專利名稱：：治療眼科疾病的多靶點小干擾rna雞尾酒制劑及制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑及其制備、導入、應用的方法。
背景技術：
：感染、變態(tài)性反應、血管增生和年齡相關眼科疾病的治療仍沒有較為有效的治療藥物。許多眼科疾病是由于眼部新生血管或血管不正常增生所致。在很多嚴重的眼科疾病中，新生血管增生是早期的病理變化，對視力產(chǎn)生損害，雖然不斷有新的治療這些疾病的藥品問世，但是新生血管增生仍是歐美和亞洲國家中引起永久性失明的主要原因。有些眼科疾病所促進的不正常眼部新生血管增生會對視力造成進一步的損傷。但是，目前還沒有有效的治療方法和藥物來治療不正常眼部新生血管增生所引起的眼科疾病。應用較多的治療手段是光動力學治療方法，利用光活化光敏劑達到摧毀非正常血管的作用。但是這種療法在相當一部分患者上沒有療效，而在有效病例中也容易出現(xiàn)復發(fā)癥狀。Macugen(輝瑞藥業(yè))在雖然部分患者表現(xiàn)出來阻止病情惡化的療效，但對大部分的患者仍然沒有療效。Lucentis(GENENTECH公司)雖表現(xiàn)出來一定的療效，但也有些副作用。因此，需要新的治療藥物和手段治療新生血管增生所引起的眼科疾病。據(jù)美國NIH國家眼科研究所統(tǒng)計美國有40萬人感染不同類型的單純皰疹病毒，每年有5萬新發(fā)和復發(fā)病例，約有25%為嚴重的角膜基質(zhì)炎。據(jù)多數(shù)研究報道統(tǒng)計，眼皰疹病毒疾病的1年復發(fā)率為10%，2年復發(fā)率為23%，20年的復發(fā)率為63%。雖然抗病毒藥物在一定程度上可以控制HSV病毒的感染，但是沒有有效的藥物治療HSV引起的角膜基質(zhì)炎所致的患者失明。老年性黃斑病(AMD)及糖尿病引起的視網(wǎng)膜病變(PDR)是眼科的常見病。僅老年性黃斑變性(AMD)—項，全球共有2500萬病人，其治療醫(yī)藥市值約達6億美元。眼新生血管可以引起眼前、眼后、視網(wǎng)膜以及其他眼部位的疾病。不同眼部位新生血管的發(fā)生的原因不一樣，但是新生血管增生的生化和生理進程是一致的。因此，無論是眼前還是眼后，采用有效的手段干擾新生血管增生發(fā)展的生化和生理進程可以治療任何新生血管增生血管引起的眼科疾病。但是，由于眼前和眼后的組織結構不同使給藥的方法有很大不同，因此對于不同的組織結構應采用適當?shù)慕o藥方法，使藥物可以最大限度的到達病變組織和細胞中。1.眼后新生血管疾病1.1早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP)ROP是導致31周前出生的體重小于1250mg的早產(chǎn)兒失明的一種疾病。體重越輕的嬰兒越易患ROP。ROP通常會導致雙眼失明，是引起兒童視力損傷或永久失明的最普遍的原因。由于醫(yī)療技術的發(fā)展，使得早產(chǎn)和體重較輕的新生兒存活的幾率增加，但也增加了ROP發(fā)生的幾率。不是所有的早產(chǎn)兒都會發(fā)生ROP。美國每年有390萬嬰兒出生，其中約有2萬8千個嬰兒的體重小于1250mg。約有14000-16000個嬰兒會發(fā)生不同程度的ROP。中度的ROP不會產(chǎn)生永久性的損傷，90。/。左右的中度ROP嬰兒部需要治療。但是嚴重ROP嬰兒會有進展性的實力損傷或完全失明。目前臨床有效的ROP治療方法是激光治療和冷凍治療。激光治療針對的是視網(wǎng)膜邊緣的區(qū)域，正常情況下這些區(qū)域沒有血管生成。冷凍治療是使用物理的方法產(chǎn)生冰凍溫度，接觸視網(wǎng)膜周圍血管增生產(chǎn)生的斑點。激光治療和冷凍治療都是摧毀視網(wǎng)膜邊緣區(qū)域，可以減慢或逆轉(zhuǎn)不正常血管的增生。令人遺憾的是，雖然這些方法可以挽救閱讀、駕駛所需的直視視力，但也會損傷視網(wǎng)膜邊緣視力。激光治療和冷凍治療都被認為是非侵害式手術，但是長期療效還不確切，而且只應用于嬰兒進展性ROP治療中。這些方法可以減輕ROP造成的視力喪失，但不能阻止ROP進一步的發(fā)展。上述治療方法并非對所有的兒童有效，病情的進一步發(fā)展會造成視網(wǎng)膜脫離，喪失中心視力?？梢?，現(xiàn)有的治療ROP的手段是非侵害式的手術，并不能阻止病情惡化和長期療效。1.2糖尿病增殖型視網(wǎng)膜病變(PDR)當向視網(wǎng)膜供應氧氣的毛細管受到損傷后，血液和其他體液會流入視網(wǎng)膜，誘發(fā)新生血管生長，從而導致PDR疾病。這些新生血管通常植入眼玻璃體中而且較為脆弱，影響視力。嚴重的PDR患有如果不經(jīng)治療視力嚴重損傷的幾率很高。新生血管增生是PDR主要的病理變化過程，是導致成年糖尿病患者致盲的主要的原因。在一些PDR患者中，血管膨脹和出現(xiàn)體液滲漏；在另一些患者中新生血管則生長在視網(wǎng)膜表面。視網(wǎng)膜是眼后的光敏組織，健康的視網(wǎng)膜是良好視力所必需的。目前治療PDR采用分光激光治療技術治療。激光治療可以收縮不正常的血管，在遠離視網(wǎng)膜黃斑的區(qū)域設置1000-2000個激光點使非正常的血管收縮，由于該療法需要設置較多的激光灼燒點，常常需要2個或更多的療程。激光治療除對邊緣視力有損害外，可以保留其它的視力。激光治療會減弱夜視和彩視的能力?？梢姡止饧す庵委熂夹g還不是理想的治療技術。1.3老年性黃斑病變(AMD)在超過60歲的老年人中，AMD是首要的致盲疾病，而且隨著年齡的增加AMD致盲幾率增加。AMD常導致個人和社會沉重的負擔，而且對AMD發(fā)病原因和進程還知之甚少，但是可以明確的是視網(wǎng)膜色素上皮細胞起著關鍵作用。視網(wǎng)膜圓錐細胞和桿狀細胞的正常功能依賴于視網(wǎng)膜色素上皮細胞，因此視網(wǎng)膜色素上皮細胞損傷會導致視力的下降。AMD會導致眼后嚴重的血管生成和血管增生。在大部分的濕性AMD患者中，視網(wǎng)膜前泄漏血管的增生也會導致視力模糊和扭曲。在絕大部分后期病例中，泄漏的新生血管會進一步發(fā)展，從而導致疾病進一步加重。2.眼前新生血管疾病眼前發(fā)紅是因為虹膜和眼前部其它結構上非正常血管生成。通常情況下，在這些區(qū)域沒有可見的血管。當視網(wǎng)膜缺氧或短暫缺血、糖尿病視網(wǎng)膜病變以及動脈閉塞都會誘導不正常血管形成以向眼部供血。血管閉塞和眼前部液體的排放導致眼壓升高，常會導致青光眼的發(fā)生。葡萄膜炎是一類由于眼內(nèi)組織炎癥引起的疾病，根據(jù)解剖結構可分為眼前、眼后、眼中和彌散等部位的病變。眼葡萄膜炎的并發(fā)癥會給視力帶來深度和不可逆的損傷，尤其是未能確診和治療不當時，最常見的并發(fā)癥有白內(nèi)障、青光眼、視網(wǎng)膜脫離、視網(wǎng)膜新生血管化、視神經(jīng)損傷等。另一類眼病是由于感染所導致的，如結膜炎、角膜炎、臉緣炎、麥粒腫、霰粒腫和虹膜炎等，都會引起眼部新生血管所導致的視力下降。HSV感染復發(fā)是美國角膜直忙得最普遍的原因。這種病毒感染引起的眼疾稱為角膜基質(zhì)炎。角膜新生血管是由于眼部感染也會導致角膜基質(zhì)炎早期的病理過程。3.眼疾的生理和靶向的基因如其他組織一樣，眼組織也需要不斷的維護，這個過程中常會有新生血管生成。在上述眼病的后期進程中，新生血管生成是主要的特征，是需要治療的關鍵的非正常的病理進程。在許眼病或其他疾病中，盡管發(fā)病的原因和部位不同，所造成的病例損傷也有所不同，但是新生血管過程中生成的滲漏的新血管的病理變化是一致的。因此，治療新生血管相關的疾病可以采用相同的手段來處理眼病或其他疾病。I型單純皰疹病毒感染所引起單純皰疹性角膜基質(zhì)炎能夠誘導角膜新生血管生成。新生血管生成因子有病毒感染的角膜上皮細胞、無菌性炎癥和基質(zhì)中與巨噬細胞等炎癥細胞相鄰的細胞。通過導入純化過的HSV病毒DNA或CpG寡核苷酸(CpGODN)誘導角膜新生血管建立角膜新生血管模型。該模型被認為是臨床病理變化類似角膜新生血管模型和單純皰疹性角膜基質(zhì)炎動物模型，可用于測試藥物治療眼新生血管疾病。在本發(fā)明中，應用siRNA抑制病毒基因的表達可以抑制病毒的復制和感染，從而抑制新生血管的生成。其中，作為病毒復制和感染的關鍵基因的UL5和UL29是重要的靶基因。缺氧誘導引子l(HIF-l)是由HIF-1a亞基和0亞基組成的轉(zhuǎn)錄因子HIF能夠激活VEGF等在維持氧動態(tài)平衡起關鍵作用的多個基因的表達。在成年人中，免疫斑點雜交表明在誘導四天后的早期階段HIF-la的表達顯著增加，在視網(wǎng)膜血管發(fā)展過程仍保持高表達，隨后降至中等表達水平。HIF-1P亞基的表達在各個時期較為穩(wěn)定。在氧誘導的鼠視網(wǎng)膜缺血模型上，視網(wǎng)膜中HIF-1a的表達增加，在2小時達到峰值，在雖后24小時內(nèi)降至本底水平。免疫組化分析表明在缺氧的內(nèi)視網(wǎng)膜HIF-la含量增加，在含氧量正常的外視網(wǎng)膜沒有變化；分析也表明上述措施對HIF-10沒有影響。在內(nèi)核層VEGFmRNA的表達在缺氧誘導6小時后持續(xù)增加，而且可以持續(xù)數(shù)天。HIF-1是轉(zhuǎn)錄因子，而且大部分存在于核內(nèi)，因此難以應用單克隆抗體和其他小分子藥物來作用于HIF-1。siRNA治療策略是具有獨特優(yōu)勢的抑制基因表達的制劑。一些疾病有著類似的病理特征，針對這些特征的治療手段將具有誘人的前景。大量的研究已證實VEGF介導的血管新生和血管生成是許多新生血管疾病的類似的病理進程。VEGF介導的血管生成在所有的新生血管相關的眼疾中扮演者中心的角色。VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)家族由VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PIGF(胎盤生長因子)組成，已知的受體包括三種結構酪氨酸激酶同系物VEGFR-l(Flt-l)、VEGFR-2(Flk-l或KDR)和VEGFR-3(Flt-4)，三種受體對不同的VEGF因子具有不同的親和性和功能。但是對四種VEGF的功能和調(diào)控模式還了解的不多，VEGF-A與VEGFR-1、VEGFR-2結合誘導血管新生、血管生成和血管滲透性。VEGFR-1和VEGFR-2可能直接響應VEGF-A或者缺氧脅迫，在增殖的上皮細胞中上調(diào)表達。VEGFR-1對VEGF-A的親和性好于VEGFR-2。對VEGFR-1功能的了解甚少，VEGFR-2則響應于血管的生成信號?；谝陨蟅EGF調(diào)控途徑的關鍵因子的研究，已有研究直接開發(fā)包括Macugen、Lucentis等VEGF-A的抑制因子作為候選藥物。這些研究都確證了VEGF通道在眼疾和腫瘤臨床治療上的作用，但是還未能許多患者的需求。特別是上述的藥物工作機制只是抑制相關蛋白的功能，而不能夠抑制這些相關蛋白的產(chǎn)生。因此，若要更好地抑制VEGF通道，就需要開發(fā)能夠抑制相關蛋白產(chǎn)生的藥物來提高治療眼病的療效?；|(zhì)金屬蛋白酶是是一類依賴鋅離子的內(nèi)肽酶，在與新生血管相關的細胞外基質(zhì)的降解和重建中起重要作用。基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)在脈絡膜新生血管的發(fā)病機制中扮演重要角色。視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)是外層視網(wǎng)膜環(huán)境中MMPs的重要發(fā)源地，但是對調(diào)解這些細胞中MMP分泌的因素知之甚少。有研究表明不分裂的RPE細胞子分泌MMP-2不分泌MMP-9，TNF-a刺激后可分泌MMP-9,而且MMP-2分泌增加，VEGF束U激也可以增加MMP-2分泌，但是bFGF刺激沒有影響。另夕卜，MMP-2活性增加可能會危及視網(wǎng)膜周細胞的存活，因為MMP-2可作用于細胞基質(zhì)蛋白和/或直接與整合素聯(lián)合導致細胞與細胞基質(zhì)的粘附解離促進細胞調(diào)亡或失巢調(diào)亡。有不同的研究設計了針對MMP-9基因不同區(qū)域序列的shRNA表達載體pshMMP-9，在體外和體內(nèi)研究中pshMMP-9能夠特異的抑制MMP-9的表達。通過結膜下給藥將pshMMP-9導入體內(nèi)能夠有效抑制鼠角膜中MMP-9蛋白的表達。因此pshMMP-9能夠阻止血管生成和減輕單純皰疹性角膜基質(zhì)炎的病情，我們堅信MMP-2和MMP-9是一組有效的抑制血管生成藥物作用靶點。研究表明整合素avP3和av(35參與眼血管生成的發(fā)展。對AMD和擬眼組織胞漿菌病綜合征病人視網(wǎng)膜下新生血管中avp3和av(35表達情況的分析表明只有av卩3在眼組織新生血管中表達、PDR病人視網(wǎng)膜新生血管中av(33和avp5表達情況的分析表明avP3和avP5均存在于血管組織中。PDR病人視網(wǎng)膜新生血管中存在av(33和av卩5，因此應用av卩3和av卩5的抑制子或拮抗多肽能夠阻斷新血管的形成，而且對其它已存在的血管沒有影響。這不僅使我們更確信視網(wǎng)膜或視網(wǎng)膜下新生血管生成是已明確的病理變化進程。而且通過抑制avP3和av(35可以有效治療血管生成相關的致盲眼疾.。FGF-2等成纖維生長因子是上皮細胞潛在的分離素，能夠在體外和體內(nèi)誘導出類似血管的結構。研究表明FGF-2在正常血管化早期的各個階段起主要作用，但是總的來說FGF-2在正常血管化中的作用還很少有研究報道。存在玻璃狀膜退變和視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞侵入缺陷可作為一些眼病的動物模型。有趣的是FGF-2表達有助于角膜基質(zhì)炎中傷口的愈合。表皮生長(EGF)受體、胎盤生長因子(PIGF)也在眼部血管生長中起一定作用。雖然這些因子的作用相對較小，但是設計針對這些基因的siRNA和其他基因的siRNA聯(lián)合使用對治療不同的眼疾具有重要意義。炎癥過程較為復雜，其中涉及許多種細胞和生化因子，但是不同組織中的發(fā)病進程保守。炎癥早期的癥狀之一是分泌導致缺氧、損傷等后果的激活因子。這.些因子激活細胞并募集炎癥細胞進入組織中，進入的炎癥細胞又可分泌其他激活因子。誘導炎癥的一個共同生化通路是分泌TNFa和IL-1卩，上調(diào)環(huán)氧合酶2(COX-2)的表達。這些因子大部分并行作用于炎癥的病理發(fā)展過程，因此阻斷或抑制一系列炎癥的發(fā)展需要同是抑制這些基因的表達。而且一系列的炎癥反應分泌的因子會誘導新生血管生成。炎癥發(fā)展過程為利用siRNA抑制或阻斷炎癥的發(fā)展提供了多個作用靶點。因此，利用siRNA技術抑制參與血管生成、參與炎癥發(fā)展過程的基因以及HSV關鍵基因?qū)⑹且环N極具吸引力的新的治療手段。4.RNAi(RNA干擾，RNAinterfering)和siRNA(小分子干擾核糖核酸，smallinterferingRNA)RNAi降解RNA具有序列特異性，理論上可以抑制所有基因的表達，為下調(diào)或沉默基因的表達提供了直接和快速的手段。RNAi是生物體內(nèi)天然存在的一種機制，雙鏈的RNA被RNA酶III、Dicer切成19一23nt具有2nt懸垂3，末端的雙鏈RNA分子，即siRNA分子。siRNA分子和多組分的核糖核酸酶構成RNA誘導的沉默復合體(RISC)，隨后雙鏈siRNA分子中的一條單鏈仍與RISC結合并指導復合物與互補的RNA結合，然后在核糖核酸酶的作用下降解RNA，從而達到沉默基因的效果。研究表明化學合成的21—25nt的siRNA分子在哺乳動物細胞中具有RNAi效應，siRNA雙鏈雜交分子的末端和中部區(qū)域的熱力學穩(wěn)定性決定了siRNA分子的功能。有研究對RISC、siRNA分子和RNAi特性進行了深入研究。有研究報道了化學合成或shRNA表達載體產(chǎn)生siRNA分子在哺乳細胞中產(chǎn)生RNAi效應在實驗室或潛在臨床治療應用。shRNA表達載體首先在體內(nèi)產(chǎn)生小發(fā)卡狀RNA(shRNA)，隨后shRNA被Dicer切成siRNA。研究認為siRNA治療人類疾病具有巨大的前景，尤其是在治療病毒病方面。重要的是并非每一個潛在的siRNA分子都能有效的抑制靶向基因的表達，沒有方法確保設計的siRNA能夠抑制耙向基因的表達，siRNA分子的療效必須測試并分析其對靶向基因的抑制效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一目的在于提供一種治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑。本發(fā)明的第二目的在于提供一種上述用于治療眼科疾病的雞尾酒制劑中多靶點小干擾RNA的制備方法。本發(fā)明的第三目的在于提供一種上述用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑制備方法。本發(fā)明的第四目的在于提供一種上述多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑的用途。上述目的可通過以下技術措施來實現(xiàn),'一種治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，該多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑是由至少三個小干擾RNA序列和特定的小干擾RNA傳輸載體組成，能將小干擾RNA高效導入眼組織中；這些小干擾RNA作用于三個或三個以上不同基因的靶序列，可同時具有將三個或三個以上的基因靶點敲低的功能；所述的小干擾RNA傳輸載體為生理鹽水、糖類、聚合物、脂類或膠束的溶液。所述的靶序列是完整或部分的皰疹病毒基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分促進炎癥反應途徑基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分促進血管生成途徑基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分促進細胞增殖途徑基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分病毒感染所需的基因組RNA，和/或，完整或部分介導病毒感染的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA。所述的每一個小干擾RNA的靶序列在人和鼠或非人靈長類動物的基因序列上同源，編碼相同或類似的蛋白。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個或三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼皰疹病毒UL5蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gguaggcguggagcuuggccaugua-3'，antisense:5，-uacauggccaagcuccacgccuacc-3，)、針對編碼皰疹病毒UL29蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ggucguugccggccaugccguagua-3',antisense:5，-uacuacggcauggccggcaacgacc-3，)、針對編碼人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcgcgcggagcacggagacgggua-3',antisense:5，-uacccgucuccgugcuccgcgcgcgc-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠腫瘤壞死因子a蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-caagcccugguaugagcccaucuau-3'，antisense:5，-auagaugggcucauaccagggcuug-3，)、針對編碼人和鼠白介素1e蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-guuccccaacugguacaucagcacc-3'，antisense:5，-ggugcugauguaccaguuggggaac-3，)、針對編碼人和鼠環(huán)氧合酶-2蛋白mRNA的小干擾RNA(5'-ggucuggugccuggucugaugaugu-3'，antisense:5，-acaucaucagaccaggcaccagacc-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3',antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3'，antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gacuuccugaccuuggagcaucuca-3'，antisense:5，-ugagaugcuccaaggucaggaaguc-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gacuuccugaccuuggagcaucuca-3'，antisense:5'-ugagaugcuccaaggucaggaaguc-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3'，antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gaguuggcagugcaauaccugaaca-3',antisense:5，-uguucagguauugcacugccaacuc-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3'，antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠b型成纖維生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gaagagagaggaguugugucuauca-3',antisense:5，-ugauagacacaacuccucucucuuc-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3'，antisense:5，國ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cugagagauuguaccuucuaguuga-3',antisense:5，-ucaacuagaagguacaaucucucag-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3',antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cugagagauuguaccuucuaguuga-3',antisense:5，-ucaacuagaagguacaaucucucag-3')、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3'，antisense:5'-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白raRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3'，antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)、針對編碼人和鼠成纖維生長因子b蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gaagagagaggaguugugucuauca-3'，antisense:5，-ugauagacacaacuccucucucuuc-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人禾卩鼠A—RAF蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccuguggcuacaaguuccaccagca-3',antisense:5，-ugcugguggaacuuguagccacagg-3，)、針對編碼人禾口鼠mTOR蛋白m麗的小干擾RNA(sense:5'-gcgcgaaccucagggcaagaugcuu-3',antisense:5，-aagcaucuugcccugagguucgcgc-3，)、針對編碼人禾卩鼠缺氧誘導因子la蛋白m腿的小干擾RNA(sense:5'-caggacaguacaggaugc皿gccaa-3',antisense:5，-uuggcaagcauccuguacuguccug-3，)、針對編碼人和鼠整合素aV蛋白m腿的小干擾RNA(sense:5'-gugguccugguagcuuuuauuggca-3'，antisense:5，-ugccaauaaaagcuaccaggaccac-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人禾口鼠A—RAF蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccuguggcuacaaguuccaccagca-3'，antisense:5，-ugcugguggaacuuguagccacagg-3，)、針對編碼人禾口鼠mTOR蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gcgcgaaccucagggcaagaugcuu-3'，antisense:5，-aagcaucuugcccugagguucgcgc-3，)、針對編碼人和鼠缺氧誘導因子la蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-caggacaguacaggaugcuugccaa-3'，antisense:5，-uuggcaagcauccuguacuguccug-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人禾口鼠A—RAF蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccuguggcuacaaguuccaccagca-3',antisense:5，-ugcugguggaacuuguagccacagg-3，)、針對編碼人和鼠mTOR蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gcgcgaaccucagggcaagaugcuu-3',antisense:5，-aagcaucuugcccugagguucgcgc-3，)、針對編碼人和鼠整合素aV蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gugguccugguagc皿uuauuggca-3',antisense:5，-ugccaauaaaagcuaccaggaccac-3')。所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cccugagagauuguaccuucuaguu-3',antisense:5，-aacuagaagguacaaucucucaggg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcagacguguaaauguuccugcaa-3',antisense:5，隱uugcaggaacauuuacacgucugcg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3'，antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gacuuccugaccuuggagcaucuca-3',antisense:5，-ugagaugcuccaaggucaggaaguc-3')。所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小千擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cccugagagauuguaccuucuaguu-3',antisense:5，-aacuagaagguacaaucucucaggg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcagacguguaaauguuccugcaa-3',antisense:5，-uugcaggaacauuuacacgucugcg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子B蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gugacugugcagcgcugugguggcu-3'，antisense:5，-agccaccacagcgcugcacagucac-3，)、針對編碼人和鼠b型成纖維生長因子蛋白mRNA的小千擾RNA(sense:5'-gaagagagaggaguugugucuauca-3',antisense:5，-ugauagacacaacuccucucucuuc-3，)。所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcgcgcggagcacggagacgggua-3'，antisense:5，-uacccgucuccgugcuccgcgcgcg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcagacguguaaauguuccugcaa-3',antisense:5，-uugcaggaacauuuacacgucugcg-3')、針對編碼皰疹病毒UL5蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gguaggcguggagcuuggccaugua-3',antisense:5，-uacauggccaagcuccacgccuacc-3，)、針對編碼皰疹病毒UL29蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ggucguugccggccaugccguagua-3',antisense:5，-uacuacggcauggccggcaacgacc-3，)。所述的糖類小干擾RNA傳輸載體為葡萄糖溶液；所述的聚合物類小干擾RNA傳輸載體為聚陽離子結合分子、陽離子膠束、陽離子多l(xiāng)fc、具有親水性基團分枝結構的聚合物、非天然的陽離子聚合物、陽離子聚縮醛聚合物、具有親水性基團分枝結構的聚縮醛聚合物、具有功能性基團的陽離子聚合物和具有功能性基團-親水性基團-聚合物結構的嵌段式聚合物；所述的脂類小干擾RNA傳輸載體為陽離子脂質(zhì)體。所述的陽離子多肽小干擾RNA傳輸載體由組氨酸和賴氨酸構成的異量分子聚合物，和小干擾RNA形成100-400nm直徑的納米顆粒。所述的小干擾RNA是長度為19或20或21或22或23或24或25或26或27堿基對的雙鏈RNA;小干擾RNA是兩端皆為平末端或皆為粘末端或兩端分別為平末端和粘末端的雙鏈RNA;小干擾RNA是粘末端的懸垂核苷酸的長度為1-4核苷酸的雙鏈RNA;小干擾RNA由天然的核苷酸組成或由人工合成的核苷酸或由人工修飾的核苷酸組成的雙鏈RNA。上述用于治療眼科疾病的雞尾酒制劑中多靶點小干擾RNA的制備方法，選用抑制血管內(nèi)皮生長因子通路相關基因表達的小干擾RNA和抑制成纖維生長因子通路上相關基因表達的小干擾RNA;選用抑制促進炎癥反應通路相關基因表達的小干擾RNA和抑制促進血管生成通路上相關基因表達的小干擾RNA;選用抑制促進血管生成通路上相關基因表達的小干擾RNA和抑制皰疹病毒基因表達的小干擾RNA;選用抑制促進血管生成通路上相關基因表達的小干擾RNA和抑制內(nèi)皮細胞增殖基因表達的小干擾RNA;或選用抑制促進炎癥反應通路相關基因表達的小干擾RNA和抑制皰疹病毒基因表達的小干擾RNA。