專利名稱：：3-芳基取代的喹唑啉酮及其用途的制作方法3-芳基取代的喹唑啉酮及其用途相關(guān)申請本申請要求2005年12月22日提交的美國臨時申請60/753,801和2006年7月27日提交的美國臨時申請60/833,855的優(yōu)先權(quán)，所述文獻全文并入本文作為參考。
背景技術(shù)：
：許多用于治療疾病的藥物是以疾病細胞和正常細胞間的普遍差異作為靶標。例如，用于治療卵巢癌和乳腺癌并抑制微管功能的紫杉醇，被認為基于腫瘤細胞相對正常細胞更高的增殖率而顯示對腫瘤細胞的特異性(Miller和Ojima,Chem.Rec.1:195-211,2002)。然而，盡管這是一致的觀點，但是紫杉醇的體外活性在不同腫瘤細胞系間差別很大(Weinstein等人，Science275:343-349,1997)，表明遺傳因子可以調(diào)節(jié)腫瘤細胞對紫杉醇的敏感性，并且腫瘤細胞的反應(yīng)性不是簡單的決定于其增殖率。分子靶向治療代表了抗癌藥物開發(fā)的一種有前途的新方法(Shawver等人，CancerCell1:117-23,2002)。利用這個方法，設(shè)計小分子用于直接抑制特定腫瘤細胞類型中突變或者過表達的癌蛋白。通過靶向于腫瘤細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的特定分子缺陷，這種方法最終可以產(chǎn)生適于特定治療各種腫瘤遺傳組成的方法。近來成功的兩個分子耙向抗癌治療劑的例子是格列衛(wèi)(Gleevec)(甲磺酸伊馬替尼)，一種在費城染色體陽性慢性髓性白血病中發(fā)現(xiàn)的斷裂點簇集區(qū)-abelsen激酶(BCR-ABL)癌蛋白的抑制劑(Capdeville等人，NatRevDrugDiscov1:493-502,2002)，和赫賽汀(Herceptin)(曲妥單抗)，一種耙向在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中發(fā)現(xiàn)的HER2/NEU癌蛋白的單克隆抗體(Mokbel和Hassanally，CurrMedResOpin17:51-9，2001)。一種互補的策略涉及尋找基因型選擇性的抗腫瘤試劑，所述試劑只有在特定癌蛋白存在或者特定腫瘤抑制物缺失的條件下對腫瘤細胞才是致死性的。這種基因型選擇性化合物可以直接靶向癌蛋白，或者它們可以靶向其他參與癌蛋白相聯(lián)信號網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵蛋白。已報道的顯示合成致死性的化合物包括(i)雷帕霉素類似物CCI-779在缺少PTEN的骨髓瘤細胞中(Shi等人，CancerRes62:5027-34，2002)，(ii)格列衛(wèi)在BCR-ABL-轉(zhuǎn)化細胞中(Druker等人，NatMed2:561-6，1996)，和(iii)大量未充分表征的化合物(Stockwell等人，ChemBiol6:71-83,1999;Torrance等人，NatBiotechnol19:940-5，2001)。盡管有上述研究，仍然非常需要開發(fā)和/或鑒定能夠選擇性靶向腫瘤細胞的化合物。發(fā)明簡述已經(jīng)鑒定了許多在需要治療或預(yù)防的個體如人中可用于治療或預(yù)防癌(特征在于特別是作為BRAF、HRAS、NRAS或KRAS突變結(jié)果的Ras途徑活化的腫瘤或白血病)化合物/試劑/藥物。此處使用的術(shù)語"試劑"和"藥物"可以互換使用；它們可以是化合物或者分子。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了由結(jié)構(gòu)式(I)表示的化合物(R2)jv(1)，或其可藥用鹽，其中Ra為鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基-o-，被取代或未被取代的垸基-O-，被取代或未被取代的烯基-O-或被取代或未被取代的炔基-O-，其中垸基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；每個R2獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH和-OR，；每個R3獨立地選自囪素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R,-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH和-OR，；R4和Rs獨立地選自-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)和被取代或未被取代的芳基，其中烷基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)J司斷；或者R4和R5—起形成碳環(huán)或雜環(huán)基團；V為-NH-L-A-Q或環(huán)C為被取代或未被取代的雜環(huán)的芳香或非芳香環(huán)；A為NR或O;或者A為共價鍵；L為被取代或未被取代的烴基，其任選被一個或多個選自N、O和S的雜原子間斷；Q選自-R，-C(O)R，，-C(0)N(R)2，-C(0)OlHS(0)2R，；每個R獨立地為-H，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)；每個R'獨立地為被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)或被取代或未被取代的芳基；j為0-4的整數(shù)；k為0-4的整數(shù)，條件是j和k至少之一是l-4的整數(shù)；和每個n獨立地為0、l或2。在又一實施方案中，本發(fā)明提供了由結(jié)構(gòu)式(II)表示的化合物:或其可藥用鹽，其中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>Ri為被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基或被取代或未被取代的炔基，其各自任選地被NR、O或S(O)J司斷；每個R2獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH和-OR，；每個R3獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH和-OR，；R4和Rs獨立地選自-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)和被取代或未被取代的芳基，其中垸基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；或者R4和R5—起形成碳環(huán)或雜環(huán)基團；V為-NH-L-A-Q或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>環(huán)C為被取代或未被取代的雜環(huán)的芳香或非芳香環(huán)；A為NR或O;或者A為共價鍵；L為被取代或未被取代的烴基，其任選被一個或多個選自N、O和S的雜原子間斷；Q選自-R，-C(0)R，，-C(0)N(R)2，-C(0)OR,-S(0)2R，；每個R獨立地為-H，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)；每個R，獨立地為被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)或被取代或未被取代的芳基j為0-4的整數(shù)；k為0-4的整數(shù)，條件是j和k至少之一是l-4的整數(shù)；和每個n獨立地為0、l或2。本發(fā)明的化合物可以與可藥用載體配制成藥物組合物。在本發(fā)明的其它方面，本發(fā)明涉及本文公開的化合物，其選擇性地殺傷或抑制腫瘤細胞生長(對腫瘤細胞具有毒性)。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療哺乳動物的病況的方法，包括對哺乳動物給用治療有效量的本發(fā)明的化合物。適當?shù)脑噭┛梢云洮F(xiàn)有形式或者在完全或部分代謝后具有所述的活性。在某些方面，化合物通過細胞凋亡或非細胞凋亡機理殺傷細胞。在某些方面，細胞有升高的Ras路徑活性(例如RasV12)。在某些方面，所述病況是癌。本發(fā)明的另一方面提供了殺傷細胞、促進細胞死亡或抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給用有效量的本發(fā)明的化合物。適當?shù)脑噭┛梢云洮F(xiàn)有形式或者在完全或部分代謝后具有所述的活性。在某些實施方案中，所述細胞是癌細胞。在一個實施方案中，本發(fā)明是減少腫瘤生長率的方法，包括給用足夠減少腫瘤生長率的量的治療劑，其中所述治療劑是本發(fā)明的化合物。適當?shù)脑噭┛梢云洮F(xiàn)有形式或者在完全或部分代謝后具有所述的活性。在一個方面，本發(fā)明是治療癌患者的方法，包括對所述患者給用有效量的本發(fā)明的化合物。適當?shù)脑噭┛梢云洮F(xiàn)有形式或者在完全或部分代謝后具有所述的活性。在另一方面，本發(fā)明是增加腫瘤細胞對化療劑的敏感性的方法(例如加合或協(xié)同方式)，其中腫瘤細胞與本文公開的化合物接觸。在相關(guān)方面，本發(fā)明是減少標準細胞對化療劑的敏感性的方法，其中所述正常細胞與本文公開的化合物接觸。在一個實施方案中，本發(fā)明是鑒定可能響應(yīng)用本發(fā)明化合物的治療的方法。使用本領(lǐng)域已知的標準表征方法，可期待被識別具有顯示以下一種或多種的瘤形成的患者可應(yīng)答以一個或多個路徑元件的活化為特征的異常Ras信號路徑活性(例如磷酸化Erkl/2，磷酸化MEK等)，和/或基因表達分布和/或相似或相同基因型的細胞系對體外或體內(nèi)暴露于本發(fā)明的化合物下的敏感性。在另一個實施方案中，本發(fā)明是一種進行制藥活動的方法，包括(a)鑒定抑制細胞增殖的候選治療劑，其中候選治療劑是本文公開的化合物；(b)進行在步驟(a)中鑒定的候選治療劑在動物中的功效和毒性的治療評價；和(c)制備藥物制劑，其包括一種或多種在步驟(b)中鑒定的具有可接受的治療評價的候選治療劑。取代步驟(b)和(c)的一步或者兩步或者除了步驟(b)和(c)的一步或者兩步之外，所述方法可以包括將候選治療劑進一步開發(fā)的權(quán)利許可給第三方。在另一個實施方案中，進行藥物開發(fā)活動的方法包括建立用于分配待售藥物制劑的分配系統(tǒng)。任選地，建立銷售團隊用于藥物制劑的市場推廣。本發(fā)明還提供包裝的藥物。在一個實施方案中，包裝的藥物包括(i)治療有效量的本文公開的化合物；和(ii)用于治療癌癥患者的試劑給藥的說明書和/或標簽。說明書或者標簽可以儲藏在電子介質(zhì)，例如CD、DVD、軟盤、存儲卡等等，這些可以通過電腦讀取。本發(fā)明還提供了本文公開的化合物用于制備用于治療癌的藥物的用途。