專(zhuān)利名稱(chēng)：一種促進(jìn)傷口愈合的蛻皮甾酮乳膏的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物新用途、新劑型的研發(fā)，具體涉及蛻皮甾酮在促進(jìn)傷口愈合方面的作用的研究，及蛻 皮甾酮乳膏的制備方法、量效分析、及療效觀察。
2背景技術(shù)：
蛻皮甾酮(ecdysterone，B-ecdysone)屬于昆蟲(chóng)生長(zhǎng)代謝調(diào)節(jié)激素，該化合物可由鴨跖草科藍(lán)耳草屬植物 露水草Cynotis arach加idea C. B. Clarke等植物中提取制得。也是目前藥用蛻皮甾酮的主要提取途徑。
蛻皮甾酮的可用于(l)皮膚再生；(2)化妝品；(3)抗糖尿??；(4)治療哮喘；(5)治療癡呆等腦缺血性疾病；
(6)改善腦功能障礙所造成的記憶損傷。
蛻皮甾酮的藥理作用機(jī)制有a〉蛋白同化作用；(2)抗氧化作用；(3)適應(yīng)原樣作用。
本發(fā)明的目的是在于提供蛻皮甾酮的的新用途，新劑型。即在促進(jìn)傷口愈合中的應(yīng)用，以及將其制備 成乳膏制劑后的量效學(xué)分析及療效對(duì)比觀察。
目前用于促進(jìn)傷口愈合的外用藥有(l)傷口愈合填充膏主要有填充傷口和防止感染的作用。(2)膚康 寧能夠促進(jìn)機(jī)體在傷口部位產(chǎn)生免疫細(xì)胞，有的因子能夠"調(diào)配細(xì)胞"前往傷口處增援。(3)無(wú)推進(jìn)劑噴 霧狀皮膚貼劑組合物形成覆蓋傷口的保護(hù)性薄膜，將生理活性成分或其前藥運(yùn)送至或穿透皮膚。(4)苯扎 氯銨貼主要作用為殺菌、止血、護(hù)創(chuàng)。(5)云南白藥創(chuàng)可貼顯著提高血小板聚集；對(duì)抗二甲苯所致小鼠 耳腫脹；促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bEGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)。
以上藥物的愈創(chuàng)機(jī)理也是創(chuàng)傷愈合的關(guān)鍵點(diǎn)(l)創(chuàng)面早期的止血處理；(2)創(chuàng)面早期的清潔處理；(3)創(chuàng) 面上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等的快速增殖；(4)抗生素的使用，用于防止創(chuàng)面感染。
蛻皮甾酮乳膏的愈創(chuàng)機(jī)理為(l)早期的創(chuàng)面護(hù)理；(2)促進(jìn)創(chuàng)面上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等的 快速增殖；(3)早期抗炎作用；(4)早期創(chuàng)面消腫作用。
目前市場(chǎng)上的愈創(chuàng)藥物中又以云南白藥創(chuàng)可貼的愈創(chuàng)機(jī)理最全面，愈創(chuàng)效果相對(duì)較好。但其主要注重 早期創(chuàng)面止血作用，其他幾個(gè)方面的作用相對(duì)較弱。而蛻皮甾酮的最重要作用是促進(jìn)創(chuàng)面上皮細(xì)胞、內(nèi)皮 細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等的快速增殖，而這才是形成肉芽組織及創(chuàng)傷愈合的關(guān)鍵點(diǎn)。所以本發(fā)明主要目的是將 蛻皮甾酮制備成便攜易帶的乳膏制劑；并做量效學(xué)分析，找到最佳有效濃度；同時(shí)將最佳有效濃度的蛻皮 甾酮乳膏作為實(shí)驗(yàn)組，以云南白藥創(chuàng)可貼作為對(duì)照組，觀察在新西蘭大白兔創(chuàng)傷動(dòng)物模型中的促愈效果， 并作病理切片分析電鏡及光鏡下上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等增殖情況，從而得出蛻皮甾酮乳膏的 愈創(chuàng)效果結(jié)論。
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發(fā)明內(nèi)容
一種促進(jìn)傷口愈合的蛻皮甾酮乳膏的制備方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行
