專利名稱：防制鴿禽i型副粘病毒病新型滅活疫苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及防治鴿禽I型副粘病毒病的疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)：
鴿禽I型副粘病毒(PA/PMV-I)病，俗稱鴿瘟，又稱鴿新城疫，是由禽I型副粘病毒(A/PMV-I)引起鴿的一種高度接觸性、敗血性的急性傳染病。自從20世紀(jì)80年代初，在我國(guó)部分地區(qū)發(fā)現(xiàn)以來(lái)，現(xiàn)已普遍發(fā)生于我國(guó)各養(yǎng)鴿地區(qū)，且一直是鴿病中發(fā)生頻率最高、危害性最大的一種疾病，在不同品種、齡期的鴿子中都能感染發(fā)病，且傳播迅速，發(fā)病率高，死亡率一般為20％～80％之間，耐過(guò)者常因有神經(jīng)癥狀而被迫淘汰，造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。此外，本病病原與雞新城疫的病原(NDV)同屬禽副粘病毒，現(xiàn)場(chǎng)發(fā)病情況及流行病學(xué)的研究證明本病病原對(duì)雞的毒力較弱，NDV也能感染敏感鴿，并使之發(fā)病和死亡。因此本病病原對(duì)雞等家禽也是一種嚴(yán)重的潛在威脅。
為防制本病，目前許多鴿場(chǎng)均應(yīng)用雞新城疫弱毒(NDV)疫苗或PA/PMV-I同源病毒制備的滅活疫苗免疫接種。應(yīng)用雞NDV疫苗免疫鴿群，一般不能獲得滿意的效果，只能獲得低水平保護(hù)，保護(hù)率僅有20％左右，且免疫期短；而目前以PA/PMV-1同源病毒制備的滅活疫苗免疫，雖能為免疫鴿提供較為持久的免疫保護(hù)，但亦有免疫鴿群仍發(fā)生PA/PMV-I病。因此，安全、有效的PA/PMV-I疫苗的研究和開(kāi)發(fā)顯得非常迫切和重要。
為提高疫苗的免疫保護(hù)效果，在疫苗的制備過(guò)程中常采用添加免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)劑及免疫佐劑。

發(fā)明內(nèi)容
多年來(lái)，本申請(qǐng)人在防治禽病的臨診和開(kāi)展科研工作的基礎(chǔ)上，對(duì)PA/PMV-I進(jìn)行了流行病學(xué)跟蹤調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)防治實(shí)踐，在此過(guò)程中從全國(guó)多個(gè)省市的不同地區(qū)、品種、齡期的發(fā)病鴿群中成功分離并鑒定到的23株P(guān)A/PMV-1中，篩選出1株免疫原性強(qiáng)、對(duì)流行毒株有高保護(hù)率的疫苗種毒。另外，在對(duì)家禽疫苗、抗體、免疫增強(qiáng)劑等生物制劑以及中藥制劑等方面，進(jìn)行了大量的研究，提出了疫苗、佐劑的研制方法和工藝；結(jié)果研制出了鴿禽I型副粘病毒病疫苗，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室及適度的現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，證明本疫苗安全，有效。
本發(fā)明的目的就是提出一種安全、有效的防制鴿禽I型副粘病毒病新型滅活疫苗及其制備方法。
本發(fā)明所提出的防制鴿禽I型副粘病毒病新型滅活疫苗，是應(yīng)用申請(qǐng)人所篩選出的免疫原性強(qiáng)、對(duì)流行毒株有高保護(hù)率的疫苗種毒，該種毒被鑒定命名為鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902，用該種毒接種非免疫雞胚，再?gòu)乃琅叩呐咭褐刑崛A/PMV-I抗原，將PA/PMV-I抗原滅活后，加入佐劑混配而制成所述的疫苗。
