專利名稱：：非天然氨基酸及其神經(jīng)降壓肽類似物的制作方法非天然氨基酸及其神經(jīng)降壓肽類似物本專利文件要求2005年12月16日申請的U.S.臨時專利申請系列號60/751,165;2006年6月16日申請的U.S.臨時專利申請系列號60/814,240;和2006年6月16日申請的U.S.臨時專利申請系列號60/814,355的優(yōu)先權(quán)權(quán)益；所有上述文件通過引用合并于此。
背景技術(shù)：
：一些非天然氨基酸(non-naturalaminoacid)對肽的結(jié)構(gòu)和生物活性的影響己得到初步研究。例如，Moore等(Can.J.Biochem.1978，56，315)公開了堿性氨基酸側(cè)鏈長度和倒數(shù)第二位殘基對羧肽酶B1(CPB)水解苯甲酰二肽的影響。將包括高賴氨酸和高精氨酸在內(nèi)的非天然氨基酸引入小的肽鏈中，并測定了CPB催化肽水解的動力學(xué)參數(shù)。此夕卜，Lindeberg等(Int.J.PeptideProteinRes.1977，10，240)公開了l-脫氨-4-L-纈氨酸-8-DL-高賴氨酸-血管加壓素和受保護(hù)的l-脫氨-4-L-8-D-賴氨酸-血管加壓素的合成，其中引入了非天然氨基酸。通過將亞甲基加成到賴氨酸和精氨酸上以分別形成非天然氨基酸高賴氨酸和高精氨酸，由此形成非天然氨基酸。該研究表明具有高賴氨酸和高精氨酸的肽降低了肽的抗利尿活性。由于天然存在的內(nèi)源性肽促進(jìn)和調(diào)節(jié)生物過程的多種活性，因此它們是理想的候選藥物先導(dǎo)物。然而，肽的化學(xué)和生物學(xué)固有屬性也是使得它們成為不佳候選藥物的幾個因素。肽通常發(fā)揮局部效應(yīng)，并在機(jī)體內(nèi)迅速降解。另外，大部分肽不能穿過生物膜，包括小腸和血腦屏障(BBB)。最后，肽通常結(jié)合一種以上的受體或受體亞型，由此很少表現(xiàn)出成功候選藥物所需要的選擇性。因此，要使肽成為成功的候選藥物，就應(yīng)在血液穩(wěn)定性、受體選擇性以及屏障穿透性上有所改進(jìn)，同時不消除其固有的結(jié)合親和性。已開發(fā)了很多作為提高肽穩(wěn)定性方法的策略，包括阻止外肽酶活性的N端修飾和C端修飾、酰胺主鏈修飾和引入構(gòu)象限制以掩飾肽使其不受肽酶降解。其他治療化合物使用旨在改變其整體疏水性的前藥部分，這使得化合物可穿過生物膜。在這種情況下，化合物被內(nèi)源酶裂解成活性組分。盡管這其中的每一策略均已用于改善作為候選藥物的肽，但是尚未發(fā)現(xiàn)形成穩(wěn)定的、具有受體選擇性的、可穿過生物屏障的肽的全面解決方案。因此，本領(lǐng)域需要非天然氨基酸和引入這樣的非天然氨基酸的肽以獲得例如提高診斷或疾病對抗活性的優(yōu)良效果。因此，非天然氨基酸的概念可應(yīng)用于新型肽類藥物的開發(fā)中。這種開發(fā)的一個實例是將該概念應(yīng)用于神經(jīng)肽例如神經(jīng)降壓肽(neurotensin)上。神經(jīng)降壓肽(NT)是主要在腦中發(fā)現(xiàn)的13個氨基酸殘基肽。其具有通過兩種祌經(jīng)降壓肽受體(NTR)NTR-l和NTR-2的結(jié)合和激活呈現(xiàn)出的多功能活性(參見Carraway&Leeman，J.ofBiol.Chem.248:6854(1973))。盡管NT殘基在其C端六個氨基酸序列的全部活性(NH2-Arg(8)-Arg(9)-Pro,-Tyr(11)-Ile(12)-Leu(l3)-COOH，稱為NT[8畫13]，參見Carraway&Leeman，J.Biol.Chem.250:1907(1975))，但由于其在血液中的不穩(wěn)定性和不能穿過血腦屏障和/或腸道屏障，IP給藥或口服時，C端六個氨基酸序列不具有活性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及能夠攜帶正電荷側(cè)鏈的a-脫氨氨基酸化合物(脫氨氨基酸化合物)、其合成、其作為生物活性肽的天然氨基酸部分的替代物的應(yīng)用以及所得到的肽。特別地，a-脫氨精氨酸、賴氨酸和鳥氨酸及其側(cè)鏈被取代和衍生的類似物構(gòu)成了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。這些脫氨氨基酸化合物可取代任何已知的、生物活性肽的精氨酸和/或賴氨酸部分，因此被取代的肽可在取代位置被截短?；蛘撸@些脫氨氨基酸化合物可偶聯(lián)到任何已知的、生物活性肽的N端氨基上以產(chǎn)生延長的肽。由于截短的肽或延長的肽對氨肽酶降解的抗性，它們具有顯著的生物學(xué)選擇性和生物半衰期。在第一個方面中，本發(fā)明涉及具有通式I的非天然脫氨氨基酸化合物12<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中n為0至5的整數(shù)，優(yōu)選2至5;m為零或整數(shù)1;R是H或有機(jī)取代基，如C,-C6直鏈或支鏈垸基，或QrC,8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或CVd8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜源自任意組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自卣素、烷氧基、羧基、酰胺或垸基的取代基任何組合物形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；R,、R2和R3獨立地，為氫或C,-C6支鏈或直鏈垸基、烯基或炔基或C6-C,8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任何組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或CrC,8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)，前提是R、R2和R3中最多選擇兩個為芳香基團(tuán)、取代芳香基團(tuán)、雜芳基團(tuán)或取代雜芳基團(tuán)，只要m是0或l且n是0至5時，R,、R2和R3不全是H;如果R處的取代基是有機(jī)取代基時，Ca為具有R或S立體化學(xué)的碳原子；或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、垸基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合。在第二個方面中，本發(fā)明涉及通式II的非天然脫氨氨基酸化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>(II)其中n為0至6的整數(shù)，優(yōu)選2至5;虛線a不存在時，X和Y獨立地為氫或Cl-C6低級支鏈或直鏈烷基、烯基或炔基；虛線a存在時，X-Y是(CH2)z，其中z為l-8的整數(shù)，優(yōu)選2至4;R是H或有機(jī)取代基，如CrQ直鏈或支鏈烷基，或Q-C,8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或垸基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或Q-C,8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子任意組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；R4為氫或C,-C6低級支鏈或直鏈垸基、烯基或炔基，或C6-C,8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、垸氧基、羧基、酰胺或垸基的取代基以任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或C4-Cw且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)，和；C。為碳原子，并且如果R處的取代基是有機(jī)取代基時，C。處的立體化學(xué)為R或S;或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、垸基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合。本發(fā)明的第三個方面涉及通式III的非天然脫氨氨基酸化合物X——YNR7HOOC—Cb—RH(III)其中n為0至5的整數(shù)，優(yōu)選2至5;X-Y是(CH2)z，其中z為0至6的整數(shù)，優(yōu)選2至4;R是H或有機(jī)取代基，如d-C6直鏈或支鏈烷基，或QrQ8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或CrC,8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子任意組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；R6和R7獨立地，為氫或C,-C6低級支鏈或直鏈烷基、烯基或炔基，或C6-ds芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或C4-C18i—個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；和C。為碳原子，并且如果R處的取代基是有機(jī)取代基時，Cu處的立體化學(xué)為R或S;或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、烷基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合。本發(fā)明的第四個方面涉及通式IV的非天然脫氨氨基酸化合物15jCH2)nHOOC—Ca—RH(IV)其中n為0至5的整數(shù)，優(yōu)選2至4;R是H或有機(jī)取代基，如C,-C6直鏈或支鏈垸基，或C6-C,8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或CrC,8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子任意組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、垸氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；R9、Rk)和Rh獨立地，為氫或C,-C6低級支鏈或直鏈烷基、烯基或炔基，或Qrd8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或垸基的取代基以任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或C4-C18且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、垸氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)，前提是R9、Ru)和Ru中最多選擇兩個為芳香基團(tuán)、取代芳香基團(tuán)、雜芳基團(tuán)或取代雜芳基團(tuán)；和Ca為碳原子，并且如果R處的取代基是有機(jī)取代基時，Ca處的立體化學(xué)為R或S;或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、垸基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合。本發(fā)明的第五個方面涉及通式V的非天然脫氨氨基酸化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>n為0至5的整數(shù)，優(yōu)選2至4;R是H或有機(jī)取代基，如d-C6直鏈或支鏈垸基，或C6-C,8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或CrC,8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子任意組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或垸基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；Rl2、Rn和R,4獨立地，為氫或CrC6低級支鏈或直鏈烷基、烯基或炔基，或C6-d8芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或CVd8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)，前提是R,2、1113和1114中最多選擇兩個為芳香基團(tuán)、取代芳香基團(tuán)、雜芳基團(tuán)或取代雜芳基團(tuán)；和C。為碳原子，并且如果R處的取代基是有機(jī)取代基時，C。處的立體化學(xué)為R或S;或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、烷基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合。本發(fā)明另一方面涉及將本發(fā)明的非天然脫氨氨基酸化合物添加至生物活性肽的N端氨基基團(tuán)，或取代生物活性肽的天然存在的同源氨基酸部分。優(yōu)選的同源部分包括精氨酸和/或賴氨酸。添加到己知的生物活性肽的N端氨基基團(tuán)可提供延長肽，該肽具有與已知的生物活性肽相同類型的選擇性、長期持續(xù)的生物活性。添加可通過將酸和胺基團(tuán)偶聯(lián)在一起形成酰胺鍵的已知方法來完成，包括?；B氮偶聯(lián)、碳二亞胺偶聯(lián)、酸性離子交換樹脂、三氨基硼烷和酶偶聯(lián)的使用。優(yōu)選的方法涉及在促進(jìn)肽鍵形成的條件下使用氨基外肽酶。在本發(fā)明的某些實施方案中，可通過非天然氨基酸化合物取代NT(8-13)的N端精氨酸殘基產(chǎn)生半合成肽，例如，ABS205、ABS207、ABS208、ABS210、ABS211、ABS212、ABS220、ABS225、ABS226、ABS227、ABS228、ABS230、ABS232、ABS234或ABS239。延長肽的基礎(chǔ)肽的優(yōu)選實施方案包括可用于治療或預(yù)防疾患的生物活性肽。優(yōu)選的種類和實例的列表包括在下文中。一些優(yōu)選的種類包括但不限于轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞受體的配體、激素和胞外結(jié)合肽。一些優(yōu)選的實例包括但不限于腦啡肽(enkephlin)、LHRH和類似物、神經(jīng)肽、糖腸降血糖素(glycoincretin)、整聯(lián)蛋白和類似物、胰高血糖素和胰高血糖素樣肽、抗凝血肽、細(xì)胞因子和白細(xì)胞介素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、干擾素、內(nèi)皮縮血管肽、利尿鈉激素、胞外激酶配體、血管緊張素酶抑制劑、肽抗病毒化合物、凝血酶、P物質(zhì)、G物質(zhì)、生長激素、生長激素抑制素、GnRH和類似物、促胰液素、緩激肽、血管加壓素和類似物、胰島素及其類似物、生長因子等等。通過將基礎(chǔ)肽的N端氨基基團(tuán)偶聯(lián)到本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物的羧基基團(tuán)上形成延長肽。用脫氨氨基酸部分取代生物活性肽的精氨酸或賴氨酸部分可以提供具有選擇性、長期持續(xù)的生物活性的截短肽。在其氨基酸序列中具有精氨酸和/或賴氨酸部分的任何己知的生物活性肽可以作為相應(yīng)的截短肽的基礎(chǔ)。從該ARG或LYS部分開始，截短肽具有與己知的生物活性肽相同的下游序列，但是沒有上游序列。此外，該ARG或LYS部分可以換成脫氨氨基酸部分，由此提供截短肽。幾種已知的生物活性肽可以為倒數(shù)第二步形成的在前肽或前體裂解位置具有精氨酸或賴氨酸部分的前肽形式，或者為形成的在可裂解而提供活性截短肽的位置含有精氨酸或賴氨酸部分的最終肽形式。胰蛋白酶是專門針對這類裂解位點的酶。實例包括胰高血糖素樣肽、神經(jīng)降壓肽、胰島素原和凝血酶。用脫氨氨基酸化合物取代精氨酸或賴氨酸部分的這些實例的截短形式可以提供具有選擇性、長期持續(xù)的生物活性。本發(fā)明的再一方面包括脫氨氨基酸化合物、延長肽或截短肽及其組合的藥物組合物和化妝品組合物。包括藥物組合物的單元劑型(Unitdosageform)和生物有效制劑。化妝品制劑包括合適的油、霜、蠟或水基化妝品載體。本發(fā)明的另一個方面包括使用本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物和/或添加或截短的肽來篩選、診斷和治療的方法。本發(fā)明的一個實施方案是具有脫氨氨基酸作為其N端氨基酸部分的截短神經(jīng)降壓肽。本發(fā)明還提供了在此公開的用于制備本發(fā)明化合物的方法和中間體，本發(fā)明的化合物如通式I、II、III、IV和/或V的化合物和含有這些化合物的肽。這其中的一類中間體包括通式I、II、m和iv的N受保護(hù)或羧基受保護(hù)或N和羧基均受保護(hù)的化合物。這些受保護(hù)的中間體將在本申請的以下部分中詳細(xì)描述。這其中的另一類中間體包括通式I、II、III和IV化合物的羧酸鹽、這些化合物的有機(jī)酸胺鹽或無機(jī)酸胺鹽和復(fù)鹽(羧酸鹽、胺鹽)。本發(fā)明中的定義除非上下文明確另外指出，否則說明書和所附權(quán)利要求書中所使用的單數(shù)形式"一種"、"一個"和"所述的(the)"包括復(fù)數(shù)指代對象。除非另有指明，否則通篇申請中的變量，如R,-R3、n、z、X、Y、C。和Cp與在此所定義的變量相同。本申請所使用的術(shù)語"烷基"指具有1至24個碳原子的支鏈或直鏈飽和烴基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基等。本申請優(yōu)選的烷基基團(tuán)含有1至6個碳原子。本申請所使用的術(shù)語"烯基"指具有2至24個碳原子且結(jié)構(gòu)式含碳碳雙鍵的烴基，在此類別中優(yōu)選的基團(tuán)含有2至6個碳原子。本申請所使用的術(shù)語"炔基"指具有2至24個碳原子且結(jié)構(gòu)式含碳碳三鍵的烴基，在此類別中優(yōu)選的基團(tuán)含有2至6個碳原子。除非另有定義，本申請中所使用的術(shù)語"低級(lower)",尤其是指烷基、烯基和炔基時，指具有1至6個碳原子，優(yōu)選具有1至4個19碳原子，更優(yōu)選具有1至2個碳原子的部分。本申請所提供的術(shù)語"垸化劑"為具有結(jié)構(gòu)式RX的化合物，其中R為上述烷基、烯基或炔基基團(tuán)，X優(yōu)選為鹵素，例如氯、溴或碘。本申請所使用的術(shù)語"非天然氨基酸"指為天然氨基酸的同源物的有機(jī)化合物，這是由于它具有與天然氨基酸相似的結(jié)構(gòu)，因此它可模擬天然氨基酸的結(jié)構(gòu)和反應(yīng)性。非天然氨基酸取代肽的天然氨基酸單位或通過其他方式摻入肽時，本申請所定義的非天然氨基酸一般會提高或增強(qiáng)肽的性質(zhì)(如選擇性、穩(wěn)定性)。本申請所使用的術(shù)語"肽"指一類由化學(xué)鍵合在一起的氨基酸組成的化合物。一般而言，氨基酸通過酰胺鍵(-CONH-)化學(xué)鍵合在一起；但是氨基酸可通過本領(lǐng)域已知的其他化學(xué)鍵合在一起。例如，氨基酸可通過胺鍵鍵合。本申請所使用的肽包括氨基酸的低聚物以及小肽和大肽，包括多肽。本申請所使用的術(shù)語"活性"指生物活性。本申請所使用的術(shù)語"藥理活性"指肽或多肽的固有物理性質(zhì)。這些性質(zhì)包括但不限于半衰期、溶解性和穩(wěn)定性以及其他藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)。本申請所使用的術(shù)語"有機(jī)酸鹽"指胺基團(tuán)與烷基或芳基C,-C9羧酸、磺酸或磷酸的鹽形式。本申請所使用的術(shù)語"無機(jī)酸鹽"指胺基團(tuán)與無機(jī)酸，例如鹽酸、硫酸、磺酸、磷酸、硝酸、亞硝酸或氫溴酸的鹽形式。本申請所使用的術(shù)語"C6至Ci8芳族"指例如苯基、萘基、蒽基的芳族烴或者例如苯甲基、苯乙基或萘亞甲基的芳烷烴。本申請所使用的術(shù)語"C4至C,8且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子任意組合形式的雜芳族"指含有一個或兩個雜原子的雜芳烴或烷基雜芳烴，例如噻吩基、呋喃基、吡咯基、氮雜噻吩基、氮雜呋喃基、吡啶基、硫代吡啶基、吡嗪基、亞甲基吡啶基、亞乙基吡啶基、亞甲基吡咯基等。與立體化學(xué)相關(guān)的術(shù)語"R"或"S"具有通常的意思，指明選定碳的光學(xué)異構(gòu)。該內(nèi)容范圍中的R不應(yīng)當(dāng)與作為取代基的R相混淆。本申請中所使用的化學(xué)術(shù)語、藥物學(xué)術(shù)語和生物學(xué)術(shù)語沿用本領(lǐng)域的技術(shù)人員例如博士研究員認(rèn)為應(yīng)該屬于它們的常用含義和習(xí)慣含義。這些含義可參見恰當(dāng)?shù)募夹g(shù)辭典和規(guī)定，例如但不限于，"Hawley'sCondensedChemicalDictionary",IIth版，SaxandLewis編輯，VanNostrandReinholdPublishing,NewYork,NY1987;"ConciseChemicalandTechnicalDictionary",4th擴(kuò)大版。Bennett編輯，ChemicalPublishingInc.,NewYork,NY，1986，"TheMerckIndex"11th及隨后的版本，Merck&Co.Rahway，NJ1989禾口更新的，"AdvancedOrganicChemistry"4th版，J.March,WileyInterscience，NewYork,NY1992;"ConciseDictionaryofBiomedicineandMolecularBiology",Pei-ShowJuo編輯，CRCPress,NewYork,NY1996;"MolecularCellBiology",Darnell,Lodish，Baltimore,ScientificAmericanBooks,NewYork,NY1986;將所有這些辭典和規(guī)定的公開內(nèi)容通過引用合并于此。圖l.NT(8-13)，中間體NT類似物和ABS201的結(jié)構(gòu)比較。圖2.通式I-V的化合物的代表性實例。圖3A-3C.通式I-V化合物的合成方案。圖4.w-溴酸的不對稱合成。圖5.亞乙基橋連的(NS至N")精氨酸類似物的合成。圖6.環(huán)狀和非環(huán)狀烷基精氨酸類似物的合成。圖7.本發(fā)明的代表性肽的肽合成。圖8A-8C.ct-甲基NT(8-13)類似物所引起的低體溫的比較。圖9.各自2mg/kg和20mg/kg的IP(實心符號)和口服(空心符號)后ABS201的低體溫效應(yīng)。圖10A-10B.IP和口服KH29(10A)和KH30(脂)后低體溫效應(yīng)的比較。圖11A-11B.IP給藥后ABS201的劑量-應(yīng)答曲線。圖12.口服后對ABS201的劑量依賴性低體溫反應(yīng)。圖13.IP給藥ABS201后d-苯異丙胺所引起的過興奮的衰減。圖14.口服ABS201后d-苯異丙胺所引起的過興奮的衰減。圖15.Brattleboro大鼠中口服ABS201引起的PPI逆轉(zhuǎn)。圖16.ABS201和氟哌啶醇對全身僵硬癥的影響。圖17.每日5mg/kg劑量ABS201后，長期給藥ABS201的低體溫效應(yīng)。圖18.每日5mg/kg劑量ABS201后，每天重復(fù)給藥ABS201對d-苯異丙胺所引起的過度運(yùn)動的影響。圖19.Fmoc-脯氨酸-OH+的合成。圖20.靜脈內(nèi)給藥5mg/kg游離堿的ABS201'TFA后，雄性SD大鼠中的血液濃度-時間曲線(n=3)。圖21.口服50mg/kg游離堿的ABS201*TFA后，雄性SD大鼠中的血液濃度-時間曲線(n=3)。圖22.靜脈內(nèi)給藥100mg/kg游離堿的ABS201*TFA后，雄性SD大鼠中的血漿和腦濃度-時間曲線(n=3)。圖23.GI道內(nèi)ABS201吸收部位的比較。圖24.ABS201(5mg/kg)和嗎啡(5mg/kg)的抗疼痛活性。圖25.每日給藥5mg/kgABS201，持續(xù)5天，通過MPE測定的大鼠中ABS耐受性的評價。圖26.NT[8-13〗和肽ABS1、ABS13、ABS201、ABS15、ABS16、ABS17和ABS19的結(jié)構(gòu)，其呈現(xiàn)出提高的NTR-2與NTR-1的結(jié)合親和性。圖27.設(shè)計為更好的NTR-2選擇性配體的肽結(jié)構(gòu)。圖28.通過管飼20mg/kg劑量給藥(A)ABS201、(B)ABS205、(C)ABS210、(D)ABS212和(E)ABS220的止痛效果。圖29.通過管飼20mg/kg劑量給藥(A)ABS232禾卩(B)ABS239的止痛效果。圖30.使用hotplate測試測定的ABS212止痛效果。ABS212(10mg/kg)和嗎啡(5mg/kg)的止痛效果比較(A);通過LR注射(B)或口服(C)給藥的ABS212的劑量應(yīng)答數(shù)據(jù)。圖31.使用福爾馬林測試測定的ABS212止痛效果。ABS212"0mg/kg)和嗎啡(5mg/kg)的止痛效果比較(A);通過I.P.注射(B)或口服(C)給藥的ABS212的劑量應(yīng)答數(shù)據(jù)。圖32.在尾巴彈開測試(tailflickassay)中測定I.P.(A)給藥和口服(B)ABS212的劑量應(yīng)答數(shù)據(jù)。圖33.使用神經(jīng)痛的Chimg模型測定I.P.注射給藥的ABS212的效果。圖34.靜脈內(nèi)給藥5mg/kg游離堿劑量的ABS212'2HC1(A)和口服50mg/kg游離堿劑量的ABS212'2HC1(B)后，雄性SD大鼠中的濃度-時間曲線，(n=3)。具體實施例方式本發(fā)明涉及一些脫氨氨基酸化合物、其作為添加物或同源物在己知的生物活性肽中的摻入，以及該化合物和肽在醫(yī)療診斷、治療和篩選中的用途。本發(fā)明的幾個方面涉及該脫氨氨基酸化合物對天然氨基酸精氨酸和/或賴氨酸的模擬。通過將其用作己知的生物活性肽中這些天然氨基酸部分的同源物，可制備這些肽的截短形式，其中其生物活性比已知肽的生物活性更具有選擇性并且持續(xù)時間更長。通過將其用作延長物，其作為已知的生物活性肽的N端部分加合物的位置也可提供比已知肽的生物活性持續(xù)時間更長的生物活性。本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物用于截短肽的一個實例為神經(jīng)降壓肽。神經(jīng)降壓肽(NT)是具有神經(jīng)學(xué)性質(zhì)的13個氨基酸肽。產(chǎn)生截短神經(jīng)降壓肽(8-13)的AA7處的裂解可提供具有選擇性的生物活性的肽。根據(jù)本發(fā)明，將AA8精氨酸轉(zhuǎn)化為脫氨氨基酸化合物部分同樣可產(chǎn)生具有顯著的和選擇性的生物活性的肽。NT和該轉(zhuǎn)化形式的實例示于圖1中。本發(fā)明的生物活性肽具有脫氨氨基酸部分作為其N端部分。這些肽具有生物活性氨基酸的已知氨基酸序列，其中所述脫氨氨基酸既可以通過酰胺鍵與已知肽的N端氨基共價偶聯(lián)(延長肽)，也可以取代肽中的相應(yīng)同源部分(類似的天然氨基酸部分)(截短形式)。在另一種情況下，該肽在取代位置被截短使得該脫氨氨基酸部分成為新的N端，而該位置上游的氨基酸殘基不再是該序列的一部分(截短肽)。延長肽和截短肽在體內(nèi)具有更長的壽命，并且具有與那些天然肽類似的生物活性，所不同的是該活性更具有選擇性。本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物的一方面由上述通式I提供。通式I23的優(yōu)選實施方案包括那些化合物，其中Rl、R2和R3獨立地，為氫或d-C5低級支鏈或直鏈垸基，更優(yōu)選氫或甲基，只要m是O或l且n為1至5時，R,、R2和R3不全是H。在另一個實施方案中，n是4。在進(jìn)一步的實施方案中，R是H、甲基、乙基或丙基。