專利名稱：一種用于治療膿毒癥的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及烏司他丁、α1胸腺肽或兩者聯(lián)合應(yīng)用的新醫(yī)藥用途，即烏司他丁、α1胸腺肽或兩者聯(lián)合應(yīng)用在制備治療和/或預(yù)防膿毒癥藥物中的應(yīng)用，以及含有它們的藥物組合物。
背景技術(shù)：
烏司他丁，又名人尿胰蛋白酶抑制劑(Human Urinary Trypsin Inhibitor，UTI；Urinastatin；或Ulinastatin)，是從人體尿液中分離純化的一種胰蛋白酶抑制劑，由143個(gè)氨基酸組成的一種糖蛋白，N端為丙氨酸，C端為亮氨酸，在第10位絲氨酸和45位天冬氨酸上有糖鏈。烏司他丁的分子量為40～50KD，是一種對熱穩(wěn)定的酸性蛋白。
烏司他丁對多種水解酶具有有效的抑制作用，對細(xì)胞膜、溶酶體膜有明顯的穩(wěn)定作用。烏司他丁在人體內(nèi)不僅僅是一種酶抑制劑，同時(shí)還是參與細(xì)胞表達(dá)分泌調(diào)控的重要生理活性物質(zhì)，在炎癥等疾病狀態(tài)下，烏司他丁由粒細(xì)胞酶水解釋放到血液中，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控；在機(jī)體遭遇重大打擊，發(fā)生全身炎癥反應(yīng)時(shí)，減輕過度釋放的炎癥介質(zhì)對機(jī)體組織造成的損傷。烏司他丁在臨床上用于急性胰腺炎、急性循環(huán)障礙的治療，以及大中型手術(shù)期的器官保護(hù)和危重癥中多器官功能障礙綜合癥的預(yù)防等。
α1胸腺肽(Thymosinα1)是人工合成的含有28個(gè)氨基酸的小分子多肽，是胸腺素主要的生物活性成分，為人體內(nèi)重要的免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)。它能阻止特異性免疫細(xì)胞凋亡、逆轉(zhuǎn)免疫抑制。目前，α1胸腺肽主要用于慢性乙型肝炎及腫瘤患者，而對膿毒癥患者的治療尚缺乏報(bào)道。
膿毒癥(Sepsis)是感染所引發(fā)的全身性炎癥反應(yīng)綜合征，多由肺炎、創(chuàng)傷、燒傷、外科手術(shù)、癌癥等疾病引起。事實(shí)上，因患上述疾病而死亡的病例中，大部分是因膿毒癥致死。如創(chuàng)傷后死亡的患者，80％的死因是膿毒癥。當(dāng)代醫(yī)學(xué)對膿毒癥還缺少有力的治療和/或預(yù)防手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人經(jīng)過認(rèn)真研究和動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，烏司他丁、α1胸腺肽或兩者的聯(lián)合對膿毒癥有明顯的治療和/或預(yù)防作用。
因此，本發(fā)明的目的是提供烏司他丁和/或α1胸腺肽用于制備治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物的用途。
所述的膿毒癥是感染所引發(fā)的全身性炎癥反應(yīng)綜合征，多由病原微生物感染和肺炎、創(chuàng)傷、燒傷、外科手術(shù)、癌癥等疾病引起。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于治療和/或預(yù)防膿毒癥的含有烏司他丁和/或α1胸腺肽的藥物組合物，該目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物組合物，其含有治療有效量的烏司他丁和/或α1胸腺肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
具體說，本發(fā)明的一種技術(shù)方案涉及治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物組合物，其一個(gè)藥物劑量單位中含有10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位烏司他丁，以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的另一種技術(shù)方案涉及治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物組合物，其一個(gè)藥物劑量單位中含有0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mgα1胸腺肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的再一種技術(shù)方案涉及治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物組合物，其一個(gè)藥物劑量單位中含有10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