(1) 、配方包括如下組分-
油相單硬脂酸甘油酯35g ，硬脂酸130 150g ，白凡士70g ，氮酮20ml ,尼泊金乙酯lg。 水相純化水560 580ml ,硼砂4g ,十二垸基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ,甘油160ml ,尿囊素3g。 藥相蛻皮甾酮25g溶于75。/。乙醇10ml中做成蛻皮甾酮溶液。
(2) 、方法按以下步驟進(jìn)行
① 、將油相與水相分別水浴加熱至9(TC,并水浴保溫；
② 、將25g蛻皮甾酮溶解于75。/。乙醇10ml中做成藥相；
③ 、在高剪切乳化機(jī)以2000-6000r.min'的轉(zhuǎn)速攪拌下，將水浴溶解后的油相加入到水相中；
④ 、在攪拌3-10min后，待其完全乳化，撤離水浴保溫，自然冷卻；
、待膏體冷卻到6(TC-5(TC時(shí)，將溶解好的藥相，即含25g蛻皮甾酮的乙醇溶液加入到膏體中； 、以2000-6000r.min—i的轉(zhuǎn)速剪切勻質(zhì)10-30min后形成微乳，繼續(xù)以中低速度攪拌，使膏體均勻脫 氣，溫度降至42'C-35'C時(shí)停止攪拌，自然冷卻至室溫，則可做成濃度為2.5%的蛻皮甾酮乳膏。 ⑦、最后制成的乳膏總量控制在1000g，可用純化水加減做到。具體實(shí)施例方式
(1)、蛻皮甾酮乳膏的量效學(xué)分析分別做成0.625%、 1.25%、 2.5%、 5%四種不同濃度的蛻皮甾酮乳膏 實(shí)施例一 配方包括如下組分
油相單硬脂酸甘油酯35g ，硬脂酸130 150g ,白凡士70g ,氮酮20ml ，尼泊金乙酯lg。 水相純化水560 580ml ，硼砂4g ，十二烷基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ，甘油160ml ，尿囊素3g。 藥相蛻皮甾酮6. 25g溶于75y。乙醇10ml中做成蛻皮甾酮溶液。 方法按以下步驟進(jìn)行
① 、將油相與水相分別水浴加熱至9(TC，并水浴保溫；
② 、將6.25g蛻皮甾酮溶解于75%乙醇1 Oml中做成藥相；
③ 、在高剪切乳化機(jī)以2000-6000r.min'的轉(zhuǎn)速攪拌下，將水浴溶解后的油相加入到水相中；
④ 、在攪拌3-10min后，待其完全乳化，撤離水浴保溫，自然冷卻；
⑤ 、待膏體冷卻到6(TC-50'C時(shí)，將溶解好的藥相，即含6.25g蛻皮甾酮的乙醇溶液加入到膏體中； 、以2000-6000r.min—i的轉(zhuǎn)速剪切勻質(zhì)10-30min后形成微乳，繼續(xù)以中低速度攪拌，使膏體均勻脫
氣，溫度降至42'C-35'C時(shí)停止攪拌，自然冷卻至室溫，則可做成濃度為0.625%蛻皮甾酮乳膏。 ⑦、最后制成的乳膏總量控制在1000g，可用純化水加減做到。 實(shí)施例二 配方包括如下組分
油相單硬脂酸甘油酯35g ,硬脂酸130 150g ,白凡士70g ,氮酮20ml ,尼泊金乙酯lg。 水相純化水560 580ml ，硼砂4g ,十二烷基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ，甘油160ml ，尿囊素3g。 藥相蛻皮甾酮12. 5g溶于75y。乙醇10rnl中做成蛻皮甾酮溶液。 方法按以下步驟進(jìn)行
① 、將油相與水相分別水浴加熱至9(TC，并水浴保溫；
② 、將12.5g蛻皮甾酮溶解于75%乙醇1 Oml中做成藥相；
③ 、在高剪切乳化機(jī)以2000-6000r.mirf'的轉(zhuǎn)速攪拌下，將水浴溶解后的油相加入到水相中；
④ 、在攪拌3-10min后，待其完全乳化，撤離水浴保溫，自然冷卻；
⑤ 、待膏體冷卻到6(TC-5(TC時(shí)，將溶解好的藥相，即含12.5g蛻皮甾酮的乙醇溶液加入膏體中-，
⑥ 、以2000-6000r.min-'的轉(zhuǎn)速剪切勻質(zhì)10-30min后形成微乳，繼續(xù)以中低速度攪拌，使膏體均勻脫
氣，溫度降至42'C-35'C時(shí)停止攪拌，自然冷卻至室溫，則可做成濃度為1.25%的蛻皮甾酮乳膏。
⑦ 、最后制成的乳膏總量控制在1000g,可用純化水加減做到。 實(shí)施例三
配方包括如下組分