其他優(yōu)選的實施方案包括其中R是H、甲基、乙基、丙基或丁基以及a)n是4，m是0，R,是氫，112是甲基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;b)n是4，m是l，R,和R2是甲基，113是氫或甲基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;c)n是4，m是l，R,是甲基，&和113是氫，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;d)n是4，m是l，R,、112和113是氫，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;e)n是3，m是0，&和112是甲基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C,的立體化學(xué)是R或S;f)n是3，m是0，Ri和R2是乙基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，。的立體化學(xué)是R或S;g)n是3，m是0，R,和R2是丙基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;h)n是3，m是0，R,和R2是丁基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;i)n是2，m是0，R,和R2是甲基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，。的立體化學(xué)是R或j)n是2，m是O，R,和R2是乙基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;k)n是2，m是0，R,和R2是丙基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;1)n是2，m是0，R,和R2是丁基，通式I的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S。上述優(yōu)選實施方案a-l任一的酯或鹽也是優(yōu)選的。本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物的另一方面由上述通式II來闡述。通式II的優(yōu)選實施方案包括其中n為3且虛線不存在的那些。其他優(yōu)選實施方案包括其中X是氫并且其中Y和&是相同低級支鏈或直鏈烷基的那些。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R4和Rs獨立地，是氫或甲基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，虛線不存在，X是氫或d-Cs低級支鏈或直鏈烷基，優(yōu)選甲基或乙基，且Y是氫或d-C5低級支鏈或直鏈烷基，優(yōu)選甲基，或虛線存在，并且z是2，并優(yōu)選n是3。其他優(yōu)選的實施方案包括其中R是H、甲基、乙基、丙基或丁基以及a)n為3，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是氫，X是氫，Y是甲基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;b)n為3，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是甲基，X是氫，Y是甲基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;c)n為3，虛線存在，通式II的化合物是酸，z是2，&是氫，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;d)n為3，虛線存在，通式II的化合物是酸，z是2，R4是甲基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是25R或S;e)n為3，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是氫，X是甲基，Y是氫，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;f)n為3，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是氫，X是乙基，Y是氫，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;g)n為2，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是氫，X是氫，Y是甲基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是r或S;h)n為2，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是甲基，X是氫，Y是丙基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;i)n為4，虛線存在，通式II的化合物是酸，z是2，R4是氫，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;j)n為3，虛線存在，通式II的化合物是酸，z是2，R4是甲基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;k)n為2，虛線存在，通式II的化合物是酸，z是3，R4是甲基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;1)n為3，虛線不存在，通式II的化合物是酸，R4是甲基，X是氫，Y是乙基，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S。上述優(yōu)選實施方案a-l任一的酯或鹽也是優(yōu)選的。本發(fā)明的脫氨氨基酸的第三個方面通過通式III來說明。通式III的優(yōu)選實施方案包括其中R^和R7獨立地，是氫或d-C5低級烷基或直鏈烷基，優(yōu)選氫或甲基，更優(yōu)選全部是氫。在另一個實施方案中，z是2或3，優(yōu)選3。在優(yōu)選的實施方案中，n是3。其他優(yōu)選的實施方案包括其中R是H、甲基、乙基、丙基或丁基以及a)n是3，z是2，116和117是氫，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;b)n是3，z是3，R6和R7是氫，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;c)n是2，z是2，R6和R7是氫，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;d)n是4，z是2，R6和R7是氫，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;e)n是2，z是3，R6和R是氫，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;f)n是4，z是3，R6和R7是氫，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;g)n是2，z是2，R6和R7是甲基，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;h)n是4，z是2，R^和Rr是甲基，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;i)n是2，z是3，R^和R7是甲基，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;j)n是4，z是3，R6和R7是甲基，通式III的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S。上述優(yōu)選實施方案a-j任一的酯或鹽也是優(yōu)選的。本發(fā)明的第四個方面由通式IV的脫氨氨基酸化合物來提供。通式IV的化合物的優(yōu)選實施方案包括其中R9、R,。和Rn獨立地，是氫或C,-C5低級直鏈或支鏈垸基，優(yōu)選氫、甲基或乙基。在另一個實施方案中，Rh)是甲基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R9是H，Ru)是甲基，Rn是氫，并且n為3。其他優(yōu)選的實施方案包括其中R是H、甲基、乙基、丙基或丁基以及a)n是3，119和11是氫，Ru)是甲基，通式IV的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;b)n是3，119是氫，Rh)和R，,是甲基，通式IV的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;c)n是3，R9是氫，Rk)是甲基，Rh是乙基，通式IV的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;d)n是2，R9和Rn是氫，R,o是甲基，通式IV的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C',的立體化學(xué)是R或S;e)n是2，119是氫，R,o和Rh是甲基，通式IV的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;f)n是4，R9是氫，Ru)是甲基，Ru是乙基，通式IV的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S。上述優(yōu)選實施方案a-f任一的酯或鹽也是優(yōu)選的。本發(fā)明的第五個方面由通式V的脫氨氨基酸化合物來提供。通式V的化合物的優(yōu)選實施方案包括其中R12、Rn和R，4獨立地，是氫或C廣C5低級直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選氫、甲基或乙基。在另一個實施方案中，R,2是甲基。在另一個優(yōu)選的實施方案中，Rn可以是氫，1114可以是甲基、乙基或丙基，1113和1114可以是氫、甲基、乙基或丙基的任意組合，并且n為2或3。其他優(yōu)選的實施方案包括其中R是H、甲基、乙基、丙基或丁基以及a)n是3，Ri2和R,3是氫，Rm是甲基，通式V的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;b)n是3，R,2是甲基，R^和R,4是甲基，通式V的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，Cu的立體化學(xué)是R或S;c)n是3，R2是甲基，R，3是甲基，R"是乙基，通式V的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;d)n是2，R,2是甲基，Ru是氫，并且R,4是甲基，通式V的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;e)n是2，R,2是甲基，Ru和R"是甲基，通式V的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S;f)n是4，R,2是甲基，R,3是甲基，Rw是乙基，通式V的化合物是酸，并且如果R處的取代基是甲基、乙基、丙基或丁基，C。的立體化學(xué)是R或S。上述優(yōu)選實施方案a-f任一的酯或鹽也是優(yōu)選的。本發(fā)明特別優(yōu)選的非天然脫氨氨基酸化合物包括圖2中提供的通式，其中R是H、甲基或乙基。本發(fā)明的某些實施方案提供了本發(fā)明受保護(hù)的中間體和受保護(hù)的非天然氨基酸。某些實施方案提供了本發(fā)明受保護(hù)的中間體和受保護(hù)的非天然氨基酸，其中側(cè)鏈氨基受到防止氨基不利反應(yīng)，并且可通過不引起氨基斷裂的化學(xué)方法除去的保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)。某些實施方案提供了本發(fā)明受保護(hù)的中間體和受保護(hù)的非天然氨基酸，其中側(cè)鏈羧基受到防止羧基不利反應(yīng)，并且可通過不引起羧基斷裂的化學(xué)方法除去的保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)。在某些的實施方案中，保護(hù)基團(tuán)為叔丁基羰基(BOC)或芴甲氧羰基(FMOC)。在某些的實施方案中，保護(hù)基團(tuán)為BOC、FMOC、Alloc(烯丙氧羰基)、CBZ(苯甲氧羰基)、Pbf(2,2,4,6,7-五甲氧基二氫苯并呋喃-5-磺?；?、N02(硝基)、Pmc(2,2,5,7,8-五甲氧苯并二氫吡喃-6-磺?；?、Mtr(4-甲氧基-2,3，6-三甲基苯磺酰基)或Tos(甲苯磺?；?。在一個實施方案中，通式I-V的非天然脫氨氨基酸的結(jié)構(gòu)與天然存在的氨基酸賴氨酸、精氨酸以及天然存在的谷氨酰胺生物合成中間體鳥氨酸的結(jié)構(gòu)相似。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物在下述29方面不同于相應(yīng)的天然氨基酸在(i)與肽中相鄰氨基酸單位形成N端鍵的羧基端，(ii)取代a氨基基團(tuán)的a-H或垸基基團(tuán)，禾B(iii)取代胺側(cè)鏈的有機(jī)基團(tuán)之間有更長或更短的亞甲基橋接，也包括其他區(qū)別(/"fera/Za)。優(yōu)選地，本發(fā)明延長的橋與天然氨基酸橋相比長一個碳或短一個碳(即，homo-或des-形式)。在其他的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的化合物與相當(dāng)?shù)奶烊话被嵯啾龋哂懈L的、更短的或者等長的亞甲基橋接，并且在多個部分有取代，形成不同部分，或?qū)⒉糠诌B接形成環(huán)結(jié)構(gòu)，也包括其他區(qū)別(/^^/&)。本發(fā)明的每一種化合物均可制備成酸、酰胺、鹽或酯。在水中，本發(fā)明的非天然氨基酸將是帶電荷的；但是，在細(xì)胞的細(xì)胞膜和其他非極性區(qū)域，該非天然氨基酸可不帶電荷。在一個實施方案中，本發(fā)明的非天然氨基酸的酯基團(tuán)為甲基、乙基、叔丁基、苯甲基或烯丙基。在另一個實施方案中，非天然氨基酸的鹽的反荷離子為鈉、鉀、銨和四烷基銨。本發(fā)明的一些實施方案提供了含有本發(fā)明的非天然氨基酸化合物的半合成肽。在一些實施方案中，該半合成肽含有非天然氨基酸化合物作為其N端部分。在一些實施方案中，該半合成肽含有非天然氨基酸化合物作為半合成神經(jīng)降壓肽(8-13)的N端部分。在一個實施方案中，半合成肽是ABS201、ABS202、ABS205、ABS207、ABS208、ABS210、ABS211、ABS212、ABS220、ABS225、ABS226、ABS227、ABS228、ABS230、ABS232、ABS234或ABS239。在一些實施方案中，與具有不包含取代的非天然氨基酸化合物作為其N端部分的半合成肽的相同序列的肽比較，所述半合成肽在體內(nèi)具有更長的半衰期。在一些實施方案中，半合成肽具有止痛和/或安定活性。具有安定和/或止痛活性的半合成肽實例顯示于下表中。表l-具有安定特征的半合成肽<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>*"tLeu"或"t-Leu"意思是叔-Leu(feW-Leu)。序列中的數(shù)字或術(shù)語"L-hLys"表示非天然氨基酸部分，其結(jié)構(gòu)顯示于圖7中或結(jié)構(gòu)示意圖1或2中。表2-具有止痛特征的半合成肽<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>*序列中的字母"X"表示非天然氨基酸部分，其結(jié)構(gòu)顯示于圖26中。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>ABS229HLys-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS230H4-Arg-Pro-Tyr-《Leu-Leu示意圖3ABS231H5-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS232H6-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS233HOrn-Arg-Pro-Tyr-,Leu-Leu示意圖3ABS234H7-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS235H8-Arg-Pro-Tyr-丄eu-Leu示意圖3ABS236H9-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS237HArg-Arg-Pro-Tyr-/Leu-Leu示意圖3ABS238H10-Arg-Pro-Tyr-/Leu-Leu示意圖3ABS239H11-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS240H〗2-Arg-Pro-Tyr-fLeu-Leu示意圖3ABS241H13-Arg-Pro-Tyr-,Leu-Leu示意圖3ABS242H18-Arg-Pro-Tyr-/Leu-Leu示意圖3ABS243H19-Arg-Pro-Tyr-/Leu-Leu示意圖3ABS244H15-Arg-Pro-Tyr-《Leu-Leu示意圖3ABS245H16-Arg-Pro'-Tyr-/Leu-Leu示意圖3ABS246H17-Arg-Pro-Tyr-rfLeu-Leu示意圖3*"tLeu"禾CI"t-Leu"意思是叔-Leu(feW-Leu)。序列中的數(shù)字或術(shù)語"L-hLys"表示非天然氨基酸部分，其結(jié)構(gòu)顯示于示意圖3中。本發(fā)明的某些實施方案提供了含有本發(fā)明的肽和藥物載體的藥物組合物。在一些實施方案中，該肽以單元劑型存在。本發(fā)明的某些實施方案提供了含有本發(fā)明的非天然氨基酸化合物和化妝品基質(zhì)制劑的化妝品制劑。本發(fā)明的某些實施方案提供了含有本發(fā)明的半合成肽和化妝品基質(zhì)制劑的化妝品制劑。在某些實施方案中，該化妝品基質(zhì)制劑為水性基質(zhì)或油性基質(zhì)。本發(fā)明的某些實施方案提供了用于醫(yī)療中的本發(fā)明的非天然氨基酸化合物。本發(fā)明的某些實施方案提供了本發(fā)明的非天然氨基酸化合物在制備用于治療哺乳動物的精神病的藥劑中的用途。本發(fā)明的某些實施方案提供了本發(fā)明的半合成肽在制備用于治療哺乳動物的精神病的藥劑33中的用途。在某些實施方案中，該精神病是精神分裂癥。本發(fā)明的某些實施方案提供了本發(fā)明的化合物在制備用于治療哺乳動物的癌癥、肥胖癥、帕金森病或精神興奮藥(psychostimulatn)濫用的藥劑中的用途。本發(fā)明的某些實施方案提供了本發(fā)明的化合物在制備用于治療哺乳動物的疼痛的藥劑中的用途。本發(fā)明的某些實施方案提供了本發(fā)明的半合成肽用于醫(yī)療中。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種降低患者體溫的方法，包括將有效量的本發(fā)明的半合成肽給藥于患者以降低患者的體溫。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種降低患者體溫的方法，包括將有效量的本發(fā)明的組合物給藥于患者以降低患者的低溫。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療精神病患者的方法，包括將有效量的本發(fā)明的肽給藥于患者以治療精神病。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療精神病患者的方法，包括將有效量的本發(fā)明的組合物給藥于患者以治療精神病。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療癌癥的方法，包括將有效量的本發(fā)明的肽給藥于患者以治療癌癥。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療癌癥的方法，包括將有效量的本發(fā)明的組合物給藥于患者以治療癌癥。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療疼痛的方法，包括將有效量的本發(fā)明的肽給藥于患者以治療疼痛。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療疼痛的方法，包括將有效量的本發(fā)明的組合物給藥于患者以治療疼痛。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種就某種活性篩選含有非天然氨基酸化合物的肽的方法，包括如下步驟a)測量具有已知氨基酸序列的第一種肽的生物活性；以及b)測量本發(fā)明的任何一種半合成肽的相同生物活性，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。在本發(fā)明的某些實施方案中，該生物活性為凋亡(poptosis)，凋亡(apoptosis)、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、配體結(jié)合、轉(zhuǎn)錄、翻譯、代謝、細(xì)胞生長、細(xì)胞分化、穩(wěn)態(tài)、半衰期、溶解性或穩(wěn)定性。在本發(fā)明的某些實施方案中，該生物活性包括對半合成肽穿過生物屏障的能力的直接或間接評估。在本發(fā)明的一些實施方案中，該生物活性為選擇性。本發(fā)明的某些實施方案提供了治療患有受到給予己知的第一種肽影響的疾病的患者的方法，包括將本發(fā)明的半合成肽給藥于所述患者，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種提高已知的第一種肽穿過患者的生物屏障的方法，包括置換為本發(fā)明的半合成肽，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。在特定的實施方案中，該屏障包括血腦屏障、細(xì)胞膜、腸上皮、皮膚或血眼屏障。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種提高已知肽的選擇性的方法，包括將所述已知肽置換為本發(fā)明的半合成肽，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種提高已知肽抵抗肽酶消化的能力的方法，包括將所述已知肽置換為本發(fā)明的半合成肽，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療患有受到給予已知的穿過機(jī)體屏障的第一種肽影響的疾病的患者的方法，包括給予所述患者本發(fā)明的半合成肽，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種治療患有受到給予已知的第一種肽影響的腦疾病的患者的方法，包括給予所述的患者任何本發(fā)明的半合成肽，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。本發(fā)明的某些實施方案提供了一種制備在體內(nèi)具有更長半衰期的半合成肽的方法，包括將已知肽置換為本發(fā)明的半合成肽，其中，所述半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述第一種肽相同的序列，或為除了非天然氨基酸化合物外的所述第一種肽的截短形式。除非另外指出，本申請中所使用的化合物名稱ABS201、ABS48、KH48和肽28表示相同的化合物。脫氨氨基酸化合物的制備本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物的制備按照圖3所示的總體合成方案進(jìn)行。該方法的第一步為生成具有對應(yīng)通式I至V的n的亞甲基單位鏈長"鹵素羧酸。在下文的詳述和圖3中，該中間體被稱為化合物27。生成化合物27后，其"鹵素基團(tuán)可以容易地被過量親核試劑取代而產(chǎn)生通式I-V的脫氨氨基酸化合物。當(dāng)R-H時，"鹵素化合物可以直接用于隨后的步驟中。當(dāng)R是有機(jī)取代基時，通過以下合成來添加R基團(tuán)。當(dāng)R是有機(jī)取代基時，用于產(chǎn)生化合物27的反應(yīng)條件包括通過形成?；鶉f唑酮對w羧酸的羧基進(jìn)行保護(hù)。該酰基噁唑酮被轉(zhuǎn)化為烯醇化物，該烯醇化物與烷化劑例如烷基碘化物或垸基甲磺?；锘弦孕纬苫衔?7。使用遠(yuǎn)遠(yuǎn)過量的烷化劑和較長反應(yīng)時間可顯著提高化合物27的收率。如圖3的合成方案所示，通過合適的側(cè)鏈部分與化合物25的co鹵素基團(tuán)偶聯(lián)可將《鹵素羧酸化合物25轉(zhuǎn)化成任何一種側(cè)鏈修飾物。還優(yōu)選采用對羧基的恰當(dāng)保護(hù)。這些反應(yīng)條件以及恰當(dāng)?shù)嫩瘎┖腿〈鷦┳裱?AdvancedOrganicChemistry",第4版，J.March.WileyInterSciences,NewYork,N.Y.1992中所示的教導(dǎo)，將其全部內(nèi)容通過引用合并于此。具體而言，為制備通式I的化合物(參見圖3和4的合成方案)，w鹵素羧酸化合物27可與恰當(dāng)?shù)陌酚H核試劑如氨、伯胺和仲胺化合。胺親核試劑的化學(xué)式對應(yīng)通式I的側(cè)鏈部分。反應(yīng)條件遵循適合胺親核取代的反應(yīng)條件，這些反應(yīng)條件在上文引用的"AdvancedOrganicChemistry"中被公開，并如完全重復(fù)那樣通過引用合并于此。這些化36合物可直接用于下文的肽合成，前提是側(cè)鏈胺基團(tuán)被恰當(dāng)保護(hù)或以其他方式抑制了羧基縮合。相似地，為制備通式II的化合物(參見圖3和5的合成方案)，《鹵素化合物27首先在羧基位置受到保護(hù)，然后相繼與二胺和溴化氰反應(yīng)。脫保護(hù)和純化后獲得通式II的脫氮氨基酸化合物。這些化合物可直接用于具有恰當(dāng)側(cè)鏈保護(hù)的肽合成中。通式III和IV的化合物(參見圖3和6的合成方案)也可通過將側(cè)鏈部分加成到《鹵素羧酸化合物27制備得到。在這種情況下，不必對羧基進(jìn)行保護(hù)。恰當(dāng)?shù)牧螂寤衔锏闹苽淇梢酝ㄟ^將烷化劑例如烷基、烯基或炔基鹵化物加成到硫脲、N-取代硫脲或N,N-二取代硫脲(市售)完成。堿性條件下，所得到的恰當(dāng)硫脲化合物在化合物27的"鹵素位置的親核取代提供了通式IV的脫氨氨基酸化合物。相似地，堿性條件下，將恰當(dāng)?shù)沫h(huán)狀硫脲化合物加成到"鹵素化合物27提供了通式III的脫氨氨基酸化合物。恰當(dāng)?shù)沫h(huán)狀硫脲化合物可以通過將烷化劑如烷基、烯基或炔基鹵化物與相應(yīng)未取代的、N-取代的或N，N-二取代的環(huán)狀重氮硫酮(市售)化合物制備得到。反應(yīng)粗產(chǎn)物可以通過已知方法如離子交換色譜法純化，以得到通式III和IV的脫氨氨基酸化合物，它們可直接用于具有恰當(dāng)側(cè)鏈保護(hù)的肽合成中。首先通過作為酰基惡唑酮的羧基保護(hù)來制備通式V的化合物。形成受保護(hù)的羧酸后，如果希望按照上述給出的程序，可在a碳(R)處添加有機(jī)取代基。在接下來的步驟中，將w鹵素基團(tuán)與氰化物反應(yīng)以形成"氰基受保護(hù)的羧酸。將該中間體與堿性金屬有機(jī)胺(XNR13R14)反應(yīng)來形成脒陰離子。用酸、水或烷基鹵化物將該脒陰離子淬火，以各自形成脒的未取代亞胺部分或脒的烷基取代亞胺部分。然后將該脒保護(hù)的羧酸用于上述的合成方案中，用于產(chǎn)生所需的肽。在通式I-V的化合物用于肽合成前，其側(cè)鏈既可以被恰當(dāng)保護(hù)，也可以確定被完全抑制，使得它們不進(jìn)行肽縮合反應(yīng)。例如，如果通式I的化合物的側(cè)鏈為伯胺基團(tuán)，那么可根據(jù)肽合成相關(guān)領(lǐng)域的教導(dǎo)將它恰當(dāng)保護(hù)。參見，例如在"CompendiumofOrganicSyntheticMethods"I&SHarrison,WileyInterscience,NewYork,NY，1971中所提供的胺保護(hù)基團(tuán)的綜述，將其公開內(nèi)容通過引用合并于此。在這些實例中，恰當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)可為首字母縮寫為BOC的叔丁氧羰基或首字母縮寫為FMOC的芴甲氧羰基。可以通過分別用酸例如三氟乙酸水溶液和堿例如哌啶進(jìn)行溫和處理來除去該BOC和FMOC保護(hù)基團(tuán)?；蛘撸?鹵素羧酸化合物27與次末肽(penultimatepeptides)偶聯(lián)以在次末肽的N端形成co鹵素?；糠?。因為該w鹵素羧酸化合物27在其側(cè)鏈上不含氨基部分，所以可不太考慮保護(hù)和假肽形成。在此替代方案中，氨基部分可與上述?