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠腫瘤壞死a因子基因、人和鼠白介素-1P、人和鼠環(huán)氧合酶-2基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制皰疹病毒UL5基因、皰疹病毒UL29基因、人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠缺氧誘導因子基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1和人和鼠胎盤生長因子基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠b型成纖維生長因子基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠mTOR基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠mT0R、人和鼠A-ARF和人和鼠缺氧誘導因子基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1和人和鼠mTOR基因的表達。選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠mT0R、人和鼠A-ARF、人和鼠整合素整合素aV蛋白基因、人和鼠缺氧誘導因子基因的表達。上述用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑制備方法，選用三條或三條以上的小干擾RNA根據(jù)需要比例混合，混合比例以制備所得制劑對所^f對基因表達的抑制率達50%以上的功效來確定。選用至少3條小干擾RNA以1:1:l或1:2:1或1:2:3或1:2:4或1:3:6:或1:5:10或根據(jù)需要的比例制備多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑。選用4條小干擾RNA以1:1:1:或1:2:1:1或1:1:2:1或1:1:1:2或1:2:3:4或1:3:5:7或1:5:10:20或根據(jù)需要的比例制備多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑。上述多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑用于作為治療眼科疾病的藥物，可用作治療與炎癥和新生血管相關或部分與炎癥和新生血管相關的眼科疾病的藥物制劑。siRNA分子設計本發(fā)明提供了一種新的方法設計針對特定序列的siRNA，具有以下三個特性1.siRNA的耙向序列是人和鼠同一個基因中相同的基因序列。因此設計的siRNA分子對人和鼠中的相同基因都有抑制作用。例如特異的耙向VEGF基因的siRNA能夠同時敲低人細胞中VEGF基因的表達和鼠細胞中VEGF基因的表達。2.設計了21-mer，23-mer和25-mer三種不同長度的siRNA。設計的依據(jù)為23-mer和25-mer的敲低功效通常強于21-mer，但是25-mer易誘導非特異的干擾素反應，因此不同長度的siRNA聯(lián)合使用將會最大限度發(fā)揮特異地抑制基因表達的功效同時避免出現(xiàn)非特異的干擾素反應。3.組成siRNA的寡核苷酸(oligonucleotides)可以是平末端或是具有懸垂末端的粘性末端。設計的依據(jù)為粘性末端的siRNA分子比平末端的更易降解，但平末端易誘導非特異的干擾素反應。因此不同末端siRNA聯(lián)合使用將會最大限度發(fā)揮特異地抑制基因表達的功效同時避免出5a.非特異的干擾素反應。上述所指的寡核苷酸(oligonucleotides)或短核苷酸(shortoligo)可由天然的核苷酸組成也可由人工合成或人工修飾的核苷酸組成，下文所指的寡核苷酸(oligonucleotides)或短核苷酸(shortoligo)相同。寡核苷酸的長度為19或20、21、22、23、24、25、26和27個核苷酸等，寡核苷酸的長度也可達到35個核苷酸或更長。組成siRNA寡核苷酸的長度為19-35個核苷酸中的任何長度。在具體實施例中，siRNA為19-35個核苷酸中的任何長度。siRNA兩端皆為平末端或皆為粘末端或兩端分別為平末端和粘末端；粘末端的懸垂核苷酸的長度為標1-4個核苷酸或更長。在本發(fā)明專利的附表中，所列出的siRNA序列為平末端的21nt、23nt和25nt的雙鏈分子。siRNA和聚合物或脂質(zhì)體等傳輸載體形成復合物，經(jīng)siRNA導入體內(nèi)或細胞中。聚合物傳輸載體包括陽離子聚合物，陽離子聚合物帶有正電和負電的.siRNA結合形成50-500nm直徑的納米顆粒。陽離子聚合物是含有賴氨酸和組氨酸等氨基酸的異量分子聚合物；可以是具有分枝結構的聚合物。載體為含有靶向基團的合成傳輸載體。傳輸載體由陽離子聚合物、親水性聚合物和靶向分子組成。陽離子聚合物為聚乙烯亞胺，親水性聚合物為聚乙二醇或聚甲醛，靶向分子為RGD分子、轉(zhuǎn)鐵蛋白、亞精胺或單鏈抗體等分子。本發(fā)明制劑和制備方法中所述的dsRNA寡核苷酸的序列與人內(nèi)源基因或突變的基因互補，所說的突變的基因是指在基因的編碼區(qū)或調(diào)控區(qū)存在至少一個突變。所說的內(nèi)源基因指與血管生成相關的一組因子，其中包括生長因子基因、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶基因、蛋白酪氨酸激酶基因、蛋白絲氨酸/蘇氨酸磷酸化酶基因、蛋白酪氨酸磷酸化酶基因、受體基因和轉(zhuǎn)錄因子基因。抑制病毒感染已確知的引起眼新生血管的原因之一是皰疹病毒或其他病毒感染，因此阻斷病毒感染引發(fā)的眼新生血管手段是抑制病毒的感染。RNAi是體內(nèi)天然的抗擊病毒感染的機制，但是理論上可以抑制任何基因的表達，而且具有很高的特異性。本發(fā)明提供的RNAi制劑能夠抑制眼部的病毒感染，同樣也適用于抑制眼新生血管生成；本發(fā)明所提供的RNAi制劑包括短雙鏈RNA寡核苷酸和小干擾RNA，這些RNAi制劑的序列與病毒基因序列一致并且和人的序列沒有同源性，能夠抑制DNA病毒或RNA病毒的感染，降解病毒感染中的dsRNA基因組。HSV是一種DNA病毒，可引起皰疹角膜基質(zhì)炎，可通過RNAi抑制HSV感染眼部。HSV病毒的基因組相對較大，游離在寄主細胞中并表達病毒mRNA。持續(xù)低水平病毒mRNA的表達導致變化不大持續(xù)的感染，感染不是會爆發(fā)。本發(fā)明提供的RNAi制劑可用于抑制HSV病毒mRNA表達，避免感染復發(fā)。抑制HSV病毒的感染，可以避免病毒感染所誘發(fā)的眼新生血管疾病。RNAi制劑也有助于將持續(xù)低水平的HSVmRNA的表達降至更低的水平，從而消除HSV感染的發(fā)作，防止由于病毒感染所導致的眼新生血管生成。分別針對1型和2型HSV病毒UL5和UL29基因設計10條長度為21-mer、10條長度為23-mer和10條長度為25-mer的雙鏈小干擾RNA。首先合成單鏈的正義鏈RNA和單鏈的反義鏈RNA,然后兩條單鏈RNA退火形成雙鏈小干擾RNA,根據(jù)設計不同雙鏈小干擾RNA可以是平末端或具有2個以上懸垂末端。針對1型HSV和2型HSVUL5基因設計的siRNA如表1所示；針對1型HSV和2型HSVUL29基因設計的siRNA如表1所示。表1，用于設計siRNA的HSV-1和HSV-2病毒UL5基因耙序列<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表2:用于設計siRNA的HSV-1和HSV-2病毒UL29基因靶序列<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>抑制炎癥細胞和發(fā)炎途徑刺激的眼新生血管生成炎癥過程較為復雜，其中涉及許多種細胞和生化因子，但是不同組織中的發(fā)病進程保守。炎癥早期的癥狀之一是分泌導致缺氧、損傷等后果的激活因子。這些因子激活細胞并募集炎癥細胞進入組織中，進入的炎癥細胞又可分泌其他激活因子。誘導炎癥的一個共同生化通路是分泌TNFct和IL-1P，上調(diào)環(huán)氧合酶2(COX-2)的表達。這些因子大部分并行作用于炎癥的病理發(fā)展過程，因此阻斷或抑制一系列炎癥的發(fā)展需要同是抑制這些基因的表達。而且一系列的炎癥反應分泌的因子會誘導新生血管生成。炎癥的發(fā)病過程為進行siRNA治療提供多個作用靶點在上游分泌的因子啟動炎癥的級聯(lián)反應；下游分泌的因子則負責激活級聯(lián)反應中下游的特定細胞，如內(nèi)皮細胞從血液中募集嗜中性白細胞和誘導新生血管生成。本發(fā)明提供的siRNA能夠有效抑制促進炎癥發(fā)展細胞因子的表達。細胞分泌和釋放的細胞因子能夠啟動炎癥反應，這些因子的上調(diào)表達對炎癥反應的不斷擴展和持續(xù)進行來說是重要的。本發(fā)明提供的RNAi制劑能夠抑制炎癥的持續(xù)進行，從而有利于治療眼新生血管疾病。許多因子參與了發(fā)炎進程，尤其重要的是激活內(nèi)皮細胞的因子導致持續(xù)眼部炎癥并進而誘導眼部新生血管生成。針對人和鼠腫瘤壞死因子a和白介素-le基因設計長度為21-mer、長度為23-mer和長度為25-mer的雙鏈小干擾RNA。首先合成單鏈的正義鏈RNA和單鏈的反義鏈RNA，然后兩條單鏈RNA退火形成雙鏈小千擾RNA，根據(jù)設計不同雙鏈小干擾RNA可以是平末端或具有2個以上懸垂末端。針對人和鼠白介素-13基因設計的siRNA如表3所示；針對人和鼠腫瘤壞死因子a基因設計的siRNA如表4所示；針對人和鼠環(huán)氧合酶-2基因設計的siRNA如表5所示。表3:用于設計siRNA的人和鼠IL-l(3基因靶序列<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>抑制血管生成通路因子的表達如同炎癥進程--樣，血管生成進程較為復雜，但在不同組織中的發(fā)病進程保守，細胞分泌的幾種因子起著主要作用。缺氧誘導引子l(HIF-l)是由HIF-la亞基和P亞基組成的轉(zhuǎn)錄因子，HIF-1能夠激活VEGF等在維持氧動態(tài)平衡起關鍵作用的多個基因的表達。在VEGF通路驅(qū)動血管生成的早期階段出現(xiàn)VEGF的分泌，VEGF能夠結合和激活帶有VEGF家族蛋白的受體。VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)家族由VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PIGF(胎盤生長因子)組成，已知的受體包括三種結構酪氨酸激酶同系物VEGFR-l(Flt-l)、VEGFR-2(Flk-l或KDR)和VEGFR-3(Flt-4),三種受體對不同的VEGF因子具有不同的親和性和功能。針對人和鼠HIF-1a基因基因設計的siRNA如表6所示；針對人和鼠VEGFA基因設計的siRNA如表7所示；針對人和鼠VEGFB基因設計的siRNA如表8所示；針對人和鼠PIGF基因設計的siRNA如表9所示；針對人和鼠VEGF-l(Flk-l)基因設計的siRNA如表10所示;針對人和鼠VEGF-2基因設計的siRNA如表11所示。表6.用于設計siRNA的人和鼠HIF-la基因靶序列<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表7:用于設計siRNA的人和鼠VEGFA基因靶序列<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表8:用于設計siRNA的人和鼠VEGFB基因靶序列<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>3<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>3抑制新生血管形成相關因子的表達基質(zhì)金屬蛋白酶是是一類依賴鋅離子的內(nèi)肽酶，在與新生血管相關的細胞外基質(zhì)的降解和重建中起重要作用。基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)在脈絡膜新生血管的發(fā)病機制中扮演重要角色。視網(wǎng)膜色素上皮細胞(RPE)是外層視網(wǎng)膜環(huán)境中MMPs的重要發(fā)源地，但是對調(diào)解這些細胞中MMP分泌的因素知之甚少。有研究表明不分裂的RPE細胞子分泌MMP-2不分泌MMP-9，TNF-a刺激后可分泌MMP-9，而且MMP-2分泌增加，VEGF刺激也可以增加MMP-2分泌，但是bFGF刺激沒有影響。因此，MMP-2和MMP-9可作為抗血管生成治療另一個系列的靶點。研究表明整舍素av卩3和av卩5參與眼血管生成的發(fā)展。對AMD和擬眼組織胞漿菌病綜合征病人視網(wǎng)膜下新生血管中ctv卩3和avp5表達情況的分析表明只有avp3在眼組織新生血管中表達、PDR病人視網(wǎng)膜新生血管中avp3和avp5表達情況的分析表明avj33和avp5均存在于血管組織中。針對人和鼠MMP-2基因設計的siRNA如表15所示；針對人和鼠MMP-9基因設計的siRNA如表16所示；針對人和鼠整合素av(33基因設計的siRNA如表17所示。表15:用于設計siRNA的人和鼠MMP-2基因靶序列<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表16:用于設計siRNA的人和鼠MMP-9基因耙序列<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>siRNA雞尾酒療法治療眼科疾病許多疾病是由于人體內(nèi)自身致病基因不正常過量表達所致或外來生物感染所致。疾病的發(fā)展過程較為復雜不是單一藥物所能解決的而且也不能解決人體藥物抗性的問題?？朔@些問題的一個策略是聯(lián)合用藥。本發(fā)明提供的siRNA等RNAi制劑是化學性質(zhì)一致的由四種核苷酸組成，但堿基序列不同，。致病的原因較為復雜，可能有較多的因素參與，本發(fā)明提供的siRNA雞尾酒制劑針對致病的多因素治療葡萄膜炎、AMD、PDR和HSK等眼科疾病，并避免可能的潛在毒性。本發(fā)明所涉及的siRNA雞尾酒制劑具有以下特點1.siRNA雞尾酒制劑至少含有三種針對三種不同基因的siRNA分子(不是針對同一個基因不同區(qū)域的)，并且根據(jù)治療的需要以一定的比例配制而成；2.組成siRNA雞尾酒制劑每一個siRNA所作用基因在生物系統(tǒng)中的作用確確；3.組成siRNA雞尾酒制劑每一個siRNA合成的原料、工藝相同、化學修飾相同、儲存條件相同和制劑方法相同；4.組成siRNA雞尾酒制劑每一個siRNA在長度、平末端或粘末端可以不同，根據(jù)不同形式功能不同而定；5.由于siRNA雞尾酒制劑針對多種基因起作用，而一種細胞中可能不表達所有的siRNA雞尾酒制劑所作用的因子，所以在細胞模型中驗證組成siRNA雞尾酒制劑每一個siRNA的功能后，siRNA雞尾酒制劑還必須在相關的疾病模型、多種細胞模型、組織模型或動物模型上驗證其功效。6.每組有效的siRNA雞尾酒制劑能夠用于治療多種病理情況，用于應對致病的多種因素，如siRNA雞尾酒制劑抑制炎癥、抗血管生成和自動免疫方面；7.siRNA雞尾酒制劑以同樣的劑型和同樣的導入途徑進行治療，但是根據(jù)實驗要求和治療的需求調(diào)整給藥的劑量安排；8.—個siRNA雞尾酒制劑可以單獨使用，也可聯(lián)合如小分子抑制劑、單克隆抗體、蛋白和多肽藥物使用，還可和其他siRNA雞尾酒制劑聯(lián)合使用。圖lHKP-siRNA納米顆粒提高siRNA進入兔眼組織的能力。250ug熒光標記siRNA通過玻璃體注射導入兔的眼球中。每組中隨機選擇4個眼檢測。圖2聚合物-siRNA納米顆粒。(a)針對mVEGF,mVEGRl和mVEGFR2設計siRNA，每個基因的兩條siRNA。(b)RT-PCR分析mVEGF，mVEGRl和mVEGFR2基因mRNA表達情況。細胞轉(zhuǎn)染simVEab,simRlab和simR2ab后收集細胞提取總RNA。處理組和對照組siRNA的劑量相同，設兩個劑量。(c)制備聚合物-siRNA納米顆粒的兩種方式。HKP-siRNA顆粒由HKP水溶液與siRNA水溶液混合后制備。RPP-siRNA顆粒制備方法相同。(d)siRNA的局部和系統(tǒng)給藥。采用兩種鼠眼新生血管模型，HSK模型代表角膜疾病，ROP模型代表視網(wǎng)膜疾病。HKP-siRNA納米顆粒主要通過結膜下(SCJ)和玻璃體(IVT)，RPP-siRNA納米顆粒主要通過腹腔(IP)和靜脈(IV)兩種途徑系統(tǒng)給藥通過血液循環(huán)到達眼新生血管。圖3通過局部和系統(tǒng)給藥方式將siRNA傳輸?shù)窖劢M織中。(al)FITC標記的siClab經(jīng)HKP包裹后通過結膜下給藥24小時后，在角膜的冷凍切片中觀察到FITC標記的siClab。(a2)未經(jīng)HKP包裹的裸FITC標記的siClab結膜下給藥24小時后冷凍切片的情況。