油相單硬脂酸甘油酯35g ,硬脂酸130 150g ,白凡士70g ，氮酮20ml ，尼泊金乙酯lg。 水相純化水560 580ml ，硼砂4g ，十二烷基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ，甘油160ml ,尿囊素3g。 藥相蛻皮甾酮25g溶于75y。乙醇10ml中做成蛻皮甾酮溶液。 方法按以下步驟進(jìn)行
① 、將油相與水相分別水浴加熱至9(TC，并水浴保溫；
② 、將25g蛻皮甾酮溶解于75%乙醇1 Oml中做成藥相；
③ 、在高剪切乳化機(jī)以2000-6000r.min皿'的轉(zhuǎn)速攪拌下，將水浴溶解后的油相加入到水相中； 、在攪拌3-10min后，待其完全乳化，撤離水浴保溫，自然冷卻；
⑤、待膏體冷卻到6(TC-5(TC時(shí)，將溶解好的藥相，即含25g蛻皮甾酮的乙醇溶液加入到膏體中； 、以2000-6000r.min"的轉(zhuǎn)速剪切勻質(zhì)10-30min后形成微乳，繼續(xù)以中低速度攪拌，使膏體均勻脫 氣，溫度降至42'C-35'C時(shí)停止攪拌，自然冷卻至室溫，則可做成濃度為2.5%的蛻皮甾酮乳膏。 ⑦、最后制成的乳膏總量控制在1000g，可用純化水加減做到。
實(shí)施例四
配方包括如下組分油相單硬脂酸甘油酯35g ,硬脂酸130 150g ,白凡士70g ，氮酮20ml ,尼泊金乙酯lg。 水相純化水560 580tnl ,硼砂4g ，十二烷基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ，甘油160ml ，尿囊素3g。 藥相蛻皮甾酮50g溶于7596乙醇10ml中做成蛻皮甾酮溶液。 方法按以下步驟進(jìn)行
① 、將油相與水相分別水浴加熱至9(TC，并水浴保溫；
② 、將50g蛻皮甾酮溶解于75%乙醇1 Om沖做成藥相；
③ 、在高剪切乳化機(jī)以2000-6000r.min'的轉(zhuǎn)速攪拌下，將水浴溶解后的油相加入到水相中； 、在攪拌3-10min后，待其完全乳化，撤離水浴保溫，自然冷卻；
⑤ 、待膏體冷卻到60'C-5(TC時(shí)，將溶解好的藥相，即含50g蛻皮甾酮的乙醇溶液加入到膏體中；
⑥ 、以2000-6000r.mirT'的轉(zhuǎn)速剪切勻質(zhì)10-30min后形成微乳，繼續(xù)以中低速度攪拌，使膏體均勻、
脫氣，溫度降至42'C-35'C時(shí)停止攪拌，自然冷卻至室溫，則可做成濃度為5%的蛻皮甾酮乳膏。
⑦ 、最后制成的乳膏總量控制在1000g,可用純化水加減做到。 通過(guò)以上實(shí)施例，分別做成濃度為0.625%、 1.25%、 2.5%、 5%的蛻皮甾酮乳膏。 動(dòng)物模型制作將新西蘭大白兔背部脫毛備皮，經(jīng)兔耳緣靜脈予以戊巴比妥鈉麻醉(35mg/kg)，背部常
規(guī)消毒，在每只兔子背部的5個(gè)位置，都用外科方法減去5塊直徑1.5cm的圓形全層皮膚，深達(dá)肌膜，制 成全皮層缺損動(dòng)物模型。
實(shí)驗(yàn)分組將9只兔子成功建立創(chuàng)傷缺損模型后，用生理鹽水沖洗傷口，碘酒、酒精消毒，每只兔子 的第一個(gè)傷口設(shè)為空白對(duì)照，只涂抹乳膏基質(zhì)；第二個(gè)傷口涂抹0.625%蛻皮甾酮乳膏；第三個(gè)傷口涂抹 1.25%蛻皮甾酮乳膏；第四個(gè)傷口涂抹2.5%蛻皮甾酮乳膏；第五個(gè)傷口涂抹5%蛻皮甾酮乳膏。每個(gè)傷口 一次涂抹的乳膏總量為0.5ml。所有傷口敷藥后均用凡士林油紗敷蓋，再用干紗布包扎。傷口每大鹽水沖 洗、酒精消毒后各用原法處理?yè)Q藥。每只兔分籠飼養(yǎng)。
指標(biāo)檢測(cè)其中8只兔子分別T造模當(dāng)天及建模后4、 8、 12天，以同定距離、固定焦距、固定像素 分別對(duì)各個(gè)創(chuàng)面進(jìn)行數(shù)碼拍照，以imagepro plus6.0軟件處理照片，得出各個(gè)創(chuàng)面愈合過(guò)程中的面積，并 計(jì)算傷n愈合率傷口愈合率=(原始創(chuàng)面面積一未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積；第9只兔子分別于創(chuàng)傷 組織局部取材，常規(guī)固定、包埋、切片經(jīng)HE染色。