；拇文╇牡膚鹵素基團(tuán)進(jìn)行親核反應(yīng)，以形成通式I-V的化合物，得到在其N端具有通式I-IV的化合物的殘基的所需肽。在此替代方案中，可以采用對羧基和氨基側(cè)鏈的恰當(dāng)保護(hù)和C端的恰當(dāng)保護(hù)以防止這些基團(tuán)不合需要的反應(yīng)。肽合成和純化本發(fā)明包括截短肽和延長肽，它們含有通式i、n、in、rv或v的化合物的殘基作為N端部分。這些肽通過Merrifidd固相法合成，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，該方法為制備肽的完善方法。參見R.B.Merrifield，Science,232，341-347(1986)，將其公開內(nèi)容通過引用合并于此，用以對Merrifield固相肽合成進(jìn)行解釋并對其條件進(jìn)行規(guī)定?？商娲?，去N端氨基酸單位的肽、或次末肽可以通過已知生物學(xué)方法重組表達(dá)，并且可使用氨肽酶通過酶縮合將通式I-V的脫氨氨基酸化合物加成為N端。參見"EnzymeStructureandMechanism",AlanFersht，W.H.Freeman,NewYork,NY(1985)，將其公開內(nèi)容通過引用合并于此，用于對肽的重組表達(dá)進(jìn)行解釋并對其條件進(jìn)行規(guī)定。可以用標(biāo)準(zhǔn)保護(hù)基團(tuán)對通式I-V的化合物在側(cè)鏈氨基基團(tuán)進(jìn)行恰當(dāng)保護(hù)。在優(yōu)選的實施方案中，保護(hù)基團(tuán)為BOC和/或FMOC。簡而言之，對固相合成而言，可大批量生產(chǎn)次末肽，然后使用Merrifidd固相合成的保護(hù)和偶聯(lián)技術(shù)將其偶聯(lián)到通式I-V的任一種化合物上。首先用被設(shè)計用于暴露氨基基團(tuán)的恰當(dāng)錨定樹脂使具有例如FMOC基團(tuán)的氨基保護(hù)基團(tuán)的肽的羧基端氨基酸單位通過可選擇性斷裂的羧基偶聯(lián)的連接錨定到該樹脂上。然后將被錨定的羧基端單位的氨基基團(tuán)脫保護(hù)，然后其他的氨基被保護(hù)的氨基酸單位以固有順序依次被偶聯(lián)。每一個偶聯(lián)步驟均包括錨定肽鏈的被保護(hù)的氨基基團(tuán)的脫38保護(hù)以及隨后該未保護(hù)氨基基團(tuán)和下一個氮基酸單位的羧基基團(tuán)之間的肽縮合。該縮合可以通過碳二亞胺偶聯(lián)、通過SchottenBauman反應(yīng)或通過活化?；鶊F(tuán)縮合輕易實現(xiàn)。這些縮合反應(yīng)描述于上文所引用的"AdvancedOrganicChemistry"中。使用恰當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)對胺和羧基側(cè)鏈的保護(hù)將使相繼的氨基酸單位的選擇性肽縮合成為可能，該保護(hù)基團(tuán)不同于進(jìn)行肽縮合的a氨基基團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)。恰當(dāng)保護(hù)基團(tuán)的選擇和固相肽合成的條件描述于上文引用的Merrifield參考文獻(xiàn)中。次末肽也可以通過重組表達(dá)產(chǎn)生。該生物學(xué)方法涉及對微生物重新的遺傳工程改造以表達(dá)次末肽。編碼次末肽序列的DNA片段可以正確的閱讀形式插入至能引起DNA的微生物表達(dá)的質(zhì)?；蚱渌d體中。該載體還含有恰當(dāng)?shù)目刂艱NA片段、啟動子DNA片段和選擇DNA片段。在插入微生物如大腸桿菌或枯草芽孢桿菌后，可以通過用相應(yīng)的選擇試劑的處理對微生物混合物選擇以得到恰當(dāng)轉(zhuǎn)染的微生物。一般而言，該試劑為抗生素，并且該載體含有編碼該抗生素相應(yīng)解毒酶的序列。氯霉素和青霉素為這其中的兩種試劑。培養(yǎng)該轉(zhuǎn)染微生物，收獲培養(yǎng)基中分泌物質(zhì)形式的或通過裂解微生物細(xì)胞形式的表達(dá)的肽，得到粗制次末肽?？梢酝ㄟ^已知技術(shù)例如凍干法、色譜法等純化次末肽。這些用于肽表達(dá)的重組技術(shù)在"ColdSpringHarbor-CurrentProtocolsinMolecularBiology",WileyInterscience,ColdSpringHarbor(2003)中得到充分闡述，將其公開內(nèi)容通過引用合并于此。固相肽生產(chǎn)的實例通過開發(fā)一組神經(jīng)降壓肽(8-13)化合物(NT肽)提供。這些化合物摻入了作為其N端的通式I-V的脫氨氨基酸化合物。它們?yōu)橐活愋滦涂咕癫∷幬?，以下部分中將描述其生物學(xué)研究和背景。NT肽合成一概述可以使用對垸氧基苯甲醇固相法(65)大量合成肽NT(9-13)的次末序列，并以完全保護(hù)形式將其儲存。原料對垸氧基苯甲醇樹脂結(jié)合的Na-Fmoc-亮氨酸、Na-Fmoc-異亮氨酸、Na-Fmoc-叔亮氨酸、Na-Fmoc-(But)-酪氨酸、Na-Fmoc-(Boc)-色氨酸、Na-Fmoc-脯氨酸和Na-Fmoc-(Pbf)-精氨酸購自AdvancedChemtech(Louisville,KY)。PyBOP⑧購自Novabiochem(SanDiego，CA)。N-羥基苯并三唑(HOBt)、無水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)、三異丙基硅烷(TIS)和四氟乙酸(TFA)購自Aldrich(Milwaukee,WI)。使用因此制得的非天然氨基酸類似物。縮寫Fmoc，芴甲氧羰基；NH3，氨；NH2CH3，甲胺；NH(CH3)2，二甲胺，N(CH3)3，三甲胺；EtOH，乙醇。簡而言之，樹脂結(jié)合的Na-Fmoc-亮氨酸可以在DMF中溶脹，然后用哌啶(20%，溶于DMF)進(jìn)行Fmoc裂解?？梢哉婵者^濾除去哌啶溶液，并用DMF和CH2Cl2洗滌樹脂結(jié)合的氮基酸。氨基酸(4當(dāng)量)可以在DMF中用HOBt(4當(dāng)量)、PyBOP(4當(dāng)量)和DIPEA(10當(dāng)量)活化，并直接加入肽反應(yīng)容器中。該氨基酸偶聯(lián)可以進(jìn)行約6小時，用DMF和CH2Cl2洗滌樹脂，并用Kaiser測試(66)對游離胺存在與否進(jìn)行監(jiān)測。必要時可對殘余物進(jìn)行重偶聯(lián)?？梢杂秒S后的氨基酸重復(fù)該操作以獲得次末肽序列。然后，樹脂結(jié)合的五聚體的等份試樣可如以上所述的與通式I-V的化合物偶聯(lián)，以產(chǎn)生所需要的肽?？梢杂煤星‘?dāng)清除劑的TFA溶液進(jìn)行酸催化的脫保護(hù)，粗制肽可以在用冰預(yù)冷的乙醚中沉淀。肽純化一概述可以使用反相高壓液相色譜法純化上述粗制肽。例如，可以將Waters雙泵系統(tǒng)與WatersC18徑向壓縮柱聯(lián)合用于此目的?？梢酝ㄟ^280nm的UV吸光度對洗脫液進(jìn)行監(jiān)測。含非天然氨基酸的肽的篩選本發(fā)明提供了一種就其活性或者藥理活性篩選肽的方法。該方法包括如下步驟a)測量具有所選擇的天然氨基酸序列的肽的活性或藥理活性，和b)測量延長肽或截短肽的相同的活性或藥理活性，該延長肽或截短肽以與上述肽相同的氨基酸序列為基礎(chǔ)，其中N端為具有上述通式I-V的非天然氨基酸；和c)比較由步驟a)和b)測量得到的肽的活性或藥理活性以確定步驟b)的肽是否具有所需活性或藥理活性。本發(fā)明篩選所依據(jù)的活性包括任何與生物活性肽或擬肽相關(guān)的活性。下面為可以在本篩選方法中確定的多種活性的部分列表1.受體激動劑/拮抗劑活性測量這些活性的具體篩選的實例匯總可以參見"TheRBIHandbookofReceptorClassificationandSignalTransduction",K.J.Watling，J.W.Kebebian，J丄.Neumeyer編輯，ResearchBiochemicalsInternational,Natick，MA，1995和其中的參考文獻(xiàn)。分析方法可以參見T.Kenakin"PharmacologicAnalysisofDrug-ReceptorInteractions",第2版，RavenPress,NewYork,1993和其中的參考文獻(xiàn)。2.酶抑制作用測量這些活性的具體篩選實例匯總可以參見H.Zollner"HandbookofEnzymeInhibitors",第2版，VCHWeinheim，F(xiàn)RG，1989和其中的參考文獻(xiàn)。3.中樞神經(jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)(心血管和胃腸道)、抗組胺、抗炎、麻醉、細(xì)胞毒性和抗生物活性測量這些活性的具體篩選的實例匯總可參見E.B.Thompson,"DrugBioscreening:DrugEvaluationTechniquesinPharmacology",VCHPublishers,NewYork,1990禾卩其中的參考文獻(xiàn)。4.抗癌活性測量這些活性的具體篩選的實例匯總可以參見I丄Fidler禾口R,J.White"DesignofModelsforTestingCancerTherapeuticAgents"，VanNostrandReinholdCompany，NewYork，1982和其中的參考文獻(xiàn)。5.抗菌和抗病毒(特別是抗HIV)活性測量這些活性的具體篩選的實例匯總可以參見"antibioticsinLaboratoryMedicine",第3版，V.Lorian編輯，Williams和Wilkens，Baltimore,1991和其中的參考文獻(xiàn)。測量這些活性的抗HIV篩選的匯總可以參見"HIVVolume2:Biochemistry,MolecularBiologyandDrugDiscovery",J.Karn編輯，IRLPress,Oxford,1995和其中的參考文獻(xiàn)。6.免疫調(diào)節(jié)活性測量這些活性的具體篩選的實例的匯總可以參見V.St.Georgiev(1990)，"ImmunomodulatoryActivityofSmallPeptides"TrendsPharm.Sci.11，373-378。7.藥物代謝動力學(xué)特征在篩選方法中測定的藥理活性包括半衰期、溶解性或穩(wěn)定性等。例如，分析和測量藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)的方法可以參見J.-P.Labaune"HandbookofPharmacokinetics:ToxicityAssessmentofChemicals",EllisHorwoodLtd.，Chichester,1989禾口其中的參考文獻(xiàn)。在該篩選方法中，步驟a)的肽可以由天然氨基酸組成?；蛘撸襟Ea)的肽主要含有天然氨基酸，還含有一個或少量非天然氨基酸。這種肽被認(rèn)為基本由天然氨基酸組成。在該篩選方法中，步驟b)的肽可以為上文所述本發(fā)明的截短肽或延長肽。在一個實施方案中，通式I-V的非天然氨基酸的結(jié)構(gòu)與天然存在的氨基酸賴氨酸和精氨酸的結(jié)構(gòu)相似。因此，在本申請所考慮的篩選方法中，任何延長肽或截短肽可以與具有相同下游序列和具有已知活性或藥理活性的肽相比較，以確定該延長肽或截短肽是否具有相同或不同水平的相同或相似活性或藥理活性。根據(jù)測量歩驟如何進(jìn)行的詳細(xì)說明，本篩選方法也可以用于檢測延長肽或截短肽所表現(xiàn)出的活性或藥理活性。同樣，該篩選方法還可用于檢測和測量相同或相似活性或藥理活性的定性差異和定量差升。因此，本發(fā)明的方法提供了延長肽或截短肽活性改變的評估方法。一般而言，在脫氨氨基酸部分參與結(jié)合(如受體-配體結(jié)合、酶-輔酶因子結(jié)合、酶-底物結(jié)合)時，肽的疏水性提高，這間接導(dǎo)致結(jié)合活性增強(qiáng)，由于結(jié)合強(qiáng)度與活性相關(guān)，因此可以得到具有較高效能(測量得到的較高活性水平)的肽。另外，本發(fā)明的脫氨氨基酸還可以增強(qiáng)或提高肽的藥理活性。例如，因為脫氨氨基酸疏水性更強(qiáng)(即，親脂性更強(qiáng))，所以含有非天然氨基酸的肽更有能力穿過機(jī)體屏障(如血腦屏障、血眼屏障、皮膚、腸上皮)。此外，因為脫氨氨基酸賦予肽增強(qiáng)的選擇性和穩(wěn)定性，所以在與其他肽相比較時，該藥理活性也可以得到篩選。治療本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種治療或預(yù)防患者疾患的方法，包括將具有通式I-V的氨基酸作為N端的延長肽或截短肽給藥于患者。形成延長肽或截短肽的基礎(chǔ)肽會與待治療或預(yù)防的疾患在生物化學(xué)、生理學(xué)、藥理學(xué)或生物學(xué)上相關(guān)或被認(rèn)為與之相關(guān)。該疾患可以為疾病、生物功能異?；驒C(jī)體功能異常或者通常并不被認(rèn)為是疾病或功能異常的不良生物狀況，例如但不限于皮膚斑、痤瘡等的化妝品疾患?；颊邽榘ㄡt(yī)學(xué)或獸醫(yī)患者，包括哺乳動物，如人，和非人哺乳動物，如狗、貓、牛、羊、豬以及鳥類。在本發(fā)明的方法中，可以治療或預(yù)防的疾患和可使用的肽有很多。例如，可以合成慘入本發(fā)明的非天然氨基酸的神經(jīng)降壓肽類似物。本發(fā)明這樣的合成NT肽可以用來治療肥胖癥、糖尿病、性功能障礙、帕金森病、動脈粥樣硬化、胰島素抵抗、葡萄糖耐量受損、高膽固醇血癥或高甘油三酯血癥。本發(fā)明的合成NT肽還可以用來誘導(dǎo)血管舒張、肌肉松弛或降低食欲。此外，本發(fā)明的合成NT肽可以用來治療體溫過高；體溫過低；胃腸道潰瘍；物質(zhì)濫用；抑郁；阿爾茨海默氏??；遲發(fā)性運(yùn)動障礙；驚恐發(fā)作；胃腸道逆流疾?。荒c易激綜合征；腹瀉、膽酸(cholic);消化不良；胰腺炎；食道炎；胃輕癱；神經(jīng)疾病如精神分裂癥、精神病(psychoses)、焦慮、躁郁癥、譫妄癡呆、嚴(yán)重的智力低下和運(yùn)動障礙，如亨亭頓病和Tourett綜合癥；真菌和病毒感染，包括HIV-1和HIV-2感染；疼痛(即，止痛)；癌癥(包括胃腸道腫瘤)；食欲缺乏；易餓??；哮喘；帕金森?。患毙孕牧λソ?；低血壓；高血壓；尿潴留；骨質(zhì)疏松；心絞痛；心肌梗塞；過敏；炎癥；或良性前列腺肥大。本發(fā)明的治療方法還可以包括聯(lián)合治療，其中將用于治療肥胖癥或其他疾病的其他藥物活性化合物結(jié)合本發(fā)明的合成NT肽來使用。已知肥胖患者具有特定疾病較高的發(fā)病率，如動脈粥樣硬化、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高血壓、性功能障礙(包括勃起功能障礙)、胰島素抵抗、葡萄糖耐量受損、糖尿病[特別是非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM或2型糖尿病)]以及與糖尿病相關(guān)的疾病，如腎病、神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病、心肌病、白內(nèi)障和多囊卵巢綜合征?？梢酝ㄟ^使用本發(fā)明的合成NT肽治療肥胖癥來間接治療疾病，或通過使用本發(fā)明的合成NT肽來治療特定疾病自身來直接治療這些疾病。在不存在肥胖癥的情況下，可以使用本發(fā)明的合成NT肽來治療這些疾病。在本發(fā)明的一個實施方案中，肥胖患者或處于變成肥胖風(fēng)險中的患者可以給予以下的組合l)本發(fā)明的合成NT肽；和2)用于治療肥胖癥、糖尿病[包括(NIDDM)和與糖尿病相關(guān)的病癥和/或疾病，如腎病、神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病、心肌病、白內(nèi)障和多囊卵巢綜合征]、動脈粥樣硬化、高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、性功能障礙(包括勃起功能障礙)、胰島素抵抗、葡萄糖耐量受損的其他化合物，或用于治療這些疾病的化合物的組合物?？梢杂脕碇委煼逝职Y的化合物類別的實例包括抑制食欲的活性化合#勿，如Adipex⑧、Bontril、DesoxynGradumet⑧、Fastin⑧、Ionamin和Meridia⑧，和脂酶抑制劑，如Xenical?？梢越Y(jié)合本發(fā)明的合成NT肽使用的其他抗肥胖藥劑包括P3-腎上腺素能受體激動劑、膽囊收縮素-A激動劑、單胺重攝取抑制劑、擬交感神經(jīng)藥、血清素激活劑、多巴胺激動劑、黑素細(xì)胞剌激激素受體激動劑或模擬物、黑素細(xì)胞剌激激素受體類似物、大麻素(cannabitioid)受體拮抗劑、黑素濃縮激素拮抗劑、來普汀(leptin)、來普汀類似物、來普汀受體拮抗劑、促生長激素神經(jīng)肽(galanin)拮抗劑、鈴蟾素激動劑、神經(jīng)肽-Y拮抗劑(包括NPY-1和NPY-5)、擬甲狀腺素藥、脫氫表雄酮或其類似物、糖皮質(zhì)激素受體激動劑或拮抗劑、阿立新(orexin)受體拮抗劑、尿皮質(zhì)激素(urocortin)結(jié)合蛋白拮抗劑、胰高血糖素樣肽-1受體激動劑和纖毛神經(jīng)營養(yǎng)因子。在本發(fā)明的另一個方面中，可以結(jié)合已知能治療高血壓的化合物來給藥本發(fā)明的合成NT肽?？梢杂脕碇委煾哐獕旱幕衔锏念悇e實例包括鈣阻斷劑、ACE抑制劑、利尿劑、血管緊張素II受體阻斷劑、g-阻斷劑和a-腎上腺素能阻斷劑。此外，已經(jīng)使用上述類別化合物的組合物來治療高血壓?？梢越Y(jié)合本發(fā)明的合成NT肽使用的特定化合物的一些實例包括喹那普利；氨氯地平，包括苯磺酸鹽；硝苯地平;多沙唑嗪，包括甲磺酸鹽；和哌唑嗪，包括鹽酸鹽。在另一個方面中，本發(fā)明的合成NT肽可以結(jié)合用于治療糖尿病的化合物來使用，糖尿病包括葡萄糖耐量受損、胰島素抵抗、胰島素依賴性糖尿病(1型)和非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM或2型)。糖尿病治療中還包括糖尿病并發(fā)癥，如神經(jīng)病、腎病、視網(wǎng)膜病、心肌病或白內(nèi)障。本發(fā)明的合成NT肽還可以結(jié)合醛糖還原酶抑制劑來使用。因為它們在治療由糖尿病并發(fā)癥如糖尿病性神經(jīng)病和腎病引起的病癥中的用途，醛糖還原酶抑制劑構(gòu)成了一類公知的化合物。這樣的化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且可以通過標(biāo)準(zhǔn)的生物測試來容易地鑒定。本發(fā)明的合成NT肽還可以結(jié)合山梨糖醇脫氫酶抑制劑來使用。山梨糖醇脫氫酶抑制劑降低果糖水平，并且已經(jīng)用來治療或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥，如神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病、腎病、心肌病、微血管病和大血管病。本發(fā)明的合成NT肽還可以結(jié)合糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑來使用。糖皮質(zhì)激素受體(GR)存在于糖皮質(zhì)激素應(yīng)答細(xì)胞中，它在其中以無活性狀態(tài)停留在胞質(zhì)溶膠中，直至受到激動劑的剌激。在刺激時，糖皮質(zhì)激素受體改變位置至細(xì)胞核，它在其中與DNA和/或蛋白質(zhì)特異性地相互作用并調(diào)節(jié)以糖皮質(zhì)激素應(yīng)答方式的轉(zhuǎn)錄。GR拮抗劑可以用于治療與體內(nèi)糖皮質(zhì)激素過量或不足相關(guān)的疾病。因此，它們可以用來治療以下的疾病肥胖癥、糖尿病、心血管疾病、高血壓、X綜合癥、抑郁、焦慮、青光眼、人免疫缺陷病毒(HIV)或獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)、神經(jīng)退化(例如，阿爾茨海默氏病和帕金森病)、認(rèn)知增強(qiáng)、庫欣綜合癥、愛迪生氏病、骨質(zhì)疏松、虛弱、炎癥疾病(如骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘和鼻炎)、腎上腺功能紊亂、病毒感染、免疫缺陷、免疫調(diào)節(jié)、自體免疫疾病、過敏、傷口愈合、強(qiáng)迫行為、多藥物抗性、成癮、精神病、食欲減退、惡病質(zhì)、創(chuàng)傷后應(yīng)激綜合癥、手術(shù)后骨折、醫(yī)療分解代謝和肌肉虛弱的預(yù)防。此外，本發(fā)明的合成NT肽可以結(jié)合其他藥劑來使用，其他藥劑如膽固醇生物合成抑制劑和膽固醇吸收抑制劑，尤其是HMG-CoA還原酶抑制劑和HMG-CoA合成酶抑制齊U，HMG-CoA還原酶和合成酶基因表達(dá)抑制劑，CETP抑制齊lj，膽酸螯合劑，fibmte，ACAT抑制劑，角鯊烯合成酶抑制劑，抗氧化劑和煙酸。還可以結(jié)合天然產(chǎn)生的作用來降低血漿膽固醇水平的化合物來給藥本發(fā)明的合成NT肽。這些天然產(chǎn)生的化合物通常稱為營養(yǎng)藥物，并包括，例如，大蒜提取物，Benecol和煙酸。還考慮了本發(fā)明的合成NT肽可以與脂酶抑制劑和/或葡糖苷酶抑制劑一起給藥，這兩種抑制劑通常用于治療由過量甘油三酯、游離脂肪酸、膽固醇、膽固醇酯或葡萄糖的存在引起的病癥，特別是肥胖癥、高脂血癥、高脂蛋白血癥、綜合癥X等。任何脂酶抑制劑或葡糖苷酶抑制劑可以結(jié)合本發(fā)明的合成NT肽來使用。優(yōu)選的脂酶抑制劑包括胃或胰脂酶抑制劑，如奧利司他。優(yōu)選的葡糖苷酶抑制劑包括淀粉酶抑制劑。脂酶抑制劑是抑制膳食甘油三酯代謝分裂成游離脂肪酸和甘油單酯的化合物。在正常的生理條件下，通過兩個步驟進(jìn)行脂肪分解，這兩個步驟涉及脂酶的激活絲氨酸部分的?；?。這使得產(chǎn)生脂肪酸-脂酶半縮醛中間體，然后其分裂來釋放甘油二酯。進(jìn)一步去?；?，脂酶-脂肪酸中間體得到分裂，形成游離的脂酶、甘油單酯和脂肪酸。將所得到的游離脂肪酸和甘油單酯引入膽酸-磷脂膠束，其隨后在小腸的刷狀緣水平得到吸收。膠束最終作為乳糜微粒進(jìn)入外周循環(huán)。因此，選擇性限制或抑制攝入的脂肪前體物質(zhì)吸收的化合物，包括脂酶抑制劑，用于治療包括肥胖癥、高脂血癥、高脂蛋白血癥、綜合癥X等的病癥。各種脂酶抑制劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。任何葡糖苷酶抑制劑可以結(jié)合本發(fā)明的合成NT肽來使用，然而，通常優(yōu)選的葡糖苷酶抑制劑是淀粉酶抑制劑。淀粉酶抑制劑是抑制淀粉或糖原酶降解成麥芽糖的葡糖苷酶抑制劑。這樣的酶降解的抑制在降低生物可利用糖含量和由其產(chǎn)生的伴隨有害條件中是有利的，生物可利用糖包括葡萄糖和麥芽糖。葡糖苷酶和淀粉酶抑制劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。此外，本發(fā)明包括結(jié)合apoB分泌/MTP抑制劑來使用本發(fā)明的合成NT肽。各種apoB分泌/MTP抑制劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。本發(fā)明的合成NT肽還可以結(jié)合一種或多種為神經(jīng)降壓肽受體配體的化合物來使用。還可以將本發(fā)明的非天然氨基酸摻入其他肽中來治療疾患，如下所述。激發(fā)B細(xì)胞和T細(xì)胞活性的肽可以用于治療自體免疫疾病，包括葡萄膜炎、膠原誘導(dǎo)的佐劑性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、甲狀腺炎、重癥肌無力、多發(fā)性硬化和糖尿病。這些肽的實例為白細(xì)胞介素(參見Aulitzky，WE;Schuler,M;Peschel，C;Huber，C;Interleukins.Clinicalpharmacologyandtherapeuticuse.Drugs.48(5):667-77，1994年11月)。禾口細(xì)胞因子(參見Peters,M.;Actionsofcytokinesontheimmuneresponseandviralinteractions:anoverview.Hepatology.23(4》909-16，1996年4月)。腦啡肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療AIDS、ARC和癌癥、疼痛調(diào)節(jié)、亨廷頓病、帕金森病。LHRH和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療前列腺腫瘤和生殖生理病理學(xué)，包括乳腺癌和不育癥。靶向關(guān)鍵性酶、癌基因或癌基因產(chǎn)物、腫瘤抑制基因及其產(chǎn)物、生長因子及其相應(yīng)受體的肽和擬肽可以用于治療癌癥。這些肽的實例描述于Unger，C.Currentconceptsoftreatmentinmedicaloncology:newanticancerdrugs.JournalofCancerResearch&ClinicalOncology.122(4):189-98，1996。祌經(jīng)肽Y和其他胰多肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療緊張、焦慮、抑郁和相關(guān)血管收縮作用。糖腸降血糖素，包括胃抑制性多肽、糖依賴性促胰島多肽、PACAP/胰高血糖素和胰高血糖素樣多肽1和2以及類似物，激動劑和拮抗劑可以用于治療II型糖尿病性高血糖。心房鈉尿肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療充血性心力衰竭。整聯(lián)蛋白和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療骨質(zhì)疏松、瘢痕形成、骨形成、血管閉塞的抑制和腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制。胰高血糖素、胰高血糖素樣肽1、PACAP/胰高血糖素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療糖尿病心血管急癥?？鼓暮皖愃莆?、激動劑和拮抗劑可以用于治療心血管疾病和腦血管疾病。這些被稱為RGD、D-Phe-Pro-Arg和其他名字的肽的實例描述于OjimaI.;ChakravartyS.;DongQ.Antithromboticagents:fromRGDtopeptidemimetics.Bioorganic&MedicinalChemistry.3(4):337-60，1995。細(xì)胞因子/白細(xì)胞介素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療炎性疾病、免疫應(yīng)答功能異常、血細(xì)胞生成、蕈樣肉芽腫、再生障礙性貧血、血小板減少和惡性黑素瘤。這些肽的實例為白細(xì)胞介素。參見Aulitzky等和Peters等的文獻(xiàn)。內(nèi)皮縮血管肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療動脈血壓過高、心肌梗塞、充血性心力衰竭、動脈粥樣硬化、休克病癥、腎衰竭、哮喘和血管痙攣。利尿鈉激素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療心血管疾病和急性腎衰竭。這些肽的實例在Espiner，E.A;Richards,A.M.;Yandle,T.G.;Nicholls，M.G.;Natriuretichormones.Endocrinology&MetabolismClinicsofNorthAmerica.24(3):481-509，1995中被命名和描述。激活或抑制酪氨酸激酶的肽或結(jié)合到TK激活肽或抑制肽的肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療慢性骨髓性白血病和急性淋巴性白血病、乳腺癌和卵巢癌以及其他酪氨酸激酶相關(guān)疾病。這些肽的實例描述于Smithgall，TE.;SH2andSH3domains:potentialtargetsforanti-cancerdrugdesign.JournalofPharmacological&ToxicologicalMethods.34(3):125-32，1995。腎素抑制劑類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療心血管疾病，包括高血壓和充血性心力衰竭。這些肽的實例描述于Rosenberg,S.H.;Renininhibition.CardiovascularDrugs&Therapy,9(5》645-55，1995。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療心血管疾病，包括高血壓和充血性心力衰竭。激活或抑制酪氨酸磷酸化酶的肽可以用于治療心血管疾病。