專利名稱：：一種從中藥提取物中分離苦參堿類總生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥有效成分的提取分離方法，特別是涉及一種從中藥提取液中提取分離苦參堿類總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：中藥生物堿是自然界中存在的一類重要物質(zhì)，目前己分離到700多種，它們是中藥中最大一類療效確切，用途廣泛的有效成分，尤其對(duì)癌癥、肝病及心腦血管、風(fēng)濕重大疾病等有獨(dú)特療效，如黃連中的小檗堿用于抗菌消炎，麻黃中的麻黃堿用于平喘，蘿芙木中的利血平用于降壓，石蒜中的加蘭他敏對(duì)小兒麻痹后遺癥有療效，罌粟果皮中所含的嗎啡堿是著名鎮(zhèn)痛劑；奎寧堿是有價(jià)值的解熱藥；辣椒堿具有許多生理活性和強(qiáng)而持久的消炎鎮(zhèn)痛作用；喜樹(shù)中的喜樹(shù)堿與長(zhǎng)春花中的長(zhǎng)春新堿用于抗腫瘤等。以苦參堿和氧化苦參堿為代表的苦參堿類生物堿，多存在于豆科槐屬植物中，例如山豆根、苦豆子、苦參等，這類生物堿可以有效治療乙型肝炎、老年癡呆癥等，是一類臨床應(yīng)用價(jià)值很大的生物堿。目前，含中藥生物堿類藥材的提取，多根據(jù)生物堿的理化特性，采用適宜的溶劑如水、酸水、酸醇及堿醇等，利用浸漬、滲漉、煎煮、回流、超聲等技術(shù)將生物堿類成分提取出來(lái)，提取工藝已較完善，生物堿提取率能達(dá)到90%以上。但由于生物堿在中藥中的相對(duì)含量較低(多數(shù)含量為0.01%1%)，提取時(shí)勢(shì)必引入大量的雜質(zhì)類成分，如大量的淀粉、樹(shù)膠、果膠、粘液質(zhì)、色素等，給進(jìn)一步的去粗取精帶來(lái)了很大的困難，因而真正的技術(shù)瓶頸就在于如何進(jìn)一步純化富集提取出來(lái)的生物堿。目前，生物堿純化工藝中廣泛應(yīng)用的純化方法主要是堿化后有機(jī)溶劑萃取法及大孔吸附樹(shù)脂法(《中藥化學(xué)》，肖崇厚主編，1997年，上?？茖W(xué)技術(shù)出版社；《中草藥中生物堿的提取與分離》，蔡艷華，四川化工，2005.(1)39)。有機(jī)溶劑萃取法是利用親脂性生物堿溶于親脂性有機(jī)溶劑，而其鹽溶于水的性質(zhì)，使生物堿酸堿轉(zhuǎn)化，利用有機(jī)溶劑(常用的如苯、三氯甲烷、乙醚等)萃取，去除大量的雜質(zhì)，有機(jī)溶劑萃取法應(yīng)用較為廣泛，但堿化后大量中性及非極性色素等雜質(zhì)易被帶入，因此分離效率和純度較低，且使用大量有機(jī)溶劑(一般萃取5次)，操作不便(萃取罐效率不高，且易乳化)安全性不佳(有機(jī)溶劑毒性大，且易燃易爆)，為實(shí)驗(yàn)室工藝，不適合工業(yè)大生產(chǎn)。大孔吸附樹(shù)脂分離技術(shù)，選擇性吸附中藥提取液中有效成分，去除雜質(zhì)。與傳統(tǒng)的除雜方法和工藝相比，可縮小服藥劑量，提高了制劑的質(zhì)量，該法對(duì)水溶性較好的黃酮、皂苷等有良好的分離精制效果，如目前常用的銀杏類制劑及人參皂苷的制備等。但對(duì)于生物堿的精制來(lái)講，本法最大的不足在于首先是吸附困難，上樣藥液必須是稀溶液，堿度要適宜，堿度低則生物堿仍為離子化狀態(tài)，樹(shù)脂的吸附率低，堿度高，生物堿為游離型，大分子生物堿水溶性差而析出，仍然無(wú)法上柱，適用的生物堿范圍很小，品種太少；其次，大孔吸附樹(shù)脂的非極性靜電吸附原理對(duì)生物堿有效成份和脂溶性雜質(zhì)的分離選擇性太差，且在溶劑洗脫過(guò)程中由于沒(méi)有特異性的洗脫溶劑，生物堿和大量脂溶性雜質(zhì)往往一起被洗滌下來(lái)，最后精制得到的總生物堿純度不高。還有新興的離子交換樹(shù)脂分離技術(shù)，是通過(guò)離子交換反應(yīng)達(dá)到分離和純化的目的。目前在中藥領(lǐng)域所普遍采用的技術(shù)是，將含有生物堿的溶液過(guò)柱后，以氨液或NaOH溶液洗脫，收集洗脫液后再以有機(jī)溶劑萃取生物堿；或者將上過(guò)樣品的樹(shù)脂以堿液浸泡，然后再用有機(jī)溶劑回流提取生物堿。但該方法步驟繁瑣，有機(jī)溶劑萃取、將樹(shù)脂柱進(jìn)行有機(jī)溶劑回流提取等步驟在工業(yè)上很難實(shí)現(xiàn)，且以堿液洗脫的效率很低，僅停留于實(shí)驗(yàn)室制備小樣品的水平，也無(wú)法實(shí)現(xiàn)大生產(chǎn)。以上這些方法，普遍存在成本高、有機(jī)溶劑消耗大、選擇性差、總生物堿純度低和無(wú)法實(shí)現(xiàn)大生產(chǎn)等不足，因此，純化技術(shù)仍是中藥分離生物堿的"瓶頸"問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種安全、低成本、高效率的提取分離苦參堿類總生物堿的方法。