位烏司他丁；0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mgα1胸腺肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的還一種技術(shù)方案涉及治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物組合物，其包括一個(gè)劑量單位的烏司他丁，其中含有10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位烏司他丁活性成分；和一個(gè)劑量單位的α1胸腺肽，其中含有0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mgα1胸腺肽活性成分，兩者是同時(shí)或依次給藥。
在本發(fā)明涉及的烏司他丁和/或α1胸腺肽在制備治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物的用途中，其治療劑量根據(jù)病情的嚴(yán)重程度、治療時(shí)間而定，一般烏司他丁靜脈注射給藥，每次10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位，每天給藥1-4次；α1胸腺肽皮下注射給藥，每次0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mg，每天給藥1-4次，兩者可同時(shí)或依次給藥。
本發(fā)明的烏司他丁對膿毒癥有明顯的治療和/或預(yù)防作用。
本發(fā)明的α1胸腺肽對膿毒癥有明顯的治療和/或預(yù)防作用。
本發(fā)明的烏司他丁和α1胸腺肽兩者聯(lián)合應(yīng)用比二者單獨(dú)應(yīng)用對膿毒癥有更好的治療和/或預(yù)防作用。
本發(fā)明的烏司他丁可以以藥物組合物的形式使用，這種組合物含有治療有效量的作為活性成分的烏司他丁和一種或多種制藥可接受的載體或添加劑。含有烏司他丁的藥物組合物通常以靜脈注射途徑給藥，主要?jiǎng)┬桶跛舅龈煞坩槃┖妥⑸湟簞?br> 烏司他丁凍干粉針劑藥物組合物中可以含有一種或多種制藥可接受的載體或添加劑，特別是甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡萄糖中的一種或其任意混合物，在使用時(shí)可以溶解于滅菌水或其他注射用滅菌介質(zhì)中。
烏司他丁凍干粉針劑制備方法是取過濾滅菌烏司他丁水溶液10000萬單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)pH至中性，加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝1000個(gè)西林瓶中，無菌條件下冷凍干燥，即得。
烏司他丁注射液劑藥物組合物中可以含有一種或多種制藥可接受的載體或添加劑，特別是注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的一種或其任意混合物。
烏司他丁注射液制備方法是取過濾滅菌烏司他丁水溶液10000萬單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)pH至中性，加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝1000個(gè)西林瓶中，即得。
本發(fā)明的α1胸腺肽可以以藥物組合物的形式使用，這種組合物含有治療有效量的作為活性成分的α1胸腺肽和一種或多種制藥可接受的載體或添加劑。含有α1胸腺肽的藥物組合物通常以靜脈注射途徑給藥，主要?jiǎng)┬桶é?胸腺肽凍干粉針劑和注射液劑。
α1胸腺肽凍干粉針劑藥物組合物中含有α1胸腺肽、緩沖劑、等滲調(diào)節(jié)劑和穩(wěn)定劑。所述的緩沖劑選自磷酸氫二鈉、氫氧化鈉、碳酸鈉、氨水或其任意混合物。所述的等滲調(diào)節(jié)劑選自碳水化合物、多元醇或其任意混合物；其中碳水化合物選自半乳糖、阿拉伯糖或乳糖；多元醇選自甘露醇、山梨醇、肌醇、甘油、木糖醇或聚乙二醇。所述的穩(wěn)定劑選自甘氨酸、谷氨酸或醋酸銨等。
α1胸腺肽凍干粉針劑制備方法是稱取0.1-10mg/mlα1胸腺肽、0.1-50mg/ml緩沖劑、5-50mg/ml等滲調(diào)節(jié)劑、5-50mg/ml穩(wěn)定劑，加入注射用水溶解，然后用緩沖溶液調(diào)至pH為5.0-7.5，補(bǔ)加注射用水至1000ml，過菌過濾，分裝1000個(gè)西林瓶中，無菌條件下冷凍干燥，即得。
α1胸腺肽注射液劑藥物組合物中含有α1胸腺肽、緩沖劑、等滲調(diào)節(jié)劑和穩(wěn)定劑。所述的緩沖劑選自磷酸氫二鈉、氫氧化鈉、碳酸鈉、氨水或其任意混合物。所述的等滲調(diào)節(jié)劑選自碳水化合物、多元醇或其任意混合物；其中碳水化合物選自半乳糖、阿拉伯糖或乳糖；多元醇選自甘露醇、山梨醇、肌醇、甘油、木糖醇或聚乙二醇。所述的穩(wěn)定劑選自甘氨酸、谷氨酸或醋酸銨等。
