol、甘油二酯、甘油三酯和蓖 麻油。所ii^一種物質(zhì)包括狄油酸，它是一種含極性基團(tuán)的長(zhǎng)MJI旨肪酸的實(shí) 例。
可以被本發(fā)明的純化方法處理的所述水性提取物一般包含多種水溶組 分的多組分混合物。它可以通過(guò)以下方式獲得在所述合適的植物部分中加 入水以獲得懸浮液，所述懸浮液然后通常被加熱至低于水的沸點(diǎn)的溫度(例 如90-94。C)，然后冷卻至室溫。
然后，所述水性提取物經(jīng)過(guò)所述兩個(gè)過(guò)濾步驟。積/f5l作為示例的目的， 下文將分別對(duì)微孔過(guò)濾和超濾進(jìn)行描述。其他的技術(shù)例如親脂屏障的使用也 可能^:合適的。如果需要，每個(gè)過(guò)濾步驟可以分一個(gè)、兩個(gè)或多于兩個(gè)階段 進(jìn)行。
如上文所述，使用微孔過(guò)濾的目的是為了去除那些會(huì)損害所^濾步驟 的效果的物質(zhì)。微孔過(guò)濾確實(shí)可以去除污染物，如US6024998中描述的那樣。 這通常涉及使用具有至少O.l)iin的孔徑的濾器。在隨后的超濾步驟所使用 的孔徑一fel0. 001-O.Olnim,例如最多至O. l|am。
每個(gè)過(guò)濾步驟優(yōu)選通itM分離進(jìn)行，使用玻璃、金屬、陶瓷或合成塑料 等材料制造的合成膜。適用于微孔過(guò)濾的材料包括聚丙烯和聚四氟乙烯 (polytetrafluorethyene)。適用于超濾的材料包括聚醚砜(polyether sulfone)
和再生纖維素。
當(dāng)分離兩種液相的時(shí)候，優(yōu)選通itM技術(shù)的方法i^f亍。為了該目的，優(yōu) 選使用管狀膜或被稱為"錯(cuò)流(cross-flow)"膜的膜。
所述產(chǎn)品擬用于治療中。然后應(yīng)該把它滅菌，并且其合適的生產(chǎn)步驟需 要在無(wú)菌的務(wù)降下進(jìn)行。這些步艱在附圖的圖IB中顯示為19、 21、 23和 26。這種方法示于下文的實(shí)施例1至實(shí)施例5中。實(shí)施例6使用經(jīng)改進(jìn)的方 案^J"本發(fā)明進(jìn)行了闡述。實(shí)施例7至實(shí)施例11作為對(duì)比。
下文報(bào)道的實(shí)驗(yàn)工作表明，過(guò)濾 和加入植物油的聯(lián)^(吏得完全或者 幾乎完全去除了細(xì)菌細(xì)胞壁碎片，它被本領(lǐng)域技術(shù)人員當(dāng)作細(xì)菌性內(nèi)毒素或 致熱原。這些脂多糖或大分子由附著于多糖鏈的脂質(zhì)A部分構(gòu)成，并且是革 蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁的主要組成部分。這些復(fù)合大分子是水溶性的，但是 意外地可與植物油形成高分子復(fù)合物而產(chǎn)生懸浮液，并且可以通過(guò)分子量排 除技術(shù)(優(yōu)選地通過(guò)使用超濾裝置)被阻留。分子量過(guò)濾的微孔過(guò)濾適宜于除 去大片的細(xì)胞壁碎片以及植物材料的粘液細(xì)胞壁片段，否則它們會(huì)堵塞超濾 裝置的孔。
在所述實(shí)施例中獲得的樣品中的細(xì)菌內(nèi)毒素用Cambrex PyroGene測(cè)定進(jìn) 行分析，4吏用1: 10. 000的稀^^數(shù)。
實(shí)施例1和2
將45 g的黃色管狀甘菊花(C力獨(dú)o肌7/a recw〃7a)與900 g的水(Aqua purificata, Ph. Helv.)混合。將該混合液加熱到90*C-94n的溫度保持20-30 分鐘。之后將所述混合液置于室溫下(151C-25。C)直至達(dá)到30匸-35X:的溫 度。
通過(guò)深層過(guò)濾去除藥物殘留。把獲得的粗濾液通過(guò)0.22 jam的膜過(guò)濾使
在所述澄清的濾液中，# 據(jù)^:取物的量加入0. 3°/。(實(shí)施例l)或0.1% (實(shí) 施例2)的蓖麻油(Ph. Eur. Grade)。所述全混合液經(jīng)過(guò)勻漿化處理5分鐘。 該制備的提取物經(jīng)過(guò)0.22 pm的膜進(jìn)行^物回收過(guò)濾(以切線流過(guò)濾模式 (tangential flow mode))。
所述獲得的滲透物經(jīng)過(guò)0.1pm的膜進(jìn)行絲物回收過(guò)濾(以切線流過(guò)濾模 式)。^，所ii^得的滲透物經(jīng)過(guò)1000 kDa的膜進(jìn)行^^回收i^慮(以切線 流過(guò)濾模iO 。
在每種終濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素< 100 EU/ml。
實(shí)施例3-5
除以下改變W卜重復(fù)實(shí)施例1:條提取物的質(zhì)量用0. 3% (實(shí)施例3) 、 1. 0% (實(shí)
施例4)和3. 0% (實(shí)施例5)的mygl iol (Ph. Eur.) ^^絲油加入到澄清后的濾液 中。
在^^終濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素< 100 EU/ml。 實(shí)施例6
該實(shí)施例使用經(jīng)改進(jìn)的方案，其中加熱和^HP步驟不是在高壓滅菌器中而是 在攪拌下的10L雙層容器中進(jìn)行咖熱器的最高溫;ILA 140*C)。
