專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥成方制劑領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是涉及一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
以枸杞子、女貞子、何首烏等制成的治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑杞明系列藥品具有補(bǔ)肝益腎，活血明目的功效。用于青少年肝腎陰虛所致的眼部酸困，眼眶疼痛等癥。然而中藥成份比較復(fù)雜，含有許多未知成份。目前既能有效控制治療眼疾近視及視疲勞的中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，又能操作方便的檢測(cè)方法，還沒(méi)有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能有效控制治療眼疾近視及視疲勞的中藥制劑質(zhì)量，準(zhǔn)確度高的質(zhì)量檢測(cè)方法。
本發(fā)明的一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，將板藍(lán)根、僵蠶粉碎成細(xì)粉，備用；將牡丹皮、何首烏、關(guān)黃柏、赤芍粉碎成細(xì)粉，其余枸杞子、菟絲子、女貞子、茺蔚子、山茱萸、淫羊藿、谷精草、木賊、決明子、川芎、丹參、地黃、紅花、雞血藤十四味，加水煎煮三次，第一次加水8倍量，浸泡30分鐘，煎煮1小時(shí)，第二、三次各加水6倍量，煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.30的稠膏，加入上述藥材細(xì)粉，混合，60℃時(shí)干燥，粉碎成細(xì)粉，制成顆粒，干燥，冰片研細(xì)，加入上述顆粒中，混勻，裝入膠囊，即得，其檢測(cè)方法包括以下步驟(1)取本品內(nèi)容物5g，研細(xì)，加乙醚50ml，低溫回流提取30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液濃縮至10ml，作為供試品溶液；另取冰片對(duì)照品，加乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液2μl、對(duì)照品溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以9∶1∶1的60-90℃石油醚-甲苯-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取鑒別(1)項(xiàng)下的供試品溶液，自然揮干乙醚，殘留物加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以3∶1環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加正己烷30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取決明子對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(4)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加甲醇40ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次提取，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液；另取何首烏對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(5)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，溫水浴上回流提取1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，棄去乙酸乙酯液，殘?jiān)鼡]去溶劑，加乙醇30ml回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三5∶1氯甲烷-甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(6)取本品內(nèi)容物5g，研細(xì)，加水15ml使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，加乙酸乙酯30ml，振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以25∶10∶4三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(7)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，置索氐提取器中，加70％乙醇回流提取至無(wú)色，提取液水浴蒸去乙醇，加熱水15ml，混勻，趁熱濾過(guò)，濾液移至分液漏斗中，加三氯甲烷振搖提取3次，第一次15ml，第二次10ml，第三次10ml，三氯甲烷液棄去，水液用水飽和的正丁醇振搖提取5次，分別為15、15、10、10、10ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌5次，每次15ml，繼用正丁醇飽和的水25ml洗滌；分取正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1.3∶1∶1乙酸丁酯-甲酸-水10℃以下放置的上層液為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％三氯化鋁乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(8)鹽酸小檗堿含量測(cè)定
對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對(duì)照品10mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加100∶1的甲醇-鹽酸溶液至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加100∶1的甲醇-鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得每1ml中含鹽酸小檗堿0.01mg對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約1.0g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入100∶1的甲醇-鹽酸溶液50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；照高效液相色譜法測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以50∶25∶25的乙腈-0.1mol/L的磷酸二氫鈉-0.025mol/L的十二烷基磺酸鈉為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。
本發(fā)明通過(guò)試驗(yàn)得出，每粒含關(guān)黃柏以鹽酸小檗堿(C20H18ClNO4)計(jì)，不得少于0.20mg。
本發(fā)明的治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑包括丸劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑常規(guī)劑型。
本發(fā)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的意義在于本發(fā)明提供了對(duì)丹皮酚、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚、芍藥苷、丹參素鈉、淫羊藿苷的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開(kāi)劑，能對(duì)該制劑進(jìn)行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明提供了鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法，因?yàn)辂}酸小檗堿與其它組份分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色譜法測(cè)定本品中鹽酸小檗堿的含量，制定出了最佳的供試品制備方法和流動(dòng)相配制方法，大大提高了鹽酸小檗堿的含量檢測(cè)準(zhǔn)確度。本方法的建立，有利于市場(chǎng)上對(duì)治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的真?zhèn)蝺?yōu)劣進(jìn)行鑒別。
