醫(yī)療試劑盒和使用該試劑盒的方法

文檔序號：1128093閱讀：498來源：國知局

專利名稱：醫(yī)療試劑盒和使用該試劑盒的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療試劑盒和使用該試劑盒的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及使用一種試劑盒的方法，所述試劑盒與用于軟骨和骨的再生的細胞治療產(chǎn)品的制備和植入、以及臍帶血的儲存和臍帶血的處理有關。尤其是，本發(fā)明能夠制備和提供對于期望細胞的分離、培養(yǎng)、收集、植入和儲存過程所必需的單一的試劑盒形式的各種材料、培養(yǎng)基和溶液，以容易并方便地使用。因此，本發(fā)明能夠解決制備細胞治療產(chǎn)品和儲存臍帶血的常規(guī)技術中存在的一些問題，例如生產(chǎn)成本過高、生產(chǎn)周期過長和勞動成本高。因此，本發(fā)明能夠顯著地改善產(chǎn)品的質(zhì)量和可靠性，從而非常有助于提高消費者的滿意程度。
背景技術：
由于用于移植的供體器官嚴重短缺，對組織再生的研究興趣越來越濃，這是本領域公知的。然而，很難開發(fā)出細胞治療產(chǎn)品以替代組織再生，而且不易創(chuàng)建儲存臍帶血的方法。尤其是，細胞治療產(chǎn)品不是治療的方法，在目前的醫(yī)藥領域，細胞治療產(chǎn)品可廣泛地通過商購獲得。此外，絕沒有將無菌的醫(yī)療器械和培養(yǎng)基制備在單獨一套的形式的試劑盒中，這樣所述細胞治療產(chǎn)品可以容易地并方便地進行制備，隨后移植到靶區(qū)域。
此外，組織工程學是通過恢復、重建、再生或者置換受損組織或器官的功能，以給器官或者組織提供正常的生物功能的生物技術的領域。以前，盡管組織工程學不為生物學家或者工程師所熟知，但是現(xiàn)在，組織工程學己經(jīng)是眾所周知的并快速成長的科學分枝。組織工程學已經(jīng)稱為值得關注的領
域，并被稱為"20世紀最有前途的研究領域之一"，并被時代雜志選中(2005五月)。這被認為是由于從事多個領域的專家不斷地、不厭倦地努力的結(jié)果。同樣地，在韓國，組織工程學正引起濃厚的興趣并快速地成長。
在組織工程學的早期，研究的主要目的是在體外制備在解剖學上或者組織學上與人的組織和器官相似的組織和器官。其后，組織工程學重視這樣形成的組織的功能。通過不斷地、大量地研究，遍及各個領域的組織工程學的產(chǎn)品和技術在臨床應用方面進行了大量的努力，最初的研究從人造皮膚開始。最近，組織再生還與組織重建一起被介紹。
組織工程學的基本構成元件之一是細胞。例如，在組織工程學的研究中己經(jīng)使用同種異體細胞、異種細胞或自體同源細胞。為了避免在移植的植入時可能發(fā)生的免疫排斥反應，同種異體細胞或異種細胞被誘導而分泌出對人體必需的物質(zhì)，從而改善體內(nèi)組織的生物功能。然而，同種異體細胞或異種細胞的應用受到實際應用的限制，從而導致優(yōu)先使用不會導致免疫排斥反應的自體同源的細胞。己經(jīng)使用自體同源的細胞進行了大量的研究。目前，在許多領域完成動物試驗后，正在積極地進行的實際的臨床試驗，并報道了一些令人滿意的結(jié)果。與人造生物材料不同，優(yōu)選利用自體同源細胞的注射治療是因為沒有外來物反應的風險。在臨床上，已經(jīng)嘗試使用各種組織的制劑通過注射治療。尤其是，可以說內(nèi)窺鏡的引入和協(xié)助擴展了組織工程學的應用范圍。
然而，制備利用這些自體同源細胞的細胞治療產(chǎn)品的總過程有些復雜，因此，不能容易地進行。在處理制備細胞治療產(chǎn)品所使用的各種塑料器皿、溶液和培養(yǎng)基，以及將細胞植入到機體的缺陷部位時可能發(fā)生污染。此外，由于細胞培養(yǎng)時間被延長，患者可能錯過及時植入的機會。

發(fā)明內(nèi)容
因此，考慮到上文討論的常規(guī)技術中存在的問題而完成本發(fā)明，本發(fā)明的第一個目的是提供一種使用試劑盒的方法，所述試劑盒與用于軟骨和骨的再生細胞治療產(chǎn)品的制備和植入、以及臍帶血的儲存和臍帶血的處理有關。尤其是，本發(fā)明能夠制備和提供對于期望的細胞的分離、培養(yǎng)、收集、植入和儲存過程必需的單一試劑盒形式的各種材料、培養(yǎng)基和溶液，以容易并方便地使用。因此，本發(fā)明能夠解決制備細胞治療產(chǎn)品和儲存臍帶血的常規(guī)技術中存在的一些問題，例如，生產(chǎn)成本過高、生產(chǎn)周期過長和勞動成本高。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種無菌的并已消毒的醫(yī)療試劑盒，該醫(yī)療試劑盒能夠?qū)氖占能浌墙M織、骨髓組織和臍帶血中得到細胞進行可靠的分離、培養(yǎng)、收集和儲存，并將期望的細胞植入到機體的靶位置。為了實現(xiàn) 這個目的，所述醫(yī)療試劑盒配置成單獨的試劑盒組的形式，通過將所有的過程分成相應的步驟而使每一個過程都能按照相應于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行。
本發(fā)明的第三個目的是使所有的過程實現(xiàn)標準化，所述所有的過程包括按照相應步驟制備用于軟骨和骨再生的細胞治療產(chǎn)品的過程，和制備適合標準化過程的試劑盒的過程。因此，本發(fā)明能夠使所述試劑盒在每一次使用時都容易并且方便，這將激活并提升細胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)，并且通過組織工程學使新的治療產(chǎn)品商品化。
本發(fā)明的第四個目的是使儲存臍帶血的方法標準化，這與上述用于軟骨
和骨再生的試劑盒的配置相同；還能夠制備相應于每一個過程的功能專一化的試劑盒，并使每一次使用該試劑盒較為方便。因此，與常規(guī)的儲存/處理方法相比，本發(fā)明在儲存臍帶血時能夠?qū)崿F(xiàn)降低成本、縮短時間和減少人力的優(yōu)點。
本發(fā)明的第五個目的是提供一種醫(yī)療試劑盒和使用該試劑盒的方法，通過顯著地改善產(chǎn)品的質(zhì)量和可靠性能夠提高消費者的滿意程度。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，上述和其它目的可以通過提供用于軟骨再生的無菌的/已消毒的醫(yī)療試劑盒實現(xiàn)，該醫(yī)療試劑盒包括按以下方式配置的軟骨再生試劑盒，所述配置通過將所有的過程分成以下相應步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟。所述軟骨再生試劑盒包括軟骨組織收集試劑盒、軟骨細胞分離試劑盒、軟骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒、以及軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒。因此，使用所述的軟骨再生試劑盒通過以下方式以使軟骨再生收集軟骨組織，分離軟骨細胞，改變軟骨細胞培養(yǎng)基和對軟骨細胞進行傳代培養(yǎng)，制備軟骨細胞治療產(chǎn)品，用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基，以及，用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用于骨再生的無菌的/己消毒的醫(yī)療試劑盒，該醫(yī)療試劑盒包括按以下方式配置的骨再生試劑盒，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟。所述骨再生試劑盒包括骨髓收集試劑盒、成骨細胞分離試劑盒、成骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒、以及成骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒。因此，使用所述的骨再生試劑盒通過以下方式以使骨再生收集骨髓，分離成骨細胞，改變成骨細胞培養(yǎng)基和對成骨細胞進行傳代培養(yǎng)，制備成骨細胞治療產(chǎn)
CI
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根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用于儲存造血干細胞的無菌的/已消毒的試劑盒，該試劑盒包括按以下方式配置的臍帶血儲存試劑盒，所述配置通過將所有的過程分成以下相應步驟使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟。所述臍帶血儲存試劑盒包括臍帶血收集試劑盒、造血干細胞分離試劑盒、和造血干細胞冷凍保存試劑盒。因此，使用所述的臍帶血儲存試劑盒通過以下方式儲存臍帶血收集臍帶血，分離造血干細胞和對造血干細胞進行冷凍保存。

通過以下描述并結(jié)合附圖對本發(fā)明進行的詳細說明，本發(fā)明上述的和其它目的、特點和其它優(yōu)點將能夠被更清楚地理解，其中-
圖1為適用于本發(fā)明的軟骨再生試劑盒的配置示意圖2為適用于本發(fā)明的骨再生試劑盒的配置示意圖3為適用于本發(fā)明的臍帶血儲存試劑盒的配置示意圖4為適用于本發(fā)明的軟骨組織收集試劑盒的照片；
圖5為適用于本發(fā)明的軟骨細胞分離試劑盒的照片；
圖6為適用于本發(fā)明的軟骨細胞培養(yǎng)基改變試劑盒的CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒的照片；
圖7為適用于本發(fā)明的軟骨細胞培養(yǎng)基改變試劑盒的CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒的照片；
圖8為適用于本發(fā)明的軟骨細胞培養(yǎng)基改變試劑盒的CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒的照片；
圖9為適用于本發(fā)明的軟骨細胞傳代培養(yǎng)試劑盒的CRM-P1傳遞培養(yǎng)試劑盒的照片；
圖10為適用于本發(fā)明的軟骨細胞傳代培養(yǎng)試劑盒的CRM-P2傳遞培養(yǎng) 試劑盒的照片；
圖11為適用于本發(fā)明的軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒中的細胞收集試劑盒的CRM-收集試劑盒的照片；圖12為適用于本發(fā)明的軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒中的遞送試劑盒的CRM-遞送試劑盒的照片；
圖13為適用于本發(fā)明的軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒中的植入試劑盒的CRM-植入試劑盒的照片；
圖14為適用于本發(fā)明的用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒的照片；
圖15為適用于本發(fā)明的用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒的照片；
圖16為適用于本發(fā)明的臍帶^收集試劑盒的照片；圖17為適用于本發(fā)明的造血干細胞分離試劑盒的照片；圖18為適用于本發(fā)明的用于分離/冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基試劑盒的照片。