(bl)FITC標記的siClab經(jīng)RPP包裹后通過靜脈給藥24小時后，在角膜的冷凍切片中觀察到FITC標記的siClab。(b2)未經(jīng)RPP包裹的裸FITC標記的siClab靜脈給藥24小時后冷凍切片的情況。(c)ELISA分析證實mVEGF蛋白的表達下降。P4和P7時，靜脈系統(tǒng)注射RPP-simVEab后使VEGF蛋白(圓點)顯著下降(*P<0.05，n=8)，RPP-siClab組(黑)，裸simVEab組(灰)。圖4在CpG誘導的眼新生血管模型上的抗血管生成作用。(a)Systemicdelivery(IV)ofRPP-包裹simVEab(點)，simRlab(空白)andsimR2ab(斜紋)通過靜脈注射在P4時顯著縮小眼新生血管面積(*P<0.05,n=8)，對照組為RPP-siClab組(灰)和未處理組(黑)。(b)鼠眼的圖片，組別標記同(a)。(c)在P4和P7時，HPK-simVmix經(jīng)結膜下局部給藥(SCJ)和RPP-simVmix經(jīng)靜脈系統(tǒng)給藥(IV)展現(xiàn)出抗血管生成活性。處理組的新生血管面積(點和斜紋)顯著小于對照組HKP-siClab和RPP-siCl(黑和灰)，N=8，*表示P〈0.05。(d)鼠眼的圖片，組別標記同(c)。圖5simVmix在鼠HSK模型上的藥物動力學。(a)在P1和P3時HKP-simVmix和RPP-simVmix經(jīng)結膜下或靜脈給藥后P6,10,14和22時間點進行HSK疾病評分。在P14和P22時間點可觀察到RPP-simVmix處理組比RPP-siClab對照組具有顯著的抑制效果。HKP-simVmix的療效類似。(b)simVmix在HSK模型上的治療效果。在P22時HKP-simVmix(斜紋)和RPP-simVmix(點)處理組的眼保持健康狀態(tài)，而對照組.HKP-siClab(黑)和RPP-siClab(灰)表現(xiàn)出嚴重的HSK病變特征。圖6通過熒光灌注鋪片和冷凍切片分析simVmix在ROP模型上的療效。(a)比較不同導入途徑的效果。與對照組HKP-siClab組(黑和灰)相比，玻璃體注射HKP-simVmix(斜紋，n=8)表現(xiàn)出顯著抑制效果(P<0.05)。但simVmix經(jīng)結膜下注射為表現(xiàn)出治療效果。在治療方案A(n-4)或治療方案B(n-4)中，RPP-simVmix通過腹腔給藥的療效HKP-simVmix處理組類似(P<0.05)。(b)不同導入治療方案的比較。因為治療方案B有三次重復注射導致視網(wǎng)膜受損，不能做冷凍切片分析。治療方案.A中進行兩次玻璃體注射HKP-simVmix(n=5)和應用腹腔注射RPP-simVmix的治療方案A(11=4)或治療方案B(i^4)都顯示顯著的抗血管生成的效果(P<0.05)。(c)熒光灌注鋪片圖片分析。cl.缺氧誘導的ROP;c5.正常；c2.IVT傳輸HKP-siC2ab;c6.IVT傳輸HKP-simVmix;c3.IP傳輸RPP墨siC2ab;c7.IP傳輸RPP-simVmix;c4.SCJ傳輸HKP-siC2ab禾Bc8.SCJ傳輸HKP-simVmix。(d)冷凍切片圖片分析。dl.缺氧誘導的ROP;d5.Normal;d2.IVT傳輸HKP-siC2ab;d6.IVT傳輸HKP-simVmix;d3.IP傳輸RPP-siC2ab;d7.IP傳輸RPP-simVmix;d4.SCJ傳輸HKP-siC2ab禾Qd8.SCJ傳輸HKP-simVmix。圖7siRNA雞尾酒制劑顯著沉默VEGF，VEGFR1和VEGFR2基因的表達。每個基因或蛋白有五組處理未處理對照組(黑)，IVT傳輸HKP-siC2ab(白)和HKP-simVmix(斜紋)，IP傳輸RPP-siC2ab(灰)和RPP-simVmix(圓點)。(a)Q-RT-PCR分析mRNA表達水平。敲低三種基因的表達(P<0.05,n=3);下欄表示P17時治療方案B顯著敲低三種基因的表達(P〈0.05,n:3)。(b)通過ELISA分析蛋白的表達情況。上欄表示P14時治療方案A顯著下調(diào)VEGF(n=4)、VEGFR1(n=4)和VEGFR2(n=5)蛋白的表達。下欄表示P17時治療方案B顯著敲低三種蛋白的表達(P<0.05，n=3)。(c)siRNA雞尾酒制劑simVmix是新型的抗血管生成制劑Cocktail-siRNA，可通過局部和系統(tǒng)給藥，這種多靶點的抑制劑可同時阻斷VEGF(A,B,C),VEGFR1(FLT-l)和VEGFR2(Flk-l/KDR)的表達，下調(diào)整個VEGF通路。圖8在HSK模型中通過局部給藥方式傳輸siRNA雙鏈分子抑制角膜新生血管。與對照組(a)相比一直單個基因的siRNA分子能夠抑制角膜新生血管(c、d、e)。與抑制單個基因的siRNA相比simVmix表現(xiàn)出更強的抑制作用(b)。在P4時拍攝的照片。圖9在HSK模型中通過系統(tǒng)給藥方式傳輸siRNA雙鏈分子抑制角膜新生血管。與對照組(a)相比一直單個基因的siRNA分子能夠抑制角膜新生血管(c、d、e)。與抑制單個基因的siRNA相比simVmix表現(xiàn)出更強的抑制角膜新生血管的作用(b)。在P4時拍攝的照片。圖10不同處理熒光標記視網(wǎng)膜組織樣本的情況。通過結膜下、玻璃體或腹腔注射分析siRNA雙鏈分子對缺氧誘導視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜變化的影響。(al,a2)P17時正常小鼠(對照)中正常的視網(wǎng)膜血管；(bl,b2)視網(wǎng)膜新生血管廣泛的高熒光區(qū)域(箭頭所指)；(cl,c2)結膜下注射siC2ab，視網(wǎng)膜新生血管出現(xiàn)的許多斑點(箭頭所指)；(dl,d2)結膜下注射simVmix，視網(wǎng)膜新生血管出現(xiàn)的許多斑點(箭頭所指)；(el，e2，gl，g2)分別于玻璃體注射或腹腔直射注射siC2ab，視網(wǎng)膜新生血管出現(xiàn)的大的斑點(箭頭所指)；(fl，f2，hl，h2)分別于玻璃體注射或腹腔直射注射simVmix，視網(wǎng)膜新生血管出現(xiàn)小斑點(箭頭所指)。圖11缺氧誘導視網(wǎng)膜病變小鼠的組織學變化。通過結膜下、玻璃體或腹腔注射分析siRNA雙鏈分子對缺氧誘導視網(wǎng)膜病變小鼠組織學變化的影響。(al,a2)P17時正常小鼠(對照)中正常的視網(wǎng)膜血管；(bl,b2)在內(nèi)界膜上視網(wǎng)膜新生血管廣泛的GSA陽性視網(wǎng)膜新生血管擴展(箭頭所指)；(cl，c2)結膜下注射siC2ab，出現(xiàn)大的叢生的視網(wǎng)膜新生血管(箭頭所指)；(dl,d2)結膜下注射simVmix，叢生的視網(wǎng)膜新生血管(箭頭所指)；(el,e2,gl，g2)分別于玻璃體注射或腹腔直射注射siC2ab,大的葉狀視網(wǎng)膜新生血管(箭頭所指)；(fl,f2,hl,h2)分別于玻璃體注射或腹腔直射注射simVmix，偶見小的視網(wǎng)膜新生血管分布于內(nèi)界膜上(箭頭所指)。圖12應用RT-PCR分析VEGF，VEGFR1和VEGFR2mRNA水平的變化。在P14和P17時分析玻璃體注射(IPN)或腹腔直射注射(IVT)simVmix后視網(wǎng)膜組織中mRNA表達水平的變化。.具體實施例方式siRNA雞尾酒制劑的設計范例步驟l.根據(jù)疾病的病理情況設計siRNA。炎癥發(fā)病過程較為復雜，其中涉及許多種細胞和生化因子，但是不同組織中的發(fā)病進程保守。炎癥早期的癥狀之一是分泌導致缺氧、損傷等后果的激活因子。這些因子激活細胞并募集炎癥細胞進入組織中，進入的炎癥細胞又可分泌其他激活因子。誘導炎癥的一個共同生化通路是分泌TNFa和IL-lp。是花生四烯酸代謝的關鍵性限速酶，在正常情況下，COX-2基因不表達，多數(shù)組織中檢測不到，但在各種細胞因子、炎性遞質(zhì)以及促癌劑等刺激因素作用下，其表達明顯上調(diào)，其上調(diào)可能與MAPK、PKC等激酶途徑的激活有關。COX-2被激活后，可以催化花生四烯酸產(chǎn)生多種PG，參與機體的多種生理及病理過程。除了在炎癥中發(fā)生重要作用外，是關鍵的炎癥調(diào)節(jié)分子?？梢钥隙ǎ槍NFa、IL-1p和COX-2設計和制備siRNA雞尾酒制劑為治療葡萄膜炎等眼科炎癥疾病提供了有利的治療手段。步驟2.在人和鼠細胞模型中篩選設計的候選siRAN分子。從表3、4、5中選擇siRNA序列，并將這些siRNA導入有關的細胞模型中，通過RT-PCR分析、westernblot等分析確定siRNA的功效，挑選功能最強的siRNA組成表A中siRNA雞尾酒制劑。(注本發(fā)明所說的siRNA皆針對cDNA序列設計，可將T替換為U轉(zhuǎn)換為RNA;由于篇幅所限本發(fā)明僅列出正鏈序列，反義鏈序列可通過堿基配對原則從正鏈上得出；另外，本處所列出的復合物僅是舉例，根據(jù)本發(fā)明所舉之例可以獲得針對不同病理過程治療不同疾病的具有功效的siRNA雞尾酒制劑)。表A:用于抑制炎癥反應的雞尾酒siRNA制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>步驟3.在相關的動物模型中確證siRNA雞尾酒制劑的功效。馬再發(fā)性葡萄膜炎自發(fā)免疫模型是一種經(jīng)常發(fā)生的自發(fā)性，并與人葡萄膜炎具有類似發(fā)病機制的疾病模型，在該模型上測試三組siRNA雞尾酒復合物的功效。步驟4.。siRNA雞尾酒制劑的功效確證后，在鼠自發(fā)免疫和炎癥疾病模型上進一步驗證其功效。因為本發(fā)明設計的siRNA所針對的序列在人和鼠上是相同的序列，篩選出來的siRNA雞尾酒制劑可直接應用于人類疾病的治療上。應用同樣的方法，本發(fā)明為不同疾病的臨床研究和隨后的臨床應用設計并確證了以下若干siRNA雞尾酒制劑表B.第一組耙向VEGF通路siRNA雞尾酒制劑siRNA雞尾酒制劑的組成(耙向序列)<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>表C.第二組靶向VEGF通路siRNA雞尾酒制劑.<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>表H.具有抗血管生成和抗if殖活性的siRNA雞尾酒制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>(注siRNA兩端為平末端或皆為粘末端或兩端分別為平末端和粘末端；根據(jù)組成雞尾酒制劑siRNA的功效以及在疾病治療中的角色不同，不同siRNA雞尾酒制劑中siRNA組成成分可以相同也可以不同。)siRNA雞尾酒制劑與其他藥物聯(lián)合siRNA雞尾酒制劑即可單獨使用也可聯(lián)合其他藥物使用。因為siRNA藥物與如抗體和其他小分子抑制劑藥物有著很大的不同，因此在同一治療過程中聯(lián)合其他抗血管生成藥物將具有更好的療效。另外，不同siRNA雞尾酒制劑也可同時使用，己取得更好的療效。治療藥物的局部、經(jīng)皮和系統(tǒng)給藥本發(fā)明提供了治療眼新生血管疾病，尤其是眼前疾病的藥物傳輸載體構成和導入方法。本發(fā)明也提供了治療包括眼后等任何眼部組織中新生血管眼科疾病藥物傳輸載體構成和導入方法。本發(fā)明中新生血管靶向的制劑或藥物可經(jīng)局部、經(jīng)皮和靜脈注射等方法導入到眼部各組織中。通過結膜下注射局部給藥、經(jīng)皮給藥、眼周注射給藥、眼內(nèi)給藥和靜脈系統(tǒng)給藥將藥物導入眼前。本發(fā)明提供的傳輸載體成分包括1.包括非天然人工合成的聚合物、接枝聚合物、嵌段共聚物、多肽、脂質(zhì)體和膠束等能夠通過電性作用結合核酸的制劑。2.包括非天然人工合成的聚合物、多肽和糖類等親水性試劑，以減少與組織、細胞的非特異性結合；3.包括表面活性劑、多肽、非天然人工合成的聚合物和糖類等試劑利于進入組織和細胞的制劑。所指的多肽是以組氨酸-賴氨酸為骨架的一類帶正電的多肽。所指的多肽也為在第e位氨基上帶有組氨酸或咪唑的聚賴氨酸。所指多肽可以和帶負電的siRNA等核酸治療藥物以2-6或2-10以上的電荷比例自組裝形成復合物。30-70%的聚賴氨酸在伯氨基位上帶有組氨酸或咪唑。所指多肽是以組氨酸-組氨酸-賴氨酸三肽或組氨酸-組氨酸-賴氨酸-賴氨酸四肽為單元組成的線性或分枝形聚合物，分枝型聚合物由聚合物單體之間以alpha或epsilon氨基連接而成。聚賴氨酸的分子量為5000-100000，其中以10000-30000之間最為合適。圖1表明能夠?qū)iRNA高效導入到視網(wǎng)膜組織中。所指的接枝聚合物為多肽與PEG、polyoxazoline、縮聚醛(與Fleximer類似)、水解聚馬來酸酐(HPMA)、聚合甘油等親水性聚合物接枝而成。所指的接枝聚合物可以和帶負電的siRNA等核酸治療藥物以2-6或2-10以上的電荷比例自組裝形成復合物。親水性聚合物的分子量為2000-10000之間。含有親水性聚合物的接枝聚合物可以和多肽、碳水化合物、維他命、營養(yǎng)素、抗體和其他片段的配體進一步形成新的接枝聚合物。所指的非天然的合成陽離子聚合物是包括聚乙烯亞胺(PEI)和polyoxazoline含有乙基-氮(-C-C-N-)重復單元的骨架的聚合物。.所指的合成陽離子聚合物可以和帶負電的siRNA等核酸治療藥物以2-6或2-10以上的電荷比例自組裝形成復合物。在具體實施中，本發(fā)明提供了線性的polyoxazoline或帶有組氨酸或咪唑單體的線性PEI;提供了分枝形polyoxazoline或帶有組氨酸或咪唑單體的分枝形PEI。帶有組氨酸或咪唑單體的聚合物中30-70%為堿性咪唑組分。聚合物的分子量為5000-100000，其中以10000-30000之間最為合適。所指的接枝聚合物為聚合物與PEG、polyoxazoline、縮聚醛(與Fleximer類似)、水解聚馬來酸酐(HPMA)、聚合甘油等親水性聚合物接枝而成。所指的接枝聚合物可以和帶負電的siRNA等核酸治療藥物以2-6或2-10以上的電荷比例自組裝形成復合物。親水性聚合物的分子量為2000-10000之間。含有親水性聚合物的接枝聚合物可以和多肽、碳水化合物、維他命、營養(yǎng)素、抗體和其他片段的配體進一步形成新的接枝聚合物。所指的另一類陽離子聚合物是以縮聚醛為骨架的陽離子聚合物。這里所指的聚合物可以和帶負電的siRNA等核酸治療藥物以2-6或2-10以上的電荷比例自組裝形成復合物。在具體實施中，本發(fā)明提供了線性的含有堿性組分的縮聚醛聚合物，堿性組分包括賴氨酸、伯氨基、組氨酸和咪唑單體。提供了分枝形縮聚醛聚合物，堿性組分包括賴氨酸、伯氨基、組氨酸和咪唑。如果堿性組分為咪唑時，帶有賴氨酸、伯氨基、組氨酸和咪唑單體的縮聚醛占30-70%。聚合物的分子量為5000-100000，其中以10000-30000之間最為合適。接枝聚合物為聚合物與PEG、polyoxazoline、縮聚醛(與Fleximer類似)、水解聚馬來酸酐(HPMA)、聚合甘油等親水性聚合物接枝而成。這里所指的聚合物可以和PEG、polyoxazoline、縮聚醛(與Fleximer類似)、水解聚馬來酸酐(HPMA)、聚合甘油等親水性聚合物接枝而成?？s聚醛接枝聚合物中親水性聚合物可以和多肽、碳水化合物、維他命、營養(yǎng)素、抗體和其他片段的配體進一步形成新的接枝聚合物。應用針對VEGF通路因子的雞尾酒siRNA制劑治療ROP和HSKRNAi是一種基因沉默技術，指雙鏈RNA可誘導序列特異的mRNA降解，已被證明是強有力的發(fā)現(xiàn)基因和具有巨大潛力的靶向治療技術。在本發(fā)明中設計的抑制眼新生血管的RNAi制劑中，VEGF-A、VEGF-R1、VEGF-R2作為VEGF血管生成途徑中的重要調(diào)節(jié)因子被選為siRNA靶向的序列分子。這里siRNA為具有3'2nt懸垂末端的21nt雙鏈RNA，其負鏈和所耙向的siRNA互補。siRNA制劑單獨或聯(lián)合使用敲低這些基因的表達，阻斷VEGF血管生成途徑，達到抑制新生血管生成和緩解SK癥狀的目的。同樣的方法也適用于ROP等其他新生血管相關的眼科疾病。到目前為止，還沒有任何關于應用雞尾酒siRNA制劑治療眼科疾病的報道。本發(fā)明重點在于應用針^f不同基因的雞尾酒siRNA制劑治療眼科疾病。在下面的實施例中，將具體展示基于抗血管生成治療技術的獨特的siRNA雞尾酒制劑，通過局部或系統(tǒng)給藥在鼠單純皰疹基質(zhì)膜炎(HSK)模型和鼠早產(chǎn)視網(wǎng)膜病變(ROP)模型上取得顯著的療效，而且沒有觀察到明顯的副作用。