所述的鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902的相關(guān)特性測(cè)定結(jié)果如下1.1種毒的特性測(cè)定本病毒屬副粘病毒科，為RNA病毒，電鏡下觀察病毒呈圓形、橢圓形或不規(guī)則的病毒粒子，在電鏡下為有纖突的病毒粒子，直徑均為120～200nm。對(duì)理化因素的抵抗力不強(qiáng)，經(jīng)紫外線照射或在100℃條件下1min，55℃時(shí)20～60min可全部被滅活。對(duì)氯仿、乙醚、胰酶及酸敏感，能被二價(jià)鎂離子保護(hù)。病毒的囊膜上具有HN纖突，具有凝集紅細(xì)胞的能力，能凝集雞、鴨、鵝、鴿、人、豬、牛、羊、豚鼠、小白鼠的紅細(xì)胞。本病毒可在雞(鴨)胚中繁殖，尿囊腔接種9～11日齡的易感雞胚，37℃培養(yǎng)72h～96h，可致死雞胚，收獲胚液測(cè)定HA效價(jià)≥7log2。分別取抗NDV、AI-H5、AI-H9和EDSV血清抗體，4～8個(gè)血凝單位的本病毒液為抗原，作HI試驗(yàn)，結(jié)果表明，本病毒能被抗NDV血清所抑制，而不能被抗AI-H5、AI-H9、AI-H7和EDSV血清抗體所抑制。
本病毒接種SPF雞胚成纖維細(xì)胞單層后，44～48h出現(xiàn)細(xì)胞病變，形成多核巨細(xì)胞；空斑試驗(yàn)結(jié)果表明，分離毒于接種5d后形成3種大小不同的空斑，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，空斑日漸增大，最后連成一片。于接種7d后測(cè)量空斑大小為大斑2.0～2.5mm，中斑1.3～1.8mm，小斑0.5～1.0mm。
1.2種毒毒力測(cè)定1.2.1攻毒用種毒，選用本種毒毒株的原代毒，經(jīng)SPF雞胚傳代，毒力在第6～13代內(nèi)不變，用其200個(gè)ELD50/0.2ml經(jīng)肌肉注射攻擊1月齡非免疫乳鴿(無(wú)特異抗體)，結(jié)果為乳鴿出現(xiàn)明顯癥狀和病變，并有死亡。其雞胚半數(shù)致死量(ELD50)分別為10-8.34/0.2ml，雞胚平均致死時(shí)間(MDT)為104h，1日齡SPF雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)為1.38，六周齡雛雞靜脈接種致病指數(shù)(IVPI)分別為2.0。
1.2.2制苗用種毒選用本病毒，經(jīng)SPF雞胚傳代，在第20～28代內(nèi)毒力不變，用其200個(gè)ELD50/0.1ml分別經(jīng)肌肉注射攻擊1月齡非免疫乳鴿(無(wú)特異抗體)結(jié)果為乳鴿出現(xiàn)明顯癥狀和病變，并有死亡。其雞胚半數(shù)致死量(ELD50)分別為10-8.34/0.2ml、10-8.52/0.2ml、10-7.80/0.2ml，雞胚平均致死時(shí)間(MDT)分別為96h，106h，98.4h，1日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)分別為1.58、1.56、1.43，六周齡雛雞靜脈接種致病指數(shù)(IVPI)分別為2.21、2.30、1.95。
1.2.3種毒純凈 毒種沒(méi)有細(xì)菌、霉菌、支原體、禽流感及其它外源病原污染。
1.2.4種毒保存 濕毒在-30℃不超過(guò)12個(gè)月，-15～-20℃不超過(guò)6個(gè)月；凍干毒在-30℃不超過(guò)24個(gè)月，-15～-20℃不超過(guò)18個(gè)月。
所述的鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902已于2006年9月8日寄交中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏編號(hào)為CCTCC NOV200605。