具體實施例方式
在下文中，將參照附圖更詳細地描述實現(xiàn)上述目的的本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。
適用于本發(fā)明的一種醫(yī)療試劑盒以及使用該試劑盒的方法的構成如圖 1-18所示。
關于下文中對本發(fā)明的描述，如果涉及本發(fā)明的己知功能或者結(jié)構的描述可能使本發(fā)明的主體不清楚，則在詳細描述時將被省去。
下文中將描述的術語是考慮到其在本發(fā)明中的功能而確定的，可以根據(jù) 廠商的目的或者相關領域的通常實踐而發(fā)生變化。因此，本文中使用的術語應當根據(jù)本發(fā)明的說明書的內(nèi)容定義。
首先，本發(fā)明的技術構成一般由用于軟骨再生的試劑盒、用于骨再生的試劑盒、和用于儲存臍帶血的試劑盒組成。更確切地說，用于軟骨再生的試劑盒10為塑料器皿試劑盒，該試劑盒
包括
1. 軟骨組織收集試劑盒(CRM-輸送試劑盒)(CRM-TransportKit);
2. 軟骨細胞分離試劑盒(CRM-起始試劑盒[CRM-分離試劑盒、CRM-初級試劑盒])(CRM-Initiation Kit [CRM-Isolation Kit, CRM-Primary Kit]);
3. 軟骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)分離試劑盒(CRM-加工試劑盒 [CRM-PI傳代試劑盒、CRM-P2傳代試劑盒、CRM-PI培養(yǎng)基改變試劑盒、 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒、CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒])(CRM-Processing Kit [CRM-PI Subculture Kit, CRM-P2 Subculture Kit, CRM-PI Medium Change Kit, CRM-P2 Medium Change Kit, CRM-P3 Medium Change Kit]);禾口
4. 軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒(CRM-產(chǎn)品試劑盒[CRM-收集試劑盒、CRM-遞送試劑盒、CRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒、CRM-植入試劑盒]) (CRM-Product Kit [CRM-Collection Kit, CRM-Delivery Kit, CRM-Medium Packaging Kit, CRM- Implantation Kit]),它們分別由各種亞-試劑盒組成。所述軟骨再生試劑盒還包括用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒(CRM畫RF試齊U盒[CSB-I、 CSB-II、 CSM、 CPM、 CCM、 CCB])禾口用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒(CRM-FZ試劑盒[Cartisepor、 STA、 PCF、 Pass溶液、細胞儲液、CSMAD溶液、CPMAD溶液、Neutro溶液])，它們有助于細胞的分離、培養(yǎng)、收集和植入。
此外，用于骨再生的試劑盒20為塑料器皿試劑盒，該試劑盒包括
1. 骨髓收集試劑盒(BRM-輸送試劑盒)(BRM-TransportKit);
2. 成骨細胞分離試劑盒(BRM-開始試劑盒[BRM-分離試劑盒、BRM-初級試劑盒])(BRM-Initiation Kit [BRM-Isolation Kit, BRM-Primary Kit]);
3. 成骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒(BRM-加工試劑盒[BRM-Pl 傳代試劑盒、BRM-P2傳代試劑盒、BRM-Pl 4培養(yǎng)基改變試劑盒、BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒、BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒])(BRM-Processing Kit [BRM-P1 Subculture Kit, BRM-P2 Subculture Kit, BRM-P1 4. Medium Change Kit, BRM-P2 Medium Change Kit, BRM-P3 Medium Change Kit]);
4. 成骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒(BRM-產(chǎn)品試劑盒[BRM-收集試劑盒、BRM-遞送試劑盒、BRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒、BRM-植入試劑盒]) (BRM-Product Kit [B脂-Collection Kit, BRM誦Delivery Kit, BRM-Medium Packaging Kit, BRM- Implantation Kit]);
5. 用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存成骨細胞的培養(yǎng)基試劑盒(BRM-RF 試齊U盒[OSB、 BSB、 BSM、 BPM、 BCM、 BCB、 BDB、 BNB]);禾口
6. 用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存成骨細胞的培養(yǎng)基試劑盒(BRM-FZ試劑盒 [STA、 PCF、 Pass溶液、細胞儲液、OSMAD溶液、OPMAD溶液、Neutro 溶液])，為單獨成套的形式。最后，用于儲存臍帶血的試劑盒30由三個試劑盒組成
1. 臍帶血收集試劑盒(USCRM-輸送試劑盒)(USCRM-TransportKit);
2. 造血干細胞分離試劑盒(USCRM-加工試劑盒)(USC RM-Processing Kit);和
3. 造血干細胞冷凍保存試劑盒(USC RM-儲存試劑盒)(USC RM-Stomge Kit),還包括用于分離和冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基(USC RM-RF試劑盒)和用于分離和冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基(USC RM-FZ試劑盒)。
在下文中將更詳細描述本發(fā)明。
如圖1所示，根據(jù)本發(fā)明，提供了一種用于軟骨再生的無菌的/消毒的試劑盒。該試劑盒包括按以下方式配置的軟骨再生試劑盒10，所述配置通過將所有的過程分成以下相應步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟。所述軟骨再生試劑盒10包括軟骨組織收集試劑盒11、軟骨細胞分離試劑盒12、
軟骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒13、以及軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒14。
在本文中，所述軟骨組織收集試劑盒11包括用于收集軟骨組織的硬組織收集試劑盒；通用容器，該通用容器為用于組織遞送的內(nèi)部容器；輸送瓶，該輸送瓶為用于組織遞送的外部容器；用于移取lml溶液的藍色的槍頭 (lml);聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送組織的內(nèi)部盒；用于將所述輸送瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；以及，用于保持冷卻狀態(tài)的Koolit冷卻劑。
此外，所述軟骨細胞分離試劑盒12包括移液用的巴斯德吸液管；作為具有密封蓋的細胞培養(yǎng)容器(25cm4咅養(yǎng)瓶)的T25 (密封)；置于50ml 離心管上的細胞過濾器，用于將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于離心以洗滌細胞的管；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時用的E-管；用于移取lml溶液的藍色的槍頭；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于溶液過濾的注射器過濾器；T25細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
此外，適用于本發(fā)明的軟骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒13包括: 用于移液的巴斯德吸液管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于轉(zhuǎn)移大量溶液的吸液管；用于移取少量溶液的黃色的槍頭；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管；T75細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
本發(fā)明的軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒14包括用于移液的巴斯德吸液管；用于細胞冷凍保存的凍存管；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于轉(zhuǎn)移大量溶液的吸液管；置于50ml離心管上的細胞過濾器，用于將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于移取溶液的含有過濾器的藍色槍頭；用于塞瓶的橡皮蓋和鋁蓋；用于容納用于制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的細胞的lml的V-形瓶；聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送組織的內(nèi)部盒；用于將所述含有軟骨細胞治療產(chǎn)品的所述V形瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；用于保持冷卻狀態(tài)的 Koolit冷卻劑；以及，用于將細胞植入到缺陷區(qū)域的裝置2組。
此外，所述軟骨再生試劑盒10還包括用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒15和用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒16。
實施例
將參照以下實施例更詳細地描述本發(fā)明。提供的這些實施例僅用于說明本發(fā)明的目的，而不應解釋為是對本發(fā)明的范圍和精神實質(zhì)的限制。
如上構成的本發(fā)明使用所述軟骨再生試劑盒10通過以下方式實現(xiàn)軟骨的再生收集軟骨組織，分離軟骨細胞，改變軟骨細胞培養(yǎng)基和對軟骨細胞
進行傳代培養(yǎng)，制備軟骨細胞治療產(chǎn)品，用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基，以及用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基。本發(fā)明的實施例將