該發(fā)明目的是通過(guò)如下工藝實(shí)現(xiàn)的取含苦參堿類總生物堿的中藥提取液，調(diào)整pH值l至7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5%15%酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得苦參堿類總生物堿。在上述工藝過(guò)程中，將含有總生物堿的提取液調(diào)至合適的酸度后，生物堿電離成為陽(yáng)離子，非堿性物質(zhì)不被電離，提取液過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱后，電離的生物堿有機(jī)離子與樹(shù)脂柱上的氫離子交換而被牢固地吸附于樹(shù)脂柱上。這里提取液的pH值不宜過(guò)高或過(guò)低，如果過(guò)高，提取液呈中性或堿性，生物堿不能電離，也就不能完成樹(shù)脂上的交換過(guò)程；如果過(guò)低，提取液中的氫離子濃度太高，阻礙了樹(shù)脂柱上的氫離子解離，同樣不能很好地完成樹(shù)脂交換過(guò)程，因而實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)調(diào)整提取液的pH值為1至7是比較合適的。以水洗脫時(shí)，使用的是去離子水，以確保不引入新的離子干擾，洗脫時(shí)那些沒(méi)有被樹(shù)脂吸附的非堿性物質(zhì)就很容易被水洗脫下來(lái)，從而與被吸附在樹(shù)脂柱上生物堿有機(jī)離子分離了。此后再加較高濃度的酸液進(jìn)行洗脫，由于此時(shí)酸液中的氫離子濃度很高，就會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地與樹(shù)脂相結(jié)合，從而將吸附在樹(shù)脂柱上的生物堿有機(jī)離子交換下來(lái)，溶解在酸洗脫液中，流出樹(shù)脂柱，完成生物堿的富集過(guò)程。之后，在洗脫液中加入堿中和掉多余的酸，再經(jīng)常規(guī)脫鹽處理，即可得到純度較高的苦參堿類總生物堿了。該工藝過(guò)程與現(xiàn)有技術(shù)相比，工藝流程簡(jiǎn)單，不使用有機(jī)溶劑、無(wú)樹(shù)脂單體成分殘留、生物堿轉(zhuǎn)移率高；其重要的貢獻(xiàn)還在于，打破了傳統(tǒng)理論認(rèn)為的離子交換能力順序規(guī)律，艮P-C^、K+^NH4、Na、H"。正是在這一傳統(tǒng)理論的影響下，所有關(guān)于苦參堿類總生物堿的離子交換樹(shù)脂分離法中都是堿液或氨液進(jìn)行洗脫，或者先用堿液中和樹(shù)脂柱再用有機(jī)溶劑回流提取理論上已經(jīng)游離的生物堿，而實(shí)際應(yīng)用中的效果非常不理想且不適于大生產(chǎn)。在本發(fā)明的技術(shù)方案中，雖然氫離子的交換能力是最弱的，但通過(guò)提高酸洗脫液中氫離子的濃度，從而抵消了其交換能力弱的缺點(diǎn)，同時(shí)在酸性條件下，可以使交換下來(lái)的生物堿迅速溶解到酸液中，并被沖出柱子，由此保證了生物堿的洗脫效果。并且，以酸液進(jìn)行洗脫，在洗脫的同時(shí)，也使陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱得以再生，從而可以循環(huán)使用，減少了堿液洗脫后再生樹(shù)脂柱的過(guò)程，降低了成本。本發(fā)明的技術(shù)完全突破了現(xiàn)有技術(shù)中以堿液洗脫的傳統(tǒng)觀念和工藝過(guò)程，取得了意想不到的效果，極大的提高了苦參堿類總生物堿的得率，使陽(yáng)離子交換樹(shù)脂在工業(yè)生產(chǎn)中用于精制分離苦參堿類總生物堿成為可能?；谏鲜龉に囘^(guò)程，發(fā)明人又進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，細(xì)化各步驟的參數(shù)，篩選出最優(yōu)方案，具體內(nèi)容如下1、上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍優(yōu)選為2至5，效果更加明顯。2、所用的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以是大孔型或凝膠型強(qiáng)酸型離子交換樹(shù)脂，在實(shí)際使用時(shí)可以根據(jù)情況處理成氫型、鈉型或銨型中的任一種。