這些月太的實例描述于Srivastava，A.K.;Proteintyrosinephosphorylationincardiovascularsystem.Molecular&CellularBiochemistry.149-150:87-94，1995。以抗病毒劑為基礎(chǔ)的肽可以用于治療病毒性疾病。這些肽的實例描述于Toes，R.E.;Feltkamp，M.C.;Ressing，M.E.;Vierboom，M.P.;Blom，RJ.;Bmndt，R.M;Hartman，M.;Offnnga，R.;Melief，C丄；Kast，W.M.;CellularimmunityagainstDNAtumourviruses:possibilitiesforpeptide-basedvaccinesandimmuneescape.BiochemicalSocietyTransactions.23(3):692-6，1995。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子和肽類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療高CRF相關(guān)疾病，即阿爾茨海默氏病、神經(jīng)性厭食、抑郁癥、關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化。血小板衍生傷口愈合因子(PDWHF)的肽激動劑和拮抗劑可以用作供體組織缺陷和外科手術(shù)中傷口愈合抑制時的治療。這些肽的實例描述于Rudkin，G.H.;Miller，T.A.;Growthfactorsinsurgery.Plastic&ReconstructiveSurgery.97(2):469-76，1996。纖連蛋白、血纖肽抑制劑和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療轉(zhuǎn)移(即，酶抑制、腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移)。趨化因子(各種細(xì)胞因子，包括白細(xì)胞介素-8、RANTES和單核細(xì)胞趨化肽)類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療關(guān)節(jié)炎、超敏反應(yīng)、血管發(fā)生、腎病、腎小球腎炎、炎癥和血細(xì)胞生成。中性內(nèi)肽酶抑制劑和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療高血壓和炎癥。這些肽的實例描述于Gregoire，J.R;Sheps，S.G;Newerantihypertensivedrugs.CurrentOpinioninCardiology.10(5):445-9，1995。P物質(zhì)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療免疫系統(tǒng)功能異常、痛傳遞/痛知覺，并可以用于自主反射和行為中。a黑色素細(xì)胞剌激激素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療艾滋病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和心肌梗塞。緩激肽(BK)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療炎性疾病(水腫等)、哮喘、變態(tài)反應(yīng)(鼻炎等)、麻醉用途和敗血性休克。促胰液素可以用于治療心血管急癥。GnRH和類似物，激動劑和拮抗劑可以用于治療依賴激素的乳腺腫瘤和前列腺腫瘤。促生長素抑制素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療消化道神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。促胃液素、促胃液素釋放肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作小細(xì)胞肺癌或其他惡性腫瘤中化療或外科手術(shù)的佐劑，或者可以用于治療變應(yīng)性呼吸系統(tǒng)疾病、哮喘和變應(yīng)性鼻炎。層粘連蛋白、層粘連蛋白源抗轉(zhuǎn)移藥物YIGSR肽、層粘連蛋白源合成肽類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療腫瘤細(xì)胞生長、血管發(fā)生、再生研究、糖尿病眼血管化和局部缺血。這類肽可以抑制白血病細(xì)胞的腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，可以用作白血病浸潤的潛在治療劑。含有該序列的肽還能抑制實驗性轉(zhuǎn)移。示例性參考文獻(xiàn)包括McGowanKA.MarinkovichMRLamininsandhumandisease.MicroscopyResearch&Technique.51(3):262-79，2000年11月1日；YoshidaN.IshiiE.NomizuM.YamadaYMohriS.KinukawaN.MatsuzakiA.OshimaK.HaraT.MiyazakiS.Thelaminin-derivedpeptideYIGSR(Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg)inhibitshumanpre-BleukaemiccellgrowthanddisseminationtoorgansinSCIDmice.BritishJournalofCancer.80(12):1898-904，1999。這些肽的實例還描述于Kleinman，H.K.;Weeks,B.S.;Schnaper，H.W.;Kibbey，M.C.;Yamamura，K.;Grant,D.S;Thelaminins:afamilyofbasementmembraneglycoproteinsimportantincelldifferentiationandtumormetastases.Vitamins&Hormones.47:161-86，1993。防御素、皮質(zhì)穩(wěn)定素、蛙皮抗菌肽、mangainin和其他抗菌(抗細(xì)菌和抗微生物)肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療感染、組織炎癥和內(nèi)分泌調(diào)控。血管加壓素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)障礙、緊張和糖尿病尿崩。催產(chǎn)素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)障礙和用于誘導(dǎo)分娩。ACTH相關(guān)肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作神經(jīng)營養(yǎng)劑、神經(jīng)保護(hù)劑和外周脫髓鞘性神經(jīng)病劑。淀粉狀蛋白e肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療阿爾茨海默氏病。表皮生長因子、受體和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療壞死性腸結(jié)腸炎、佐林格-艾利森綜合癥、胃腸潰瘍、結(jié)腸炎和先天性微絨毛萎縮癌。白細(xì)胞粘附分子及其配體和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療動脈粥樣硬化、炎癥。這些肽的實例描述于Barker,J.N.;Adhesionmoleculesincutaneousinflammation.CibaFoundationSymposium.189:91-101。主要組織相容性復(fù)合物(MHC)結(jié)合肽和類似物、激動劑和拮抗50劑可以用于治療自身免疫疾病、免疫功能異常、免疫調(diào)節(jié)疾病，以及用作它們相應(yīng)的治療劑。這些肽的實例描述于Appdla，E.;Padlan，E.A.;Hunt,D.F;AnalysisofthestructureofnaturallyprocessedpeptidesboundbyclassIandclassIImajorhistocompatibilitycomplexmolecules.EXS.73:105-19，1995。促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子可以用于治療神經(jīng)障礙。神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(包括腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)蛋白3)和類似物、激動劑和拮抗劑，可以用于治療神經(jīng)障礙。細(xì)胞毒性T細(xì)胞激活肽可以用于治療感染疾病和癌癥。這些肽的實例描述于ChesnutR.W.;Sette，A.;Celis，E.;Wentworth，P.;Kubo，R.T.;Alexander,J.;Ishioka，G.;Vitiello，A.;Grey，H.M;Designandtestingofpeptide-basedcytotoxicT-cell-mediatedimmunotherapeuticstotreatinfectiousdiseasesandcancer.PharmaceuticalBiotechnology.6:847-74，1995。預(yù)防HIV-1和HTLV-1逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的肽免疫原可以用于治療AIDS。這些肽的實例描述于Hart，M.K.;Palker，T.J.;Haynes，BF;DesignofexperimentalsyntheticpeptideimmunogensforpreventionofHIV-IandHTLV-Iretroviralinfections.PharmaceuticalBiotechnology.6:821-45，1995。促生長激素神經(jīng)肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療阿爾茨海默氏病、抑郁、進(jìn)食障礙疾患、慢性疼痛、缺血損傷的預(yù)防和生長激素調(diào)節(jié)。速激肽(神經(jīng)激肽A和祌經(jīng)激肽B)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療痛傳遞/痛知覺，并可以用于自主反射和行為中。含有RGD的肽可以用于治療涉及細(xì)胞粘附的各種疾病、抗凝血病和急性腎衰竭。成骨生長肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作全身性骨丟失的治療。這些肽的實例描述于BabIA.Regulatoryroleofosteogenicgrowthpeptideinproliferation,osteogenesis,andhemopoiesis.ClinicalOrthopaedics&RelatedResearch.(313):64-8，1995。甲狀旁腺激素、甲狀旁腺激素相關(guān)肽和類似物、激動劑和拮抗劑51可以用于治療影響鈣平衡(高鈣血癥)、骨代謝的疾病、血管病和動脈粥樣硬化。血管舒張素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療組織損傷或炎癥和CNS的疼痛信號轉(zhuǎn)導(dǎo)病理狀態(tài)。T細(xì)胞受體肽疫苗和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于免疫治療中。這些肽的實例描述于Brostoff，SW;Tcellreceptorpeptidevaccinesasimmunotherapy.Agents&Actions-Supplements.47:53-8，1995。血小板衍生生長因子(PDGF)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療非致瘤性過度增生病癥、用作供體組織缺陷和外科手術(shù)中傷口愈合抑制的治療。支鏈淀粉、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療胰島素依賴性糖尿病。血管活性腸多肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療變應(yīng)性呼吸系統(tǒng)疾病、哮喘和變應(yīng)性鼻炎，并可以作為生殖功能的神經(jīng)控制。生長激素釋放激素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療生長激素缺乏癥和免疫調(diào)節(jié)。HIV蛋白酶抑制劑可以用于治療AIDS。這些肽的實例描述于Bugelski，P.J.;Kirsh，R.;Hart，T.K;HIVproteaseinhibitors:effectsonviralmaturationandphysiologicfunctioninmacrophages.JournalofLeukocyteBiology.56(3):374-80，1994。胸腺生成素活性片段肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和病毒感染。殺菌肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作抗菌劑。甲狀腺釋放激素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療脊髓損傷和休克。紅細(xì)胞生成素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療貧血。成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)、受體和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作骨形成的刺激作用，還可以用作卡波氏肉瘤、神經(jīng)元再生、前列腺生長、腫瘤生長抑制和血管發(fā)生的治療。干細(xì)胞因子和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療貧血。GP120、GP160、CD4片段肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療AIDS。胰島素樣生長因子、受體和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療乳腺癌和其他癌癥、非胰島素依賴性糖尿病、細(xì)胞增殖、程序性細(xì)胞死亡、血細(xì)胞生成、AIDS、生長障礙、骨質(zhì)疏松和胰島素抵抗。集落刺激因子(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞集落刺激因子和巨噬細(xì)胞集落刺激因子)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療貧血?？咸仉暮皖愃莆?、激動劑和拮抗劑可以用于免疫調(diào)節(jié)。淋巴細(xì)胞激活肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于免疫調(diào)節(jié)。這些肽的實例描述于Loleit，M.;Deres，K.;Wiesmuller，K.H.;Jung，G.;Eckert，M.;Bessler，W.G;BiologicalactivityoftheEscherichiacolilipoprotein:detectionofnovellymphocyteactivatingpeptidesegmentsofthemoleculeandtheirconformationalcharacterization.BiologicalChemistryHoppe-Seyler.375(6):407-12，1994年6月。促吞噬肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于免疫調(diào)節(jié)。催乳素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療風(fēng)濕病、全身性紅斑狼瘡和高催乳素血癥。血管緊張素II及受體和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療高血壓、血液動力調(diào)節(jié)、神經(jīng)障礙、糖尿病性腎病、主動脈動脈炎引起的RVH、醛甾酮過多癥、重金屬引起的心血管效應(yīng)、糖尿病和甲狀腺機(jī)能障礙。強(qiáng)啡肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)障礙、疼痛治療、感覺過敏、脊髓損傷和癲癇。降鈣素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)障礙、免疫系統(tǒng)功能異常、鈣平衡和骨質(zhì)疏松。垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽在生長、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)血管活性作用中起作用，并在疾病中的確切作用尚不確定?？s膽囊素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療飲食障礙、驚恐性障礙，并且具有抗阿片樣物質(zhì)性質(zhì)。胃酶抑制劑和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作胃蛋白酶和HIV蛋白酶抑制劑(AIDS)。貝他定和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療肌肉萎縮，抗癌劑、抗白血病藥、免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑和治療急性非淋巴細(xì)胞白血病。亮肽素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作蛋白酶抑制劑，在疾病中的確切作用尚不確定。黃體生成素和釋放激素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作不育雄性避孕藥。神經(jīng)降壓肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作例如抗緊張劑、止痛劑、抗癌劑和/或例如通過引起低體溫提供神經(jīng)保護(hù)從而例如治療中風(fēng)患者的神經(jīng)保護(hù)劑。促胃動素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于控制胃排空。胰島素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療糖尿病。轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于細(xì)胞增殖和分化、癌癥治療、免疫調(diào)節(jié)、供體組織缺陷和外科手術(shù)中傷口愈合抑制的治療。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)和類似物、激動劑和拮抗劑可以用作供體組織缺陷、骨發(fā)生和外科手術(shù)中傷口愈合抑制的治療。鈴蟾肽和腸抑素及其類似物、激動劑和拮抗劑可以用于防止腫瘤細(xì)胞增殖、調(diào)控飲食和神經(jīng)內(nèi)分泌功能。這些肽屬于上述祌經(jīng)調(diào)節(jié)肽的一類。這些肽在如下示例性參考文獻(xiàn)中有描述YamadaK.WadaE.WadaK.Bombesin-likepeptides:studiesonfoodintakeandsocialbehaviourwithreceptorknock-outmice.AnnalsofMedicine.32(8):519-29，2000年11月；Ohki誦HamazakiH.NeuromedinB.ProgressinNeurobiology.62(3):297-312，2000年10月；StillCD.Futuretrendsinweightmanagement.JournaloftheAmericanOsteopathicAssociation.99(10SuPt2):S18-9，1999;MartinezV.TacheY.Bombesinandthebrain-gutaxis.Peptides.21(11》.1617-25，2000;Afferentsignalsregulatingfoodintake.ProceedingsoftheNutritionSociety.59(3):373-84，2000;TakenakaY.NakamuraF.JinsmaaY.LipkowskiAW.YoshikawaM.Enterostatin(VPDPR)hasanti-analgesicandanti-amnesicactivities-BioscienceBiotechnology&Biochemistry.65(l):236-8，2001J。胰高血糖素、胰高血糖素樣肽I和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療糖尿病性心血管急癥。胰抑制素、嗜鉻粒蛋白A、B和C類似物、激動劑和拮抗劑一與抑制胰島素分泌、外分泌胰腺分泌和胃酸分泌以及egradati分泌刺激相關(guān)的病癥。內(nèi)啡肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)障礙、緩解疼痛、治療阿片樣物質(zhì)濫用、肥胖和糖尿病。這些肽的實例在Dalayeim，J.F.;Nores，J.M.;Bergal，S.;Physiologyofbeta-endorphins.Aclose-upviewandareviewoftheliterature.Biomedicine&Pharmacotherapy.47(8):311-20,1993中被命名和描述。各種阿片肽，包括(但不限于)腎上腺肽E、ci酪蛋白片段、P酪啡肽、皮啡肽、京都啡肽、甲八肽酰胺神經(jīng)肽FF(NPFF)、黑素細(xì)胞抑制因子和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)障礙、緩解疼痛，還可以用于阿片樣物質(zhì)濫用的治療。加壓催產(chǎn)素和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于有待確定的臨床用途中。蛋白激酶C和抑制劑及類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療癌癥、凋亡、平滑肌功能和阿爾茨海默氏病。這些肽的實例在Philip,P.A.;Harris,A.L;PotentialforproteinkinaseCinhibitorsincancertherapy.CancerTreatment&Research.78:3-27，1995中被命名和描述。淀粉狀蛋白、淀粉樣纖維蛋白、片段和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)變性疾病和糖尿病。鈣激活中性蛋白酶和其他鈣調(diào)蛋白和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)變性病癥、腦缺血、白內(nèi)障、心肌缺血、肌肉萎縮和血小板聚集?？尚舅亍⒎渖窠?jīng)毒肽和類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療神經(jīng)變性疾病和疼痛以及腦缺血。磷脂酶A2和受體抑制/激活肽及類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療急性胰腺炎、胰腺癌、腹部創(chuàng)傷和炎癥，例如膿毒、感染、急性胰腺炎、各種形式的關(guān)節(jié)炎、癌癥、妊娠并發(fā)癥和術(shù)后狀態(tài)。鉀通道激活和抑制蛋白及類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療各種疾病。這些肽的實例描述于Edwards,G.;Weston，A.H;Pharmacologyofthepotassiumchannelopeners.CardiovascularDrugs&Therapy.9Suppl2:185-93，1995年3月。IgG激活劑、抑制劑及類似物、激動劑和拮抗劑可以用于治療自身免疫疾病和免疫功能異常。這些肽的實例描述于Mouthon，L.;Kaveri，S.V.;Spalter，S.H.;Lacroix-Desmazes，S.;Lefranc，C;Desai，R.;Kazatchkine,M.D;Mechanismsofactionofintravenousimmuneglobulininimmune-mediateddiseases.Clinical&ExperimentalImmunology.104Suppl1:3-9，1996。內(nèi)毒素和抑制劑及類似物、激動劑和拮抗劑可以用于減小心臟輸出量、全身性低血癥、減少的遞送至組織的血流和02、強(qiáng)烈的肺血管收縮和高血壓、支氣管收縮、增大的滲透性、肺水腫、通氣-灌注失衡、低氧血癥和血液濃稠。在Burrell，R;Humanresponsestobacterialendotoxin.CirculatoryShock.43(3):137-53，1994年7月中命名和描述了這些肽的實例。孤兒受體配體(包括但不限于ADNF、腎上腺髓質(zhì)素、Apdin、生長素釋放肽、肥大脫粒肽(MCD肽)、黑色素濃縮激素、傷害感受肽/痛穩(wěn)素、食欲肽、受體活性調(diào)節(jié)蛋白、硬骨魚緊張肽)。根據(jù)定義，孤兒受體并沒有與之相關(guān)的功能，但是認(rèn)為它們在將來的藥物開發(fā)中是重要的角色。這些孤兒受體配體在如下的參考文獻(xiàn)中有描述DS.OrphanGprotein-coupledreceptorsandbeyond.JapaneseJournalofPharmacology.90(2):101-6，2002;MaguireJJ.Discoveringorphanreceptorfunctionusinghumaninvitropharmacology.CurrentOpinioninPharmacology.3(2):135-9,2003;SzekeresPG.FunctionalassaysforidentifyingligandsatorphanGprotein-coupledreceptors.Receptors&Channels.8(5-6):297-308，2002;ShiauAK.CowardP.SchwarzM.LehmannJM.Orphannuclearreceptors:fromnewliganddiscoverytechnologiestonovelsignalingpathways.CurrentOpinioninDrugDiscovery&Development.4(5):575-90，2001;CivelliO.NothackerHP.SaitoY.WangZ.LinSH.ReinscheidRK.NovelneurotransmittersasnaturalligandsoforphanG-protein-coupledreceptors.TrendsinNeurosciences.24(4):230-7，2001;DarlandT.HeinricherMM.GrandyDK.OrphaninFQ/nociceptin:aroleinpainandanalgesia,butsomuchmore.TrendsinNeurosciences.21(5):215-21，1998，將其公開內(nèi)容通過引用合并于此。另一類包括糖蛋白Ilb/IIIa抑制劑。富含血小板的血栓在急性冠狀動脈綜合癥(ACS)病變中的核心作用是公知的。糖蛋白Ilb/IIIa(GpIlb/IIIa)受體拮抗劑是血小板功能的有效抑制劑，它們有望將ACS的自然史朝著好的方向影響。這類的示例性參考文獻(xiàn)包括BhattDL.Topo1EJ.CurrentroleofplateletglycoproteinIlb/IIIainhibitorsinacutecoronarysyndromes.JAMA.284(12):1549-58，2000;KereiakesDJ.OralblockadeoftheplateletglycoproteinIlb/IIIareceptor:factorfancy.AmericanHeartJournal.138(1Pt2):S39-46，1999;BassandJP.Low-molecular-weightheparinandotherantithromboticagentsinthesettingofafast-trackrevascularizationinunstablecoronaryarterydisease.Haemostasis.30S卿l2:114-21;discussion106-7，2000。