本發(fā)明所述的新型滅活疫苗，所用的佐劑為油乳佐劑、蜂膠佐劑或中藥復(fù)方佐劑。
所述的油乳佐劑，其組份包括白礦油、吐溫-80、司本-80和硬脂酸鋁，其中，白礦油、吐溫-80、司本-80的配比按體積百分比計(jì)為白礦油93％～96％、吐溫-80 2％～3％、司本-802％～4％，硬脂酸鋁占油乳佐劑總重量的1～3％。將各組分混配，煮溶后，高壓滅菌。
所述的蜂膠佐劑，為純蜂膠的95％乙醇浸液，浸液中蜂膠的質(zhì)量濃度為10～50％。
所述的中藥復(fù)方佐劑，其原料藥的重量份配比為黃芪1～3份、扶芳藤1～3份、黨參1～3份、靈芝1～3份和蜂膠0.01～0.03份，由所述的黃芪、扶芳藤、黨參和靈芝提純浸液與蜂膠95％乙醇浸液混配而成。
本發(fā)明所述的新型滅活疫苗的制備方法，包括下列步驟a)PA/PMV-I抗原的培養(yǎng)將鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902 CCTCC V200605用無(wú)菌生理鹽水作適當(dāng)稀釋，使每0.1ml～0.5ml含毒量約104.0～5.0EID50，尿囊腔接種10～11日齡非免疫雞胚，每胚0.2ml，37℃孵育48～96小時(shí)，24小時(shí)前死胚為非特異性死亡廢棄，收獲24小時(shí)以后的死亡的胚液，測(cè)定其HA效價(jià)，取HA效價(jià)27～9的雞胚液，即得PA/PMV-I抗原，分裝，-15℃～-20℃保存?zhèn)溆?；b)PA/PMV-I抗原的滅活在每1000ml雞胚液中加入1ml～3ml甲醛含量為37％～40％的福爾馬林溶液，并將其轉(zhuǎn)入另外的高壓消毒瓶中，置搖床上37℃滅活48小時(shí)，即為滅活抗原，按常規(guī)進(jìn)行滅活效果檢驗(yàn)；c)將滅活抗原配入佐劑而成滅活疫苗。
在上述步驟c)中，如應(yīng)用所述的油乳佐劑，其制備方法是將滅活抗原與所述的油乳佐劑按1∶1～2比例混合均勻，再傾入勻漿泵乳化，無(wú)菌及安全檢查后，分裝，即成為油乳劑滅活疫苗。
在上述步驟c)中，如應(yīng)用所述的蜂膠佐劑，其制備方法是按每1000毫升滅活抗原中加入所述的蜂膠佐劑20～50毫升，混合均勻，再傾入勻漿泵乳化，無(wú)菌及安全檢查后，分裝，即成為蜂膠佐劑滅活疫苗。
在上述步驟c)中，如應(yīng)用所述的中藥復(fù)方佐劑，其制備方法是將滅活抗原與所述的中藥復(fù)方佐劑混懸液按重量比1∶1～1.5混合，后將滅菌吐溫-80加入混懸液中，滅菌吐溫-80的加入量為混懸液重量的1％～2％，攪拌混合均勻，再傾入勻漿泵乳化，無(wú)菌及安全檢查后，分裝，即成為純中藥復(fù)合佐劑滅活疫苗。
本發(fā)明從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，應(yīng)用經(jīng)篩選出的抗原性良好的1株地方流行病毒，作為制苗用種毒，輔以免疫佐劑(包括白礦油佐劑、蜂膠佐劑、復(fù)合中藥免疫佐劑)研制成一系列安全、有效的滅活疫苗。研制的蜂膠佐劑、復(fù)合中藥免疫佐劑PA/PMV-I滅活疫苗，均具有不損傷鴿體，易被機(jī)體吸收，在接種部位不會(huì)形成硬結(jié)，不影響胴體品質(zhì)，且易于組織規(guī)模生產(chǎn)及成本低的優(yōu)勢(shì)。既適用于緊急免疫接種和受威脅區(qū)小日齡后備種鴿的免疫接種，也適用于種鴿的免疫。使之成為對(duì)防制鴿PA/PMV-I病，具有特異、效佳、安全、使用方便的新型系列滅活疫苗。
本發(fā)明達(dá)到的技術(shù)效果如下