在某些實施方案中，本發(fā)明的方法還包括聯(lián)合給藥一種或多種試劑，諸如通常通過細胞凋亡機理殺傷細胞的化療劑。適用于降低腫瘤生長率和治療癌患者的試劑包括但不限于有機小分子，肽，蛋白質(zhì)，素擬肽，核酸，抗體，及其組合。預(yù)期本發(fā)明的所有的實施方案可以與一個或多個其它實施方案，甚至是在本發(fā)明的不同方面描述的其它實施方案組合。圖1表示由化合物25所引起的HT-1080細胞異種移植物生長的抑圖2表示由化合物25所引起的HT-1080細胞異種移植物生長的抑制。圖3表示由化合物IO所引起的HT-1080細胞異種移植物生長的抑制。圖4表示通過蛋白質(zhì)印跡法和SDS-PAGE使用固定在Affi-Gel10珠上的化合物4-9使用得自腫瘤細胞的細胞裂解產(chǎn)物從pull-down實驗鑒定的蛋白質(zhì)。發(fā)明詳述本發(fā)明還提供了由結(jié)構(gòu)式(I)表示的化合物，其中該化合物適用于本文公開的方法和組合物中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>或其可藥用鹽，其中Ra為鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基-O-，被取代或未被取代的垸基-o-，被取代或未被取代的烯基-o-或被取代或未被取代的炔基-O-，其中垸基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)J司斷；每個R2獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH禾口-OR，；每個R3獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH和-OR，；R4和Rs獨立地選自-H，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)和被取代或未被取代的芳基，其中烷基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；或者R4和R5—起形成碳環(huán)或雜環(huán)基團；V為-NH-L-A-Q或環(huán)C為被取代或未被取代的雜環(huán)的芳香或非芳香環(huán)；A為NR或O;或者A為共價鍵；L為被取代或未被取代的烴基，其任選被一個或多個選自N、O和S的雜原子間斷；Q選自-R，-C(0)R，，-C(0)N(R)2，-C(0)OlHS(0)2R，；每個R獨立地為-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)；每個R，獨立地為被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)或被取代或未被取代的芳基；j為0-4的整數(shù)；k為0-4的整數(shù)，條件是j和k至少之一是l-4的整數(shù)；和每個n獨立地為0、1或2。對于本發(fā)明的某些化合物，V是由上述結(jié)構(gòu)包括的V的適當?shù)睦影?<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>當V由這些結(jié)構(gòu)之一表示時，A通常是共價鍵或NR。V的特別適當?shù)睦邮?、Q和Q其中A是共價鍵；和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>其中A是NR。在某些實施方案中，A是共價鍵并且Q是-R。當Q是-R時，Q通常是-H或被取代或未被取代的烷基(例如甲基，乙基)。在某些這種實施方案中，V是Q,A是共價鍵并且Q是-H，甲基或乙基，特別是甲基。在某些實施方案中，在本發(fā)明的化合物中，特別是其中V如上所示的化合物中，取代基-Q是酰基。酰基通常由-C(O)R'表示，其中R'的定義如上所述。在某些實施方案中，-C(O)R，中的R，為被取代或未被取代的芳基或芳基氧基烷基，特別是被取代或未被取代的苯基或苯基氧基烷基，諸如被取代或未被取代的苯基氧基甲基。苯基的適當?shù)娜〈╠-6烷基，CF3，羥基，CM烷氧基，芳基，芳基氧基，鹵素，-N(R)2，硝基，羧酸，羧酸酯，和磺?；?。苯基氧基甲基的適當?shù)娜〈u素，特別是氯。當存在時，氯優(yōu)選位于苯基環(huán)的4-位，以得到如上所示的-Q基在其中V由-NH-L-A-Q表示的化合物中，L通常是被取代或未被取代的亞烷基或聚(亞垸基二醇)(例如聚(乙二醇)，聚(丙二醇)。適當?shù)膩嗃睦佑?(CH2)j-表示，其中j是1-6的整數(shù)，諸如2-4。聚(亞烷基二醇)通常是2聚體或3聚體。R4和Rs通常獨立地為-H或被取代或未被取代的烷基(例如烷基，垸氧基垸基，單-或二垸基氨基垸基，芳烷基)，特別是當V(包括A和Q)具有上述值時。更通常地，R4和R5獨立地為被取代或未被取代的Q-C4烷基，特別是甲基。R,通常是被取代或未被取代的烷基，特別是未被取代的d-Q垸基(例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基)。在一個實施例中，當&、Rs和V具有上述值時，R,通常是被取代或未被取代的烷基。在某些實施方案中，j為1，2，3或4，諸如當k為0時。在某些實施方案中，k為1，2，3或4，諸如當j為0時。在某些實施方案中，j為1-4的整數(shù)并且k為1-4的整數(shù)。例如，j為1并且k為1，j為1并且k為2，j為l并且k為3，j為l并且k為4，j為2并且k為1,j為2并且k為2，j為2并且k為3，j為2并且k為4，j為3并且k為1，j為3并且k為2，j為3并且k為3，j為3并且k為4，j為4并且k為1，j為4并且k為2，j為4并且k為3，或j為4并且k為4。當存在一個或多個112和/或R3取代基時，它們通常獨立地選自極性取代的烷基，極性取代的垸氧基，極性取代的碳環(huán)芳基，被取代或未被取代的雜芳基(例如含氮雜芳基，諸如咪唑基，嗯唑基，噻唑基，吡啶基，嘧啶基，三唑基)和被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)(例如吡唑基，哌啶基，哌嗪基，嗎啉基，高哌嗪基)。有利地，這些基團改善了化合物的水溶性。特別適當?shù)臉O性取代基包括氨基，酰胺基，胍基，-S03H，-P03H，-OH和-COOH(包括水解生成-COOH的酯)，包括其鹽。其它適當?shù)娜〈ㄏ趸u素如氯、溴和碘，被鹵素取代的垸基和烷氧基(例如-CF3，-OCF3)。R2和/或R3的另外的適當值包括-NRC(O)R和-N(R)2，特別是-NHC(O)R和-NHR。對于-NHC(O)R和-NHR,R通常是-H或被取代的烷基。這種烷基上的取代基有利地是能夠與其它官能團反應(yīng)形成共價鍵，諸如胺，羧酸，酰鹵，鹵素等的基團。優(yōu)選地，當&和/或R3是-NHC(O)R或—NHR時R是氨基垸基(例如其中垸基通常是C3-C6)，或當R2和/或R3是-NHR時R是-H。112和/或R3的例子包括-NH2、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>在某些實施方案中，結(jié)構(gòu)式(I)的化合物由以下的具體結(jié)構(gòu)表示:在結(jié)構(gòu)式(Ia)中，R2通常是-NHR(例如-NH2)并且&通常是垸氧基(例如甲氧基，乙氧基)。在結(jié)構(gòu)式(Ib)中，R3通常是鹵素或-OCF3并且Ra通常是鹵素或垸氧基(例如甲氧基，乙氧基)。在某些實施方案中，在結(jié)構(gòu)式(Ia)中R3所在位置與R3在結(jié)構(gòu)式中(Ib)的位置相同。本發(fā)明的特別適當?shù)幕衔锞哂幸韵碌囊粋€或多個特點(1)V是4-哌嗪基，4-高哌嗪基，4-甲基高哌嗪基或4-(4-氯苯氧基乙酰基)哌嗪基，優(yōu)選4-甲基高哌嗪基；(2)&是-H或未被取代的烷基，優(yōu)選-H或甲基；(3)R5是-H或未被取代的垸基，優(yōu)選-H或甲基；(4)Ra是未被取代的烷基-O-基，優(yōu)選乙基-O-(即，乙氧基)；和(5)R2和R3的至少之一是增強水溶性的基團(例如，-NH2)，-N02，-0^3和/或鹵素。這種適當?shù)幕衔锏睦泳哂刑攸c(l);特點(1)和(2);特點(1)國(3);特點(l)-(4);或特點(1)-(5)。本發(fā)明還提供了由結(jié)構(gòu)式(II)表示的化合物，其中該化合物適用于本文公開的方法和組合物中<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>或其可藥用鹽，其中R,為被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基或被取代或未被取代的炔基，其各自任選地被NR、0或S(0)。間斷；每個R2獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，棚CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02，-OH和-OR，(例如鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-S02N(R)2，-OH和-OR，)；每個R3獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-NRC(O)R，-S02N(R)2，-N(R)2，-N02,-OH和-OR，(例如鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-S02N(R)2，-OH和-OR，)；R4和R5獨立地選自-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)和被取代或未被取代的芳基，其中烷基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；或者FU和Rs—起形成碳環(huán)或雜環(huán)基團；V為-NH-L-A-Q或<formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula>環(huán)C為被取代或未被取代的雜環(huán)的芳香或非芳香環(huán)；A為NR或O;或者A為共價鍵；L為被取代或未被取代的烴基，其任選被一個或多個選自N、O和S的雜原子間斷；Q選自-R，-C(O)R'，-C(0)N(R)2，-(:(0)011，和-3(0)2仗，；每個R獨立地為-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)；每個R'獨立地為被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)或被取代或未被取代的芳基；j為0-4的整數(shù)；k為0-4的整數(shù)，條件是j和k至少之一是l-4的整數(shù)；和每個n獨立地為0、1或2。對于本發(fā)明的某些化合物，V是V的特別適當?shù)睦邮?Q和Q其中A是共價鍵；和其中A是NR。