統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件，進(jìn)行配伍組設(shè)計(jì)資料的方差分析(two-way ANOVA)。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果各處理因素組4天、8天、12天后傷口愈合率的比較見(jiàn)表1。
表l 各處理因素組4天、8天、12天后傷口愈合率的比較(5士力
組另u4天后傷口愈合率(°/0)8天后傷口愈合率(°/。)12天后傷口愈合率(°/。)
空白對(duì)照組817.8 士 2.422.6 士 3.6"
0.625%組813.2 士2.4 32.8 士 3.6"70.2 士3.3女女"
1.2500/0組8]4.3 士2.434,7士3.6"79.2 士 3.3女*
2.500%組822.7 士 2.455.4 士3.6**國(guó)隱盍贏參*92.3 士 3.3女a(chǎn)b"參
5.000%組823.6 士2.化34.0 士 3.6"69.0 士3.3女女"
F0.9550.2690.055
P0.0110.0000働
★P<0.05, a女P0.01,vs空白對(duì)照組屬P0.05,羅BPO.Q，vs0.625。/。蛻皮甾酮乳育組AP0.05,▲ ▲PO.0], vsl.25。/o蛻皮甾鵬乳膏組;
PO.05, "P0.01,vs2.5。/。蛻皮甾酮乳膏組,P《0.05,拳參PO.Ol， vs5。/。蛻皮甾酮乳膏組。
術(shù)后4天，五組愈合率比較，8只兔子之間無(wú)顯著性差異(F<1),各處理因素組之間的比較有意義 (P<0.05)。其中除5%蛻皮甾酮乳膏組與0.625%蛻皮甾酮乳膏組之間差異有顯著性意義(P<0.05)， 5%蛻 皮甾酮乳膏組傷口愈合較快以外，其他各組之間的差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。
術(shù)后8天，五組愈合率比較，8只兔子之間差異無(wú)顯著性意義(F〈)，各處理因素組之間的比較有意義 (PO.Ol)。其中2.5°/。蛻皮甾酮乳膏組與其余各組之間差異有顯著性意義(PO.Ol)， 2.5%蛻皮甾酮乳膏組 較其余各組傷口愈合較快；除2.5%蛻皮甾酮乳膏組外，其余各組之間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。
術(shù)后12天，五組愈合率比較，8只兔子之間差異無(wú)顯著性意義(FO,各處理因素組之間的比較有意義(PO.Ol)。其中空白對(duì)照組與其余各組之間差異有顯著性意義(P<0.01)，空白對(duì)照組較其余各組傷口 愈合較慢。而2.5。/。蛻皮甾酮乳膏組與空白對(duì)照組、0.625%蛻皮甾酮乳膏組、5%蛻皮甾酮乳膏組之間差異 有顯著性意義(PO.01), 2.5%蛻皮甾酮乳膏組傷口愈合較快；2.5%蛻皮甾酮乳膏組與1.25%蛻皮甾酮乳膏 組之間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。
各濃度蛻皮甾酮乳膏愈合率對(duì)比曲線圖見(jiàn)"說(shuō)明書(shū)附圖"之圖1。
肉眼觀察
術(shù)后4天，各處理因素組創(chuàng)面均紅腫、濕潤(rùn)，無(wú)明顯膿液形成，無(wú)明顯感染，傷口收縮不明顯。
術(shù)后8天，空白對(duì)照組仍明顯滲出，個(gè)別傷口出現(xiàn)潰瘍，創(chuàng)面的收縮與蛻皮甾酮乳膏各濃度組相比有 差異。而2.5%蛻皮甾酮乳膏組傷口濕潤(rùn)、無(wú)感染，傷口表面及皮下組織收縮明顯，愈合最快；
術(shù)后12天，蛻皮甾酮乳膏各濃度組傷口進(jìn)一步收縮，創(chuàng)面干燥，表面結(jié)厚痂，創(chuàng)面愈合較快，創(chuàng)面 大部分已經(jīng)愈合；尤其是2.5%蛻皮甾酮乳膏組已經(jīng)接近完全愈合，創(chuàng)面基本消失。而正常對(duì)照組傷口面積 較術(shù)后8大有明顯收縮，創(chuàng)面邊緣結(jié)痂，但仍有很大面積沒(méi)有愈合。
顯微觀察
術(shù)后4天，五組傷口均以滲出和充血為主，未見(jiàn)肉芽組織明顯增生，五組比較無(wú)明顯差異。
術(shù)后8天，空白對(duì)照組最主要特點(diǎn)是化膿明顯伴潰瘍形成，上皮增生不明顯。各濃度蛻皮甾酮乳膏組 創(chuàng)面雖有滲出，但肉芽組織初步形成，少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原開(kāi)始形成，上皮細(xì)胞少許增生。