1、滅活疫苗的安全性試驗(yàn)1.1取以上三種疫苗各5批，分別以單(0.5ml/羽份)免疫劑量，肌肉或頸皮下各接種10只30日齡非免疫鴿和10只1年齡非免疫產(chǎn)鴿，觀察接種免疫鴿的反應(yīng)，觀察期15天。結(jié)果表明，接種鴿食欲、精神狀況正常，均無(wú)不良反應(yīng)。
1.2取以上三種疫苗各5批，分別以4倍(2ml/羽份)免疫劑量，肌肉或頸皮下各接種10只30日齡非免疫鴿和10只1年齡非免疫產(chǎn)鴿，觀察接種免疫鴿的反應(yīng)，觀察期15天。結(jié)果表明，接種鴿食欲、精神狀況正常，均無(wú)不良反應(yīng)。
2、滅活疫苗的免疫效力試驗(yàn)取30日齡非免疫鴿1320只，隨機(jī)分成4個(gè)試驗(yàn)組，第1組(330只)肌肉接種中藥佐劑滅活苗0.5ml/只，第2組(330只)肌肉接種蜂膠佐劑滅活苗0.5ml/只，第3組(330只)肌肉接種油佐劑滅活苗0.5ml/只，第4組(330只)不進(jìn)行疫苗免疫以作為對(duì)照。在免疫前后定期(免疫前1天及免疫后3天、6天、9天、14天、21天、35天、60天、90天、120天、150天、180天)抽血1ml分離血清，用鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902為抗原，按常規(guī)微量法分別測(cè)定其HI價(jià)，其HI價(jià)結(jié)果判定以完全抑制血凝的最高稀釋度為終點(diǎn)，以Xlog2表示，每次測(cè)定均重復(fù)一次，取平均值。并于免疫后7天、14天、21天、35天、90天、120天、150天、180天，4個(gè)組各隨機(jī)抽取20只，用鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902強(qiáng)毒(200個(gè)ELD50/0.1ml)進(jìn)行攻擊，隔離飼養(yǎng)，連續(xù)觀察25天，以檢測(cè)其免疫保護(hù)效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，使用中藥復(fù)合佐劑、蜂膠佐劑和油佐劑苗免疫后6天即可檢出抗體，14天至30天維持最高峰(10.8～11.5log2)，6個(gè)月仍能維持較高的抗體水平(6.9log2)，且沒(méi)有油苗的難于注射和局部形成硬結(jié)的問(wèn)題。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，中藥復(fù)合佐劑苗、蜂膠佐劑苗和油佐劑苗于免疫后21天、60天、90天、120天、150天、180天分別用強(qiáng)毒株200個(gè)ELD50/0.1ml攻擊，其保護(hù)指數(shù)分別為100％、100％、100％、94.4％、88.9％、83.5％；100％、96.7％、90.2％、83.7％、83.0％、80.2％和100％、100％、94.2％、83.7％、82.7％、81.1％。疫苗免疫21天后，用強(qiáng)毒攻擊，均可得到100％的保護(hù)；此時(shí)，檢測(cè)其血清抗體HI價(jià)，平均(10.5log2～11.5log2)log2以上。根據(jù)“HI抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)率平行關(guān)系的試驗(yàn)報(bào)告”我們制定為免疫21天后測(cè)定HI效價(jià)平均應(yīng)≥6log2。
3、滅活疫苗的保存期試驗(yàn)將批號(hào)為200305的蜂膠佐劑滅活苗、中藥復(fù)方佐劑滅活苗和油佐劑滅活苗分別分成10小瓶，10毫升/瓶，置4℃～8℃冰箱內(nèi)保存，并分別于第90天、120天和180天抽取保存的疫苗各1瓶，按0.5毫升/只的劑量各免疫30天齡青年鴿10只，于免疫后21天，各抽檢HI抗體水平及用鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902強(qiáng)毒(200個(gè)ELD50/0.1毫升)攻擊，免疫鴿均得到保護(hù)，且疫苗的性狀和免疫特性不變。個(gè)別油佐劑滅活苗保存12個(gè)月后表面有少量的白油析出，搖勻后又成為均勻的乳白色油苗，不影響效價(jià)。蜂膠佐劑滅活疫苗和中藥復(fù)方佐劑滅活疫苗保存180天后，瓶底均有少許沉淀，但在使用前搖勻，不影響效價(jià)。