含有脫氨氨基酸的肽穿過機(jī)體屏障的用途本發(fā)明涉及一種通過使用具有化合物通式I-V的殘基作為其N端的延長肽或截短肽來提高肽穿過患者機(jī)體屏障能力的方法。本發(fā)明還涉及一種治療或預(yù)防患者疾病或病癥的方法，該疾病或病癥通過給予延長肽或截短肽得到治療或預(yù)防，該延長肽或截短肽穿過機(jī)體屏障的量比不含非天然氨基酸的肽要大。本發(fā)明還涉及一種治療或預(yù)防患者腦疾病或病癥的方法，該疾病或病癥通過給予延長肽或截短肽得到治療或預(yù)防。由于無法穿過機(jī)體屏障，肽用作治療劑的用途受到限制。短語"機(jī)體屏障(bodybarrier)"在本申請中被定義為細(xì)胞膜或其他起著防止某些分子自由通過(例如，擴(kuò)散)作用的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的延長肽或截短肽的使用促進(jìn)所得到的肽穿過各種屏障。機(jī)體屏障的實例包括但不限于血腦屏障、細(xì)胞膜、腸上皮、皮膚細(xì)胞或血眼屏障。在優(yōu)選的實施方案中，機(jī)體屏障為血腦屏障。含有非天然氨基酸的肽的選擇性和穩(wěn)定性本發(fā)明的某些實施方案涉及一種通過使用上述基于所選肽序列的延長肽或截短肽提高所選肽的選擇性的方法。增強(qiáng)藥物對生物目標(biāo)的選擇性非常重要。在一個實施方案中，含有精氨酸和/或賴氨酸的肽可以根據(jù)本發(fā)明轉(zhuǎn)化成延長肽或截短肽，以提高該肽的選擇性。在另一個實施方案中，本文所公開的任何一種非天然氨基酸可以用來提高肽的選擇性。藥物組合物本發(fā)明的肽可以用于本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的任何治療方法中，以治療任何與相應(yīng)已知肽相關(guān)的疾病或生理問題。本發(fā)明的肽可以配制成藥物組合物，并可以以各種適于所選給藥途徑的劑型給藥于例如人患者等的哺乳動物宿主，所選給藥途徑即口服給藥或通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、局部或皮下途徑非腸道給藥。因此，該藥可以全身給藥，例如通過灌注或注射靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥。該肽或肽綴合物的溶液可以在水中制備，任選與五毒表面活性劑混合。分散系也可以在丙三醇、液體聚乙二醇、乙酸甘油酯及其混合物中制備，并可以在油中制備。在常規(guī)保存和使用條件下，這些制劑含有防止微生物生長的防腐劑。適合注射或輸注的藥物劑型可以包括含有活性成分的無菌水溶液或分散系或無菌粉劑，該無菌水溶液或分散系或無菌粉劑適于臨時配制成無菌可注射或可輸注溶液或分散系，任何可包封于脂質(zhì)體中。在所有情況下，最終劑型在制備和保存條件下必須是無菌的、能流動的和穩(wěn)定的。液體載體或賦形劑可以為含有如下物質(zhì)的溶劑或液體分散介質(zhì)例如，水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇、液體聚乙二醇等)、植物油、無毒甘油酯，及其合適的混合物。恰當(dāng)?shù)牧鲃有钥梢岳缤ㄟ^形成脂質(zhì)體來維持，就分散系而言，可以通過維持所需粒徑大小來維持或通過使用表面活性劑來維持。對微生物作用的預(yù)防可以通過各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、柳硫汞等來實現(xiàn)。在很多情況下，優(yōu)選含有等滲劑，例如糖，緩沖劑或氯化鈉。注射用組合物的延長吸收可以通過在組合物中使用延緩吸收的藥劑，例如單硬脂酸鋁和明膠來實現(xiàn)。無菌注射用溶液可以通過下述方法制得在恰當(dāng)?shù)娜軇┲袑⑺枇康碾幕螂木Y合物根據(jù)需要與上文列出的各種其他成分混合，然后過58濾除菌。就用于制備無菌注射用溶液的無菌粉劑而言，制備該粉劑的優(yōu)選方法是真空干燥和冷凍干燥技術(shù)，由此可以獲得活性成分以及在之前過濾除菌溶液中存在的任何其他所需成分。在一些情況下，本發(fā)明的肽也可以與藥用賦形劑例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體聯(lián)合口服給藥。該肽可被封入硬殼或軟殼明膠膠囊中，壓成片劑，或直接摻入患者飲食的食物中。就口服治療給藥而言，該肽和肽綴合物可以與一種或多種賦形劑聯(lián)合，以可吸收的片劑、口含片劑、糖錠、膠囊、酏劑、懸浮劑、糖槳、夾心劑等形式來使用。這些組合物和制劑應(yīng)當(dāng)含有至少0.1%的活性化合物。當(dāng)然，該組合物和試劑的百分比可以有所變化，并且方便地介于既定單元劑型重量的約2至約60%至約90%之間。這些治療用組合物中的肽含量為將能獲得有效劑量水平的含量。片劑、糖錠、丸劑、膠囊等還可以含有如下物質(zhì)粘合劑，如黃芪膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，如磷酸二鈣；崩解劑，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑，如硬脂酸鎂；和甜味劑，如蔗糖、果糖、乳糖和阿斯巴甜，或增香劑，如薄荷、冬青油，或者也可以加入櫻桃香精。當(dāng)單元劑型為膠囊時，除了含有上述類型的物質(zhì)外，還可以含有液體載體，如植物油或聚乙二醇。各種其他物質(zhì)可以以包衣形式或其他修飾固體單元劑型物理形式的形式存在。例如，片劑、丸劑或膠囊可以用明膠、蠟、紫膠或糖等包被。糖漿或酏劑可以含有活性化合物、作為甜味劑的蔗糖或果糖、作為防腐劑的對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯、燃料和香精，如櫻桃香精或橙香精。當(dāng)然，用于制備任何單元劑型的任何材料應(yīng)該是可藥用的，并且在所使用量的水平上基本無毒。另外，本發(fā)明的肽可摻入到緩釋制劑和裝置中。有用的固體載體包括細(xì)粒固體，例如滑石、粘土、微晶纖維素、硅石、礬土等。有用的液體載體包括水、乙醇或丙三醇或水-乙醇/丙三醇混合物，其中本發(fā)明化合物可以以有效水平溶解或分散，任選借助于無毒表面活性劑。可以加入佐劑如香料和其他抗微生物劑，以就既定用途使性質(zhì)最優(yōu)化。增稠劑，例如合成型聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽和酯、脂肪醇、改性纖維素或改性礦物質(zhì)也可以與液體載體一起使用，以形成直接用于使用者皮膚的可分散糊劑、凝膠、軟膏、皂等。本發(fā)明肽的有用劑量可以通過與它們的體外活性和在本申請所述動物模型中的體內(nèi)活性相關(guān)聯(lián)來確定。本發(fā)明肽的治療有效量需隨患者和待治療的疾病或生理問題變化，并與相應(yīng)抑制肽的有效量相關(guān)。例如，介于30至112,000ug/kg體重的治療量對靜脈內(nèi)給藥是有效的。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識到的那樣，該含量可以根據(jù)給藥方法有所變化。治療用所需的本發(fā)明肽的含量還隨給藥途徑有所變化，而且還隨所治療病癥的性質(zhì)以及患者年齡和狀況有所變化，最終由護(hù)理的內(nèi)科醫(yī)師或臨床醫(yī)師決定。該化合物可以單元劑型的形式方便的給藥;例如含有1至1000mg，方便地10至750mg，最方便地為20至500mg肽/單元劑型。理想情況下，應(yīng)該以獲得約0.1至約75iiM，優(yōu)選1至50PM，最優(yōu)選2至30uM的血漿峰濃度來給予該肽。這可以通過例如靜脈內(nèi)注射0.05至5%肽溶液(任選溶于鹽水中)來實現(xiàn)，或通過口服給予含有約l-100mg此肽的大丸劑來實現(xiàn)。所需血液水平可以通過連續(xù)輸注以提供約0.01-5.0mg/kg/hr活性成分得以維持，或通過不連續(xù)輸注含約0.4-15mg/kg活性成分得以維持。所需劑量可以分份劑量或以連續(xù)輸注形式方便地存在于單次劑量中。所需劑量也可在恰當(dāng)間隔，如以每天兩次、三次、四次或多次分劑量(sub-dose)給藥?；瘖y品制劑化妝品的一個重要作用是"美化"或使面容更漂亮。通常該作用包括對皮膚粗糙度、斑疤和膚色以及活力的改善。本發(fā)明的化妝品組合物含有常用基質(zhì)載體以及本發(fā)明的脫氨氨基酸化合物。用于此目的的本發(fā)明的化合物通常為酯、酰胺或鹽形式。一般而言，化妝品基質(zhì)取決于所配制的化妝品的種類面霜、撲面粉、粉餅、護(hù)膚霜、唇膏、胭脂等。這些基質(zhì)可以含有恰當(dāng)?shù)臒o毒色料、乳劑(emuUant)、油、蠟、溶劑、乳化劑、脂肪酸、醇或酯、樹膠、無機(jī)惰性組分等。60例如，樹膠可以包括多種已知的多糖化合物，例如纖維素、半纖維素、阿拉伯樹膠、黃芪膠、羅望子樹膠、果膠、淀粉、甘露聚糖、瓜爾豆膠、刺槐豆膠、溫柏籽膠、藻酸、角叉菜聚糖、瓊脂、蒼耳垸樹膠、葡聚糖、支鏈淀粉、殼多糖、脫乙酰殼多糖、透明質(zhì)酸、軟骨素硫酸等，多糖化合物的衍生物，例如羧甲基化衍生物、硫酸化衍生物、磷酸化衍生物、甲基化衍生物、乙基化衍生物，例如，環(huán)氧乙烷或氧化丙烯的烯化氧加成衍生物，?；苌?、陽離子化衍生物、低分子量衍生物，還可以述及其他多糖衍生物?？梢园诒景l(fā)明的外用組合物中的另一組分為粉末組分?？墒黾暗姆勰┙M分為基于如下無機(jī)組分和有機(jī)組分的粉末組分無機(jī)組分，例如滑石、高嶺土、云母、絲云母、白云石、金云母、合成云母、鱗云母、黑云母、鯉云母、蛭石、碳酸鎂、碳酸鈣、硅酸鋁、硅酸鋇、硅酸鈣、硅酸鎂、硅酸鍶、鎢酸的金屬鹽、鎂、硅石、沸石、硫酸鋇、燒結(jié)硫酸鈣(燒結(jié)石膏)、磷酸轉(zhuǎn)、氟磷灰石、羥磷灰石、陶瓷粉、金屬皂(肉豆蔻酸鋅、棕櫚酸鈣、硬脂酸銨)、氮化硼等，有機(jī)粉末組分，例如聚酰胺樹脂粉末(尼龍粉末)、聚乙烯粉末、聚甲基丙烯酸甲酯粉末、聚苯乙烯粉末、苯乙烯和丙烯酸的共聚樹脂粉末、苯胍胺樹脂粉末、硅氧垸樹脂粉末、硅氧烷橡膠粉末、硅氧烷樹脂包被橡膠粉末、聚四氟乙烯粉末、纖維素粉末等。另外，根據(jù)需要可以將通過由如下物質(zhì)處理這些粉末組分的表面獲得的粉末組分配入本發(fā)明的外用組合物中硅氧烷化合物、氟修飾的硅氧烷化合物、氟化合物、高級脂肪酸、高級醇、脂肪酸酯、金屬皂、磷酸烷基酯等?？梢允褂眉褐玖匣蛏?。可以提及的例如無機(jī)白色色素，例如，二氧化鈦、氧化鋅，無機(jī)紅色色素，例如氧化鐵(三氧化二鐵)、鈦酸鐵，無機(jī)棕色色素，例如，Y-氧化鐵；無機(jī)黃色色素，例如黃色氧化鐵，赭黃土(yellowearth);無機(jī)黑色色素，例如黑色氧化鐵、碳黑、低價氧化鐵和無機(jī)紫色色素，例如芒果紫、鈷紫，無機(jī)綠色色素，例如，氧化鉻、氫氧化鉻、鈦酸鈷，藍(lán)色色素，普魯士藍(lán)、群青，珍珠色色素，例如，氧化鈦包被的云母、氧化鈦包被的氯氧化鉍、氧化鈦包被的滑石、有色氧化鈦包被的云母、氯氧化鉍、魚鱗，金屬粉末色素，例如鋁粉、銅粉；鋯色淀、鋇色淀或鋁色淀等的有機(jī)色素，如立索玉紅B(RedNo.201)、立索玉紅BCA(RedNo.202)、色淀紅CBA(RedNo.204)、立索紅(RedNo.205)、深紫紅(RedNo.220)、郝林頓粉紅CN(RedNo.226)、巴馬通紅(RedNo.228)、永久紅F5R(RedNo.405)、永久橙(OrangeNo.203)、聯(lián)苯胺橙(OrangeNo.204)、聯(lián)苯胺黃G(YellowNo.205)、漢撒黃(YellowNo.401)、藍(lán)No.404，和其他有機(jī)色素；赤蘚紅(RedNo.3)、焰紅燃料B(RedNo.104)、酸性紅(RedNo.106)、堅牢酸性品紅(RedNo.227)、曙紅YS(RedNo.230)、紫胺R(RedNo.401)、油性紅XO(RedNo.505)、橙II(OrangeNo.205)、酒石黃(YellowNo.4)、日落黃FCF(YellowNo.5)、熒光素鈉(YellowNo.202)、喹啉黃(YellowNo.203)、堅牢綠FCF(GreenNo.3)、亮藍(lán)FCF(BlueNo.l)。本發(fā)明的化妝品組合物可以用液體來配制?？梢赃x擇在例如化妝品劑等的外用組合物中常用的揮發(fā)性組分作為該液體。具體而言，可以述及的是例如，揮發(fā)性硅油、水或低級醇(或它們的混合物)?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明的外用組合物的具體形式(例如，下文中提及的"改善粗糙的組合物"或"化妝品組合物"等)或載體類型(例如，油性基質(zhì)或乳液基質(zhì)等)適當(dāng)選擇這些揮發(fā)性組分。通過配制這些揮發(fā)性組分，就能在使用本發(fā)明外用組合物時調(diào)節(jié)產(chǎn)品的粘度，并能調(diào)節(jié)外用組合物在皮膚上的涂抹厚度。作為揮發(fā)性硅油，可以使用用于化妝品領(lǐng)域和其他外用組合物中的揮發(fā)性硅油。對其并沒有特別限定。具體而言，可以提及的是，例如，低沸點線性硅油，如六甲基二硅氧烷、八甲基三硅氧烷、十甲基環(huán)五硅氧烷、十二甲基環(huán)六硅氧垸和十四甲基環(huán)七硅氧垸、低沸點環(huán)狀硅油，例如八甲基環(huán)四硅氧垸、十甲基環(huán)五硅氧垸、十二甲基環(huán)六硅氧垸和十四甲基環(huán)七硅氧垸等。本發(fā)明外用組合物可以根據(jù)需要在不損害本發(fā)明所需效果下含有以下作為輔助組分的其他組分?？梢詫⑾铝形镔|(zhì)作為油性組分配制于本發(fā)明的外用組合物中，例如烴油，例如液體石蠟、等液(isoliquid)石蠟、角鯊垸、油和脂，例如，橄欖油、棕櫚油、椰子油、澳洲堅果油、希蒙得木油、高級醇類，例如異硬脂醇，酯油，如高級脂肪油和肉豆蔻酸異丙酯等。本發(fā)明的外用組合物中的這些油性組分，特別是形成極性油的油性組分能在一段時間內(nèi)改善穩(wěn)定性。另外，可以將下述物質(zhì)混于本發(fā)明的外用組合物中二苯甲酮衍生物、對氨基苯甲酸酯衍生物、對甲氧基琥珀酸酯衍生物、水楊酸酯衍生物和其他UV吸收劑；潤濕劑、血液循環(huán)促進(jìn)劑、清涼劑、防汗劑、殺菌劑、皮膚活化劑、抗炎劑、維生素、抗氧化劑、抗氧化劑佐劑、防腐劑、香精和芳香劑等。本發(fā)明化妝品制劑可以在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中生產(chǎn)。這些介質(zhì)包括但不限于糊、粉末、餅、霜、油、洗劑、脂膏、蠟或類似化妝品基質(zhì)。生產(chǎn)方法包括將化妝品成分和通式I-V(優(yōu)選作為酯、酰胺或鹽)的任一種脫氨氨基酸化合物組合。將該組合物混合、揉捏、碾壓、研磨、加熱或進(jìn)行其他處理以形成基本均一的備用物質(zhì)或混合物?？梢酝ㄟ^使用捏合機(jī)、研磨輪、滾輪、混合機(jī)、熱交換器、擠壓機(jī)等完成這些步驟。如上所述，通過對天然肽神經(jīng)降壓肽的修飾來舉例說明本發(fā)明。在如下部分中詳細(xì)討論了本發(fā)明的技術(shù)背景、對神經(jīng)降壓肽和相應(yīng)肽的修飾及其生物活性。神經(jīng)降壓肽的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)1973年Carraway和Leeman首次從牛下丘腦中分離出作為降壓肽的神經(jīng)降壓肽(NT)。此后發(fā)現(xiàn)NT在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和外周具有多種不同的生理效應(yīng)。通過直接將NT注射到大腦中可以促進(jìn)低體溫、抗傷害感受、d-苯異丙胺誘導(dǎo)的過度運(yùn)動的衰減以及巴比妥鹽誘導(dǎo)的鎮(zhèn)靜作用的增強(qiáng)。在外周，NT充當(dāng)誘導(dǎo)低血壓和減少胃酸分泌的激素。從結(jié)構(gòu)上來看，NT是具有如下序列的線性十三肽pGlu-Leu-Tyr-Glu-Asn-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-OH。在NT石開究早期發(fā)現(xiàn)C端六肽片段Arg8-Arg9-Pro^TyrU-Ile^Leu13[NT(8-13)]，在產(chǎn)生NT的體外和體內(nèi)生理效應(yīng)上是等效的。1990年，Tanaka及其同事首次從大鼠大腦中鑒定了NT受體(NTR,)。此后，人NTR,被成功克隆和表達(dá)。這兩者均為含有7個跨膜(7TM)結(jié)構(gòu)域的典型G蛋白偶聯(lián)受體，并具有84%同源性。NTR,激活后，包括cGMP產(chǎn)生、鈣動員和磷脂酰肌醇循環(huán)在內(nèi)的第二信使系統(tǒng)就被激發(fā)。NTR,的mRNA在大鼠和人的腦和腸中均有表達(dá)。還在大鼠和人腦中鑒定了第二種NT受體(NTR2)，該受體對NT的親和力顯著低于NTR,(Kd分別為^2.5和0.5nM)(23-25)。NTR2也是一種7TM/G-蛋白偶聯(lián)受體，但是與NTR,相比，它具有較短N(yùn)端胞外尾部，并具有較長第三胞漿內(nèi)環(huán)。第三種受體(NTR3)從人腦cDNA文庫克隆得到，發(fā)現(xiàn)它與之前克隆的gp95/分選蛋白相同。NTR3是僅有一個跨膜區(qū)域的非G蛋白偶聯(lián)分選蛋白。NT作為內(nèi)源性神經(jīng)安定藥幾種不同的證據(jù)暗示了NT在神經(jīng)分裂癥中的病例生理學(xué)中的作用。精神分裂癥的多巴胺理論中的研究進(jìn)展在中腦緣多巴胺系統(tǒng)中的各種神經(jīng)回路的匯集中的一個漏洞是引起該病癥出現(xiàn)的原因。NT系統(tǒng)的解剖定位使它與腦中的谷氨酰胺能系統(tǒng)、多巴胺能系統(tǒng)、GABA能系統(tǒng)以及5-羥色胺能系統(tǒng)相互作用。具體而言，NT系統(tǒng)和多巴胺系統(tǒng)在被認(rèn)為引起妄想和錯覺的腦區(qū)-伏核內(nèi)緊密相關(guān)。與上述神經(jīng)元系統(tǒng)密切相關(guān)的腦區(qū)-腹側(cè)被蓋區(qū)中NTR,受體密集。幾乎90%的NT受體位于多巴胺能神經(jīng)元，并且腦內(nèi)超過80。/。的多巴胺神經(jīng)元表達(dá)NTR,。精神分裂癥中所涉及的NT系統(tǒng)和腦區(qū)的共區(qū)域化也暗示著其參與。神經(jīng)降壓肽及其生物活性由于NT被推測為一種"內(nèi)源性神經(jīng)安定藥"并且NT(8-13)被鑒定為其活性片段，因此已經(jīng)作出很多努力開發(fā)NT(8-13)衍生物作為可能的抗精神病藥物。兩個小組，具體是Eisai制藥公司(日本，東京)和Richelson石開究小組(MayoClinic,Jacksonville,FL)，已經(jīng)制備了多種有望稱為抗精神病藥物的NT(8-13)類似物的衍生物。具體而言，在Arg8、Arg9、Tyr11和lie12的氨基酸取代已經(jīng)產(chǎn)生了幾種類似物，這些類似物在外周給藥后在中樞起作用。Eisai化合物(Eisai六肽)是外周給藥后引起行為效應(yīng)的第一個NT(8-13)類似物。但是，摻入該肽的各種修飾使得該肽對NTR,的親和力損失700倍。另外，該類似物口服給藥后不能引發(fā)中樞活性。進(jìn)來，Richelson小組已經(jīng)開發(fā)出作為NT(8-13)類似物的NT69L，該物質(zhì)保持對NTR,的納摩爾結(jié)合親和力(Kd=1.55nM)(55)，并且在注射lmg/kg后表現(xiàn)出顯著的低體溫效應(yīng)(90分鐘PI時-5.3t:)(41)。NT69L還使由可卡因和d-苯異并胺所誘導(dǎo)的過興奮衰減。但是，在長期給予該化合物后，觀察到對其低體溫效應(yīng)以及對d-苯異丙胺誘導(dǎo)的過興奮的抑制的耐受性。同Eisai六肽一樣，NT69L在口服給藥后僅產(chǎn)生輕微的低體溫效應(yīng)。實施例實施例l一本發(fā)明NT肽的神經(jīng)學(xué)效應(yīng)的概括合成了根據(jù)本發(fā)明(參見之前的概述和實施例)制備的NT(8-13)的N端a甲基a脫氨高賴氨酸和鳥氨酸類似物，并在預(yù)測抗精神病潛能的多種行為分析中就其活性進(jìn)行了篩選。口服給藥后，這些肽以劑量依賴方式引起低體溫。另外，口服給藥這些肽顯著減少了d-苯異丙胺誘導(dǎo)的過度運(yùn)動，該過度運(yùn)動為己有的或潛在的APD治療有效性的一個量度。在這些分析中，口服給藥后引發(fā)顯著反應(yīng)的低劑量肽(10mg/kg)是有意義的。該肽在重復(fù)給藥后還表現(xiàn)出維持有效性的能力。事實上，它們表現(xiàn)出在一段時間內(nèi)增大最大低體溫反應(yīng)的能力，這表明重復(fù)給藥實際上提高了其CNS活性。因此，本發(fā)明的NT肽表現(xiàn)出與已知的天然存在的肽NT相似的生物活性，并且更具有選擇性。這些效果的詳細(xì)內(nèi)容如下。低體溫作為CNS活性的初篩。直接給藥至CNS時，NT引起低體溫。因此，所引起的低體溫可以用于確定本發(fā)明的NT(8-13)肽在外周給藥后穿過BBB的能力，并且可以用于間接確定其體內(nèi)CNS活性。NT的低體溫效應(yīng)可以歸因于其對NTR,的作用，該NTR^是在精神分裂癥的病理生理學(xué)中最常涉及的NTR。因此，表明IP注射后引起低體溫的NT(8-13)肽為抗精神病劑。顯著的低體溫效應(yīng)將證明該肽顯著改善了血液穩(wěn)定性和膜穿透性。IP注射是確定神經(jīng)降壓肽類似物穿過BBB的程度的標(biāo)準(zhǔn)給藥途徑。該方法和方案在實施例部分提供。IV給藥產(chǎn)生完全可以供全身循65環(huán)的劑量。相比而言，IP注射是更為嚴(yán)格的穩(wěn)定性測試，因為該肽首先要面臨肝臟中的首過代謝。5mg/kgIP注射后，肽28-30的低體溫效應(yīng)顯示于表4中。每種肽均在5小時內(nèi)表現(xiàn)出顯著效應(yīng)。這三種肽的低體溫結(jié)果表明a垸基基團(tuán)對N端胺基團(tuán)(即，a甲基基團(tuán))的取代并沒有失去NT(8-13)肽的體內(nèi)活性。就用作抗精神分裂藥物而言，評估了在口服給藥后這些肽引發(fā)CNS活性的能力。表4NT(8-13)類似物的氨基酸序列肽氨基酸序列N端910II1213c端<ABS201)CH3L-HlysL-ArgL-ProL-TyrL-/LeuCOOHKH29CH3L-ArgL-ProL隱TyrLwLeuL-LeuCOOHKH30CH39L-ArgL-ProL-TyrCOOH表5NT(8-13)和NT(8-13)類似物IP給藥的低體溫反應(yīng)肽at，鵬(min)bBT中的A(0C)CNT(8-13)90-0.45±0.17dABS201150-2.51土0.17KH29150-3.75±0.24KH30300-3.84±0.20a所有肽的IP劑量為5mg/kg。btmax(min)=溫度下降最多時的時間。eBT中的A(。C)-在tmax測量的體溫下降值。d對于所有天數(shù)，N=5?？诜o藥。開發(fā)作為抗神經(jīng)分裂藥物的NT(8-13)肽的目的在于確定其在口服給藥后引發(fā)CNS活性的能力。已知的NT肽、NT69L和Eisai六肽在口服給藥時，在這方面不能引發(fā)中樞活性。因此，就N端甲基肽28-30在口服給藥后，引起低體溫的能力對其進(jìn)行了測試。本發(fā)明肽的一個實例ABS201表現(xiàn)出高于2'C的最大低體溫反應(yīng)(表6)，并且其最大低體溫效應(yīng)與IP給藥后的低體溫效應(yīng)相同(圖9)，這產(chǎn)生了約25%的口服生物利用度。雖然肽29和30也具有口服活性，但是其口服活性與IP活性的比率不如ABS201的平衡。ABS201的口劑量肽ABS201a0.1mg/kg-1.14±0.210,5mg/kg-1.92±0.121.0mg/kg-2,63±0.215.0mg/kg」-3.61±0.22a體溫變化rc)是每單次劑it所記錄的最大下降值。精神分裂癥的研究。d-苯異丙胺("DA激動劑")所引起的運(yùn)動阻斷已經(jīng)成為已有的或潛在的候選藥物治療精神分裂癥的治療效果的標(biāo)準(zhǔn)量度。該模型起作用是基于這樣的假設(shè)即對中腦緣DA系統(tǒng)中的DA受體的直接剌激可以弓1起運(yùn)動反應(yīng)。嚙齒類中通常被定義為緊張性不動狀態(tài)的全身僵硬癥被認(rèn)為與人的EPSE(錐體外副作用)相似。因此，全身僵硬癥為成功的候選藥物應(yīng)避免的副作用。同時，候選藥物在大鼠中引起全身僵硬癥的程度也可以用作與該具體候選物相關(guān)的EPSE可能出現(xiàn)的一個預(yù)示。低體溫分析。為檢測ABS201的抗精神病性質(zhì)，制作了IP給藥后誘導(dǎo)低體溫的劑量-反應(yīng)曲線。另外，測量了口服給予ABS201(10mg/kg-30mg/kg)所引發(fā)的低體溫效應(yīng)。還測量了IP和口服給藥后ABS201減輕d-苯異丙胺誘導(dǎo)過度運(yùn)動的能力。為評價對ABS201延長治療所引起的CNS活性的影響，每日重復(fù)給藥后測量了低體溫和d-苯服活性是支持其作為進(jìn)一步評估抗精神病潛能的先導(dǎo)NT(8-13)類似物的重要因素。表6長期IP給藥ABS201的低體溫反應(yīng)0.70±0.201202.72±0.24902.85±0-261203.74±0-131203.71±0.13903.83±0.24a所有天的IP劑量為5mg/kg。btmax(min)=溫度下降最多時的時間。^BT中的A(°C)^在t^x測量的體溫下降值。d對于所有肽，N=5。表7IP給藥后肽ABS201的最大低體溫效應(yīng)的比較水天天天天天J12345:皿第第第第第67異丙胺誘導(dǎo)過度運(yùn)動的衰減。最后，用單杠測試(horizontalbartest)作為人EPSE預(yù)示的全身僵硬癥。IP注射后濃度在0.1-10mg/kg范圍內(nèi)的ABS201的劑量-反應(yīng)曲線(圖ll)給出了一些矛盾的結(jié)果。首先，5mg/kg所引發(fā)的最大效應(yīng)(-3.61±0.22°C，150分鐘PI)完全高于初篩后所觀察到的最大效應(yīng)(-2.51±0.17°C，150分鐘PI)。這種偏差最可能是由于影響大鼠反應(yīng)的環(huán)境因素(空氣溫度、直腸探針、大鼠個頭等)所引起的。最重要的是，即便有這些差異，ABS201仍可繼續(xù)引發(fā)顯著的CNS效應(yīng)。ABS201的EDs。值為0.943mg/kg，這有利地與具有CNS活性的其他NT(8-13)類似物相當(dāng)(41，60)。ABS201口服給藥后也以劑量依賴方式引起低體溫(圖12)。顯著低體溫效應(yīng)被證明出現(xiàn)在10mg/kg，此為測試的最低劑量(-1.02±0.10°C，150分鐘PI)?？诜o藥ABS201的ED5o值的得出是不實用的，這是由于非常量的肽必需產(chǎn)生完整劑量-反應(yīng)曲線。已經(jīng)作為抗精神病化合物開發(fā)的以前的NT(8-13)類似物含有Trp11取代。本申請中列出的研究證據(jù)支持此修飾破壞了NT類似物的口服活性的理論。需要進(jìn)一步研究確定Try11在NT(8-13)類似物的口服生物利用度中起何具體作用。d-苯異丙胺("DA激動劑")所引起運(yùn)動的阻斷已經(jīng)成為已有的或潛在的精神分裂癥候選藥物的治療效果的標(biāo)準(zhǔn)量度，并且目前作為候選物處于研究中的NT(8-13)類似物己經(jīng)證明具有以劑量依賴方式降低d-苯異丙胺誘導(dǎo)過興奮的能力。聲和光衰減運(yùn)動盒可以用于測量潛在候選物降低d-苯異丙胺誘導(dǎo)過興奮的能力。還檢測了不同劑量ABS201對d-苯異丙胺誘導(dǎo)過興奮的影響。所有被測劑量的ABS201顯著減輕了過度運(yùn)動(未給出劑量3mg/kg和10mg/kg的數(shù)據(jù))?，F(xiàn)有APD的另一個標(biāo)志是減弱自發(fā)活動能力的能力。所有ABS201劑量組在藥物階段的反應(yīng)顯著低于鹽水組，這表明ABS201有減少自發(fā)活動的能力。ABS201口服給藥后也證明具有使d-苯異丙胺所誘導(dǎo)的過度運(yùn)動衰減的能力。在給藥階段，只有劑量10和30mg/kg減弱了自發(fā)活動能力。劑量20mg/kg沒有觀察到顯著性最大可能使由于該組大鼠反應(yīng)的輕微變異所引起的一個意外。但是，在基線相未檢測到劑量的主要效應(yīng)，這表明不同劑量組之間基線活動沒有顯著差異。每日重復(fù)給藥后ABS201維持顯著的CNS效應(yīng)(表6)，并且在5天時間段內(nèi)絕對低體溫反應(yīng)增大。對第1天和第5天的ABS201所誘導(dǎo)低體溫進(jìn)行了比較。第5天最大低體溫反應(yīng)的獲得(90分鐘)比第l天的(120分鐘)快。與第1天相比，第5天的最大低體溫反應(yīng)不能維持較長一段時間，這表明盡管重復(fù)給藥并不降低最大效應(yīng)，但是它能減少低體溫效應(yīng)的持續(xù)時間。