α1胸腺肽注射液制備方法是稱取0.1-10mg/mlα1胸腺肽、0.1-50mg/ml緩沖劑、5-50mg/ml等滲調(diào)節(jié)劑、5-50mg/ml穩(wěn)定劑，加入注射用水溶解，然后用緩沖溶液調(diào)至pH為5.0-7.5，補(bǔ)加注射用水至1000ml，過菌過濾，分裝1000個(gè)西林瓶中，即得。
本發(fā)明的烏司他丁和α1胸腺肽聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，兩者可同時(shí)或依次給藥。烏司他丁通常以靜脈注射途徑給藥，主要?jiǎng)┬桶跛舅龈煞坩槃┖妥⑸湟簞Ｃ看戊o脈給藥10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位；α1胸腺肽皮下注射給藥，主要?jiǎng)┬桶é?胸腺肽凍干粉針劑和注射液劑，每次給藥0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mg。
本發(fā)明采用烏司他丁、α1胸腺肽或兩者的聯(lián)合對膿毒癥有明顯的治療和/或預(yù)防作用，尤其是采用烏司他丁和α1胸腺肽的聯(lián)合，對膿毒癥有特別突出的治療效果，這在臨床上為膿毒癥的治療提供了新途徑。
具體實(shí)施例方式
下面用具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1制備烏司他丁干粉針取過濾滅菌烏司他丁水溶液10000萬單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)pH至中性，加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無菌過濾，分裝1000個(gè)西林瓶中，無菌條件下冷凍干燥，即得。
實(shí)施例2制備α1胸腺肽注射液取α1胸腺肽1.6g，甘露醇10.0g，甘氨酸10.0g，加800ml注射用水，用磷酸二氫鈉緩沖劑溶液調(diào)至pH為6.5，加注射用水至1000ml，除菌過濾，分裝至1000個(gè)西林瓶中，每瓶分裝1.0ml，經(jīng)加塞、壓塞、加蓋、扎蓋，即得。
實(shí)施例3烏司他丁和/或α1胸腺肽對膿毒癥大鼠的治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組Wister性大鼠128只，體重240g-260g，雌雄各半。分別采用UTI和α1胸腺肽為抗炎和免疫刺激治療劑，并將動(dòng)物隨機(jī)分為四組(每組32只大鼠)①模型組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在建模后6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、和72小時(shí)，通過尾靜脈注射與UTI治療組等量的生理鹽水、腹部皮下與α1胸腺肽治療組等量的生理鹽水作對照。
②UTI治療組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在與對照組相同的時(shí)間點(diǎn)通過尾靜脈給以UTI 0.4ml(2萬單位)/只、腹部皮下給生理鹽水0.2ml/只治療。
③α1胸腺肽治療組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在對照組相同的時(shí)間點(diǎn)通過腹部皮下給以α1胸腺肽0.2ml(0.32mg)/只、尾靜脈給以生理鹽水0.4ml/只治療。
④聯(lián)合治療組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在與對照組相同的時(shí)間點(diǎn)同時(shí)尾靜脈給以UTI 0.4ml(2萬單位)/只、腹部皮下給α1胸腺肽0.2ml(0.32mg)/只治療。
采用盲腸結(jié)扎穿孔制作膿毒癥模型，取大鼠麻醉開腹后，在其盲腸離末端1.5cm-2.0cm處完全結(jié)扎，在末端用18#針頭對穿2孔，縫合后腹部皮下給生理鹽水9ml/只，死亡率40％-80％之間。
檢測指標(biāo)和方法記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組動(dòng)物存活情況，計(jì)算其死亡率，并測定造模前、造模后24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)血液標(biāo)本的淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4/CD8等指標(biāo)。
結(jié)果各組膿毒癥大鼠淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD4/CD8和死亡率的檢測結(jié)果如下表1。
表1膿毒癥大鼠特異性免疫功能指標(biāo)的檢測結(jié)果


注*與同組造模前相比，P＜0.05；△與同時(shí)點(diǎn)①組比較，P＜0.05。