在某些實施方案中，A是共價鍵并且Q是-R。當Q是-R時，Q通常是-H或被取代或未被取代的垸基(例如甲基，乙基)。在某些這種實施方案中，V是、Q，A是共價鍵并且Q是-H，甲基或乙基，特別是甲基。在某些實施方案中，在本發(fā)明的化合物中，特別是其中V如上所示的化合物中，取代基-Q是酰基。酰基通常由-C(O)R'表示，其中R'的定義如上所述。在某些實施方案中，-C(O)R'中的R，為被取代或未被取代的芳基或芳基氧基烷基，特別是被取代或未被取代的苯基或苯基氧基垸基，諸如被取代或未被取代的苯基氧基甲基。苯基的適當?shù)娜〈≦V烷基，CF3，羥基，CM垸氧基，芳基，芳基氧基，鹵素，-N(R)2，硝基，羧酸，羧酸酯，和苯基氧基甲基的適當?shù)娜〈u素，特別是氯。當存在時，氯優(yōu)選位于苯基環(huán)的4-位，以得到如上所示的-Q基在其中V由-NH-L-A-Q表示的化合物中，L通常是被取代或未被取代的亞烷基或聚(亞垸基二醇)(例如聚(乙二醇)，聚(丙二醇)。適當?shù)膩嗃睦佑?(CH2)j-表示，其中j是l-6的整數(shù)，諸如2-4的整數(shù)。聚(亞垸基二醇)通常是2聚體或3聚體。R4和Rs通常獨立地為-H或被取代或未被取代的烷基(例如垸基，烷氧基烷基，單-或二垸基氨基垸基，芳垸基)，特別是當V(包括A和Q)具有上述值時。更通常地，R4和Rs獨立地是-H或被取代或未被取代的C,-C4烷基，特別是甲基。R通常是被取代或未被取代的垸基，特別是未被取代的C,-C4烷基(例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，叔丁基)。在一個實施例中，當R4、Rs和V具有上述值時，R,通常是被取代或未被取代的烷基。在某些實施方案中，j為1，2，3或4，諸如當k為0時。在某些實施方案中，k為1，2，3或4，諸如當j為0時。在某些實施方案中，j為1-4的整數(shù)并且k為1-4的整數(shù)。例如，j為1并且k為1,j為1并且k為2，j為l并且k為3，j為l并且k為4，j為2并且k為1，j為2并且k為2，j為2并且k為3，j為2并且k為4，j為3并且k為1，j為3并且k為2，j為3并且k為3，j為3并且k為4，j為4并且k為1，j為4并且k為2，j為4并且k為3，或j為4并且k為4。當存在一個或多個R2和/或R3取代基時，它們通常獨立地選自極性取代的垸基，極性取代的烷氧基，極性取代的碳環(huán)芳基，被取代或未被取代的雜芳基(例如含氮雜芳基，諸如咪唑基，瞎唑基，噻唑基，吡啶基，嘧啶基，三唑基)和被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)(例如吡唑基，哌啶基，哌嗪基，嗎啉基，高哌嗪基)。有利地，這些基團改善了化合物的水溶性。特別適當?shù)臉O性取代基包括氨基，酰胺基，胍基，-S03H，-P03H，-OH和-COOH(包括水解生成-COOH的酯)，包括其鹽。其它適當?shù)娜〈ㄏ趸?，鹵素諸如氯、溴和碘，和被鹵素取代的垸基和烷氧基(例如-CF3，-OCF3)。R2和/或R3的另外的適當值包括-NRC(O)R和-N(R)2，特別是-NHC(O)R和-NHR。對于-NHC(O)R和-NHR，R通常是-H或被取代的烷基。這種垸基上的取代基有利地是能夠與其它官能團反應(yīng)形成共價鍵，例如胺，羧酸，?；u，鹵素等的基團。優(yōu)選地，當R2和/或R3是-NHC(O)R或-NHR時R是氨基垸基(例如其中垸基通常是C3-C6)，或當R2和/或R3是-NHR時R是-H。R2和/或R3的例子包括-NH2，-NHC(0)(CH2)3NH2和-NH(CH2)6NH2。本發(fā)明的特別適當?shù)幕衔锞哂幸韵碌囊粋€或多個特點(1)V是4-哌嗪基，4-高哌嗪基，4-甲基高哌嗪基或4-(4-氯苯氧基乙?；?哌嗪基；(2)R4是未被取代的烷基，優(yōu)選是甲基；R5是-H或未被取代的垸基，優(yōu)選是-H或甲基；(4)Ri是未被取代的垸基，優(yōu)選是乙基；和(5)R2和R3的至少之一是增強水溶性的基團，-OCF3，-N02和/或鹵素。這種適當?shù)幕衔锏睦泳哂刑攸c(1);特點(l)-(2);特點(l)-(3);特點(1)-(4);或特點(1)-(5)。示例性的化合物包括化合物(l)、(2)和(3):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>其它的示例性化合物如實施例所示。本發(fā)明的化合物包括本文公開的化合物的對映體和非對映體。本發(fā)明還包括本文公開的化合物的鹽，特別是可藥用鹽。另外，本發(fā)明包括本文公開的化合物的溶劑合物、水合物和多晶型物結(jié)晶形式。預(yù)期本發(fā)明的所有的實施方案可以與一個或多個其它實施方案，甚至是那些在本發(fā)明的不同方面描述的其它實施方案組合。本文中使用的術(shù)語"酰基"包括可由通式表示的以下部分o其中適當?shù)腞基團包括但是不限于H，烷基，烷氧基，芳烷基，芳基氧基，芳基，雜芳基，雜芳烷基，雜芳基氧基，和環(huán)垸基，其中任何這些基團可任選地被進一步適當?shù)厝〈Ｐg(shù)語"烴基"是指被取代或未被取代的、環(huán)狀或非環(huán)狀的、飽和或不飽和的烴基。當被說明時，烴基原子可以被一個或多個雜原子例如N、O和S間斷(即，雜原子不位于烴基的末端)。術(shù)語"垸基"是指被取代或未被取代的飽和烴基，包括直鏈垸基和支鏈垸基，包括鹵代烷基諸如三氟甲基和2，2，2-三氟乙基等。Co烷基當所述基團位于末端時是指氫，如果所述基團位于內(nèi)部時是指化學(xué)鍵。術(shù)語"烯基"和"炔基"是指被取代或未被取代的不飽和的脂族基團，與上面描述的烷基的具有類似的可能取代，但是分別包含至少一個雙鍵或三鍵。術(shù)語"烷氧基"是指連接有垸基的氧。代表性的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，叔丁氧基等。"醚"是通過氧以共價鍵連接的兩個烴。因此，使烷基成為醚的該烷基的取代基是烷氧基或類似垸氧基。本文中使用的術(shù)語"芳烷基"是指被芳基取代的烷基。本文中使用的術(shù)語"碳環(huán)"包括被取代或未被取代的、飽和或不飽和的、3-8元單環(huán)環(huán)狀脂族基團，其中每個環(huán)原子是碳。本文中使用的術(shù)語"雜環(huán)基"包括被取代或未被取代的、3-8元、優(yōu)選4-8元的單環(huán)環(huán)狀基團，其中環(huán)中包含l-3個雜原子。非芳香雜環(huán)基團的例子包括吡咯垸、哌啶、哌嗪、四氫呋喃和四氫噻吩。本文中使用的術(shù)語"芳基"包括被取代或未被取代的5、6和7元的單環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)芳香基團。術(shù)語"芳基"還包括具有兩個或多個環(huán)狀環(huán)的多環(huán)體系，其中兩個或多個碳為兩個鄰接環(huán)所共有，其中環(huán)的至少之一是芳香性的，例如另一個環(huán)狀環(huán)可以是環(huán)烷基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基和/或雜環(huán)基。碳環(huán)芳基包括苯，萘，菲，苯酚，苯胺等。術(shù)語"雜芳基"包括被取代或未被取代的芳香的5-7元環(huán)狀結(jié)構(gòu)，更優(yōu)選為5-6元環(huán)，其環(huán)狀結(jié)構(gòu)含有l(wèi)-4個雜原子。術(shù)語"雜芳基"還包括具有兩個或多個環(huán)狀環(huán)的多環(huán)體系，其中兩個或多個碳為兩個鄰接環(huán)所共有，其中環(huán)的至少之一是雜芳香性的，例如，另一個環(huán)狀環(huán)可以是環(huán)垸基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基，和/或雜環(huán)基。雜芳基包括例如吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，螺唑，噻唑，三唑，吡唑，吡啶，吡嗪，噠嗪和嘧啶等。本文中使用的術(shù)語"雜原子"是指任何的不同于碳或氫的元素的原子。優(yōu)選的雜原子是氮、氧、磷和硫。術(shù)語"多環(huán)基"或"多環(huán)的"是指兩個或多個環(huán)(例如環(huán)烷基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基，雜芳基,和/或雜環(huán)基)其中兩個或多個碳為兩個鄰接的環(huán)所共有，例如所述環(huán)是"稠環(huán)"。多環(huán)中的每個環(huán)可以是飽和或不飽和的。術(shù)語"取代的"是指具有替換骨架上一個或多個碳上的氫的取代基的部分。很清楚"取代"或者"用...取代"包括隱含條件，即這種取代與取代的原子和取代基允許的化合價一致，并且取代導(dǎo)致穩(wěn)定的化合物，例如，不會自發(fā)進行轉(zhuǎn)化例如通過重排、環(huán)化、消除等等。此處使用的術(shù)語"取代的"預(yù)期包括有機化合物所有允許的取代。在較寬范圍，允許的取代基包括有機化合物的非環(huán)狀的和環(huán)狀的，支鏈和無支鏈的，碳環(huán)的和雜環(huán)的，芳香族和非芳香族取代基。對合適的有機化合物，允許的取代可以是一種或多種，可以是相同或者不同的。對本發(fā)明來說，雜原子比如氮可以有氫取代基和/或此處描述的任何允許的有機化合物取代，其滿足雜原子的化合價。取代基可以包括此處描述的任何取代基，例如鹵素，羥基，羰基(比如羧基，烷氧羰基，甲?；?，或者酰基)，硫代羰基(比如硫酯，硫代醋酸酯，或者硫代甲酸酯)，垸氧基，磷?；?，磷酸酯，膦酸酯，次膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亞胺，氰基，硝基，疊氮基，巰基，垸硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺酰基，磺酰氨基，磺?；?，雜環(huán)，芳烷基，或者芳香族或者雜芳族部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道烴鏈上被取代的部分它們自身也是可以被取代的，如果合適的話。術(shù)語"小的有機分子"是指分子量小于2000amu的非聚合物。通常，這種分子的分子量小于1000amu，比如小于500amu。選擇性細胞殺傷基因型選擇性化合物作為分子探針的能力基于化學(xué)遺傳學(xué)的前提，即小分子可用于鑒定行使生物學(xué)效果的蛋白和途徑(Schreiber，1998，Bioorg.Med.Chem.6,1127-1152;Stockwell,2000，NatRevGenet1,116-25;Stockwell,2000，TrendsBiotedmol18，449-55)。例如，觀測到天然產(chǎn)物雷帕霉素阻止細胞生長，使發(fā)現(xiàn)哺乳動物的雷帕霉素(mTOR)的靶標作為調(diào)節(jié)細胞生長的蛋白成為可能(Brown等人，1994,Nature369，756-758;Sabatini等人，1994，Cell78,35-43)。