術(shù)后12犬，空白對(duì)照組表皮仍有部分缺損，炎性細(xì)胞大量滲出，僅少許肉芽組織形成，上皮細(xì)胞少 量增生。各濃度蛻皮甾酮乳膏組有較多肉芽組織形成，真皮與表皮連接處少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；膠原明顯形 成，上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生明顯。
討論
蛻皮甾酮又名e-蛻皮激素，是一種土要從植物中提取的有效藥物成分。蛻皮甾酮對(duì)于高等動(dòng)物有較強(qiáng) 的生理活性。目前蛻皮甾酮主要應(yīng)用丁(l)強(qiáng)壯劑(2)化妝品;(3航抑郁劑;(4)治療糖尿病;(5)降血脂;(6) 抗心律失常；(7)抗腫瘤制劑；(8)消炎藥等方面。本研究主要是考察蛻皮甾酮在制備成乳膏制劑后在促進(jìn)創(chuàng) 傷愈合方面的功效。
在愈合過(guò)程中，通過(guò)觀察傷口面積逐步收縮的情況，可以直接了解其愈合狀況。如果傷口愈合較快， 則其傷口面積必然縮小較快。又因傷口愈合率=(原始創(chuàng)面面積一未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積，所以， 傷口愈合快者，其傷口愈合率必然較大。本研究通過(guò)比較空白對(duì)照組(賦形劑組)及四種濃度的蛻皮甾酮 組傷口的愈合率，可以看出傷口愈合早期(4d),各組間差異不大，此時(shí)傷口主要處于炎癥水腫期，創(chuàng)
面以充血滲出為主，各種組織細(xì)胞的增值只是在起始階段，所以即使有外用藥幫助，對(duì)傷口愈合速度影響
不大；而在傷口愈合中期(8d)，各種組織細(xì)胞處于快速增值階段，這時(shí)外用藥的促愈作用體現(xiàn)的比較明 顯，可以看出2.5%蛻皮甾酮乳膏的傷口愈合明顯快丁-其他各組；而隨著愈合時(shí)間的延伸(12d),只涂抹乳 膏基質(zhì)的空白對(duì)照組(賦形劑組)的劣勢(shì)越來(lái)越明顯，其傷口愈合明顯慢于其他各組，相反，2.5%蛻皮甾 酮乳膏組的愈合速度還是明顯優(yōu)于其他各組，但領(lǐng)先1.25%蛻皮甾酮乳膏組的優(yōu)勢(shì)已沒(méi)有原來(lái)那么大。通 過(guò)此研究可以看出蛻皮甾酮乳膏確實(shí)有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用，且2.5%蛻皮甾酮乳膏在創(chuàng)傷動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn) 中促愈效果最好，為其最佳有效濃度。
傷口愈合是十分復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，包括傷口早期止血、創(chuàng)面保護(hù)、炎癥控制及多種組織細(xì)胞的增生， 新生血管的形成，肉芽組織的形成，創(chuàng)緣的爬行收縮等。肉芽組織在創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程中起抗感染及保護(hù)創(chuàng)面、 機(jī)化凝血塊及壞死組織、填補(bǔ)傷口等作用，因此，有無(wú)健康肉芽組織生長(zhǎng)及其生長(zhǎng)速度是傷口愈合的關(guān)鍵。 而內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等細(xì)胞的增值又是形成肉芽組織的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)病理切片觀 察，空白對(duì)照組創(chuàng)面炎細(xì)胞大量滲出，肉芽組織形成及上皮細(xì)胞增生緩慢。而2.5。/。蛻皮甾酮乳膏組肉芽組 織生長(zhǎng)速度最快，上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的快速增值，使上皮爬行速度增快，新生的毛細(xì)血管 較多，膠原形成明顯，創(chuàng)面于造模后12d基本愈合。這也說(shuō)明了為什么蛻皮甾酮乳膏有促進(jìn)傷口愈合的作 用。其藥理作用機(jī)制可能是蛻皮甾酮本身有促進(jìn)蛋白質(zhì)合成及蛋白質(zhì)同化作用，同時(shí)觸發(fā)了細(xì)胞DWA的 合成。