4、滅活疫苗的免疫期試驗(yàn)研制的中藥復(fù)合佐劑疫苗、蜂膠佐劑疫苗和油佐劑疫苗分別作了180天的免疫攻毒試驗(yàn)，證實(shí)其免疫期分別至少6個(gè)月以上。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，使用蜂膠佐劑滅活苗、中藥復(fù)方佐劑滅活苗、油乳劑滅活疫苗免疫后4天可產(chǎn)生抗體，6～9天即可達(dá)較高抗體水平，分別至14天、14天、21天時(shí)達(dá)最高峰(10.5log2、11.0log2、11.5log2)，6個(gè)月仍能維持較高的抗體水平(5.9log2、6.2log2、7.2log2)，于免疫后21天、30天、60天、90天、180天用強(qiáng)毒株200個(gè)ELD50/0.1毫升攻擊，其保護(hù)指數(shù)分別是油佐劑苗為100％、100％、100％、94.4％、94.4％；蜂膠佐劑苗為100％、100％、100％、88.9％、88.9％；中藥復(fù)方佐劑苗為100％、100％、100％、94.4％、88.9％。在試驗(yàn)過(guò)程中，使用本三種疫苗后，均沒(méi)發(fā)生鴿新城疫病毒的感染。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一按下述步驟制備防制鴿禽I型副粘病毒病油乳佐劑滅活疫苗1、PA/PMV-I抗原的制備a)PA/PMV-I抗原的培養(yǎng)將鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902 CCTCC V200605用無(wú)菌生理鹽水100倍稀釋，使每0.5ml含毒量約104.0～5.0EID50，尿囊腔接種10～11日齡非免疫雞胚，每胚0.2ml，37℃孵育48～96小時(shí)，收獲24小時(shí)以后的死亡的胚液，測(cè)定其HA效價(jià)，取HA效價(jià)27～9的雞胚液，分裝，-15℃～-20℃保存?zhèn)溆茫籦)PA/PMV-I抗原的滅活在每1000ml雞胚液中加入2ml甲醛含量為37％的福爾馬林溶液，并將其轉(zhuǎn)入另外的高壓消毒瓶中，置搖床上37℃滅活48小時(shí)，即為滅活抗原，按常規(guī)進(jìn)行滅活效果檢驗(yàn)；2、油乳佐劑的制備將960ml白礦油、20ml吐溫-80、20ml司本-80和200克硬脂酸鋁配合，煮溶后，高壓滅菌，制得油乳佐劑。
3.PA/PMV-I油乳佐劑滅活疫苗的配制經(jīng)效價(jià)測(cè)定調(diào)至合格的抗原與油乳佐劑按1∶1.5比例混合均勻，再傾入勻漿泵乳化，無(wú)菌及安全檢查后，分裝，成為油乳劑滅活疫苗。
實(shí)施例二按下述步驟制備防制鴿禽I型副粘病毒病蜂膠佐劑滅活疫苗1、PA/PMV-I抗原的制備a)PA/PMV-I抗原的培養(yǎng)將鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP19990 CCTCC V200605用無(wú)菌生理鹽水100倍稀釋，使每0.2ml含毒量約104.0～5.0EID50，尿囊腔接科10～11日齡非免疫雞胚，每胚0.2ml，37℃孵育48～96小時(shí)，收獲24小時(shí)以后的死亡的胚液，測(cè)定其HA效價(jià)，取HA效價(jià)27～9的雞胚液，分裝，-15℃～-20℃保存?zhèn)溆?；b)PA/PMV-I抗原的滅活在每1000ml雞胚液中加入1ml～3ml甲醛含量為40％的福爾馬林溶液，并將其轉(zhuǎn)入另外的高壓消毒瓶中，置搖床上37℃滅活48小時(shí)，即為滅活抗原，按常規(guī)進(jìn)行滅活效果檢驗(yàn)；2、蜂膠佐劑的制備純蜂膠的95％乙醇浸液，浸液中蜂膠質(zhì)量濃度為50％。