3、所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的柱徑與柱高之比并無(wú)一定之規(guī)，但考慮生產(chǎn)實(shí)際，柱徑柱高=1:51:IO時(shí)可以取得最好的效果。4、給樹(shù)脂柱上樣的藥液濃度為每ml相當(dāng)于生藥0.13g，具體情況可以根據(jù)藥液的前處理方式?jīng)Q定，如果是采用浸漬、滲漉等方式，得到的藥液就會(huì)比較?。欢绻腔亓魈崛?、煎煮等方式，尤其是經(jīng)過(guò)濃縮處理，藥液的濃度就會(huì)比較大，但只要是在這個(gè)范圍內(nèi)，都能實(shí)現(xiàn)上樣。同時(shí)，上樣速度也根據(jù)藥液的濃度進(jìn)行適時(shí)調(diào)整，基本滿足在0.55倍柱體積/小時(shí)即可。5、上樣方式一般選擇為從柱上端上樣，藥液靠自流力而流過(guò)整個(gè)柱子；發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果逆流上樣，即將藥液從柱子底端上樣，通過(guò)一定的壓力，使藥液注滿整個(gè)柱子，這種上樣方式可以發(fā)揮柱子的最大交換效率，也避免了從上端上樣時(shí)由于生物堿交換不完全而發(fā)生的提前穿透問(wèn)題。這一點(diǎn)也是發(fā)明人創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)。6、洗脫所用的酸液優(yōu)選為鹽酸溶液或硫酸溶液，其濃度均優(yōu)選為3%6%。7、洗脫時(shí)洗脫液的流速不宜過(guò)快或過(guò)慢，如果過(guò)快，則氫離子與生物堿有機(jī)離子的交換不充分，酸液浪費(fèi)較多；如果過(guò)慢，則解離下來(lái)的生物堿有機(jī)離子可能又重新吸附回樹(shù)脂柱上，影響洗脫效率。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，洗脫速度保持在26倍柱體積/小時(shí)為宜。進(jìn)一步優(yōu)選，洗脫速度保持在46倍柱體積/小時(shí)最好。8、發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，如果想更高地提高洗脫效率，可以在水洗脫除雜后，不立即進(jìn)行酸液洗脫，而是先在樹(shù)脂柱中充滿酸液并靜置2小時(shí)以上，一般不需超過(guò)12個(gè)小時(shí)，再進(jìn)行洗脫。經(jīng)過(guò)靜置后，大量的生物堿有機(jī)離子已被氫離子交換下來(lái)，或者處于半吸附半解離的狀態(tài)，此時(shí)進(jìn)行洗脫，生物堿富集效果明顯，洗脫效率明顯提高。9、為了進(jìn)一步提高洗脫效率，還可以在洗脫用的酸液中加入少量NHX1、NaCl或CaCl2，加入量不宜過(guò)少或過(guò)多，如果過(guò)少，則起不到作用；如果過(guò)多，則因鹽濃度過(guò)高易鹽析而影響生物堿有機(jī)離子的溶解度。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，洗脫液中以NH/、Na+或Ca2+濃度為0.1lmol/L時(shí)為佳，進(jìn)一步優(yōu)選，NH4+、Na+或Ca"的濃度為0.10.3mol/L時(shí)最好。10、工藝中所說(shuō)的脫鹽方法可以是透析法除鹽、膜濾過(guò)除鹽以及其他各種藥物生物領(lǐng)域常規(guī)的除鹽方法，目前這些方法都已經(jīng)比較成熟，并可以管道化生產(chǎn)。11、該方法中所說(shuō)的中藥提取液可以通過(guò)浸漬、滲漉、超聲、微波或煎煮中的任一種方式提取制得，并且提取的溶媒可以是水、酸水、乙醇溶液、酸性乙醇溶液中的任一種，但都屬于目前中藥領(lǐng)域的常規(guī)提取方法。區(qū)別點(diǎn)在于，如果是用浸漬或滲漉方法制得，可以直接上樣；如果是用其他方法提取得到的，還要經(jīng)過(guò)醇沉、過(guò)濾或離心除雜等步驟，以保證上樣的順利。需要說(shuō)明的是，上述優(yōu)選的技術(shù)參數(shù)，可以根據(jù)實(shí)際情況的需要，與基本工藝進(jìn)行任意組合，且均能取得良好的效果，解決技術(shù)問(wèn)題，達(dá)到本發(fā)明的目的。下面通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。