死亡率是評價(jià)藥物療效的基本指標(biāo)，由于膿毒癥的死亡率較高，故能有效降低患病大鼠死亡率的藥物，表明該藥物的抗炎能力越強(qiáng)。淋巴細(xì)胞是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的基礎(chǔ)細(xì)胞，測定外周血中淋巴細(xì)胞數(shù)量變化，結(jié)合細(xì)胞免疫功能檢查，可以幫助觀察機(jī)體免疫狀態(tài)。T細(xì)胞亞群是免疫系統(tǒng)內(nèi)功能最重要的一大細(xì)胞群。T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用主要由CD4+細(xì)胞和CD8+細(xì)胞來完成。CD4+細(xì)胞協(xié)調(diào)B細(xì)胞分化產(chǎn)生抗體，CD8+細(xì)胞抑制抗體的合成、分泌及T細(xì)胞的增殖，兩者的協(xié)調(diào)維持著機(jī)體的正常免疫應(yīng)答。感染時(shí)CD4+/CD8+比值低于正常對照。
本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，UTI組、α1胸腺肽組和聯(lián)合治療組的死亡率都大幅降低，激活淋巴細(xì)胞的數(shù)目明顯減少，并可顯著提高了CD4+/CD8+比值(P＜0.05)，且聯(lián)合治療組的結(jié)果優(yōu)于其它兩組單獨(dú)治療組，說明UTI和/或α1胸腺肽可有效控制膿毒癥大鼠的炎癥反應(yīng)進(jìn)程，促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)，而二者聯(lián)合應(yīng)用治療膿毒癥的效果最佳。
實(shí)施例4烏司他丁和/或α1胸腺肽對膿毒癥家兔的治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組家兔32只，體重240g-260g，雌雄各半。分別采用UTI和α1胸腺肽為抗炎和免疫刺激治療劑，并將動(dòng)物隨機(jī)分為四組(每組8只家兔)①模型組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在建模后6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、和72小時(shí)，通過靜脈注射與UTI治療組等量的生理鹽水、腹部皮下與α1胸腺肽治療組等量的生理鹽水作對照。
②UTI治療組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在與對照組相同的時(shí)間點(diǎn)通過尾靜脈給以UTI 0.4ml(8萬單位)/只、腹部皮下給生理鹽水1.0ml/只治療。
③α1胸腺肽治療組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在對照組相同的時(shí)間點(diǎn)通過腹部皮下給以α1胸腺肽1.0ml(1.6mg)/只、尾靜脈給以生理鹽水0.4ml/只治療。
④聯(lián)合治療組制模成功后正常飼養(yǎng)，并分別在與對照組相同的時(shí)間點(diǎn)同時(shí)尾靜脈給以UTI 0.4ml(8萬單位)/只、腹部皮下給α1胸腺肽1.0ml(1.6mg)/只治療。
動(dòng)物模型制備氯胺酮注射液80mg/kg腹腔注射麻醉，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的硫化鈉背部脫毛。將家兔背部浸泡于沸水12S，造成30％總體表面積(TBSA)III度燙傷(病理證實(shí))，燙傷后立即腹腔注射生理鹽水50ml/kg進(jìn)行液體復(fù)蘇，12h后腹腔注射內(nèi)毒素5mg/kg，以模擬燙傷膿毒癥模型。
檢測指標(biāo)和方法建模前、建模后24小時(shí)和48小時(shí)分別留取血液標(biāo)本，檢測TNF-α、IL-6和IL-10等因子的水平。
結(jié)果各組膿毒癥家兔TNF-α、IL-6和IL-10的檢測結(jié)果如下表2。
表2各組膿毒癥家兔TNF-α、IL-6和IL-10的檢測結(jié)果

注*與同組造模前相比，P＜0.05；△與同時(shí)點(diǎn)①組比較，P＜0.05。
TNF-α和IL-6均是由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有廣泛生物學(xué)活性的典型的致炎細(xì)胞因子，是炎癥反應(yīng)過程中重要的炎性介質(zhì)，在組織損傷的早期即產(chǎn)生。在急性炎性反應(yīng)中，TNF-α的水平與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。IL-10是一種重要的負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，主要由Th2、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，它可抑制T細(xì)胞克隆的增殖，抑制多種細(xì)胞因子如IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β以及γ-干擾素的合成及表達(dá)，從而在抗腫瘤、抗感染和神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用。