3、PA/PMV-I蜂膠佐劑滅活疫苗的配制經(jīng)效價(jià)測(cè)定調(diào)至合格的抗原每1000毫升中加入蜂膠佐劑20毫升，混合均勻，再傾入勻漿泵乳化，無(wú)菌及安全檢查后，分裝，成為蜂膠佐劑滅活疫苗。
實(shí)施例三按下述步驟制備防制鴿禽I型副粘病毒病純中藥復(fù)合佐劑滅活疫苗1、PA/PMV-I抗原的制備a)PA/PMV-I抗原的培養(yǎng)將鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902 CCTCC V200605用無(wú)菌生理鹽水100倍稀釋，使每0.3ml含毒量約104.0～5.0EID50，尿囊腔接種10～11日齡非免疫雞胚，每胚0.2ml，37℃孵育48～96小時(shí)，收獲24小時(shí)以后的死亡的胚液，測(cè)定其HA效價(jià)，取HA效價(jià)27～9的雞胚液，分裝，-15℃～-20℃保存?zhèn)溆茫籦)PA/PMV-I抗原的滅活在每1000ml雞胚液中加入2ml甲醛含量為37％的福爾馬林溶液，并將其轉(zhuǎn)入另外的高壓消毒瓶中，置搖床上37℃滅活48小時(shí)，即為滅活抗原，按常規(guī)進(jìn)行滅活效果檢驗(yàn)；2、純中藥復(fù)合佐劑的制備原料藥的重量份配比純蜂膠0.01份、黃芪1份、扶芳藤1份、黨參1份和靈芝1份，將黃芪、扶芳藤、黨參和靈芝的提純浸液與蜂膠的95％乙醇浸液混配而成純中藥復(fù)合佐劑混懸液。
3、PA/PMV-I純中藥復(fù)合佐劑滅活疫苗的配制經(jīng)效價(jià)測(cè)定調(diào)至合格的抗原后與中藥復(fù)方佐劑混懸液1∶1～1.5混合，后將滅菌吐溫-80按1％～2％加入混懸液中，攪拌混合均勻，再傾入勻漿泵乳化，無(wú)菌及安全檢查后，分裝，成為純中藥復(fù)合佐劑滅活疫苗。
上述三個(gè)實(shí)施例所制得蜂膠佐劑、中藥復(fù)方佐劑PA/PMV-I滅活疫苗為棕黑色混懸液，均勻度好，粘度低，通針性良好；在4℃下存放2月以上，瓶底可能有少許沉淀，但在使用前搖勻，不影響效價(jià)；油乳劑PA/PMV-I滅活疫苗為油包水型乳白色乳劑苗。以上三種疫苗均不含其它病原；無(wú)菌；分別以4倍免疫劑量(2ml/只)和單免疫劑量(0.5ml/只)，肌肉注射免疫10只30日齡鴿，觀察20天，無(wú)不良反應(yīng)，安全，有效。胚液抗原HA效價(jià)達(dá)27以上。
所制得的PA/PMV-I滅活疫苗的使用方法預(yù)防肌肉或皮下注射0.5ml/羽份；緊急防疫接種肌肉或皮下注射0.8ml～1.0ml/羽份。
權(quán)利要求
1.一種防制鴿禽I型副粘病毒病新型滅活疫苗，其特征在于用鴿1型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902 CCTCC V200605接種非免疫雞胚，再?gòu)乃琅叩呐咭褐刑崛A/PMV-I抗原，將PA/PMV-I抗原滅活后，加入佐劑混配而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型滅活疫苗，其特征在于所述的佐劑為油乳佐劑，其組份包括白礦油、吐溫-80、司本-80和硬脂酸鋁，其中，白礦油、吐溫-80、司本-80的配比按體積百分比計(jì)為白礦油93％～96％、吐溫-80 2％～3％、司本-80 2％～4％，硬脂酸鋁占油乳佐劑總重量的1～3％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型滅活疫苗，其特征在于所述的佐劑為蜂膠佐劑，該佐劑為純蜂膠的95％乙醇浸液，浸液中蜂膠的質(zhì)量濃度為10～50％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型滅活疫苗，其特征在于所述的佐劑為中藥復(fù)方佐劑，該佐劑的原料藥重量份配比為黃芪1～3份、扶芳藤1～3份、黨參1～3份、靈芝1～3份和蜂膠0.01～0.03份，由所述的黃芪、扶芳藤、黨參和靈芝提純浸液與蜂膠95％乙醇浸液混配而成。
