專利名稱：：一種用于預(yù)防及治療急性肝損傷的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種預(yù)防及治療由藥物、酒精及毒物等對(duì)肝臟造成的急性損害的水飛薊賓，丁二酸鈉鹽的制備方法，更具體地說，涉及一種水飛薊賓'丁二酸鈉凍干粉針的制備方法。
背景技術(shù)：
：肝臟是藥物代謝的主要器官，大多數(shù)藥物在肝內(nèi)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化排除，在此過程中，一定量的藥物、酒精及毒物等本身及其代謝產(chǎn)物可通過直接作用或免疫機(jī)制造成肝臟的急性損害和病變。近年來，隨著藥物品種的不斷增加，酒精消費(fèi)群體日益龐大，農(nóng)作物頻繁使用合成農(nóng)藥，人們誤食有毒蘑菇等因素導(dǎo)致急性肝損害的發(fā)生率亦相應(yīng)增加。其中藥物性肝病占所有住院黃疸病例的2%5%，占急性肝炎病例的10%，50歲以上患者中達(dá)40%1'2。暴發(fā)性肝炎中20%50%與藥物有關(guān)[2，3]，中草藥所致肝損害占藥物性肝病的30%[4。據(jù)全球資料證實(shí)，60億人口中酒精肝患會(huì)約2.3億人，在美國，因酒精攝入過量而導(dǎo)致的肝臟疾患已成為男性的第四大主要死亡原因[5]。我國專家預(yù)測(cè)，目前酒精肝患者仍然具有很大上升的趨勢(shì)。另外農(nóng)藥殘留量高的蔬菜水果、因誤食毒性較高的蘑菇等造成急性肝損傷的發(fā)生率fe低，但中毒后導(dǎo)致肝臟快速損傷，嚴(yán)重者數(shù)小時(shí)內(nèi)導(dǎo)致死亡，較短時(shí)間內(nèi)搶救病人顯得尤為重要。綜上所述，一種安全、有錄的預(yù)防及治療肝損傷的藥物的研究與開發(fā)迫在眉睫。水飛薊賓(SIL，SilybummarianumL.Gaertn.)，是菊科水飛薊屬植物，原產(chǎn)南歐、北非，以民間草藥用于治療肝膽疾病，具有抗肝膽中毒，保護(hù)肝細(xì)胞膜，改善肝功能的生理活性。我國早在50年代初，由英國引入作觀賞，70年代初開始研究其醫(yī)藥功^[，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)水飛薊的有效成分進(jìn)行了大量的研究，并開發(fā)出產(chǎn)品益肝靈片及復(fù)方益肝靈片均載入部頒標(biāo)準(zhǔn)。但由于S1L的水溶性和脂溶性均較差，生物利用度低，吸收量不穩(wěn)定，大大降低了臨床療效，常規(guī)劑型如益肝靈片(即水飛薊素片)臨床應(yīng)用受到很大限制。為提高SIL的生物利用度，增加其療效，將其結(jié)構(gòu)進(jìn)行衍生化得ft其水溶性化合物水飛薊賓'丁二酸鈉。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證明，本品具有預(yù)防及治療由于藥物、毒物及酒精等造成的肝損傷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的問題是提供一種水飛薊賓*丁二酸鈉凍干粉針的制備方法，將水飛薊賓'丁二酸鈉以注射劑的形式直接進(jìn)入血液以提高生物利用度，使水飛薊賓'丁二酸鈉以固體的形式存在，達(dá)到易存儲(chǔ)、更穩(wěn)定，起效果快的目的。本發(fā)明提供的技術(shù)方案是，水飛薊賓.丁二酸鈉，其結(jié)構(gòu)式如下OMeOHO本發(fā)明提供的制備水飛薊賓*丁二酸鈉凍干粉針的方法包括以下步驟:(1)將水t薊賓'丁二酸鈉溶解于注射用水中，制備成含水飛薊賓'丁二酸鈉的溶液；(2)于上述溶液中加入附形劑使溶解；(3)將上述溶液中用活性炭加熱脫色后，用稀鹽酸或稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為79，過濾；(4)濾液無菌分裝，冷凍干燥，即得。上述步驟中所述的(2)中的附形劑為甘露醇或乳糖。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，產(chǎn)品水溶性好，可不用加其他助溶劑，直接用注射用水溶解即可使用。下面結(jié)合實(shí)施例及主要藥效學(xué)試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例一取水飛薊賓'丁二酸鈉原料50g，加入注射用水5000ml中得溶液，再加入50g甘露醇，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙?，?%(w/v)的活性炭4(TC加熱脫色并用1M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為9.0，冷至室溫，濾過，無菌分裝于西林瓶中，冷卻干燥后壓塞，即得本發(fā)明水飛薊賓*丁二酸鈉凍干粉針。