一、實(shí)驗(yàn)方案取山豆根藥材5000g，加pH二3的酸水8倍量，浸泡一夜，滲漉，收集滲漉液至用硅鎢酸檢査無(wú)沉淀為止，合并滲漉液，離心，得上清液；將上清液均為五份'，分別按下面五種方法進(jìn)行生物堿的分離提純(O離子交換樹(shù)脂+酸溶液洗脫將上清液調(diào)節(jié)pH=3，上已處理好強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂001X7(氫型，徑高比為l:8)，上樣速度為3倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢査有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)的速度洗脫，洗脫液用硅鎢酸檢査有沉淀時(shí)開(kāi)始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢查無(wú)沉淀時(shí)至，合并洗脫液，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽(備用)，干燥，得山豆根總生物堿。(2)離子交換樹(shù)脂+鹽的酸溶液洗脫將上清液調(diào)節(jié)pH=3，上已處理好強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂001X7(氫型，徑高比為l:8)，上樣速度為3倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢査有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)顏色時(shí)停止，再用2%氯化鈣的0.5%的鹽酸溶液浸泡樹(shù)脂。再用2%氯化鈣的0.5%的鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)，洗脫液用硅鎢酸檢查有沉淀時(shí)開(kāi)始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢査無(wú)沉淀時(shí)至，合并洗脫液，用氫氧化鈣中和至p^7左右，除鹽(備用)，濃縮干燥，得山豆根總生物堿。(3)離子交換樹(shù)脂+回流提取將上清液調(diào)節(jié)p1^3，上己處理好強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂OOlX7(氫型，徑高比為1:8)，上樣速度為3倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢査有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)顏色時(shí)停止洗脫，將樹(shù)脂由柱中倒出，置瓷盤中晾干，加10%氨水適量，攪拌均勻，以手摸有潮濕感，但不沾手為宜。將此樹(shù)脂置索氏提取器中，以氯仿回流提取2小時(shí)，將氯仿液加無(wú)水Na2S04脫水后，回收氯仿至干糖漿狀，干燥得山豆根總生物堿。(4)大孔吸附樹(shù)脂法將上清液調(diào)節(jié)pH-lO，上己處理好的DFOl型大孔吸附樹(shù)脂，上樣速度為4倍柱體積/小時(shí)，至流出液用硅鎢酸檢査有沉淀停止上樣，用水洗脫至洗脫液基本無(wú)顏色時(shí)停止洗脫。以乙醇-水(70:30)為洗脫劑，以2.5倍柱體積/小時(shí)的速度進(jìn)行洗脫，洗脫液用硅鎢酸檢查有沉淀時(shí)開(kāi)始接收，接收洗脫液至用硅鎢酸檢查無(wú)沉淀時(shí)至，合并洗脫液，回收乙醇，干燥，得山豆根總生物堿。(5)有機(jī)溶劑萃取法將上清液調(diào)節(jié)pH-lO，先用IO倍量氯仿分三次萃取，再用10倍量乙酸乙酯萃取三次，合并所有萃取液，蒸干，得山豆根總生物堿。二、結(jié)果計(jì)算分別稱量五種工藝所得總生物堿的重量，并與藥材量相除，得總生物堿的收率；分別采用酸堿滴定的定量方法，對(duì)五種方法所得總生物堿進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算總生物堿的純度。三、結(jié)果對(duì)比，見(jiàn)下表五種工藝的效果評(píng)價(jià)表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由以上對(duì)比結(jié)果可見(jiàn)，本發(fā)明的技術(shù)方案可以解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，并顯著地提高產(chǎn)品的質(zhì)量、降低成本、提高安全性和生產(chǎn)可行性，本發(fā)明達(dá)到了發(fā)明目的。本發(fā)明的技術(shù)方案適合于苦參堿類總生物堿有效部位的精制純化?？鄥⑾刀箍浦参锟鄥?SopHoraflavescensAit.)的根,收載于中國(guó)藥典藥典2005版一部141頁(yè)，又名"苦骨"、"鳳凰參"、"川參"、"野槐"等，具有清熱燥濕、殺蟲、利尿等功效。