在下面描述。
實施例1
軟骨組織收集過程包括
1. 打開容納在軟骨RM試劑盒中的CRM-輸送試劑盒的外包裝紙；
2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沬塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和
3. 使用聚苯乙烯泡沫塑料盒中的無菌的硬質(zhì)組織收集器收集軟骨組織，將收集的軟骨組織置于含有紅色培養(yǎng)基的軟骨組織輸送容器中，用聚苯乙烯泡沫塑料盒和外包裝紙盒對所述軟骨組織的輸送容器進行雙重包裝，并然后將該包裝物轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)室中。
此外，CRM-起始試劑盒的所述分離軟骨細胞的過程包括
1. 從CRM-起始試劑盒中取出CRM-分離試劑盒，用足量的70%的乙醇對該CRM-分離試劑盒進行噴霧，然后將CRM-分離試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用50ml的管在凈化臺中稱量由CRM-輸送試劑盒輸送的軟骨組織；
3. 將所述軟骨組織轉(zhuǎn)移到50ml的管中，使用25 ml吸液管將CSB-I等分地引入到管中，并洗滌所述軟骨組織；
4. 通過巴斯德吸液管除去洗滌軟骨組織的溶液，并重復步驟3;
5. 將洗漆的軟骨組織轉(zhuǎn)移到皿中，并使用10號和11號刀片將所述組織剪切成塊；
6. 將剪切的軟骨組織轉(zhuǎn)移到15ml的管中；
7. 使用10ml吸液管將CSB-I等分地引入到管中；
8. 在1200rpm下將含有所述軟骨組織的管離心1分鐘；
9. 洗滌所述組織，并使用巴斯德吸液管除去上清；
10. 重復步驟8和9三次；
11. 提供兩個T25培養(yǎng)瓶(密封)，并使用10ml吸液管將Cartisepor 等分地引入到一個T25培養(yǎng)瓶中，并將Cartisepor和抗生素的混合物等分地引入到另一個培養(yǎng)瓶中；
12. 將1/3的洗滌過的軟骨組織轉(zhuǎn)移到含有CSB-I的培養(yǎng)瓶中，并將剩余2/3的洗滌過的軟骨組織轉(zhuǎn)移到含有CSB-II的培養(yǎng)瓶中；
13. 將所述組織轉(zhuǎn)移到所述培養(yǎng)瓶中后，將它們在37°C下于(302培養(yǎng) 箱中孵育12-16小時，然后在37。C下，以100rpm攪拌30分鐘；禾口14.將細胞過濾器置于50ml的管上，過濾培養(yǎng)瓶中的懸浮液，和 CRM-初級試劑盒的所述分離軟骨細胞的過程包括
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-初級試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-初級試劑盒進行噴霧，然后將它轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用10ml的吸液管將CRM等分地引入到50ml的管中；
3. 離心并洗滌所述管中的物質(zhì)，通過巴斯德吸液管移去上清，將CSM 再次等分地引入到所述管中，隨后洗漆；
4. 將1/20的細胞和PCF在凍存管中混合，并冷凍保存所述混合物；以
及
5. 第二天將未附著在T25培養(yǎng)瓶上的懸浮細胞回收到15ml的管中，并將回收的細胞接種到T25培養(yǎng)瓶中。
此外，本發(fā)明的CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒的改變軟骨細胞培養(yǎng)基和傳代培養(yǎng)的過程包括
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 CRM-P1培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基；
3. 通過25ml的吸液管將CSM等分地引入到50ml的管中；和
4. 將管中的等分的規(guī)定量的CSM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和 CRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒的所述改變軟骨細胞培養(yǎng)基和傳代培養(yǎng)的過程
包括
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P1 傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 在50ml的管中將T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；
5. 將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；
6. 重復步驟5三次；
7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3分鐘；
8. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
9. 將細胞收集到15ml的管中；
10. 用CSM洗滌所述培養(yǎng)瓶；
11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)；
12. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T75培養(yǎng)瓶中；和
13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒的軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程
包括
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；
3. 通過25ml吸液管將CPM等分地引入到50ml的管中；和
4. 將管中的等分的規(guī)定量的CPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和 CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒的軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包
括
1.從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P2 傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 在50ml的管中將T75培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；
3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；
5. 將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；
6. 重復步驟5三次；
7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3-5分鐘；
8. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
9. 在15ml的管中收集細胞；
10. 用CSM在輕輕搖晃下洗滌所述培養(yǎng)瓶；
11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)；
12. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T150培養(yǎng)瓶中；和
13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒的所述軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的
過程包括
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；
3. 通過25ml吸液管將CPM等分地引入到50ml的管中；禾口
4. 將管中的等分的規(guī)定量的CPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒的軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包
括-
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P2 傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 用50ml的管將T75培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；
3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；
5. 將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；
6. 重復步驟5三次；
7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3-5分鐘；
8. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
9. 在15ml的管中收集細胞；
10. 用CSM在輕輕搖晃下洗漆所述培養(yǎng)瓶；
11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)；
12. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T150培養(yǎng)瓶中；和
13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒的所述軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的
過程包括
1.從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；
3. 通過25ml的吸液管將CPM等分地引入到50ml的管中；禾口
4. 將管中等分的規(guī)定量的CPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中。
此外，適用于本發(fā)明的CRM-收集試劑盒的所述制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括
1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-收集試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-收集試劑盒進行噴霧，然后將CRM-收集試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 在遞送成品之前3天，用25ml的吸液管取出一部分培養(yǎng)基置于50ml 的管中作為樣品；
3. 在遞送產(chǎn)品當天，用50ml的管將T150培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合.
4. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
5. 用巴斯德吸液管移去所述培養(yǎng)瓶中的剩余的培養(yǎng)基；
6. 用25ml的吸液管將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，隨后進行洗滌；
7. 重復步驟6三次；
8. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約4-5分鐘；
9. 用lOml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
10. 將細胞過濾器分別置于50ml的管上；
11. 用25ml的吸液管將所述培養(yǎng)瓶中的經(jīng)Pass溶液處理后的懸浮液等分地引入到其上放置有細胞過濾器的管中；
12. 使用黃色的槍頭將細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)，
共計數(shù)三次；
13. 使用過濾器的藍色槍頭將CCM等分地引入到1ml的瓶中，將細胞和CCM進行混合；和
14.將橡皮蓋和鋁蓋裝到lml的瓶上；和
CRM-遞送試劑盒和CRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的所述制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括
1. 打開容納在軟骨RM試劑盒中的CRM-遞送試劑盒和CRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的外包裝紙；
2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和
3. 從轉(zhuǎn)移到外科療室中的盒中取出1號和4號小瓶，將所述小瓶和 CRM-植入試劑盒混合以備使用；和
CRM-植入試劑盒的軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備過程包括
1. 使用CRM-植入試劑盒中的混合槍頭，將用于混合物中的培養(yǎng)基和底物與裝置2組中的軟骨細胞治療產(chǎn)品進行混合；和
2. 使混合的底物和培養(yǎng)基組合物完全溶解，將18號針裝到注射器上，將所述組合物注射到患者的軟骨缺陷部位。
另一方面，本發(fā)明的構成還可以如圖2所示。
更確切地說，所圖2所示，根據(jù)本發(fā)明提供了一種無菌的/己消毒的用于骨再生的試劑盒。該用于骨再生的試劑盒包括按以下方式配置的骨再生試劑盒20，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng) 細胞的步驟、收集細胞和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的耙位點的步驟。所述骨再生試劑盒20包括骨髓收集試劑盒21、成骨細胞分離試劑盒22、成骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒23、以及成骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒24。
在本文中，所述骨髓收集試劑盒21包括通用容器，該通用容器為用于組織遞送的內(nèi)部容器；用于移取lml溶液的藍色的槍頭；聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送組織的內(nèi)部盒；用于將所述輸送瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；以及，用于保持冷卻狀態(tài)的Koolit冷卻劑。
此外，所述成骨細胞分離試劑盒22包括用于移液的巴斯德吸液管；置于離心管上的細胞過濾器，將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于離心以洗滌細胞的管；為了細胞計數(shù)將錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基混合時使用的E-管；用于移取lml溶液的藍色的槍頭；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；T75細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
此外，所述成骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒23包括用于移液的巴斯德吸液管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于轉(zhuǎn)移大量溶液的吸液管；用于移取少量溶液的黃色的槍頭；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管；T75細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
本發(fā)明的成骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒24包括用于移液的巴斯德吸液管；用于細胞冷凍保存的凍存管；為了細胞計數(shù)將錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基混合時使用的E-管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移液的吸液管；置于離心管上的細胞過濾器，將得到的細胞和培養(yǎng)基懸的浮液通過該過濾器以分離細胞；用于移取溶液的含有過濾器的藍色槍頭；用于塞瓶的橡皮蓋和鋁蓋；用于容納用于制備成骨細胞治療產(chǎn)品的細胞的lml的V形瓶；聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送成骨治療產(chǎn) 品的內(nèi)部盒；用于將所述含有成骨細胞治療產(chǎn)品的所述V形瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；以及，用于保持冷卻狀態(tài)的Koolit冷卻劑。
此外，所述骨再生試劑盒20還包括用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒25和用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒26。如上構成的本發(fā)明使用所述骨再生試劑盒20通過以下方式實現(xiàn)骨的再
生收集骨髓，分離成骨細胞，成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)，制備成骨細胞治療產(chǎn)品。本發(fā)明的實施例將在下面描述。
實施例2
骨髓收集過程包括
1. 打開容納在骨RM試劑盒中含有的BRM-輸送試劑盒的外包裝紙；
2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下己去掉的外包裝；和
3. 將骨髓置于聚苯乙烯泡沫塑料盒中的含有紅色培養(yǎng)基的骨髓組織輸送容器中，用聚苯乙烯泡沫塑料盒和外包裝紙盒對骨髓組織輸送容器進行雙重包裝，并然后將該包裝物轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)室中。
此外，BRM-起始試劑盒的所述分離成骨細胞的過程包括
1. 從BRM-起始試劑盒中取出BRM-分離試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-分離試劑盒進行噴霧，然后將BRM-分離試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用50ml的管在凈化臺中稱量由BRM-輸送試劑盒輸送的骨髓組織；
3. 將所述骨髓組織轉(zhuǎn)移到50ml的管中，使用25ml的吸液管將BSB-I 等分地引入到管中，并洗滌所述骨髓；
4. 通過巴斯德吸液管除去洗滌的骨髓組織的溶液，并重復步驟3;
5. 使用25ml的吸液管將BDB溶液加入到洗滌過的骨髓組織中；
6. 在經(jīng)過預定的時間后，使用10ml的吸液管吸出規(guī)定量的BDB溶液，并用BDB溶液中和所述骨髓組織；
7. 在中和后，用BSM溶液再次洗滌中和過的骨髓組織；和
8. 將經(jīng)洗滌的有核細胞轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶中，并將細胞保持在3/C的 C02培養(yǎng)箱中；和BRM-初級試劑盒的所述分離成骨細胞的過程包括
1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的BRM-初級試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-初級試劑盒進行噴霧，然后將BRM-初級試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用10ml的吸液管將置于37°C的C02培養(yǎng)箱中T75培養(yǎng)瓶中的懸浮細胞層轉(zhuǎn)移到50ml的管中；和
3. 對所述50ml的管進行離心，使用25ml的吸液管將細胞和BSM溶液混合，并將混合物接種到T75培養(yǎng)瓶中。
此外，本發(fā)明的BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括
1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；
3. 通過25ml的吸液管將BSM等分地引入到50ml的管中；禾口
4. 將管中的等分的規(guī)定量的BSM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和 BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過
程包括
1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將BRM-P1
傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 在50ml的管中將T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；
3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；
5. 將BSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；
6. 重復步驟5三次；
7. 用10ml吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3分鐘；
8. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
9. 在15ml的管中收集細胞；
10. 用BSM洗滌所述培養(yǎng)瓶；
11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到BCB中，隨后進行活細胞計數(shù)；
12. 在活細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T75培養(yǎng)瓶中；和
13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的
過程包括
1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；
3. 通過25ml吸液管將BPM等分地引入到50ml的管中；和
4. 將管中的等分的規(guī)定量的BPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和 BRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過
程包括-
1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將BRM-P2 傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 在50ml的管中將T75培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；