實施例1設計針對VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2的siRNA雙鏈分子針對每個基因分別設計的6條siRNA雙鏈分子，共18條siRNA在Qiagen(Germantown,MD)采用化學方法合成。所有的siRNA的3'端都具有dTdT的懸垂結構，除此之外，沒有其它修飾。經(jīng)過細胞模型中的篩選后，從每六條siRNA中選出活性最好的兩條siRNA，siRNA等比例混合。siRNA序列如下mVEGF誦siRNA(a):(forward)5，-GCCGUCCUGUGUGCCGCUGdtdt-3，，(reverse)5'陽CAGCGGCACACAGGACGGCdtdt-3，；mVEGF-siRNA(b):(forward)5，-CGAUGAAGCCCUGGAGUGCdtdt-3，，(reverse)5，-GCACUCCAGGGCUUCAUCGdtdt-3，；mVEGFRl-siRNA(a):(forward)5，-GUUAAAAGUGCCUGAACUGdtdt-3，，(reverse)5'-CAGUUCAGGCACUUUUAACdtdt-3，；mVEGFRl-siRNA(b):(forward)5，-GCAGGCCAGACUCUCUUUCdtdt-3，，(reverse)5,-GAAAGAGAGUCUGGCCUGCdtdt-3，；mVEGFR2-siRNA(a):(forward)5，-GCUCAGCACACAGAAAGACdtdt-3，，(reverse)5，-GUCUUUCUGUGUGCUGAGCdtdt-3，；mVEGFR2-siRNA(b):(forward)5，-UGCGGCGGUGGUGACAGUAdtdt-3，，(reverse)5，-UACUGUCACCACCGCCGCAdtdt-3.對照組siRNA分子的序列如下Controll-siRNA(a):(forward)5，-CAGUUGCGCAGCCUGAAUGdtdt-3，，(reverse)5，-CAUUCAGGCUGCGCAACUGdtdt-3，；Controll-siRNA(b):(forward)5，-CUUAAUCGCCUUGCAGCACdtdt-3，，(reverse)5，-GUGCUGCAAGGCGAUUAAGdtdt-3.Control2-siRNA(a):(forward)5，-GCUAUGAAACGAUAUGGGCdtdt-3，，(reverse)5'-GCCCAUAUCGUUUCAUAGCdtdt陽3，；Control2-siRNA(b):(forward)5'-CCGCUGGAGAGCAACUGCAd他-3，，(reverse)5'-UGCAGUUGCUCUCCAGCGGdtdt-3，。因為siRNA為兩條鏈退火變性后使用，因此對每一對siRNA重新命名為simVEab即mVEGF-siRNAab，simRlab即mVEGFRl-siRNAab，simR2ab即VEGFR2-siRNAab,siClab即Control1-siRNAab和siC2ab即Control2-siRNAab。含有等摩爾simVEab,simRlab和simR2ab的雞尾酒siRNA制劑命名為simVEGFmix。實施例2在細胞模型上篩選候選的siRNA雙鏈分子應用RAW264.7gammaNO(-)細胞(ATCC,CRL-2278)篩選候選的鼠VEGFsiRNA，細胞培養(yǎng)條件含有10%FBS的RPMI。應用SVR細胞(ATCC,CRL-2280))篩選候選的鼠VEGFR1和VEGFR2，細胞培養(yǎng)條件:含有5%FBS的DMEM。將細胞種于6孔板中，轉(zhuǎn)染試劑為LipofectAmine(Invitrogen,Carlsbad,CA)，24小時或48小時后提取RNA，應用RNA特異PCR(RS-PCR)的方法分析RNA拷貝數(shù)的變化。實施例3制備siRNA/聚合物納米顆粒在RaninVoyagersynthesizer(PTI,Tucson,AZ)合成儀上合成分枝型的賴氨酸-組氨酸多肽復合物(HKP)，這里使用的一種HKP多肽為PT73，結構特征為(R)K(R)-K(R)-(R)K(X),whereR=KHHHKHHHNHHHNHHHN,X=C(0)NH2,K=lysine,H=histidineandN=Asperagine。PT73和siRNA分別溶于水中按照4:1的質(zhì)量比混合，形成平均直徑為150-200nm的納米顆粒。用于系統(tǒng)給藥的靶向納米共軛聚合物載體RPP為兩親性三段嵌合物，其結構特征為RGD-PEG-PEI，其中RGD為序列是H-ACRGDMFGCA-OH的粘附蛋白，PEG為聚乙二醇，PEI為聚乙烯亞胺。RPP和siRNA分別溶于水中，按照2:l的克分子比例混合，既可自組裝形成120-150nm納米顆粒，；-電位分析表明RPP-siRNA納米顆粒為具有一定空間結構的納米膠束，其中RGD位于最外端膠束的表面以吸附細胞。HKP-siRNA和RPP-siRNA皆為半透明的溶液，未出現(xiàn)沉淀聚集現(xiàn)象，并可在4°C至少保存3個月。實施例4鼠HSK角膜新生血管模型采用6-8個星期的BALB/C(H-2d)大鼠，通過角膜植入CpG-ON或I型HSV誘導角膜基質(zhì)形成新生血管。CpG-ON誘導的動物模型需要在體視顯微鏡下在lmm大小的微晶格中植入CpG-ON誘導物，植入4-7天后評價新生血管面積和VEGF蛋白的表達水平。HSV誘導的HSK模型使用30-gauge針在角膜中注入2pl含1x105plaque-formingunits(PFU)的HSV-1RE。在感染后的22天內(nèi)通過新生血管面積、血管生成評價指標、臨床評價指標評價HSK模型。動物實驗按照道德委員會的要求進行。實施例5視網(wǎng)膜新生血管ROP動物模型通過缺氧誘導C57BL/6大鼠視網(wǎng)膜新生血管。產(chǎn)后P7到P12期間仔鼠和母鼠在缺氧環(huán)境下(75%+2%02)喂養(yǎng)，隨后移至正常環(huán)境下，通過局部和系統(tǒng)給藥等不同途徑用siRNA雞尾酒制劑治療。通過熒光灌注、冰凍切片染色、RT-PCR分析mRNA水平和ELASIA分析蛋白水平。動物實驗按照道德委員會的要求進行。實施例6通過局部和系統(tǒng)給藥導入聚合物-siRNA納米顆粒在HSK動物模型中，動物經(jīng)阿伏丁麻醉后，HKP-siRNA溶液(10|al/eye)在CpG-ON植入6-24小時后或HSV病毒感染1-3天后使用32-gaugehamilton皮下注射器結膜下給藥；RPP-siRNA溶液(40嗎siRNA/100jal/mice)在CpG-ON植入6-24小時后或HSV病毒感染1-3天后通過靜脈注射方式導入。在ROP動物模型中，HKP-simVmix溶液(4jag/2pl/eye)通過結膜下(SCJ)或靜脈(IVT)導入左眼，用同樣的方法將HKP-siC2ab(4ng/2pl/eye)導入右眼。RPP-simVmix溶液(15嗎siRNA/50)al/mice)通過腹腔注射方式導入(IP)。給藥安排為P12、P14和P16或者只在P12和P13時給藥。鼠在P14和P17安樂死后評價新生血管表達情況和有關基因的表達情況。實施例7視網(wǎng)膜血管造影50mg/ml熒光染料標記溶于氯化鈉溶液的葡聚糖灌注動物眼中。摘除雙眼并在室溫下用10%的甲醛固定0.5-1小時，眼前部被切除并小心將感覺神經(jīng)性視網(wǎng)膜剝離。完全切下視網(wǎng)膜并在甘油中面朝相機平鋪固定。蓋玻片覆蓋于視網(wǎng)膜上，用熒光顯微鏡觀察。使用Image-ProPlus軟件計算出視網(wǎng)膜新生血管面積。實施例8凍干切片分析眼被摘除包埋后在適當?shù)那衅瑴囟壤鋬銮衅?。然后用生物素標記的GSA進行組織化學染色。切片浸泡在甲醇/H202，在40'C下10分鐘，用0.05MTris-bufferedsaline(TBS),pH7.6洗，在10%正常牛血清中浸泡30分鐘。然后切片在生物素標記的GSA、偶聯(lián)堿性磷酸酶和二氨聯(lián)苯胺的卵白素，用曙紅復染，固定封片。15GSA染色的部分用顯微鏡定量評價分析，拍照后用Image-ProPlus軟件計算出視網(wǎng)膜新生血管面積。實施例9通過RS-PCR和RT-PCR檢測細胞模型或組織中mRNA表達水平的變化使用RNAwiz(Ambion,約736)提取細胞培養(yǎng)中的總RNA，組織中的總RNA使用TRIzoIreagent(Invitrogen，USA)提取。RS-PCR使用的反轉(zhuǎn)錄引物為47mer的mRNA特異的引物，弓|物5'端為基因特異的引物序列，3'端為通用的引物序列5，-GAACATCGATGACAAGCTTAGGTATCGATA-3'，擴增基因的引物序列mVEGF:(RTP)5，-GAACATCGATGACAAGCTTAGGTATCGATAcaagctgcctcgccttg-3，，(GP)5,-GATGTCTACCAGCGAAGCTACTGCCGTCCG-3，；mVEGFRl:(RTP)5，-GAACATCGATGACAAGCTTAGGTATCGATAtagattgaagattccgc-3，，(GP)5'-GTCAGCTGCTGGGACACCGCGGTCTTGCCT陽3，；andmVEGFR2(RTP)5，-GAACATCGATGACAAGCTTAGGTATCGATaggtcactgacagaggcg-3，，(GP)5'-GGCGCTGCTAGCTGTCGCTCTGTGGTTCTG-3，。RNA樣品也用RT-PCR方法對樣品中的GAPDH和p-actin的RNA含量進行定量分析。實施例IO使用ELISA分析VEGF、VEGF1和VEGFR2的蛋白表達量.Retinawerecollectedaftermiceweresacrificedat在P14和P17天時，鼠輩麻醉安樂死，收集視網(wǎng)膜，在細胞裂解液中裂解(MammaliancelllysisKit,BiotechnologyDepartmentBioBasidInc,Canada)。上清用于進行ELISA分析，上清的兩可以用BCAproteinquantitativeanalysisKit定量。VEGF、VEGF1和VEGFR2的蛋白表達量QuantikineMMurineVEGF,sVEGFRl,andsVEGFR2免疫分析試劑盒(R&DSystemsInc"Minneapolis,MN)定量。每個取樣點每組6-12個組織分析。實施例ll雙鏈siRNA的篩選和納米顆粒的制備針對每個基因分別設計的6條21-ntsiRNA雙鏈分子，共18條siRNA在Qiagen(Germantown,MD)采用化學方法合成。應用RAW264.7gammaNO(-)細胞、SVR細胞、(ATCC,CRL-2278)篩選候選的鼠VEGFsiRNA、鼠VEGFR1和VEGFR2,應用RT-PCR和ELASIA的方法分析RNA拷貝數(shù)和蛋白表達的變化。從每六條siRNA中選出活性最好的兩條siRNA(圖2a),并進一步分析聯(lián)合使用siRNA的功效(圖2b)。針對鼠VEGF通路的三種聯(lián)合使用的siRNA的功效分析表明，simVEab、simRlab和simR2ab都表現(xiàn)出顯著敲低基因表達的功效。simVEab對VEGF三種等位基因VEGF188,VEGF^和VEGF,2。都具有明顯功效。這些siRNA裝載入納米傳輸載體后分析其在體內(nèi)抑制眼新生血管的作用。CpG-ON植入和HSV感染誘導角膜基質(zhì)炎模型(HSK)是一種具有典型類臨床癥狀的角膜新生血管動物模型，有典型的血管生成和淋巴管生成。新生血管面積測量、HSK疾病評分和蛋白表達水平等指標是評價眼前部siRNA介導的抗血管生成療效的最為有效的方法。在另一方面，早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP)模型具有典型的局部缺氧所誘導和PDR、AMD等變性疾病所誘導的新生血管的視網(wǎng)膜病理特征。熒光灌注、冰凍切片染色、RT-PCR分析mRNA水平和ELASIA分析蛋白水平是評價眼后抗血管生成功效的有效手段。在HSK和ROP模型中整合素受體亞型avp3和avp5選擇性在角膜、視網(wǎng)膜和脈絡膜新生血管膜增殖內(nèi)皮細胞上表達，是RGD配體理想的結合靶點。這里選擇兩種聚合物載體通過局部和系統(tǒng)給藥方式進行siRNA體內(nèi)傳輸。其中一種為優(yōu)化的分枝型的賴氨酸-組氨酸多肽復合物(PT73即HKP),用于體外和體內(nèi)siRNA的傳輸，載體以賴氨酸為骨架，具有四個分支結構，分枝結構含有多個組氮酸v賴氨酸和精氨酸重復單元；HKP和siRNA分別溶于水中按照4:1的質(zhì)量比混合，形成平均直徑為150-200nm的納米顆粒，用于HSK和ROP模型中結膜下和靜脈注射給藥(圖2c，圖2d)。用于系統(tǒng)給藥的靶向納米共軛聚合物載體RPP為兩親性三段嵌合物，其結構特征為RGD-PEG-PEI，其中RGD為序列是H-ACRGDMFGCA-OH的粘附蛋白，PEG為聚乙二醇，PEI為聚乙烯亞胺。RPP和siRNA分別溶于水中，按照2:l的克分子比例混合，既可自組裝形成120-150nm納米顆粒，用于HSK和ROP模型中腹腔和靜脈注射給藥(圖2c，圖2d)。使用前分析RPP-siRNA和HKP-siRNA的包裝效率、；-電位和粒徑大小。實施例12將siRNA高效導入眼新生血管組織中為了研究生理狀態(tài)下HKP-siRNA和RPP-siRNA納米顆粒在眼新生血管組織中的存在狀態(tài)，用HKP和RPP裝載熒光標記FITC標記的對照組siClab，通、過局部和系統(tǒng)注射兩種方式導入進HSK模型中。冰凍切片分析表明在眼前部可觀察到HKP-siRNA(圖3al)，靜脈注射導入的RPP-siRNA也在鼠眼組織中發(fā)現(xiàn)，而裸siRNA則未能觀察到(圖3a2、圖3bl)。揭示系統(tǒng)注射的RPP-siRNA能夠有效到達眼部新生血管組織中，其中納米顆粒中的靶向分子起著重要作用(圖3b2XVEGF蛋白的顯著降低也表明通過靜脈注射系統(tǒng)給藥的simVEab有效到達新生血管組織中并發(fā)揮功效(圖3c)。CpG-ON誘導并經(jīng)siRNA治療6和24小時后4天或7天采集實驗鼠眼樣品分析。RPP-simVEab在P7時的效果強于P4時的抑制效果，而裸siRNA只觀察到微弱的抑制作用。實施例13siRNA雞尾酒制劑具有很強的抗血管生成的活性VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2在CpG-ODN誘導炎癥反應所致的新生血管過程中扮演關鍵角色。因此應用siRNA抑制這些基因的表達會抑制眼新生血管的進程。與對照組siClab相比，將RPP-simVmix(為simVEab、simRlab和—simR2ab的混合物)納米顆粒(40pg/lOOnl/eye)通過系統(tǒng)給藥到入體內(nèi)后顯著縮小新生血管面積(圖4a)。單一種類siRNA抑制HSK模型中VEGF、VEGFR1和VEGFR2對新生血管的影響類似(圖4b)。因此同時使用幾種siRNA同時抑制VEGF、VEGFR1和VEGFR2的表達可能會取得更為明顯的抑制效果。為了確證此假設，將siRNA雞尾酒制劑(siRNA分別與HKP、RPP形成的納米顆粒)，HKP-simVmix(4)ag/2nl/eye)結膜下注射，RPP-simVmix(40pg/100^eye)靜脈注射，按照方法中所述在CpG誘導HSK模型角膜新生血管6和24小時后給藥，在第4和第7天比較處理組和對照組新生血管的面積(圖8)。無論局給藥還是系統(tǒng)給藥，siRNA雞尾酒制劑都比針對單一基因的siRNA制劑的療效更強(圖4a，圖4b，圖4c，圖4d)，抑制血管生成的效率在第四天從30%提高到50%，在第7天從30%提高到40%。實施例14系統(tǒng)給藥后siRNA雞尾酒制劑在HSK模型中表現(xiàn)出持久的活性選擇與臨床關系更為密切的HSV感染的HSK模型評價siRNA雞尾酒制劑的療效。與CpG-ODN誘導的HSK模型不同，HSV感染能夠產(chǎn)生更為嚴重的新生血管并在感染后14-22天出現(xiàn)角膜損傷。在Pl和P3時間點，HKP-simVmix(4lag/2nl/eye)結膜下注射，RPP-simVmix(40|ag/100pl/eye)靜脈注射，獲得顯著的療效，使眼免于新生血管所造成的損傷，降低HSK疾病的評分(圖5a)。如同在CpG誘導的HSK模型上觀察到的現(xiàn)象，無論局給藥還是系統(tǒng)給藥都取得很好的抗血管生成的療效。同時，在整個病程進展期間，局部給藥的HKP-simVmix和系統(tǒng)給藥RPP-simVmix的藥物動力學很類似。在所有的給藥安排中，在P22時還具有40%的抑制效果，表現(xiàn)出持久的抗血管生成的功效。