山豆根系豆科植物越南槐SopHoratonkinensisGagn印.的干燥根及根莖，收載于中國(guó)藥典藥典2005版一部19頁(yè)，又名"山大豆根"、"苦豆根"等，具有清熱解毒、消腫利咽等功效。苦豆子系豆科槐屬植物苦豆子(S叩Horaal叩ecuroidesL.)全草或根或種子，又名苦甘草，具清熱利濕、止痛、殺蟲等功效。白刺花系豆科植物白刺花SopHoraviciifoliaHance的根，又名"馬蹄針"、"狼牙刺"，具有清熱涼血、利濕消腫、清熱解毒等功效。砂生槐系豆科砂生槐SopHoramoorcroftiana(Wall.)Benth.exBaker的果實(shí)，具有消炎解毒之功效。上述五種藥材均來(lái)源于豆科槐屬，所含化學(xué)成分也基本上相同，且多為苦參堿類生物堿。研究表明，它們各自的總生物堿是其主要有效部位，包括苦參中的苦參堿(Matrine)、氧化苦參堿(Oxymatrine)、羥基苦參堿(SopHoranol)、N-甲基金雀花堿(N-methylcytisine)、脫氫苦參堿(SopHocarpine)、安那吉堿(Anagyrine)等；山豆根中的苦參堿(Matrine)、氧化苦參堿(Oxyma-trine)、臭豆堿(Anagyrine)、甲基金雀花堿(Methylcytisne)、槐果堿(SopHocarpine);苦豆子中的苦參堿(Matrine)、氧化苦參堿(Oxymatrinel)、槐果堿(SopHocarpine)、氧化槐果堿(0xysopHocarpine)、槐胺堿(SopHoramine)、槐定堿(SopHoridine)、萊曼堿(Lehmannine)、苦豆堿(Alopefine);白刺花中苦參堿(Matrine)、氧化苦參堿(Oxyma-trine)等；砂生槐中的苦參堿(Matrine)、氧化苦參堿(Oxyma-trine)等生物堿成分。臨床苦參堿類總生物堿治劑已用于乙型肝炎等的治療，顯示了良好的療效。經(jīng)大量試驗(yàn)證實(shí)，陽(yáng)離子交換樹(shù)脂酸水洗脫苦參堿類總生物堿的工藝，具有成本低、有機(jī)溶劑消耗少、選擇性高、總生物堿純度高以及有利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)大生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，為中藥苦參堿類總生物堿制劑的生產(chǎn)研發(fā)創(chuàng)造了一個(gè)嶄新的平臺(tái)。具體實(shí)施方式實(shí)施例l:取苦參飲片1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，離心，調(diào)節(jié)p^3，離心，上清液以4倍柱體積/小時(shí)通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X7，氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無(wú)顏色，加3%的硫酸洗脫，洗脫速度為2倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得苦參總生物堿。實(shí)施例2:取山豆根飲片1000g，加p^5的酸水滲漉，合并滲漉液加水稀釋至10000ml，離心，調(diào)節(jié)pH4，離心，上清液以5倍柱體積/小時(shí)通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X12，鈉型，徑高比l:5)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用0.5%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)，洗脫2倍柱體積后浸泡5小時(shí)，再洗脫至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鉤酸無(wú)沉淀)，收集該部分洗脫液，用氫氧化鈣中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得山豆根總生物堿。實(shí)施例3:取砂生槐飲片5kg，加70%乙醇超聲提取兩次，每次加5倍量，超聲0.5小時(shí)，合并提取液，離心，回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)p^2，離心，上清液以2倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X10，鈉型，徑高比l:7)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用6%的鹽酸溶液(含lmol/L的CaCl2)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得砂生槐總生物堿。