申請人已經(jīng)加工了一系列具有確定遺傳元件的腫瘤細胞，用于鑒定那些關(guān)鍵途徑，這些途徑的破壞將導(dǎo)致致瘤表型(Hahn等人，1999,NatMed5,1164-70;Hahn等人，2002，NatRevCancer2，331-41;Lessnick等人，2002,CancerCell1，393-401)。申請人推定這些實驗轉(zhuǎn)化的細胞使得鑒定基因型選擇性試劑成為可能，所述試劑在特定癌癥相關(guān)等位基因存在的情況下顯示合成致死性。具有基因型選擇致死性的化合物可以作為腫瘤細胞中信號網(wǎng)絡(luò)的分子探針，并作為后續(xù)開發(fā)具有良好療效指數(shù)的臨床有效藥物的先導(dǎo)物，和/或作為有效藥物。本發(fā)明提供了殺傷癌細胞，尤其是基因型特異的癌細胞，比如那些具有升高的Ras信號活性的癌細胞的化合物。因此，本發(fā)明的一個方面提供一種選擇性殺傷癌細胞，尤其是那些具有升高的Ras活性的癌細胞的方法，所述方法包括對需要治療的哺乳動物患者給藥治療有效量的本文公開的化合物。如本領(lǐng)域公知，Ras的組成性活化是人癌細胞惡性生長的重要因素。在20%到30%的人類腫瘤中發(fā)現(xiàn)，RAS原癌基因(H-RAS,N-RAS,K-RAS)的突變是頻發(fā)的遺傳畸變，盡管在不同腫瘤類型中的發(fā)生率變化很大(Bos，CancerRes.49:4682-4689，1989)。最高的RAS突變率是在胰腺腺癌(90%)，結(jié)腸腺癌(50%)和肺腺癌(30%)中發(fā)現(xiàn)。在甲狀腺的濾泡和未分化癌中，RAS突變的發(fā)生率也是相當高的(50%)。最常觀察到的RAS突變出現(xiàn)在Ras調(diào)節(jié)的關(guān)鍵位點--即密碼子12、13和61。這些突變的每一種均導(dǎo)致Ras正常GTPase活性的消除。Ras活化還經(jīng)常在血液惡性腫瘤例如骨髓性白血病和多發(fā)性骨髓瘤中觀察到。在大約三分之一的脊髓發(fā)育不良綜合征(MDS)和急性骨髓性白血病(AML)中，RAS基因被突變活化。RAS突變存在于大約40%新確診的多發(fā)性骨髓瘤患者中，并且頻率隨病程進展增加。具有活化Ras途徑的細胞可被本文公開的化合物選擇性的殺傷，諸如通過細胞凋亡機理。因此，在某些實施方案中，某些特定基因型的癌細胞可被本發(fā)明的化合物選擇性的殺傷。這些可以包括帶有組成活化的Ras突變或者Ras信號途徑突變和增強的ERK1、MEK1活性的癌癥。在某些其他實施方案中，靶細胞的基因型可以被選擇性的改變，這樣的話以前對本發(fā)明的化合物不敏感的靶細胞現(xiàn)在對這種殺傷敏感。在某些實施方案中，本發(fā)明提供一種選擇性殺傷具有升高的Ras途徑活性的癌細胞而保護不具有升高的Ras活性的相對正常細胞的方法。這可能是有用的，因為許多癌癥帶有體細胞RasV12或者導(dǎo)致癌細胞中Ras信號活性升高的其他類似突變，而相同患者/個體中的正常細胞通常沒有相同的RasV12或者其他的Ras途徑突變。本發(fā)明的化合物可以用來選擇性的殺傷這些癌細胞。本發(fā)明的方法仍能有效殺傷癌細胞，因為正常細胞可能沒有升高的Ras信號活性。在一些實施方案中，升高的Ras活性通過在氨基酸位置12、13和/或61的組成性活化Ras(N-，H-，或者K-Ras)突變而顯示。在一些其它實施方案中，Ras活性的升高通過Ras途徑蛋白一種或多種下游組件增強的活性顯示，包括但不限于Raf、MEK、MAPK等等。在其他實施方案中，細胞可以通過一種或多種靶蛋白的導(dǎo)入或表達對藥物敏感。表達可以通過用載體，諸如表達靶蛋白的腺病毒或者逆轉(zhuǎn)錄病毒感染耙細胞來實現(xiàn)(見下文)?；蛘?，靶蛋白可以直接地提供給靶細胞。例如，靶蛋白可利用本領(lǐng)域已知的各種方法導(dǎo)入靶細胞(參見下文細節(jié))。在一個實施方案中，靶蛋白可以通過捕獲在表面上帶有正電荷的脂質(zhì)體(例如lipofectins)中而提供給靶細胞，任選可用抗耙組織細胞表面抗原的抗體，例如，抗癌細胞表面抗原的抗體標記。在另一個實施方案中，靶蛋白可以通過胞轉(zhuǎn)(transcytosis)作用提供給靶細胞，利用任何能夠調(diào)節(jié)這種功效的"內(nèi)化肽"，包括但不限于HIV蛋白Tat的N端結(jié)構(gòu)域(例如，Tat的殘基l-72或者其能夠促進胞轉(zhuǎn)作用的更小片段)，果蠅antenopediaIII蛋白的全部或者部分，黃峰毒素(mastoparan)的足夠部分等等(見下文)。在其他實施方案中，通過輸送抗體、RNAi(siRNA，短發(fā)夾RNA,等等)、反義序列或者對這種靶蛋白特異的小分子抑制劑可獲得減少的蛋白質(zhì)(和/或其它的靶蛋白)。這種靶細胞蛋白拮抗劑的輸送是本領(lǐng)域公知的。參見，例如，WO0術(shù)8940A2，EP1439227A1,WO04048545A2,US20040029275A1,WO03076592A2，WO04076674Al，W09746671A1，在此全部引入作為參考。本發(fā)明的另一個方面提供一種利用本發(fā)明的化合物和一種或多種通過細胞凋亡機理殺傷細胞的試劑或者療法(例如放療)的聯(lián)合療法。這種試劑包括如下所述的多種化療藥物。據(jù)信某些蛋白在對本發(fā)明化合物敏感的細胞中表達水平升高。在某些實施方案中，靶細胞被調(diào)控表達更高水平的靶蛋白，這樣通過本發(fā)明的化合物增強殺傷或者降低增殖率的敏感性。例如，靶蛋白可利用本領(lǐng)域已知的各種方法被導(dǎo)入靶細胞(參見下面詳述)。在一個實施方案中，靶蛋白可以通過被捕獲在表面上帶有正電荷表面的脂質(zhì)體(例如lipofectins)中而提供給耙細胞，該脂質(zhì)體可選地用抗靶組織的細胞表面抗原的抗體，例如，抗癌細胞表面抗原的抗體進行標記。此外，編碼功能性靶標的核酸可被導(dǎo)入這種靶細胞，利用例如腺病毒或者逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。此外，內(nèi)源靶蛋白活性可以被試劑刺激，所述試劑刺激靶蛋白的表達，或者抑制靶蛋白抑制劑(轉(zhuǎn)錄或者翻譯抑制劑，或者促進靶蛋白在細胞中轉(zhuǎn)換的抑制劑)的活性。在某些方面，本發(fā)明的方法還涉及給藥一種增加細胞中靶蛋白豐度的試劑。用于增加靶蛋白豐度的試劑可以，例如，包括適合運輸進細胞靶蛋白的編碼靶蛋白的多核苷酸，例如，與異源內(nèi)化結(jié)構(gòu)域融合或者制備成脂質(zhì)體制劑。在某些方面，本發(fā)明的方法還涉及給藥一種降低細胞中耙蛋白豐度的試劑。用于降低靶蛋白豐度的試劑能夠，例如，抑制內(nèi)源靶蛋白表達，抑制(suppress)蛋白質(zhì)表達或者增強蛋白質(zhì)抑制劑的功能。下面章節(jié)描述本發(fā)明的某些示范性的實施方案，它們預(yù)期能夠彼此結(jié)合。此外，所述實施方案只用于說明目的，不是用于在任何方面進行限制。細胞系之前的報告已經(jīng)表明，通過引入表達hTERT和致癌RAS蛋白以及其他破壞p53、RB和PP2A功能的載體，有可能將原代人細胞轉(zhuǎn)化為致瘤細胞(Hahn等人，2002，MolCellBiol22，2111-23;Hahn等人，1999，Nature400，464-8jHahn禾口Weinberg,2002,NatRevCancer2，331-41;Lessnick等人，2002,CancerCell1,393-401)。在本文所述的試驗中利用了一系列工程化人致瘤細胞和它們的前體。先前已經(jīng)報告了這些工程化致瘤細胞的各種特征，包括它們的倍增時間，它們抗復(fù)制老化和培養(yǎng)危機的能力，它們的對Y照射的反應(yīng)，它們以非貼壁依賴性模式生長的能力，以及它們在免疫缺陷小鼠中形成腫瘤的能力(Hahn等人，1999,前文；Hahn等人，2002,前文；Lessnick等人，2002，前文)。篩選基因型選擇性化合物的方法此處使用的術(shù)語"試劑"和"藥物"是可互換使用的。此處使用的術(shù)語"對...有毒性"是指試劑或者化合物殺傷或者抑制致瘤細胞的生長/增殖的能力。大規(guī)模篩選包括對成百上千的化合物進行高通量篩選對工程化致瘤細胞的選擇毒性。在本發(fā)明的一個實施方案中，通過比較與候選試劑接觸后待測細胞與對照細胞的活力，來檢測選擇性的毒性，所述待測細胞是工程化致瘤細胞。一種合適的對照是與待測細胞相同類型的細胞，除了對照細胞未被工程化為致瘤的。例如，對照細胞可能是衍生出待測細胞的親本原代細胞。對照細胞在與待測對照細胞相同的條件下接觸候選試劑。合適的對照可以同時進行，或者可以預(yù)先建立(例如，預(yù)先建立標準或者參考)。細胞活力可以通過本領(lǐng)域己知的各種方法檢測，包括利用染料例如鈣黃綠素乙酰甲酯(鈣黃綠素AM)和AlamarBlue。在本發(fā)明的某些實施方案中，在用候選試劑處理后，染料比如鈣黃綠素AM被用于待測和對照細胞。在活細胞中，鈣黃綠素AM被胞內(nèi)酯酶切割，形成陰離子熒光衍生物鈣黃綠素，它無法擴散出活細胞。因此，當與鈣黃綠素AM孵育時，活細胞顯示綠色熒光，而死細胞不顯示。活細胞顯示的綠色熒光可以被檢測，從而提供檢測細胞活力的方法。在本發(fā)明的某些實施方案中，進一步在動物模型中鑒定試劑的特性，所述試劑已被鑒定為一種在體外選擇性誘導(dǎo)細胞死亡的試劑。動物模型包括小鼠，大鼠，兔子和猴子，它們可以是非轉(zhuǎn)基因(例如野生型)或者轉(zhuǎn)基因動物。在工程化致瘤細胞中選擇性誘導(dǎo)細胞死亡的試劑的效果可以在動物模型中進行評定任意多種效果，例如其在動物致瘤細胞中選擇性誘導(dǎo)細胞死亡的能力和其對動物的總體毒性。例如，本方法還包括在適當?shù)男∈竽Ｐ椭性u定試劑(例如藥物)對致瘤細胞的選擇毒性。在工程化致瘤細胞中誘導(dǎo)細胞死亡的試劑的效果可以在動物模型中進行評定任意多種效果，例如其在動物的致瘤細胞中誘導(dǎo)細胞死亡的能力和其對動物的總體毒性。例如，本方法還包括在適當?shù)男∈竽Ｐ椭性u定試劑(例如藥物)對致瘤細胞的毒性。為了說明，通過使用腫瘤生長試驗進一步評價試劑，所述試驗評定待測試劑抑制小鼠中建立的實體瘤生長的能力。所述試驗通過在裸鼠的脂肪墊植入腫瘤細胞來進行。給藥之前允許腫瘤細胞生長到一定大小。在數(shù)周內(nèi)監(jiān)控腫瘤體積，例如，三周。在試驗過程中還監(jiān)控待測動物的總體健康狀況。進一步在基于細胞的試驗中評定試劑的作用機理，所述試劑已經(jīng)被鑒定為一種選擇性殺傷或者抑制工程化致瘤細胞生長/增殖的試劑。例如，試劑可以在凋亡試驗中檢測其通過前-細胞凋亡途徑誘導(dǎo)細胞死亡的能力。另外，可以評定試劑通過非細胞凋亡途徑在致瘤細胞中誘導(dǎo)死亡的能力，所述試劑在腫瘤細胞中誘導(dǎo)死亡。例如，試劑可以在凋亡試驗中檢測其通過前-細胞凋亡途徑不能誘導(dǎo)細胞死亡的能力。如果在上述試驗中待測細胞的活力大于對照細胞的活力，則鑒定出選擇性抑制細胞毒性的試劑(藥物)。