每日重復(fù)給藥對ABS201使d-苯異丙胺所誘導(dǎo)的過度運(yùn)動衰減的能力沒有影響。急性給藥組和長期給藥組均降低了過興奮，該過興奮的降低在苯異丙胺給藥后幾乎兩個小時內(nèi)使顯著的。重要的是，ABS201長期給藥并不破壞其對自發(fā)活動能力的抑制效果。全身僵硬癥分析。在實驗室測試中，全身僵硬癥的特征在于動物被放置成為不自然的姿勢時，它不能糾正其位置。全身僵硬癥測試受到多個變量的顯著影響。這些變量包括新環(huán)境引起的應(yīng)激導(dǎo)致的全身僵硬癥的抑制作用和對同一動物反復(fù)測量后產(chǎn)生的習(xí)得"假全身僵硬癥"作用。為設(shè)法避開這些可能的致混淆因素，僅在安靜受控環(huán)境中對動物進(jìn)行一次測試。外周給藥后ABS201(5mg/kg)或生理鹽水均不能引起全身僵硬癥。氟哌啶醇是一種已知的能在大鼠中產(chǎn)生完全全身僵硬癥反應(yīng)的典型抗精神分裂藥物，它引起持續(xù)超過30秒的全身僵硬癥。這些結(jié)果表明ABS201在外周給藥后不引起全身僵硬癥，這是目前具有臨床有效的候選物的標(biāo)志。使用CACO-2細(xì)胞的生物利用度研究。來源于人結(jié)直腸癌的Caco-2細(xì)胞可以自發(fā)分化成為具有發(fā)育良好的微絨毛和刷狀緣酶的極性細(xì)胞。這些特征使得該細(xì)胞成為極好的人小腸模型。已經(jīng)鑒定出Caco-2細(xì)胞模型中化合物的攝入和化合物的口服生物利用度之間關(guān)系密切。ABS201在大鼠血清中可以穩(wěn)定超過24小時，但是它在細(xì)胞中的穩(wěn)定性尚未確定。因此，確定攝入實驗中完整肽進(jìn)入Caco-2細(xì)胞中的能力將給出口服生物利用度和細(xì)胞穩(wěn)定性。反相HPLC是分析溶解的細(xì)胞組分ABS201和ABS降解產(chǎn)物的理想方法。該分析將給出口服生物利用度和細(xì)胞穩(wěn)定性?？梢栽诩榷ㄩg隔收集各流分并通過LSC對放射活性進(jìn)行計數(shù)。通過經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)梯度測定ABS201洗脫時間，在攝入實驗后可以對Caco-2細(xì)胞的內(nèi)容物進(jìn)行直接比較。為了驗證完整肽進(jìn)入Caco-2細(xì)胞，并初步嘗試評估細(xì)胞培養(yǎng)物中肽的穩(wěn)定性，在細(xì)胞攝入后進(jìn)行了分析ABS201和RP-HPLC測定。孵育2分鐘后，使用HPLC技術(shù)可以鑒定細(xì)胞內(nèi)的完整ABS201。這些研究證明ABS201可以被Caco-2細(xì)胞大量攝入，由此表現(xiàn)出其口服生物利用度。實施例2—化合物合成給出以下實施例和方案是為了給本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員提供如何制備和評估本申請所要求保護(hù)化合物的完整公開和描述，純粹是為了舉例說明本發(fā)明，無意于限制本發(fā)明人所認(rèn)定的發(fā)明范圍。已經(jīng)努力確保數(shù)字(例如含量、溫度等)的準(zhǔn)確性，但還是應(yīng)該考慮到一些錯誤和偏差。除非另外指出，否則部分為重量份，溫度為。C并在室溫，壓力為大氣壓或接近大氣壓。原料。如果沒有另外指出，溶劑購自FisherScientific(Pittsburgh,PA)，試劑購自Aldrich(Milwaukee,WI)?？s略詞。Trisyl-N3即2,4,6-三異丙基苯磺酰疊氮化物；Et3N即三乙胺；t-BuCOCI即三甲基乙酰氯；n-BuLi即正丁基鋰；&即氫氣；Pd-C即活性碳上的鈀；Xps即(S)-(-)-4-苯甲基-2-惡唑垸二酮；KHMDS即雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鉀；CH3l即甲基碘；&02即過氧化氫；LiOH即氫氧化鋰；THF即四氫呋喃；CH2Cl2即二氯甲烷；MgS04即硫酸鎂；Hex即己烷；EtOAc即乙酸乙酯；NaHC03即碳酸氫鈉；HC1即鹽酸；N2即氮氣；&0即蒸餾水。(3pS),化)-:3-(2-甲基-5-溴-l-氧代戊酰)-4-(苯甲基)-2-惡唑烷二酮(24a)(圖3)。按照之前所述(57)的制備中間體23a。將17.4ml(5當(dāng)量)雙(三甲基甲硅垸基)酰胺鉀(KHMDS)溶液加入100ml無水四氫呋喃(THF)中并在正氮氣(N2)壓力下冷卻至-78。C，并將管子插入KHMDS溶液中。在-78"C下將此混合物攪拌30分鐘使得形成烯醇化物。通過插管將甲基碘(CH3I)(1.90mL，2當(dāng)量)加入溶液中并在-78"C攪拌l小時，然后用4.09mL(5當(dāng)量)冰醋酸終止反應(yīng)。將溶液在攪拌條件下在兩個小時內(nèi)加溫至室溫，真空除去THF。將得到的黃色漿液溶于200mL半飽和鹽水中并用CH2C12(3X100mL)萃取。合并CH2Cl2層，用無水硫酸鎂(MgS04)干燥、過濾，并真空蒸發(fā)，得到黃色油狀物。粗制油狀物在硅膠上用3:1己垸:乙酸乙酯(Hex:EtOAC)洗脫純化，得到2.81克純26a(產(chǎn)率為52。/。)。'HNMR(400MHz,CDC13)S7.38-7.15(m，5H),4.71-4.63(m,1H)，4.18-4.15(d，J=5.0Hz,2H),3.71-3.65(m，1H),3.41-3.33(m，2H)，3.27-3.20(dd,J=4.0,13.8Hz，1H),2.89-2.81(dd，J=10.0,14.2Hz,1H)，1.90-1.55(m，4H)，1.24-1.20(d,J=7.4，3H);13CNMR(100MHz,CDC13)S176.8，153.2,135.2，129.6,129.1，127.6,66.4，55.6，38.3，37.6,33.8,32.2，31.8,17.9。(3(2S),4S)-3-(2-甲基-6-溴-l-氧代己酰)-4-(苯甲基)-2-惡唑垸二酮(24b)。用稍作改動的方法獲得24b。將KHMDS加入23b后，隨后加入5當(dāng)量CH3I，并且該反應(yīng)在-78。C于氮氣中攪拌1小時。用冰醋酸終止反應(yīng)以及隨后的萃取和純化的方案如24a所述。用100%CH2Cl2洗脫的進(jìn)一步硅膠純化獲得了純的24b(產(chǎn)率為10%)。"HNMR(400MHz，CDC13)57.36-7.19(m,5H),4.72-4.65(m，1H),4.25-4.16(dJ=4.2Hz,2H)，3.77-3.67(m，1H),3.46-3.36(t,J=7.0Hz，2H)，3.29-3.22(dd，J=4.0,14.0Hz,1H),2.82-2.74(dd,J=9.0，14.0Hz,1H),1.92-1.74(m，3H)，1.50-1.42(m,3H),1.25-1.21(d，J=7.2Hz，3H);13C麗R(100MHz,CDC13)5176.9，153.2,135.3,129.6，129.1，66.4，55.6，38.1,37.8,34.1,32.8，32.5，26,1,18.7。。(2S),化)-3-P-甲基溴-l-氧代庚基)-4-(苯甲基)-2-惡唑烷二酮(24c)。按照獲得26a所概括的方法由化合物23c制得24c(產(chǎn)率為56%)。'HNMR(400MHz,CDC13)S7.41-7.22(m,5H)，4.74-4.66(m,IH)，4.25-4.19(d，J=4.0Hz,2H),3.77-3.70(m,IH),3.45-3.39(t,J=7.0Hz:2H),3.31-3.23(dd,J=3.7，13.7Hz,IH),2.84-2.77(dd，J=10.0,12.5Hz，IH),1.91-1.77(m,3H)，1.50-1.32(m,5H)，1.25-1.20(d,J=7.0Hz,3H);13CNMR(100MHz,CDC13)S177.2,153.1,135.4,129.7，129.1,127.5，66.4,55.7,38.2，37.9，343，33.4，32.8,28.4，27.7,17.8。2(S)-甲基-5-溴戊酸(25a)。將溶于lOOmLTHF和40mLH20中的24a(10.41g，29.4mmol)溶液在攪拌條件下冷卻至0°C。向該溶液中加入12.12mL(3.5當(dāng)量)30%過氧化氫(H202)，然后加入2.41g(2當(dāng)量)氫氧化鋰(LiOH)，將此溶液在0i:攪拌50分鐘。50分鐘后，加入94mL亞硫酸鈉(0.183g/mLH20)禾Q288mL0.5N碳酸氫鈉(NaHCO》。真空除去THF，用CH2C12(3XlOOmL)萃取剩余水溶液。用25%HC1將水層酸化至pH2。并用EtOAc(3X100mL)萃取。將EtOAc部分合并，真空濃縮得到4.01g蒼白色油狀物27a(產(chǎn)率為70%)。'H麗R(400MHz,CDC1:,)53.46-3.38(t,J=6.0Hz,2H),2.56-2.46(m，1H),1.95-1.60(m,4H)，1.25-1.20(d，J=7.0Hz,3H);13CNMR(100MHz,CDC13)S183.1,38.9,33.6,32.1,30.5,17.3。2(S)-甲基-6-溴己酸(25b)。按照獲得化合物25a所概括的方法由化合物24b制得25b，產(chǎn)率為77%。'HNMR(400MHzCDC13)53.45-3.38(t,J=6.2Hz,2H),2.55-2.45(m，1H),1.92-1.85(m，2H)，1.77-1.68(m，IH)，1.55-1.46(m,3H)，1.24-1.19(d,J=7.8Hz,3H);13C畫R(lOOMHz,CDC13)5183.5,39.5,33.8,32.9,32.7,26.0，17.2。2(S)-甲基-7-溴庚酸(25c)。按照獲得25所概括的步驟由化合物24c制得25c，產(chǎn)率為74%。'HNMR(400MHz,CDC13)53.43-3.36(t，J=6.8Hz,2H),2.51-2.42(m，1H),1.90-1.64(m,3H),1.49-1.32(m,5H)1.20-1.14(d,J=7.0Hz,3H);13C畫R(100MHz,CDC13)S183.6,39.5，34.1,33.5,32.7,28.2,26.6，17.1。實施樹3—a甲基,a脫氨,"-N取代高賴氨酰和鳥氨酰(8)神經(jīng)降壓肽(8-13)合成了a甲基，a脫氨"N-高賴氨酰和鳥氨酰(8)神經(jīng)降壓肽(8-13)(圖7)。如概述部分所述，使a-甲基溴代酸27a和c與樹脂結(jié)合肽偶聯(lián)。如下進(jìn)行固態(tài)偶聯(lián)。將結(jié)合NaFmoc亮氨酸的樹脂在DMF中溶脹，然后用哌啶(20%，溶于DMF中)進(jìn)行Fmoc裂解。真空過濾除去哌啶溶液，用DMS和二氯甲烷(各均為5X)洗滌樹脂結(jié)合氨基酸。在DMF中用HOBt(4當(dāng)量)PyBOP(4當(dāng)量)和DIPEA(10當(dāng)量)將氨基酸活化并直接加至肽反應(yīng)池中。將氨基酸偶聯(lián)6小時，用DMF和二氯甲烷洗滌樹脂，并用Kaiser測試監(jiān)測是否存在游離胺。必要時，將殘基重偶聯(lián)。用隨后的氨基酸重復(fù)該過程，以獲得次末肽序列(五聚體)。然后如上所述將樹脂結(jié)合五聚體的整分試樣與適當(dāng)?shù)腃O溴代羧酸偶聯(lián)，以獲得N-"溴代?；寰垠w。然后如這些實施例所述使N-co酰基五聚體與氨、二甲胺或三甲胺反應(yīng)，以生成本發(fā)明的所需肽。用含有恰當(dāng)清除劑的TFA溶液對側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)進(jìn)行酸催化脫保護(hù)。以15%至75%B的線性梯度、4mL/分鐘恒定流速進(jìn)行55分鐘的RP-HPLC純化得到純的co溴代肽53和54。這些溴代肽在40。C于乙醇(EtOH)中與150當(dāng)量氫氧化銨(29%,溶于H20)、甲胺(40%，溶于H20)、二甲胺(40%，溶于H20)或三甲胺(40%，溶于H2(D)反應(yīng)12小時。真空除去溶劑，并將粗制肽溶于流動相中，并用2%至50%B的線性梯度、4mL/分鐘的恒定流速進(jìn)行65分鐘的純化。對肽進(jìn)行表征并通過MALDI-TOFMS在VoyagerDE-STRSystem4117質(zhì)譜儀(AppliedBiosystems,FosterCity，CA)上分析純度。在體內(nèi)使用純度大于95%的肽。實施例4一抗精神病的NT肽類似物的鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。所評價的肽類似物含有一個非天然氨基酸(示意圖1)或脫氨基酸(示意圖2)。L-高-L>SL-Ly:R-NHMc42:a-NHMc7n1:R—NHMc!l-固c:8"—2:n一l:R-NMe^12R>&;R"-H17R一Et示意圖l.產(chǎn)生NT類似物中所用的非天然氨基酸。RCOOH22n-3;R"NHMc25n-2;R。NHMe28n-l;R-NHMe24n3;R=NMe;+27n-2;R*NMe/"30n城I;R一NMe，+32R，—Mc;R"膽Me37RMc40n-242R=Me,X=Me33R'Et;R"。H38REt"R'H，X，H34R，》Et:iT-El35R'Et;R'，=Mes示意圖2.產(chǎn)生NT類似物中所用的脫氨氨基酸。基準(zhǔn)化合物。對約50各化合物進(jìn)行初篩所得到的，在表8中所列出的化合物被選為用作抗精神病化合物進(jìn)行進(jìn)一歩的測試和開發(fā)。這些化合物以神經(jīng)降壓肽片段NT(8-13)為基礎(chǔ)。這些化合物具有如下有益的特征均作為競爭性激動劑在體外結(jié)合NTR-1(涉及精神分裂癥的腦神經(jīng)降壓肽受體)，均在IP注射大鼠時顯示出中樞活性，此時使用低體溫作為中樞活性的指示標(biāo)準(zhǔn)，它也通過NTR-1結(jié)合出現(xiàn)，并且在精神分裂癥的大鼠行為模型中引發(fā)恰當(dāng)?shù)幕钚?。?.以NT[8-131為基礎(chǔ)的肽的結(jié)構(gòu)肽#結(jié)構(gòu)'NT(8-13)NH2-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-COOHABS13N3-L-高賴氨酸-Arg-Pro-Tyr-teWLeu-Leu-COOHABS41N3-13-Arg-Pro-Tyr"eWLeu-Leu-COOHABS44N3-7-Arg-Pro-Tyr-/eWLeu-Leu-COOHABS46N3-9-Arg-Pro-Tyr-/er/Leu-Leu-COOHABS20143-Arg-Pro-Tyr-tertLeu-Leu-COOHABS20228-Arg-Pro-Tyr-/eWLeu-Leu-COOHABS20329-Arg-Pro-Tyr-/ewLeu-Leu-COOH2j肽結(jié)構(gòu)中加粗的數(shù)字表示示意圖1和2中所示非天然Arg和Lys殘基。為了進(jìn)一歩表征這些化合物，口服給藥和IP給藥每個化合物來評價低體溫誘導(dǎo)(NTR-1受體結(jié)合)活性。如表9所示，除ABS201外的所有化合物表現(xiàn)<10%的口服活性。引人注意的是，與現(xiàn)有活性最強(qiáng)的化合物相比，ABS201口服活性升高了300%。另夕卜，與IP給藥相比較，ABS201在口服給藥時反應(yīng)更快。這在NT(8-13)衍生物中是獨特的。表9.IP和口服給藥后NT(8-13)類似物的低體溫效應(yīng)。肽t^ax(min)BT中的A(。c)口服劑量bdtn^c(min)BT中的A(。C)App-口服鹽水240-0.60土180-0.64±NAABS13150-4.26±卯-1.66±ABS31ISO-6.87±150-1.05±NAABS44150-5.07士150-1-58±ABS46180-4.68±180-2.03±ABS201150-2.51土卯-2.49±ABS202150-3.75±120-1.09±NAABS203300-3.84±150-1.30±NAa對于所有肽，IP劑量為5mg/kg。b對于所有肽，口服劑量為20mg/kg。etmax(min)=最大溫度降低時的時間。dBT中的A(°0=在tmax時測量的體溫降低。e表示顯著的應(yīng)答(p<0.05)。f近似口服生物利用度可以從每種給藥方案的低體溫曲線的相對面積計算得到，并以所給予化合物的量進(jìn)行校正。75SNA-不明顯(即，口服給藥相對于基線不顯著)。實施例5—ABS201神經(jīng)測試的實驗方案總體動物實驗方案。雄性SpragueDawley大鼠(250-350g)或Brattleboro大鼠(270-310g)從Harlan(Indianapolis,IN)獲得并放入AAALAC批準(zhǔn)的恒溫恒濕動物房中。光照控制為12hr光照:黑暗循環(huán)，并在0700hr給予光照。每個籠子圈養(yǎng)兩只動物并喂食實驗室食物和隨意飲水。所有實驗在光照循環(huán)過程中進(jìn)行。動物管束。將大鼠放入裝有木釘?shù)腜las-Labs⑧塑料籠中以限制其運(yùn)動。將礦物油潤滑的直腸溫度探頭(Physitemp,RET-2，Clifton，NJ)插入每只動物的直腸中。將探頭連接到與熱電偶選擇器(Physitemp,SWT-5)連接的微探針溫度計(Physitemp,BAT-12)上。在IP注射之前，讓大鼠在籠子里適應(yīng)1個小時。肽制備。將所測試的每種肽溶解于0.9%NaCl至用于I.P.注射的合適終濃度(lmL0.9%NaCl中10、30或100mgNT[8-13]或等摩爾等價類似物)。對于口服，通過管飼將測試物質(zhì)直接給藥于動物的胃部。對照包括給藥0.9MNaCl。因此，將肽溶解于鹽水中，并在平衡階段后，給予大鼠IP注射肽(5mg/kg)或鹽水(lmL/kg)。最初的溫度值是在注射之前和之后立即的大鼠平均溫度。隨后每30分鐘進(jìn)行測量，持續(xù)5h。使用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，接著Tukey'sposthoc測試，用于多項比較，使用GraphPadPrism⑧來測量顯著性。對于p0.05，認(rèn)為結(jié)果是顯著性的。低體溫。低體溫誘導(dǎo)是神經(jīng)降壓肽衍生物進(jìn)入腦并結(jié)合NTR-1(精神病涉及的受體)的簡單而直接的測量。對于這些實驗，將動物單個圈養(yǎng)在沒有床的Plexiglas籠子里，25°C。對于每只大鼠，將電熱調(diào)節(jié)器探針置入直腸中4.5cm;記錄基線溫度1小時，使得在注射化合物前適應(yīng)籠子。低體溫誘導(dǎo)的劑量-應(yīng)答曲線。所有動物管束和低體溫實驗方案同上文所述。使用GraphPadPrisn^得到變斜率測量反應(yīng)曲線和ED5。值。d-苯異丙胺誘導(dǎo)的過度運(yùn)動。根據(jù)經(jīng)驗，如上文所述將I雄性Sprague-Dawley大鼠放入籠子中。測試前將大鼠處理三天，以使在測76試日實驗者所引起的過度運(yùn)動最小化。在實驗中，聲和光衰減的自動光電元件光束活動盒(AccuScanInstruments,Inc.,Columbus,OH)用于測量運(yùn)動。將籠子連接到連有IBM計算機(jī)的VersaMax分析儀(AccuScan)上，該IBM計算機(jī)使用VersaMaxl.80-0146軟件(AccuScan)來記錄垂直活動和水平活動。所記錄的總活動值為垂直活動和水平活動的和。通過計算控制的光電池活性盒子(SanDiegoInstruments,SanDiego，CA)中每分鐘動物"絆倒"光束的次數(shù)來測量每只動物的活動。將盒子放置于安靜房間中的四個水平的行李架中，使用于分開的圈養(yǎng)房間大致相同的環(huán)境光照和溫度。將實驗進(jìn)行6天，在每天下午的中間進(jìn)行1輪。每個處理條件每天安排6只天然大鼠(naiVerat)。分配劑量，使得測定分布于裝置中的12個盒子中的每一個，裝置控制了不同盒子的光照等的變化。將大鼠置于活動室中30分鐘來適應(yīng)并建立基礎(chǔ)活動水平。然后，取出大鼠并給予IP或口服劑量的肽(N=7)或鹽水(N=8)，并返回活動室中來建立肽對自發(fā)活動水平的作用。約給藥后30分鐘，取出大鼠，并給予d-苯異丙胺(lmg/kg)或載體的IP注射，并返回活動室中再lhr，來測定肽對誘導(dǎo)的運(yùn)動過度的作用。長期測試實驗方案。對于長期低體溫測試，每日給大鼠IP注射一次ABS201(5mg/kg)或鹽水，連續(xù)進(jìn)行五天。如上文所述對所誘導(dǎo)的低體溫進(jìn)行監(jiān)測并就顯著性進(jìn)行檢驗。為評估重復(fù)給藥后，ABS201降低d-苯異丙胺誘導(dǎo)的過興奮的能力，將大鼠分為三個劑量組長期組、急性組和對照組(所有組次N均等于7)。在第1-4天，長期組接受ABS201(5mg/kg)IP注射，而給予急性組和對照組鹽水。在測試日即第五日，給予長期組和急性組動物ABS201(5mg/kg)，而給予對照組動物鹽水。第五日的測試方案如上所述。全身僵硬癥評估。將ABS201(5mg/kg)溶于鹽水(lml/kg)中。給大鼠IP注射肽(5mg/Kg)、鹽水或氟哌啶醇(lmg/kg)。3小時后，使用單杠測試(horizontalbartest)全身僵硬癥。簡而言之，將直徑5mm的單杠放在高于籠底7.5cm處，并將前爪直接放在單杠上。使大鼠保持該姿勢3秒，然后將其釋放。測量并記錄從釋放到前爪回到籠底的時間。觀察到30秒的截斷時間，這表明動物完全呈現(xiàn)出全身僵硬，因為僵硬動物僵在杠上。正常動物實際上是立即松開的。每30分鐘重復(fù)該測量，持續(xù)4小時。數(shù)據(jù)為平均值+ASEM(p<0.01)。實施例6—ABS201神經(jīng)測試的結(jié)果通過IP和PO給藥的ABS201的低體溫誘導(dǎo)。IP給藥時，ABS201具有約lmg/kg的ED5Q，而口服給藥時為10mg/kg(低體溫數(shù)據(jù)未顯示，參見以下的苯異丙胺誘導(dǎo)的運(yùn)動過度結(jié)果)。如圖9中所示的，當(dāng)口服給藥對IP時，ABS201實際上誘導(dǎo)了較快的低體溫效應(yīng)，每種化合物為2X大概的ED,劑量-應(yīng)答曲線。圖11中顯示了IP注射后濃度范圍0.1-10.0mg/kg的ABS201的劑量-反應(yīng)曲線。計算得到的ED^值為0.943mg/kg。圖12中顯示了口服給藥濃度范圍在10.0-30.Omg/kg的ABS201的低體溫效應(yīng)。IP和口服給藥后d-苯異丙胺誘導(dǎo)的過度運(yùn)動的衰減。圖13說明了ABS201傳送的IP抑制了苯異丙胺誘導(dǎo)的過度運(yùn)動，具有約lmg/kg的ED5()。圖14說明了通過口服給藥傳送的ABS201誘導(dǎo)了過度運(yùn)動，具有約10mg/kg的大致EDm)。由于缺乏足夠的材料，在PO給藥中沒有嘗試更大的劑量；然而，IP數(shù)據(jù)清楚地說明了可以完全逆轉(zhuǎn)運(yùn)動過度影響。對該嘗試的每個不同時間段進(jìn)行了劑量X時間的獨立兩因素ANOVA。對于IP給藥和口服給藥實驗階段由適應(yīng)階段(時間點10-60)、藥物階段(時間點70-120)和苯異丙胺階段(時間點130-240)組成。對于IP給藥實驗，在適應(yīng)階段過程中，存在時間的主效應(yīng)[F(5,185)-264.335(pO.OOl)，表明不論劑量如何，在一段時間里活動水平逐漸下降。隨劑量變化下跌的Tukey'spost-hoc測試表明時間點10-30的活動水平顯著高于時間40-60(p<0.001)的。這些結(jié)果是由與新環(huán)境相關(guān)的初始自發(fā)探查性活動所引起的。在藥物階段的過程中，存在時間的主效應(yīng)[F(5，185)-12.336(p<0.001)]和劑量的主效應(yīng)[F(5，37)=l1.775(pO.OOl)]。時間主效應(yīng)是由于相對于第一時間點(70分鐘)對于全部劑量，活動均減少所引起的。隨劑量變化下跌的Tukey'spost-hoc測試表明全部劑量的反應(yīng)顯著不同于鹽水組(p<0.001)。在苯異丙胺階段為劑量X時間相互作用[F(55，407"4.474(p〈0細(xì))〗。Tukey'spost-hoc測試表明全部ABS201劑量組的活動能力在時間點130-200被證明比鹽水組有所減弱(p<0.05)。對于口服給藥實驗，在適應(yīng)階段過程中，存在時間主效應(yīng)[F(5,120)=201.979(pO.OOl)]，表明不論劑量如何，在一段時間里活動水平逐漸下降。隨劑量變化下跌的Tukey，spost-hoc測試表明每個時間點活動水平顯著降低。在藥物階段過程中，存在劑量X時間相互作用[F(15，120)二11.584(p<0.037)]。隨時間變化下跌的Tukey'spost-hoc測試表明僅有10mg/kg和30mg/kg劑量組的反應(yīng)顯著不同于鹽水組(p<0.01)。在苯異丙胺過程中，存在劑量X時間相互作用[F(ll,264)=35.616(pO.001)]。Tukey'spost-hoc測試表明全部劑量組的活動能力在時間點140-180被證明比鹽水組有所減弱(p<0.05)。另夕卜，20mg/kg和30mg/kg劑量組在時間點190-200的反應(yīng)顯著低于鹽水組。ABS201長期給藥對低體溫誘導(dǎo)的影響。每日重復(fù)給藥后ABS201保持顯著的CNS效應(yīng)(表6)，在5天內(nèi)絕對低體溫反應(yīng)增大。重復(fù)給藥ABS201對d-苯異丙胺誘導(dǎo)過興奮的影響。對本實驗的每個不同時間段進(jìn)行組別X時間的獨立雙因素ANOVA。階段與上文所述一致。在適應(yīng)階段過程中，存在時間主效應(yīng)[F(5，90"146.164(p<0.001)]，這表明不管組別如何，在一段時間里活動水平逐漸下降。隨劑量變化下跌的Tukey'spost-hoc測試表明在時間點10-20的活動水平顯著高于時間點30-60的(p<0.001)。這些結(jié)果是由于大鼠對新環(huán)境的適應(yīng)隨時間變化。在藥物階段過程中，存在時間主效應(yīng)[F(5，90)=13.512(pO.001)]和組別主效應(yīng)[F(2,18)-4.37(p<0.028)]。時間主效應(yīng)是由于相對于第一時間點(70分鐘)所有劑量組的活動減少。隨時間下跌的Tukey'spost-hoc測試表明在藥物階段過程中僅有急性組的反應(yīng)顯著不同于鹽水組(p<0.05)。在苯異丙胺階段過程中，存在組別X時間相互作用[F(22.198"4.069(pO.001)]。Tukey'spost-hoc測試表明急性組和長期組的活動能力在時間點140-220均被證明相對于鹽水組有所減弱(p<0.05)。前脈沖抑制的逆轉(zhuǎn)。在自發(fā)的精神分裂癥患者中，聲音震驚的前脈沖抑制(PPI)得到降低，并且通過藥物、環(huán)境或神經(jīng)解剖學(xué)的操縱，可以在大鼠中誘導(dǎo)相似的不足。最近，報道了Brattleboro(BB)大鼠，這是帶有單個基因突變的LongEvans(LE)株系，具有與精神分裂癥患者中觀察到的那些同源的固有PPI不足(參見，F(xiàn)eifd等，Neuropsych叩harmacology29:731(2004))。非典型的抗精神病藥在該模型中是有活性的。如圖15中所示，口服給藥的ABS201逆轉(zhuǎn)了Brattleboro大鼠中的PPI。全身僵硬癥評估。在外周給藥后ABS201(5mg/kg)或鹽水均沒有引起全身僵硬(N=5)。氟哌啶醇是一種已知能在大鼠中引起完全全身僵硬應(yīng)答的典型APD，它可引起持續(xù)時間超過30秒的全身僵硬。參見圖16。劑量耐受性。以5XED50給動物I.P.給藥ABS201，連續(xù)5天，使用低體溫誘導(dǎo)和苯異丙胺誘導(dǎo)的過度運(yùn)動的誘導(dǎo)作為監(jiān)控方法，使用上述的程序。使用任一種化合物都沒有觀察到劑量耐受性(參見圖17和18)。ABS201行為效果的概述。用于評價具有抗精神病潛能的分子的"黃金標(biāo)準(zhǔn)"動物模型是對苯異丙胺誘導(dǎo)過度運(yùn)動的抑制。不論是IP注射還是口服給藥，ABS201具有劑量依賴性活性(圖13和14)。ABS201的作用在IV和PO給藥后是明顯的，劑量依賴性的和長效的(給藥后1小時即可觀察到，并且至少在再一個小時內(nèi)是明顯的)。在大鼠中檢測了ABS201和氟哌啶醇對全身僵硬的影響。對大鼠(N=5)IP注射ABS201(5mg/kg)或氟哌啶醇(lmg/kg)。2小時后，使用單杠測試測量全身僵硬。數(shù)據(jù)為平均值+/-8￡]^4<0.01)。ABS201并不會引起大鼠的全身僵硬狀態(tài)(圖16)，不會對抗傷害感受，并且通過監(jiān)測低體溫或?qū)Ρ疆惐氛T導(dǎo)過度運(yùn)動的抑制并沒有發(fā)現(xiàn)對多次給藥的耐受性(圖17和18)。因此，IV和PO給藥后，ABS201確實在嚙齒動物中引起了低體溫。ABS201的作用是劑量依賴性且長效的，給藥后3-4小時內(nèi)可觀察到。產(chǎn)生低體溫的劑量與逆轉(zhuǎn)d-苯異丙胺反應(yīng)的劑量即便不相同也是相近的。