實(shí)施例4:取白刺花飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至3000ml，調(diào)節(jié)pH:4，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(011X6，氨型，徑高比l:9)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用15%硫酸溶液洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得白刺花總生物堿。實(shí)施例5:取白刺花飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)pF^5，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(D001X4，氫型，徑高比l:10)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用3%鹽酸溶液洗脫，洗脫速度為3倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得白刺花總生物堿。實(shí)施例6:取苦參飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(60。C)，加乙醇至濃度為7(m，靜置，上清液回收乙醇，加水至4000ml，調(diào)節(jié)p^4,離心，上清液以0.5倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X18，氫型，徑高比l:6),水洗至流出液無(wú)顏色，再用0.5%硫酸溶液(含O.lmol/L的氯化鈉)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得苦參總生物堿。實(shí)施例7:取砂生槐飲片10kg，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至10000ml，調(diào)節(jié)pH二3，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X5，氫型，徑高比l:8)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用15%鹽酸溶液(含0.3mol/L的氯化鈣)洗脫，洗脫速度為6倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得砂生槐總生物堿。實(shí)施例8:取白剌花飲片1000g，加水煎煮2次，每次10倍量，煎煮2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.1(6(TC)，加乙醇至濃度為70%，靜置，上清液回收乙醇，加水至1000ml，調(diào)節(jié)pH:3，離心，上清液以3倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X5，氫型，徑高比1:8)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用6%硫酸溶液洗脫，洗脫速度為4倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得白刺花總生物堿。實(shí)施例9:取山豆根飲片2000g，加pH=3的鹽酸溶液，微波提取2次，每次加5倍體積微波提取0.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液加水稀釋至1600ml，調(diào)節(jié)pH:6，離心，上清液以2倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(001X15，氫型，徑高比1:6)，水洗至流出液無(wú)顏色，再用5%鹽酸溶液(含0.2mol/L的氯化氨)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢査為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得山豆根總生物堿。