5. 將BSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；
6. 重復步驟5三次；
7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3-5分鐘；
8. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
9. 在15ml的管中收集細胞；
10. 用BSM在輕輕搖晃下洗滌所述培養(yǎng)瓶；
11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到BCB中，隨后進行細胞計數(shù)；
12. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T150培養(yǎng)瓶中；和
13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的
過程包括
1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；
3. 通過25ml的吸液管將BPM等分地引入到50ml的管中；和
4. 將管中的等分的規(guī)定量的BPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中。
此外，本發(fā)明的BRM-收集試劑盒的所述制備成骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括
1.從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-收集試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-收集試劑盒進行噴霧，然后將BRM-收集試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；
2. 在遞送成品之前3天，用25 ml的吸液管取出一部分培養(yǎng)基置于50 ml 的管中作為樣品；
3. 在遞送產(chǎn)品當天，在50ml的管中將T150培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；
4. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；
5. 用巴斯德吸液管移去所述培養(yǎng)瓶中的剩余的培養(yǎng)基；
6. 用25ml的吸液管將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，隨后進行洗滌;
7. 重復步驟6三次；
8. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約4-5分鐘；
9. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；
10. 將細胞過濾器分別置于50 ml的管上；
11. 用25ml的吸液管將所述培養(yǎng)瓶中處理的Pass溶液懸浮液等分地引入到其上放置有細胞過濾器的管中；
12. 使用黃色的槍頭將細胞等分地引入到BCB中，隨后進行細胞計數(shù)，共計數(shù)三次；
13. 使用過濾器的藍色槍頭將BCM等分地引入到lml的瓶中，將細胞和BCM混合；和
14. 將橡皮蓋和鋁蓋裝到1ml的瓶上；和
BRM-遞送試劑盒和BRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的所述制備成骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括
1.打開容納在骨RM試劑盒中的BRM-遞送試劑盒和BRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的外包裝紙；2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和
3. 從轉(zhuǎn)移到外科療室中的盒中取出1號和4號小瓶，將所述小瓶和 BRM-植入試劑盒進行混合以備使用；和
BRM-植入試劑盒的所述制備成骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括
1. 使用BRM-植入試劑盒中的混合槍頭，將用于混合物中的培養(yǎng)基和底物與裝置2組中的成骨細胞治療產(chǎn)品混合；和
2. 使混合的底物和培養(yǎng)基的組合物完全溶解，將針裝到注射器上，將所述組合物注射到患者的骨缺陷部位。
或者，本發(fā)明的的構成還可以如圖3所示。
確切地說，如圖3所示，根據(jù)本發(fā)明提供了一種用于儲存臍帶血的無菌的/已消毒的試劑盒。該試劑盒包括按以下方式配置的臍帶血儲存試劑盒30，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟。所述臍帶血儲存試劑盒包括臍帶血收集試劑盒31、造血干細胞分離試劑盒32、以及造血干細胞冷凍保存試劑盒33。
在本文中，所述臍帶血收集試劑盒31包括用于收集大量血液的血液收集袋；用于遞送血液收集袋的儲存盒；用于在輸送前對所述血液收集袋進行保存的拉鏈袋；以及，附著在所述儲存盒的表面上的粘著劑。
此外，所述造血干細胞分離試劑盒32包括用于對除去血紅細胞的造血干細胞進行濃縮的加工袋；為了控制質(zhì)量而在抽取樣品時使用的注射器；置于離心管上的細胞過濾器，將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于離心以洗滌細胞的管；用于進行無菌操作的乳膠手套；用于容納用于造血干細胞的儲存的細胞的CCZ瓶；用于塞瓶的鋁封；用于移取溶液的藍色的槍頭；以及，在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的 E-管。
此外，適用于本發(fā)明的造血干細胞冷凍保存試劑盒33包括用于冷凍所述造血干細胞的冷凍袋；用于保護所述冷凍袋的低溫冷阱(cryowmp); 以及，用于存放所述冷凍袋和所述低溫冷阱的筒。
適用于本發(fā)明的臍帶血儲存試劑盒30包括用于分離和冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基試劑盒34和用于分離和冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基試劑盒35。
如上構成的本發(fā)明使用所述臍帶血儲存試劑盒通過以下方式實現(xiàn)臍帶血的儲存收集臍帶血，分離造血干細胞和對造血干細胞進行冷凍保存。本
發(fā)明的實施例將在下面描述。
實施例3
所述臍帶血的收集過程包括
1. 將容納在USC RM試劑盒中的USC RM-輸送試劑盒的儲存盒輸送到外科療室；
2. 打開輸送出的儲存盒中的拉鏈袋，使用無菌血液收集袋來收集臍帶血；禾口
3. 將收集的血液置于所述USC RM-輸送試劑盒的儲存盒中，并將所述血液轉(zhuǎn)移到加工房間。
此外，所述分離造血干細胞的過程包括
1. 使用10ml的注射器從所述血液收集袋中取出規(guī)定量的血液，將這些
血液等分地引入到EPP管中；
2. 使用30ml的注射器向所述管中加入規(guī)定量的UES溶液，隨后進行攪拌，并在室溫下靜置；3. 在靜置一定時間后，通過半自動血漿分離器將第一血漿層(primary plasma layer)分離到所述加工袋中；
4. 重復步驟2和3;
5. 將所述加工袋置于斗中，隨后進行稱重和離心；
6. 在離心后，將所述加工袋從所述斗上分離；
7. 將所述加工袋放置到自動血漿分離器上；
8. 使用自動血漿分離器將所述血漿等分地引入到15ml的管中；
9. 使用自動血漿分離器將剩余的血漿置于50ml的管中；和
10. 使用10ml的注射器從所述50ml的管中取出血漿，等分地引入到真空采血管中。
此外，所述造血干細胞冷凍保存的過程包括
1. 將加工袋懸浮，用lOmI的注射器取出懸浮后的加工袋中的物質(zhì)，并將這些物質(zhì)等分地引入到EPP中；
2. 用lOml的注射器取出細胞儲液，并將該儲液加入到懸浮在冰水總的所述加工袋中，隨后均勻混合；
3. 用70%的乙醇對所述加工袋的外表面進行消毒；
4. 將經(jīng)冷凍的袋連接到所述加工袋上，從而回收得到濃縮的有核細胞層，并除去氣泡；
5. 將所述經(jīng)冷凍的袋置于經(jīng)雙重包裝的袋中，隨后進行壓緊包裝并進行滅菌；和
6. 將經(jīng)雙重包裝的袋中的所述冷凍袋插入到所述筒中。工業(yè)實用性
從上述的描述可以清楚地看出，本發(fā)明提供了一種使用試劑盒的方法，所述試劑盒與用于軟骨和骨的再生細胞治療產(chǎn)品的制備和植入、以及臍帶血的儲存和臍帶血的處理有關。尤其是，本發(fā)明能夠制備和提供對于期望的細胞的分離、培養(yǎng)、收集、植入和儲存過程必需的單一試劑盒形式的各種材料、培養(yǎng)基和溶液，以容易并方便地使用。因此，本發(fā)明能夠解決制備細胞治療產(chǎn)品和儲存臍帶血的常規(guī)技術中存在的一些問題，例如生產(chǎn)成本過高、生產(chǎn) 周期過長和勞動成本高。
此外，本發(fā)的試劑盒是一種無菌的已消毒的醫(yī)療試劑盒，該試劑盒能夠對從收集的軟骨組織、骨髓組織和臍帶血中得到的細胞進行可靠地分離、培養(yǎng)、收集和儲存，并將期望的細胞植入到機體的靶位置。為了實現(xiàn)這個目的，所述醫(yī)療試劑盒配置以單獨的試劑盒組的形式，通過將所有的過程分成相應的步驟而使每一個過程都能按照相應于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行。
此外，本發(fā)明使所有過程實現(xiàn)標準化，所述所有過程包括按照相應步驟制備用于軟骨和骨再生的細胞治療產(chǎn)品的過程，和制備適合標準化過程的試劑盒的過程。因此，本發(fā)明能夠使所述試劑盒在每一次使用時都容易并且方便，這將激活并提升細胞治療產(chǎn)品的生產(chǎn)，并且通過組織工程學使新的治療產(chǎn)品商品化。
此外，本發(fā)明還使儲存臍帶血的方法標準化，這與上述用于軟骨和骨再
生的試劑盒的配置相同；還能夠制備相應于每一個過程的功能專一化的試劑盒，和使每一次使用該試劑盒更方便。因此，與常規(guī)的儲存/處理方法相比，本發(fā)明在儲存臍帶血時能夠?qū)崿F(xiàn)降低成本、縮短時間和減少人力的優(yōu)勢。
結(jié)果，本發(fā)明能夠顯著地改善產(chǎn)品的質(zhì)量和可靠性，從而有益于提高消費者的滿意程度。
盡管為了說明的目的公開了本發(fā)明的優(yōu)選的實施方式，但是本領域的技術人員能夠理解的是在不背離所附權利要求中公開的本發(fā)明的范圍和精神
實質(zhì)的情況下可以進行各種改變、添加和置換。
權利要求
1、一種用于軟骨再生的無菌的/已消毒的醫(yī)療試劑盒，該醫(yī)療試劑盒包括按以下方式配置的軟骨再生試劑盒(10)，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞的步驟和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟，其中，所述軟骨再生試劑盒(10)包括軟骨組織收集試劑盒(11)、軟骨細胞分離試劑盒(12)、軟骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒(13)、以及軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒(14)。
2、根據(jù)權利要求1所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述軟骨組織收集試劑盒(11)包括用于收集軟骨組織的硬質(zhì)組織收集試劑盒；通用容器，該通用容器為用于組織遞送的內(nèi)部容器；輸送瓶，該輸送瓶為用于組織遞送的外部容器；用于移取lml溶液的藍色的槍頭(lml);聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送組織的內(nèi)部盒；用于將所述輸送瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；以及，用于保持冷卻狀態(tài)的 Koolit冷卻劑。