對3只雄性大鼠和3只雌性大鼠的口服給藥和靜脈內(nèi)給藥進(jìn)行了觀察，給予每只大鼠溶于中性生理鹽水的50mg/kg(IV)或250mg/kg(PO)ABS201HC1。在給藥后2和24小時臨床觀察測量了核心體溫。在靜脈內(nèi)給予ABS201期間以及隨后鄰近時間內(nèi)觀察到如下現(xiàn)象給藥期間(通過尾靜脈慢推，〉1分鐘<2分鐘)，給予ABS201HC1的動物在身體管束籠中變得特別安靜；離開管束籠后，動物明顯安靜，缺乏自發(fā)的桌面活動能力，處理后呈現(xiàn)為巻曲姿勢，并表現(xiàn)出翻正反射嚴(yán)重受到損傷或失去翻正反射；盡管如此，但不存在上瞼下垂；沒有弛緩性麻痹的跡象，盡管肌緊張被顯著降低；出現(xiàn)瞳孔反射；后肢收縮反應(yīng)受損或不存在；沒有副交感反應(yīng)，例如，自然排尿、排便、分泌唾液的跡象，并且不能流淚；沒有急性交感反應(yīng)，例如豎毛的跡象；沒有強(qiáng)直性或陣攣性癲癇發(fā)作的跡象。急性效應(yīng)時間短暫，僅持續(xù)到整個給藥階段(約30分鐘)結(jié)束翻正反射得以恢復(fù)時。在給藥后兩小時觀察期，盡管存在顯著的低體溫，但是所有的動物看上去十分正常。在給藥后24小時觀察期，不存在低體溫，所有的動物看上去十分正常?？诜o予ABS201HC1的動物在所有時間點看上去都十分正常。因此，這些證據(jù)表明靜脈內(nèi)給予ABS201HC1(50mg/kg)后動物的急性行為表現(xiàn)和反應(yīng)可以直接歸因于快速顯著的中樞神經(jīng)系統(tǒng)效應(yīng)。實施例7—ABS的口服生物利用度研究用于產(chǎn)生放射性ABS201的Fmoc-脯氨酸-OI^的合成(圖19)。將L-脯氨酸(20.7mg，0.18mmol)(AdvancedChemtech)溶解于450uL的10%Na2C03溶液中，向其加入5mL含有250wCiL-[U-14C]egrada(Moravek，Brea，CA)的EtOH:H20(2:98)。將3mL二甲氧基乙烷(DME)中的Fmoc-N-羥基琥珀酰亞胺(Fmoc-Osu)(100mg，1.5當(dāng)量)逐滴加入攪拌的氨基酸溶液中。使反應(yīng)在室溫攪拌12小時并在真空中除去DME。剩余的水溶液用10mLH20稀釋并用飽和N-丁醇(4X10mL)提取。合并丁醇提取物并濃縮獲得蒼色油。用MeOH:CH2Cl2(50:50)在硅膠上洗脫來除去殘余的Fmoc-Osu。在肽合成中使用粗制的Fmoc-脯氨酸-OHS而沒有進(jìn)一步純化。使用Caco-2細(xì)胞模型研究ABS201口服生物利用度。Caco-2細(xì)胞，源自人結(jié)直腸癌，自發(fā)地分化成呈現(xiàn)出發(fā)育良好的微絨毛和刷狀緣酶的極性細(xì)胞(78)。這些特征使得該細(xì)胞成為極好的人小腸模型。已經(jīng)鑒定出Caco-2細(xì)胞模型中的攝入和口服生物利用度之間關(guān)系密切(79)。致力于肽穿過Caco-2細(xì)胞的研究己經(jīng)將溶質(zhì)-溶劑氫鍵確定為肽穿透性的主要決定因子。非天然氨基酸技術(shù)可以用于減少溶質(zhì)-溶劑相互作用，具體指通過氫鍵產(chǎn)生的水溶劑化作用，因此在Caco-2細(xì)胞中，本發(fā)明的修飾應(yīng)當(dāng)賦予增強(qiáng)的腸吸收。下文所述研究旨在評估NT(8-13)類似物的潛在口服生物利用度以及負(fù)責(zé)其攝入的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。ABS201是開發(fā)NT(8-13)類似物作為新的APD的先導(dǎo)化合物。因此，ABS201可以作為用于評估NT(8-13)類似物的細(xì)胞攝入的原型。液閃計數(shù)(LSC)是這些測試的優(yōu)選分析方法，因為無需從細(xì)胞單層提取該肽，并且溶解細(xì)胞組分可以直接分析，無需因不準(zhǔn)確而致分析不一致的萃取方案。L-[U-l4C]aegrada被用這些作這些研究的放射標(biāo)記。脯氨酸易于在用于肽合成的a-胺處用堿不穩(wěn)定性的Fmoc部分保護(hù)。另夕卜，Pro'c尚未被鑒定為NT(8-13)的主要裂解位點。表現(xiàn)出抗精神病潛能的NT(8-13)類似物并不包括Pro^修飾。為了研究NT(8-13)類似物的細(xì)胞攝入的現(xiàn)象和機(jī)制，可以使用Caco-2細(xì)胞，這是一種成熟的腸上皮模型。這些研究旨在深入了解這些肽類似物的口服活性的潛能。如上所述，NT(8-13)類似物在口服給藥后引發(fā)CNS活性。它們是表現(xiàn)口服活性的首批NT(8-13)類似物，這些初步研究應(yīng)該提供有助于開發(fā)未來的口服活性增強(qiáng)的肽類似物的信必o選擇200iaM作為用于這些攝入研究的ABS201的濃度有兩個不同原因。20mg/kg劑量的肽分散于鹽水(lmL/kg)中的濃度為24mM。由于管詞給藥可以確保直接給藥到胃，應(yīng)在小腸觀察到略低于24mM的濃度。因此，加至Caco-2細(xì)胞的濃度明顯低于理論上的體內(nèi)觀察值。另外，大鼠中標(biāo)準(zhǔn)循環(huán)血液體積為64mL/kg(82)。管飼給藥后，20mg/kg劑量肽循環(huán)遍及整只大鼠的濃度是377uM。基于這些原因，確定200uM為體外研究ABS201攝入的生理相應(yīng)濃度。實施例8—ABS201的臨床前研究受體篩選。針對下述16種受體分別對三個不同濃度的ABS201(10-9、IO'7、1(T5M)進(jìn)行了篩選腎上腺能(al、a2、"、多巴胺、組胺(m、H2、H3)、毒覃堿(中樞、外周)、煙堿、阿片樣物質(zhì)(非選擇性)、孤肽、5-羥色胺(運(yùn)載體、非選擇性)、單胺氧化酶(A、B)。未觀察到受體的內(nèi)源性底物的置換。因此，ABS201似乎不與這其中的任何受體結(jié)合。相反，ABS201對靶受體(NTRi)具有nM親和性。肝受體篩選(StandfordResearchInstituteStudyB213-06)。對抗以下的肝CYP篩選ABS201(l(T3、10-2、0.1M):CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4。沒有觀察到任何濃度的ABS201對這些酶的底物結(jié)合抑制，表明缺乏藥物-藥物相互作用的潛能。血液分布和代謝產(chǎn)物鑒定。將ABS201加入新鮮分離的大鼠全血中使其濃度為100ug/mL，使其分配，離心除去細(xì)胞碎片。該濃度下的ABS201幾乎均勻分布在細(xì)胞碎片和血清部分之間。未檢測到ABS201的代謝產(chǎn)物，這與先前正式血清/血漿半衰期非常長的實驗相一致。最大耐受劑量。將ABS201給予大鼠，IV劑量最高達(dá)100mg/kg，口服劑量最高達(dá)500mg/kg。給藥48小時后未觀察到化合物的副作用(體重減輕、死亡、一系列異常臨床評估結(jié)果)。因此，這些實驗確定了ABS201的MTD的下限為抗精神病和其他反映大腦活性的測試化合物的EDs。的100倍。遺傳毒理學(xué)。進(jìn)行了微核研究、小鼠淋巴瘤研究和Ames研究。微核研究評價了合成NT肽引起遺傳損傷的潛能，如通過小鼠骨髓細(xì)胞中誘導(dǎo)的微核多染性紅細(xì)胞呈現(xiàn)的。小鼠淋巴瘤研究評價了合成NT肽引起在未激活的和S9代謝激活條件下L5178Y1^+/-小鼠淋巴瘤細(xì)胞的胸苷激酶位點突變的能力。Ames研究評價了合成NT肽在未激活和S9代謝激活條件下引起鼠傷寒沙門氏菌株(5""http://0^〃(30^/z/ww/iW7strain)TA98、TAIOO、TA1535和TA1537的組氨酸操縱子和大腸桿菌株WP2urvA的色氨酸操縱子中突變的能力。實驗方案如下。在微核研究中，研究中所用的90只CD-1小鼠由組1-4中10只/性別/組(對照、低、中和高劑量)和陽性對照組中5/性別構(gòu)成?？诜?3給藥測試肽，并口服給藥陽性對照、80mg/kg的環(huán)磷酰胺。給藥后大約24和48小時后，將小鼠殺滅并從兩側(cè)股骨獲得骨髓。制備一玻片骨髓懸浮液，用Wright-Giemsa染色，干燥并進(jìn)行盲評分。通過計數(shù)至少200個紅細(xì)胞來測定每只動物的總紅細(xì)胞(PCE+正染性紅細(xì)胞(NCE))中的多染性紅細(xì)胞(PCE)的數(shù)目。然后分選每只動物的2000個PCE的微核多染色紅細(xì)胞(MPCE)的數(shù)目。如果與對照相比較，在一個或多個劑量水平的MPCE數(shù)目中存在陽性劑量-應(yīng)答趨勢或統(tǒng)計學(xué)顯著提高，那么獲得了陽性結(jié)果。在小鼠淋巴瘤研究中，通過用Aroclor-1254或苯巴比妥和/或P-萘黃酮誘導(dǎo)雄性Sprague-Dawley大鼠來制備標(biāo)準(zhǔn)大鼠肝S-9。正對照包括羥胺硫蒽酮磺酸甲酯(HYC)，其沒有用代謝激活誘導(dǎo)了TK位點的突變，和7,12-二甲基苯并[a]蒽(DMBA)，其用代謝激活誘導(dǎo)了TK位點的突變。進(jìn)行范圍確定測試來鑒定產(chǎn)生0-100%毒性的ABS201濃度。在該測試中，使用了正對照(HYC和DMBA)和五個濃度的ABS201，沒用和使用代謝激活。將細(xì)胞暴露于每個ABS劑量，并活動上清液，孵育20和44小時。在2天表達(dá)階段后，用限制性試劑三氟胸苷(只使TK-A細(xì)胞生長)或載體對照來克隆培養(yǎng)物。計算突變頻率和誘導(dǎo)的突變頻率。如果至少一個培養(yǎng)物具有相應(yīng)溶劑對照培養(yǎng)物的平均MF兩倍或更高的MF，就獲得了陽性應(yīng)答，并且應(yīng)答是劑量應(yīng)答性的。進(jìn)行了證實測試，沒有使用S-9激活來證實突變測試結(jié)果。在Ames研究中，評價合成NT肽類似物引起鼠傷寒沙門氏菌株TA98、TAIOO、TA1535和TA1537的組氨酸操縱子和大腸桿菌株WP2urvA的色氨酸操縱子中突變的能力。簡而言之，通過用Aroclor-1254或苯巴比妥和/或e-萘黃酮誘導(dǎo)雄性Sprague-Dawley大鼠來制備標(biāo)準(zhǔn)大鼠肝S-9。所用的細(xì)菌株是鼠傷寒沙門氏菌株TA98、TAIOO、TA1535和TA1537以及大腸桿菌株WP2urvA。陽性對照包括2-AA、2-NF、9-AA、NaAZ和MMS。進(jìn)行溶解性/混溶性測試來測定選定溶劑(水、DMSO、丙酮或乙醇)中肽類似物的最大可獲得濃度。進(jìn)行范圍測定測試，使用或不使用S-9激活，使用測試菌株T100和WP2urvA，只能鑒定產(chǎn)生0-100%毒性的ABS201濃度。使用四個鼠傷寒沙門氏菌株(TA98、TAIOO、T1535、TA1537)和大腸桿菌株WP2urvA株進(jìn)行突變測試，使用處理的平板引入方法。如果TA98或T100中任一個菌株具有高于或等于對應(yīng)溶劑對照的平均逆轉(zhuǎn)頻率兩倍的平均逆轉(zhuǎn)頻率的劑量，或者如果與溶劑對照頻率相比，菌株TA1535、TA1537或WP2iirvA具有產(chǎn)生三倍或更高平均逆轉(zhuǎn)頻率增加的劑量，那么認(rèn)為應(yīng)答是陽性的。最初的數(shù)據(jù)表明ABS201在所有三個測試中是沒有活性的。hERG測試。hERG研究的目的在于測定測試物質(zhì)對HEK293細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)的hERG(人ether-a-go-go相關(guān)基因)控制的快速激活內(nèi)向整流鉀電流(Ik》的作用。如下使用該方法。該研究中使用了用hERGcDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞。在接近生理溫度的溫度(35±2°C)進(jìn)行所有實驗。將陽性對照(60nM特非那定)應(yīng)用于兩種細(xì)胞(n^2)。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至記錄室并傾注HB-PS溶液。將記錄室和水浴溶液維持于35士2。C，使用串聯(lián)的溶液預(yù)熱器、室板(chamberfloor)加熱器和溫度反饋控制器的組合。使用熱敏探示器測量水浴溫度。使用P-97微量吸管拉制器(SutterInstruments,CA)從玻璃毛細(xì)管制得膜片吸管。將商業(yè)膜片鉗放大器用于完整細(xì)胞記錄。在數(shù)字化之前，在五分之一的取樣頻率，目前的記錄是低通過濾的。將穩(wěn)定表達(dá)hERG的細(xì)胞維持于-80mV。使用脈沖圖形測量由于ABS201引起的hERG電流的發(fā)作和穩(wěn)定狀態(tài)阻斷，使用穩(wěn)幅(調(diào)節(jié)前脈沖+2011^1秒；再極化測試坡度至-80mV(-0.5V/s)，以5s間隔重復(fù)。用最終應(yīng)用超大濃度的參照物(E-403K500nM)來結(jié)束每個記錄，以測定內(nèi)源電流的作用。從數(shù)據(jù)中脫機(jī)數(shù)字化地減去剩余的未阻斷電流來測定ABS201對hERG抑制的功效。最初的結(jié)果表明ABS201在hERG研究中是沒有活性的。ABS201藥物代謝動力學(xué)和腦分布。將ABS201以一個IV劑量(5mg/kg)或口服劑量(50mg/kg)給予大鼠。在所選時間點取血或獲取腦，使用LC/MS/MS確定化合物的濃度。證明了在IV和口服給藥后高達(dá)120分鐘時，可以在血液和腦中檢測到ABS201。腦中的含量足以飽和NTR-1來產(chǎn)生所觀察到的行為效應(yīng)。ABS201以兩個階段從全血中清除除去，最初的階段和第二個階段中，化合物處于可測量的低水平，直至IV給藥5mg/kg后120分鐘；在口服給藥化合物(50mg/kg)的所有時間點，全血中的ABS201水平低于LLOD;在IV給藥后的所有時間點，腦中的ABS201水平低于LLOD;在口服給藥50mg/kg后15分鐘時，3只動物中的2個腦中檢測到可測量的ABS201含量。圖20和21中顯示了IV和口服給藥ABS201的血漿濃度對時間的曲線。IV注射后，全身清除的平均值為2.45L/hr/kg，其對應(yīng)于74.02%大鼠肝臟血流。半衰期和Vz的平均值為0.29hr和0.87L/kg。ABS201很好地分布至組織中。在末期的分布體積為0.87±0.27L/kg，這與大鼠中的全部身體水份相似(0.67L/kg)。在0.9%鹽水溶液中時，口服后ABS201的生物利用率為0.07%。半衰期的平均值為0.99hr。為了腦中ABS201的藥物代謝動力學(xué)研究，在靜脈內(nèi)灌輸測試物質(zhì)ABS20r2HC1后的四個時間點，從SD大鼠收集血漿樣品和腦樣品。然后將這些樣品用于測定血漿和腦藥物水平，通過LC/MS/MS來估算BBB滲透和藥物代謝動力學(xué)參數(shù)。時間過程的結(jié)果顯示于圖22中。靜脈內(nèi)灌輸100mg/kg的ABS2012HC115分鐘后，全身清除值為22.77L/hr/kg，其對應(yīng)于大鼠肝臟血流的6.88倍(3.31L/hr/kg)。ABS2012HC1的半衰期值(T'/2)為0.49hr。靜脈內(nèi)灌輸100mg/kg劑量后(25分鐘時)的Cmax平均值為5459.78ixg/L。AUC。^的值為4391.09hr*ug/L。ABS201'2HC1很好地分布至組織中。末期的分布體積為16.10L/kg，其高于大鼠中的全部身體水分(0.67L/kg)。靜脈內(nèi)灌輸100mg/kgABS201'2HC115分鐘后，腦中的C,(45分鐘時)和AUQ).t的值分別為32.93ng/g和60.96hr*ng/g。ABS201'HC1的半衰期值(TV2)為4.85hr。靜脈內(nèi)灌輸后，從25分鐘至135分鐘的腦對血漿的比例為0.0015至0.1453。這些結(jié)果證明了ABS201選擇性地吸收至腦中，因為這比在血液中具有顯著更長的半衰期。腦半衰期與ABS201看到的行為效果的半衰期相對應(yīng)。還在給非禁食大鼠IV給藥lmg/kg和口服給藥30mg/kgABS201后，研究了ABS201的血漿和腦藥物代謝動力學(xué)。該研究的結(jié)果表明IV給藥后，ABS201從血漿中快速清除，t^為約5分鐘；化合物的水平在45分鐘后下降至低于LLOD;口服給藥后在所有時間ABS201的水平都低于LLOD;IV和PO給藥后在所有時間腦中ABS201的水平均低于LLOD。ABS201的體外代謝和區(qū)域化。為了評價ABS201在血液中的分布、血槳中蛋白質(zhì)結(jié)合的程度，以及為了獲得ABS201在血液和血漿中代謝的初步測定。該研究的結(jié)果證明了37'C孵育5或30分鐘后，少有或沒有ABS201結(jié)合到血漿蛋白上；37。C孵育5或30分鐘后，全血或血漿中的ABS201沒有代謝的跡象；全血與ABS201在37。C孵育5或30分鐘時，約33%的ABS201快速分布到血液細(xì)胞組分中。ABS201從PO給藥腦的吸收位點的評價。為了最終提高ABS201通過制劑的整體口服生物利用率，評價了腸道中的吸收位點。該研究的目的是在原位循環(huán)模型中的胃內(nèi)、十二指腸內(nèi)、空腸內(nèi)和結(jié)腸內(nèi)給藥測試物質(zhì)ABS2012HC1后的不同時間點，從SD大鼠收集血漿樣品。這些樣品用于測定血漿藥物，通過LC/MS/MS來估算藥物代謝動力學(xué)參數(shù)和節(jié)段性吸收。計算了胃內(nèi)、十二指腸內(nèi)、空腸內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)給藥相對于靜脈內(nèi)給藥和管飼的生物利用率。如圖23中可以看到的，ABS201在腸內(nèi)幾乎全部吸收，十二指腸呈現(xiàn)出最大量的吸收。實際上，在胃中沒有ABS201得到吸收。結(jié)論。用甲基脫氨衍生物43(示意圖2)取代ABS13N端的高賴氨酸a疊氨基基團(tuán)(示意圖1)生成ABS201可以獲得具有潛在抗精神病藥物的重要特征的分子。具體而言，ABS201對NTR-1有高選擇性，無論是IP或口服給藥，在關(guān)鍵的精神病大鼠模型中都顯示出有效的抗精神病藥物活性?？诜o藥時ABS201顯示出升高300%的中樞活性，并且與IV注射相比，口服獲得更快的反應(yīng)(這些獨特的特征可歸因于脫氨修飾)。ABS201沒有引起全身僵硬或誘導(dǎo)耐藥性。最初的大鼠毒性和誘變實驗是陰性的。在體外和體內(nèi)評價了ABS201的藥物代謝動力學(xué)、區(qū)域化和可能的代謝。該結(jié)果表明幾乎沒有代謝，和復(fù)雜的藥物代謝動力，這表明化合物最初經(jīng)受了從血壓的快速清除，接著是較長的持續(xù)，深層區(qū)域化現(xiàn)象。此外，1V和PO給藥后的ABS201的藥物動力學(xué)應(yīng)答是長效的(2-4hr);IVABS201的急性效應(yīng)通過中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)；與血漿或全血一起孵育后，該化合物似乎沒有得到代謝；在體外，ABS201在水相和細(xì)胞相中分配；全血中ABS201的PK狀況與兩相清除過程相一致；并且所觀察到的藥效反應(yīng)同樣也與兩相清除過程相一致。ABS201優(yōu)先被吸收至腦中，推定為通過主動轉(zhuǎn)運(yùn)過程，因為從腦中丟失的比例是從血液中丟失比例的10%。已知ABS201在大鼠腦中明顯的長半衰期(可檢測的至給藥后6小時)，以及藥物在血液成分中形成存儲(即，用于藥物的緩慢釋放傳送系統(tǒng))，本發(fā)明的化合物，如半合成肽ABS201，可以以每日一次或兩次的基礎(chǔ)來給藥。實施例9一生物活性肽中H取代CH3引起的生物提高已經(jīng)形成了一系列的Arg和Lys的氨基酸類似物。參見US專利No.6，043,218;6,358,922;6,566,330;6,783,946;6，858，396。當(dāng)取代NT(8-13)中的Arg8時，產(chǎn)生了一系列化合物，其具有抗精神病和止痛活性。這些化合物的實例可以在以下的表10中找至U(ABS202、ABS203、ABS204、ABS206)。除了非天然側(cè)鏈，證明T-CH3取代N端-,2獲得了對于兩個指標(biāo)最有活性的化合物。參見2005年6月17日申請的PCT/US2005/021580，和2004年6月17日申請的U.S.臨時專利申請系列號60/581,333。產(chǎn)生了另一系列的化合物，其中末端-H被取代為-CH3，以評價-CH3在這些化合物的生物活性中的作用(ABS226、ABS227、ABS228、ABS230，表10)?；衔顰BS202和ABS203的結(jié)構(gòu)顯示于圖8中?；衔顰BS226和ABS227各自不同于ABS202禾nABS203，因為ABS202和ABS203的N端-CH3基團(tuán)由ABS226和ABS227中的-H基替代。ABS204的結(jié)構(gòu)為30-Arg-Pro-Tyr-Ile-feWLeu-COOH，其中30表示示意圖2中所示的非天然殘基。ABS206的結(jié)構(gòu)是N-Me-Lys-Arg-Pro-Tyr-Ile-tewLeu-COOH?；衔顰BS228和ABS230各自不同于化合物ABS204和ABS206，因為ABS204和ABS206的N端-CH3基團(tuán)由ABS228和ABS230中的-H基替代。在合適的大鼠模型中評價化合物ABS226、ABS227、ABS228和ABS230的每一種各自相對于其母體化合物ABS202、ABS203、ABS204、ABS206的抗精神病和止痛活性。前一種活性最容易通過測量誘導(dǎo)的低體溫(核心體溫失去)的程度來監(jiān)控，這是NTR-1結(jié)合和激動的測量，因此測量抗精神病活性。按照常規(guī)隨著時間測量低體溫，通過將熱量探測器插入大鼠的肛門中，該探測器勾著數(shù)字讀數(shù)盒。通過熱板測試來監(jiān)控痛覺缺失，其中在維持于52"C的圍住的金屬表面上進(jìn)行熱板測量。測量將大鼠置于表面上時和它舔后爪時之間的時間潛伏期。如果動物在30秒內(nèi)沒有沒有舔后爪，將其移開并記錄為100%的最大陽性效應(yīng)(或MPE)。中間體應(yīng)答獲得0-100n/。的MPE，將鹽水對照定義為0%潛伏期。<table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table>如圖IO中所看到的，-11取代為《&在每種情況中都具有效果。ABS226和ABS202具有大致相同的抗精神病能力，但是其小的多的止痛活性是由于較差的NTR-2結(jié)合引起的。因此，該化合物對于NTR-1的選擇性更大，是更好的抗精神病藥候選物。使用ABS203和ABS227看到相似的效果。ABS228比ABS224具有更好的止痛活性，因此對于NTR-2的選擇性更大。ABS226在兩種能力指標(biāo)中都更有活性。為了概括，具有-H的非天然Arg和Lys氨基酸，在生物活性肽中取代-CH3或-NH2時，作為化合物口服活性提高，或?qū)δ繕?biāo)受體亞型提高的選擇性的結(jié)果，可以產(chǎn)生更好的藥物候選物。實施例10—NT衍生物止痛活性的測試動物。實驗天然雄性Sparague-Dawley大鼠來自CharlesRiverLaboratories,Raleigh，NC(230-260g)或Harlan,PrattvilleAL(240-280g)，在動物住處每個籠子飼養(yǎng)4只，以規(guī)律的亮/暗循環(huán)(0600-1800為亮)，隨意進(jìn)食和飲水，在實驗前持續(xù)大約1周。在測試2天的體重范圍為230-260克。在一天進(jìn)行實驗，使動物在重復(fù)實驗之前恢復(fù)三天。肽制備。以所需的濃度在鹽水中制備測試物質(zhì)，用于IP注射或管飼給藥，每個劑量和載體使用N=6。嗎啡(5mg/kg)用作特定實驗方案的對照。具體而言，將測試肽懸浮于0.9%NaCl中并以lmL/kg的體積I.R注射(大鼠體重230-260g)來獲得10mg/kg的劑量。將阿樸嗎啡HC1(Sigma-Aldrich，St.Louis.MO)以5mg/kL的濃度溶解于蒸餾水中，在40分鐘內(nèi)給藥，用于以lmL/kgS.C.注射來獲得5mg/kg的劑量。測定完整的EDs。時，肽的劑量范圍為ED5o的10、3.、1、0.3、0.1，涵蓋兩個對數(shù)級。熱板測試。如下進(jìn)行熱板測試，這是用于慢性疼痛的標(biāo)準(zhǔn)大鼠模型(參見，LeBars等，Pharmacol.Rev.53:597-652(2001)和Chapman等，Pain22:l-31(2002))。將維持于52。C至53°C的熱板在樹脂玻璃室中四側(cè)封閉起來，超過熱板延伸出6英寸。將動物置于平板上，測定將大鼠置于表面上和離開或舔后爪(表示痛覺)之間的時間潛伏期。在30秒的截留潛伏期立即移開動物。作為定義為100%的最大可能效應(yīng)(％MPE)的百分比來評價測試，100%對應(yīng)于大鼠在熱板上停留30秒，而沒有反應(yīng)。因此，使用以下的等式計算MMPE:。/oMPE呵(藥物后潛伏期-藥物前潛伏期)/(截留藥物前潛伏期)]xioo。/。。對于所有實驗，N=6或更大。將每組實驗的值接受方差分析，使用劑量(載體和5個水平)作為因素。方差分析中顯著效果后，通過Newman-Keuls測試將每個劑量與載體相比較。如果p0.05，認(rèn)為效果是顯著性的。尾巴彈開測試。將每個實驗的6只大鼠置于樹脂玻璃限制盒中。將標(biāo)準(zhǔn)實驗室熱水浴維持于49°C。將大鼠尾巴的遠(yuǎn)側(cè)3cm浸入水中，記錄從插入至尾巴彈開或尾巴移出的時間。在10秒的截留潛伏期，立即將動物移開。計算MPE，使用對應(yīng)于尾巴在水浴中保持10秒的100%MPE。將這重復(fù)3次。使尾巴干燥并在實驗之間休息20秒。然后給予大鼠適量的肽并在30和60分鐘重復(fù)實驗。在實驗中分配處理條件，以平衡設(shè)計來控制如歷期和給藥次序這樣的因素。對于所有實驗，N:6或更大。福爾馬林測試。將六只天然大鼠分配給單個處理條件，給予如上所述的肽或鹽水(對照)，并置于沒有草墊物質(zhì)的Plexiglas觀察籠中(43cmX24cmX20cm)，并監(jiān)控其行為15分鐘。以以下的等級將動物每分鐘評分0=前爪平著在地板上，1=前爪正好接觸地板，2=前爪舉起離開地板和3-舔或咬著前爪。該基礎(chǔ)測定后，給動物皮下注射37%甲醛的5%溶液(50mL無菌鹽水中制備的5%甲醛，在l.OmL針筒中，使用26G3/8針)至右前爪中。立即將動物置于觀察籠中，并在隨后30分鐘內(nèi)記錄其行為。每次實驗后，用C02接著頸部脫位使大鼠安樂死。將每個肽隨著時間的平均疼痛等級對基線和只有福爾馬林的對照作曲線，并使用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。在5%的置信區(qū)間認(rèn)為差異是統(tǒng)計學(xué)差異的。對于所有的實驗，N二6或更大。己經(jīng)建立了兩階段的行為應(yīng)答，最初的階段(注射后大約3分鐘)反應(yīng)出最初的疼痛剌激，接著大約30分鐘后為第二個階段，反應(yīng)出由于炎癥過程的煽動(instigation)引起的敏感。Chung測試。為了測試觸覺閾值(tactilethreshold),將大鼠置于干凈的金屬網(wǎng)底部的籠子中，分成單個區(qū)間。使動物適應(yīng)，然后在藥物處理之前測定基線閾值。為了測定爪子縮回的50%機(jī)械閾值，將弗雷氏毛運(yùn)用至腳底(plantar)后爪，避免隆起(tori)(足墊)。通過[log(10承彎曲毛發(fā)需要的力量，mg)]來命名八根弗雷氏毛，并且為0.4-15.1克(弁's3.61-5.18)。將每根毛發(fā)對爪子垂直壓緊，使用足夠的力來引起引起輕微的彎曲，并保持大約6-8秒。如果爪子突然縮回，注意到陽性應(yīng)答。毛發(fā)取出時立即退縮，也認(rèn)為是陽性應(yīng)答。缺少應(yīng)答("-")是呈現(xiàn)下一個連續(xù)較強(qiáng)烈刺激的原因；陽性應(yīng)答("+")是呈現(xiàn)下一個較弱應(yīng)答的原因。刺激得到成功呈現(xiàn)，直至收集了六個數(shù)據(jù)點，或達(dá)到最大或最小刺激。如果達(dá)到最小刺激，并且陽性應(yīng)答仍然產(chǎn)生時，閾值指定為0.25克的隨意最小值；如果呈現(xiàn)出最大刺激并且不再發(fā)生應(yīng)答，指定為15克的最大閾值。如果發(fā)生應(yīng)答改變，"-"至"+"或"+"至"-"，引起刺激呈現(xiàn)方向的改變，從下降至上升，或反之亦然，改變后，收集另外四個數(shù)據(jù)點。將所得到的應(yīng)答模式列表并使用公式log(閾值，mgX10)二Xf+kd計算50。/。應(yīng)答閾值；其中參Xf二所用的最后的弗雷氏毛的值；參]^基于應(yīng)答模式的校正系數(shù)(來自校準(zhǔn)表)魯d^刺激之間log單位的平均距離。基于對正常的未手術(shù)的大鼠和假手術(shù)大鼠的觀察，選擇15.1-g毛發(fā)的截留作為測試的上限。實施例11一ABS201作為潛在的止痛劑通過NTR-1激動介導(dǎo)NT和衍生物的抗精神病和低體溫效應(yīng)，而通過NTR-2激動介導(dǎo)止痛效果。為了切實可行的止痛，NT衍生物應(yīng)當(dāng)在體外結(jié)合NTR-2，具有高親和性，并且在體內(nèi)是口服可利用的和穩(wěn)定的。