實(shí)施例二取水飛薊賓'丁二酸鈉原料30g，加入注射用水1000ml中得溶液，再加入60g乳糖，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙?，?W(w/v)的活性炭5(TC加熱脫色并用0.5M稀鹽酸溶液將上述溶液調(diào)節(jié)pH為7.0,冷至室溫，濾過，無菌分裝于西林瓶中，冷凍干燥后壓塞，壓蓋，即得本發(fā)明水飛薊賓*丁二酸鈉凍干粉針。藥效學(xué)試驗(yàn)-一、注射用'水飛薊賓，丁二酸鈉凍干粉對(duì)小鼠四氯化碳急性肝損傷的影響1受試藥物實(shí)施例一的注射用水飛薊賓'丁二酸鈉凍干粉針，氯化鈉注射液。2受試動(dòng)物昆明種SPF級(jí)小鼠，雌性，體重18g22g，由廣東醫(yī)學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)中心提供。3試驗(yàn)方法3.1動(dòng)物分組將50只小鼠隨機(jī)分層分組，每組10只，共5組。分別為正常對(duì)照組、模型組、注射用水飛薊賓*丁二酸鈉30mg&g"、15mg*kg—!、7.5mg-kg'1組。3.2試驗(yàn)步驟將正常對(duì)照組、模型組給予小鼠0.9%生理鹽水尾靜脈注射0.5m1/只，注射用水飛薊賓*丁二酸鈉三個(gè)劑量依照劑量尾靜脈注射，每天1次，連續(xù)5天，于第6天，除正常對(duì)照組外，其余各組用0.P/。四氯化碳10mhkg—i腹腔注射1次，2^小時(shí)后各組小鼠摘除眼球取血，分離血清，測(cè)定ALT和AST活性。結(jié)果用t檢驗(yàn)，與模型組進(jìn)行比較。表l.不同劑量注射用水飛薊賓，丁二酸鈉對(duì)小鼠四氯化碳急性肝損傷的影響(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與模型教$較，進(jìn)行t檢驗(yàn)，'p<0.01從以上結(jié)果可見模型組與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(pO.01);注射用水飛薊賓'丁二酸鈉30、15、7.5mg-kg"高、中、低劑量均能明顯降低四氯化碳所致小鼠血清中的ALT和AST，且降低AST作用最為明顯，注射用水飛薊賓-丁二酸鈉高、中、低劑量組的降酶作用與劑量存在量效關(guān)系呈劑量正相關(guān)關(guān)系。注射用水飛薊賓'丁二酸鈉具有保護(hù)急性肝損傷的作用。二、注射用水飛薊賓'丁二酸鈉過敏性、溶血性和血管刺激性試驗(yàn)1受試藥物實(shí)施例二注射用水飛薊賓，丁二酸鈉凍干粉針，注射用氯化鈉溶液。2受試動(dòng)物家兔2.1-2.5kg，雌雄兼用；豚鼠200300g，雌雄兼用。動(dòng)物均由廣東省醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供。3試驗(yàn)方法3.1全身過敏試驗(yàn)取健康豚鼠18只，隨機(jī)分為3組，每組6只①氯化鈉注射液對(duì)照組，②卵白蛋白組(0.5%)，③注射用水飛薊賓*丁二酸鈉30mg/kg。各組分別按無菌操作隔H腹腔注射氯化鈉注射液、0.5%卵白蛋白和注射用水飛薊賓《丁二酸鈉30mg/kg，0.5mi/只，共3次進(jìn)行動(dòng)物致敏。致敏后將每組動(dòng)物隨機(jī)分為2批，每批各3只，一批于首次致敏后第14天靜脈注射對(duì)應(yīng)藥液1ml/只進(jìn)行攻擊；另一批于首次致敏后第21天同法攻擊。觀察動(dòng)物攻擊后30分鐘內(nèi)有無咳嗽、抓鼻、豎毛、呼吸困難、痙寧、休克及死亡等情況。結(jié)果按表2進(jìn)行過敏反應(yīng)評(píng)分，計(jì)算出每批動(dòng)物反應(yīng)平均分?jǐn)?shù)。_表2全身過敏性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)__反短芬叛^^0無明顯反應(yīng)1只有輕微抓鼻、顫抖或豎毛2有幾次咳嗽、有抓鼻、顫抖或豎毛3多次或連續(xù)咳嗽、伴有呼吸困難或痙攣、抽搐等4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克、死亡試驗(yàn)結(jié)果見表3，鹽水組兩次攻擊試驗(yàn)結(jié)果均呈陰性。根據(jù)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)為注射用水飛i]賓J一二酸鈉無明顯致敏作用。表3注射用水飛薊賓，丁二酸鈉過敏試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>3.2溶血試驗(yàn)家兔頸動(dòng)脈插管取血約20ml,將所得紅細(xì)胞用生理鹽水禱釋成2%的混懸液，備用。將注射用水飛薊賓.