3、根據(jù)權利要求1所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述軟骨細胞分離試劑盒(12)包括移液用的巴斯德吸液管；作為具有密封蓋的細胞培養(yǎng)容器(25cn^的培養(yǎng)瓶)的T25 (密封)；置于50ml離心管上的細胞過濾器，用于使得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離出細胞；用于離心以洗滌細胞的管；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時用的E-管；用于移取 lml溶液的藍色的槍頭；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于溶液過濾的注射器過濾器；T25細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
4、根據(jù)權利要求1所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述軟骨細胞培養(yǎng)基改突和傳代培養(yǎng)試劑盒(13)包括用于移液的巴斯德吸液管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于轉(zhuǎn)移大量溶液的吸液管；用于移取少量溶液的黃色的槍頭；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管；T75細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
5、根據(jù)權利要求1所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述軟骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒(14)包括用于移液的巴斯德吸液管；用于細胞冷凍保存的凍存管；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于轉(zhuǎn)移大量溶液的吸液管；置于50ml 離心管上的細胞過濾器，用于將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于移取溶液的過濾器的藍色槍頭；用于塞瓶的橡皮蓋和鋁蓋；用于容納用于制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的細胞的lml的V形瓶;聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送組織的內(nèi)部盒；用于將含有軟骨細胞治療產(chǎn)品的所述V形瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；用于保持冷卻狀態(tài)的Koolit冷卻劑；以及，用于將細胞植入到缺陷區(qū)域的裝置(2)組。
6、根據(jù)權利要求1所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述軟骨再生試劑盒(IO) 還包括用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒(15)和用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒(16)。
7、一種醫(yī)療試劑盒的使用方法，該方法使用權利要求1中所述的軟骨再生試劑盒(10)通過以下方式使軟骨再生收集軟骨組織，分離軟骨細胞，軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)，制備軟骨細胞治療產(chǎn)品，用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基，以及用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基。
8、根據(jù)權利要求7所述的方法，其中，所述收集軟骨組織的過程包括:1. 打開容納在軟骨RM試劑盒中的CRM-輸送試劑盒的外包裝紙；2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和3. 使用聚苯乙烯泡沫塑料盒中的無菌的硬質(zhì)組織收集器收集軟骨組織，將收集的軟骨組織置于含有紅色培養(yǎng)基的軟骨組織的輸送容器中，用聚苯乙烯泡沫塑料盒和外包裝紙盒對所述軟骨組織的輸送容器進行雙重包裝，并然后將該包裝物轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)室中。9、根據(jù)權利要求7所述的方法，其中，CRM-起始試劑盒的所述分離軟骨細胞的過程包括1. 從CRM-起始試劑盒中取出CRM-分離試劑盒，用足量的70%的乙醇對該CRM-分離試劑盒進行噴霧，然后將該CRM-分離試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用50ml的管在凈化臺中稱量由CRM-輸送試劑盒輸送的軟骨組織；3. 將所述軟骨組織轉(zhuǎn)移到50ml的管中，使用25ml的吸液管將CSB-I 等分地引入到所述管中，并洗滌所述軟骨組織；4. 通過巴斯德吸液管除去洗滌軟骨組織的溶液，并重復步驟3;5. 將洗滌后的軟骨組織轉(zhuǎn)移到皿中，并使用10號和11號刀片將所述組織剪切成塊；6. 將剪切的軟骨組織轉(zhuǎn)移到15ml的管中；7. 使用10ml的吸液管將CSB-1等分地引入到所述管中；8. 在1200rpm下將含有所述軟骨組織的管離心1分鐘；
9. 洗滌所述組織，并使用巴斯德吸液管除去上清；10. 重復步驟8和9三次；11. 提供兩個T25培養(yǎng)瓶(密封)，并使用10ml的吸液管將Cartisepor 等分地引入到一個T25培養(yǎng)瓶中，并將Cartisepor和抗生素的混合物等分地引入到另一個培養(yǎng)瓶中；12. 將1/3的洗滌過的軟骨組織轉(zhuǎn)移到含有CSB-I的培養(yǎng)瓶中，并將剩余2/3的洗滌過的軟骨組織轉(zhuǎn)移到含有CSB-II的培養(yǎng)瓶中；13. 將所述組織轉(zhuǎn)移到所述培養(yǎng)瓶中后，將它們在37°C下于C02培養(yǎng) 箱中孵育12-16小時，然后在37。C下，以100rpm攪拌30分鐘；禾口14. 將細胞過濾器置于50ml的管上，過濾培養(yǎng)瓶中的懸浮液，和 CRM-初級試劑盒的所述分離軟骨細胞的過程包括1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-初級試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-初級試劑盒進行噴霧，然后將CRM-初級試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用10ml的吸液管將CRM等分地引入到50ml管中；3. 離心并洗滌所述管中的物質(zhì)，通過巴斯德吸液管移去上清，將CSM 再次等分地引入到所述管中，隨后洗滌；4. 將1/20的細胞和PCF在凍存管中混合并冷凍保存該混合物；以及5. 第二天將未附著在T25培養(yǎng)瓶上的懸浮細胞回收到15ml的管中，并將回收的細胞接種到T25培養(yǎng)瓶中。
10、根據(jù)權利要求7所述的方法，其中，CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒的所述軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1.從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中； 2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基； 3. 通過25ml的吸液管將CSM等分地引入到50ml的管中；和 4. 將管中等分的規(guī)定量的CSM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和 CRM-PI傳代培養(yǎng)試劑盒的所述軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-PI傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-PI傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將CRM-PI 傳養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 在50ml的管中將T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；5. 將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；6. 重復步驟5三次；7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3分鐘；8. 用lOml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；9. 將細胞收集到15ml的管中；10. 用CSM洗滌所述培養(yǎng)瓶；11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)；12. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T75培養(yǎng)瓶中；和13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒的軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括-1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 CRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；-2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；-3. 通過25ml的吸液管將CPM等分地引入到50ml的管中；禾口-4. 將管中等分的規(guī)定量的CPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和 CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒的所述軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括-1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；-2. 在50ml的管中將T75培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；-3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；-4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；-5. 將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；-6. 重復步驟5三次；-7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3-5分鐘；-8. 用lOml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；-9. 在15ml的管中收集細胞；-10. 用CSM在輕輕搖晃下洗滌所述培養(yǎng)瓶； 11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)； 12. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T150培養(yǎng)瓶中；和 13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液進行混合，冷凍保存混合物；和CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒的所述軟骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基；3. 通過25ml的吸液管將CPM等分地引入到50ml的管中；和4. 將管中等分的規(guī)定量的CPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中。