具體實(shí)施例方式
實(shí)驗(yàn)例將板藍(lán)根、僵蠶粉碎成細(xì)粉，備用；將牡丹皮、何首烏、關(guān)黃柏、赤芍粉碎成細(xì)粉，其余枸杞子、菟絲子、女貞子、茺蔚子、山茱萸、淫羊藿、谷精草、木賊、決明子、川芎、丹參、地黃、紅花、雞血藤十四味，加水煎煮三次，第一次加水8倍量，浸泡30分鐘，煎煮1小時(shí)，第二、三次各加水6倍量，煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.30的稠膏，加入上述藥材細(xì)粉，混合，60℃時(shí)干燥，粉碎成細(xì)粉，制成顆粒，干燥，冰片研細(xì)，加入上述顆粒中，混勻，裝入膠囊，即得，其檢測(cè)方法包括以下步驟(1)取本品內(nèi)容物5g，研細(xì)，加乙醚50ml，低溫回流提取30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液濃縮至10ml，作為供試品溶液；另取冰片對(duì)照品，加乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液2μl、對(duì)照品溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以9∶1∶1的60-90℃石油醚-甲苯-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取鑒別(1)項(xiàng)下的供試品溶液，自然揮干乙醚，殘留物加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以3∶1環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加正己烷30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取決明子對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(4)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加甲醇40ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次提取，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液；另取何首烏對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(5)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，溫水浴上回流提取1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，棄去乙酸乙酯液，殘?jiān)鼡]去溶劑，加乙醇30ml回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三5∶1氯甲烷-甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(6)取本品內(nèi)容物5g，研細(xì)，加水15ml使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，加乙酸乙酯30ml，振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以25∶10∶4三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(7)取本品內(nèi)容物10g，研細(xì)，置索氐提取器中，加70％乙醇回流提取至無(wú)色，提取液水浴蒸去乙醇，加熱水15ml，混勻，趁熱濾過(guò)，濾液移至分液漏斗中，加三氯甲烷振搖提取3次，第一次15ml，第二次10ml，第三次10ml，三氯甲烷液棄去，水液用水飽和的正丁醇振搖提取5次，分別為15、15、10、10、10ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌5次，每次15ml，繼用正丁醇飽和的水25ml洗滌；分取正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1.3∶1∶1乙酸丁酯-甲酸-水10℃以下放置的上層液為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％三氯化鋁乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(8)鹽酸小檗堿含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對(duì)照品10mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加100∶1的甲醇-鹽酸溶液至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加100∶1的甲醇-鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得每1ml中含鹽酸小檗堿0.01mg對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約1.0g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入100∶1的甲醇-鹽酸溶液50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；照高效液相色譜法測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以50∶25∶25的乙腈-0.1mol/L的磷酸二氫鈉-0.025mol/L的十二烷基磺酸鈉為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。
重復(fù)上述步驟一次，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿含量的平均值為0.28mg/粒。
用實(shí)施例所述質(zhì)量檢測(cè)方法反復(fù)試驗(yàn)9次，得出鹽酸小檗堿含量(mg/粒)平均值，結(jié)果見(jiàn)下表

實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、儀器與試藥儀器Agilent1100型高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司。G1311A型四元梯度泵，G1314A型可編程紫外檢測(cè)器，G2170AA化學(xué)工作站。
試藥乙腈為色譜純，水為超純水，其它化學(xué)試劑均為分析純。
對(duì)照品鹽酸小檗堿，批號(hào)0714-9903供含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。
供試品杞明膠囊，規(guī)格每粒裝0.4g；由本公司生產(chǎn)。
2、色譜條件色譜柱Kromasil 5u C18100A，250×4.6mm；
流動(dòng)相乙腈-0.1mol/L的磷酸二氫鈉-0.025mol/L的十二烷基磺酸鈉(50∶25∶25)。
檢測(cè)波長(zhǎng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(C＝0.036mg/ml)，置紫外分光光度計(jì)中，從200～300nm進(jìn)行連續(xù)波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明，鹽酸小檗堿對(duì)照品在265nm處有獨(dú)立的吸收峰，故選用265nm作為本品的檢測(cè)波長(zhǎng)。