在P6和P10時，HKP-siClab處理組的兵力評分略微升高，可能是由于注射時的物理損傷引起的。顯然未經(jīng)siRNA處理的實驗組，HSV感染后出現(xiàn)嚴重的血管生成和最終導致變形(圖5b)。很有趣的是系統(tǒng)給藥RPP-simVmix和局部給藥的HKP-simVmix的療效相似(圖9)。實施例15siRNA雞尾酒制劑在ROP模型中展現(xiàn)出抗血管生成的療效ROP模型反映了缺氧和變性疾病所引起的眼新生血管的病理過程，HKP-simVmix納米顆粒經(jīng)局部給藥的和RPP-simVmix納米顆粒經(jīng)系統(tǒng)給藥揭示它們在治療PDR和AMD疾病上的應用價值。HKP-simVmix納米顆粒采用玻璃體和結膜下局部給藥的兩種方式；由于幼鼠尾靜脈太小的限制，不能實施尾靜脈給藥，系統(tǒng)給藥改為腹腔注射給藥。這三種給藥方式都在A和B治f方案中實施，A方案為在P12和P13給藥兩次，B方案在P12、P14和P16給藥三次。A方案在P14采樣和B方案在P17，用熒光標記葡聚糖進行心臟灌注后采樣。A和B治療方案中采用玻璃體和腹腔注射給藥的新生血管面積減少一半，而結膜下局部給藥在A和B治療方案都沒有取得顯著的療效(圖6a)。通過對冷凍切片進行組織學分析對內(nèi)界膜前部GSA陽性細胞進行評價。我們發(fā)現(xiàn)玻璃體注射給藥存在易導致結構損傷的缺點，使得取樣很困難。腹腔注射給藥在所有的方案中都使新生血管面積顯著減少約50%(圖6b)。圖5c和附圖3顯示了視網(wǎng)膜灌注鋪片的結果。與對照組相比，HKP-simVmix和RPP-simVmix具有明顯的療效(圖6c2、圖6c6、圖6c3、圖6c7、圖6d)。玻璃體和腹腔注射siRNA雞尾酒制劑能夠使新生血管最小化(圖6d6、圖6d7)，而對照組樣品則在內(nèi)界膜上的視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜下發(fā)現(xiàn)大面積的新生血管。但是，和玻璃體給藥同樣劑量的HKP-simVmix經(jīng)結膜下給藥對新生血管的生長沒有影響(圖6c4、圖6c8、圖6d4、圖6d8)。本發(fā)明也證實了RPP-simVmix通過腹腔給經(jīng)血液循環(huán)可以到達眼新生血管組織中，通過血液循環(huán)傳輸是藥物到達激活的血管內(nèi)皮細胞的最好途徑。然而，結膜下注射的HKP-simVmk不能通過眼組織內(nèi)的擴散到達視網(wǎng)膜和脈絡膜。其他的冷凍切片的圖片見圖11。實施例16siRNA雞尾酒制劑能夠有效抑制VEGF通路如同上述所說，siRNA雞尾酒制劑(simVmix)經(jīng)HKP或RPP包裹成納米顆粒，經(jīng)局部或系統(tǒng)給藥導入體內(nèi)，在HSK和ROP模型上表現(xiàn)出體內(nèi)抗血管生成的療效。我們需要進一步證實的是siRNA雞尾酒制劑的療效是否來自于其對同一時間和同一空間上^L管生成通路上三個關鍵基因的抑制作用。因此，本發(fā)明進一步應用RT-PCR技術檢測simVmix處理組和對照組mRNA表達水平的變化，應用ELASIA技術檢測simVmix處理組和對照組蛋白表達水平的變化。RT-PCR分析結果表明HKP-simVmix納米顆粒、RPP-simVmix納米顆粒經(jīng)玻璃腔局部給藥和腹腔系統(tǒng)給藥后通過RNAi作用抑制了VEGF、VEGFR1和VEGFR2的表達(圖7a、圖12)。A治療方案抑制基因表達的效果強于治療方案B。ELASIA分析進一步證實了siRNA雞尾酒制劑在不同組織中的抑制效果(圖7b)。如同mRNA水平的發(fā)現(xiàn)一樣，不同劑型和不同給藥方式對VEGF、VEGFR1和VEGFR2蛋白的抑制效果相似的效果，A治療方案抑制蛋白表達的效果強于治療方案B。這些結果是我們進一步分析下調(diào)VEGF、VEGFR1和VEGFR2的表達對完整VEGF通路的影響。因為三種亞型VEGF蛋白在HA和LA進程所誘導的眼新生血管中扮演著不同的角色，因此通過siRNA雞尾酒制劑調(diào)控VEGF通路無疑代表著基因靶向治療上一個新主要進展。針對VEGFR1的siRNA通過敲低VEGFR1的表達阻斷VEGF和PIGF介導的信號轉(zhuǎn)導途徑，從而達到一定的治療目的，但是VEGFC和VEGFD主要結合VEGFR2激活LA，因此針對單獨基因的治療方法不能解決其他涉及整個VEGF通路的治療。為了更加嚴密的敲低VEGF通路的表達和避免補償或替代途徑的出現(xiàn),siRNA雞尾酒制劑是一種新的多靶點治療范式，比單一耙點的治療眼新生血管疾病的效果更為有效。<110>廣州拓譜基因技術有限公司<120>治療病眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑及制備方法<130>1<160>505<170>Patentlnversion3.1<210>1<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>1gcugaugccguagucggcguu21<210>2<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>2ccugggagcgcgugaugguca21<210>3<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>3cugcaugugcuccucggugau21<210>4<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>4ggccguacuccagcaccuuca21<210>5<211>21<212>RNA<213>'humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>5cguacuccagcaccuucauga21<210>6<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>6cuccagcaccuucaugagguu21<210>7<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>7gcgguugcagaugagguacgu21<210>8<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>8gaugagguacgugagcacguu21<210>9<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>9ggugugguacagggcguuaau21<210>10<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>10ccuggacgugauucccgcgaa21<210>11<211>23<212>'RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>11gacaucagccccccgcgcggcga23<210>12<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>12cccgcgcggcgagccggucagca23<210>13<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>13guaggcguggagcuuggccaugu23<210>14<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>14guugcagaugagguacgugagca23<210>15<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<40O15gcgguugcagaugagguacguga"<210>16<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>16ggugugguacagggcguuaauc323<210>17<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>17gggcguuaaucauccaccagcaa23<210>18<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>18gcguuaaucauccaccagcaaua23<210>19<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>19cgccacgucccggaaccacugca23<210>20<211>23<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>20ggccuggacgugauucccgcgaa23<210>21<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>21cgg3cauc3gccccccgcgcggcga25<210>22<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>22cccccgcgcggcgagccggucagca25<210>23<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>23gguaggcguggagcuuggccaugua25<210>24<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>24cgguugcagaugagguacgugagca25<210>25<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>25gugcgguugcagaugagguacguga25<210>26<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>26gggugugguacagggcguuaaucau25<210>27<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>27cagggcguuaaucauccaccagcaa25<210>28<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>28gcguuaaucauccaccagcaauaca25<210>29<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>29gccgccacgucccggaaccacugca25<210>30<211>25<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>30gggccuggacgugauucccgcgaaa25<210>31<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>31gcgccagccaguccucgaucu21<210>32<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>32ccagccaguccucgaucugca21<210>33<211>21<212>RNA<213>humanherpesvirus1/humanherpesvirus2<400>33ccggagcugcucgcacagcga21<210>34<211>21<212>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>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>440gacaagaaccagaucacauacagga<210>441<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>441ggcaucgcucagauccguggugaga<210>442<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>442gagcgugaaguuuggaagcaucaaa<210>443<2U>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus25252525252525<400>443gagaucuucuucuucaaggaccggu25<210>444<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>444cauccaguuuggugucgcgga21<210>445<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>445ccagpuuggugucgcggagca21<210>446<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>446gcggagcacggagacggguau21<210>447<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>447cggagacggguaucccuucga21<210>448<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>448gagcugugcgucuuccccuuc21<210>449<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>449gucauccaguuuggugucgcgga23<210>450<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>450gcgcggagcacggagacggguau23<210>451<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>451ggagcacggagacggguaucecu23<210>452<211>25<212>RNA<213>Homo,sapiens/Musmusculus<400>452ccaguuuggugucgcggagcacgga25<210>453<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>453cgcgcgcggagcacggagacgggua25<210>454<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>454cggagcacggagacggguaucccuu25<210>455<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>455ccaccacaacaucaccuautt21<210>456<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221〉RNA<222>(1)"(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>456gccaguuuccauucaucuutt<210>457<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>457gcgcugggcuuagaucauutt<210>458<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>458gcauaaggacgacgugaautt<210>459<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>459ccugcaacgugaacaucuutt<210>460<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>460ggaaccagcuguauuuguutt<210>461<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>461gccaguuugccggauacaatt<210>462<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220〉<221>RNA<222>(1)"(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>462ccaguuugccggauacaaatt.