丁二酸鈉用生理鹽水稀釋50倍，備用。取試管7支分別進(jìn)行注射用水飛薊賓.丁二酸鈉2%的溶血試驗(yàn)。按表4加樣，第6管不加受試品，作為空白對(duì)照，第7管不加受試品，用蒸餾水代替生理鹽水，作為溶血的陽性對(duì)照。將各管輕輕搖勻，在37t:水浴中保溫4小時(shí)，觀察各管的溶血和凝集現(xiàn)象。分別于保溫0.5、1、2、3和4小時(shí)肉眼觀察各管溶血情況。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參見表5。表4.2%注射用水飛薊賓.丁二睡鈉溶血試驗(yàn)加樣表__管號(hào)J^^^J"2%紅細(xì)胞懸液(ml)2.52.52.52.52.52%注射用水飛薊賓'丁二0.10.20.30.40.5酸鈉(ml)生理鹽水(ml)2.42.32.22.1,,2.0蒸餾水(ml)_----'-_表5.紅細(xì)胞溶血、凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)全溶血溶液澄明紅色，管底無細(xì)胞殘留；部分溶血溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留；無溶血紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色澄明；凝集_紅細(xì)胞凝聚成塊，振搖后不能分散;_2%注射用水飛薊賓*丁二酸鈉試驗(yàn)結(jié)果顯示，本品對(duì)紅細(xì)胞無明顯的影響。3.3血管刺激試驗(yàn)取健康、耳緣無損傷家兔6只，隨機(jī)分為兩組5%注射用水飛薊賓'丁二酸鈉組和0.9%生理鹽水對(duì)照組。給藥容積15ml/kg,給藥速度為lml/min，每天1次，連續(xù)7天。給藥期間至未次給藥后24小時(shí)肉眼觀察給藥局部的靜脈血管及周圍組織的紅腫情況。然后分別于注射部位近心端24cm處剪取耳緣，用10%甲醛固定，常規(guī)組織切片，觀察病理變化。肉眼觀察可見葡萄糖對(duì)照組和葛根素組662.572.52.;2.5只家兔的注射部位血管均有不同程度的淤血，距注射部位2cm和距注射部位4cm耳廓未見明顯充血、水腫。結(jié)合病理切片結(jié)果顯示5%注射用水飛薊賓《丁二酸鈉對(duì)血管無明顯剌激作用。參考文獻(xiàn)D]潘國宗主譯.胃腸急癥學(xué).人民衛(wèi)生出版社.1999，381403.[2]梁擴(kuò)寰，李紹白.肝臟病學(xué).人民衛(wèi)生出版社.1995，750769.[3]魏鏡龍,內(nèi)科講座.人民衛(wèi)生出版社.i985,4754.[4]姚光弼.藥物性肝病.中華消化雜志.1999，19(5):339342.[5]Sm他W,CecilB.Textbookofedicine[M].l她ed.Pennsylvania:SzundersCompany,1992—230259,權(quán)利要求1.一種成分為水飛薊賓·丁二酸鈉凍干粉針的制備方法，包括以下步驟(1)將水飛薊賓·丁二酸鈉溶解于注射用水中，充分?jǐn)嚢璩扇芤骸?2)于上述溶液加入甘露醇或乳糖使溶解。(3)將上述溶液用活性炭加熱脫色并用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH7～9，過濾。(4)濾液無菌分裝，冷凍干燥，即得。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水飛薊賓'丁二酸鈉凍干粉針，其特征在于所述的水飛薊賓-丁二酸鈉為水飛薊賓經(jīng)丁二酸反應(yīng)制備得到的化學(xué)純度為90%以上的化學(xué)物質(zhì)。3.—種成分為水飛薊賓*丁二酸鈉凍干粉針應(yīng)用于預(yù)防及治療由藥物、酒精及毒物等對(duì)肝臟造成的急性損害。全文摘要本發(fā)明公開了一種用于預(yù)防及治療急性肝損傷的水飛薊賓·丁二酸鈉凍干粉針的制備方法，包括以下步驟(1)將水飛薊賓·丁二酸鈉原料溶解于注射用水中，制備成溶液；(2)于上述溶液中加入甘露醇或乳糖使溶解；(3)將上述溶液用活性炭加熱脫色并調(diào)節(jié)pH7～9，過濾；(4)濾液無菌分裝，冷凍干燥，即得。本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單，用注射用水溶解即可使用?？捎糜陬A(yù)防及治療由藥物、酒精及毒物等對(duì)肝臟造成的急性損害。文檔編號(hào)A61K9/19GK101244041SQ200710026898公開日2008年8月20日申請(qǐng)日期2007年2月13日優(yōu)先權(quán)日2007年2月13日發(fā)明者傅衛(wèi)國,偉王,王佩賢,黃偉靜申請(qǐng)人:廣州安健實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司