在上述分析條件下，鹽酸小檗堿峰完全達(dá)到基線(xiàn)分離，其峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.7以上，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算大于3000。
3、提取條件選擇與提取完全性考察提取溶劑的選擇我們參考文獻(xiàn)資料，選用甲醇和甲醇-鹽酸(100∶1)超聲處理30分鐘，進(jìn)行提取條件的比較。試驗(yàn)結(jié)果表明，采用甲醇-鹽酸(100∶1)提取方法提取的雜質(zhì)干擾少，提取效率高。甲醇提取的效率低，雜質(zhì)干擾較多，且分離度不理想，故選擇正文方法作為提取條件。
提取完全性考察 根據(jù)提取條件分析，正文樣品溶液的制備過(guò)程，主要受超聲處理的影響，因此，我們對(duì)其進(jìn)行考察與比較。
超聲處理時(shí)間對(duì)提取完全性的影響 取同一批樣品(批號(hào)20030303)，約1.5g，精密稱(chēng)定，分別按20、30、40分鐘不同時(shí)間進(jìn)行超聲處理，依法測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表1。
表1超聲處理試驗(yàn)及結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，超聲處理30分鐘后的樣品含量基本趨于不變，故選擇30分鐘為超聲處理時(shí)間。
4、方法學(xué)考察線(xiàn)性關(guān)系及范圍的考察 精密吸取濃度為0.036mg/ml的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液2、4、8、12、16μl，分別注入液相色譜儀，依法測(cè)定，結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表2。
表2線(xiàn)性關(guān)系考察試驗(yàn)及結(jié)果

以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并進(jìn)行直線(xiàn)回歸，回歸方程為Y＝3421.7X-28.54，r＝9991。試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法進(jìn)樣量在0.072～0.576mg范圍內(nèi)，呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。
精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液(C＝0.036mg/ml)10μl，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，試驗(yàn)結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表3。
表3精密度試驗(yàn)及結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸小檗堿對(duì)照品重復(fù)進(jìn)樣5次測(cè)得峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜2.0％，故認(rèn)為本方法具有良好的精密度。
陰性空白對(duì)照試驗(yàn) 取除去關(guān)黃柏的模擬處方，制成不含關(guān)黃柏的空白樣品，按供試品溶液制法制成空白對(duì)照溶液。另取供試品溶液(批號(hào)20030303)及對(duì)照品溶液(C＝0.014mg/ml)，按正文方法注入液相色譜儀測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間位置上，有一對(duì)應(yīng)的單一色譜峰，而空白對(duì)照液色譜中，在該保留時(shí)間相應(yīng)位置處無(wú)相對(duì)應(yīng)的峰出現(xiàn)。說(shuō)明陰性空白對(duì)其測(cè)定無(wú)干擾，其方法的專(zhuān)屬性較好。
穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批(批號(hào)20030303)供試品溶液及對(duì)照品溶液(C＝0.014mg/ml)，按0、0.5、1、2、4小時(shí)時(shí)間間隔，分別注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果請(qǐng)分別見(jiàn)表4。
表4穩(wěn)定性考察試驗(yàn)與結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品及對(duì)照品的鹽酸小檗堿經(jīng)本方法測(cè)定，在4小時(shí)內(nèi)較為穩(wěn)定，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為RSD＝2.13％和RSD＝2.39％。
重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批(批號(hào)20030303)樣品5份，按正文方法重復(fù)進(jìn)行處理測(cè)定，結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表5。
表5樣品重復(fù)性試驗(yàn)及結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法5次重復(fù)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＝2.23％，說(shuō)明其重現(xiàn)性較好。
回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn)法，精密稱(chēng)取同一批(批號(hào)20030303)已知含量(0.183mg/粒，折合0.4575mg/g)的樣品各約1.0g，精密稱(chēng)定，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品各約0.28～0.36mg，依法測(cè)定，試驗(yàn)結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表6。
表6加樣回收試驗(yàn)及結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法具有較高的回收率，其平均回收率為99.03％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為RSD＝1.25％。
5、樣品中鹽酸小檗堿含量測(cè)定取2005年版實(shí)行后生產(chǎn)的8批樣品，按正文方法進(jìn)行鹽酸小檗堿含量測(cè)定，結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表7。
表7八批樣品含量測(cè)定結(jié)果(n＝2)

6、關(guān)黃柏藥材中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定取不同來(lái)源的關(guān)黃柏藥材，按正文方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果請(qǐng)見(jiàn)表8表8關(guān)黃柏藥材含量測(cè)定結(jié)果(n＝2)

7、含量限度的確定八批樣品中，鹽酸小檗堿的實(shí)測(cè)結(jié)果，最高含量為0.483mg/粒，最低為0.201mg/粒，關(guān)黃柏藥材中國(guó)藥典2005年版一部規(guī)定限度為不得少于0.60％，實(shí)測(cè)三批不同來(lái)源藥材的最高含量為1.08％，最低含量為0.63％，考慮到處方用量，工藝損耗與裝量差異等因素影響，故本品每粒中含關(guān)黃柏以鹽酸小檗堿(C20H18ClNO4)計(jì)，不得少于0.20mg。
權(quán)利要求