ABS201滿足所有這些要求一具有低于微摩爾NTR-2親和性，延長的血漿穩(wěn)定性和口服生物率，如表ll中所示的。表ll<table>tableseeoriginaldocumentpage94</column></row><table>競爭性NTR結(jié)合親和性對放射性標(biāo)記的NT[8-13][103]tAMP和肌醇磷酸產(chǎn)生的誘導(dǎo)(Orwig，Ph.D.論文，2005)。我們實驗室中研發(fā)的定量MALDI-MS測試[53]。如[103]中所述的行為測試方法。1P給藥的100XED5Q的單個急性劑量[未發(fā)表]'5天內(nèi)每日給藥10XED5()[103]。ABS201還呈現(xiàn)出止痛活性，如通過熱板測試中。/。MPE所示的，與嗎啡的程度和持續(xù)時間相當(dāng)(圖24)。然后，在給藥這些肽后，在動物的影響中關(guān)注的是不同的。給予嗎啡的大鼠看上去象"投藥的"，變得更強(qiáng)直，并且對環(huán)境刺激完全沒有應(yīng)答，而給予ABS201的動物看上去簡單地就得到了放松。大鼠對ABS201的止痛活性沒有變得耐受，因為給藥5天的大鼠直接顯示出與最初給藥基本上相同的a/。MPE(圖25)。這是特別值得注意的，因為大鼠在給藥時間過程結(jié)束時，在實驗上不是天然的，這可能導(dǎo)致它們學(xué)習(xí)來逃避熱板并遮蓋無痛覺的可能。最后，ABS201的止痛活性與低體溫效應(yīng)不相關(guān)，因為這兩者沒有顯示出平行的動力學(xué)一尤其是止痛效果逐漸減弱，而低體溫效應(yīng)仍然很強(qiáng)烈。這清楚地表明了這些效果是由不同的受體介導(dǎo)的?？偠灾?，這些數(shù)據(jù)表明ABS201作為可能的止痛藥和抗精神病藥的用途。實施例12—具有側(cè)鏈胍鹽基團(tuán)的止痛肽由于ABS201以高親和性結(jié)合NTR-1和-2的事實，存在這樣的可能性與NTR-1結(jié)合相關(guān)的效果可能使得肽作為止痛藥不太理想。這些效果包括大鼠全身低體溫的誘導(dǎo)，這實際上在人體中是非常小的效應(yīng)(D.Fdfd,個人交流)，以及抗精神病功效，這可能不是不理想的。對于NTR-2高度選擇的并維持ABS201所有的有利特征的肽將是"更合適的(cleaner)"的止痛藥候選物。在產(chǎn)生NTR-2選擇性配體的過程中，評價了圖26中所示的肽。這些肽呈現(xiàn)出NTR-2比NTR-1提高的結(jié)合親和性，并且表12中提供了兩種受體的相對選擇性。表12肽NTR-1(nM)NTR-2(nM)NTR-l/NTR-2'選擇性NT[8-13J0.21±0.014.1±0.0119.5ABS10.38±0.070.7±0.021.8ABS135.7±0.3711.1±0.11.9ABS201U.2士0.3n/dn/dABS150.4±0.10.9±0.22.5ABS160.3±0.050.67±0.072.2ABS170.25±0.070.3士0.11.2ABS191.2±0.70.23±0.050.19競爭性的因為NT[8-13]對于NTR-1結(jié)合具有超過NTR-220倍的優(yōu)先性(表12)，因此作為NTR-2的選擇性配體不太有用。然而，肽ABS1、ABS13和ABS201的數(shù)據(jù)表明在改變a氨基中存在結(jié)構(gòu)-結(jié)合效應(yīng)。將ABS1的極性-NH2(在生理pH得到質(zhì)子化，顯著增加了親水性)改變成非極性的不帶電荷的-N3(ABS13)導(dǎo)致NTR-2比NTR-1的選擇性提高10倍。此外，因為精氨酸側(cè)鏈測量變得更大和更非極性，得到顯著更高95的與NTR-2的結(jié)合。在ABS15、ABS16、ABS17、ABS19的進(jìn)展中說明了NTR-2的精氨酸側(cè)鏈結(jié)合位點中的差異。ABS19對于NTR-2具有5倍的選擇性，并且超過NT[8-13]約IOO倍的整體選擇性提高。此外，在該系統(tǒng)中容許受體結(jié)合親和性的顯著丟失，如ABS201，其比親核的結(jié)合有效性低50倍，在口服時，在大鼠精神分裂癥模型中仍然呈現(xiàn)出飽和的效果。口服給藥時，在精神分裂癥的大鼠行為模型中，ABS201的生理活性為ABS13的約三倍，清楚地表明了這對于a-氨基是最好的取代。基于該基本原理，形成設(shè)計為更好的NTR-2選擇性配體的肽，并且它們的結(jié)果呈現(xiàn)于圖27中。所有這些肽含有ABS201的R=Arg-Pro-Tyr-tertLeu-Leu-COOH和N端甲基，這是口服活性能力所需要的。這些肽還在胍鹽基團(tuán)周圍引入了添加的空間體積，胍鹽是證明了能提高NTR-2對NTR-1選擇性對NT[8-13]的要素(N端甲基也是如此)。理想的止痛肽是那些(1)在熱板、尾巴彈開和福爾馬林測試中，以IP注射時，呈現(xiàn)出與ABS201相當(dāng)或好于ABS201的止痛活性，(2)口服給藥時，呈現(xiàn)出活性，(3)具有理想的NTR-1和NTR-2結(jié)合活性，和(4)呈現(xiàn)出血漿穩(wěn)定性。實施例13—止痛的NT肽類似物ABS201的鑒定過程使得能夠限定生物穩(wěn)定性和血腦屏障穿透需要的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)參數(shù)。因此，形成了一組引入了可以提高IP或口服生物利用度的結(jié)構(gòu)要素的神經(jīng)降壓肽(NT)[S-13]衍生物。在這些參數(shù)內(nèi)，引起了其他專有的結(jié)構(gòu)改變，其可以影響與作為治療劑的潛在開發(fā)相關(guān)的各種藥物和行為參數(shù)?？偠灾b定了具有以下潛能的肽，(1)對它們的受體具有提高的結(jié)合親和性，例如，提高的結(jié)合和選擇性(例如，對于腦NTR-2具有選擇性的NT-衍生物具有止痛活性，而對NTR-1具有選擇性的那些具有抗神經(jīng)病活性)；(2)提高的生物屏障穿透；(3)提高的穩(wěn)定性；和(4)切實可行的合成成本。具體地，對已建立的NT[8-13]衍生物的化學(xué)改變包括在位置8引入非天然氨基酸殘基。設(shè)計新的肽來保留對于口服活性需要的抗精神病藥前體物質(zhì)ABS201的結(jié)構(gòu)要素，而改變Arg(8)殘基和N端部分。通過在如上所述的痛覺缺失的大鼠熱板模型中，通過IP注射來篩選具有提高的止痛活性的肽，g卩，預(yù)測具有NTR-2選擇性。使用上述三個不同止痛活性測試的五個肽的最初篩選實驗表明這些測試產(chǎn)生了相當(dāng)?shù)南鄬钚?，熱板測試是最敏感的。設(shè)計所選擇的IP劑量來產(chǎn)生活性化合物的最大應(yīng)答，如通過。/。MPE(最大陽性效應(yīng))所測量。100%的MPE表示對于熱板上的時間程度，大鼠沒有感覺到疼痛，使用30秒的截留。Tmax表示給藥后觀察到最大應(yīng)答的時間。記錄所有化合物的tmax，因為這給出了每種化合物止痛效果持續(xù)時間的表示。使用口服給藥評價。/。MPE呈現(xiàn)出100%的化合物。表13提供了測試的肽的序歹U，對于NTR-1或NTR-2的選擇性，如通過誘導(dǎo)低體溫的能力和熱板測試的結(jié)果所示的。帶有星號的化合物在熱板測試中呈現(xiàn)出顯著的活性。<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage99</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage100</formula>所有肽的最初篩選(1)IP或口服給藥時，評價它們的止痛能力(表示NTR-2激動)和(2)IP時，評價它們誘導(dǎo)低體溫的能力，這是NTR-1激動劑活性的次生效應(yīng)。使用口服給藥評價IP給藥時呈現(xiàn)出顯著止痛活性的肽，即，高于設(shè)定的閾值水平?？诜o藥時，具有高止痛和低低體溫誘導(dǎo)活性的肽是優(yōu)選，這些肽表明了對NTR-2的高選擇性。然而，具有高的低體溫活性的肽可能顯示出顯著更高的口服生物利用率，并且也是優(yōu)選的，因為它們是更好的止痛候選物，特別是如果NTR-1結(jié)合的副作用是次要的。第三個參數(shù)是IP止痛藥可以具有與口服給藥的肽不同的用途和藥效。在選擇止痛候選物中還考慮了限定的劑量-應(yīng)答曲線。因此，將不同的參數(shù)權(quán)重，并且沒有選擇在上述分析下沒有和其他肽一樣"好"同時顯示出整體相似特征的肽。進(jìn)行了涉及評價口服給藥時止痛的第二個篩選，并將最好的肽接受全部劑量-應(yīng)答分析。基于上述標(biāo)準(zhǔn)，肽ABS201、ABS202、ABS205、ABS207、ABS208、ABS210、ABS211、ABS212、ABS220、ABS225、ABS230、ABS232、ABS234和ABS239鑒定為優(yōu)選的止痛肽。這些肽的結(jié)構(gòu)概括于下表中。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table>A對于N端部分的結(jié)構(gòu)，參見以上的示意圖3實施例14一選擇的NT-類似物的止痛效果的評價圖28中顯示了通過管飼給藥20mg/kg劑量的ABS201、ABS205、ABS210、ABS212禾BABS220的止痛效果。這些結(jié)果表明口服時，ABS201、ABS205、ABS210和ABS220與ABS212活性一樣或比其給有活性。圖29A和B中說明了使用熱板測試測定的ABS232和ABS239的止痛效果。然而，通過I.P.注射給藥時，最有活性的肽是ABS212。使用熱板、尾巴彈開和福爾馬林測試，ABS212的止痛特征與嗎啡的相當(dāng)。從熱板測試和福爾馬林測試獲得的結(jié)果各自顯示于圖30A和B中，而從尾巴彈開測試獲得的結(jié)果概括于以下的表15中。在熱板測試中，大致等摩爾比例的ABS212呈現(xiàn)出與嗎啡的程度和持續(xù)時間相當(dāng)或更好的止痛活性(％MPE)(圖30A)。然而，這些肽給藥后，關(guān)注的是動物影響的差異。給予嗎啡的大鼠看上去象"投藥的"，變得更強(qiáng)直，并且對環(huán)境刺激完全沒有應(yīng)答，而給予ABS212的動物看上去簡單地就得到了放松。此外，大鼠對ABS212的止痛活性沒有變得耐受，因為給藥5天的大鼠直接顯示出與最初給藥基本上相同的"/。MPE(數(shù)據(jù)未顯示)。這是特別值得注意的，因為大鼠在給藥時間過程結(jié)束時，在實驗上不是天然的，這可能導(dǎo)致它們學(xué)習(xí)來逃避熱板并遮蓋無痛覺的可能。圖30B和C各自顯示了IP或口服給藥時的ABS212的劑量應(yīng)答。對于IP和口服給藥的大概EDs。各自為2.5-5mg/kg禾卩30-40mg/kg。在福爾馬林測試中，ABS212提供了實驗時間過程的全部止痛效果(圖31A)。在熱板測試中還可以看到，大致等摩爾濃度的嗎啡，在30分鐘后失去了活性。然而，ABS212，通過I.P.給藥時，具有更顯著的止痛效果。圖31B和C各自顯示了對于I.P.和口服給藥，使用福爾馬林測試測定的劑量應(yīng)答。大約的IP和口服ED5o在以上進(jìn)行的測試的相同范圍中。ABS212的止痛活性似乎對于NTR-2是高度選擇性的，因為在治療性止痛劑量時，從該肽引發(fā)了非常小的低體溫(NTR-1結(jié)合的次生效應(yīng))。(體外受體結(jié)合研究正在進(jìn)行中)。在尾巴彈開測試中，與鹽水相比較，ABS212在30分鐘時呈現(xiàn)出相當(dāng)顯著的痛覺缺失，在60分鐘時具有明顯更大的效果(參見表15)。ABS212基本上與嗎啡相當(dāng)。表15.ABS212(lOmg/kg)與嗎啡(5mg/kg)和鹽水在尾巴彈開測試中的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage103</column></row><table>圖32A和B各自顯示了I.P.和口服給藥時，ABS212在尾巴彈開測試中的劑量應(yīng)答數(shù)據(jù)。大約的IP和口服ED^在上述測試中看到的相同范圍中。圖33證明了通過LP.注射給藥時，ABS212在用于神經(jīng)痛的Chmig模型中是高度活性的?？偠灾珹BS212在用于疼痛狀態(tài)范圍的四個關(guān)鍵的大鼠模型中是高度有效的止痛藥急性(熱板、尾巴彈開)、慢性(福爾馬林)和神經(jīng)性的(Chung)。實施例15—ABS212的臨床前表征為了評價ABS212的藥物代謝動力，在靜脈內(nèi)和口服給藥測試物質(zhì)ABS212后的不同時間點從Spargue-Dawley(SD)大鼠收集血漿樣品。這些樣品用于測定血漿母體藥物濃度，通過LC/MS/MS用于估算藥物代謝動力學(xué)參數(shù)和口服生物利用率。對于ABS212的IV和口服給藥的濃度對時間曲線顯示于圖34A和B中。IV彈丸注射5、2.5和lmg/kg的ABS-212'2HC1后，全身清除的平均士SD值為0.40±0.05，0.40士0.17禾口1.07±0.15L/hr/kg，各自對應(yīng)于大鼠肝臟血流(3.31L/hr/kg)的12.08%、12.08。/。和32.33。/。。ABS-212'2HCl半衰期(T,/2)的平均士SD值為0.29±0.13、0.28±0.11和0.28士0.08hr。ABS-212'2HC1沒有很好地分布于組織中。IV給藥5、2.5和lmg/kg正常劑量后末期的分布體積各自為0.16±0.06、0.15±0.01和0.43±0.15L/kg，這低于大鼠的全部身體水分(0.67L/kg)。在5、2.5和lmg/kg各自的劑量，劑量標(biāo)準(zhǔn)化的AUC(。叫是2.68:2.92:1，而在5、2.5和lmg/kg各自的劑量，劑量標(biāo)準(zhǔn)化的C籠為2.68:2.46:1，表明在高劑量給予時，存在可飽和的消除?？诜o藥50mg/kg劑量的ABS-212'2HC1后，ABS-212'2HC1的C蘭和Tmax的平均±SD值各自為27.08±11.55Pg/L和0.14±0.05hr;AUC(0-和半衰期(Tl/2)的平均土SD值各自為53.06土39.65hr^g/L和1.42士0.87hr。ABS-212'2HC1的生物利用率的平均士SD值為0.11±0.08%，選擇lmg/kg組作為IV給藥數(shù)據(jù)。參考文獻(xiàn)列表下列文獻(xiàn)提供了背景信息、合成信息、科學(xué)信息、實驗方案和相關(guān)公開。每一篇文獻(xiàn)的全部內(nèi)容如被完全重復(fù)那樣被納入本申請中作為本申請的完整部分，并在此將在此引用的所有出版物、專利和專利申請通過引用合并于此。(1)Rowley,M.，Bristow,LJ.,andHutson,P.H.，"Currentandnovelapproachestothedrugtreatmentofschizophrenia."JMedChem.44:477-501,2001.(2)Kitabgi，P.andNemeroff，CB.Eds."TheNeurobiologyofNeurotensin."AnnNYAcadSci.668:1-374,1992.(3)Kapur,S.，Remington,G"Jones，C,Wilson,A.,DaSilva,J.，Houle,S.,andZipursky,R."HighlevelsofdopamineD2receptoroccupancywithlowdosehaloperidoltreatment:aPETstudy."AmJPsvch.153:948-50，1996.(4)Alvir,J.MJ.,Ueberman,J.A.，Safferman，A.Z.，Schwimmer,J丄.,andSchaff,J.A."Clozapine-inducedagranulocytosis:incidenceandriskfactorsintheUnitedStates."NewEngJMed.329:162,1993.(5)Andreasen,N.C.,Arndt，S.,Swayze，V"Cizadlo,T"Flaum,M.,Oleary,D.,Ehrhardt,JC,andYuh,W.T.C."Thalamicabnormalitiesinschizophreniavisualizedthroughmagneticresonanceimagingaveraging."Science.266:294-98,1994.(6)Lawrie，S.M.andAbukmeil，S.S."Brainabnormalityinschizophrenia.Asystematicandquantitativereviewofvolume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xué)為R或S。或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、烷基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合；(d)通式IV是并且其中N為0至5的整數(shù)；R是H；R9、R10和R11獨立地，為氫或C1-C6低級支鏈或直鏈烷基、烯基或炔基，或C6-C18芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或C4-C18且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)，前提是R9、R10和R11中最多選擇兩個為芳香基團(tuán)、取代芳香基團(tuán)、雜芳基團(tuán)或取代雜芳基團(tuán)；和Cα為碳原子，并且Cα處的立體化學(xué)為R或S；或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、烷基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合；和(e)通式V是其中N為0至5的整數(shù)；R是H或有機(jī)取代基，如C1-C6直鏈或支鏈烷基，或C6-C18芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基以任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或C4-C18且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)；和R12、R13和R14獨立地，為氫或C1-C6低級支鏈或直鏈烷基、烯基或炔基，或C6-C18芳香基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任意組合形式的相應(yīng)取代芳香基團(tuán)，或C4-C18且一個或兩個選自氧、硫和氮的雜原子以任何組合形式的雜芳基團(tuán)或具有一個或兩個選自鹵素、烷氧基、羧基、酰胺或烷基的取代基任何組合形式的相應(yīng)取代雜芳基團(tuán)，前提是R12、R13和R14中最多選擇兩個為芳香基團(tuán)、取代芳香基團(tuán)、雜芳基團(tuán)或取代雜芳基團(tuán)；或其羧酸基團(tuán)的酯、酰胺、烷基酰胺或金屬陽離子鹽或銨鹽，或其胺基的有機(jī)酸鹽或無機(jī)酸鹽，或其任意組合。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中化合物具有通式V時，C。處的立體化學(xué)是S。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的化合物，其中R、Rj、R2和R3獨立地，是氫或甲基。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中(a)如果化合物是通式I的，那么n是2至5的整數(shù)；(b)如果化合物是通式II或m的，那么n是2至5的整數(shù)，并且z是2至4的整數(shù)；和(c)如果化合物是通式IV的，那么n是2至4的整數(shù)。5.根據(jù)權(quán)利要求l、2、3或4所述的化合物，其中側(cè)鏈氨基、側(cè)鏈羧基或側(cè)鏈氨基和羧基兩者受到各自的防止氨基、羧基或這兩個基團(tuán)的不利反應(yīng)，并且可通過不引起其他基團(tuán)斷裂的化學(xué)方法除去的保護(hù)基團(tuán)的保護(hù)。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中所述的保護(hù)基團(tuán)是BOC(t-丁氧羰基)、FMOC(芴甲氧羰基)、Alloc(烯丙氧羰基)、CBZ(苯甲氧羰基)、Pbf(2,2，4，6，7-五甲氧基二氫苯并呋喃-5-磺?；?、N02(硝基)、Pmc(2，2，5,7,8-五甲氧苯并二氫吡喃-6-磺?；?、Mtr(4-甲氧基-2,3，6-三甲基苯磺?；?或Tos(甲苯磺?；?。7.包括權(quán)利要求l、2、3、4、5或6的非天然氨基酸化合物的半合成肽。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的半合成肽，其中所述的非天然氮基酸化合物是所述的半合成肽的N端部分。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的半合成肽，其中該半合成肽是(i)神經(jīng)降壓肽(8-13)，(ii)轉(zhuǎn)錄因子，(iii)細(xì)胞受體的配體，(iv)激素，(V)胞外結(jié)合肽，(vi)腦啡肽(ofenkephlin)，(vii)LHRH或其類似物，(viii)神經(jīng)肽，(ix)糖腸降血糖素(glycoincretin)，(x)整聯(lián)蛋白或其類似物，(xi)胰高血糖素，(xii)胰高血糖素樣肽，(xiii)抗血栓形成肽，(xiv)細(xì)胞因子，(xv)白細(xì)胞介素，(xvi)轉(zhuǎn)鐵蛋白，(xvii)干擾素，(xviii)內(nèi)皮素，(xix)利尿鈉激素，(xx)胞外激酶配體，(xxi)血管緊張素酶抑制劑，(xxii)肽抗病毒化合物，(xxiii)凝血酶，(xxiv)物質(zhì)P，(xxv)物質(zhì)G，(xxvi)生長激素，(xxvii)生長激素抑制素，(xxviii)GnRH或其類似物，(xxix)分泌素，(xxx)緩激肽，(xxxi)加壓素或其類似物，(xxxii)胰島素或其類似物，(xxxiii)胰島素原，或(xxxiv)生長因子的半合成肽。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的半合成肽，其是ABS205、ABS207、ABS208、ABS210、ABS211、ABS212、ABS220、ABS225、ABS226、ABS227、ABS228、ABS230、ABS232、ABS234或ABS239。11.根據(jù)權(quán)利要求7、8、9或10所述的半合成肽，其中與具有與該半合成肽相同氨基酸序列，但不具有被所述的非天然氨基酸化合物作為N端部分取代的肽相比較時，該半合成肽具有延長的體內(nèi)和/或體外半衰期。12.包括權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽和藥物載體的藥物組合物。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中肽是單元劑型。14.化妝品制劑，包括化妝品基礎(chǔ)制劑和(a)如權(quán)利要求l、2、3、4、5或6所述的脫氨烷基氨基酸；或(b)如權(quán)利要求7、8、9、IO或11所述的肽。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化妝品制劑，其中所述的化妝品基礎(chǔ)16.如權(quán)利要求l、2、3、4、5或6所述的化合物，或如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，用于醫(yī)療中。17.如權(quán)利要求l、2、3、4、5或6所述的化合物，或權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，在制備用于治療哺乳動物的精神病、疼痛、癌癥、肥胖、糖尿病或精神興奮藥濫用的藥物中的用途。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途，其中所述的精神病為精神分裂癥。19.降低患者體溫的方法，包括給藥于患者(a)有效量的如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，或(b)有效量的如權(quán)利要求12或13所述的組合物，以降低患者的體溫。20.治療癌癥的方法，包括給藥于患者(a)有效量的如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，或(b)有效量的如權(quán)利要求12或13所述的組合物，以治療癌癥。21.治療疼痛的方法，包括給藥于患者(a)有效量的如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，或(b)有效量的如權(quán)利要求12或13所述的組合物，以治療疼痛。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述的疼痛是神經(jīng)性疼痛。23.治療精神病患者的方法，包括給藥于患者(a)有效量的如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，或(b)有效量的如權(quán)利要求12或13所述的組合物，以治療精神病。24.治療肥胖癥的方法，包括給藥于患者(a)有效量的如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的肽，或(b)有效量的如權(quán)利要求12或13所述的組合物，以治療肥胖。25.篩選含有非天然氨基酸化合物的肽的活性的方法，包括歩驟:a)測量具有已知氨基酸序列的第一種肽的生物活性，其中所述的第一種肽不具有非天然氨基酸化合物；和b)測量如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的半合成肽的相同生物活性，其中所述的半合成肽具有和所述的第一種肽相同的氨基酸序列，或是第一種肽的截短形式。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述的生物活性是選擇性、凋亡(poptosis)，凋亡(apoptosis)、細(xì)胞信號、配體結(jié)合、轉(zhuǎn)錄、翻譯、代謝、細(xì)胞生長、細(xì)胞分化、穩(wěn)態(tài)、半衰期、溶解性、轉(zhuǎn)運(yùn)或穩(wěn)定性。27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述生物活性包括對所述的半合成肽穿過生物屏障能力的直接或間接評估。28.治療患有受到給予己知的第一種肽影響的疾病的患者的方法，包括將如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的半合成肽給藥于該患者，其中所述的半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述的第一種肽相同的序列，或除了非天然氨基酸化合物外是所述的第一種肽的截短形式。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述的疾病是腦的疾病，或其中該已知的第一種肽穿過身體屏障。30.提高已知的肽穿過生物屏障的能力、提高已知的肽的選擇性或提高已知的肽抵抗肽酶消化的方法，包括用如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的半合成肽替代該已知的肽，其中所述的半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述的第一種肽相同的序列，或除了非天然氨基酸化合物外是所述的第一種肽的截短形式。31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的屏障包括血腦屏障、細(xì)胞膜、腸上皮、皮膚或血眼屏障。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述的屏障是血腦屏障。33.制備具有延長的體內(nèi)半衰期的半合成肽的方法，包括用如權(quán)利要求7、8、9、10或11所述的半合成肽替代已知的肽，其中所述的半合成肽具有除了非天然氨基酸化合物外與所述的第一種肽相同的序列，或除了非天然氨基酸化合物外是所述的第一種肽的截短形式。全文摘要本發(fā)明涉及非天然脫氨氨基酸化合物，其制備方法和含有這些化合物作為N端部分的肽。優(yōu)選的實例是神經(jīng)降壓肽(8-13)，其中N端是α脫氨N，N-二甲基高賴氨酸殘基。文檔編號A61K38/00GK101472601SQ200680052885公開日2009年7月1日申請日期2006年12月15日優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日發(fā)明者J·O·布勞爾,T·A·迪克斯申請人:阿爾戈林生物科學(xué)公司;南卡羅來納醫(yī)科大學(xué)研究發(fā)展基金會