5.權(quán)利要求1所述的新型滅活疫苗的制備方法，其特征在于包括下列步驟a)PA/PMV-I抗原的培養(yǎng)將鴿I型副粘病毒PA/PMV-I種毒GDP199902 CCTCC V200605用無(wú)菌生理鹽水作適當(dāng)稀釋，使每0.1ml～0.5ml含毒量約104.0～5.0EID50，尿囊腔接種10～11日齡非免疫雞胚，每胚0.2ml，37℃孵育48～96小時(shí)，24小時(shí)前死胚為非特異性死亡廢棄，收獲24小時(shí)以后的死亡的胚液，測(cè)定其HA效價(jià)，取HA效價(jià)27～9的雞胚液，分裝，-15℃～-20℃保存?zhèn)溆胋)PA/PMV-I抗原的滅活在每1000ml雞胚液中加入1ml～3ml甲醛含量為37％～40％的福爾馬林溶液，并將其轉(zhuǎn)入另外的高壓消毒瓶中，置搖床上37℃滅活48小時(shí)，即為滅活抗原；c)將滅活抗原配入佐劑而成滅活疫苗。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的新型滅活疫苗的制備方法，其特征在于在步驟c)中，將滅活抗原與油乳佐劑按1∶1～2比例混合均勻，再傾入勻漿泵乳化而成油乳劑滅活疫苗，所述的油乳佐劑的組份包括白礦油、吐溫-80、司本-80和硬脂酸鋁，其中，白礦油、吐溫-80、司本-80的配比按體積百分比計(jì)為白礦油93％～96％、吐溫-80 2％～3％、司本-80 2％～4％，硬脂酸鋁占油乳佐劑總重量的1～3％。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的新型滅活疫苗的制備方法，其特征在于在步驟c)中，按每1000毫升滅活抗原中加入蜂膠佐劑20～50毫升，混合均勻，再傾入勻漿泵乳化而制成滅活疫苗，所述的蜂膠佐劑為純蜂膠的95％乙醇浸液，浸液中蜂膠的質(zhì)量濃度為10～50％。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的新型滅活疫苗的制備方法，其特征在于在步驟c)中，將滅活抗原與中藥復(fù)方佐劑混懸液按重量比1∶1～1.5混合，后將滅菌吐溫-80加入混懸液中，滅菌吐溫-80的加入量為混懸液重量的1％～2％，攪拌混合均勻，再傾入勻漿泵乳化而制成中藥復(fù)合佐劑滅活疫苗，所述的中藥復(fù)方佐劑的原料藥重量份配比為黃芪1～3份、扶芳藤1～3份、黨參1～3份、靈芝1～3份和蜂膠0.01～0.03份，由所述的黃芪、扶芳藤、黨參和靈芝提純浸液與蜂膠95％乙醇浸液混配而成。
全文摘要
本發(fā)明提出一種防制鴿禽I型副粘病毒病新型滅活疫苗及其制備方法，所述的防制鴿禽I型副粘病毒病新型滅活疫苗，是應(yīng)用申請(qǐng)人所篩選出的免疫原性強(qiáng)、對(duì)流行毒株有高保護(hù)率的鴿I型副粘病毒PA/PMV－I種毒GDP199902 CCTCC V200605，接種非免疫雞胚，再?gòu)乃琅叩呐咭褐刑崛A/PMV－I抗原，將PA/PMV－I抗原滅活后，加入佐劑混配而成。本疫苗對(duì)防制鴿禽PA/PMV－I病，特異、安全、有效。
文檔編號(hào)A61P31/14GK101020054SQ20071002706
公開(kāi)日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月6日
發(fā)明者鄒永新 申請(qǐng)人:廣東省家禽科學(xué)研究所