(2)、最佳有效濃度的蛻皮甾酮乳膏(即2.5 %蛻皮甾酮乳膏)與空白對(duì)照(只涂抹乳膏基質(zhì)的賦形劑組)、 云南白藥創(chuàng)可貼的療效對(duì)比觀察。動(dòng)物模型制作將新西蘭大白兔背部脫毛備皮，經(jīng)兔耳緣靜脈予以戊巴比妥鈉麻醉(35mg/kg)，背部常 規(guī)消毒，在每只兔子背部的3個(gè)位置，都用外科方法減去3塊直徑1.5cm的圓形全層皮膚，深達(dá)肌膜，制 成全皮層缺損動(dòng)物模型的創(chuàng)面。
實(shí)驗(yàn)分組將9只兔子成功建立創(chuàng)傷缺損模型后，用生理鹽水沖洗傷口，碘酒、酒精消毒，每只兔子 的第一個(gè)傷口設(shè)為空白對(duì)照，只涂抹乳膏基質(zhì)；第二個(gè)傷口涂抹2.5%蛻皮甾酮乳膏笫三個(gè)傷口覆蓋云南 白藥創(chuàng)可貼。前兩個(gè)傷口一次涂抹的乳膏總量為0.5ml，傷口敷藥后均用凡士林油紗敷蓋，再用干紗布包 扎。傷口每天鹽水沖洗、酒精消毒后各用原法處理?yè)Q藥。每只兔分籠飼養(yǎng)。
指標(biāo)檢測(cè)同以上量效分析實(shí)驗(yàn)時(shí)的指標(biāo)檢測(cè)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件，進(jìn)行配伍組設(shè)計(jì)資料的方差分析(two-way ANOVA)。 統(tǒng)計(jì)結(jié)果各處理因素組4天、8天、12天后傷口愈合率的比較見(jiàn)表2。
表2各處理因素組4天、8天、12天后傷口愈合率的比較(5士s)
組另l」4天后傷口愈合率(％)8天后傷口愈合率(％)12天后傷口愈合率(％)
空白對(duì)照組81 7 . 8 士 2 . 7 2 2.6士3.7"令令3 3.4 士 2.2
蛻皮甾酮組82 2 . 7 士 2 . 7 5 5 . 4 士 3 . 7 ★★
云南白藥組83 3 . 5 士 2 . 7 ★6 6.0士3.7a8 7 . 7 士 2 . 2 ★★
F0.9870.2970.743
P0 . 0 [) 30.0000.000
★P<0.05, A女P0.01, vs空白對(duì)照組,"P0.01， vs2.5。/。蛻皮甾酮乳膏組令P0.05,爭(zhēng)余P0.01, vs云南白藥組。
術(shù)后4大，五組愈合率比較，8只兔子之間差異無(wú)顯著性意義(F〈)，各處理因素組之間的比較有意義 (PO.01 )。其中2.5%蛻皮甾酮乳膏組與空白對(duì)照組之間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05);而云南白藥創(chuàng)可 貼組與空白對(duì)照組組之間差異有顯著性意義(P<0.01)，云南白藥創(chuàng)可貼組愈合較快；2.5%蛻皮甾酮乳 膏組與云南白藥創(chuàng)可貼組之間的差異有顯著性意義(P<0.05)，云南白藥創(chuàng)可貼組愈合較快。
術(shù)后8天，五組愈合率比較，8只兔子之間差異無(wú)顯著性意義(FO，各處理因素組之間的比較有意義 (PO.01 )。其中2.5%蛻皮甾酮乳膏組與云南白藥創(chuàng)可貼組之間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05);而云南白 藥創(chuàng)可貼組與空白對(duì)照組組之間差異有顯著性意義(P<0.01)，云南白藥創(chuàng)可貼組愈合較快；2.5 %蛻皮 甾酮乳膏組與空白對(duì)照組之間的差異有顯著性意義(PO.01 )， 2 . 5 %蛻皮甾酮乳膏組愈合較快。
術(shù)后12天，五組愈合率比較，8只兔子之間差異無(wú)顯著性意義(FO，各處理因素組之間的比較有意 義(PO.0 1 )。其中2.5%蛻皮甾酮乳膏組與云南白藥創(chuàng)可貼組之間差異無(wú)顯著性意義(P>0.05);而云南 白藥創(chuàng)可貼組與空白對(duì)照組組之間差異有顯著性意義(P<0.01)，云南白藥創(chuàng)可貼組愈合較快；2.5 %蛻 皮甾酮乳膏組與空A對(duì)照組之間的差異有顯著性意義(P<0.01), 2 . 5 %蛻皮甾酮乳膏組愈合較快。