實(shí)施例10:取苦豆子飲片5kg，加70%乙醇超聲提取兩次，每次加5倍量，超聲0.5小時(shí)，合并提取液，離心，回收乙醇，加水至5000ml，調(diào)節(jié)pH-7，離心，上清液以2倍柱體積/小時(shí)通過(guò)上大孔型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，水洗至流出液無(wú)顏色，再用4%的硫酸溶液(0.6mol/L的氯化氨)洗脫，洗脫速度為5倍柱體積/小時(shí)，收集洗脫液，至生物堿檢查為陰性(流出液滴加10%硅鎢酸無(wú)沉淀)，用氫氧化鈉中和至中性，除鹽，濾液濃縮干燥得苦豆子總生物堿。權(quán)利要求1、一種從中藥提取液中分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于該方法為取含有苦參堿類總生物堿的中藥提取液，調(diào)整pH值1至7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以水洗脫除雜質(zhì)，再用0.5％～15％酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得苦參堿類總生物堿。2、如權(quán)利要求1所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于上柱前調(diào)整藥液的pH值范圍為2至5。3、如權(quán)利要求1所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂可以是大孔型或凝膠型強(qiáng)酸型離子交換樹(shù)脂。4、如權(quán)利要求3所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于所用陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱的柱徑柱高=1:51:10。5、如權(quán)利要求1所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于該方法中上樣藥液的濃度為每ml相當(dāng)于生藥0.13g，上樣速度為0.55倍柱體積/小時(shí)。6、如權(quán)利要求5所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于上樣方式優(yōu)選為逆流上樣。7、如權(quán)利要求1所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于該方法中洗脫用的酸液是3%6%的鹽酸溶液或3%6%的硫酸溶液。8、如權(quán)利要求7所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于洗脫速度為26倍柱體積/小時(shí)。9、如權(quán)利要求8所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于洗脫速度為46倍柱體積/小時(shí)。10、如權(quán)利要求1所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于在水洗脫除雜后，可以先在樹(shù)脂柱中充滿洗脫用酸液并靜置212個(gè)小時(shí)，再進(jìn)行洗脫。11、如權(quán)利要求7所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于洗脫用的酸液中還可以加入0.1lmol/L的N眼、NaCl或CaCl2。12、如權(quán)利要求ll所述的分離苦參堿類總生物堿的方法，其特征在于酸液中鹽的濃度優(yōu)選為0.10.3mol/L。13、權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的方法制備的苦參堿類總生物堿。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種分離中藥總生物堿的方法，尤其是一種從中藥提取液中分離苦參堿類總生物堿的方法，屬中藥領(lǐng)域。該方法包括如下技術(shù)方案取中藥提取液，調(diào)整pH值1至7，濾過(guò)，取濾液加于陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱上，先以水洗脫除雜，再用0.5％～15％酸液洗脫，收集洗脫液，加堿中和，經(jīng)脫鹽處理，即得苦參堿類總生物堿。該方法克服了現(xiàn)有技術(shù)提取率低、有機(jī)溶劑用量大、工藝復(fù)雜、無(wú)法大生產(chǎn)等不足，可以高效率地從中藥提取液中分離高純度的苦參堿類總生物堿。文檔編號(hào)A61P1/00GK101289472SQ20071001433公開(kāi)日2008年10月22日申請(qǐng)日期2007年4月18日優(yōu)先權(quán)日2007年4月18日發(fā)明者龍代,馮新剛,張加余,趙德峰,鵬高申請(qǐng)人:龍代