本研究結(jié)果表明，與模型組比較，UTI組、α1胸腺肽組和聯(lián)合治療組的TNF-α和IL-6這兩種促炎因子的濃度都明顯降低，而抑炎因子IL-10的水平卻顯著升高，說明UTI和/或α1胸腺肽可促使促炎細(xì)胞因子下降和抗炎細(xì)胞因子上升，減輕了炎癥介質(zhì)所致的損傷反應(yīng)。
本試驗(yàn)結(jié)果表明烏司他丁與α1胸腺肽聯(lián)合應(yīng)用能有效治療膿毒癥，二者聯(lián)合應(yīng)用治療膿毒癥的效果最佳。
權(quán)利要求
1.一種治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物組合物，其含有治療有效量的烏司他丁和/或α1胸腺肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其一個(gè)藥物劑量單位中含有10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位烏司他丁以及藥學(xué)上可接受的載體，每天給藥1-4個(gè)劑量單位。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其為凍干粉針劑，其載體選自甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡萄糖中的一種或其任意混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其為注射液劑，其載體選自注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的一種或其任意混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其一個(gè)藥物劑量單位中含有0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mgα1胸腺肽以及藥學(xué)上可接受的載體，每天給藥1-4個(gè)劑量單位。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其為凍干粉針劑或注射液劑型，還含有0.1-50mg/ml緩沖劑、5-50mg/ml等滲調(diào)節(jié)劑和5-50mg/ml穩(wěn)定劑，所述的緩沖劑選自磷酸氫二鈉、氫氧化鈉、碳酸鈉、氨水或其任意混合物。所述的等滲調(diào)節(jié)劑選自碳水化合物、多元醇或其任意混合物；其中碳水化合物選自半乳糖、阿拉伯糖或乳糖；多元醇選自甘露醇、山梨醇、肌醇、甘油、木糖醇或聚乙二醇，所述的穩(wěn)定劑選自甘氨酸、谷氨酸或醋酸銨等。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其一個(gè)藥物劑量單位中含有10萬-300萬單位，優(yōu)選20-00萬單位烏司他丁；0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mgα1胸腺肽以及藥學(xué)上可接受的載體，每天給藥1-4個(gè)劑量單位。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其包括一個(gè)劑量單位的烏司他丁，其中含有10萬-300萬單位，優(yōu)選20-100萬單位烏司他丁活性成分；和一個(gè)劑量單位的α1胸腺肽，其中含有0.1mg-5.0mg，優(yōu)選1mg-2mgα1胸腺肽活性成分，兩者是同時(shí)或依次給藥，每天各給藥1-4個(gè)劑量單位。
9.烏司他丁和/或α1胸腺肽用于制備治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及烏司他丁(Urinary Trypsin Inhibitor，UTI)、α1胸腺肽或兩者聯(lián)合應(yīng)用于制備治療和/或預(yù)防膿毒癥的藥物用途及按該方法制備的藥物。本發(fā)明的烏司他丁、α1胸腺肽或兩者聯(lián)合應(yīng)用對膿毒癥有明顯的治療作用。本發(fā)明的藥物通常以凍干粉針劑或注射液劑的形式使用。
文檔編號A61K47/26GK101020048SQ200710004938
公開日2007年8月22日 申請日期2007年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月12日
發(fā)明者傅和亮, 侯永敏, 吳蓉蓉, 王曉巖, 徐娟 申請人:廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司