對照細胞在與待測對照細胞相同的條件下接觸候選試劑。合適的對照可以同時進行，或者可以預(yù)先建立(例如，預(yù)先建立標準或者參考)。本發(fā)明的基因型選擇性化合物RASV12的表達導(dǎo)致幾種已經(jīng)清楚表征的信號途徑的活化，包括RAF-MEK-MAPK信號級聯(lián)，磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信號途徑和Ral-鳥嘌呤解離因子途徑(Ral-GDS)。這些途徑的每一種都與人類癌癥有關(guān)，最近的研究顯示這些途徑與細胞轉(zhuǎn)化體系相呼應(yīng)而起作用(Hamad等人，2002，GenesDev16,2045-57)。鑒定基因型選擇性化合物靶標的方法在某些實施方案中，本發(fā)明涉及利用本發(fā)明的化合物，此處也稱為"配體"，鑒定參與改變患病細胞表型的耙標(此處還被稱為"細胞組分"(例如，蛋白，核酸，或者脂類)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種鑒定參與腫瘤發(fā)生的細胞組分的方法，其中致瘤細胞，諸如工程化人致瘤細胞、組織、器官、有機體或者其裂解產(chǎn)物或者提取物，與所述抗腫瘤化合物接觸；在接觸后，與配體作用(直接或者間接)的細胞組分被鑒別，從而可以鑒定出參與腫瘤發(fā)生的細胞組分。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供一種鑒定參與腫瘤發(fā)生的細胞組分的方法。在這個方法中，(a)致瘤細胞，諸如工程化人致瘤細胞、組織、器官、有機體或者其裂解產(chǎn)物或者提取物，與配體抑制劑接觸和與配體接觸；和(b)與配體抑制劑作用(直接或者間接)的細胞組分被鑒別，這些細胞組分參與腫瘤發(fā)生。細胞可以先后或者同時接觸配體和配體抑制劑?？衫靡阎姆椒ㄨb定與配體或者本發(fā)明的任何試劑相互作用的細胞組分。如此處描述，這些方法的所述化合物(或者配體)可以用任何化學(xué)方法制備。配體可選衍生自另一個化合物。這種改變的一個益處是，衍生化合物可以用于促進配體靶復(fù)合物收集或者配體收集，例如，在分離配體和靶標后。衍生基團的非限制性實例包括生物素，熒光素，地高辛，綠色熒光蛋白，同位素，多聚組氨酸，磁珠，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶，光激活交聯(lián)劑或者任意其組合。衍生基團還可以用于結(jié)合耙標(例如，erastin結(jié)合蛋白)以有利于它們的檢測。根據(jù)本發(fā)明，靶標(細胞組分)可以是體內(nèi)或者體外合成的天然存在的生物分子。靶標可以包括氨基酸，核酸，糖，脂類，天然產(chǎn)物或者其任意組合。本發(fā)明的一個益處是不需要靶標性質(zhì)或者功能的先驗知識。配體和靶標的相互作用可以是共價的或者非共價的。任選，配體-靶標配對中的配體對其他耙標可以顯示親合力，或者也可以不顯示親合力。配體-靶標配對中的靶標對其他配體可以顯示親合力，或者也可以不顯示親合力。例如，配體和靶標間的結(jié)合可以使用體外生化法在蛋白水平鑒定，包括光-交聯(lián)，放射性同位素標記的配體結(jié)合和親和色譜法(JakobyWB等人，1974，MethodsinEnzymology46:1)。作為替代，小分子可以固定在合適的固體支持物或者親合基質(zhì)例如瓊脂糖基質(zhì)上，用于篩選不同細胞類型和生物體的提取物。同樣地，小分子可以接觸細胞，組織，器官，生物體或者其裂解產(chǎn)物或者提取物，然后加入固相支持體以捕獲小分子和結(jié)合的靶蛋白。表達克隆可用于檢測蛋白的小庫中的靶標(KingRW等人，1997，Science277:973)。肽(Kieffer等人，1992，PNAS89:12048)，核苷衍生物(HaushalterKA等人，1999，Curr.Biol.9:174)和藥物-牛血清白蛋白(藥物-BSA)結(jié)合物(Tanaka等人，1999，Mol.Pharmacol.55:356)已經(jīng)被用于表達克隆中。另一個將配體與編碼靶標的DNA緊密聯(lián)系的有用技術(shù)是噬菌體展示。噬菌體展示，主要用于單克隆抗體領(lǐng)域，在病毒表面創(chuàng)建了肽或者蛋白文庫，并用于篩選活性(SmithGP,1985，Science228:1315)。淘篩噬菌體以獲得連接到固相上的靶標(ParmleySF等人,1988，Gene73:305)。噬菌體展示的一個優(yōu)點是cDNA位于噬菌體中，因此不需要分離克隆步驟。一種非限制性實例包括結(jié)合反應(yīng)條件，其中配體包括標記物例如生物素、熒光素、地高辛、綠色熒光蛋白、放射性同位素、組氨酸標記物、磁珠、酶或者其組合。在本發(fā)明的一個實施方案中，耙標可以在基于機理的試驗中篩選，比如檢測結(jié)合靶標的配體的試驗。這可以包括與配體或者蛋白或者被檢測的指示劑的固相或者液相結(jié)合情況?；蛘撸幋a功能還不確定的蛋白的基因可以與報告系統(tǒng)(例如，iS-半乳糖苷酶、熒光素酶或者綠色熒光蛋白)一起轉(zhuǎn)染細胞，并篩選文庫，優(yōu)選的通過高通量篩選或者用文庫的單獨成員?？梢允褂没谄渌麢C理的結(jié)合試驗，例如，檢測對酶活性作用的生化試驗，基于細胞的試驗，其中靶標和報告系統(tǒng)(例如，熒光素酶或者/3-半乳糖苷酶)已經(jīng)導(dǎo)入細胞，以及檢測自由能變化的結(jié)合試驗。靶標被固定到孔、珠或者芯片上，或者通過固定化抗體捕獲，或者進行毛細管電泳分析，進行結(jié)合試驗。結(jié)合的配體通常可以使用比色或者熒光或者表面等離子共振來檢測。在某些實施方案中，通過調(diào)節(jié)本發(fā)明鑒定的靶標(細胞組分)的功能(例如，活性或者表達)，本發(fā)明還預(yù)期了治療或者預(yù)防疾病(例如癌癥)的方法。為了說明，如果靶標被鑒定促進腫瘤生長，治療劑可用于改變或者降低靶標的功能(活性或者表達)?；蛘?，如果耙標被鑒定抑制腫瘤生長，治療劑可用于增強靶標的功能(活性或者表達)。治療劑是本發(fā)明的化合物。治療方法在某些實施方案中，本發(fā)明提供在個體中治療或者預(yù)防癌癥的方法。術(shù)語"癌癥"，"腫瘤"，和"瘤形成"在此處可以互換使用。此處使用的癌癥(腫瘤或者腫瘤形成)的特點在于一種或者多種下列性質(zhì)在環(huán)境中細胞生長不受正常生化和生理影響調(diào)節(jié)；退行發(fā)育(例如，缺少正常調(diào)節(jié)的細胞分化)；和在有些情況下，轉(zhuǎn)移。癌癥疾病包括，例如，肛門癌，膀胱癌，乳腺癌，宮頸癌，慢性淋巴細胞性白血病，慢性髓性白血病，子宮內(nèi)膜癌，毛細胞性白血病，頭頸癌，肺(小細胞)癌，多發(fā)性骨髓瘤，非何杰金淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤，卵巢癌，腦腫瘤，結(jié)腸直腸癌，肝細胞癌，卡波西肉瘤，肺癌(非小細胞癌)，黑素瘤，胰腺癌，前列腺癌，腎細胞癌，和軟組織肉瘤。其他的癌癥病癥可以參見，例如，Isselbacher等人(1994)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine1814-1877，在此引入作為參考。通常，如上所述的可用此處所述方法治療的癌癥顯示不受控制的Ras途徑活化。在一個實施方案中，上述癌癥包含Ras信號途徑的突變，導(dǎo)致Ras信號活性升高。例如，突變可以是Ras基因上的組成性活化突變，比如RasV12。突變還可以是任何的Ras途徑相關(guān)基因，其將導(dǎo)致所述途徑的活化或活性改變。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種在個體中治療或者預(yù)防癌癥的方法，包括給藥個體治療有效量的化合物，所述化合物對工程化人致瘤細胞，或者特定基因型(或者特異改變的基因型)的癌細胞顯示選擇毒性。在某些實施方案中，癌癥的特點在于包括活化的RAS途徑的細胞。在某些其他實施方案中，癌癥的特點在于細胞表達SV40小T癌蛋白，或者顯示sT和/或致癌RAS的靶標的調(diào)節(jié)。在相關(guān)實施方案中，本發(fā)明預(yù)期本發(fā)明的方法與其他抗腫瘤療法，例如抗實體瘤和控制轉(zhuǎn)移建立的傳統(tǒng)化療方法，聯(lián)合應(yīng)用。本發(fā)明化合物的給藥可以在化療期間或者化療之后進行。這種試劑通常與可接受的載體配制成制劑，可以靜脈內(nèi)、口服、經(jīng)頰、非腸道、通過吸入噴霧、通過局部施用或者經(jīng)皮膚給藥。試劑還可以通過局部給藥方式給藥。優(yōu)選的，一種或多種其他試劑與抗癌癥化療劑(例如，本發(fā)明的化合物)聯(lián)合給藥，以加合或者協(xié)同方式抑制癌細胞。大量的傳統(tǒng)化合物已經(jīng)顯示具有抗腫瘤活性。這些化合物已經(jīng)在化療中用作藥物制劑縮小實體瘤，預(yù)防轉(zhuǎn)移和進一步生長，或者降低在白血病或者骨髓惡性腫瘤中惡性細胞的數(shù)目。盡管化療在治療各種類型的惡性腫瘤中有效，許多抗腫瘤化合物誘導(dǎo)不良副作用。多數(shù)情況下，當兩種或者多種不同治療方法結(jié)合時，治療可以協(xié)同起作用，可以降低每種療法的劑量，從而降低每種化合物在較高劑量時的不良副作用。在其他情況下，對一種治療無反應(yīng)的惡性腫瘤可能對兩種或更多種不同治療的療法組合有反應(yīng)。因此，本發(fā)明的化合物和藥物組合物可以與傳統(tǒng)抗腫瘤化合物聯(lián)合給藥。