11.根據(jù)權利要求7所述的方法，其中，CRM-收集試劑盒的所述制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括1. 從軟骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的CRM-收集試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-收集試劑盒進行噴霧，然后將CRM-收集試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 在遞送成品之前3天，用25ml的吸液管取出一部分培養(yǎng)基置于50ml的管中作為樣品；3. 在遞送產(chǎn)品當天，用50ml的管將T150培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合.4. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；5. 用巴斯德吸液管移去所述培養(yǎng)瓶中的剩余的培養(yǎng)基；6. 用25ml的吸液管將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，隨后進行洗滌；7. 重復步驟6三次； 8. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約4-5分鐘； 9. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中； 10. 將細胞過濾器分別置于50ml的管上； 11. 用25ml的吸液管將所述培養(yǎng)瓶中經(jīng)Pass溶液處理后的懸浮液等分地引入到其上放置有細胞過濾器的管中； 12. 使用黃色的槍頭將細胞等分地引入到CCB中，隨后進行細胞計數(shù)，共計數(shù)三次； 13. 使用過濾器的藍色槍頭將CCM等分地引入到lml的瓶中，并將細胞和CCM進行混合；和 14. 將橡皮蓋和鋁蓋裝到lml的瓶上；和CRM-遞送試劑盒和CRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的所述制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括1打開容納在軟骨RM試劑盒中的CRM-遞送試劑盒和CRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的外包裝紙；2只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和3從轉(zhuǎn)移到外科療室的盒中取出1號和4號小瓶，將所述小瓶和CRM-植入試劑盒混合以備使用；和CRM-植入試劑盒的所述制備軟骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括1使用CRM-植入試劑盒中的混合槍頭對用于混合物中的培養(yǎng)基和底物與裝置(2)組中的軟骨細胞治療產(chǎn)品進行混合；和2使混合的底物和培養(yǎng)基組合物完全溶解，將18號針裝到注射器上，將所述組合物注射到患者的軟骨缺陷部位。
12、一種無菌的/已消毒的用于骨再生的試劑盒，該用于骨再生的試劑盒包括按以下方式配置的骨再生試劑盒(20)，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞的步驟和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟，其中，所述骨再生試劑盒(20)包括骨髓收集試劑盒(21)、成骨細胞分離試劑盒(22)、成骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒(23)、以及成骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒(24)。
13、根據(jù)權利要求12所述的用于骨再生的試劑盒，其中，所述骨髓收集試劑盒(21)包括通用容器，該通用容器為用于組織遞送的內(nèi)部容器；用于移取lml溶液的藍色的槍頭；聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送組織的內(nèi)部盒；用于將輸送瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；以及，用于保持冷卻狀態(tài)的Koolit冷卻劑。
14、根據(jù)權利要求12所述的用于骨再生的試劑盒，其中，所述成骨細胞分離試劑盒(22)包括移液用的巴斯德吸液管；置于離心管上的細胞過濾器，用于將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于離心以洗滌細胞的管；為了細胞計數(shù)而將錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基混合時使用的E-管；用于移取lml溶液的藍色的槍頭；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；T75細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
15、根據(jù)權利要求12所述的用于骨再生的試劑盒，其中，所述成骨細胞培養(yǎng)基改變和傳代培養(yǎng)試劑盒(23)包括用于移液的巴斯德吸液管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；用于轉(zhuǎn)移大量溶液的吸液管；用于移取少量溶液的黃色的槍頭；在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管；T75細胞培養(yǎng)瓶；以及，用于細胞冷凍保存的凍存管。
16、根據(jù)權利要求12所述的用于骨再生的試劑盒，其中，所述成骨細胞治療產(chǎn)品的制備試劑盒(24)包括用于移液的巴斯德吸液管；用于細胞冷凍保存的凍存管；為了細胞計數(shù)而將錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基混合時使用的E-管；用于離心以洗滌細胞的管；用于轉(zhuǎn)移溶液的吸液管；置于離心管上的細胞過濾器，用于將得到的細胞和培養(yǎng)基懸的浮液通過該過濾器以分離細胞；用于移取溶液的過濾器的藍色槍頭；用于塞瓶的橡皮蓋和鋁蓋；用于容納用于制備成骨細胞治療產(chǎn)品的細胞的lml的V形瓶;聚苯乙烯泡沫塑料盒，該聚苯乙烯泡沫塑料盒為用于在冷卻條件下遞送成骨治療產(chǎn)品的內(nèi)部盒；用于將含有成骨細胞治療產(chǎn)品的所述V形瓶引入到所述聚苯乙烯泡沫塑料盒中的海綿；以及，用于保持冷卻狀態(tài)的Koolit冷卻劑。
17、根據(jù)權利要求12所述的用于骨再生的試劑盒，其中，所述骨再生試劑盒(20)還包括用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒(25)和用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基試劑盒(26)。
18、一種醫(yī)療試劑盒的使用方法，該方法使用權利要求12中所述的骨再生試劑盒(20)通過以下方式以使骨再生收集骨髓，分離成骨細胞，成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)，制備成骨細胞治療產(chǎn)品。
19、根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，所述收集骨髓的過程包括[1. 打開容納在骨RM試劑盒中的BRM-輸送試劑盒的外包裝紙；[2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和(3.將骨髓置于聚苯乙烯泡沫塑料盒中的含有紅色培養(yǎng)基的骨髓組織輸送容器中，用聚苯乙烯泡沫塑料盒和外包裝紙盒對骨髓組織輸送容器進行雙重包裝，然后將該包裝物轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)室中。
20、根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，所述BRM-起始試劑盒的所述分離成骨細胞的過程包括(1. 從BRM-起始試劑盒中取出BRM-分離試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-分離試劑盒進行噴霧，然后將BRM-分離試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；(2. 使用50ml的管在凈化臺中稱量由BRM-輸送試劑盒輸送的骨髓組織；(3. 將所述骨髓組織轉(zhuǎn)移到50ml的管中，使用25ml的吸液管將BSB-I等分地引入到管中，并洗滌所述骨髓；(4. 通過巴斯德吸液管除去洗滌的骨髓組織的溶液，并重復步驟3;(5. 使用25ml的吸液管將BDB溶液加入到洗滌過的骨髓組織中；(6. 在經(jīng)過預定的時間后，使用10ml的吸液管吸出規(guī)定量的BDB溶液，并用BDB溶液中和所述骨髓組織；(7. 在中和后，用BSM溶液再次洗滌經(jīng)中和的骨髓組織；和(8. 將洗滌過的有核細胞轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶中，并將細胞保持在37。C的C02培養(yǎng)箱中；和BRM-初級試劑盒的所述分離成骨細胞的過程包括(1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-初級試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-初級試劑盒進fi^噴霧，然后將BRM-初級試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；(2. 使用10ml的吸液管將置于37°C的C02培養(yǎng)箱中T75培養(yǎng)瓶中的懸浮細胞層轉(zhuǎn)移到50ml的管中；和，3.對所述50ml的管進行離心，使用25ml的吸液管對細胞和BSM溶液進行混合，并將混合物接種到T75培養(yǎng)瓶中。