1.一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，將板藍(lán)根、僵蠶粉碎成細(xì)粉，備用；將牡丹皮、何首烏、關(guān)黃柏、赤芍粉碎成細(xì)粉，其余枸杞子、菟絲子、女貞子、茺蔚子、山茱萸、淫羊藿、谷精草、木賊、決明子、川芎、丹參、地黃、紅花、雞血藤十四味，加水煎煮三次，第一次加水8倍量，浸泡30分鐘，煎煮1小時(shí)，第二、三次各加水6倍量，煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至60℃時(shí)相對(duì)密度為1.30的稠膏，加入上述藥材細(xì)粉，混合，60℃時(shí)干燥，粉碎成細(xì)粉，制成顆粒，干燥，冰片研細(xì)，加入上述顆粒中，混勻，即得，其特征在于包括以下步驟(1)取本品5g，研細(xì)，加乙醚50ml，低溫回流提取30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液濃縮至10ml，作為供試品溶液；另取冰片對(duì)照品，加乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液2μl、對(duì)照品溶液4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以9∶1∶1的60-90℃石油醚-甲苯-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(2)取鑒別(1)項(xiàng)下的供試品溶液，自然揮干乙醚，殘留物加丙酮1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹皮酚對(duì)照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以3∶1環(huán)己烷-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以鹽酸酸性5％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(3)取本品10g，研細(xì)，加正己烷30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取決明子對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(4)取本品10g，研細(xì)，加甲醇40ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，再加鹽酸2ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分兩次提取，每次20ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液；另取何首烏對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展開(kāi)，取出，晾干；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(5)取本品10g，研細(xì)，加乙酸乙酯30ml，溫水浴上回流提取1小時(shí)，放冷，濾過(guò)，棄去乙酸乙酯液，殘?jiān)鼡]去溶劑，加乙醇30ml回流提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至5ml，作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三5∶1氯甲烷-甲醇為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(6)取本品5g，研細(xì)，加水15ml使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2，加乙酸乙酯30ml，振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參素鈉對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以25∶10∶4三氯甲烷-丙酮-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；(7)取本品10g，研細(xì)，置索氐提取器中，加70％乙醇回流提取至無(wú)色，提取液水浴蒸去乙醇，加熱水15ml，混勻，趁熱濾過(guò)，濾液移至分液漏斗中，加三氯甲烷振搖提取3次，第一次15ml，第二次10ml，第三次10ml，三氯甲烷液棄去，水液用水飽和的正丁醇振搖提取5次，分別為15、15、10、10、10ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌5次，每次15ml，繼用正丁醇飽和的水25ml洗滌；分取正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以1.3∶1∶1乙酸丁酯-甲酸-水10℃以下放置的上層液為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15分鐘，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5％三氯化鋁乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在365nm紫外光燈下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；(8)鹽酸小檗堿含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對(duì)照品10mg，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加100∶1的甲醇-鹽酸溶液至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加100∶1的甲醇-鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得每1ml中含鹽酸小檗堿0.01mg對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約1.0g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入100∶1的甲醇-鹽酸溶液50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；照高效液相色譜法測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以50∶25∶25的乙腈-0.1mol/L的磷酸二氫鈉-0.025mol/L的十二烷基磺酸鈉為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的中藥制劑每0.4g含關(guān)黃柏以鹽酸小檗堿計(jì)，不得少于0.20mg。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述中藥制劑的劑型包括丸劑、顆粒劑、膠囊劑、片劑常規(guī)劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥成方制劑領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是涉及一種治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明提供了對(duì)丹皮酚、大黃酚、大黃素、大黃素甲醚、芍藥苷、丹參素鈉、淫羊藿苷的定性鑒別，制定出了最佳的供試品制備方法，找到了合適的展開(kāi)劑，能對(duì)該制劑進(jìn)行有效的定性鑒別。此外本發(fā)明提供了鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法，因?yàn)辂}酸小檗堿與其它組份分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色譜法測(cè)定本品中鹽酸小檗堿的含量，制定出了最佳的供試品制備方法和流動(dòng)相配制方法，大大提高了鹽酸小檗堿的含量檢測(cè)準(zhǔn)確度。本方法的建立，有利于市場(chǎng)上對(duì)治療眼疾近視及視疲勞中藥制劑的真?zhèn)蝺?yōu)劣進(jìn)行鑒別。
文檔編號(hào)A61K9/20GK101028388SQ200710017619
公開(kāi)日2007年9月5日 申請(qǐng)日期2007年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月4日
發(fā)明者黃小華, 付彬, 張 浩, 雒西萍 申請(qǐng)人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司