加入miglyol^^代絲油。miglyol^^自股nseler的"非腸胃用的Miglyol 812"。所述^給WE室溫下攪拌10^lf代替勻漿化。
前人的微孔過(guò)濾方法都是用Mi 11 ipore Pel 1 icon 2系統(tǒng)進(jìn)行的。為了更 好地實(shí)施并且為了避免費(fèi)時(shí)的清洗程序，本實(shí)施例中的微孔過(guò)濾用以下設(shè)備 進(jìn)行
過(guò)濾濾器系統(tǒng)Cartouche
0.2 |jm過(guò)濾M川ipore Pellicon 2Durapore 0.2 C-screen
0.1 (jm過(guò)濾單向?yàn)V器Millipack 200， 0.1 nm
1000 kDa過(guò)濾Millipore Pellicon 2Biomax 1000 kDa' V-Screen
0.2 |jm過(guò)濾單向?yàn)V器Millipack 200， 0.2
另外，加入苯酚以穩(wěn)定所述《^取物。加入苯酚的量是6.0-8.0 mg/ml。 在1000 kDa過(guò)濾之后加入它。在加入之后，攪拌所述懸浮液約IO分鐘，直 至所有的苯酚都溶解。
在每個(gè)實(shí)例中所述內(nèi)毒素的水平都是很低的。
實(shí)施例7(對(duì)比實(shí)施例)
除以下改變之外重復(fù)實(shí)施例1:省略最后兩步過(guò)濾步驟。 在所*濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素1917 EU/ml。
實(shí)施例8(對(duì)比實(shí)施例)
除以下改變之外重復(fù)實(shí)施例1:省略最后一步it^慮步驟。 在所iiif濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素1556 EU/ml。實(shí)施例9(對(duì)比實(shí)施例)
除以下改變之外重復(fù)實(shí)施例1:不加入M^油并JJl略最后兩步itj慮步驟。 在所iiif濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素3095 EU/ml。
實(shí)施例IO(對(duì)比實(shí)施例)
除以下改變之外重復(fù)實(shí)施例1:不加入M油并JL^略最后一步i^慮步驟。 在所iiif濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素4839 EU/ml。
實(shí)施例ll(對(duì)比實(shí)施例)
除以下改變O卜重復(fù)實(shí)施例1:不加入M油。 在所i^if濾液中的殘余細(xì)菌內(nèi)毒素2068 EU/ml。
權(quán)利要求
1.一種用于純化水性組合物的方法，所述水性組合物包含含有脂質(zhì)基團(tuán)的水溶性污染物，所述方法包含把所述組合物與一種親脂組分相接觸，所述親脂組分與所述污染物形成復(fù)合物；去除比所述復(fù)合物的大小更大的物質(zhì)的第一去除步驟；以及去除所述復(fù)合物的第二去除步驟。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中所述組合物為植物提取物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述植物提取物為水性提取物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3的方法，其中所述植物為甘菊。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述提取物為flores tubiformis的提取 物。
6. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述水溶性污染物為還含有蛋白 基團(tuán)的碳水化合物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述污染物為內(nèi)毒素。
8. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述親脂組分為油。
9. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述第一去除步驟包括微孔過(guò)濾。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述微孔過(guò)濾使用孔徑為至少O.lum的 過(guò)濾器。
11. 根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述第二去除步驟包括超濾。
全文摘要
一種用于純化水性組合物的方法，所述水性組合物包含有脂質(zhì)基團(tuán)的水溶性污染物，例如內(nèi)毒素，所述方法包含將所述組合物與一種親脂組分相接觸，所述親脂組分與所述污染物形成復(fù)合物；去除比所述復(fù)合物的大小更大的物質(zhì)的第一去除步驟；以及去除所述復(fù)合物的第二去除步驟。
文檔編號(hào)A61K36/28GK101346151SQ200680049183
公開(kāi)日2009年1月14日 申請(qǐng)日期2006年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月15日
發(fā)明者M·H·克瑞特 申請(qǐng)人:韋羅特龍有限公司