空白對(duì)照組、2.5%蛻皮甾酮乳膏組、云南白藥創(chuàng)可貼組愈合率對(duì)比線性圖表見(jiàn)"說(shuō)明書(shū)附圖"之圖2。
肉眼觀察
術(shù)后4天，各處理因素組創(chuàng)面均紅腫、濕潤(rùn)，無(wú)明顯膿液形成，無(wú)明顯感染，傷口收縮不明顯。 術(shù)后8天，空白對(duì)照組仍明顯滲出，個(gè)別傷口出現(xiàn)潰瘍，創(chuàng)面的收縮與蛻皮甾酮乳膏組及云南白藥創(chuàng) 可貼組相比有差異。后兩組傷口濕潤(rùn)、無(wú)感染，傷口表面及皮下組織收縮明顯。
術(shù)后12天，蛻皮甾酮乳膏組及云南白藥創(chuàng)可貼組傷口進(jìn)一步收縮，創(chuàng)面干燥，表面結(jié)厚痂，創(chuàng)面愈 合較快，創(chuàng)面大部分己經(jīng)愈合；尤其是2.5%蛻皮甾酮乳膏組已經(jīng)接近完全愈合，創(chuàng)面基本消失。而正常對(duì) 照組傷口面積較術(shù)后8天有明顯收縮，創(chuàng)面邊緣結(jié)痂，但仍有很大面積沒(méi)有愈合。
顯微觀察
術(shù)后4大，三組傷口均以滲出和充血為主，未見(jiàn)肉芽組織明顯增生，三組比較無(wú)明顯差異。 術(shù)后8天，空白對(duì)照組最主要特點(diǎn)是化膿明顯伴潰瘍形成，上皮增生不明顯。蛻皮甾酮乳膏組創(chuàng)面雖 有滲岀，但肉芽組織初步形成，少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原開(kāi)始形成，上皮細(xì)胞少許增生。云南白藥創(chuàng)可貼 組創(chuàng)面干燥，肉芽組織初步形成，少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但膠原、內(nèi)皮細(xì)胞及上皮細(xì)胞增生較少。
術(shù)后12天，空白對(duì)照組表皮仍有部分缺損，炎性細(xì)胞大量滲出，僅少許肉芽組織形成，上皮細(xì)胞少量增生。蛻皮甾酮乳膏組有較多肉芽組織形成，真皮與表皮連接處少許炎細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原明顯形成，上皮 細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生明顯。云南白藥創(chuàng)可貼組創(chuàng)面干燥，肉芽組織形成，少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原、內(nèi)皮 細(xì)胞及上皮細(xì)胞增生，但不如蛻皮甾酮乳膏組增生活躍。 討論
本實(shí)驗(yàn)中，空白對(duì)照組傷口愈合率明顯低于蛻皮甾酮乳膏組及云南白藥組，且僅少許肉芽組織形成， 上皮細(xì)胞少量增生，增生速度很慢。而2.5%蛻皮甾酮乳膏組與云南白藥創(chuàng)可貼組創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)速度最 快，新生的毛細(xì)血.管較多，膠原形成明顯，創(chuàng)面于術(shù)后12天基本愈合。云南白藥創(chuàng)可貼組與2.5%蛻皮甾 酮乳膏組愈合效果相似。但顯微觀察顯示，創(chuàng)傷早期，云南白藥創(chuàng)可貼組的止血效果好于蛻皮甾酮軟膏組， 所以早期云南白藥創(chuàng)可貼促愈效果好于蛻皮甾酮乳膏；但是，中晚期蛻皮甾酮乳膏組的內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì) 胞及膠原的數(shù)量多丁-云南白藥創(chuàng)可貼組，所以蛻皮甾酮乳膏組在創(chuàng)傷愈合后期的平均傷口愈合率也稍大于 云南白藥創(chuàng)可貼組。
總之，2.5%蛻皮甾酮乳膏及云南白藥都有促進(jìn)傷口愈合的作用，整體來(lái)說(shuō)，兩者療效相似。但，創(chuàng)傷 早期，云南白藥效果稍好于蛻皮甾酮乳膏；而創(chuàng)傷中晚期，蛻皮甾酮乳膏愈創(chuàng)效果稍好于云南白藥。雖然 兩者總體促愈效果相似，但作用機(jī)理不同導(dǎo)致了在創(chuàng)傷早、晚期的愈合效果稍有差異。


圖1:為各濃度蛻皮甾酮乳膏組傷口愈合率的對(duì)比曲線圖?？梢?jiàn)所有蛻皮甾酮乳膏組傷口愈合率均好