<210>463<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><卿>463gccggauacaaacugguautt<210>464<211>21<212>DNA<213>Homosapiens<220><221>RNA<222>(1)..(19)<223><220><221>DNA<222>(20)..(21)<223><400>464ccggauacaaacugguauutt<210>465<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>465uggcaccaccacaacaucaccuauu<210>466<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>楊cacaacaucaccuauuggauccaaa25<210>467<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>467gacgcagacaucgucauccaguuug<210>468<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>468ggaaacccugccaguuuccauucau<210>469<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>469cauucaucuuccaaggccaauccua<210>470<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>470acgaugccugcaacgugaacaucuu<210>471<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>471gcggagauugggaaccagcuguauu<210>472<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>472cggagauugggaaccagcuguauuu<210>473<211>25<212>RNA<213>Homosapiens<400>473caguaccgagagaaagccuauuucu<210>474<211>2525252525252525<212>RNA<213>Homosapiens<400>474aagccuauuucugccaggaccgcuu25<210>475<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>475cagggauuuugucaaggagga21<210>476<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>476gggauuuugucaaggaggauu21<210>477<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>477ggauucagcauugauuuuacu21<210>478<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>478ggugguccugguagcuuuuau21<210>479<211>21<212>RNA.<213>Homosapiens/Musmusculus<400>479gguagcuuuuauuggcaaggu21<210>480<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>480caggaguuccaagagcagcaa21<210>481<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>481gagcagcaaggacuuugggaa21<210>482<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>482ggacuuugggaaugguuuaua21<210>483<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>483gguuuauauuuaugaugggaa21<210>484<211>21<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>484cccuagcauuuuaaaucaaga21<210>485<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>485cagggauuuugucaaggaggauu23<210>486<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>486gggauuuugucaaggaggauuca23<210>487<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>487-ggauucagcauugauuuuacima23<210>488<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>488gguccugguagcuuuuauuggca23<210>489<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>489cugguagcuuuuauuggcaaggu23<210>490<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>4卯gaguuccaagagcagcaaggacu23<210>491<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>491caagagcagcaaggacuuuggga23<210>492<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>492ggacuuugggaaugguuuauauu23<210>493<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>493gaaguguacccuagcauuuuaaa23<210>494<211>23<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>494cccuagcauuuuaaaucaagaca23<210>495<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>495cagggauuuugucaaggaggauuca25<210>496<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>496gauuuuguc3aggaggauucagcau<210>497<211>25<212>RNA<21.3>Homosapiens/Musmusculus<400>497gauuuuacuaaagcugacagaguac<210>柳<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>498uuacuaaagcugacagaguacuucu<210>499<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>499gugguccugguagcuuuuauuggca<210>500<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>500cugguagcuuuuauuggcaagguca<210>501<2I1>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>501gaguuccaagagcagcaaggacuuu<210>502<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>502ccaagagcagcaaggacuuugggaa<210>503<211>25<212>RNA25252525252525<213>Homosapiens/Musmusculus<400>503ggacuuugggaaugguuuauauuua25<210>504<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>504gaaugguuimusuuimugaugggaa25<210>505<211>25<212>RNA<213>Homosapiens/Musmusculus<400>505caagcccugguaugagcccaucuau2權利要求1.一種治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于該多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑是由至少三個小干擾RNA序列和特定的小干擾RNA傳輸載體組成，能將小干擾RNA高效導入眼組織中；這些小干擾RNA作用于三個或三個以上不同基因的靶序列，可同時具有將三個或三個以上的基因靶點敲低的功能；所述的小干擾RNA傳輸載體為生理鹽水、糖類、聚合物、脂類或膠束的溶液。2.根據(jù)權利要求1所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的靶序列是完整或部分的皰疹病毒基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分促進炎癥反應途徑基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分促進血管生成途徑基因轉(zhuǎn)錄的raRNA、完整或部分促進細胞增殖途徑基因轉(zhuǎn)錄的mRNA、完整或部分病毒感染所需的基因組RNA，和/或，完整或部分介導病毒感染的基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA.3.根據(jù)權利要求1或2所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制齊U，其特征在于所述的每一個小干擾RNA的靶序列在人和鼠或非人靈長類動物的基因序列上同源，編碼相同或類似的蛋白。4.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個或三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼皰疹病毒UL5蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gguaggcguggagcuuggccaugua-3'，antisense:5，-uacauggccaagcuccacgccuacc-3，)、針對編碼皰疹病毒UL29蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ggucg皿gccggccaugccguagua-3',antisense:5，-uacuacggcauggccggcaacgacc-3，)、針對編碼人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcgcgcggagcacggagacgggua-3'，antisense:5，-uacccgucuccgugcuccgcgcgcgc-3，)。5.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小千擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠腫瘤壞死因子a蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-caagcccugguaugagcccaucuau-3',antisense:5，-auagaugggcucauaccagggcuug-3，)、針對編碼人和鼠白介素1P蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-guuccccaacugguacaucagcacc-3',antisense:5'-ggugcugauguaccaguuggggaac-3，)、針對編碼人和鼠環(huán)氧合酶-2蛋白mRNA的小干擾RNA(5'-ggucuggugccuggucugaugaugu-3',antisense:5，-acaucaucagaccaggcaccagacc-3，)。6.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca曙3'，antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3'，antisense:5,-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)、針對編碼人禾口鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gacuuccugaccuuggagcaucuca-3'，antisense:5，-ugagaugcuccaaggucaggaaguc-3，)。7.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gacuuccugaccuuggagcaucuca-3',antisense:5，陽ugagaugcuccaaggucaggaaguc-3')、針對編碼人禾口鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小千擾腿(sense:5'國ccaugccaaguggucccaggcugca-3',antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。8.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gaguuggcagugcaauaccugaaca-3',antisense:5，-uguucagguauugcacugccaacuc-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白ra腿的小干擾飄(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3'，antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人禾卩鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5'-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。9.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠b型成纖維生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gaagagagaggaguugugucuauca-3',antisense:5，-ugauagacacaacuccucucucuuc-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3',antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。10.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cugagagauuguaccuucuaguuga-3',antisense:5，-ucaacuagaagguacaaucucucag-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'國ccaugccaaguggucccaggcugca陽3'，antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人禾卩鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)。