傳統(tǒng)的抗腫瘤化合物包括，僅僅為舉例說明氨魯米特，安吖啶，阿那曲唑，天冬酰胺酶，卡介苗，比卡魯胺，爭光霉素，布舍瑞林，白消安，喜樹堿，卡培他濱，卡鉑，卡莫司汀，苯丁酸氮芥，順鉑，2-氯脫氧腺苷，氯膦酸鹽，秋水仙堿，環(huán)磷酰胺，環(huán)丙氯地孕酮，阿糖胞苷，達卡巴嗪，放線菌素D，柔紅霉素，雙烯雌酚，己烯雌酚，紫杉萜，阿霉素，表柔比星，雌二醇，雌氮芥，鬼臼乙叉甙，依西美坦，非格司亭，氟達拉濱，氟氫可的松，氟尿嘧啶，氟烴甲基睪丸素，氟他米特，吉西他濱，染料木素，戈舍瑞林，羥基脲，伊達比星，異磷酰胺，伊馬替尼，干擾素，依立替康，ironotecan，來曲唑，甲酰四氫葉酸，亮丙瑞林，左旋四咪唑，洛莫司汀，氮芥，甲羥孕酮，甲地孕酮，左旋苯丙氨酸氮芥，巰基嘌呤，美司鈉，氨甲蝶呤，絲裂霉素，米托坦，米托蒽醌，尼魯米特，諾考達哇，奧曲肽，奧沙利鉑，紫杉醇，帕屈膦酸二鈉，噴司他丁，普卡霉素，卟菲爾鈉，甲基芐肼，雷替曲塞，利妥昔單抗(riruximab)，鏈脲霉素，蘇拉明，他莫昔芬，替莫唑胺，替尼泊甙，睪丸激素，硫鳥嘌呤，塞替派，二氯環(huán)戊二烯鈦，托泊替康，曲妥單抗，維甲酸，長春花堿，長春新堿，長春地辛，和長春瑞濱o在其他實施方案中，本發(fā)明的化合物和藥物組合物可以與傳統(tǒng)抗腫瘤化合物聯(lián)合給藥，所述傳統(tǒng)抗腫瘤化合物選自表皮生長因子受體拮抗劑，五硫化二砷，阿霉素，順鉑，卡鉑，西咪替丁，洋紅霉素，氮芥氫氯化物，五甲三聚氰酰胺，塞替派，替尼泊甙，環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，去甲氧基竹紅菌甲素A，左旋丙氨酸氮芥，異磷酰胺，曲磷胺，曲奧舒凡，足葉草毒素或者足葉草毒素衍生物，鬼臼乙叉甙磷酸鹽，替尼泊甙，鬼臼乙叉甙，異長春堿，環(huán)氧長春堿，長春地辛，9-氨基喜樹堿，抗癌妥伊立替康(camptoirinotecan)，克立那托，甲地孕酮，甲氨蝶呤，絲裂霉素C，ecteinascidin743，白消安，卡莫司汀(BCNU)，洛莫司汀(CCNU)，洛伐他汀，l-甲基-4-苯基吡啶鑰離子，司莫司汀，十字孢堿，鏈脲霉素，酞菁，達卡巴嗪，氨基蝶呤，氨甲蝶呤，曲美沙特，硫鳥嘌呤，巰基嘌呤，氟達拉濱，噴它斯汀(pentastatin)，克拉曲賓，阿糖胞苷(amC)，泊非霉素，5-氟尿嘧啶，6-巰基嘌呤，阿霉素氫氯化物，甲酰四氫葉酸，霉酚酸，柔紅霉素，去鐵敏，5-氟脫氧尿苷，去氧氟尿苷，雷替曲塞，伊達比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，博來霉素硫酸鹽，放線菌素D,番紅精,沙弗拉霉素(saframycins)，quinocarcins，discodermolides，長春新堿，長春花堿，長春瑞濱酒石酸鹽，維替泊芬，紫杉醇，他莫昔芬，雷洛昔芬，噻唑呋林，硫鳥嘌呤，病毒唑，EICAR，雌氮芥，雌氮芥磷酸鈉，氟他米特，比卡魯胺，布舍瑞林，亮丙瑞林，蝶啶，烯二炔，左旋四咪唑，aflacon，干擾素，白介素，阿地白介素，非格司亭，沙莫司亭，利妥昔單抗，卡介苗，維甲酸，betamethosone，鹽酸吉西他濱，異搏定，VP-16，六甲密胺，毒胡蘿卜內(nèi)酯(thapsigargin)，奧沙利鉑，異丙鉑，四鉑，洛鉑，DCP，PLD-147，JM118，JM216，JM335，沙鉑，紫杉萜，脫氧紫杉醇，TL-139，5'-降-脫水長春堿(以下5'-降-長春花堿)，喜樹堿，依立替康(Camptosar，CPT-ll)，托泊替康(Hycamptin)，BAY38-3441，9-硝基喜樹堿(Orethecin，盧比替康)，依沙替康(DX-8951)，勒托替康(GI-147211C)，吉馬替康，高喜樹堿氟替康(diflomotecan)(BN-80915)和9-氨基喜樹堿(IDEC-13')，SN-38，ST1481，karanitecin(BNP1350)，B引哚咔唑(indolocarbazole)(例如，NB-506)，原小蘗堿，茚托利辛，茚并異喹諾酮(idenoisoquinolones)，苯-吩嗪或者NB-506。在另一個相關(guān)實施方案中，本發(fā)明預(yù)期將本發(fā)明實施的方法與其他抗腫瘤療法例如照射聯(lián)用。此處使用的術(shù)語"照射"是用于包括通過光子、中子、電子或者其他類型的電離輻射治療贅生性細胞或者相關(guān)細胞的任意療法。這種放療包括，但不限于，x射線，y照射，或者重離子顆粒，比如CX或者(3粒子。此外，照射可以是放射性的。在患者中照射贅生性細胞的方法是本領(lǐng)域公知的，包括例如，外粒子束療法和近距放射療法。檢測癌癥(腫瘤或者腫瘤形成)是否已經(jīng)被治愈的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括，例如，腫瘤細胞數(shù)目減少(例如，細胞增殖下降或者腫瘤大小減小)。應(yīng)該意識到本發(fā)明的治療可以是持續(xù)和完全反應(yīng)，或者可以包括部分或者短暫的臨床反應(yīng)。參見實例，Isselbacher等人(1996)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13ed.，1814-1882，在此引入作為參考。檢測腫瘤細胞的致敏性或者增加的死亡的試驗是本領(lǐng)域公知的，包括，例如，評定細胞活力的標準劑量反應(yīng)試驗；DNA提取物的瓊脂糖凝膠電泳或者檢測表示細胞死亡特征的DNA片段的流式細胞計量術(shù)；檢測參與凋亡的多肽活性的試驗；和檢測細胞死亡形態(tài)特征的試驗。關(guān)于這些試驗的細節(jié)在此處其他地方描述。其他試驗包括，染色質(zhì)試驗(例如，計數(shù)濃縮的核染色質(zhì)的頻率)或者例如在Lowe等人(1993)Cell74:957-697中描述的抗藥性試驗，在此引入作為參考。還可參見美國專利號5，821，072，也在此引入作為參考。藥物組合物預(yù)期的治療劑可以進行評價以便檢測它們包含在藥物組合物中的適應(yīng)性。這種試劑一個通用的檢測方法是療效指數(shù)，這是治療劑量對有毒劑量的比率。治療劑量(功效)和有毒劑量的閾值可以調(diào)整為適當?shù)?例如，治療反應(yīng)或者最小化毒性反應(yīng)的必需量)。例如，治療劑量可以是試劑治療有效量的(相對于治療一種或多種病癥)，有毒劑量可以是引起死亡的劑量(例如，LD5Q)或者在一定比例受治療者中引起不希望有的效果。優(yōu)選的，試劑的療效指數(shù)至少是2，更優(yōu)選的至少是5，甚至更優(yōu)選的至少是10。評價治療劑還可以包括檢測試劑的藥物動力學(xué)，當以不同制劑和/或通過不同途徑給藥時檢測其生物利用率和/或吸收。本發(fā)明的化合物可以施用給需要它的個體。在某些實施方案中，個體是哺乳動物比如人，或者非人哺乳動物。當給藥個體時，本發(fā)明的化合物可以作為藥物組合物給藥，所述藥物組合物包含，例如，本發(fā)明的化合物和藥學(xué)可接受的載體。藥學(xué)可接受的載體是本領(lǐng)域公知的，包括，例如，水溶液比如水或者生理緩沖鹽水或者其他溶劑，或者媒介例如乙二醇，甘油，油劑比如橄欖油或者可注射的有機酯。在優(yōu)選的實施方案中，當這種藥物組合物用于人施用時，水溶液是無熱原的，或者基本上無熱原的?？梢赃x擇賦形劑，例如，以延緩試劑的釋放或者選擇性靶向一種或多種細胞，組織或者器官。藥學(xué)可接受的載體可以包含生理可接受的試劑，所述試劑用作，例如，穩(wěn)定或者促進本發(fā)明化合物的吸收。這種生理可接受的試劑包括，例如，糖類，比如葡萄糖，蔗糖或者右旋糖酐，抗氧化劑，比如抗壞血酸或者谷胱甘肽，螯合劑，低分子量蛋白或者其他穩(wěn)定劑或者賦形劑。藥學(xué)可接受的載體的選擇，包括生理可接受的試劑，依賴于例如組合物的給藥途徑。藥物組合物(制劑)還可以是脂質(zhì)體或者其他聚合物基質(zhì)，這可以整合入例如本發(fā)明的化合物。脂質(zhì)體，例如，由磷脂或者其他脂類組成，是無毒的，生理可接受的和可代謝的載體，可以相對容易的制造和給藥。包含本發(fā)明化合物的藥物組合物(制劑)可以通過多種給藥途徑給藥，包括，例如，口服；肌內(nèi)；靜脈內(nèi)；肛門；陰道；非腸道；鼻；腹膜內(nèi)；皮下；和局部。組合物可以通過注射或者通過溫育給藥。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以單獨給藥或者與另一種抗腫瘤治療劑聯(lián)合給藥。此處使用的短語"聯(lián)合給藥"是指聯(lián)用兩種或更多不同治療化合物的任意給藥形式，這樣的話在先前給藥的治療化合物在體內(nèi)仍然有效時給藥第二種化合物(例如，兩種化合物同時在患者體內(nèi)起作用，這可以包括兩種化合物的協(xié)同效應(yīng))。例如，不同的治療化合物可以在相同制劑或者在分開的制劑中給藥，或者同時的或者依次的。因此，接受這種治療的個體可以受益于不同治療化合物的協(xié)同效應(yīng)。預(yù)期本發(fā)明的化合物以治療有效量(劑量)給藥患者(例如哺乳動物，優(yōu)選的是人)。"治療有效量"是指化合物的濃度足以得到所需治療效果(例如，病癥的治愈，贅生性細胞的死亡)。應(yīng)該理解化合物的有效量會根據(jù)患者的重量，性別，年齡和治療史而變化。其他影響有效量的因素可能包括，但不限于，患者病癥的嚴重程度，接受治療的疾病，化合物的穩(wěn)定性，和，如果需要，與本發(fā)明的化合物一起給藥的另一種治療劑。通常，對人類患者有效量的范圍從大約0.001mg/kg體重到大約50mg/kg體重。通過多次試劑給藥可以輸送更多的總劑量。檢測功效和劑量的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見例如，Isselbacher等人(1996)Harrison'sPrinciplesofInternalMedicine13ed.，1814-1882，在此引入作為參考。實施例現(xiàn)在概述本發(fā)明，參考下列實施例更容易地理解本發(fā)明，下列實施例僅僅為了舉例說明本發(fā)明的某些方面和實施方式，不是用于限制本發(fā)明。實施例12-(1-(4-(2-(4-氯苯氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)乙基)-7-氯-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(311)-酮的制備根據(jù)反應(yīng)路線所示的反應(yīng)制備2-(l-(4-(2-(4-氯苯氧基)乙?；?哌嗪-l-基)乙基)-7-氯-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮(化合物1)。反應(yīng)路線1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>簡而言之，使用丙酰氯在三乙胺(TEA)和四氫呋喃(THF)中將2-氨基_4_氯苯甲酸?；?，?；衔锱c2-乙氧基苯胺在三氯化磷和甲苯中回流，得到2-乙基-7-氯-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮。2-乙基-7-氯-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮與N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)在四氯化碳中溴化，其產(chǎn)物隨后與哌嗪在THF中反應(yīng)。哌嗪基部分用4-氯苯氧基乙酰氯在THF和TEA中?；?，得到最終產(chǎn)物。實施例23-(2-乙氧基苯基)-2-[(六氫-4-甲基-111-1，4-二氮雜卓-1-基)甲基]喹唑啉-4(3H)-酮的制備。根據(jù)反應(yīng)路線2所示的反應(yīng)制備3-(2-乙氧基苯基)-2-[(六氫-4-甲基-lH-l，4-二氮雜卓-l-基)甲基]喹唑啉-4(3H)-酮(化合物10)?；衔飅o<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>反應(yīng)路線2簡而言之，使用丙酰氯在三乙胺(TEA)和四氫呋喃(THF)中將2-氨基-4-硝基苯甲酸?；；衔锱c2-乙氧基苯胺在三氯化磷(POCl3)和甲苯中回流，得到2-乙基-7-硝基-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮。2-乙基-7-硝基-3-(2-乙氧基苯基)喹唑啉-4(3H)-酮與N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)在四氯化碳中溴化，其產(chǎn)物隨后與N-甲基高哌嗪在THF中反應(yīng)，該反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)歷使用催化量的Pd/碳(10。/。Pd)的氫化條件，得到化合物10。實施例3化合物1的細胞生長的抑制檢測化合物1在DMSO中抑制腫瘤細胞和正常細胞生長的能力?；衔锿ㄟ^Sytox初篩進行分析，這是一種監(jiān)控作為化合物處理結(jié)果的細胞幸存-增殖改變的表型試驗。它設(shè)計為鑒定特異改變細胞生長潛力的化合物的高通量方法，所述細胞帶有在癌癥患者中發(fā)現(xiàn)的致病性的突變，而這種突變不影響正常細胞的生長。該試驗依賴于一種便宜、簡單和可靠的膜不可滲透的熒光染料(Sytox，來自MolecularProbes)的讀數(shù)，所述熒光染料結(jié)合核酸。在健康細胞中，沒有檢測到信號，因為細胞膜是完整的，染料不會進入。但是，如果細胞膜是作為凋亡或者壞死的結(jié)果而受損，將檢測到與受到類似影響細胞的數(shù)目成比例的熒光信號。利用兩步讀數(shù)(在去污劑存在條件下最終讀數(shù)，以標記所有細胞)，該試驗可以鑒定產(chǎn)生白細胞郁積、細胞毒性和/或致有絲分裂的化合物。第一次讀數(shù)或者"死細胞"讀數(shù)，通過顯示試驗時培養(yǎng)物中死亡或者瀕死細胞的數(shù)目來評估給定化合物的毒性。第二次讀數(shù)或者"總細胞"讀數(shù)，獲得細胞毒性在減小細胞群大小方面的累積效應(yīng)，以及無毒性時待測化合物對待測細胞群的任意細胞的抑制細胞或者抗增殖效果。細胞種于96孔板過夜，在未處理情況下種植密度允許在72小時后孔中95%融合。隨后幾天，細胞接受系列稀釋的待測化合物處理48小時。在這段溫育期后，按廠商推薦濃度添加Sytox試劑到培養(yǎng)物，讀取死細胞熒光讀數(shù)。在完成這些測量后，添加去污劑皂角苷到培養(yǎng)物各孔對膜進行透化處理，以允許Sytox試劑對進入每個細胞，從而便于測量留在培養(yǎng)物中細胞總數(shù)。對于數(shù)據(jù)評價，在表現(xiàn)細胞毒性和抑制細胞生長的化合物之間沒有差異。該試驗結(jié)果如圖2所示。化合物1抑制腫瘤細胞生長的IQo為約IO岸?；衔?和3，如圖3和4所示，抑制HT-1080細胞增殖的IC5()值分別為lOOnM和200nM。實施例4HT-1080細胞生長抑制在DMSO中測量了本發(fā)明的多種化合物抑制HT-1080細胞生長的能力。在這些實驗中使用的HT-1080細胞系來自纖維肉瘤并帶有在密碼子12的N-ms基因的激活突變的患者。使用實施例3所示的試驗試驗的化合物。該試驗的結(jié)果如下表所示，其中活性相當于以下范圍A-低于10nM，B-10-100nM，C-100-1000nM，D-1000-2000nM，E-高于2000nM。<table>complextableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>實施例5腫瘤異種移植物的治療使用相似的方法(如下所述)在每天靜脈內(nèi)給藥后檢查化合物10和25抑制HT-1080異種移植物生長的能力?；衔?0和25連續(xù)5天給藥，并評價它們各自的IVMTD劑量。概述在異種移植物研究中使用的HT-1080細胞系來自患纖維肉瘤并帶有在密碼子12的N-ras基因的激活突變的患者?；衔镆种艸T-1080瘤生長。當化合物以其各自的MTD給藥時觀察到穩(wěn)固的腫瘤消退。沒有觀察到不利的臨床跡象。小鼠品系裸Balb/c(Nu/Nu品系，CharlesRiverLaboratories)，雌性，5-6周，老齡(平均體重22g)。實驗組A:未治療對照，11=6B:化合物10的媒介物對照，QDx5天，IV，n=6D:化合物10@25mg/Kg(MTD)，QDx5天，IV,n=6E:化合物10@12.5mg/Kg(l/2MTD),QDx5天，IV，n=6治療計劃當平均腫瘤體積達到200mi^并且腫瘤開始活性生長時開始(實驗的第一天)，持續(xù)至第5天，每天給藥每只動物單一IP注射上述治療中的一種，總共5次治療。腫瘤移植和分期50只小鼠每只都移植1X107個HT-1080細胞，通過在右后肢側(cè)面SC注射O.lcc接種物。使用26GX3/8"針號。使用HT-1080細胞(ATCC分離，第6次傳代凍存物)制備腫瘤細胞接種物，所述HT-1080細胞在DMEM[Gibco，No.l0569-010]+10%FCS[Gibco，No.F-2442]中培養(yǎng)。在細胞收獲時，細胞生長到95-100。^的融合度。HT-1080接種物在無菌的DMEM培養(yǎng)基+10。/。FCS中制備，密度1.0Xl()8細胞/ml。在腫瘤移植后+10天，動物分組匹配為治療和對照組，每組由6只小鼠組成。總共14個非正常值從實驗中剔除，因為腫瘤太小或者太大。這被認為是實驗第1天，治療從這天開始?；衔?0儲液的制備在每天早上給藥化合物，制備新鮮的化合物10的儲液，首先將20mg的化合物10溶解在由400mMHC1在水中組成的溶劑中得到0.2ml的最終體積，達到20mg/ml的濃度。然后將得到的100mg/ml溶液以1:5稀釋到20mg/ml的濃度，使用的稀釋劑由1.1%(78mM)磷酸氫二鈉和3%(90mM)蔗糖組成。這通過將0.2毫升體積的100mg/ml溶液與0.8ml的稀釋劑混合進行。得到的溶液具有的pH=6.8和304mOsm。然后對該溶液進行過濾滅菌(0.45pm)，并用于最終的注射溶液的制備(參見下文)?；衔颕O注射溶液的制備在給藥化合物的5天的每一天，制備注射溶液，通過使用5%的注射用葡萄糖(Baxter，No.2B0064，NDC0338-0017-04)稀釋20mg/ml儲液，如下表所示(兩種注射溶液的濃度基于22.0克的平均體重)<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>化合物IO媒介物對照制備媒介物對照首先將0.1ml的400mMHC1與0.4ml的稀釋劑混合，所述稀釋劑由1.1%(78mM)的磷酸氫二鈉和3%(90mM)蔗糖組成。然后將得到的溶液進一步稀釋，1:7.27，通過添加3.135ml的5%的注射用葡萄糖(Baxter，No.2B0064,NDC0338-0017-04)進行稀釋。然后使用5MNaOH調(diào)節(jié)溶液的pH到7.4。最終溶液相當于媒介物存在于準備用于D組的注射溶液中，而沒有化合物存在。媒介物對照在給藥之前進行過濾滅菌。劑量概述(基于平均體重-22.0克.V.<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>腫瘤測量:從第1天開始，每隔一天稱重全部動物，測量腫瘤尺寸(長度(L)和寬度(W))。使用下列公式將腫瘤測量結(jié)果轉(zhuǎn)換為腫瘤體積(mm3):腫瘤體積=LXWXW/2。計算各時間點各實驗組獲得的腫瘤體積的平均值，對時間作圖。差異表示為平均值標準差(士SEM)。這些實驗的結(jié)果如圖1-3中所示。異種移植物研究顯示選擇的化合物能夠引導(dǎo)穩(wěn)固的HT-1080腫瘤消退。在劑量給藥Prolexys化合物的動物中沒有觀察到不利的臨床癥狀。因此，這些化合物表現(xiàn)出腫瘤選擇性的細胞死亡。實施例6鑒別在特定的癌癥相關(guān)等位基因存在條件下具有增強效力或者活性的化合物此處描述的工作是用于鑒定在RASV^存在條件下具有增強的效力或者活性的化合物。盡管此處描述的工作利用RAS^M乍為轉(zhuǎn)化基因，其它的研究可以利用多種癌癥結(jié)合等位基因，利用這種方法以便確定參與許多癌基因和腫瘤抑制物的信號網(wǎng)絡(luò)。初篩檢測測定用每種化合物治療致瘤細胞的效果，所述化合物在4ug/mL濃度作用48小時，對應(yīng)于分子量400的化合物10uM。使用染料鈣黃綠素乙酰甲酯(鈣黃綠素AM)檢測細胞活力(Wang等人，1993，Hum.Immunol.337,264-270)，這是一種能夠自由擴散進細胞的非熒光化合物。在活細胞中，鈣黃綠素AM被胞內(nèi)酯酶切割，形成陰離子熒光衍生物鈣黃綠素，它不能擴散出活細胞。因此，當與鈣黃綠素AM孵育時，活細胞顯示綠色熒光，而死細胞不顯示。當與Sytox孵育時，活細胞和死細胞顯示熒光。誘導(dǎo)的熒光與在對照細胞中觀察到的熒光不同的化合物隨后在對照細胞和致癌細胞中的系列稀釋物中進行檢測，以鑒定顯示合成致死性的化合物，這種化合物在致瘤細胞中是致死性的，但在同源原代細胞中不是。實施例7化合物的結(jié)合伴侶的鑒定和表征用Pull-down試驗鑒定細胞內(nèi)的本發(fā)明的化合物的結(jié)合伴侶，所述Pull-down試驗使用固定的本發(fā)明的化合物和細胞裂解產(chǎn)物。pull-down實驗用全細胞裂解產(chǎn)物進行。在這些實驗中，本發(fā)明的化合物被固定到Affigel10，在標準pull-down條件下與裂解產(chǎn)物孵育。洗滌珠子，然后用100UMerastin或本發(fā)明的化合物或0.8%十二垸酰肌氨酸(sarkosyl)洗脫。洗脫液用于質(zhì)譜分析。圖4表示使用BJELR全細胞裂解產(chǎn)物和化合物(4)-(9)的Pull-down試驗的結(jié)果。引用參考此處提及的全部出版物和專利在此完整引入作為參考，就像各個獨立出版物或者專利是特異和單獨引入作為參考。在沖突情況下，將以本申請，包括此處的任何定義，為準。等同物當討論本發(fā)明的特定實施方案時，上述說明書是說明性和非限制的。在獲知該說明書和下列權(quán)利要求時本發(fā)明的許多變化對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。本發(fā)明的全部范圍應(yīng)該參考權(quán)利要求和等同物的全部范圍以及說明書和這種變化來決定。權(quán)利要求1.由結(jié)構(gòu)式(I)表示的化合物或其可藥用鹽，其中Ra為鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基-O-，被取代或未被取代的烷基-O-，被取代或未被取代的烯基-O-或被取代或未被取代的炔基-O-，其中烷基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；每個R2獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR’，-CON(R)2，-NRC(O)R，-SO2N(R)2，-N(R)2，-NO2，-OH和-OR’；每個R3獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR’，-CON(R)2，-NRC(O)R，-SO2N(R)2，-N(R)2，-NO2，-OH和-OR’；R4和R5獨立地選自-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)和被取代或未被取代的芳基，其中烷基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；或者R4和R5一起形成碳環(huán)或雜環(huán)基團；V為-NH-L-A-Q或環(huán)C為被取代或未被取代的雜環(huán)的芳香或非芳香環(huán)；A為NR或O；或者A為共價鍵；L為被取代或未被取代的烴基，其任選被一個或多個選自N、O和S的雜原子間斷；Q選自-R，-C(O)R’，-C(O)N(R)2，-C(O)OR’和-S(O)2R’；每個R獨立地為-H，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)；每個R’獨立地為被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)或被取代或未被取代的芳基；j為0-4的整數(shù)；k為0-4的整數(shù)，條件是j和k至少之一是1-4的整數(shù)；和每個n獨立地為0、1或2。