21、根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將BRM-P1培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；3. 通過25ml的吸液管將BSM等分地引入到50ml的管中；禾口4. 將管中的等分的規(guī)定量的BSM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中；和BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將BRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 在50ml的管中將T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；5. 將BSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；6. 重復步驟5三次；7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3分鐘；8. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中； 9. 在15ml的管中收集細胞； 10. 用BSM洗滌所述培養(yǎng)瓶； 11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到BCB中，隨后進行活細胞計數(shù)； 12. 在活細胞計數(shù)后將所述細胞接種到T75培養(yǎng)瓶中；和 13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P2培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 BRM-培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；3. 通過25ml的吸液管將BPM等分地引入到50ml的管中；和4. 將管中的等分的規(guī)定量的BPM再次等分比引入到培養(yǎng)瓶中；和 BRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒的成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂-包裝的BRM-P2傳代培養(yǎng)試劑盒，用足量的70%的乙醇對CRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒進行噴霧，然后將CRM-P1傳代培養(yǎng)試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 在50ml的管中將T75培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合；3. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品；4. 用巴斯德吸液管移去剩余的培養(yǎng)基；5. 將BSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，搖晃以洗滌所述培養(yǎng)瓶，然后用巴斯德吸液管移去上清；6. 重復步驟5三次；，7. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約3-5分鐘；8. 用10ml的吸液管將Neutm溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中；9. 在15ml的管中收集細胞；10. 用BSM在輕輕搖晃下洗滌所述培養(yǎng)瓶；11. 使用黃色的槍頭將規(guī)定量的細胞等分地引入到BCB中，隨后進行細胞計數(shù)；2. 在細胞計數(shù)后，將所述細胞接種到T150培養(yǎng)瓶中；和13. 在凍存管中將剩余的細胞和細胞儲液混合，冷凍保存混合物；和 BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒的所述成骨細胞培養(yǎng)基的改變和傳代培養(yǎng)的過程包括. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒，用足量的70%的乙醇對BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒進行噴霧，然后將 BRM-P3培養(yǎng)基改變試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 使用巴斯德吸液管移去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基；3. 通過25ml吸液管將BPM等分地引入到50ml的管中；和4. 將管中的等分的規(guī)定量的BPM再次等分地引入到培養(yǎng)瓶中。
22、根據(jù)權利要求18所述的方法，其中，BRM-收集試劑盒的所述制備成骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括1. 從骨RM試劑盒中取出乙烯樹脂包裝的BRM-收集試劑盒，用足量的 70%的乙醇對BRM-收集試劑盒進行噴霧，然后將BRM-收集試劑盒轉(zhuǎn)移到凈化臺中；2. 在遞送成品之前3天，用25ml的吸液管取出一部分培養(yǎng)基置于50ml 的管中作為樣品； 1. 打開容納在骨RM試劑盒中的BRM-遞送試劑盒和BRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的外包裝紙； 2. 只把具有內(nèi)包裝的聚苯乙烯泡沫塑料盒轉(zhuǎn)移到外科療室而留下已去掉的外包裝；和 3. 在遞送產(chǎn)品當天，在50ml的管中將T150培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基集中并混合； 4. 取出一部分培養(yǎng)基加到50ml的管和E-管中作為樣品； 5. 用巴斯德吸液管移去所述培養(yǎng)瓶中的剩余的培養(yǎng)基； 6. 用25ml的吸液管將CSB-II等分地引入到培養(yǎng)瓶中，隨后進行洗滌； 7. 重復步驟6三次； 8. 用10ml的吸液管將Pass溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中，并將該培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱中保持約4-5分鐘； 9. 用10ml的吸液管將Neutro溶液等分地引入到培養(yǎng)瓶中； 10. 將細胞過濾器分別置于50 ml的管上； 11. 用25ml吸液管將所述培養(yǎng)瓶中處理的Pass溶液懸浮液等分地引入到其上放置有細胞過濾器的管中； 12. 使用黃色的槍頭將細胞等分地引入到BCB中，隨后進行細胞計數(shù)，共計數(shù)三次； 13. 使用過濾器的藍色槍頭將BCM等分地引入到lml的瓶中，將細胞和BCM混合；和 14. 將橡皮蓋和鋁蓋裝到所述lml的瓶上；和BRM-遞送試劑盒和BRM-培養(yǎng)基包裝試劑盒的所述制備成骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括從轉(zhuǎn)移到外科療室中的盒中取出1號和4號小瓶，將所述小瓶和 BRM-植入試劑盒進行混合以備使用；和BRM-植入試劑盒的所述制備成骨細胞治療產(chǎn)品的過程包括 (1. 使用BRM-植入試劑盒中的混合槍頭，將用于混合物中的培養(yǎng)基和底物與裝置(2)組中的成骨細胞治療產(chǎn)品混合；和 (2. 使混合的庫物和培養(yǎng)基的組合物完全溶解，將針裝到注射器上，將所述組合物注射到患者的骨缺陷部位。
23、一種用于儲存臍帶血的無菌的/已消毒的醫(yī)療試劑盒，該醫(yī)療試劑盒包括按以下方式配置的臍帶血儲存試劑盒(30)，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞的步驟和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟，其中，所述臍帶血儲存試劑盒包括臍帶血收集試劑盒(31)、造血干細胞分離試劑盒(32)、以及造血干細胞冷凍保存試劑盒(33)。
24、根據(jù)權利要求23所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述臍帶血收集試劑盒(31)包括用于收集大量血液的血液收集袋；用于遞送血液收集袋的儲存盒；用于在輸送前對所述血液收集袋進行保存的拉鏈袋；以及，附著在所述儲存盒的表面上的粘著劑。
25、根據(jù)權利要求23所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述造血干細胞分離試劑盒(32)包括用于對除去血紅細胞的造血干細胞進行濃縮的加工袋；為了控制質(zhì)量而在抽取樣品時使用的注射器；置于離心管上的細胞過濾器，用于將得到的細胞和培養(yǎng)基的懸浮液通過該過濾器以分離細胞；用于離心以洗滌細胞的管；用于進行無菌操作的乳膠手套；用于容納造血干細胞的儲存細胞的CCZ瓶；用于塞瓶的鋁封；用于移取溶液的藍色的槍頭；以及，在混合錐蟲藍和含有細胞的培養(yǎng)基時使用的E-管。
26、根據(jù)權利要求23所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述造血干細胞冷凍保存試劑盒(33)包括用于冷凍所述造血干細胞的冷凍袋；用于保護所述冷凍袋的低溫冷阱；以及，用于存放所述冷凍袋和所述低溫冷阱的筒。
27、根據(jù)權利要求23所述的醫(yī)療試劑盒，其中，所述臍帶血儲存試劑盒(30)還包括用于分離和冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基試劑盒(34)和用于分離和冷凍保存造血干細胞的培養(yǎng)基試劑盒(35)。
28、一種使用醫(yī)療試劑盒的方法，該方法使用權利要求23中所述的臍帶血儲存試劑盒(30)通過以下方式儲存臍帶血收集臍帶血，分離造血干細胞和對造血干細胞進行冷凍保存。
29、根據(jù)權利要求28所述的方法，其中，所述收集臍帶血的過程包括(1. 將容納在USC RM試劑盒中的USC RM-輸送試劑盒的儲存盒輸送到外科療室；(2. 打開輸送出的儲存盒中的拉鏈袋，使用無菌血液收集袋來收集臍帶血；禾口(3. 將收集的血液置于所述USC RM-輸送試劑盒的儲存盒中，并將所述血液轉(zhuǎn)移到加工房間。
30、根據(jù)權利要求28所述的方法，其中，所述分離造血干細胞的過程包括(1.使用10ml的注射器從所述血液收集袋中取出規(guī)定量的血液，將這些血液等分地引入到EPP管中；(2. 使用30ml的注射器向所述管中加入規(guī)定量的UES溶液，隨后進行攪拌，并在室溫下靜置；(3. 在靜置一定時間后，通過半自動血漿分離器將第一血漿層分離到所述加工袋中；(4. 重復步驟2和3;(5. 將所述加工袋置于斗中，隨后進行稱重和離心；(6. 在離心后，將所述加工袋從所述斗上分離；(7. 將所述加工袋放置到自動血漿分離器上；(8. 使用自動血漿分離器將所述血漿等分地引入到15ml的管中；(9. 使用自動血漿分離器將剩余的血漿置于50ml的管中；和(10. 使用10ml注射器從所述50ml的管中取出血漿，并將取出的血漿等分地引入到真空采血管中。
31、根據(jù)權利要求28所述的方法，其中，所述對造血干細胞進行冷凍保存的過程包括(1. 將加工袋懸浮，用10ml的注射器取出懸浮后的加工袋中的物質(zhì)，并將這些物質(zhì)等分地引入到EPP中；(2. 用10ml的注射器取出細胞儲液，并將該儲液加入到懸浮在冰水中的所述加工袋中，隨后均勻混合；(3. 用70%的乙醇對所述加工袋的外表面進行消毒；(4. 將經(jīng)冷凍的袋連接到所述加工袋上，從而回收得到濃縮的有核細胞層，并除去氣泡；(5. 將所述經(jīng)冷凍的袋置于經(jīng)雙重包裝的袋中，隨后進行壓緊包裝并進行滅菌；和(6. 將經(jīng)雙重包裝的袋中的所述冷凍袋插入到所述筒中。
全文摘要
提供了一種醫(yī)療試劑盒以及使用該醫(yī)療試劑盒的方法。為了實現(xiàn)該目的，提供了一種無菌的/經(jīng)消毒的醫(yī)療試劑盒，該醫(yī)療試劑盒包括按以下方式配置的軟骨再生試劑盒(10)、骨再生試劑盒(20)或者臍帶血儲存試劑盒(30)，所述配置通過將所有的過程分成以下相應的步驟而使每一個過程都能按照用于每一步驟的功能專一性的試劑盒組進行分離細胞的步驟、培養(yǎng)細胞的步驟、收集細胞的步驟和儲存細胞的步驟，以及將所需要的細胞植入到機體的靶位點的步驟。因此，使用軟骨再生試劑盒(10)通過以下方式使所述軟骨再生收集軟骨組織，分離軟骨細胞，改變軟骨細胞的培養(yǎng)基和對軟骨細胞進行傳代培養(yǎng)，制備軟骨細胞治療產(chǎn)品，用于分離/培養(yǎng)/制備/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基，以及用于分離/培養(yǎng)/冷凍保存細胞的培養(yǎng)基。使用骨再生試劑盒(20)通過以下方式使骨再生收集骨髓，分離成骨細胞，改變成骨細胞的培養(yǎng)基和對成骨細胞進行傳代培養(yǎng)，制備成骨細胞治療產(chǎn)品。此外，使用臍帶血儲存試劑盒(30)通過以下方式來儲存臍帶血收集臍帶血，分離造血干細胞，和冷凍保存造血干細胞。
文檔編號A61F2/28GK101528157SQ200680056211
公開日2009年9月9日申請日期2006年11月3日優(yōu)先權日2006年10月27日
發(fā)明者孫炫美, 張在德, 張晶皓申請人:世元世龍技術株式會社

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