于空白對(duì)照組，其中2.5%組傷口愈合率明顯好于其他各組，是蛻皮甾酮乳膏的最佳有效濃度。
圖2:為空白對(duì)照組、2.5%蛻皮甾酮乳膏組、云南白藥創(chuàng)可貼組傷口愈合率的對(duì)比曲線圖?？梢?jiàn)蛻皮
甾酮乳膏組及云南白藥創(chuàng)可貼組傷口愈合率均好于空白對(duì)照組，蛻皮甾酮乳膏組與云南白藥創(chuàng)可貼組傷口 愈合率差別不大。
權(quán)利要求
1、一種蛻皮甾酮臨床藥理作用的新研究，即蛻皮甾酮在促進(jìn)創(chuàng)傷愈合方面的新進(jìn)展和新探索，主要包括以下幾個(gè)方面(1)、蛻皮甾酮在促進(jìn)皮膚挫裂傷愈合方面的應(yīng)用；(2)、蛻皮甾酮在促進(jìn)皮膚燙傷愈合方面的應(yīng)用；(3)、蛻皮甾酮在促進(jìn)手術(shù)切口愈合方面的應(yīng)用；(4)、蛻皮甾酮在促進(jìn)食管、胃腸道各種瘺口愈合方面的應(yīng)用；(5)、蛻皮甾酮在支氣管胸膜瘺愈合方面的應(yīng)用。
2、 一種促進(jìn)傷口愈合的蛻皮甾酮乳膏，其特征在于配方包括如下組分 油相單硬脂酸甘油酯35g ，硬脂酸130 150g ，白凡士70g ,氮酮20ml ，尼泊金乙酯lg。水相純化水560 580ml ，硼砂4g ，十二垸基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ，甘油160ml ,尿囊素3g。藥相蛻皮甾酮25g溶于75。/。乙醇10ml中做成蛻皮甾酮溶液。最后制成的乳膏總量控制在1000g，可用純化水加減做到。
3、 一種促進(jìn)傷口愈合的蛻皮甾酮乳膏的制備方法，其特征在于按以下步驟進(jìn)行(1) 、配方包括如下組分油相單硬脂酸甘油酯35g ,硬脂酸130 150g ，白凡士70g ，氮酮20ml ,尼泊金乙酯lg。 水相純化水560 580ml ,硼砂4g ，十二烷基硫酸鈉4g ，三乙醇胺10 20ml ，甘油160,nl ,尿囊素3g。 藥相蛻皮甾酮25g溶于75。/。乙醇10ml中做成蛻皮甾酮溶液。(2) 、方法按以下步驟進(jìn)行首先將油相與水相分別水浴加熱至9(TC，并水浴保溫；其后將25g蛻皮甾酮溶解于75n/。乙醇I0ml中 做成藥相；然后在高剪切乳化機(jī)以2000-6000r.min'的轉(zhuǎn)速攪拌下，將水浴溶解后的油相加入到水相中；在 攪拌3-10min后，待其完全乳化，撤離水浴保溫，自然冷卻；待膏體冷卻到6(TC-50'C時(shí)，將溶解好的藥相， 即含25g蛻皮甾酮的乙醇溶液加入到膏體中；以2000-6000r.min"的轉(zhuǎn)速剪切勻質(zhì)10-30min后形成微乳，繼 續(xù)以中低速度攪拌，使膏體均勻脫氣，溫度降至42'C-35'C時(shí)停止攪拌，自然冷卻至室溫，則可做成濃度為 2.5%的蛻皮甾酮乳膏。最后制成的乳膏總量控制在1000g,可用純化水加減做到。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種能夠促進(jìn)傷口愈合的乳膏制劑的制備方法。其組分包括單硬脂酸甘油酯，硬脂酸，白凡士，氮酮，尼泊金乙酯，純化水，硼砂，十二烷基硫酸鈉，三乙醇胺，甘油，尿囊素，蛻皮甾酮，乙醇。其中主要藥效部分為蛻皮甾酮，能夠顯著促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞增殖，其機(jī)制為蛻皮甾酮能促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成及觸發(fā)了細(xì)胞DNA的合成。本發(fā)明的乳膏制劑具有無(wú)過(guò)敏性、無(wú)刺激性、容易吸收、療效顯著、價(jià)格低廉、攜帶方便等優(yōu)點(diǎn)。并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)確有促進(jìn)傷口愈合之功效，與云南白藥相仿，但療效各有千秋。
文檔編號(hào)A61P43/00GK101416969SQ200710030970
公開(kāi)日2009年4月29日 申請(qǐng)日期2007年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月22日
發(fā)明者旭 吳, 張軍花, 鄭高云 申請(qǐng)人:吳 旭;鄭高云;張軍花