2.權(quán)利要求1的化合物，其中V是3.權(quán)利要求2的化合物，其中V是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>4.權(quán)利要求3的化合物，其中Q是-C(O)R'或-R。5.權(quán)利要求4的化合物，其中Q是-H、甲基或乙基。6.權(quán)利要求2的化合物，其中A是共價鍵或NR。7.權(quán)利要求2的化合物，其中R4和R5是-H或被取代或未被取代的垸基。8.權(quán)利要求7的化合物，其中R4和Rs是-H或未被取代的Q-C4院基。9.權(quán)利要求2的化合物，其中Ra是被取代或未被取代的烷基-O-基。10.權(quán)利要求9的化合物，其中Ra是未被取代的CrC4烷基-0-基。11.權(quán)利要求1的化合物，其中j是1-4的整數(shù)。12.權(quán)利要求ll的化合物，其中每個R2獨立地選自-NRC(O)R，-NR2，卣素，極性取代的垸基，極性取代的碳環(huán)芳基，被取代或未被取代的雜芳基和被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)。13.權(quán)利要求ll的化合物，其中所述化合物由結(jié)構(gòu)式(Ia)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>14.權(quán)利要求l的化合物，其中k是l-4的整數(shù)。15.權(quán)利要求14的化合物，其中每個R3獨立地選自極性取代的垸基，極性取代的碳環(huán)芳基，被取代或未被取代的雜芳基和被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)。16.權(quán)利要求14的化合物，其中所述化合物由結(jié)構(gòu)式(Ib)表示v(Ib)。17.權(quán)利要求1的化合物，其中j是1-4的整數(shù)并且k是1-4的整數(shù)。18.由結(jié)構(gòu)式(n)表示的化合物:v(II)'或其可藥用鹽，其中&為被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基或被取代或未被取代的炔基，其各自任選地被NR、O或S(O)n間斷；每個R2獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-S02N(R)2，-OH和曙OR，；每個R3獨立地選自鹵素，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的芳基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)，-CN，-COOR'，-CON(R)2，-S02N(R)2，-OH和-OR，；R4和R5獨立地選自-H，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)和被取代或未被取代的芳基，其中垸基，烯基和炔基任選地被NR、O或S(O)n間斷；或者R4和R5—起形成碳環(huán)或雜環(huán)基團；V為-NH-L-A-Q或環(huán)C為被取代或未被取代的雜環(huán)的芳香或非芳香環(huán)；A為NR或O;或者A為共價鍵；L為被取代或未被取代的烴基，其任選被一個或多個選自N、O和S的雜原子間斷；Q選自-R，-C(0)R，，-C(0)N(R)2，-C(0)OR，-S(0)2R，；每個R獨立地為-H，被取代或未被取代的垸基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的芳基或被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)；每個R'獨立地為被取代或未被取代的烷基，被取代或未被取代的烯基，被取代或未被取代的炔基，被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)或被取代或未被取代的芳基；j為0-4的整數(shù)；k為0-4的整數(shù)，條件是j和k至少之一是l-4的整數(shù)；和每個n獨立地為0、1或2。619.權(quán)利要求18的化合物，其中V是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>20.權(quán)利要求19的化合物，其中V是:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>21.權(quán)利要求20的化合物，其中Q是-R。22.權(quán)利要求21的化合物，其中Q是-H，甲基或乙基。23.權(quán)利要求19的化合物，其中A是共價鍵或NR。24.權(quán)利要求23的化合物，其中R4和Rs是-H或被取代或未被取代的垸基。25.權(quán)利要求24的化合物，其中&和R5是-H或未被取代的CrC4焼基o26.權(quán)利要求18的化合物，其中R,是被取代或未被取代的垸基。27.權(quán)利要求27化合物，其中R,是未被取代的d-C4烷基。28.權(quán)利要求18的化合物，其中j是l-4的整數(shù)。29.權(quán)利要求28的化合物，其中每個R2獨立地選自-NRC(0)R，-NR2，鹵素，極性取代的垸基，極性取代的碳環(huán)芳基，被取代或未被取代的雜芳基和被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)。30.權(quán)利要求18的化合物，其中k是l-4的整數(shù)。31.權(quán)利要求30的化合物，其中每個R2獨立地選自極性取代的烷基，極性取代的碳環(huán)芳基，被取代或未被取代的雜芳基和被取代或未被取代的非芳香雜環(huán)。32.權(quán)利要求18的化合物，其中j是1-4的整數(shù)并且k是1-4的整數(shù)。33.藥物組合物，包括權(quán)利要求1-32中任一項的化合物和可藥用載體。34.治療哺乳動物的病況的方法，包括對所述哺乳動物給用治療有效量的權(quán)利要求1-32中任一項的化合物。35.權(quán)利要求34的方法，其中所述細胞具有可測量的Ras信號活性。36.權(quán)利要求34的方法，其中所述病況是癌。37.權(quán)利要求34的方法，還包括對所述哺乳動物聯(lián)合給藥通過細胞凋亡機理殺傷細胞的試劑。38.權(quán)利要求37的方法，其中所述試劑是化療劑。39.權(quán)利要求38的方法，其中所述化療劑選自表皮生長因子受體拮抗劑，五硫化二砷，阿霉素，順鉑，卡鉑，西咪替丁，洋紅霉素，氮芥氫氯化物，五甲三聚氰酰胺，塞替派，替尼泊甙，環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，去甲氧基竹紅菌甲素A，左旋丙氨酸氮芥，異磷酰胺，曲磷胺，曲奧舒凡，足葉草毒素或者足葉草毒素衍生物，鬼臼乙叉甙磷酸鹽，替尼泊甙，鬼臼乙叉甙，異長春堿，環(huán)氧長春堿，長春地辛，9-氨基喜樹堿，抗癌妥伊立替康，克立那托，甲地孕酮，甲氨蝶呤，絲裂霉素C，ecteinascidin743，白消安，卡莫司汀，洛莫司汀，洛伐他汀，1_甲基_4_苯基吡啶総離子，司莫司汀，十字孢堿，鏈脲霉素，酞菁，達卡巴嗪，氨基蝶呤，氨甲蝶呤，曲美沙特，硫鳥嘌呤，巰基嘌呤，氟達拉濱，噴它斯汀，克拉曲賓，阿糖胞苷，泊非霉素，5-氟尿嘧啶，6-巰基嘌呤，阿霉素氫氯化物，甲酰四氫葉酸，霉酚酸，柔紅霉素，去鐵敏，5-氟脫氧尿苷，去氧氟尿苷，雷替曲塞，伊達比星，表柔比星，吡柔比星，佐柔比星，米托蒽醌，博來霉素硫酸鹽，放線菌素D,番紅精，沙弗拉霉素，quinocarcins，discodermolides，長春新堿，長春花堿，長春瑞濱酒石酸鹽，維替泊芬，紫杉醇，他莫昔芬，雷洛昔芬，噻唑呋林，硫鳥嘌呤，病毒唑，EICAR，雌氮芥，雌氮芥磷酸鈉，氟他米特，比卡魯胺，布舍瑞林，亮丙瑞林，蝶啶，烯二炔，左旋四咪唑，aflacon，干擾素，白介素，阿地白介素，非格司亭，沙莫司亭，利妥昔單抗，卡介苗，維甲酸，betamethosone，鹽酸吉西他濱，異搏定，VP-16,六甲密胺，毒胡蘿卜內(nèi)酯，奧沙利鉑，異丙鉑，四鉑，洛鉬，DCP，PLD-147，JM118，JM216，JM335，沙鉑，紫杉萜，脫氧紫杉醇，TL-139，5'-降-脫水長春堿，喜樹堿，依立替康，托泊替康，BAY38-3441，9-硝基喜樹堿，依沙替康，勒托替康，吉馬替康，高喜樹堿氟替康和9-氨基喜樹堿，SN-38，ST固，karanitedn，吲哚咔唑，原小蘗堿，茚托利辛，茚并異喹諾酮，苯-吩嗪和NB-506。40.殺傷細胞的方法，包括對細胞給用有效量的權(quán)利要求1-32中任一項的化合物和增加細胞中VDAC豐度的試劑。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述細胞是癌細胞。42.殺傷細胞的方法，包括對細胞給用有效量的權(quán)利要求1-32中任一項的化合物和降低細胞中VDAC豐度的試劑。43.促進細胞死亡或抑制細胞增殖的方法，包括對細胞給用有效量的權(quán)利要求1-32中任一項的化合物。44.降低腫瘤生長率的方法，包括使腫瘤接觸有效量的權(quán)利要求1-32中任一項的化合物。45.增加腫瘤細胞對化療劑的敏感性的方法，包括使腫瘤細胞接觸有效量的權(quán)利要求1-32中任一項的化合物。46.包裝的藥物，其包括(i)治療有效量的權(quán)利要求l-32中任一項的化合物；和(ii)用于治療癌癥患者的試劑給藥的說明書、標簽或二者。全文摘要本發(fā)明提供了由結(jié)構(gòu)式(I)表示的化合物，該化合物可用于例如有效的殺傷或降低癌細胞增殖速率，諸如在癌患者中。除了化合物自身之外，本發(fā)明提供了該化合物的藥物組合物和使用該化合物的治療方法。文檔編號A61P35/00GK101374819SQ200680052925公開日2009年2月25日申請日期2006年12月22日優(yōu)先權(quán)日2005年12月22日發(fā)明者保羅·B·羅賓斯,拉杰·葛佩爾·文卡特,羅伯特·塞利亞,蘇迪爾·R·薩哈斯拉布德,邁克·皮爾斯,齊龍武申請人:普羅歷克西醫(yī)藥品公司