11.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中三個以上、，小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cugagagauuguaccuucuaguuga國3'，antisense:5，-caacuagaagguacaaucucucag-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾腿(sense:5'-ccaugccaaguggucccaggcugca-3',antisense:5，-ugcagccugggaccacuuggcaugg-3，)、針對編碼人禾卩鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白m纖的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3',antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)、針對編碼人和鼠成纖維生長因子b蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gaagagagaggaguugugucuauca-3',antisense:5'-ugauagacacaacuccucucucuuc-3，)。12.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠A-RAF蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccuguggcuacaaguuccaccagca-3',antisense:5，-ugcugguggaacuuguagccacagg-3，)、針對編碼人和鼠mT0R蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gcgcgaaccucagggcaagaugcuu-3'，antisense:5，-aagcaucuugcccugagguucgcgc-3，)、針對編碼人和鼠缺氧誘導因子Ia蛋白mRNA的小干擾腿(sense:5'-caggacaguacaggaugcuugccaa誦3'，antisense:5，-uuggcaagcauccuguacuguccug-3，)、針X寸編碼人禾口鼠整合素aV蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gugguccugguagcuuuuauuggca-3'，antisense:5，-ugccaauaaaagcuaccaggaccac-3，)。13.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠A-RAF蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccuguggcuacaaguuccaccagca-3',antisense:5，-ugcugguggaacuuguagccacagg國3')、針對編碼人和鼠mT0R蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gcgcgaaccucagggcaagaugcuu-3',antisense:5，-aagcaucuugcccugagguucgcgc-3，)、針對編碼人和鼠缺氧誘導因子Ia蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-caggacaguacaggaugcuugccaa-3'，antisense:5，-uuggcaagcauccuguacuguccug-3，)。14.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中至少三個小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠A-RAF蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccuguggcuacaaguuccaccagca-3',antisense:5，-ugcugguggaacuuguagccacagg-3，)、針對編碼人和鼠mTOR蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gcgcgaaccucagggcaagaugcuu-3',antisense:5，-aagcaucuugcccugagguucgcgc-3,)、針對編碼人和鼠整合素aV蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gugguccugguagcuuuuauuggca-3',antisense:5，-ugccaauaaaagcuaccaggaccac-3，)。15.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cccugagagauuguaccuucuaguu-3'，antisense:5，-aacuagaagguacaaucucucaggg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcagacguguaaauguuccugcaa-3'，antisense:5，-uugcaggaacauuuacacgucugcg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-ccaacuaccucaagagcaaacguga-3'，antisense:5，-ucacguuugcucuugagguaguugg-3，)、針對編碼人禾卩鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gacuuccugaccuuggagcaucuca國3'，antisense:5，-ugagaugcuccaaggucaggaaguc-3，)。16.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠胎盤生長因子蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cccugagagauuguaccuucuaguu-3'，antisense:5，-aacuagaagguacaaucucucaggg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'隱cgcagacguguaaauguuccugcaa-3'，antisense:5，-uugcaggaacauuuacacgucugcg-3,)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子B蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-gugacugugcagcgcugugguggcu-3',antisense:5，-agccaccacagcgcugcacagucac-3，)、針對編碼人和鼠b型成纖維生長因子蛋白mRNA的小干擾腿(sense:5'-gaagagagaggaguugugucuauca-3',antisense:5，-ugauagacacaacuccucucucuuc-3，)。17.根據(jù)權利要求1、2或3所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA由序列表中三個以上小干擾RNA組成，至少包括針對編碼人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcgcgcggagcacggagacgggua-3'，antisense:5，-uacccgucuccgugcuccgcgcgcg-3，)、針對編碼人和鼠血管內(nèi)皮生長因子A蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'-cgcagacguguaaauguuccugcaa-3',antisense:5，-uugcaggaacauuuacacgucugcg-3，)、針對編碼皰疹病毒UL5蛋白m腿的小干擾RNA(sense:5'-gguaggcguggagcuuggccaugua-3'，antisense:5，-uacauggccaagcuccacgccuacc-3，)、針對編碼皰疹病毒UL29蛋白mRNA的小干擾RNA(sense:5'陽ggucguugccggccaugccguagua-3',antisense:5，-uacuacggcauggccggcaacgacc-3，)。18.根據(jù)權利要求1所述的用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的糖類小干擾RNA傳輸載體為葡萄糖溶液；所述的聚合物類小干擾RNA傳輸載體為聚陽離子結合分子、陽離子膠束、陽離子多肽、具有親水性基團分枝結構的聚合物、非天然的陽離子聚合物、陽離子聚縮醛聚合物、具有親水性基團分枝結構的聚縮醛聚合物、具有功能性基團的陽離子聚合物和具有功能性基團-親水性基團-聚合物結構的嵌段式聚合物；所述的脂類小干擾RNA傳輸載體為陽離子脂質(zhì)體。19.根據(jù)權利要求18所述的用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的陽離子多肽小干擾RNA傳輸載體由組氨酸和賴氨酸構成的異量分子聚合物，和小干擾RNA形成100-400nrn直徑的納米顆粒。20.根據(jù)權利要求1所述的用于治療眼科疾病的小干擾RNA雞尾酒制劑，其特征在于所述的小干擾RNA是長度為19或20或21或22或23或24或25或26或27堿基對的雙鏈RNA;小干擾RNA是兩端皆為平末端或皆為粘末端或兩端分別為平末端和粘末端的雙鏈RNA;小干擾RNA是粘末端的懸垂核苷酸的長度為l-4核苷酸的雙鏈RNA;小干擾RNA由天然的核苷酸組成或由人工合成的核苷酸或由人工修飾的核苷酸組成的雙鏈RNA。21.上述用于治療眼科疾病的雞尾酒制劑中多靶點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用抑制血管內(nèi)皮生長因子通路相關基因表達的小干擾RNA和抑制成纖維生長因子通路上相關基因表達的小干擾RNA;選用抑制促進炎癥反應通路相關基因表達的小干擾RNA和抑制促進血管生成通路上相關基因表達的小干擾RNA;選用抑制促進血管生成通路上相關基因表達的小干擾RNA和抑制皰疹病毒基因表達的小千擾RNA;選用抑制促進血管生成通路上相關基因表達的小干擾RNA和抑制內(nèi)皮細胞增殖基因表達的小干擾RNA;或選用抑制促進炎癥反應通路相關基因表達的小干擾RNA和抑制皰疹病毒基因表達的小干擾RNA。22.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠腫瘤壞死a因子基因、人和鼠白介素-IP、人和鼠環(huán)氧合酶-2基因的表達。23.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制皰疹病毒UL5基因、皰疹病毒UL29基因、人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9基因的表達。24.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體2基因的表達。25.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠缺氧誘導因子基因的表達。26.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-2基因的表達。27.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1和人和鼠胎盤生長因子基因的表達。28.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠b型成纖維生長因子基因的表達。29.根據(jù)權利要求21所述的多耙點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體l、人和鼠mTOR基因的表達。30.根據(jù)權利要求21所述的多靶點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠mT0R、人和鼠A-ARF和人和鼠缺氧誘導因子基因的表達。31.根據(jù)權利要求21所述的多靶點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠血管內(nèi)皮生長因子、人和鼠血管內(nèi)皮生長因子受體1和人和鼠mT0R基因的表達。32.根據(jù)權利要求21所述的多靶點小干擾RNA的制備方法，其特征在于選用序列表中的小干擾RNA序列抑制人和鼠mT0R、人和鼠A-ARF、人和鼠整合素整合素aV蛋白基因、人和鼠缺氧誘導因子基因的表達。33.上述用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑制備方法，其特征在于選用三條或三條以上的小干擾RNA根據(jù)需要比例混合，混合比例以制備所得制劑對所針對基因表達的抑制率達50%以上的功效來確定。34.根據(jù)權利要求33用于治療眼科疾病的多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑制備方法，其特征在于選用至少3條小干擾RNA以1:1:l或1:2:1或1:2:3或1:2:4或1:3:6:或1:5:10或根據(jù)需要的比例制備多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑。35.根據(jù)權利要求33用于治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑制備方法，其特征在于選用4條小干擾RNA以1:1:1:或1:2:1:1或1:1:2:1或1:1:1:2或1:2:3:4或1:3:5:7或1:5:10:20或根據(jù)需要的比例制備多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑。36.上述多耙點小干擾RNA雞尾酒制劑用于作為治療眼科疾病的藥物，可用作治療與炎癥和新生血管相關或部分與炎癥和新生血管相關的眼科疾病的藥物制劑。全文摘要本發(fā)明公開了治療眼科疾病的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑及其制備方法，所指多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑由三種或三種以上針對三種或三種以上不同基因的小干擾RNA組成，同時敲低多個致病基因的表達；所指多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑根據(jù)所治療的疾病不同由特定的多種小干擾RNA以一定的比例配制而成。所指的多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑為多個不同長度為19到27nt的具有平末端或懸垂末端的雙鏈RNA分子；所指多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑中的RNA序列同時具備對人、鼠和非人靈長類基因靶點的同源性；多靶點小干擾RNA雞尾酒制劑所針對的基因序列分別為(1)病毒感染相關的基因；(2)引起炎癥的基因；(3)新生血管相關的基因。為醫(yī)治的多種眼科疾病提供了一個新鮮的治療手段，包括早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、老年眼底黃斑、老年糖尿病引起的視網(wǎng)膜病變、單純皰疹性角膜基質(zhì)炎和葡萄膜炎等。文檔編號A61K48/00GK101199858SQ200710030919公開日2008年6月18日申請日期2007年10月18日優(yōu)先權日2007年10月18日發(fā)明者梁曉玲,度程,陽陸申請人:廣州拓譜基因技術有限公司